CN109908207A - 一种肉苁蓉提取物及其制备方法与应用 - Google Patents
一种肉苁蓉提取物及其制备方法与应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种肉苁蓉提取物及其制备方法与应用,该提取物的制备方法,其工艺简单,易于操作,成本低廉,得到的提取物中总寡糖含量约为20‑40%、甘露醇含量约5‑25%、甜菜碱含量约10‑30%。该提取物具有润肠通便作用,能增强肠推进功能、缩短排便时间、增加排便总量、降低结肠肌电的振幅、增加肌电蠕动频率或增加结肠Cajal间质细胞的c‑kit阳性表达,还能对结肠组织炎症病变有明显改善作用。
Description
技术领域
本发明涉及中药技术领域,尤其涉及肉苁蓉提取物及其制备方法与应用。
背景技术
便秘是多种疾病的一种症状。随着经济的发展、生态环境的恶化及人们生活节奏的加快,在肠道门诊中约有5.0%~10.0%的人因便秘来就诊。目前国内外应用于临床治疗便秘主要通过以下几个途径:1、药物治疗选用药物应以毒性小、副作用小、药物依赖性小为原则,如膨松剂、渗透性通便剂。对于慢传输性便秘可加用促动剂。对于粪便嵌塞者,清洁灌肠一次或短期结合使用刺激性泻剂以解除嵌塞。解除后再改用膨松剂或渗透性通便剂。2、心理疗法与生物反馈治疗。中重度便秘患者往往具有心理障碍,应给予认知治疗。近年来生物反馈治疗被广泛用于耻骨直肠肌痉挛征治疗,效果肯定,但长期疗效需追踪观察。3、外科治疗。如经严格的非手术治疗后仍收效不大,且各种特殊检查显示有明确的病理解剖和确凿的功能异常部位,可考虑手术治疗。但便秘的外科治疗是起步较慢的一个领域,其治疗便秘的地位有待长期实践结果确定。由上述可知,药物治疗无论是在可操作性还是在广泛性上均占便秘治疗中的主要地位。由于化学合成药物严重的毒副作用和较高的价格,使便秘中药日益受到关注。几十年的临床应用表明,中医采用滋阴润肠药物治疗大便秘结疾病,收到了很好的成效。目前临床常用的中成药如麻仁润肠丸、牛黄解毒丸、龙胆泻肝丸等在临床均有较好的疗效,在治疗便秘起到了很大作用,但这些药物都存在共同的缺点,就是属于峻下逐水药,药效峻猛,而便秘患者大多为老年体虚患者,制约了绝大部分患者的使用。因此随着便秘发病率的增加,研制开发药效温和、补泄共进的药物以减少便秘疾病对人类健康的威胁是一项十分有意义的工作。
肉苁蓉为列当科植物肉苁蓉Cistanche diserticola Y.C.Ma.肉苁蓉属植物,属常高大草本,主产于新疆、内蒙古阿拉善盟,甘肃、宁夏也有分布。近年来,我国西南部分省区如云南、贵州、广西等省也开始大量栽培。肉苁蓉是一种寄生在沙漠树木梭梭根部的寄生植物,从梭梭寄主中吸取养分及水份。素有“沙漠人参”之美誉,具有极高的药用价值,是中国传统的名贵中药材。肉苁蓉在历史上就被西域各国作为上贡朝廷的珍品,也是历代补肾壮阳类处方中使用频度最高的补益药物之一。具有补肾阳,益精血,润肠通便作用。用于肾阳不足,经血亏虚,阳痿不孕,腰膝酸软,筋骨无力,肠燥便秘。
专利CN101353360A公开了一种肉苁蓉提取物及其制备方法和用途,但是该专利没有明确指出润肠通便的主要成分及成分组成,且该专利使用了水提取肉苁蓉使用水提取肉苁蓉,肉苁蓉多糖等大分子成分随之提取出来,后又采用醇沉工艺精制肉苁蓉提取物,工艺相对繁琐,且增加生产能耗。
发明内容
有鉴于此,本发明旨在设计从中药肉苁蓉中提取一定组分比例的有效组分的方法,简化制备工艺,采用低浓度乙醇提取,该有效组分主要含有肉苁蓉总寡糖、甘露醇、甜菜碱,具有治疗便秘抗炎等作用。
