CN109789135A - 作为perk抑制剂的异喹啉衍生物 - Google Patents

Abstract

本发明涉及取代的异喹啉衍生物及其用途。具体地，本发明涉及根据式I的化合物和式(I)的化合物治疗疾病状态的用途，其中R¹、R²、R³、R⁴、R⁵、R⁶、R⁷和X如本文所定义。本发明的化合物为PERK抑制剂且可用于治疗癌症、癌前期综合征和与活化的未折叠蛋白反应途径相关的疾病，如阿尔茨海默病、脊髓损伤、外伤性脑损伤、缺血性中风、中风、帕金森疾病、糖尿病、代谢综合征、代谢疾病、亨廷顿疾病、克‑雅病、致死性家族失眠、格‑施‑沙综合征、和相关朊病毒病、肌萎缩侧索硬化、进行性核上性麻痹、心肌梗塞、心血管疾病、炎症、器官纤维化、肝的慢性和急性疾病、脂肪肝疾病、肝脂肪变性、肝纤维化、肺的慢性和急性疾病、肺纤维化、肾的慢性和急性疾病、肾纤维化、慢性创伤性脑病(CTE)、神经变性、痴呆、额颞痴呆、tau病变、皮克病、尼曼‑皮克病、淀粉样变性、认知缺损、动脉粥样硬化、眼病、心律失常、器官移植和移植用器官的运输。因此，本发明进一步涉及包含本发明的化合物的药物组合物。本发明进一步涉及抑制PERK活性的方法和使用本发明的化合物或包含本发明的化合物的药物组合物治疗与其相关的疾病的方法。

Description

作为PERK抑制剂的异喹啉衍生物

技术领域

本发明涉及取代的异喹啉衍生物，其为蛋白激酶R(PKR)-样ER激酶(PERK)的活性的抑制剂。本发明还涉及包含该化合物的药物组合物，以及使用该化合物治疗以下疾病的方法：癌症、癌前期综合征和与活化的未折叠蛋白反应途径相关的疾病/损伤，如阿尔茨海默病、脊髓损伤、外伤性脑损伤、缺血性中风、中风、帕金森病、糖尿病、代谢综合征、代谢疾病、亨廷顿疾病、克-雅病、致死性家族失眠、格-施-沙综合征、和相关朊病毒病、肌萎缩侧索硬化、进行性核上性麻痹、心肌梗塞、心血管疾病、炎症、器官纤维化、肝的慢性和急性疾病、脂肪肝疾病、肝脂肪变性、肝纤维化、肺的慢性和急性疾病、肺纤维化、肾的慢性和急性疾病、肾纤维化、慢性创伤性脑病(CTE)、神经变性、痴呆、额颞痴呆、tau病变、皮克病、尼曼-皮克病、淀粉样变性、认知缺损、动脉粥样硬化、眼病、心律失常，该化合物用于器官移植和用于移植用器官的运输的方法。

背景技术

未折叠蛋白效应(UPR)是一种信号转导途径，其允许细胞承受由错误折叠或未折叠的蛋白质或蛋白质聚集体的存在引起的应激(Walter and Ron,2011),(Hetz,2012)。扰乱蛋白质在内质网(ER)中的折叠和成熟的环境应激也可能导致UPR的激活(Feldman等人,2005),(Koumenis和Wouters,2006)。UPR激活的应激刺激包括缺氧、蛋白质糖基化的破坏(葡萄糖剥夺)、腔内ER钙的消耗或ER氧化还原状态的改变等(Ma和Hendershot,2004),(Feldman等人,2005)。这些干扰导致ER氧化还原动态平衡的破坏以及ER中未折叠或错误折叠蛋白的积累。细胞反应包括转录重编以增加伴侣蛋白的水平以增强蛋白重折叠，错误折叠蛋白的降解和翻译阻滞以减少进入ER的客户蛋白(client protein)的负载(Ron,D.2002),(Harding等人,2002)。这些途径还通过调控细胞凋亡(Ma和Hendershot,2004)、(Feldman等人，2005)和自体吞噬(Rouschop等人，2010)调节细胞存活，并在延长的ER应激条件下可触发细胞死亡(Woehlbier和Hetz,2011)。

已经鉴定了三种ER膜蛋白作为UPR的主要效应子：蛋白激酶R(PKR)-样ER激酶[PERK，也称为真核起始因子2A激酶3(EIF2AK3)、胰腺ER激酶或胰腺eIF2α激酶(PEK)]，肌醇-需求基因1α/β(IRE1)，及转录激活因子6(ATF6)(Ma和Hendershot,2004)，(Hetz,2012)。在正常情况下，这些蛋白质通过将ER分子伴侣GRP78(BiP)结合到它们的腔内传感器区域而保持在非活性状态。未折叠蛋白质在ER中的蓄积导致从这些传感器中释放GRP78，导致这些UPR效应子的激活(Ma等，2002)。

