CN102772458B - 一种治疗宫颈糜烂的药物 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种治疗宫颈糜烂的药物，属于中药创新药物制剂技术领域。本品是以我国传统中药材蛇床子为原料，经醇提、浓缩、酸碱纯化等工艺提取得到的有效部位总香豆素，采用现代制剂技术加工制成的阴道泡腾片。由于其崩解产生的大量泡沫增加了药物与病变部位的直接接触，更好地发挥其疗效作用，适合用于阴道疾病的防治用药，并且具有崩解快速、起效迅速，生物利用度高，并且保存和携带方便。本发明药物具有燥湿消炎，祛腐生肌的功效，主要用于湿热下注所致的带下病，症见带下量多，色黄或白，或呈脓性，腰腹坠胀，或小便淋漓涩痛，或阴痒，口苦咽干，舌红，苔黄或腻，脉滑或弦滑；宫颈糜烂见上述证候者。

Description

一种治疗宫颈糜烂的药物

技术领域

本发明属于中药创新药物制剂技术领域，涉及一种治疗宫颈糜烂的药物。

背景技术

宫颈糜烂是一种慢性炎症，即慢性宫颈炎的一种最常见类型。是由于炎症刺激，宫颈表面的被覆上皮细胞脱落，而下方的柱状上皮细胞向外突出，代替了脱落的被覆上皮，因柱状上皮的毛细血管显露，使炎症区呈鲜红色，故称为宫颈糜烂。宫颈糜烂是妇女的常见病，多发病，多发生在已婚女性。

流行病学调查结果显示，农村妇女的宫颈糜烂发病率更高。随着现在人们生活环境和习惯的改变，宫颈糜烂在妇女中的发生率呈上升趋势。有统计资料显示，宫颈糜烂为35岁到50岁女性的常见妇科疾病，然而近年来的临床统计结果显示，宫颈糜烂低龄化的现象日益严重，年轻化趋势明显。1996年北京航空航天大学医院对妇女妇科普查结果显示，妇科常见病患病率为50.24％，其中，宫颈糜烂的患病率为39.54％，位居妇科疾病患病率之首，患病年龄统计结果显示，30～39岁妇女宫颈糜烂的患病率最高，为82.73％；2001年对江苏省丹阳市已婚妇女妇科普查结果显示，妇女常见妇科病发病率前3位分别是宫颈糜烂22.40％，子宫肌瘤2.49％，乳房肿物2.5％，其中，宫颈糜烂21～25岁患病率最高，为33.58％；2002年以来，对山东省滨州市已婚育龄妇女健康检查中，妇科疾病的患病率为52.2％，宫颈糜烂的发病率占妇科疾病总患病率的27％，其中宫颈糜烂I度占75.5％，II度占16.7％，III度占1.5％。

目前，临床用于治疗妇科炎症疾病的药物品种较多，其中，我国传统中成药品种占据了71％的市场份额，而化学药物制剂仅占29％，然而临床用于治疗宫颈糜烂的产品还不足20个，其中部分散、膏、栓等传统中药制剂临床已无使用。我国临床用于治疗宫颈糜烂的药物主要有：

(1)消糜栓：具有抗菌消炎，促进炎症吸收，创面愈合等作用，治疗宫颈糜烂具有一定疗效，临床研究结果表明，其治愈率为60.1％。

(2)爱宝疗：用于治疗阴道和宫颈炎症的进口产品，有浓缩液和栓剂两种制剂，其主要成分为聚甲酚磺醛，做为化学药物，临床应用过程中并未显示出显著的治疗优势，有研究结果表明，其治疗轻度宫颈糜烂的治愈率为87.3％，且1个疗程的治愈率低，需坚持2～3个疗程，同时，爱宝疗易造成药物残留滋生细菌，引发盆腔严等疾病，产品自身的不足必将对产品竞争力带来严重影响。

(3)复方莪术油栓：其主要成分为硝酸益康唑和莪术油，主治阴道炎及宫颈糜烂，具有抑菌、修复病变组织、促进糜烂表面愈合的作用。

《中药新药临床研究指导原则(第一辑)》中将宫颈糜烂按照中医辩证分为：湿热下注证、脾肾亏损证、阴虚火旺证、脾虚带下证、血瘀带下证。《中国药典》记载，蛇床子具有温肾壮阳，燥湿，祛风，杀虫的功能。主要用于阳痿，宫冷，寒湿带下，湿痹腰痛；外治外阴湿疹，妇人阴痒，滴虫性阴道炎。我们在中医药理论的指导下，结合现代药理实验，以药效学评价为指标，最终选用由蛇床子提取得到的总香豆素有效部位作为治疗宫颈糜烂的药物，应用先进科技手段，制成符合新药要求的现代中成药。