本发明提出了一种肉苁蓉提取物,其特征在于,该提取物中总寡糖含量20-40%、甘露醇含量5-25%、甜菜碱含量10-30%。总寡糖含量=D-果糖(C6H12O6)含量+葡萄糖(C6H12O6)含量+蔗糖(C12H22O11)含量。
进一步地,上述提取物中,所述总寡糖含量20-30%、甘露醇含量15-25%、甜菜碱含量20-30%。
本发明还提出一种含上述提取物的药物组合物,其特征在于,该药物组合物还包括药学上可接受的载体。
具体地,所述药物组合物的剂型包括注射剂、片剂、栓剂、软膏剂、凝胶剂、丸剂、片剂、颗粒剂、胶囊剂和合剂。
本发明还提出了一种前述肉苁蓉提取物在制备具有润肠通便作用的药物中的应用。药物的润肠通便作用体现在增强肠推进功能、缩短排便时间、增加排便总量、降低结肠肌电的振幅、增加肌电蠕动频率或增加结肠Cajal间质细胞的c-kit阳性表达等等。
本发明还提出了一种前述肉苁蓉提取物在制备改善结肠炎症药物中的应用。该结肠炎症表现为淋巴细胞、巨噬细胞、浆细胞或嗜酸性粒细胞浸润伴粘膜上皮变性坏死等。
本发明还提出了一种前述肉苁蓉提取物的制备方法,包括如下步骤:
取肉苁蓉药材,粉碎至24~60目,加60~70%乙醇溶液回流提取2~4小时,滤过,滤液备用;
将上述滤液减压浓缩至无醇味,离心,得浓缩液;
将浓缩液放置至室温,徐徐加入到非极性或弱极性的大孔树脂柱中,用4~6倍柱体积的去离子水洗脱,收集水洗脱液,减压浓缩,即得。
进一步地,肉苁蓉药材和乙醇的质量比为10:1~20:1。乙醇溶液回流提取温度优选为75~95℃,提取次数优选为2~4次。
具体地,所述浓缩液的相对密度为1.01~1.30kg/L。
具体地,所述大孔树脂选自ADS-17、DM130、AB-8、D101。
本发明提出了一种活性成分明确的肉苁蓉提取物的制备方法,利用该法能制得活性成分总寡糖、甘露醇、甜菜碱为一定比例的提取物,该提取物具有润肠通便作用,能增强肠推进功能、缩短排便时间、增加排便总量、降低结肠肌电的振幅、增加肌电蠕动频率或增加结肠Cajal间质细胞的c-kit阳性表达,还能对结肠组织炎症病变有明显改善作用。
具体实施方式
如前所述,本发明旨在提供一种肉苁蓉提取物及其制备方法与应用。以下将结合实验例的内容进行具体描述。
特别需要指出的是,针对本发明所做出的类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的,它们都被视为包括在本发明。相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合,来实现和应用本发明技术。显然,所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例,而不是全部的实施例。
本发明如未注明具体条件者,均按照常规条件或制造商建议的条件进行,所用原料药或辅料,以及所用试剂或仪器未注明生产厂商者,均为可以通过市购获得的常规产品。
肉苁蓉提取物的制备
制备例1:
取肉苁蓉药材(Cistanche diserticola Y.C.Ma的干燥带鳞叶的肉质茎),粉碎至24目,加药材10倍量的70%乙醇溶液回流提取2小时,提取温度为75~80℃,提取次数为3次,合并滤液,滤液备用;将上述滤液减压浓缩至无醇味,离心,得浓缩液,相对密度为1.01kg/L;将浓缩液放置至室温,过ADS-17大孔树脂柱(郑州勤实科技有限公司),用纯化水洗脱,洗脱液用量为5倍柱体积,收集水洗脱液,减压浓缩,得浓缩液,相对密度1.20kg/L,即得肉苁蓉活性提取物,提取物中以干燥品计算,总寡糖含量30.1%,甘露醇含量14.8%、甜菜碱含量20.7%。制备例2:
取肉苁蓉药材,粉碎至60目,加药材20倍量的65%乙醇溶液回流提取2小时,提取温度为80~85℃,提取次数为4次,合并滤液,滤液备用;将上述滤液减压浓缩至无醇味,离心,得浓缩液,相对密度为1.02kg/L;将浓缩液放置至室温,过AB-8大孔树脂柱(郑州勤实科技有限公司),用纯化水洗脱,洗脱液用量为4倍柱体积,收集水洗脱液,减压浓缩至相对密度1.23kg/L,即得肉苁蓉活性提取物,提取物中以干燥品计算,总寡糖含量39.2%,甘露醇含量25.0%、甜菜碱含量22.1%。制备例3:
取肉苁蓉药材,粉碎至30目,加药材20倍量的60%乙醇溶液回流提取4小时,提取温度为85~90℃,提取次数为2次,合并滤液,滤液备用;将上述滤液减压浓缩至无醇味,离心,得浓缩液,相对密度为1.03kg/L;将浓缩液放置至室温,过ADS-17大孔树脂柱(郑州勤实科技有限公司),用纯化水洗脱,洗脱液用量为6倍柱体积,收集水洗脱液,减压浓缩至相对密度1.25kg/L,即得肉苁蓉活性提取物,提取物中以干燥品计算,总寡糖含量21.1%,甘露醇含量6.8%、甜菜碱含量13.5%。
制备例4:
取肉苁蓉药材,粉碎至30目,加药材20倍量的60%乙醇溶液回流提取3小时,提取温度为90~95℃,提取次数为3次,合并滤液,滤液备用;将上述滤液减压浓缩至无醇味,离心,得浓缩液,相对密度为1.05kg/L;将浓缩液放置至室温,过D101大孔树脂柱(郑州勤实科技有限公司),用纯化水洗脱,洗脱液用量为8倍柱体积,收集水洗脱液,减压浓缩至相对密度1.30kg/L,即得肉苁蓉活性提取物,提取物中以干燥品计算,总寡糖含量25.7%,甘露醇含量12%、甜菜碱含量28.9%。
上述提取物的制备方法,其工艺简单,易于操作,成本低廉,得到的提取物中总寡糖含量约为20-40%、甘露醇含量约5-25%、甜菜碱含量约10-30%。
肉苁蓉提取物的活性成分测定方法
本发明提供的有效成分组合物的HPLC的含量测定方法,含量测定方法如下:
色谱条件和系统适用性试验
高效液相色谱仪(美国ultimate 3000):用氨基聚乙烯醇为填充剂;乙腈-水(77:23)为流动相,流速0.7ml/min;气体流速3.0ml/min;漂移管温度,105℃;柱温,25℃。
对照品溶液的制备
分别精密称取甜菜碱、D-果糖、甘露醇、葡萄糖、蔗糖(均购自中国食品药品检定研究院)适量,加纯净水制成每1ml含上述对照品各0.25mg的溶液,混匀,经0.22um微孔滤膜滤过,即得。
供试品溶液的制备
葡萄糖和蔗糖:精密量取肉苁蓉提取物总寡糖1g(除水份后干膏计)至10ml量瓶中,加水至刻度,摇匀,精密量取2ml至100ml量瓶中,加水至刻度,摇匀,滤过,取续滤液作为供试品溶液。
甜菜碱、D-果糖、甘露醇:取上述供试液体,精密移取5ml,置10ml量瓶中,加纯净水稀释至刻度,摇匀,滤过,取续滤液作为供试品溶液。测定
分别精密吸取对照品溶液5μl、10μl,供试品溶液10μl,注入液相色谱仪,测定,即得。
肉苁蓉提取物对复方地芬诺酯便秘小鼠模型的影响
1实验材料
1.1样品信息
1.1.1供试品肉苁蓉有效组分提取物(制备例1);麻仁丸(批号15010007,太极集团重庆桐君阁药厂有限公司)
1.2样品的配制
