CN106220465A - 一种番茄红素的制备方法及番茄红素组合物 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种番茄红素的制备方法，取新鲜番茄，清洗绞碎后，加乙醇使含醇量的体积百分比达75％，搅拌，静置，过滤，滤液浓缩至65℃时相对密度为1.25，并回收乙醇，得浓缩液，使用硅胶精制，预先将选定的硅胶装入树脂柱中，同时将所述浓缩液经纯化水稀释后，通过反相硅胶柱，去掉液体中的杂质，收集全部流出液，继续浓缩，将浓缩液进行干燥,制粒，得番茄红素提取物，制备得到番茄红素含量高，并与白藜芦醇、水苏糖配伍制备成番茄红素组合物。

Description

一种番茄红素的制备方法及番茄红素组合物
技术领域
本发明涉及中药提取技术领域，具体涉及一种番茄红素的制备方法及番茄红素组合物。
背景技术
现有技术中番茄红素提取方法，工艺粗糙、落后，杂质多，有效成分含量低，导致患者用量过大，不方便服用，严重影响了本品在临床上应用。
发明内容
发明目的：为了解决上述问题，本发明的目的在于提供一种番茄红素的制备方法及番茄红素组合物。
技术方案：本发明的目的是通过如下的方案实现的：
一种番茄红素的制备方法，制备方法为：取新鲜番茄，清洗绞碎后，加乙醇使含醇量的体积百分比达75％，搅拌，静置，过滤，滤液浓缩至65℃时相对密度为1.25，并回收乙醇，得浓缩液，使用硅胶精制，预先将选定的硅胶装入树脂柱中，同时将所述浓缩液经纯化水稀释后，通过反相硅胶柱，去掉液体中的杂质，收集全部流出液，继续浓缩，将浓缩液进行干燥,制粒，得番茄红素提取物。
所述番茄红素的制备方法，制备方法中所述硅胶比表面为300～500m2/g，孔容为0.70～0.90ml/g，所述稀释后浓缩液通过反相硅胶柱分离、洗脱，至出水无色止。
所述番茄红素的制备方法，上述提取方法中两次浓缩使用装置，包括罐体，设置在所述罐体上的进料口和设置在所述罐体底部的出料管，在所述出料管上设有出料阀门和过滤器，在所述罐体内设有搅拌轴，在所述搅拌轴上设有搅拌桨，在所述罐体的顶部设有与所述搅拌轴相连接的搅拌电机，在所述罐体内的底壁设有震动腔，在所述震动腔内设有震动板，在所述震动板与所述震动腔之间设有震动器，在所述罐体内的侧壁上设有凹腔，在所述震动板的顶面设有刮板，在所述刮板与所述凹腔之间设有伸缩气缸，所述刮板在所述伸缩气缸的作用下实现对震动板表面的刮擦，在所述震动板的中心设有与所述出料管相连通的出料口。
所述番茄红素的制备方法，上述提取方法中浓缩装置所述震动板与所述震动腔的连接处设有密封金属条，在所述罐体上设有与所述震动器相连接的震动控制器，浓缩装置所述刮板的底部设有金属刮丝层，所述金属刮丝层抵压在所述震动板上，在所述罐体上设有与所述伸缩气缸相连接的伸缩控制按钮，浓缩装置所述罐体内设有水份测试仪，在所述出料管内设有冷却器。
所述番茄红素的制备方法，上述提取方法中干燥使用装置，包括箱体，设置在所述箱体内的物料架和设置在所述箱体顶部的进风管和出风管，其特征在于：在所述箱体的侧壁内设有与所述进风管相连通的进风通道，在所述箱体的侧壁上设有与所述进风通道相连通的风孔，所述出风管穿过所述箱体的顶壁连通箱体内与箱体外部，在所述箱体的侧壁内还设有调温腔和灭菌腔，在所述调温腔内设有电加热块，所述进风通道穿过所述调节腔和灭菌腔设置，在所述箱体的底壁内设有旋转腔，在所述旋转腔内设有旋转电机，所述旋转电机的主轴与所述物料架相连接，在所述物料架内设有震动凹槽，在所述物料架的顶面设有盛放板，在所述盛放板与所述震动凹槽之间设有震动装置。
