CN106138928A - 一种蜜炼强力枇杷膏及其制备方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种蜜炼强力枇杷膏，取枇杷叶69g、百部15g、桑白皮6g、罂粟壳50g、白前9g、桔梗6g、薄荷脑0.15g，除薄荷脑外其他药材水提醇沉得浓缩液，使用超临界萃取，得超临界萃取物，继续浓缩至约100ml，加苯甲酸钠2.5g，搅拌使溶解，加炼蜜约100ml、饴糖300ml，继续加热至沸，保持20分钟，滤过，放冷，加入枸橼酸0.5g、用乙醇溶解的枇杷香精适量及薄荷脑，搅拌，混匀，加炼蜜至1000ml，混匀，即得蜜炼强力枇杷膏，制备得到桔梗皂苷D含量高，并发现蜜炼强力枇杷膏在制备抑制人胚肾HEK‑293细胞增殖药物中的应用。

Description

一种蜜炼强力枇杷膏及其制备方法和应用
技术领域
本发明涉及中药提取技术领域，具体涉及一种蜜炼强力枇杷膏及其制备方法和应用。
背景技术
现有技术中蜜炼强力枇杷膏提取方法，工艺粗糙、落后，杂质多，有效成分含量低，导致患者用量过大，不方便服用，严重影响了本品在临床上应用。
发明内容
发明目的：为了解决上述问题，本发明的目的在于提供一种蜜炼强力枇杷膏及其制备方法和应用。
技术方案：本发明的目的是通过如下的方案实现的：
一种蜜炼强力枇杷膏，制备方法为：取枇杷叶69g、百部15g、桑白皮6g、罂粟壳50g、白前9g、桔梗6g、薄荷脑0.15g，除薄荷脑外其他药材加药材10倍重量的水，浸泡0.5h，煎煮1小时，过滤，药渣再加入药材8倍重量的水，煎煮1小时，药液滤出，合并两次煎煮液，浓缩至60℃相对密度为1.05，加乙醇使含醇量的体积百分比达75％，搅拌，静置，过滤，滤液浓缩至65℃时相对密度为1.25，并回收乙醇，得浓缩液，使用超临界萃取，得超临界萃取物，继续浓缩至约100ml，加苯甲酸钠2.5g，搅拌使溶解，加炼蜜约100ml、饴糖300ml，继续加热至沸，保持20分钟，滤过，放冷，加入枸橼酸0.5g、用乙醇溶解的枇杷香精适量及薄荷脑，搅拌，混匀，加炼蜜至1000ml，混匀，即得蜜炼强力枇杷膏。
所述蜜炼强力枇杷膏，制备方法中将水提醇沉浓缩液加入到CO2超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为4-6％，萃取压力15-30MPa，温度30-50℃，CO2流量1-3m1/g生药·min，萃取时间150-180min，得超临界萃取物，优选条件为：所述CO2超临界萃取夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为5％，所述CO2超临界萃取的萃取压力20MPa，温度40℃，CO2流量2ml/g生药·min，萃取时间160min。
所述蜜炼强力枇杷膏，上述提取方法中浓缩使用装置，包括浓缩筒体，设置在所述浓缩筒体底部的蒸发器，在所述浓缩筒体的顶部设有出气孔和凝结面板，在所述凝结面板内设有降温液存储腔，在所述浓缩筒体的顶部设有与所述降温液存储腔相连通的进液管和排出管，其特征在于：在所述浓缩筒体内的顶壁设有向下延伸的旋转杆，所述旋转杆上设有刮垢刀盘，所述刮垢刀盘的盘边与浓缩筒体的内壁相接触，在所述浓缩筒体的顶壁上设有升降气缸，所述旋转杆的顶部穿过所述浓缩筒体的顶壁且顶端与所述升降气缸相连接，在所述旋转杆内设有旋转电机，所述旋转电机的主轴与所述刮垢刀盘的中心相连接，在所述浓缩筒体的顶部还设有穿过顶壁的升降杆，在所述升降杆的底部设有喇叭状吸泡嘴，在所述升降杆内设有与所述喇叭状吸泡嘴相连通的吸泡通道，在所述升降杆的顶部设有吸附泵体，在所述浓缩筒体的顶壁与所述升降杆之间设有调节气缸，所述升降杆在所述调节气缸的作用下在所述浓缩筒体内做升降移动。