高剂量组(0.06g浸膏/ml):称取0.42g样品于烧杯中,先加入适量的纯化水,充分溶解后,转移至量筒,再用纯化水洗涤烧杯2-3次,并转移至上述量筒中,再加入纯化水定容至7ml,即得0.06g浸膏/ml的溶液(高剂量),倒出,贴上标签备用。
中剂量组(0.04g浸膏/ml):称取0.28g样品于烧杯中,先加入适量的纯化水,充分溶解后,转移至量筒,再用纯化水洗涤烧杯2-3次,并转移至上述量筒中,再加入纯化水定容至7ml,即得0.06g浸膏/ml的溶液(高剂量),倒出,贴上标签备用。
低剂量(0.02g浸膏/ml):称取0.14g样品于烧杯中,先加入适量的纯化水,充分溶解后,转移至量筒,再用纯化水洗涤烧杯2-3次,并转移至上述量筒中,再加入纯化水定容至7ml,即得0.02g浸膏/ml的溶液(高剂量),倒出,贴上标签备用。
麻仁丸浸膏:取200粒麻仁丸于研钵中,先加入少量的纯化水,充分研细溶解后,称取2.1g样品于烧杯中,先加入适量的纯化水,充分溶解后,转移至量筒,再用纯化水洗涤烧杯2-3次,并转移至上述量筒中,再加入纯化水定容至7ml,即得0.3g/ml的溶液,倒出,贴上标签备用。
1.3实验动物
昆明小鼠120只,SPF级,雌雄各半,购自北京维通利华实验动物技术有限公司;环境条件:室温20.3~24.5℃;湿度57~68%。
2剂量设计
本试验提取物组按高、中、低剂量分别设计为1.2、0.8、0.4g浸膏/kg。详细剂量及阳性药(麻仁丸)给药方案见表1。
表1给药方案
3数据统计
本研究数据均以均值±标准差(±SD)表示。统计软件为SPSS13.0版,检测数据分析采用单因素方差分析。
4实验方法与结果
4.1模型选择
复方地芬诺酯是人工合成的具有止泻作用的阿片生物碱,有较弱的阿片样作用,它直接抑制肠黏膜感受器,阻断局部黏膜的蠕动反射而减弱蠕动,并可增加肠节段性收缩,使肠内容物通过延迟,从而促进肠内水分的吸收。复方地芬诺酯引起的小鼠便秘模型属于非特异性便秘模型,与临床便秘症状和病理生理改变相似,模型动物存活率高,便秘状态持续时间较长,且方法简单,经济易行,能充分的模拟慢传输型便秘结肠的功能状态。
4.2实验方法
4.2.1对复方地芬诺酯致便秘小鼠肠推进功能的影响
取KM小鼠60只,随机分为6组,每组10只。实验前各组动物禁食不禁水24h,除空白对照组给予蒸馏水外,余组均给予复方地芬诺酯混悬液10mg/kg造模。30min后,药品组、空白对照组、阳性对照组(麻仁丸)和模型组分别按表1分别以灌胃方式给予相应药物,给药体积均为20ml/kg体重,每日1次,连续给药6天。末次给药后30min后,各组灌服含2%墨汁。给墨汁后30min脱颈椎处死,打开腹腔分离肠系膜,剪取上端至幽门、下端至回盲部的肠管,置于托盘上,轻轻将小肠摆成直线,测量肠管长度作为“小肠总长度”,从幽门至墨汁前沿的距离作为“墨汁在肠内推进距离”。用公式计算墨汁推进百分率。墨汁推进率(%)=墨汁在肠内推进距离(cm)×100%/小肠全长(cm)。
4.2.2对复方地芬诺酯致便秘小鼠排便作用的影响
取KM小鼠60只,随机分为6组,每组10只。实验前各组动物禁食不禁水24h,除空白对照组给予蒸馏水外,余组均给予复方地芬诺酯混悬液10mg/kg造模。30min后,药品组、空白对照组、阳性对照组(麻仁丸)和模型组分别按表1分别以灌胃方式给予相应药物,给药体积均为20ml/kg体重,每日1次,连续给药7天。末次给药后30min后,各组灌服含2%墨汁。给墨汁后将小鼠分别放入小鼠盒中,在盒中垫上滤纸,连续观察6h,记录小鼠首次排黑便时间、排便总粒数和排便总重量。