所述番茄红素的制备方法，上述提取方法中干燥使用装置所述震动装置包括驱动电机，设置在所述驱动电机主轴上的偏心轮，所述偏心轮的轮边抵压在所述盛放板的底面中心，在所述盛放板的底部与所述震动凹槽的底壁之间设有拉簧，所述拉簧以所述偏心轮为中心对称设置。
所述番茄红素的制备方法，上述提取方法中干燥使用装置所述箱体内设有温度传感器，在所述箱体的侧壁内设有与所述温度传感器相连接的驱动器，所述驱动器与所述电加热块的控制端相连接，在所述箱体上还设有箱门。
一种番茄红素组合物，由上述方法制备得到的番茄红素、白藜芦醇、水苏糖组成。
所述番茄红素组合物，番茄红素、白藜芦醇、水苏糖的重量比为4-8：2-5：3-6。
所述番茄红素组合物在制备制备抑制中国仓鼠卵巢CHO细胞增殖药物中的应用。
现有技术中，番茄红素原来提取方法，工艺粗糙、落后，杂质多，导致患者用量过大，不方便服用，本发明制备的番茄红素含量增加，含量高。本发明中的浓缩设备结构简单、操作便捷，其设有震动板和震动器，而还设有刮板和与所述刮板相连接的伸缩气缸，可有效防止罐体底部结块，一定程度上可大大提高加热效率，有效解决了传统技术中药浓缩设备中容易出现底部结块而影响加热效率的技术不足，使用稳定性好且适用性强，药物的有效成分稳定不被破坏。本干燥设备结构简单、操作简单快捷，其采用箱体侧壁进行送风，并增设了电加热块，可以根据箱内的温度进行调节，从而保证了干燥温度的稳定性，而且设有旋转电机和震动装置，可以在加热的同时对盛放板进行旋转和震动，从而可防止药局部干燥，从而一定程度上可以提高干燥的效率，解决了传统技术的干燥装置干燥效率低的技术不足。并发现番茄红素组合物在制备制备抑制中国仓鼠卵巢CHO细胞增殖药物中的应用。
附图说明
为了使本发明的内容更容易被清楚的理解，下面根据具体实施例并结合附图，对本发明作进一步详细的说明，其中：
图1为本发明浓缩装置的结构示意图。
图2为本发明干燥装置的结构示意图。
具体实施方式
以下通过实施例形式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明，但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例，凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
实施例1
取新鲜番茄1000g，清洗绞碎后，加乙醇使含醇量的体积百分比达75％，搅拌，静置，过滤，滤液浓缩至65℃时相对密度为1.25，并回收乙醇，得浓缩液，使用硅胶精制，预先将选定的硅胶装入树脂柱中，同时将所述浓缩液经纯化水稀释后，通过反相硅胶柱，去掉液体中的杂质，收集全部流出液，继续浓缩，将浓缩液进行干燥,制粒，得番茄红素提取物。
所述番茄红素的制备方法，所述硅胶精制方法为：预先将选定的硅胶装入树脂柱中，同时将所述浓缩液经纯化水稀释后，通过反相硅胶柱，去掉液体中的杂质，收集全部流出液。
所述番茄红素的制备方法，所述硅胶比表面为300m2/g，孔容为0.90ml/g，所述稀释后浓缩液通过反相硅胶柱分离、洗脱，至出水无色止。
见图1：所述番茄红素的制备方法，上述三次浓缩使用装置，包括罐体1，设置在所述罐体1上的进料口2和设置在所述罐体1底部的出料管3，在所述出料管3上设有出料阀门4和过滤器5，在所述罐体1内设有搅拌轴6，在所述搅拌轴6上设有搅拌桨7，在所述罐体1的顶部设有与所述搅拌轴6相连接的搅拌电机8，在所述罐体1内的底壁设有震动腔9，在所述震动腔9内设有震动板10，在所述震动板10与所述震动腔9之间设有震动器11，通过震动器可以使震动板震动，从而可有效防止药物颗粒集结在震动板上，从而可防止药物颗粒在震动板上结块，在所述罐体1内的侧壁上设有凹腔12，在所述震动板10的顶面设有刮板13，在所述刮板13与所述凹腔12之间设有伸缩气缸14，可以根据需要控制伸缩气缸，使刮板在震动板的表面刮动，从而将部分集结在震动板表面的药物颗粒刮动，所述刮板13在所述伸缩气缸14的作用下实现对震动板10表面的刮擦，在所述震动板10的中心设有与所述出料管3相连通的出料口15。