所述蜜炼强力枇杷膏，上述提取方法中浓缩装置所述浓缩筒体的侧壁上设有观察窗，在所述观察窗内设有密封玻璃，所述刮垢刀盘为圆环状，所述刮垢刀盘的外径与浓缩筒体的内径相同且刮垢刀盘的内环面通过连接筋杆与旋转电机的主轴相连接，所述蒸发器为圆筒形结构，所述蒸发器通过连接法兰连接在浓缩筒体的底壁，在所述蒸发器内设有蒸发管，在所述蒸发器的侧壁上设有与所述蒸发管相连通的蒸汽进口和蒸汽出口。
现有技术中，蜜炼强力枇杷膏原来提取方法，工艺粗糙、落后，杂质多，导致患者用量过大，不方便服用，本发明制备的桔梗皂苷D含量增加，含量高。本发明中的浓缩设备结构简单、操作便捷，其不但可以根据需要启动刮垢刀盘并根据需要做升降调节从而可以实现对浓缩筒体的内壁进行刮垢处理，同时还可以根据需要调节升降杆的升降操作使喇叭状吸泡嘴处于药物液面的稍上方通过吸附泵体将表面的泡沫吸除，解决了传统技术药物浓缩装置中管壁药垢清除困难的技术不足，使用稳定性好且适用性强。并发现蜜炼强力枇杷膏在制备抑制人胚肾HEK-293细胞增殖药物中的应用。
附图说明
为了使本发明的内容更容易被清楚的理解，下面根据具体实施例并结合附图，对本发明作进一步详细的说明，其中：
图1为本发明浓缩装置的结构示意图。
具体实施方式
以下通过实施例形式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明，但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例，凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
实施例1
取枇杷叶69g、百部15g、桑白皮6g、罂粟壳50g、白前9g、桔梗6g、薄荷脑0.15g，除薄荷脑外其他药材加药材10倍重量的水，浸泡0.5h，煎煮1小时，过滤，药渣再加入药材8倍重量的水，煎煮1小时，药液滤出，合并两次煎煮液，浓缩至60℃相对密度为1.05，加乙醇使含醇量的体积百分比达75％，搅拌，静置，过滤，滤液浓缩至65℃时相对密度为1.25，并回收乙醇，得浓缩液，使用超临界萃取，得超临界萃取物，继续浓缩至约100ml，加苯甲酸钠2.5g，搅拌使溶解，加炼蜜约100ml、饴糖300ml，继续加热至沸，保持20分钟，滤过，放冷，加入枸橼酸0.5g、用乙醇溶解的枇杷香精适量及薄荷脑，搅拌，混匀，加炼蜜至1000ml，混匀，即得蜜炼强力枇杷膏。
所述超临界萃取方法为：将水提醇沉浓缩液加入到CO2超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为4％，萃取压力30MPa，温度30℃，CO2流量3m1/g生药·min，萃取时间150min，得超临界萃取物。
见图1：所述蜜炼强力枇杷膏，上述两次浓缩使用装置，包括浓缩筒体1，设置在所述浓缩筒体1底部的蒸发器2，在所述浓缩筒体1的顶部设有出气孔3和凝结面板4，在所述凝结面板4内设有降温液存储腔5，在所述浓缩筒体1的顶部设有与所述降温液存储腔5相连通的进液管6和排出管7，设有凝结面板，可以将药夜蒸发的气体部分凝结成水分，可以防止药物挥发掉，在所述浓缩筒体1内的顶壁设有向下延伸的旋转杆8，所述旋转杆8上设有刮垢刀盘9，所述刮垢刀盘9的盘边与浓缩筒体1的内壁相接触，在所述浓缩筒体1的顶壁上设有升降气缸10，所述旋转杆8的顶部穿过所述浓缩筒体1的顶壁且顶端与所述升降气缸10相连接，在所述旋转杆8内设有旋转电机11，所述旋转电机11的主轴与所述刮垢刀盘9的中心相连接，在所述浓缩筒体1的顶部还设有穿过顶壁的升降杆12，在所述升降杆12的底部设有喇叭状吸泡嘴13，在所述升降杆12内设有与所述喇叭状吸泡嘴13相连通的吸泡通道14，在所述升降杆12的顶部设有吸附泵体15，在所述浓缩筒体1的顶壁与所述升降杆12之间设有调节气缸16，所述升降杆在所述调节气缸的作用下在所述浓缩筒体内做升降移动。
在所述浓缩筒体1的侧壁上设有观察窗17，在所述观察窗内设有密封玻璃18。
所述刮垢刀盘为圆环状，所述刮垢刀盘的外径与浓缩筒体的内径相同且刮垢刀盘的内环面通过连接筋杆与旋转电机的主轴相连接。由于刮垢与吸泡并不是同时进行，故而两者并不会造成相互限制。
