CN109827814A - 一种新型大气颗粒物琼脂采样膜制备及免溶剂提取细胞暴露方法 - Google Patents
一种新型大气颗粒物琼脂采样膜制备及免溶剂提取细胞暴露方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及一种新型大气颗粒物琼脂采样膜制备及免溶剂提取细胞暴露方法。方法为：将琼脂粉或琼脂糖和水混合，加热溶解混匀，倒入制胶盘，铺平，成型，冷冻干燥，压平裁剪得到琼脂采样膜，再配合采样器采集大气颗粒物，将采集后的琼脂采样膜用培养基或水溶出大气颗粒物，用于细胞毒性实验。本发明解决了目前常用的大气颗粒物采样膜在用于暴露大气颗粒物细胞信号转导研究中，均需要经过提取才能获得大气颗粒物成分，且提取效率不高的问题。本发明琼脂采样膜的制备方法简单易行，绿色安全，可实现大规模批量化生产，制成的膜具有表面平整内部多孔的结构、柔软易于裁剪、较高的大气颗粒物采集效率、良好的生物兼容性以及不易滋生细菌等优点。
Description
技术领域
本发明属于环保技术领域，具体涉及一种新型大气颗粒物琼脂采样膜制备及免溶剂提取细胞暴露方法。
背景技术
目前，我国的大气污染形势严峻。考察大气污染造成的影响，必须对大气颗粒物进行研究。要得到大气颗粒物排放浓度或者大气中的颗粒物浓度数据，需要对大气中的颗粒物进行收集和采样。
对大气颗粒物的采集方法目前主要有两大类。一类是使大量空气通过液体吸收剂或者固体吸附剂来吸收或阻留污染物，把原来空气中颗粒浓度较低的颗粒物富集起来，如抽气法、滤膜法等。用这类方法可以收集大量的污染物，测得的结果是采样时间内空气中污染物的平均浓度。另一类是用容器(如玻璃瓶、塑料袋、注射器等)采集含有污染物的空气。这类方法适用于空气中污染物的浓度较高，或者测定方法的灵敏度较高，不易被液体吸收剂吸收或者固体吸附剂吸附的污染气体和蒸汽。此法收集到的污染物一般较少，得到的结果为空气中污染物的瞬时浓度或者短时间内的平均浓度。
针对大气颗粒物对细胞信号转导的研究，容器法因采集颗粒物少，难以富集和定量等问题，鲜有人采用。目前主流方法是通过滤膜法采集大量的颗粒物并将其从膜中提取出来。通常采用各种不同的采样膜，如玻璃纤维膜、石英膜和聚四氟乙烯膜等。其颗粒物提取过程一般需经过高温灭菌，再经过水或有机溶剂(二甲亚砜、二氯甲烷、正己烷和丙酮等)辅以超声提取。或者先经过某种溶剂溶解、吹干、再用另一种溶剂复溶提取，也有采用微波辅助提取的报道。专利文献CN103674624A即涉及滤膜法采集大气颗粒物，其具体公开了一种富集环境空气中重金属的采样膜、采样器及其应用方法，所述采样膜包括纳米纤维膜片和衬在膜片下面的透气性支撑垫料；所述采样器包括采样膜和采样夹，采样夹由上部分圆锥体和下部分圆柱体构成，圆锥体的上表面水平，圆柱体分为上圆柱和可旋转的下圆柱，上下圆柱的侧表面带有均匀分布的竖楞，通过旋转下圆柱使上下圆柱的竖楞对齐，即实现采样膜在采样夹的水平表面上固定；用该采样器完成空气中的重金属采集后，将滤膜取出放入加有缓冲液的离心管中，用溶液解析滤膜上的重金属，并对解析后的溶液进行测定。但由于这些传统采样膜的刚性网状结构，颗粒物易于嵌塞其中，膜上的化学组成未能被全部抽提，且形貌结构和纳米力学性质难以得到完整保留，实际上细胞暴露的已不是真正意义上的大气颗粒物。而且，玻璃纤维膜、石英膜等纤维膜在提取过程中，容易造成膜本底纤维脱落，对颗粒物的实际成分造成一定影响，而且影响后续细胞毒性分析结果。而聚四氟乙烯膜因其强烈的疏水性，亲水性溶剂很难深入到采样膜内部，因而提取效率不够高。