4.3实验结果
4.3.1对复方地芬诺酯致便秘小鼠肠推进功能的影响
与空白对照组比较,模型组小鼠墨汁在肠内推进距离和推进率均明显降低(P<0.01)。与模型组比较,肉苁蓉有效组分1.2、0.8、0.4g浸膏/kg和麻仁丸均能明显增加墨汁推进距离和推进百分率(P<0.01)。结果见表2。
表2对墨汁推进率的影响(n=10)
注:与模型组比较,**为P<0.01。
4.3.2对复方地芬诺酯致便秘小鼠排便作用的影响
与空白对照组比较,模型组小鼠首次排黑便时间明显延长、排便总粒数明显减少、排便总重量明显降低(P<0.01)。与模型组比较,肉苁蓉有效组分1.2、0.4g浸膏/kg和麻仁丸均能明显缩短首次排黑便时间、明显增加排便总粒数和排便总重量(P<0.01~0.05);结果见表3。
表3对便秘小鼠排便作用的影响(n=10)
注:与模型组比较,*为P<0.05;**为P<0.01。
5小结
本发明所制备得到的肉苁蓉活性提取物对复方地芬诺酯致小鼠便秘模型有明显促进肠推进作用,能缩短排便时间,亦能增加排便量,具有明显增强肠道传输作用。
肉苁蓉提取物对大鼠非特异性便秘模型的影响
1实验材料
1.1样品信息
1.1.1供试品肉苁蓉有效组分提取物(制备例2和制备例3);枸橼酸莫沙必利片(批号140205,江苏豪森药业股份有限公司);麻仁丸(批号15010007,太极集团重庆桐君阁药厂有限公司);
1.2样品的配制
肉苁蓉有效组分提取物(制备例2和制备例3)配制方法同前述制备例1组(实际配制根据配制方法按比例进行配制):
高剂量(60mg浸膏/ml):称取8.6g肉苁蓉有效组分流浸膏于烧杯中,先加入适量的纯化水,充分溶解后,转移至量筒,再用纯化水洗涤烧杯2-3次,并转移至上述量筒中,再加入纯化水定容至143ml,即得肉苁蓉有效组分浓度为60mg/ml的溶液(高剂量),倒出100ml,贴上标签备用。
中剂量(20mg浸膏/ml):高剂量剩余43ml再加入纯化水定容至129ml,即得肉苁蓉有效组分浓度为20mg/ml的溶液(中剂量),倒出100ml,贴上标签备用。
低剂量(6mg浸膏/ml):中剂量剩余29ml再加入纯化水定容至97ml,即得肉苁蓉有效组分浓度为6mg/ml的溶液(低剂量),倒出97ml,贴上标签备用。
肉苁蓉总寡糖(20mg浸膏/ml):取100g的肉苁蓉药材,切片,加生药0.7L的水加热回流提取3小时,滤过,得滤液,备用;药渣再加0.3L的水提取3次,每次0.5小时,滤过,合并四次滤液,减压浓缩至70℃相对密度为1.06kg/L,得浓缩液I,将浓缩液I放置至室温,徐徐加入95%乙醇使含醇量达到50%左右,于4℃冷库中放置6小时,滤过,滤液减压浓缩至无醇时,相对密度为1.08kg/L,得浓缩液II,将浓缩液II放置至室温,徐徐加入到树脂柱径高比为1∶6的HPD-100大孔吸附树脂柱,药材与干树脂比例为1∶3,用2倍柱体积的去离子水洗脱,收集水洗脱液,减压浓缩至至稠膏,即得肉苁蓉总寡糖36.8g;其中含总寡糖以葡萄糖C6H12O6计不低于58%,总寡糖中含半乳糖醇C6H14O620.0%。
称取2.6g肉苁蓉总寡糖加入纯化水定容至129ml,即得肉苁蓉有效组分浓度为20mg/ml的溶液,倒出100ml,贴上标签备用。
莫沙必利(0.15mg/ml):取2片莫沙必利于研钵中,先加入少量的纯化水,充分研细溶解后,转移至量筒,再用纯化水洗涤烧杯2-3次,并转移至上述量筒中,再加入纯化水定容至67ml,即得莫沙必利浓度为0.15mg/ml的溶液,倒出67ml,贴上标签备用。