PERK是I型ER膜蛋白，其含有面向ER腔的应激传感区域、跨膜区段，以及胞质激酶区域(Shi等人,1998),(Harding等人,1999),(Sood等人,2000)。GRP78从PERK的应激传感区域的释放导致在多个丝氨酸、苏氨酸和酪氨酸残基处低聚化和自磷酸化(Ma等人,2001),(Su等人,2008)。PERK敲除小鼠的表型包括糖尿病(由于失去胰岛细胞)、骨骼异常和生长迟缓(Harding等人，2001)、(Zhang等人，2006)、(Iida等人，2007)。这些特征与具有Wolcott-Rallison综合征的患者中观察到的一致，所述患者携带PERK基因的种系突变(Julier和Nicolino,2010)。PERK的主要底物是真核起始因子2α(eIF2α)，PERK响应ER应激或用ER应激的药理诱导剂如毒胡萝卜素和衣霉素处理后在丝氨酸-51(Marciniak等，2006)磷酸化。该位点也被其它EIF2AK家族成员[(一般控制非阻遏型2(GCN2)、PKR和血红素-调节的激酶(HRI)]磷酸化，响应于不同刺激。

eIF2α的磷酸化将其转化为鸟嘌呤核苷酸交换因子(GEF)的抑制剂eIF2B，其是在eIF2蛋白质合成复合物中将GDP有效转换为GTP所必需的。结果，P-eIF2a对eIF2B的抑制导致翻译起始的普遍下降和球蛋白质合成的减少(Harding等人2002)。自相矛盾地是，当UPR被激活并且eIF2a被磷酸化时，特定的mRNA的翻译得到增强。例如，转录因子ATF4具有在正常球蛋白质合成期间通常抑制ATF4合成的5’-上游开放阅读框(uORFs)。然而，当PERK在应激下被激活并且P-eIF2a抑制eIF2B时，低水平的三元翻译复合物(ternary translationcomplex)允许选择性增强的ATF4翻译(Jackson等人，2010)。因此，当ER应激继续发生时，PERK激活导致ATF4翻译增加，其转录上调下游靶基因如CHOP(转录因子C/EBP同源蛋白)。该转录重编程调节细胞存活途径并可导致促凋亡基因的诱导。

PERK和UPR的激活与人类神经退行性疾病有关，所述神经退行性疾病如阿尔茨海默病、帕金森病、亨廷顿病、肌萎缩侧索硬化(ALS)、进行性核上麻痹(PSP)、痴呆和朊病毒病包括克雅氏病(CJD),(Doyle等人2011),(Paschen 2004),(Salminen等人2009),(Stutzbach等人，2013)。所有这些疾病的共同标志是存在畸形/错误折叠或聚集的蛋白质沉积物(例如tau蛋白缠结、Lewy体、α-突触核蛋白、Aβ斑块、朊病毒蛋白突变体)，据信其造成潜在疾病病理生理学、神经元丢失和认知能力下降(Prusiner,2012),(Doyle等人2011)。细胞(例如神经元)的持续未折叠或错误折叠的蛋白质应激的命运受PERK的控制。耐受ER应激的细胞可以恢复蛋白质稳态并恢复正常，或者如果应力是不可克服的，由于持续的翻译抑制，持续的PERK活化可能导致由ATF4/CHOP驱动的自噬的细胞死亡以及无法合成重要蛋白质。在阿尔茨海默病患者的死后脑组织和人类朊病毒病中检测到激活的PERK和相关的PERK激活的生物学标志物(Ho等人，2012),(Hoozemans等人,2009)(Unterberger等人，2006)。此外，P-eIF2α(PERK激活的产物)与阿尔茨海默病患者死后脑组织中BACE1的水平相关(O’Connor等人，2008)。最近，小分子PERK抑制剂GSK2606414显示出提供神经保护作用，并预防朊病毒感染小鼠中的疾病的临床体征(Moreno等人，2013)，其与之前由UPR/PERK/eIF2α途径的基因操作得到的结果一致(Moreno等人，2012)。也报道了ALS(Kanekura等人,2009和Nassif等人，2010)、脊髓损伤(Ohri等人，2011)和外伤性脑损伤(Tajiri等人，2004)中参与的途径。总之，这些数据表明UPR和PERK代表了药物干预的有希望的节点，其作为一种手段来阻止或者逆转范围广泛的神经变性疾病的临床进展和相关的认知缺损。