所述蒸发器2为圆筒形结构，所述蒸发器2通过连接法兰19连接在浓缩筒体1的底壁，在所述蒸发器内设有蒸发管20，在所述蒸发器2的侧壁上设有与所述蒸发管20相连通的蒸汽进口21和蒸汽出口22。
实施例2
取枇杷叶69g、百部15g、桑白皮6g、罂粟壳50g、白前9g、桔梗6g、薄荷脑0.15g，除薄荷脑外其他药材加药材10倍重量的水，浸泡0.5h，煎煮1小时，过滤，药渣再加入药材8倍重量的水，煎煮1小时，药液滤出，合并两次煎煮液，浓缩至60℃相对密度为1.05，加乙醇使含醇量的体积百分比达75％，搅拌，静置，过滤，滤液浓缩至65℃时相对密度为1.25，并回收乙醇，得浓缩液，使用超临界萃取，得超临界萃取物，继续浓缩至约100ml，加苯甲酸钠2.5g，搅拌使溶解，加炼蜜约100ml、饴糖300ml，继续加热至沸，保持20分钟，滤过，放冷，加入枸橼酸0.5g、用乙醇溶解的枇杷香精适量及薄荷脑，搅拌，混匀，加炼蜜至1000ml，混匀，即得蜜炼强力枇杷膏。
所述超临界萃取方法为：将水提醇沉浓缩液加入到CO2超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为6％，萃取压力15MPa，温度50℃，CO2流量1m1/g生药·min，萃取时间180min，得超临界萃取物。
浓缩设备同上。
实施例3
取枇杷叶69g、百部15g、桑白皮6g、罂粟壳50g、白前9g、桔梗6g、薄荷脑0.15g，除薄荷脑外其他药材加药材10倍重量的水，浸泡0.5h，煎煮1小时，过滤，药渣再加入药材8倍重量的水，煎煮1小时，药液滤出，合并两次煎煮液，浓缩至60℃相对密度为1.05，加乙醇使含醇量的体积百分比达75％，搅拌，静置，过滤，滤液浓缩至65℃时相对密度为1.25，并回收乙醇，得浓缩液，使用超临界萃取，得超临界萃取物，继续浓缩至约100ml，加苯甲酸钠2.5g，搅拌使溶解，加炼蜜约100ml、饴糖300ml，继续加热至沸，保持20分钟，滤过，放冷，加入枸橼酸0.5g、用乙醇溶解的枇杷香精适量及薄荷脑，搅拌，混匀，加炼蜜至1000ml，混匀，即得蜜炼强力枇杷膏。
所述超临界萃取方法为：将水提醇沉浓缩液加入到CO2超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为5％，所述CO2超临界萃取的萃取压力20MPa，温度40℃，CO2流量2ml/g生药·min，萃取时间160min，得超临界萃取物。
浓缩设备同上。
上述实施例中药材均符合药典标准。
实施例4：本发明蜜炼强力枇杷膏中桔梗皂苷D含量测定实验研究资料
1.1实验药物：本发明蜜炼强力枇杷膏：按实施例1-3方法制备。对照组为参考实施例1采用普通提取和浓缩方法制备成蜜炼强力枇杷膏。
1.2仪器：高效液相色谱仪系统包括高效液相色谱仪(Waters 515)；P200高压泵；Waters2487紫外检测器及GJ605型高压六通进样阀；色谱柱为Shim-Pack C18(4.6mm×250mm,5μm)；数据采集及处理采用HS色谱数据工作站V4.0+(杭州英谱科技)
1.3测定条件：照高效液相色谱法(通则0512)测定。色谱条件与系统适用性试验：色谱柱：Shim-Pack C18(4.6mm×250mm,5μm)；流动相：乙腈-水(体积比25∶75)，检测波长300nm；柱温40℃；进样量10μl。理论板数按桔梗皂苷D峰计算应不低于2000。取桔梗皂苷D对照品适量，精密称定，加甲醇制成每lm l含5ug的溶液，即得。供试品溶液的制备取装量差异项下的本品，研细，取约0.5g，精密称定，置25ml量瓶中，加甲醇20ml，超声处理(功率250W，频率40kHz)30分钟，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20ul注入液相色谱仪，测定，即得。