麻仁丸(120mg/ml):取120粒麻仁丸于研钵中,先加入少量的纯化水,充分研细溶解后,转移至量筒,再用纯化水洗涤烧杯2-3次,并转移至上述量筒中,再加入纯化水定容至50ml,即得麻仁丸浓度为120mg/ml的溶液,倒出50ml,贴上标签备用。
1.3实验动物
SD大鼠134只,SPF级,雌雄各半。环境条件:室温19.8~22.0℃;湿度51~60%。
2剂量设计
本试验的提取物组按高、中、低剂量分别设计为600、200、60mg浸膏/kg,枸橼酸莫沙必利片和麻仁丸直接按照临床剂量折算成大鼠等效剂量。详细剂量及阳性药给药方案见表4。
表4肉苁蓉有效组分给药方案
3数据统计
本研究数据均以均值±标准差(x±SD)表示。统计软件为SPSS13.0版,检测数据分析采用单因素方差分析。
4实验方法与结果
4.1实验方法
模型制备:SD大鼠134只,随机选取14只作为空白对照组(每日给予纯化水10mL/kg灌胃),剩余120只大鼠均用复方地芬诺酯片15mg/kg灌胃,给药体积为10mL/kg,每天1次,连续造模7周。每周称量1次动物湿粪、干粪和体重质量,每日观察动物临床表现及排便情况。造模结束后,随机选取1只空白对照组动物和造模组2只动物进行在体结肠肌电测定;另外再随机选取1只空白对照组动物和造模组2只动物进行肠推进功能测定,确定非特异性便秘模型造模是否成功。通过造模动物的粪便含水率、结肠肌电波的频率和振幅、炭末推进百分率进行模型评价,确定造模成功后,再进行分组治疗给药。
动物分组与给药:确定造模成功后,停止灌胃给予复方地芬诺酯片,将空白对照组剩余12只动物和造模组剩余120只动物,按体重共分10组(每组12只,雌雄各半),即空白对照组、模型组、莫沙必利1.5mg/kg、麻仁丸1200mg/kg、肉苁蓉总寡糖200mg浸膏/kg、肉苁蓉有效成分提取物600、200、60mg浸膏/kg。按组别给予相应药物,给药体积均为10ml/kg体重,每日1次,连续给药32天。
4.2实验结果
4.2.1对体重及一般状况的影响
给予32天相应组别药物后,各组体重未见明显统计学差异。造模动物症状逐渐减轻:大鼠粪便明显改善,粪便变大,呈棕褐色,质地变软,表面有光泽等,尤以肉苁蓉制备例2高剂量组、莫沙必利最为明显。体重结果见表5。
表5肉苁蓉有效组分对体重的影响(n=12)
4.2.2对粪便湿重、干重质量和含水率的影响
与空白对照组比较,模型组大鼠的粪便湿重和粪便含水率明显降低。与模型组比较,尤以肉苁蓉制备例2、莫沙必利和麻仁丸均能够更明显增加粪便湿重质量和粪便含水率。结果见表6~8。
表6肉苁蓉有效组分对粪便湿重质量的影响(n=12)
表7肉苁蓉有效组分对粪便干重质量的影响(n=12)
表8肉苁蓉有效组分对粪便含水率的影响(n=12)
4.2.3对肠推进功能的影响
与空白对照组比较,模型组大鼠炭末推进长度和推进百分率均明显降低。与模型组比较,肉苁蓉制备例2高、中剂量组、肉苁蓉制备例3高剂量组、莫沙必利和麻仁丸均能明显增加炭末推进长度和推进百分率(P<0.01~0.05)。结果见表9。
表9肉苁蓉有效组分对肠推进功能的影响(n=6)
注:与模型组比较,*为P<0.05,**为P<0.01。
4.2.4对结肠肌电振幅和频率的影响
与空白对照组比较,模型组大鼠结肠肌电振幅升高和频率降低。与模型组比较,肉苁蓉制备例、莫沙必利和麻仁丸2均能明显降低药后的结肠肌电振幅(P<0.01~0.05),且能增加药后的结肠肌电频率(P<0.01~0.05)。结果见表10~11。