由于血液供应不足和血管功能异常，肿瘤细胞在生长过程中经历缺氧和营养剥夺的发作(Brown和Wilson,2004),(Blais和Bell,2006)。因此，它们可能依赖于活性的UPR信号转导以促进它们的生长。与此一致，衍生自PERK-/-、XBP1-/-和ATF4-/-小鼠的小鼠成纤维细胞和表达突变eIF2α的成纤维细胞，在体外低氧条件下显示降低的克隆生长和增加的细胞凋亡，而且当作为肿瘤植入裸鼠时以显著降低的速度生长(Koumenis等人,2002),(Romero-Ramirez等人,2004),(Bi等人,2005)。携带显性负PERK的人肿瘤细胞系(其缺乏激酶活性)也显示了在缺氧条件下增加的体外细胞凋亡和体内肿瘤生长受损(Bi等人,2005)。在这些研究中，在肿瘤内与低缺氧区域相一致的区域中观察到了UPR的活化。与具有完整的UPR信号转导的肿瘤相比，这些区域显示较高的凋亡率。观察到支持PERK在促进肿瘤生长中的作用的其它证据，与野生型对照相比，在胰岛素-分泌β细胞中表达SV40-T抗原的转基因小鼠中存在的胰岛素瘤的数量、大小和血管供应在PERK-/-小鼠中显著减少(Gupta等，2009)。也在临床样本中观察到UPR的活化。与正常组织相比，包括源自宫颈癌、胶质母细胞瘤(Bi等人,2005)、肺癌(Jorgensen等人,2008)和乳腺癌(Ameri等人,2004),(Davies等人,2008)的那些人肿瘤显示UPR中涉及的蛋白质水平升高。因此，用阻断PERK和UPR的其他组分的活性的化合物抑制未折叠的蛋白反应预期可用作抗癌剂。最近，这一假设得到了两种PERK小分子抑制剂的支持，这些抑制剂被证明可以抑制小鼠中人肿瘤异种移植物的生长(Axten等人，2012和Atkins等人，2013)。

内质网稳态的丧失和错误折叠的蛋白质的积累可能导致许多疾病状态(Wek和Cavener 2007)，(Zhang和Kaufman 2006)。PERK抑制剂可用于治疗各种人类疾病例如阿尔茨海默病和额颞叶痴呆、帕金森病、亨廷顿病、肌萎缩侧索硬化(ALS)、进行性核上麻痹(PSP)和其他tau病变例如慢性损伤性脑病(CTE)(Nijholt,D.A.,等人，2012)，(Lucke-Wold,B.P.,等人，2016)、脊髓损伤、外伤性脑损伤、中风、克雅氏病(CJD)和相关的朊病毒病，例如家族致命性失眠症(FFI)、Gerstmann-Straussler-Scheinker综合征和消失性白质(VWM)疾病。PERK抑制剂也可用于有效治疗癌症，特别是来源于分泌细胞类型的那些癌症，如胰腺癌和神经内分泌癌、多发性骨髓瘤，或组合使用作为化学增敏剂以增强肿瘤细胞杀伤力。PERK抑制剂也可用于心肌梗死、心血管病、动脉粥样硬化(McAlpine等人,2010,Civelek等人，2009,Liu and Dudley 2016)、心律失常和肾病(Dickhout等人,2011,Cybulsky,A.V.,等人，2005)。PERK抑制剂也可用于干细胞或器官移植，以防止移植器官的运输中对器官的损害(Inagi等人,2014),(Cunard,2015),(Dickhout等人,2011),(vanGalen,P.,等人，(2014)。预期PERK抑制剂在治疗许多疾病中具有多种用途，其中潜在的病理学和症状与未折叠的蛋白质应答的失调相关。

文献

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本发明的目的是提供PERK抑制剂的新的化合物。

本发明另一个目的是提供药物组合物，该药物组合物含有药用载体和式(I)化合物。

本发明的另一个目的是提供治疗以下疾病的方法：神经退行性疾病、癌症，和其它与活化的未折叠蛋白反应途径相关的疾病/损伤如：阿尔茨海默病、脊髓损伤、外伤性脑损伤、缺血性中风、中风、帕金森疾病、糖尿病、代谢综合征、代谢疾病、亨廷顿疾病、克-雅病、致死性家族失眠、格-施-沙综合征、和相关朊病毒病、肌萎缩侧索硬化、进行性核上性麻痹、心肌梗塞、心血管疾病、炎症、器官纤维化、肝的慢性和急性疾病、脂肪肝疾病、肝脂肪变性、肝纤维化、肺的慢性和急性疾病、肺纤维化、肾的慢性和急性疾病、肾纤维化、慢性创伤性脑病(CTE)、神经变性、痴呆、额颞痴呆、tau病变、皮克病、尼曼-皮克病、淀粉样变性、认知缺损、动脉粥样硬化、眼病、心律失常、器官移植和移植用器官的运输，其包括给药新的PERK活性的抑制剂。