为了降低采样膜对大气颗粒物实际成分的影响，也有少数研究者采用无膜采样，颗粒物直接撞击到金属采集板上。这样操作易造成硬颗粒反弹和破碎，粘性颗粒则会粘附在采集板上。同时，为了解释大气颗粒物中某种污染物对细胞信号转导的影响，一些研究者采用与颗粒物中相同浓度的纯物质刺激细胞进行比对分析，这样的做法忽视了污染物所依附载体的形貌结构和纳米力学性质，其结果与大气颗粒物溶剂提取物刺激细胞所得到的结果无法比对。通过以上这些设计不尽合理、操作未规范化的采样及暴露方法得到的大气颗粒物对细胞信号转导影响的结果难以被采信。
大气颗粒物的无扰动、非破坏采样和细胞暴露是完善体外细胞暴露大气颗粒物信号转导研究的关键因素。本申请发明人认为，如果用生物兼容的琼脂培养基制成的膜代替撞击式大气颗粒物采样器的常规滤膜，就可以使颗粒物撞击到软性的琼脂膜上，接着将含有大气颗粒物的琼脂膜直接暴露细胞。由于琼脂易吸水膨胀的特点，采集在琼脂上的颗粒物在培养基中很容易释放出来，可以免除用水或有机溶剂提取，从而保证颗粒物的化学组成、形貌结构和纳米力学性质不受影响，让细胞暴露接近“原生态”的大气颗粒物，而对细胞友好的琼脂对细胞的培养没有伤害，不会影响细胞的行为及其相关的信号转导过程。
发明内容
本发明的目的是要解决目前常用的大气颗粒物采样膜(如玻璃纤维膜、石英膜、聚四氟乙烯膜等)在用于细胞毒性实验中，均需要经过提取才能获得大气颗粒物成分的问题，提供一种用于大气颗粒物采集的新型琼脂膜的制备方法，一种新型的大气颗粒物采集方法，一种大气颗粒物免溶剂提取细胞暴露方法，以及一种新型的大气颗粒物分析方法。
本发明一种大气颗粒物琼脂采样膜制备方法，包括以下步骤：选取琼脂粉，烘干；将琼脂粉和水混合，加热煮沸至完全溶解，混匀，倒入制胶盘中，铺平，凝胶成型；将凝胶状的琼脂膜冷冻凝固，后转移至冷冻干燥器上至完全干燥，得所述琼脂采样膜。
作为一个优选例，所述琼脂粉与水的质量比为1:(50-150)。
作为另一优选例，所述琼脂粉为高凝胶强度生物试剂级，优选凝胶强度大于1300g/cm2。
作为另一优选例，还进一步包括以下步骤：将所述琼脂采样膜于密封状态下压平。更优选地，压强为2000-4000Pa。
作为另一优选例，还进一步包括以下步骤：对所述琼脂采样膜进行裁剪。更优选地，裁剪至与撞击式大气颗粒物采样器相匹配。
作为另一优选例，还进一步包括以下步骤：将所述琼脂采样膜放在干燥器或低温低湿下保存。
本发明一种大气颗粒物采集方法，所述大气颗粒物采集方法是应用琼脂采样膜采集大气颗粒物，所述琼脂采样膜是将琼脂粉溶解于水后制成凝胶，再冷冻凝固所述凝胶，最后完全冷冻干燥制成的膜。
作为一个优选例，所述琼脂采样膜的制备方法为：选取琼脂粉，烘干；将琼脂粉和水混合，加热煮沸至完全溶解，混匀，倒入制胶盘中，铺平，凝胶成型；将凝胶状的琼脂膜冷冻凝固，后转移至冷冻干燥器上至完全干燥，得所述琼脂采样膜。
作为另一优选例，所述琼脂粉与水的质量比为1:(50-150)。
作为另一优选例，所述琼脂粉为高凝胶强度生物试剂级，优选凝胶强度大于1300g/cm2。
作为另一优选例，采集大气颗粒物时，将所述琼脂采样膜配合撞击式大气颗粒物采样器使用。
作为另一优选例，将所述琼脂采样膜于密封状态下压平，压强2000-4000Pa，然后裁剪至与所述撞击式大气颗粒物采样器相匹配，放在干燥器或低温低湿下保存，然后用于配合撞击式大气颗粒物采样器采集大气颗粒物。
本发明一种大气颗粒物免溶剂提取细胞暴露方法，包括以下步骤：用如上任一所述的大气颗粒物采集方法采集大气颗粒物；将采集后的琼脂采样膜灭菌，通过采样前后琼脂采样膜质量的差异计算采集的大气颗粒物质量；加入一定体积的培养基或水，涡旋混匀后，制成含有大气颗粒物的母液，用于细胞实验。