在所述震动板10与所述震动腔9的连接处设有密封金属条16，在所述罐体上设有与所述震动器相连接的震动控制器17。
在所述刮板的底部设有金属刮丝层18，所述金属刮丝层抵压在所述震动板上，在所述罐体上设有与所述伸缩气缸相连接的伸缩控制按钮19。
在所述罐体内设有水份测试仪21，在所述出料管内设有冷却器20。
见图2：所述番茄红素的制备方法，上述干燥使用装置，包括箱体1，设置在所述箱体1内的物料架2和设置在所述箱体1顶部的进风管3和出风管4，在所述箱体1的侧壁内设有与所述进风管3相连通的进风通道5，在所述箱体1的侧壁上设有与所述进风通道5相连通的风孔6，进风孔设置在侧壁上，可以保证通风的均匀性，而且可以大大提高与药物的接触面积，所述出风管4穿过所述箱体1的顶壁连通箱体1内与箱体1外部，在所述箱体1的侧壁内还设有调温腔7和灭菌腔8，在所述调温腔7内设有电加热块9，设有电加热块可以根据需要对进风管的温度进行调节，保证干燥温度的稳定性，所述进风通道5穿过所述调节腔7和灭菌腔8设置，在所述箱体1的底壁内设有旋转腔10，在所述旋转腔10内设有旋转电机11，所述旋转电机11的主轴与所述物料架2相连接，在所述物料架2内设有震动凹槽12，在所述物料架2的顶面设有盛放板13，在所述盛放板13与所述震动凹槽12之间设有震动装置14。
所述震动装置14包括驱动电机141，设置在所述驱动电机141主轴上的偏心轮142，所述偏心轮142的轮边抵压在所述盛放板13的底面中心，在所述盛放板13的底部与所述震动凹槽12的底壁之间设有拉簧15，所述拉簧以所述偏心轮为中心对称设置，在使用时通过偏心轮的抵压使盛放板上升，当偏心轮的凹部抵压盛放板时，盛放板在拉簧的作用下复位，在下落过程中使物材脱离盛放板之后再跌落在盛放板上实现物料的震动。
在所述箱体1内设有温度传感器16，在所述箱体的侧壁内设有与所述温度传感器相连接的驱动器17，所述驱动器与所述电加热块的控制端相连接。温度传干器和驱动器为市场上已有的现有技术，其在使用连接时只需要按照对应的连接说明连接即可。
在所述箱体上还设有箱门18。
取上述方法制备得到的番茄红素、白藜芦醇、水苏糖的重量比为6：3：4，按常规方法制备成片剂。
实施例2
取新鲜番茄1000g，清洗绞碎后，加乙醇使含醇量的体积百分比达75％，搅拌，静置，过滤，滤液浓缩至65℃时相对密度为1.25，并回收乙醇，得浓缩液，使用硅胶精制，预先将选定的硅胶装入树脂柱中，同时将所述浓缩液经纯化水稀释后，通过反相硅胶柱，去掉液体中的杂质，收集全部流出液，继续浓缩，将浓缩液进行干燥,制粒，得番茄红素提取物。
所述番茄红素的制备方法，所述硅胶精制方法为：预先将选定的硅胶装入树脂柱中，同时将所述浓缩液经纯化水稀释后，通过反相硅胶柱，去掉液体中的杂质，收集全部流出液。
所述一种番茄红素的制备方法，所述硅胶比表面为500m2/g，孔容为0.70ml/g，所述稀释后浓缩液通过反相硅胶柱分离、洗脱，至出水无色止。
浓缩和干燥设备同上。
取上述方法制备得到的番茄红素、白藜芦醇、水苏糖的重量比为6：2：6，按常规方法制备成片剂。
实施例3