发明内容

本发明涉及取代的异喹啉衍生物及其用途。具体地，本发明涉及根据式I的化合物和式(I)的化合物治疗疾病状态的用途：

其中R¹、R²、R³、R⁴、R⁵、R⁶、R⁷和X如下定义；或其盐(包括其药学上可接受的盐)。

本发明还涉及式(I)化合物作为活性PERK抑制剂的发现。

本发明还涉及治疗癌症的方法，其包括向有需要的受试者给药有效量的式(I)的PERK抑制性化合物。

本发明还涉及治疗阿尔茨海默病的方法，其包括向有需要的受试者给药有效量的式(I)的PERK抑制性化合物。

本发明还涉及治疗帕金森病的方法，其包括向有需要的受试者给药有效量的式(I)的PERK抑制性化合物。

本发明还涉及治疗肌萎缩侧索硬化的方法，其包括向有需要的受试者给药有效量的式(I)的PERK抑制性化合物。

本发明还涉及治疗亨廷顿病的方法，其包括向有需要的受试者给药有效量的式(I)的PERK抑制性化合物。

本发明还涉及治疗克雅氏病的方法，其包括向有需要的受试者给药有效量的式(I)的PERK抑制性化合物。

本发明还涉及治疗进行性核上麻痹(PSP)的方法，其包括向有需要的受试者给药有效量的式(I)的PERK抑制性化合物。

本发明还涉及治疗痴呆的方法，其包括向有需要的受试者给药有效量的式(I)的PERK抑制性化合物。

本发明还涉及治疗脊髓损伤的方法，其包括向有需要的受试者给药有效量的式(I)的PERK抑制性化合物。

本发明还涉及治疗外伤性脑损伤的方法，其包括向有需要的受试者给药有效量的式(I)的PERK抑制性化合物。

本发明还涉及治疗缺血性中风的方法，其包括向有需要的受试者给药有效量的式(I)的PERK抑制性化合物。

本发明还涉及治疗糖尿病的方法，其包括向有需要的受试者给药有效量的式(I)的PERK抑制性化合物。

本发明还涉及治疗选自以下的疾病状态的方法：心肌梗死、心血管病、动脉粥样硬化、眼部疾病和心律失常，其包括向有需要的受试者给药有效量的式(I)的PERK抑制性化合物。

本发明还涉及在器官移植和运输用于移植的器官中使用式(I)化合物的方法。

在本发明的另一方面中，提供了用于制备本发明PERK抑制性化合物的新方法和新中间体。

包括在本发明中的是药物组合物，其包含药用载体和可用于本发明方法的化合物。

本发明还包括将本发明的PERK抑制性化合物与另外的活性成分组合给药的方法。

本发明还涉及用于治疗的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。

本发明还涉及式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗阿尔茨海默病。

本发明还涉及式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗帕金森病。

本发明还涉及式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗肌萎缩侧索硬化。

本发明还涉及式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗亨廷顿病。

本发明还涉及式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗克雅氏病。

本发明还涉及式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗进行性核上麻痹(PSP)。

本发明还涉及式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗痴呆。

本发明还涉及式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗脊髓损伤。

本发明还涉及式(I)化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗外伤性脑损伤的药物中的用途。

本发明还涉及式(I)化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗糖尿病的药物中的用途。

本发明还涉及式(I)化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗选自以下的疾病状态的药物中的用途：心肌梗死、心血管病、动脉粥样硬化、眼部疾病和心律失常。

本发明还涉及式(I)化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗慢性损伤性脑病(CTE)的药物中的用途。

本发明还涉及式(I)化合物或其药学上可接受的盐在制备用于器官移植和运输用于移植的器官的药物中的用途。

本发明包括药物组合物，其包含药用载体和式(I)化合物或其药学上可接受的盐。

本发明还涉及用于治疗的如上定义的药物组合物。

本发明一个实施方案提供组合，其包含：

a)式(I)的化合物或其药学上可接受的盐；和

b)ATF-4调节化合物。

发明详述

本发明涉及式(I)的化合物且涉及式(I)的化合物在本发明的方法中的用途:

其中：

R¹选自：

双环杂芳基,

取代的双环杂芳基,

杂芳基，和

取代的杂芳基,

其中所述取代的双环杂芳基和所述取代的杂芳基取代有1至5个独立选自以下的取代基：

氟,

氯,

溴,

碘,

C_1-6烷基，

取代有1至5个独立选自以下的取代基的C_1-6烷基：氟、氯、溴、碘、C_1-4烷基氧基、-OH、C_1-4烷基、环烷基、-COOH、-CF₃、-NO₂、-NH₂和–CN，

-OH，

羟基C_1-6烷基,

-COOH，

四唑，

环烷基，

氧代，

-OC_1-6烷基,

-CF₃，

-CF₂H,

-CFH₂,

-C_1-6烷基OC_1-4烷基，

-CONH₂,

-CON(H)C_1-3烷基，

二C_1-4烷基氨基C_1-4烷基,

氨基C_1-6烷基,

–CN，

杂环烷基，

取代有1至4个独立选自以下的取代基的杂环烷基：C_1-4烷基、C_1-4烷基氧基、-OH、-COOH、-CF₃、-C_1-4烷基OC_1-4烷基、氧代、-NO₂、-NH₂和–CN,