发明内容

本发明目的在于提供一种治疗宫颈糜烂的药物。目的在于克服现有技术的不足，为广大患者提供更好的用药种类，以方便患者治疗和康复。

本发明的目地是通过以下技术方案实现的：

1、一种治疗宫颈糜烂的药物，它是由以下重量配比的主药和辅料制成的：

2、其制备方法，包括以下步骤：

(1)取蛇床子药材粗粉10kg，加80％乙醇回流提取3次，每次10倍量，每次1小时，合并药液，回收乙醇并浓缩至在70℃下相对密度1.15～1.20的浸膏；

(2)上述浸膏加5倍浸膏量(g/ml)的纯化水，搅拌均匀，静置3小时，滤过，沉淀加1％NaOH溶液50℃使溶解，趁热滤过，收集滤液，放冷；

(3)碱水液加入10％的盐酸溶液，边加边不断搅拌，调pH至4左右，静置24小时(避光)，滤过，沉淀物以纯化水洗至中性，收集沉淀物，50℃干燥，得蛇床子总香豆素提取物；

(4)取蛇床子总香豆素提取物240g、柠檬酸165g、聚乙二醇600025g和氯化钠15g，混匀，过50目筛，备用；另取碳酸氢钠195g和羧甲基淀粉钠45g，混匀，过50目筛，将上述两种粉末合并，加入微粉硅胶15g，混匀，压制成1000片，即得。

本发明药物是在中医理论指导下，针对宫颈糜烂的主要病机，结合现代药理研究成果，将蛇床子创新性的应用于治疗宫颈糜烂，开发成为现代纯中药有效部位新药，具有燥湿消炎，祛腐生肌的功效，主要用于湿热下注所致的带下病，症见带下量多，色黄或白，或呈脓性，腰腹坠胀，或小便淋漓涩痛，或阴痒，口苦咽干，舌红，苔黄或腻，脉滑或弦滑；宫颈糜烂见上述证候者。并根据临床应用及药效学研究，确定本品用法用量确定为：外用，置阴道深部，每晚1片，或遵医嘱，相当于日外用生药量10g。

本品为现代纯中药有效部位新药，与已上市用于治疗宫颈糜烂的药品相比，具有以下优势：

一、技术含量高，工艺稳定，质量可控。由于我国传统中药研究基础薄弱，中药材成分复杂，且多以中医的君、臣、佐、使配伍理论，选用多味，甚至数十味中药材配伍制成方剂，成分及机理不明，致使我国传统中医药在技术、质量等方面一直处于低端、被动的发展境地。目前，我国已上市的用于治疗宫颈糜烂的药品以外用栓剂为主，且均为中药复方制剂，质黑量大，与之相比，本项目产品采用现代制备工艺，充分提取分离药材有效成分，其有效成分含量高，为现代中药研究的重要开发成果。本项目研究是在我国传统中医理论与现代中药研究基础上，采用现代药物研究体系与方法，对药材有效部位进行提取分离，并采用药效筛选实验，确定其有效成分，在此基础上，以工艺简单、安全、稳定为目的，最大限度的提取药材的有效成分，经大量的工艺实验研究，确定了最佳提取、分离、纯化方法，为确定的稳定的技术参数；在不同产地药材质量差异较大的情况下，为确保产品质量，从药材采购、中间体制备到成品检验，采用国际公认的指纹图谱控制技术，为产品生产的全过程建立了完善的质量控制体系。

二、疗效确切，安全无任何毒副作用。为探讨本品的治疗机理与药效，我们选用不同的动物模型进行了药效学试验研究。实验研究结果表明，本品能够抑制由角叉菜胶引起的大鼠足跖肿胀，抑制由二甲苯引起的小鼠耳廓肿胀，能够提高豚鼠的致痒阈；能够减轻苯酚胶浆所致宫颈组织病理性损伤，减轻白细胞浸润，鳞状上皮增生、水肿、溃疡、变性坏死、脱落，柱状上皮鳞状化生等，并可显著抑制局部宫颈组织中PGE2的含量；体外抑菌实验研究结果显示，本品对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、白色念珠菌有一定的抑制作用；本品可明显降低大肠杆菌所致宫颈炎大鼠组织病理性损伤，显著降低宫颈组织中IL-2的含量，可改善和减轻症状和异常体征，通过以上急性炎症、慢性炎症、止痒实验研究表明，本品具有较好的抗炎、抑菌、止痒作用。阴道刺激实验研究结果表明，本品对阴道粘膜无刺激及致炎作用；经急性毒性和长期毒性试验研究结果表明，本品无任何毒副作用，临床应用非常安全。

三、泡腾式崩解，生物利用度高。本品采用现代制剂方法，经正交试验设计，选用适宜的辅料，加工制成适于临床应用的现代药物剂型阴道泡腾片。阴道泡腾片在微量生理性分泌物润湿条件下，发生酸碱中合反应，缓缓泡腾崩解并产生细而持久的气泡，可有效扩大药物与病变部位的接触面积，提高药效。阴道泡腾片与妇科常用栓剂相比，具有溶解速度快，起效快，吸收完全，不伤粘膜，使用方便，不污染衣物等特点，是妇科外用药物中极具市场开发前景的现代药物剂型。

四、工艺简单，生产成本低，适于规模化生产。本项目处方所用原料为临床常用中药材，国内每年均有大量产出，且价廉易得；本品为阴道泡腾片，且生产工艺简单，国内拥有片剂生产线的中药制药企业均可生产，且无需购置新的生产设备。