取新鲜番茄1000g，清洗绞碎后，加乙醇使含醇量的体积百分比达75％，搅拌，静置，过滤，滤液浓缩至65℃时相对密度为1.25，并回收乙醇，得浓缩液，使用硅胶精制，预先将选定的硅胶装入树脂柱中，同时将所述浓缩液经纯化水稀释后，通过反相硅胶柱，去掉液体中的杂质，收集全部流出液，继续浓缩，将浓缩液进行干燥,制粒，得番茄红素提取物。
所述番茄红素的制备方法，所述硅胶精制方法为：预先将选定的硅胶装入树脂柱中，同时将所述浓缩液经纯化水稀释后，通过反相硅胶柱，去掉液体中的杂质，收集全部流出液。
所述番茄红素的制备方法，所述硅胶比表面为400m2/g，孔容为0.80ml/g，所述稀释后浓缩液通过反相硅胶柱分离、洗脱，至出水无色止。
浓缩和干燥设备同上。
取上述方法制备得到的番茄红素、白藜芦醇、水苏糖的重量比为6：5：3，按常规方法制备成片剂。
上述实施例中白藜芦醇(70％)、水苏糖(20％)购自陕西冠捷生物科技有限公司。
实施例4：按实施例1中制备不添加白藜芦醇的番茄红素组合物。
实施例5：按实施例1中制备不添加水苏糖的番茄红素组合物。
实施例6：本发明番茄红素组合物中番茄红素含量测定实验研究资料
1.1实验药物：本发明番茄红素组合物：按实施例1-3方法制备。对照组中番茄红素采用普通浓缩和干燥方法制备，取上述方法制备得到的番茄红素、白藜芦醇、水苏糖的重量比为6：3：4，按常规方法制备成片剂。
1.2仪器：高效液相色谱仪系统包括高效液相色谱仪(Waters 515)；P200高压泵；Waters2487紫外检测器及GJ605型高压六通进样阀；色谱柱为BDS HYPERSIL-C18(4.6mm×250mm，5μm)；数据采集及处理采用HS色谱数据工作站V4.0+(杭州英谱科技)
1.3测定条件：照高效液相色谱法(通则0512)测定。色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水(60:40)为流动相；检测波长为250nm；理论板数按番茄红素峰计算应不低于2000。取番茄红素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每lm l含5ug的溶液，即得。供试品溶液的制备取装量差异项下的本品，研细，取约0.5g，精密称定，置25ml量瓶中，加甲醇20ml，超声处理(功率250W，频率40kHz)30分钟，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20ul注入液相色谱仪，测定，即得。
1.4实验结果
各实施例制备的番茄红素组合物中番茄红素含量测定结果
样品来源 番茄红素含量(％)
实施例1 3.5
实施例2 4.5
实施例3 3.8
对照组 1.2
根据上表的试验结果可知，本发明实施例1-3制备的番茄红素组合物中番茄红素含量明显高于对照组。
实施例7：本发明番茄红素组合物抑制中国仓鼠卵巢CHO细胞增殖的实验研究资料
1实验材料
1.1实验用细胞株
中国仓鼠卵巢CHO细胞，南京医科大学实验室细胞库，DMEM+10％FBS常规培养。
1.2实验药物
研究药物：本发明番茄红素组合物：按实施例1、4、5方法制备。
药液储液：称取100mg番茄红素组合物，溶于5ml无水乙醇中，0.2μm滤器过滤，500μl doff管分装，-20℃存储，同时0.2μm滤器过滤无水乙醇以备对照组之用。
1.3实验试剂