本发明一种大气颗粒物分析方法，包含用如上任一所述的大气颗粒物采集方法采集大气颗粒物的步骤。
作为一个优选例，所述大气颗粒物分析方法用于但不限于以下几类：
I)大气颗粒物质量浓度分析；
II)大气颗粒物元素含量分析；
III)大气颗粒物中多环芳烃含量分析；或
IV)大气颗粒物中细菌数目的测定。
作为另一优选例，所述大气颗粒物质量浓度分析的具体方法为：将制得的琼脂采样膜裁剪至合适形状，采样之前仔细检查琼脂采样膜是否破损，并置于干燥器中保存至恒重，于相对恒温恒湿的洁净天平室中称重并编号。依次放置在撞击式采样器的托盘中，琼脂采样膜不高于托盘边缘。选择非阴雨天气、空气污染指数较高的地点，以一定流速采集大气颗粒物。将采集后的琼脂采样膜依次放置于铝箔纸中，于同一天平室中平衡至恒重，称重。称完后用铝箔纸将琼脂采样膜包裹，干燥器中保存。根据采样前后琼脂采样膜的质量差值计算大气颗粒物的质量，并根据采样时间换算出大气颗粒物的实际质量浓度。
作为另一优选例，所述大气颗粒物元素含量分析的具体方法为：将采集后的琼脂采样膜进行强酸消解，选用适当的检测仪器(如：电感耦合等离子体质谱、电感耦合等离子体光谱、原子吸收分光光度计等)测定消解液中多种离子的含量。通过减去空白琼脂采样膜消解后消解液中的离子浓度，得到大气颗粒物中多种元素的含量。
作为另一优选例，所述大气颗粒物中多环芳烃含量分析的具体方法为：将琼脂采样膜预先经过二氯甲烷超声清洗，风干压平后采样。将采集得到的样品经二氯甲烷/正己烷提取、富集、净化后，选择适当的检测仪器(如：气相色谱-质谱联用仪等)，测定富集液中多种多环芳烃的含量。通过减去空白琼脂采样膜中的浓度，得到大气颗粒物中多种多环芳烃的含量。
作为另一优选例，所述大气颗粒物中细菌数目的测定的具体方法为：取一定质量的采样后琼脂采样膜，剪碎，加入无菌生理盐水，充分涡旋振荡均匀。取一定体积混合液移入平皿后，将一定体积营养琼脂培养基注入平皿，转动混匀，以加入同等体积稀释液的灭菌平皿作空白对照。待琼脂凝固后，翻转平板，放置培养箱中培养，记录平板菌落数。
如本文所用，所述琼脂是从红藻中提取的，由琼脂糖和琼脂果胶组成的一种混合物。其凝胶能力主要由琼脂中β-D-半乳呋喃糖和3,6-脱水α-L-半乳呋喃糖相间结合提供。而琼脂果胶则是由许多更小的分子组成的混合物。
本发明制备的琼脂采样膜通过全内反射傅里叶红外光谱仪测定冷冻干燥后的琼脂膜，结果显示在1050cm-1、1200cm-1附近有特征吸收双峰；在1350cm-1、1650cm-1附近存在特征吸收单峰。采用扫描电子显微镜拍摄干燥后琼脂膜的表面和内部结构，其表面为平整光滑的膜结构，而内部则为多孔的网状结构。
本发明的有益效果在于：
一、为尽量减少在细胞信号转导研究中其他干扰成分对细胞的影响，本发明首次制备了表面为平整光滑的膜结构，而内部为多孔的网状结构的琼脂膜，并使用该琼脂膜采集大气颗粒物。由于琼脂膜本身较为柔软，在采样过程中，其表面的结构容易破裂，颗粒物便会进入到琼脂内部的网状结构中，采样时易于捕捉颗粒物。而由于琼脂优良的吸水性以及吸水后溶胀的特点，采集到的大气颗粒物很容易在水相体系中释放。这一独特的优点便可以用于免溶剂提取直接在培养基体系下释放大气颗粒物作用于细胞，开展一系列化学、环境、生物学实验。相比于传统采样膜(如玻璃纤维膜、石英膜、聚四氟乙烯膜等)在用于细胞信号转导研究中，均需要经过提取才能获得大气颗粒物成分，琼脂膜无需溶剂提取，确保了大气颗粒物的完整性。