综上所述，本品具有技术含量高，生物利用度高，疗效确切，安全无毒副作用，且工艺简单，生产成本低等特点，具有显著的产业化发展优势。

为了验证本发明所具有的有益效果，申请人进行了一系列试验研究，具体如下：

一、药效学试验研究

为验证本品相关药理指标的治疗作用，我们从以下几方面建立动物模型，并以阿司匹林、地塞米松、洁尔阴泡腾片等作为阳性对照药观察药效作用。

1、抗炎作用实验

采用大鼠角足跖肿实验，本品在中、高的剂量下，对角叉菜胶所引起的大鼠足跖肿胀有明显的抑制作用，与空白对照组比较，两组差别有显著意义(P＜0.05)。

采用抑制肉芽肿的形成实验，采用棉球植入法，产生与临床某些炎症后期病理变化相似的肉芽增生，来评定本品的抗增生的作用。结果表明高、中、低剂量组对肉芽增生均具有抑制作用，肉芽肿的湿重与空白组比较差别有显著意义(P＜0.05)，且中剂量组的抑制作用，好于阳性对照组洁尔阴泡腾片组。

采用苯酚胶浆致大鼠宫颈糜烂模型及大鼠宫颈PGE2含量的测定实验，用苯酚胶浆制作SD大鼠宫颈糜烂模型，取阴道、子宫进行肉眼观察。肉眼观察，模型组阴道和宫颈组织充血、水肿明显，显微镜下观察模型组阴道、宫颈黏膜下可见大量炎细胞浸润，小血管扩张、充血、水肿，少数已经出现黏膜溃疡，其鳞状上皮增厚，鳞柱交界处可见柱状上皮鳞状化生，给药组以上情况有明显好转。在苯酚致的大鼠宫颈炎模型的基础上，对模型动物宫颈组织中PGE2的含量进行了测定，结果发现，苯酚致的宫颈炎模型大鼠宫颈组织中PGE2的含量异常升高，而本品可抑制PGE2的含量升高，从而减轻炎症反应的发生。说明本品在治疗宫颈炎的作用中，降低组织局部PGE2的含量可能是其作用途径之一。

2、抑菌实验研究

体外抗菌实验，本品大剂量对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、白色念珠菌有一定的抑制作用，虽然无法与阳性药相比，但其抑菌作用随着剂量增大而显示出明显的增强作用。

大肠杆菌致宫颈糜烂模型及大鼠宫颈IL-2含量的测定，大肠杆菌模型与苯酚模型病理改变有所不同，前者以感染溃疡为主，后者以水肿为主。本品高、中、低剂量组均可明显降低大肠杆菌模型大鼠组织病理性损害，同时各剂量组均可显著降低升高的宫颈组织中IL-2含量(全部P＜0.05)，说明降低IL-2的含量可能是其作用途径之一。

3、豚鼠组胺致痒反应的实验

本品三个剂量组与空白对照组比较，差别有非常显著意义(P＜0.05)，提示本药具有止痒的作用。

综上所述，可以初步判断本品具有抗炎、抑菌、止痒等功效，对阴道没有刺激作用，对宫颈糜烂具有一定的治疗作用，适用于湿热下注所致的带下病，症见带下量多，色黄或白，或呈脓性，腰腹坠胀，或小便淋漓涩痛，或阴痒，口苦咽干，舌红，苔黄或腻，脉滑或弦滑；宫颈糜烂见上述证候者。

二、一般药理试验研究

本实验探讨了蛇床子阴道泡腾片原料药对大鼠神经系统的影响以及对大鼠心血管系统及呼吸系统的影响。结果表明：以阴道泡腾片原料药阴道给药，小剂量组0.075g原料药/kg·d(相当于3g生药/kg·d)，中剂量组0.15g原料药/kg·d(相当于6g生药/kg·d)，大剂量组0.3g原料药/kg·d(相当于12g生药/kg·d)，其中小剂量组相当于人临床有效剂量。3个剂量组的自主活动的频率及强度，与对照组间差别无显著性意义(P＞0.05)。对麻醉大鼠的收缩压、舒张压、呼吸频率和幅度、心率和心律、心电图的P、QRS、T波、ST和P-R间期无明显影响(P＞0.05)。

蛇床子阴道泡腾片原料药的一般药理学研究表明：它对血压、呼吸、心率和心电图无明显影响，具有轻微的镇静作用，但对神经系统无明显其他影响。

三、毒理学试验研究

(一)急性毒性试验研究

我们本次急性毒性试验的实验动物采用成年ICR小鼠和大耳白兔两种动物进行。小鼠急性毒性实验，受试药物为阴道泡腾片成品，加0.5％CMC溶液配制成不同浓度混悬液，分别进行小鼠口服LD50测定和小鼠口服最大耐受量(MTD)测定。未能测出小鼠LD50。口服MTD测定结果显示，每只一次性灌胃本品20g/kg。灌药后1～2h小鼠倦缩少动，基本不摄食、水，但呼吸等体征正常；2h后迅速恢复，活动、摄食-水正常，14日内没有发生死亡，本品小鼠灌胃的最大耐受量为20g/kg相当于临床人用量的1600倍。大耳白兔急性毒性实验，受试药物为阴道泡腾片总香豆素中间体，分别进行LD50测定和阴道最大耐受量测定。未能测出大耳白兔的LD50。阴道MTD测定结果显示，每次给本品总香豆素中间体1g，一天两次。给药后1～2h大耳白兔倦缩少动，扭体，基本不摄食、水，但呼吸等体征正常；4h后逐渐恢复，活动、摄食-水正常，14日内没有发生死亡，本品大耳白兔阴道的每天最大耐受量为0.4g/kg相当于临床人用量的32倍。综合两项急性毒性实验结果，显示本品临床使用应非常安全。