-NO₂，

-NH₂，

-N(H)C_1-3烷基，和

-N(C_1-3烷基)₂；

R²选自：

芳基，

取代有1至5个独立选自以下的取代基的芳基：氟、氯、溴、碘、C_1-4烷基、环烷基、C_1-4烷基氧基、-OH、-COOH、-CF₃、-C_1-4烷基OC_1-4烷基、-NO₂、-NH₂、-OC(H)F₂、-C(H)F₂、-OCH₂F、–CH₂F、-CHF₂、-OCF₃和–CN，

杂芳基，

取代有1至5个独立选自以下的取代基的杂芳基：氟、氯、溴、碘、C_1-4烷基、环烷基、C_1-4烷基氧基、-OH、-COOH、-CF₃、-C_1-4烷基OC_1-4烷基、-NO₂、-NH₂、-OC(H)F₂、-C(H)F₂、-OCH₂F、–CH₂F、-OCF₃和–CN,

双环杂芳基，

取代有1至5个独立选自以下的取代基的双环杂芳基：氟、氯、溴、碘、C_1-4烷基、C_1-4烷基氧基、-OH、-COOH、-CF₃、-C_1-4烷基OC_1-4烷基、-NO₂、-NH₂、环烷基、-OC(H)F₂、-C(H)F₂、-OCH₂F、–CH₂F、-CHF₂、-OCF₃、-CN和环烷基；

R³、R⁴、R⁵和R⁶各自独立地选自氢、氟、氯、溴、碘、-CF₃和-CH₃；且

R⁷选自：氢、C_1-6烷基、环烷基、氨基C_1-6烷基、-CF₃、-CH₃、氟、氯、溴和碘；且

X为O、S、C(＝O)、NR¹⁰⁰、CR²⁰⁰R³⁰⁰,

其中R¹⁰⁰选自氢、C_1-6烷基；

R²⁰⁰和R³⁰⁰独立地选自氢、-CH₃、-CF₃、-OH、-NH₂,

或R²⁰⁰和R³⁰⁰与它们连接的碳原子一起表示3或4元环烷基；

及其盐。

本发明还涉及式(I)的化合物的药学上可接受的盐。

适当地，在式(I)的化合物中，X为CR²⁰⁰R³⁰⁰，其中R²⁰⁰和R³⁰⁰独立地选自：氢和-CH₃。

适当地，在式(I)的化合物中，X为C(＝O)。

适当地，在式(I)的化合物中，R¹为取代的吡咯并[2,3-d]嘧啶。

适当地，在式(I)的化合物中，R¹为取代的吡唑并[3,4-d]嘧啶。

适当地，在式(I)的化合物中，R¹为取代的吡咯并[3,2-c]吡啶。

适当地，在式(I)的化合物中，R²选自：

芳基，和

取代有1至5个独立选自以下的取代基的芳基：氟、氯、溴、碘、C_1-4烷基、环烷基、C_1-4烷基氧基、-OH、-COOH、-CF₃、-C_1-4烷基OC_1-4烷基、-NO₂、-NH₂、-OC(H)F₂、-C(H)F₂、-OCH₂F、–CH₂F、-CHF₂、-OCF₃和–CN。

适当地，在式(I)的化合物中，R⁷为氢。

适当地，在式(I)的化合物中，R³、R⁵和R⁶为氢。

适当地，在式(I)的化合物中，R⁴为氟。

本发明的化合物包括且在本发明的方法中使用的为式(II)的化合物:

其中：

R¹¹选自：

双环杂芳基,

取代的双环杂芳基,

杂芳基，和

取代的杂芳基,

其中所述取代的双环杂芳基和所述取代的杂芳基取代有1至5个独立选自以下的取代基：

氟,

氯,

溴,

碘,

C_1-6烷基，

取代有1至5个独立选自以下的取代基的C_1-6烷基：氟、氯、溴、碘、C_1-4烷基氧基、-OH、C_1-4烷基、环烷基、-COOH、-CF₃、-NO₂、-NH₂和–CN，

-OH，

羟基C_1-6烷基,

-COOH，

四唑，

环烷基，

氧代，

-OC_1-6烷基,

-CF₃，

-CF₂H,

-CFH₂,

-C_1-6烷基OC_1-4烷基，

-CONH₂,

-CON(H)C_1-3烷基，

二C_1-4烷基氨基C_1-4烷基,

氨基C_1-6烷基,

–CN，

杂环烷基，

取代有1至4个独立选自以下的取代基的杂环烷基：C_1-4烷基、C_1-4烷基氧基、-OH、-COOH、-CF₃、-C_1-4烷基OC_1-4烷基、氧代、-NO₂、-NH₂和–CN,