二、本发明琼脂采样膜的制备工艺简单，溶解过程只需煮沸0.5h，凝胶过程室温下即可；制作过程绿色安全无污染；可实现大规模批量化生产；制作的琼脂膜具有较高的大气颗粒物采集效率、易于裁剪等优点，可以代替传统采样膜，更加方便快速地实现无损采样、成分分析、细胞毒性分析等一系列实验。
附图说明
图1为实施例1制备琼脂采样膜流程示意图；
图2为实施例1制备琼脂采样膜所用的圆形制胶盘的照片和示意图；
图3为实施例1冻干后琼脂采样膜的照片；
图4为实施例1冻干后琼脂采样膜的红外光谱图；
图5为实施例1冻干后琼脂采样膜的扫描电镜图；
图6为实施例2琼脂采样膜直接用于刺激细胞的示意图；
图7为本发明大气颗粒物免溶剂提取细胞暴露方法完整流程图。
具体实施方式
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。
实施例1
以采集南京市栖霞区2018年秋冬季节非阴雨天气大气颗粒物为例，进行采样膜制备，颗粒物采集及颗粒物中常见金属元素含量分析实验，包含以下具体步骤：
1.琼脂采样膜的制备
具体步骤：选取凝胶强度大于1300g/cm2的生物试剂级琼脂粉，60℃烘干6h；称取1.500g干燥后的琼脂粉，加入150mL去离子水，加热煮沸30min左右至琼脂粉完全溶解，混匀得到混合物为泛黄粘稠液体；量取15mL混合物倒入直径10cm的圆形制胶盘(见图2)，做成10份，置于室温下凝胶成型；将凝胶状的琼脂膜置于-20℃冰箱中快速冷冻1-2h；然后转移至冷冻干燥器上冻干24h左右至完全干燥；将所制得采样膜放置于密封袋中，平板压平，压强2000Pa。将所制得的琼脂采样膜裁剪至直径为8cm的圆形膜，放在干燥器或低温低湿下保存。该琼脂采样膜的制备流程见图1，所制得的琼脂膜见图3，其红外光谱见图4，扫描电子显微镜图见图5。
2.大气颗粒物的采集
将步骤1所制得的琼脂采样膜依次放置在安德森撞击式采样器的圆形托盘中，琼脂采样膜不高于圆形托盘边缘。选择非阴雨天气、空气污染指数较高的时间地点，以28.3L/min的流速采集72h。将采集后的琼脂采样膜依次放置于铝箔纸中，干燥器中保存。
3.大气颗粒物中部分金属元素含量分析
分别取1/4采集大气颗粒物后的琼脂采样膜于微波消解罐中，加入8mL浓硝酸和2mL双氧水，10min内上升至180℃并持续微波消解1h，蒸发并定容至4mL。选用电感耦合等离子体光谱检测其元素含量。通过减去空白琼脂采样膜消解后消解液中的离子浓度，得到大气颗粒物中多种元素的含量。结果见表1。
表1大气颗粒物部分金属元素含量数据表
从上表可以看出，用琼脂采样膜采集的大气颗粒物可以用于测定大气颗粒物中大部分金属元素的含量。
实施例2
以采集南京市栖霞区2018-2019年冬季非阴雨天气大气颗粒物为例，进行采样膜制备，颗粒物采集及细颗粒物刺激人肝癌细胞24h细胞活力实验，包含以下步骤：
1.琼脂采样膜的制备
具体步骤：选取凝胶强度大于1300g/cm2的生物试剂级琼脂粉，60℃烘干6h；称取3.000g干燥后的琼脂粉，加入200mL去离子水，加热煮沸30min左右至琼脂粉完全溶解，混匀得到混合物为泛黄粘稠液体；量取10mL混合物倒入直径10cm的圆形制胶盘，做成20份，置于室温下凝胶成型；将凝胶状的琼脂膜置于-20℃冰箱中快速冷冻1-2h；然后转移至冷冻干燥器上冻干24h左右至完全干燥；将所制得采样膜放置于密封袋中，平板压平。将所制得的琼脂采样膜裁剪至直径为8cm的圆形膜，放在干燥器或低温低湿下保存。
2.大气颗粒物的采集