试验结果表明：大白兔阴道给原料药，分两次，间隔6小时，每次给原料药0.2g/kg，1天给药剂量为0.4g原料药/kg(相当于16g生药/kg·d)，为人日用剂量0.0125g原料药/kg的32倍。给药后观察动物外观、四肢活动、摄食、饮水、排泄未见异常。连续观察14天，结果全部健康存活，体重增加，与空白对照组比较差异不显著，肉眼观察未见明显毒性反应，故认为，该药阴道给药，临床用药相当安全。

(二)长期毒性试验研究

根据《药品非临床研究质量管理规范》和《中药、天然药物长期毒性研究技术指导原则》，大鼠阴道给药，给予阴道泡腾片3个月，并经1个月的恢复期进行大鼠重复给药的毒性研究。

试验设本品3个给药剂量组和一个空白对照组，阴道泡腾片原料药低剂量组0.125g原料药/kg·d(相当于5g生药/kg·d)，中剂量组0.25g原料药/kg·d(相当于10g生药/kg·d)，高剂量组0.5g原料药/kg·d(相当于20g生药/kg·d)，分别为人临床剂量0.0125原料药g/kg·d(相当于0.5g生药/kg·d)的10、20、40倍，每组18只雌性大鼠，给药体积按1ml/1Kg体重给大鼠分别阴道给药。

试验采用连续给药6天、休息1天的方式进行；每周测定体重1次，以测定的体重调整给药体积；每天2次观察动物的一般状态；每周测定1次动物的7天进食总量。

在给药3个月后，各剂量组分别取10只动物；恢复期结束取全部剂量组剩余动物，分别进行以下检查：禁食14小时，腹腔注射4％水合氯醛0.8ml/100g麻醉，从腹腔静脉采血进行血液学和血清生化学检查，动物剖检的肉眼检查。

对测得的结果进行统计，试验结果如下：

对一般活动状况及死亡的影响：试验期间，没有发现明显的与本品相关的动物异常活动，所有剂量组动物的饮食、饮水、粪便等均正常。在全部试验周期中未发生因给予本品引起大鼠濒死和死亡的毒性反应。

对动物摄食量的影响：试验期间，没有引起与本品相关的动物进食量的明显改变。

对动物的体重增长的影响：与空白对照组比较，其它组别动物的体重增长未见异常。

对血液生化指标的影响：经统计分析表明：大鼠阴道给药本品3个月，雌鼠中剂量组血红蛋白(HGB)含量降低，与空白对照组比较差异有显著性意义(P＜0.05)。在恢复期后上述指标的改变均恢复正常。

大鼠阴道给药本品3个月及恢复期1个月对血液学指标中红细胞数(RBC)、红细胞压积(HCT)、平均红细胞体积(MCV)、平均红细胞血红蛋白(MCH)、平均红细胞血红蛋白浓度(MCHC)、血小板(PLT)数、血小板压积(PCT)、血小板分布宽度(PDW)、平均血小板体积(MPV)、网织红细胞计数、白细胞分类(淋巴细胞(LY))、单核细胞(MO)、中性粒细胞(GR)、凝血酶原时间和活化部分凝血激酶时间未引起毒理学意义上的显著性改变。

对血清生化学的影响：经统计分析表明：大鼠阴道给药本品3个月及恢复期1个月对动物的血清生化学指标包括：天门冬氨酸氨基转换酶(AST)、丙氨酸氨基转换酶(ALT)、尿素(Urea)、总胆固醇(T-CHO)、葡萄糖(GLU)、总胆红素(T-BIL)、肌酐(Crea)、碱性磷酸酶(ALP)、r-谷氨酰基转移酶(r-GT)、甘油三酯(TG)、肌酸激酶(CK)、总蛋白质(TP)和白蛋白(ALB)。其中高剂量组在给药3个月后肌酐(Crea)r-谷氨酰基转移酶(r-GT)有所降低，与空白组比较有显著差异(p＜0.05)，但停药1个月后二者指标恢复正常，与空白组比较未见显著差异。其余指标均没有引起毒理学意义上的显著性改变。

对脏器重量的影响：在给药3个月和恢复期1个月结束时，分别解剖预定剖杀的全部剂量组的动物的心脏、肝脏、脾脏、肺、肾脏、脑、胸腺、肾上腺、子宫、卵巢进行了脏器重量称量测定，并根据体重进行了相对脏器重量的转化计算。经统计分析表明，大鼠阴道给药本品各剂量均未引起相关的脏器重量改变。