-NO₂，

-NH₂，

-N(H)C_1-3烷基，和

-N(C_1-3烷基)₂；

R¹²选自：

芳基，

取代有1至5个独立选自以下的取代基的芳基：氟、氯、溴、碘、C_1-4烷基、环烷基、C_1-4烷基氧基、-OH、-COOH、-CF₃、-C_1-4烷基OC_1-4烷基、-NO₂、-NH₂、-OC(H)F₂、-C(H)F₂、-OCH₂F、–CH₂F、-CHF₂、-OCF₃和–CN，

杂芳基，

取代有1至5个独立选自以下的取代基的杂芳基：氟、氯、溴、碘、C_1-4烷基、环烷基、C_1-4烷基氧基、-OH、-COOH、-CF₃、-C_1-4烷基OC_1-4烷基、-NO₂、-NH₂、-OC(H)F₂、-C(H)F₂、-OCH₂F、–CH₂F、-OCF₃和–CN,

双环杂芳基，

取代有1至5个独立选自以下的取代基的双环杂芳基：氟、氯、溴、碘、C_1-4烷基、C_1-4烷基氧基、-OH、-COOH、-CF₃、-C_1-4烷基OC_1-4烷基、-NO₂、-NH₂、环烷基、-OC(H)F₂、-C(H)F₂、-OCH₂F、–CH₂F、-CHF₂、-OCF₃、-CN和环烷基；

R¹³、R¹⁴、R¹⁵和R¹⁶各自独立地选自氢、氟、氯、溴、碘、-CF₃和-CH₃；且

R¹⁷选自：氢、C_1-6烷基、环烷基、氨基C_1-6烷基、-CF₃、-CH₃、氟、氯、溴和碘；且

X¹为O、S、C(＝O)、CR²⁵⁰R³⁵⁰,

R²⁵⁰和R³⁵⁰独立地选自氢、-CH₃、-CF₃、-OH、NH2,

或R²⁵⁰和R³⁵⁰与它们连接的碳原子一起表示3或4元环烷基；

及其盐。

本发明还涉及式(II)的化合物的药学上可接受的盐。

适当地，在式(II)的化合物中，X¹为CR²⁵⁰R³⁵⁰，其中R²⁵⁰和R³⁵⁰独立地选自：氢和-CH₃。

适当地，在式(II)的化合物中，X¹为C(＝O)。

适当地，在式(II)的化合物中，R¹¹为取代的吡咯并[2,3-d]嘧啶。

适当地，在式(II)的化合物中，R¹¹为取代的吡唑并[3,4-d]嘧啶。

适当地，在式(II)的化合物中，R¹¹为取代的吡咯并[3,2-c]吡啶。

适当地，在式(II)的化合物中，R¹²选自：

芳基，和

取代有1至5个独立选自以下的取代基的芳基：氟、氯、溴、碘、C_1-4烷基、环烷基、C_1-4烷基氧基、-OH、-COOH、-CF₃、-C_1-4烷基OC_1-4烷基、-NO₂、-NH₂、-OC(H)F₂、-C(H)F₂、-OCH₂F、–CH₂F、-CHF₂、-OCF₃和–CN。

适当地，在式(II)的化合物中，R¹⁷为氢。

适当地，在式(II)的化合物中，R¹³、R¹⁵和R¹⁶为氢。

适当地，在式(II)的化合物中，R¹⁴为氟。

本发明的化合物包括且在本发明的方法中使用的为式(III)的化合物：

其中：

R²¹选自：

双环杂芳基，和

取代的双环杂芳基,

其中所述取代的双环杂芳基取代有1至5个独立选自以下的取代基：

氟,

氯,

溴,

碘,

C_1-6烷基，

取代有1至5个独立选自以下的取代基的C_1-6烷基：氟、氯、溴、碘、C_1-4烷基氧基、-OH、C_1-4烷基、环烷基、-COOH、-CF₃、-NO₂、-NH₂和–CN，

-OH，

羟基C_1-6烷基,

-COOH，

四唑，

环烷基，

氧代，

-OC_1-6烷基,

-CF₃，

-CF₂H,

-CFH₂,

-C_1-6烷基OC_1-4烷基，

-CONH₂,

-CON(H)C_1-3烷基，

二C_1-4烷基氨基C_1-4烷基,

氨基C_1-6烷基,

–CN，

杂环烷基，

取代有1至4个独立选自以下的取代基的杂环烷基：C_1-4烷基、C_1-4烷基氧基、-OH、-COOH、-CF₃、-C_1-4烷基OC_1-4烷基、氧代、-NO₂、-NH₂和–CN,

-NO₂，

-NH₂，

-N(H)C_1-3烷基，和

-N(C_1-3烷基)₂；

R²²选自：

芳基，

取代有1至5个独立选自以下的取代基的芳基：氟、氯、溴、碘、C_1-4烷基、环烷基、C_1-4烷基氧基、-OH、-COOH、-CF₃、-C_1-4烷基OC_1-4烷基、-NO₂、-NH₂、-OC(H)F₂、-C(H)F₂、-OCH₂F、–CH₂F、-CHF₂、-OCF₃和–CN，