将步骤1所制得的琼脂采样膜依次放置在安德森撞击式采样器的圆形托盘中，琼脂采样膜不高于圆形托盘边缘。选择非阴雨天气、空气污染指数较高的时间地点，以28.3L/min的流速采集72h。将采集后的琼脂采样膜依次放置于铝箔纸中，干燥器中保存。
3.大气颗粒物直接暴露细胞测定细胞活力实验
取采样后的琼脂采样膜，按照所称取的颗粒物质量裁剪相应大小的琼脂膜，直接加入一定体积的培养基，涡旋混匀，配制成500μg/mL的母液。操作流程见图6。选取0-500μg/mL的母液按梯度浓度方式刺激人肝癌细胞HepG2 24h后，利用CCK-8法测定细胞的活力值。结果表明本发明所制备的琼脂采样膜采样后制备的母液HepG2细胞活力80％，50％，20％分别在75，175，250μg/mL。
实施例3
选取分析纯琼脂糖粉，称取3.000g，加入300mL去离子水，加热煮沸30min左右至完全溶解；量取60mL混合物倒入直径20cm的圆形制胶盘，做成5份，置于室温下凝胶成型；将凝胶状的琼脂膜置于-20℃冰箱中快速冷冻凝固；然后转移至冷冻干燥器上冻干48h左右至完全干燥；将所制得采样膜放置于密封袋中，平板压平，制得更大规格的琼脂采样膜。
实施例4
制备琼脂采样膜，如下：
1、选取凝胶强度大于1300g/cm2的生物试剂级琼脂粉，60℃烘干6h；
2、将步骤1中的琼脂粉与去离子水按质量比1:100混合，加热煮沸30min左右至琼脂粉完全溶解，混匀得到混合物为泛黄粘稠液体；
3、将步骤2中混合物倒入聚苯乙烯制胶盘中，铺平，高度为2mm(例：量取15mL混合物倒入直径10cm的圆形制胶盘)，置于室温下凝胶成型；
4、将步骤3中凝胶状的琼脂膜置于-20℃冰箱中快速冷冻1-2h，或者用液氮速冻，冷冻完成的琼脂为白色固体，表面覆有一层薄冰。然后转移至冷冻干燥器上冻干24h左右至完全干燥，干燥完成后的琼脂膜直径缩小约90％，为白色多孔膜，表面有适度粘性；
5、将步骤4中所得采样膜放置于密封袋中，平板压平，压强3000Pa左右。裁剪后得到与采样器相匹配的琼脂采样膜，制成的琼脂采样膜放在干燥器或低温低湿下保存。
实施例5
一种大气颗粒物质量浓度分析方法：将按照实施例4所制得的琼脂采样膜裁剪至直径为8cm的圆形膜，采样之前仔细检查采样膜是否破损，并置于干燥器中保存至恒重，于相对恒温恒湿的洁净天平室中平衡24h以上，称重并编号。依次放置在安德森撞击式采样器的圆形托盘中，采样膜不高于圆形托盘边缘。选择非阴雨天气、空气污染指数较高的地点，以28.3L/min的流速采集72h。将采集后的琼脂膜依次放置于铝箔纸中，于同一天平室中平衡24h以上至恒重，称重。称完后用铝箔纸将采样膜包裹，干燥器中保存。根据采样前后采样膜的质量差值计算颗粒物的质量，并根据采样时间换算出大气颗粒物的实际质量浓度。
实施例6
一种大气颗粒物元素含量分析方法：用实施例4所制得的琼脂采样膜采样，将采集后的琼脂膜进行强酸消解，选用适当的检测仪器(如：电感耦合等离子体质谱、电感耦合等离子体光谱、原子吸收分光光度计，等)测定消解液中多种离子的含量。通过减去空白采样膜消解后消解液中的离子浓度，得到大气颗粒物中多种元素的含量。
实施例7
一种大气颗粒物中多环芳烃含量分析方法：按照实施例4的方法制备琼脂采样膜，将琼脂膜预先经过二氯甲烷超声清洗，风干压平后采样。将采集得到的样品经二氯甲烷/正己烷提取、富集、净化后，选择适当的检测仪器(如：气相色谱-质谱联用仪，等)，测定富集液中多种多环芳烃的含量。通过减去空白采样膜中的浓度，得到大气颗粒物中多种多环芳烃的含量。
实施例8