1.4实验结果
各实施例制备的蜜炼强力枇杷膏中桔梗皂苷D含量测定结果
样品来源 桔梗皂苷D含量(％)
实施例1 0.56
实施例2 0.49
实施例3 0.52
对照组 0.05
根据上表的试验结果可知，本发明实施例1-3制备的蜜炼强力枇杷膏中桔梗皂苷D含量明显高于对照组。
实施例5：本发明蜜炼强力枇杷膏抑制人胚肾HEK-293细胞增殖的实验研究资料
1实验材料
1.1实验用细胞株
人胚肾HEK-293细胞，南京医科大学实验室细胞库，DMEM+10％FBS常规培养。
1.2实验药物
研究药物：本发明蜜炼强力枇杷膏：按实施例1方法制备。
药液储液：称取100mg蜜炼强力枇杷膏，溶于5ml无水乙醇中，0.2μm滤器过滤，500μl doff管分装，-20℃存储，同时0.2μm滤器过滤无水乙醇以备对照组之用。
1.3实验试剂
DMEM(GIBCO公司Cat.No.12100-061Lot.No.758137)；胎牛血清(浙江天杭生物科技有限公司Lot.No.100419)；NaHCO3(上海久亿化学试剂有限公司Cat.No.11810-033Lot.No.1088387)；Trypsin(AMRESCO公司批号：2010/04)；EDTA(AMRESCO公司批号：2009/10)；Penicillin G Sodium Salt(AMRESCO公司批号：2010242)；StreptomycinSulfate(AMRESCO公司批号：2010382)；无水乙醇(南京化学试剂有限公司批号：080310182)；MTT(Biosharp批号：0793)；PBS(实验室自配)；
1.4实验器材
莱卡倒置显微镜(德国Leica型号：DM1L)；可见-紫外光微孔板检测仪(美国MD公司型号：SPECTRA MAX 190)；CO2培养箱(FORMA型号：3111)；超净台(苏净集团安泰公司制造型号：SW-CJ-ZFD)；纯水仪(美国Spring公司型号：S/N 020579)；精密移液器(法国吉尔森公司型号：P2)；电子天平(德国赛多利斯有限公司型号：BT323S)；全自动高压灭菌锅(日本SANYO公司型号：MLS-3020)；台式电热鼓风干燥箱(上海精密实验设备公司型号：DHG9123A)；冰箱(西门子公司型号：KG18V21TI)；液氮罐(CBS型号：2001)；低速离心机(上海安亭科学仪器厂型号：KA-1000)；0.2μm滤器(MILLIPORE型号：SLGP033RB)；10cm培养皿(NEST公司)、96孔培养板(NEST公司)；细胞计数板；离心管、移液管、Tips若干。
2实验方法
1)人胚肾HEK-293细胞用DMEM+10％FBS于37℃、5％CO2进行常规培养(10cm培养皿)，当细胞生长至对数期时，收集细胞，弃去培养液，PBS轻洗3遍，加入3ml 0.25％胰蛋白酶-0.04％EDTA，37℃消化2min后，向其中加入5ml完全培养基中和反应，吹打细胞后将其转入离心管中，1000rpm离心5min，调整细胞悬液浓度3×104个/ml。
2)将细胞种入96孔培养板中，每孔加入细胞悬液180μl，培养板放入细胞培养箱中(37℃，5％CO2)常规培养。
3)根据细胞生长情况，一般长至50％-70％，加入蜜炼强力枇杷膏溶液，继续培养24h。
4)24h后加入20μl MTT溶液(5mg/ml，即0.5％MTT)，继续培养4h。
5)4h后扣板法倒去上清，用吸水纸轻轻拍干，每孔加入200μl二甲基亚砜，置摇床上低速振荡10min，使结晶物充分溶解。在酶联免疫检测仪490nm处测量各孔的吸光值。
6)同时设置本底(不加细胞，只加培养液)，对照孔(细胞、相同浓度的药物溶解介质、培养液、MTT、二甲基亚砜)，每组设定6个复孔。
7)结果以药物对细胞的抑制率表示：
细胞增值抑制率(％)＝(对照孔OD值-给药孔OD值)/对照孔OD值×100％。实验重复3次。
3统计处理