杂芳基，

取代有1至5个独立选自以下的取代基的杂芳基：氟、氯、溴、碘、C_1-4烷基、环烷基、C_1-4烷基氧基、-OH、-COOH、-CF₃、-C_1-4烷基OC_1-4烷基、-NO₂、-NH₂、-OC(H)F₂、-C(H)F₂、-OCH₂F、–CH₂F、-OCF₃和–CN,

双环杂芳基，

取代有1至5个独立选自以下的取代基的双环杂芳基：氟、氯、溴、碘、C_1-4烷基、C_1-4烷基氧基、-OH、-COOH、-CF₃、-C_1-4烷基OC_1-4烷基、-NO₂、-NH₂、环烷基、-OC(H)F₂、-C(H)F₂、-OCH₂F、–CH₂F、-CHF₂、-OCF₃、-CN和环烷基；

R²³、R²⁴、R²⁵和R²⁶各自独立地选自氢、氟、氯、溴、碘、-CF₃和-CH₃；且

R²⁷选自：氢、C_1-6烷基、环烷基、-CF₃、-CH₃、氟、氯、溴和碘；且

X²为O、S、C(＝O)、CR²⁶⁰R³⁶⁰,

R²⁶⁰和R³⁶⁰独立地选自氢、-CH₃、-CF₃、-OH、-NH₂,

或R²⁶⁰和R³⁶⁰与它们连接的碳原子一起表示3或4元环烷基；

及其盐。

本发明还涉及式(III)的化合物的药学上可接受的盐。

适当地，在式(III)的化合物中，X²为CR²⁶⁰R³⁶⁰，其中R²⁶⁰和R³⁶⁰独立地选自：氢和-CH₃。

适当地，在式(III)的化合物中，X²为C(＝O)。

适当地，在式(III)的化合物中，R²¹为取代的吡咯并[2,3-d]嘧啶。

适当地，在式(III)的化合物中，R²¹为取代的吡唑并[3,4-d]嘧啶。

适当地，在式(III)的化合物中，R²¹为取代的吡咯并[3,2-c]吡啶。

适当地，在式(III)的化合物中，R²²选自：

芳基，和

取代有1至5个独立选自以下的取代基的芳基：氟、氯、溴、碘、C_1-4烷基、环烷基、C_1-4烷基氧基、-OH、-COOH、-CF₃、-C_1-4烷基OC_1-4烷基、-NO₂、-NH₂、-OC(H)F₂、-C(H)F₂、-OCH₂F、–CH₂F、-CHF₂、-OCF₃和–CN。

适当地，在式(III)的化合物中，R²⁷为氢。

适当地，在式(III)的化合物中，R²³、R²⁵和R²⁶为氢。

适当地，在式(III)的化合物中，R²⁴为氟。

本发明的化合物包括且在本发明的方法中使用的为式(IV)的化合物:

其中：

R³²选自：

芳基，

取代有1至5个独立选自以下的取代基的芳基：氟、氯、溴、碘、C_1-4烷基、环烷基、C_1-4烷基氧基、-OH、-COOH、-CF₃、-C_1-4烷基OC_1-4烷基、-NO₂、-NH₂、-OC(H)F₂、-C(H)F₂、-OCH₂F、–CH₂F、-CHF₂、-OCF₃和–CN，

杂芳基，

取代有1至5个独立选自以下的取代基的杂芳基：氟、氯、溴、碘、C_1-4烷基、环烷基、C_1-4烷基氧基、-OH、-COOH、-CF₃、-C_1-4烷基OC_1-4烷基、-NO₂、-NH₂、-OC(H)F₂、-C(H)F₂、-OCH₂F、–CH₂F、-OCF₃和–CN,

双环杂芳基，

取代有1至5个独立选自以下的取代基的双环杂芳基：氟、氯、溴、碘、C_1-4烷基、C_1-4烷基氧基、-OH、-COOH、-CF₃、-C_1-4烷基OC_1-4烷基、-NO₂、-NH₂、环烷基、-OC(H)F₂、-C(H)F₂、-OCH₂F、–CH₂F、-CHF₂、-OCF₃、-CN和环烷基；