病理解剖肉眼观察：给药3个月时剖检各组10只动物，恢复期结束时剖检全部剂量组的剩余动物，肉眼观察解剖动物的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、肾上腺、胸腺、主动脉、脑(大脑、小脑、脑干)、胰腺、胃、十二指肠、空肠、回肠、盲肠、结肠、直肠、淋巴结、膀胱、子宫、卵巢、脊髓、骨髓、垂体、甲状腺、唾液腺、气管、食管等，未见与本品毒性作用相关的病理学变化。

结论：分别以0.125原料药g/kg、0.25原料药g/kg、0.5g原料药/kg(为临床拟用剂量10倍、20倍和40倍)的剂量，大鼠阴道给药本品3个月，在各剂量下，均未引起雌性大鼠各器官重量系数的增加，在给药后3个月后及停药1个月未发现其它明显的毒副反应。同时高剂量组在给药3个月后肌酐(Crea)r-谷氨酰基转移酶(r-GT)有所降低，与空白组比较有显著差异(p＜0.05)，但停药1个月后二者指标恢复正常，与空白组比较未见显著差异。其余指标均没有引起毒理学意义上的显著性改变。因此在本试验条件下，本品的无毒剂量为0.5g原料药/kg(相当于临床拟定人用剂量的40倍)。

以下通过实验例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容作进一步的详细说明。

具体实施方式

【实验例1】：药材提取工艺考察

1.1提取溶剂考察：

色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水(55∶45)为流动相；检测波长为310nm；柱温为25℃；流速为1ml/min。

对照品溶液的制备：取蛇床子素适量，精密称定，加乙醇制成每1ml含100μg的溶液，即得。

供试品溶液的制备：取蛇床子粉末(过三号筛)约100g，三份，精密称定，置圆底烧瓶中，分别加入乙醇、水、乙酸乙酯10倍量，回流提取三次，每次1小时，合并滤液，减压回收溶剂，低温干燥。取适量干膏，用无水乙醇溶解至10ml容量瓶中并定容，摇匀，即得。

测定法：分别精密吸取对照品溶液和各供试品溶液，注入液相色谱仪中，测定即得。检测结果见表1。

表1提取溶剂考察结果

试验结果表明：不同溶剂对蛇床子素的提取能力从大到小依次为乙醇＞乙酸乙酯＞水，故选用乙醇为提取溶剂。

1.2提取方法考察：

色谱条件、对照品溶液的制备、测定方法同上。

供试品溶液的制备：取蛇床子粉末(过三号筛)约100g，精密称定，置圆底烧瓶中，加入10倍量无水乙醇，回流提取3次，每次1小时。合并滤液，减压回收溶剂，低温干燥。另取蛇床子粉末(过三号筛)约100g，精密称定，置适当容器中，加入1倍量的无水乙醇，拌匀，密闭放置1小时。将其装入渗漉筒中，加入10倍量的溶剂，浸渍24小时。然后用20倍量的溶剂渗漉提取，流速为1ml/min，收集渗漉液，其他操作同上。检测结果见表2。

表2提取方法考察结果

蛇床子质量(g)提取方法蛇床子素含量(％)

100.12渗漉1.1

100.98回流1.8

试验结果表明：回流提取对蛇床子素的提取率优于渗漉提取，所以选择回流提取。

1.3乙醇浓度考察：

色谱条件、对照品溶液的制备、测定方法同上。

供试品溶液的制备：取蛇床子粉末(过三号筛)约100g，精密称定，置圆底烧瓶中，分别加入无水乙醇、95％乙醇、80％乙醇、70％乙醇10倍量，加热回流提取3次，每次1小时，合并滤液，其他操作同上。检测结果见表3。

表3乙醇浓度考察结果

试验结果表明：不同浓度的乙醇对蛇床子素的提取能力依次为95％乙醇＝80％乙醇＞无水乙醇＞70％乙醇，鉴于95％乙醇与80％乙醇没有太大的差别，所以选择80％乙醇为提取溶剂。

1.4提取条件的优化：

称取药材粉末约1000g，共9份，按照下表的因素水平设计进行正交试验，提取溶液滤过，收集滤液，减压回收溶剂并干燥。按药材含量测定方法测定干膏中蛇床子素含量。

表4正交试验设计表

表5正交试验安排与结果

表6提取量方差分析

注：“*”为有显著性意义，F_0.1(2，2)＝9.00，F_0.05(2，2)＝19.00，F_0.01(2，2)＝99.00。

方差结果表明，影响因素的强弱依次为C＞B＞A，最优工艺为A₂、B₂、C₃。由于A(提取时间)的级差＜1，不是主要影响因素，方差分析可以看出，B、C两项有显著性差异，考虑到生产效率，选择最佳提取工艺为A₁B₂C₃，即加80％乙醇回流提取3次，每次10倍量，每次1小时。