表10肉苁蓉有效组分对结肠肌电振幅的影响(n=6)
注:与模型组比较,*为P<0.05,**为P<0.01。
表11肉苁蓉有效组分对结肠肌电频率的影响(n=6)
注:与模型组比较,*为P<0.05,**为P<0.01。
4.2.5对血清生化指标的影响
肠神经递质异常可引起肠道运动功能失调,主要分为抑制性神经递质和兴奋性神经递质。抑制性递质主要参与肠道动力调节、肠黏膜血流调节、分泌功能调节等,可作为抑制剂直接松弛肠道平滑肌,并可通过减弱肠道慢波起博使得结肠环肌自发性钟摆式节律收缩减少,主要包括一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)、生长抑素(SS)等;兴奋性递质能抑制胃肠道黏液分泌,降低胃肠道黏膜水、电解质的转运,刺激肠道运动,主要包括胃泌素(GAS)、胃动素(MTL)、五羟色胺(5-HT)、Na+-K+-ATP酶等。
通过实验表明,与空白对照组比较,模型组大鼠血清一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)和生长抑素(SS)含量均明显升高,血清胃泌素(GAS)、胃动素(MTL)、Na+-K+-ATP酶、五羟色胺(5-HT)含量均明显降低。
与模型组比较,肉苁蓉制备例组或寡糖组均能明显降低血清NO、NOS和明显增加血清GAS、MTL、Na+-K+-ATP酶、5-HT的含量(P<0.01~0.05),降低血清SS的含量(P<0.05),其中制备例组的作用和麻仁丸相当,均强于总寡糖提取物。结果见表12、13。
表12肉苁蓉有效组分对血清生化指标的影响(n=12)
注:与模型组比较,*为P<0.05,**为P<0.01。
表13肉苁蓉有效组分对血清生化指标的影响(n=12)
注:与模型组比较,*为P<0.05,**为P<0.01。
4.2.6对结肠组织生化指标的影响
与空白对照组比较,模型组大鼠结肠组织生长抑素(SS)含量明显升高,结肠组织胃泌素(GAS)、胃动素(MTL)、Na+-K+-ATP酶、五羟色胺(5-HT)含量均明显降低。
与模型组比较,肉苁蓉制备例组均能明显降低大鼠结肠组织SS和增加组织GAS、MTL、Na+-K+-ATP酶的含量(P<0.01~0.05),其中制备例组的作用均强于总寡糖提取物。结果见表14、15。
表14肉苁蓉有效组分对组织生化指标的影响(n=12)
注:与模型组比较,*为P<0.05,**为P<0.01。
表15肉苁蓉有效组分对组织生化指标的影响(n=12)
注:与模型组比较,*为P<0.05,**为P<0.01。
4.2.7对结肠Cajal间质细胞的影响
免疫组织化学检查结果显示:胞浆棕黄色颗粒为阳性表达,以结肠环纵肌层之间分布最为丰富。空白对照组c-kit表达较强,着色较深;模型组表达明显减弱,阳性细胞数分布减少,着色较浅。与模型组比较,肉苁蓉制备例组能明显增加结肠Cajal间质细胞的c-kit阳性表达,着色较深,其中肉苁蓉制备例2高剂量组与莫沙必利组作用最强。积分光密度值见表16(每个标本染色阳性区域随机选取4个不重叠的高倍镜视野观察并测定积分光密度)。
表16肉苁蓉有效组分对结肠Cajal间质细胞的影响(n=6)
注:与模型组比较,**为P<0.01。
肉苁蓉提取物对大鼠棉球肉芽肿的影响
1实验材料
1.1样品信息
1.1.1供试品肉苁蓉有效组分提取物(制备例2和制备例3配制方法同前)