DMEM(GIBCO公司Cat.No.12100-061Lot.No.758137)；胎牛血清(浙江天杭生物科技有限公司Lot.No.100419)；NaHCO3(上海久亿化学试剂有限公司Cat.No.11810-033Lot.No.1088387)；Trypsin(AMRESCO公司批号：2010/04)；EDTA(AMRESCO公司批号：2009/10)；Penicillin G Sodium Salt(AMRESCO公司批号：2010242)；StreptomycinSulfate(AMRESCO公司批号：2010382)；无水乙醇(南京化学试剂有限公司批号：080310182)；MTT(Biosharp批号：0793)；PBS(实验室自配)；
1.4实验器材
莱卡倒置显微镜(德国Leica型号：DM1L)；可见-紫外光微孔板检测仪(美国MD公司型号：SPECTRA MAX 190)；CO2培养箱(FORMA型号：3111)；超净台(苏净集团安泰公司制造型号：SW-CJ-ZFD)；纯水仪(美国Spring公司型号：S/N 020579)；精密移液器(法国吉尔森公司型号：P2)；电子天平(德国赛多利斯有限公司型号：BT323S)；全自动高压灭菌锅(日本SANYO公司型号：MLS-3020)；台式电热鼓风干燥箱(上海精密实验设备公司型号：DHG9123A)；冰箱(西门子公司型号：KG18V21TI)；液氮罐(CBS型号：2001)；低速离心机(上海安亭科学仪器厂型号：KA-1000)；0.2μm滤器(MILLIPORE型号：SLGP033RB)；10cm培养皿(NEST公司)、96孔培养板(NEST公司)；细胞计数板；离心管、移液管、Tips若干。
2实验方法
1)中国仓鼠卵巢CHO细胞用DMEM+10％FBS于37℃、5％CO2进行常规培养(10cm培养皿)，当细胞生长至对数期时，收集细胞，弃去培养液，PBS轻洗3遍，加入3ml 0.25％胰蛋白酶-0.04％EDTA，37℃消化2min后，向其中加入5ml完全培养基中和反应，吹打细胞后将其转入离心管中，1000rpm离心5min，调整细胞悬液浓度3×104个/ml。
2)将细胞种入96孔培养板中，每孔加入细胞悬液180μl，培养板放入细胞培养箱中(37℃，5％CO2)常规培养。
3)根据细胞生长情况，一般长至50％-70％，加入番茄红素组合物溶液，继续培养24h。
4)24h后加入20μl MTT溶液(5mg/ml，即0.5％MTT)，继续培养4h。
5)4h后扣板法倒去上清，用吸水纸轻轻拍干，每孔加入200μl二甲基亚砜，置摇床上低速振荡10min，使结晶物充分溶解。在酶联免疫检测仪490nm处测量各孔的吸光值。
6)同时设置本底(不加细胞，只加培养液)，对照孔(细胞、相同浓度的药物溶解介质、培养液、MTT、二甲基亚砜)，每组设定6个复孔。
7)结果以药物对细胞的抑制率表示：
细胞增值抑制率(％)＝(对照孔OD值-给药孔OD值)/对照孔OD值×100％。实验重复3次。
3统计处理
采用Microsoft Excel 2003软件中的相关分析和Student t检验，数据以mean±S.D.表示。
4实验结果
MTT法实验后统计结果显示，与对照组比较，当剂量达到5mg/ml时，对中国仓鼠卵巢CHO细胞增殖抑制有差异(P<0.05)，剂量在10mg/ml时该差异具有显著性(P<0.01)，当剂量达到15-20mg/ml时有极显著性差异(P<0.001)。
番茄红素组合物对中国仓鼠卵巢CHO细胞增殖抑制影响研究
注：与实施例1比较，*P<0.01；**P<0.001
5实验结论
番茄红素组合物可以抑制中国仓鼠卵巢CHO细胞增殖，减少中国仓鼠卵巢CHO细胞的细胞生长数目，其中实施例1抑制率明显高于实施例4和实施例5，说明番茄红素与白藜芦醇、水苏糖配伍效果良好。