采用Microsoft Excel 2003软件中的相关分析和Student t检验，数据以mean±S.D.表示。
4实验结果
MTT法实验后统计结果显示，与对照组比较，当剂量达到5mg/ml时，对人胚肾HEK-293细胞增殖抑制有差异(P<0.05)，剂量在10mg/ml时该差异具有显著性(P<0.01)，当剂量达到15-20mg/ml时有极显著性差异(P<0.001)。
蜜炼强力枇杷膏对人胚肾HEK-293细胞增殖抑制影响研究
注：与对照组比较，*P<0.01；**P<0.001
5实验结论
蜜炼强力枇杷膏可以抑制人胚肾HEK-293细胞增殖，减少人胚肾HEK-293细胞的细胞生长数目，该作用呈剂量依赖性。

Claims (5)

1.一种蜜炼强力枇杷膏，其特征在于制备方法为：取枇杷叶69g、百部15g、桑白皮6g、罂粟壳50g、白前9g、桔梗6g、薄荷脑0.15g，除薄荷脑外其他药材加药材10倍重量的水，浸泡0.5h，煎煮1小时，过滤，药渣再加入药材8倍重量的水，煎煮1小时，药液滤出，合并两次煎煮液，浓缩至60℃相对密度为1.05，加乙醇使含醇量的体积百分比达75％，搅拌，静置，过滤，滤液浓缩至65℃时相对密度为1.25，并回收乙醇，得浓缩液，使用超临界萃取，得超临界萃取物，继续浓缩至约100ml，加苯甲酸钠2.5g，搅拌使溶解，加炼蜜约100ml、饴糖300ml，继续加热至沸，保持20分钟，滤过，放冷，加入枸橼酸0.5g、用乙醇溶解的枇杷香精适量及薄荷脑，搅拌，混匀，加炼蜜至1000ml，混匀，即得蜜炼强力枇杷膏。
2.根据权利要求1所述蜜炼强力枇杷膏，其特征在于制备方法中将水提醇沉浓缩液加入到CO2超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为4-6％，萃取压力15-30MPa，温度30-50℃，CO2流量1-3m1/g生药·min，萃取时间150-180min，得超临界萃取物，优选条件为：所述CO2超临界萃取夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为5％，所述CO2超临界萃取的萃取压力20MPa，温度40℃，CO2流量2ml/g生药·min，萃取时间160min。
3.根据权利要求1所述蜜炼强力枇杷膏，其特征在于上述提取方法中浓缩使用装置，包括浓缩筒体，设置在所述浓缩筒体底部的蒸发器，在所述浓缩筒体的顶部设有出气孔和凝结面板，在所述凝结面板内设有降温液存储腔，在所述浓缩筒体的顶部设有与所述降温液存储腔相连通的进液管和排出管，其特征在于：在所述浓缩筒体内的顶壁设有向下延伸的旋转杆，所述旋转杆上设有刮垢刀盘，所述刮垢刀盘的盘边与浓缩筒体的内壁相接触，在所述浓缩筒体的顶壁上设有升降气缸，所述旋转杆的顶部穿过所述浓缩筒体的顶壁且顶端与所述升降气缸相连接，在所述旋转杆内设有旋转电机，所述旋转电机的主轴与所述刮垢刀盘的中心相连接，在所述浓缩筒体的顶部还设有穿过顶壁的升降杆，在所述升降杆的底部设有喇叭状吸泡嘴，在所述升降杆内设有与所述喇叭状吸泡嘴相连通的吸泡通道，在所述升降杆的顶部设有吸附泵体，在所述浓缩筒体的顶壁与所述升降杆之间设有调节气缸，所述升降杆在所述调节气缸的作用下在所述浓缩筒体内做升降移动。
4.根据权利要求3所述蜜炼强力枇杷膏，其特征在于上述提取方法中浓缩装置所述浓缩筒体的侧壁上设有观察窗，在所述观察窗内设有密封玻璃，所述刮垢刀盘为圆环状，所述刮垢刀盘的外径与浓缩筒体的内径相同且刮垢刀盘的内环面通过连接筋杆与旋转电机的主轴相连接，所述蒸发器为圆筒形结构，所述蒸发器通过连接法兰连接在浓缩筒体的底壁，在所述蒸发器内设有蒸发管，在所述蒸发器的侧壁上设有与所述蒸发管相连通的蒸汽进口和蒸汽出口。
5.根据权利要求1所述蜜炼强力枇杷膏在制备抑制人胚肾HEK-293细胞增殖药物中的应用。
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