1.2实验动物
SD大鼠134只,SPF级,雌雄各半。环境条件:室温19.8~22.0℃;湿度51~60%。
1.3仪器
电子天平:赛多利斯科学仪器(北京)有限公司;
DHG-9076A型电热恒温鼓风干燥箱,上海精宏实验设备有限公司。
2剂量设计
本试验的提取物组按高、中、低剂量分别设计为600、200、60mg浸膏/kg,阿司匹林片和泼尼松直接按照临床剂量折算成大鼠等效剂量。详细剂量及阳性药给药方案见表17。
表17肉苁蓉有效组分给药方案
3数据统计
本研究数据均以均值±标准差(x±SD)表示。统计软件为SPSS13.0版,检测数据分析采用单因素方差分析。
4实验方法
SD大鼠雄性120只,随机分为10组,即空白对照组、模型组、莫沙必利1.5mg/kg、麻仁丸1200mg/kg、肉苁蓉有效成分提取物600、200、60mg浸膏/kg。按组别给予相应药物,给药体积均为10ml/kg体重。大鼠用水合氯醛(350mg/kg)腹腔注射麻醉,俯卧位固定于手术台上,肩部消毒,切约1cm长小口,种植灭菌棉球(50mg)于两侧腋窝处,缝合,注入青霉素钠0.5ml(20IU/ml),种植棉球后第三日开始灌胃,各给药组大鼠分别灌胃给予各受试药物,模型组灌胃给予0.5%CMC-Na混悬液,每日一次,连续十日,给药容积为10ml/kg。末次给药后24小时,处死动物,将棉球和肉芽组织一起取出,称重(湿重)后于60℃烘箱中干燥24小时后再次称重(干重),计算肉芽重(肉芽重=棉球干重-棉球净重),比较各组间差异。
5实验结果
与模型组比较,阳性药组棉球肉芽重量显著减轻(p﹤0.001),肉苁蓉有效组分提取物各剂量组均具有较好的降低棉球肉芽肿的趋势,且随着剂量的升高,这种趋势越明显。结果见表18。
表18:肉苁蓉有效组分对大鼠棉球肉芽肿影响
与模型组比较:**p﹤0.01,*p﹤0.05。
Claims (9)
1.一种肉苁蓉提取物,其特征在于,该提取物中总寡糖含量20-40%、甘露醇含量5-25%、甜菜碱含量10-30%。
2.根据权利要求1所述的肉苁蓉提取物,其特征在于,所述总寡糖含量20-30%、甘露醇含量15-25%、甜菜碱含量20-30%。
3.一种包括权利要求1或2所述提取物的药物组合物,其特征在于,该药物组合物还包括药学上可接受的载体。
4.根据权利要求3所述的药物组合物,所述药物组合物的剂型包括注射剂、片剂、栓剂、软膏剂、凝胶剂、丸剂、片剂、颗粒剂、胶囊剂和合剂。
5.如权利要求1或2所述肉苁蓉提取物在制备润肠通便或抗炎药物中的应用。
6.如权利要求1或2所述肉苁蓉提取物的制备方法,包括如下步骤:
取肉苁蓉药材,粉碎至24~60目,加60~70%乙醇溶液回流提取2~4小时,滤过,滤液备用;
将上述滤液减压浓缩至无醇味,离心,得浓缩液;
将浓缩液放置至室温,徐徐加入到非极性或弱极性的大孔树脂柱中,用4~6倍柱体积的去离子水洗脱,收集水洗脱液,减压浓缩,即得。
7.根据权利要求6所述的制备方法,其特征在于,肉苁蓉药材和乙醇的质量比为10:1~20:1,乙醇溶液回流提取温度为75~95℃,提取次数为2~4次。
8.根据权利要求6所述的制备方法,其特征在于,所述浓缩液的相对密度为1.01~1.30kg/L。
9.根据权利要求6所述的制备方法,其特征在于,所述大孔树脂选自ADS-17、DM130、AB-8、D101。
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