1.5提取条件的验证试验

按照上述确定的最佳工艺条件A₁B₂C₃进行验证试验。

称取药材粗粉约1kg，共3份，测定出膏率及蛇床子素含量，结果见表7。

表7提取条件的验证试验结果

通过实验数据计算，其蛇床子素提取率RSD％＜2，蛇床子素的含量均值为12.1％。实验结果表明，此提取方法稳定可行，可以作为蛇床子总香豆素的提取方法。

综上，初步确定蛇床子的提取工艺为：取蛇床子药材粗粉，加80％乙醇回流提取3次，每次10倍量，每次1小时，合并药液，回收乙醇并浓缩成相对密度1.15～1.20(70℃)的浸膏。

【实验例2】：总香豆素的纯化工艺考察

2.1水沉淀方法考察：

参考文献可知，蛇床子香豆素类成分多以亲脂性的游离形式从在，可溶于一般的有机溶剂，在水中的溶解度很小，所以考虑用水沉淀的方法除去提取物中部分亲水性杂质。

2.1.1水用量考察：

精密称取上述浸膏10g，六份，置于锥形瓶中，分别加入相应浸膏量(v/g)的纯化水，搅拌均匀，静置4小时，过滤，收集滤液，挥干溶剂，杂质用乙醇溶解，HPLC测定杂质中是否含有蛇床子素。另收集沉淀物，低温干燥，称定重量，取适量用甲醇溶解，HPLC法测定蛇床子素总含量(％)。

蛇床子素的测定：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水(55∶45)为流动相；检测波长为310nm；柱温为25℃；流速为1ml/min；精密称取蛇床子素对照品适量，加乙醇分别制成每1ml各含蛇床子素100μg的对照品溶液。分别精密吸取对照品溶液和各供试品溶液，注入液相色谱仪中，测定即得。结果见表8。

表8水用量考察结果

从以上实验结果可以看出，5倍量水洗除去亲水性杂质较多，且有效成分损失较少。

2.1.2静置时间考察：

精密称取上述浸膏10g，六份，置于锥形瓶中，分别加入5倍浸膏量(v/g)的纯化水，搅拌均匀，分别静置不同时间，过滤，收集滤液，挥干溶剂，杂质用甲醇溶解，用HPLC测定杂质中是否含有蛇床子素。结果见表9。

表9静置时间考察结果

从实验结果可以看出，静置3小时时亲水性杂质可以在水中很好的溶解，有利于去除杂质，再延长时间没有太大的意义。

综上所述，蛇床子乙醇提取的浸膏，加入5倍浸膏量(v/g)的纯化水，搅拌均匀，静置3小时，过滤，收集沉淀部分。

2.2NaOH溶解方法考察：

用溶剂法提取的香豆素类成分，常有大量中性杂质存在，所以利用香豆素类成分的内酯结构，将其溶于稀碱液而和其它中性成分分离，碱溶液酸化后内酯环合，香豆素类成分即可游离析出。

因香豆素类的开环产物顺式邻羟基桂皮酸在碱液中长时间加热会异构为反式邻羟基桂皮酸，故碱溶酸沉法必须严格控制在比较温和的条件下进行。参考相关蛇床子总香豆素的文献，确定溶解温度为50℃，此处不再考察温度对其影响。

2.2.1NaOH溶液的浓度考察：

取蛇床子的醇提水沉物约10g，三份，置于锥形瓶中，加12倍量不同浓度的NaOH溶液，50℃使溶解，趁热滤过，收集滤液。滤液放冷，用10％的盐酸溶液，边加边不断搅拌，调pH至4左右，静置24小时(避光)，滤过。将酸沉淀物以水洗至中性，收集沉淀物，低温烘干。

分别精密吸取对照品溶液和各供试品溶液，注入液相色谱仪中，测定蛇床子素和欧前胡素的总含量(％)即得。检测结果见下表10。

表10NaOH溶解方法考察结果

实验结论：从以上结果可以看出，1％NaOH溶液对蛇床子总香豆素的溶解性相对比较好，所以选择1％NaOH溶液溶解。

2.2.2NaOH溶液的用量考察：

取蛇床子的醇提水沉物约10g，五份，置于锥形瓶中，加不同倍量1％NaOH溶液，50℃使溶解，趁热滤过，收集滤液。滤液放冷，用10％的盐酸溶液，边加边不断搅拌，调pH至4左右，静置24小时(避光)，滤过。将酸沉淀物以水洗至中性，收集沉淀物，低温烘干。测定方法同上，检测结果见表11。

表11Na0H溶液的用量考察结果

从实验结果可以看出，NaOH溶液的用量在大于10倍量时，其总香豆素含量变化很小，综合考虑，确定1％NaOH溶液的用量为10倍量。

综上所述：蛇床子醇提水沉物，用10倍量1％NaOH溶液，50℃使溶解，趁热滤过，收集滤液。滤液放冷，用10％的盐酸溶液，边加边不断搅拌，调pH至4左右，静置24小时(避光)，滤过。将酸沉淀物以水洗至中性，收集沉淀物，低温烘干。

2.3盐酸酸沉淀方法考察：

2.3.1盐酸浓度考察：

取蛇床子的醇提水沉物约10g，三份，置于锥形瓶中，加10倍量1％NaOH溶液，50℃使溶解，趁热滤过，收集滤液。滤液放冷，用不同浓度的盐酸溶液，边加边不断搅拌，调pH至4左右，静置24小时(避光)，滤过。将酸沉淀物以水洗至中性，收集沉淀物，低温烘干。测定方法同上，检测结果见表12。