Claims (10)

1.一种番茄红素的制备方法，其特征在于制备方法为：取新鲜番茄，清洗绞碎后，加乙醇使含醇量的体积百分比达75％，搅拌，静置，过滤，滤液浓缩至65℃时相对密度为1.25，并回收乙醇，得浓缩液，使用硅胶精制，预先将选定的硅胶装入树脂柱中，同时将所述浓缩液经纯化水稀释后，通过反相硅胶柱，去掉液体中的杂质，收集全部流出液，继续浓缩，将浓缩液进行干燥,制粒，得番茄红素提取物。
2.根据权利要求1所述番茄红素的制备方法，其特征在于制备方法中所述硅胶比表面为300～500m2/g，孔容为0.70～0.90ml/g，所述稀释后浓缩液通过反相硅胶柱分离、洗脱，至出水无色止。
3.根据权利要求1所述番茄红素的制备方法，其特征在于上述提取方法中两次浓缩使用装置，包括罐体，设置在所述罐体上的进料口和设置在所述罐体底部的出料管，在所述出料管上设有出料阀门和过滤器，在所述罐体内设有搅拌轴，在所述搅拌轴上设有搅拌桨，在所述罐体的顶部设有与所述搅拌轴相连接的搅拌电机，在所述罐体内的底壁设有震动腔，在所述震动腔内设有震动板，在所述震动板与所述震动腔之间设有震动器，在所述罐体内的侧壁上设有凹腔，在所述震动板的顶面设有刮板，在所述刮板与所述凹腔之间设有伸缩气缸，所述刮板在所述伸缩气缸的作用下实现对震动板表面的刮擦，在所述震动板的中心设有与所述出料管相连通的出料口。
4.根据权利要求3所述番茄红素的制备方法，其特征在于上述提取方法中浓缩装置所述震动板与所述震动腔的连接处设有密封金属条，在所述罐体上设有与所述震动器相连接的震动控制器，浓缩装置所述刮板的底部设有金属刮丝层，所述金属刮丝层抵压在所述震动板上，在所述罐体上设有与所述伸缩气缸相连接的伸缩控制按钮，浓缩装置所述罐体内设有水份测试仪，在所述出料管内设有冷却器。
5.根据权利要求1所述番茄红素的制备方法，其特征在于上述提取方法中干燥使用装置，包括箱体，设置在所述箱体内的物料架和设置在所述箱体顶部的进风管和出风管，其特征在于：在所述箱体的侧壁内设有与所述进风管相连通的进风通道，在所述箱体的侧壁上设有与所述进风通道相连通的风孔，所述出风管穿过所述箱体的顶壁连通箱体内与箱体外部，在所述箱体的侧壁内还设有调温腔和灭菌腔，在所述调温腔内设有电加热块，所述进风通道穿过所述调节腔和灭菌腔设置，在所述箱体的底壁内设有旋转腔，在所述旋转腔内设有旋转电机，所述旋转电机的主轴与所述物料架相连接，在所述物料架内设有震动凹槽，在所述物料架的顶面设有盛放板，在所述盛放板与所述震动凹槽之间设有震动装置。
6.根据权利要求5所述番茄红素的制备方法，其特征在于上述提取方法中干燥使用装置所述震动装置包括驱动电机，设置在所述驱动电机主轴上的偏心轮，所述偏心轮的轮边抵压在所述盛放板的底面中心，在所述盛放板的底部与所述震动凹槽的底壁之间设有拉簧，所述拉簧以所述偏心轮为中心对称设置。
7.根据权利要求5所述番茄红素的制备方法，其特征在于上述提取方法中干燥使用装置所述箱体内设有温度传感器，在所述箱体的侧壁内设有与所述温度传感器相连接的驱动器，所述驱动器与所述电加热块的控制端相连接，在所述箱体上还设有箱门。
8.一种番茄红素组合物，其特征在于由权利要求1中制备得到的番茄红素、白藜芦醇、水苏糖组成。
9.根据权利要求8所述番茄红素组合物，其特征在于番茄红素、白藜芦醇、水苏糖的重量比为4-8：2-5：3-6。
10.根据权利要求9所述番茄红素组合物在制备抑制中国仓鼠卵巢CHO细胞增殖药物中的应用。
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