一种大气颗粒物中细菌数目的测定方法：用实施例4所制得的琼脂采样膜采样，根据国标GB 4789.2-2010中的说明，取采样后琼脂采样膜的0.2g，剪碎，加入19.8mL 0.9％无菌生理盐水，充分涡旋振荡均匀。取1mL混合液移入平皿后，将凉至46℃营养琼脂培养基15mL注入平皿，转动混匀，以加入1mL稀释液的灭菌平皿作空白对照。待琼脂凝固后，翻转平板，放置36±1℃温箱中培养48h后，记录平板菌落数。
实施例9
一种大气颗粒物直接暴露细胞实验方法：用实施例4所制得的琼脂采样膜采样，将采集后的琼脂采样膜平铺在紫外灯下，灭菌1h。通过计算颗粒物的质量，裁剪采样膜，加入一定体积的培养基，涡旋混匀后，制成含有颗粒物的母液后，用于细胞活力、毒性、基因组、蛋白组等细胞实验。
在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
Claims (10)
1.一种大气颗粒物采集方法，其特征在于，所述大气颗粒物采集方法是应用琼脂采样膜采集大气颗粒物，所述琼脂采样膜是将琼脂粉溶解于水后制成凝胶，再冷冻凝固所述凝胶，最后完全冷冻干燥制成的膜。
2.根据权利要求1所述的大气颗粒物采集方法，其特征在于，所述琼脂采样膜的制备方法为：选取琼脂粉，烘干；将琼脂粉和水混合，加热煮沸至完全溶解，混匀，倒入制胶盘中，铺平，凝胶成型；将凝胶状的琼脂膜冷冻凝固，后转移至冷冻干燥器上至完全干燥，得所述琼脂采样膜。
3.根据权利要求2所述的大气颗粒物采集方法，其特征在于，所述琼脂粉与水的质量比为1:(50-150)。
4.根据权利要求2所述的大气颗粒物采集方法，其特征在于，所述琼脂粉为生物试剂级。
5.根据权利要求1所述的大气颗粒物采集方法，其特征在于，采集大气颗粒物时，将所述琼脂采样膜配合撞击式大气颗粒物采样器使用。
6.根据权利要求5所述的大气颗粒物采集方法，其特征在于，将所述琼脂采样膜于密封状态下压平，压强2000-4000 Pa，然后裁剪至与所述撞击式大气颗粒物采样器相匹配，放在干燥器或低温低湿下保存，然后用于配合撞击式大气颗粒物采样器采集大气颗粒物。
7.一种大气颗粒物免溶剂提取细胞暴露方法，其特征在于，用权利要求1-6任一所述的大气颗粒物采集方法采集大气颗粒物；将采集后的琼脂采样膜灭菌，通过采样前后琼脂采样膜质量的差异计算采集的大气颗粒物质量；加入一定体积的培养基或水，涡旋混匀后，制成含有大气颗粒物的母液，用于细胞实验。
8.一种大气颗粒物分析方法，其特征在于，包含用权利要求1-6任一所述的大气颗粒物采集方法采集大气颗粒物的步骤。
9.根据权利要求8所述的大气颗粒物分析方法，其特征在于，所述大气颗粒物分析方法用于：
I）大气颗粒物质量浓度分析；
II）大气颗粒物元素含量分析；
III）大气颗粒物中多环芳烃含量分析；或
IV）大气颗粒物中细菌数目的测定。
10.一种大气颗粒物琼脂采样膜制备方法，其特征在于，选取琼脂粉或琼脂糖，烘干；将琼脂粉和水混合，加热煮沸至完全溶解，混匀，倒入制胶盘中，铺平，凝胶成型；将凝胶状的琼脂膜冷冻凝固，后转移至冷冻干燥器上至完全干燥，得所述琼脂采样膜。
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|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
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Application publication date: 20190531 |