表12盐酸浓度考察结果

从实验结果可以看出，10％的盐酸溶液对蛇床子总香豆素的沉淀效果较好，再增大盐酸浓度其沉淀效果没有太大变化。所以，选择10％的盐酸溶液进行沉淀。

2.3.2pH值考察：

取蛇床子的醇提水沉物约10g，三份，置于锥形瓶中，加10倍量1％NaOH溶液，50℃使溶解，趁热滤过，收集滤液。滤液放冷，用10％浓度的盐酸溶液，边加边不断搅拌，调至不同pH，静置24小时(避光)，滤过。将酸沉淀物以水洗至中性，收集沉淀物，低温烘干。测定方法同上，检测结果见表13。

表13pH值考察结果

从实验结果可以看出，调pH到4时对蛇床子总香豆素的沉淀效果较好，再改变pH值其沉淀效果没有太大变化，所以将其pH调至4左右即可。

2.4总香豆素有效成份的干燥

为避免酸沉淀物中有效成分的破坏，采用低温烘干的方法进行干燥，初步确定为50℃干燥。

【实验例3】：制剂成型工艺研究

3.1剂型的选择

本品为从伞形科植物蛇床的干燥成熟果实经一定工艺提取的有效部位-总香豆素提取物，与经正交试验筛选的辅料，并优化制剂成型工艺而制成的阴道泡腾片，提高其生物利用度，从而提高临床疗效。

泡腾片剂由于崩解产生的大量泡沫增加了药物与病变部位的直接接触，更好地发挥其疗效作用，所以泡腾片适合用于阴道疾病的防治用药，并且具有崩解快速、起效迅速，生物利用度高，保存和携带方便。

3.2辅料种类的筛选和用量考察

3.2.1有机酸种类选择

按表14的处方，取蛇床子总香豆素提取物48g，各有机酸适量、聚乙二醇6000和氯化钠，混匀，以乙醇为润湿剂，过50目筛制粒，备用；另取碳酸氢钠和适量的羧甲基淀粉钠，混匀，过50目筛制粒，将上述颗粒合并，加入适量的微粉硅胶，混匀，压片，即得。

表14有机酸种类的选择

检查：

发泡量取25ml具塞刻度试管(内径1.5cm)10支，各精密加水2ml，置37℃±1℃水浴中5分钟后，各管中分别投入供试品1片，密塞，20分钟内观察最大发泡量的体积。

崩解时限实验水温为24℃±1℃，依法测定(中国药典2005年版一部附录XIIA泡腾片项下)。

实验结果见表15～16：

表15不同处方发泡量结果(ml)

表16不同处方崩解时限结果(min)

从实验数据可以看出，柠檬酸明显优于另外两种有机酸，所以选择柠檬酸。

3.2.2柠檬酸和碳酸氢钠的配比考察

按表17的处方，取蛇床子总香豆素提取物48g，柠檬酸适量，聚乙二醇6000和氯化钠，混匀，过50目筛制粒；另取碳酸氢钠和羧甲基淀粉钠，混匀，过50目筛制粒，将上述颗粒合并，加入适量的微粉硅胶，混匀，压片，即得。

表17柠檬酸和碳酸氢钠的配比考察

检查：

pH值取本品10片，加水50ml，待发泡停止后，依法测定(中国药典2005年版一部附录VIIG)。

发泡量取25ml具塞刻度试管(内径1.5cm)10支，各精密加水2ml，置37℃±1℃水浴中5分钟后，各管中分别投入供试品1片，密塞，20分钟内观察最大发泡量的体积。实验结果见表18～19：

表18不同处方pH值结果

表19不同处方发泡量结果(ml)

从实验数据可以看出，柠檬酸和碳酸氢钠物质的量之比为0.37∶1为较优比例。

3.2.3各辅料配比的正交试验

按正交设计表，取蛇床子总香豆素提取物48g，柠檬酸适量，聚乙二醇6000和氯化钠适量，混匀，过50目筛制粒，备用；另取碳酸氢钠和羧甲基淀粉钠适量，混匀，过50目筛制粒，将上述颗粒合并，加入适量微粉硅胶，混匀，压片，即得。

表20正交试验设计

检查

崩解时限实验水温为24℃±1℃，依法测定(中国药典2005年版一部附录XIIA泡腾片项下)。实验结果见表21～22：

表21直观分析表-崩解时限(s)

表22方差分析表-崩解时限(s)

从实验数据可以看出，对崩解时限的影响强弱依次为B＞A＞C＞D，较优的工艺选择为A₁B₃C₁D₂，A、B存在显著性差异。

重量差异分别取不同处方样品，各20片，照中国药典2005年版一部附录ID片剂【重量差异】项下规定进行检查，计算其RSD％。

实验结果见表23～24：

表23直观分析表-重量差异

表24方差分析表-重量差异

从实验数据可以看出，对重量差异的影响强弱依次为D＞C＞A＞B，较优的工艺选择为A₃B₁C₃D₃，C、D存在显著性差异。

在崩解时限的考察中，A、B为主要影响因素，在重量差异的考察中，C、D为主要影响因素，所以较优的工艺方案为A₁B₃C₃D₃。C因素中，水平2、3均值相差很小，对处方的综合考虑，选择水平2较为合适。

综述所述，处方的制备工艺为A₁B₃C₂D₃。即取蛇床子总香豆素提取物240g、柠檬酸165g、聚乙二醇600025g和氯化钠15g，混匀，过50目筛，备用；另取碳酸氢钠195g和羧甲基淀粉钠45g，混匀，过50目筛，将上述两种粉末合并，加入微粉硅胶适量，混匀，压制成1000片(0.7g/片)，即得。

3.3颗粒的流动性与吸湿性考察

3.3.1休止角的测定

颗粒流动性的好坏对片重差异有较大的影响，也是保证药品质量的一个环节。通过测定颗粒休止角的大小，考察其流动性，方法及结果如下：

采用固定漏斗法，将3只漏斗串联，并固定于水平放置的坐标纸上3cm处，小心将颗粒沿漏斗壁倾入最上的漏斗中，直滑到下方漏斗形成的颗粒园尖端接触到漏斗口为止，由坐标纸测定圆锥底部的直径(2R)，计算休止角(tgα＝H/R)。结果见表25。

表25颗粒的休止角(度)

结果表明本品颗粒流动性良好，利于压片，易于控制装量。

3.3.2颗粒临界相对湿度(CRH)的测定

吸湿是中药固体制剂经常发生的现象，水分对固体制剂稳定性的影响很大，往往是其它变化的前提条件。而环境湿度对颗粒在制备、分装过程中发生吸湿现象的影响又很大。因此，为了防止吸潮，测定了颗粒的临界相对湿度，为控制压片车间的相对湿度提供参考依据。

将按制粒工艺条件制备好的颗粒干燥至恒重后，在已恒重的称量瓶底放入厚约2mm的颗粒，准确称量后分别置于表中所列的盛有七种不同浓度的硫酸或不同盐的过饱和溶液的干燥器内(称量瓶盖打开)，于25℃恒温箱中放置48小时，取出称量瓶称量，按下列公式计算，吸湿百分率：

表26不同相对湿度下颗粒的吸湿百分率

吸湿曲线的绘制：以上表中的吸湿百分率为纵坐标，相对湿度(RH％)为横坐标作图，作出曲线两端的切线，两切线交点对应的横坐标即为临界相对湿度，为65％，故本品压片的环境相对湿度应控制在65％以下，以保证本品的质量。

实施例：

处方1：

其制备工艺为：

取蛇床子总香豆素提取物48g、柠檬酸33g、聚乙二醇60005g和氯化钠3g，混匀，过50目筛，备用；另取碳酸氢钠39g和羧甲基淀粉钠9g，混匀，过50目筛，将上述两种粉末合并，加入微粉硅胶3g，混匀，压制成200片，即得。

处方2：

其制备工艺为：

取蛇床子总香豆素提取物240g、柠檬酸165g、聚乙二醇600025g和氯化钠15g，混匀，过50目筛，备用；另取碳酸氢钠195g和羧甲基淀粉钠45g，混匀，过50目筛，将上述两种粉末合并，加入微粉硅胶15g，混匀，压制成1000片，即得。

Claims (3)

1.一种治疗宫颈糜烂的药物，其特征在于它是由以下重量配比的主药和辅料制成的：

其中所述蛇床子总香豆素提取物的制备工艺，包括以下步骤：

(1)取蛇床子药材粗粉10kg，加80％乙醇回流提取3次，每次10倍量，每次1小时，合并药液，回收乙醇并浓缩至在70℃下相对密度1.15～1.20的浸膏；

(2)上述浸膏加5倍浸膏量g/ml的纯化水，搅拌均匀，静置3小时，滤过，沉淀加1％NaOH溶液50℃使溶解，趁热滤过，收集滤液，放冷；

(3)碱水液加入10％的盐酸溶液，边加边不断搅拌，调pH至4，静置24小时避光，滤过，沉淀物以纯化水洗至中性，收集沉淀物，50℃干燥，即得。

2.根据权利要求1所述的一种治疗宫颈糜烂的药物，其制剂成型工艺为：

取蛇床子总香豆素提取物240g、柠檬酸165g、聚乙二醇600025g和氯化钠15g，混匀，过50目筛，备用；另取碳酸氢钠195g和羧甲基淀粉钠45g，混匀，过50目筛，将上述两种粉末合并，加入微粉硅胶15g，混匀，压制成1000片，即得。

3.根据权利要求1所述的一种治疗宫颈糜烂的药物，它的功能主治是：具有燥湿消炎，祛腐生肌的功效，主要用于湿热下注所致的带下病，症见带下量多，色黄或白，或呈脓性，腰腹坠胀，或小便淋漓涩痛，或阴痒，口苦咽干，舌红，苔黄或腻，脉滑或弦滑；宫颈糜烂见上述证候者。