R³³、R³⁴、R³⁵和R³⁶各自独立地选自氢、氟、氯、溴、碘、-CF₃和-CH₃；且

R³⁷选自：氢、C_1-6烷基、环烷基、-CF₃、-CH₃、氟、氯、溴和碘；

R³⁸选自：氢和-CH₃；且

R³⁹选自：

氢，

环烷基,

C_1-6烷基，和

取代有1至4个独立选自以下的取代基的C_1-6烷基：氟、氯、溴、碘、C_1-4烷基氧基、-OH、-CF₃、-COOH、-NO₂、-NH₂和–CN；

X³为O、S、C(＝O)、CR²⁷⁰R³⁷⁰,

R²⁷⁰和R³⁷⁰独立地选自氢、-CH₃、-CF₃、-OH、-NH₂,

或R²⁷⁰和R³⁷⁰与它们连接的碳原子一起表示3或4元环烷基；

及其盐。

本发明还涉及式(IV)的化合物的药学上可接受的盐。

适当地，在式(IV)的化合物中，X³为CR²⁷⁰R³⁷⁰，其中R²⁷⁰和R³⁷⁰独立地选自：氢和-CH₃。

适当地，在式(IV)的化合物中，X³为C(＝O)。

适当地，在式(IV)的化合物中，R³²选自：

芳基，和

取代有1至5个独立选自以下的取代基的芳基：氟、氯、溴、碘、C_1-4烷基、环烷基、C_1-4烷基氧基、-OH、-COOH、-CF₃、-C_1-4烷基OC_1-4烷基、-NO₂、-NH₂、-OC(H)F₂、-C(H)F₂、-OCH₂F、–CH₂F、-CHF₂、-OCF₃和–CN。

适当地，在式(IV)的化合物中，R³⁷为氢。

适当地，在式(IV)的化合物中，R³³、R³⁵和R³⁶为氢。

适当地，在式(IV)的化合物中，R³⁴为氟。

本发明的化合物包括且在本发明的方法中使用的为式(V)的化合物:

其中：

R⁴¹选自:

氢，

环烷基,

杂环烷基,

C_1-6烷基，和

取代有1至4个独立选自以下的取代基的C_1-6烷基：氟、氯、溴、碘、C_1-4烷基氧基、-OH、-CF₃、-COOH、-NO₂、-NH₂和–CN；

R⁴²选自：

芳基，

取代有1至5个独立选自以下的取代基的芳基：氟、氯、溴、碘、C_1-4烷基、环烷基、C_1-4烷基氧基、-OH、-COOH、-CF₃、-C_1-4烷基OC_1-4烷基、-NO₂、-NH₂、-OC(H)F₂、-C(H)F₂、-OCH₂F、–CH₂F、-CHF₂、-OCF₃和–CN，

杂芳基，

取代有1至5个独立选自以下的取代基的杂芳基：氟、氯、溴、碘、C_1-4烷基、环烷基、C_1-4烷基氧基、-OH、-COOH、-CF₃、-C_1-4烷基OC_1-4烷基、-NO₂、-NH₂、-OC(H)F₂、-C(H)F₂、-OCH₂F、–CH₂F、-OCF₃和–CN,

双环杂芳基，

取代有1至5个独立选自以下的取代基的双环杂芳基：氟、氯、溴、碘、C_1-4烷基、C_1-4烷基氧基、-OH、-COOH、-CF₃、-C_1-4烷基OC_1-4烷基、-NO₂、-NH₂、环烷基、-OC(H)F₂、-C(H)F₂、-OCH₂F、–CH₂F、-CHF₂、-OCF₃、-CN和环烷基；

R⁴³、R⁴⁴、R⁴⁵和R⁴⁶各自独立地选自氢、氟、氯、溴、碘、-CF₃和-CH₃；且

R⁴⁷选自：氢、C_1-6烷基、环烷基、-CF₃、-CH₃、氟、氯、溴和碘；

R⁴⁸选自：氢和C_1-6烷基；

R⁴⁹选自：氢和-CH₃；且

X⁴为O、S、C(＝O)、CR²⁸⁰R³⁸⁰,

R²⁸⁰和R³⁸⁰独立地选自氢、-CH₃、-CF₃、-OH、-NH₂,

或R²⁸⁰和R³⁸⁰与它们连接的碳原子一起表示3或4元环烷基；

及其盐。

本发明还涉及式(V)的化合物的药学上可接受的盐。

适当地，在式(V)的化合物中，X⁴为CR²⁸⁰R³⁸⁰，其中R²⁸⁰和R³⁸⁰独立地选自：氢和-CH₃。

适当地，在式(V)的化合物中，X⁴为C(＝O)。

适当地，在式(V)的化合物中，R⁴²选自：

芳基，和

取代有1至5个独立选自以下的取代基的芳基：氟、氯、溴、碘、C_1-4烷基、环烷基、C_1-4烷基氧基、-OH、-COOH、-CF₃、-C_1-4烷基OC_1-4烷基、-NO₂、-NH₂、-OC(H)F₂、-C(H)F₂、-OCH₂F、–CH₂F、-CHF₂、-OCF₃和–CN。

适当地，在式(V)的化合物中，R⁴⁷为氢。

适当地，在式(V)的化合物中，R⁴³、R⁴⁵和R⁴⁶为氢。

适当地，在式(IV)的化合物中，R⁴⁴为氟。

本发明的新化合物包括:

5-(3-苄基异喹啉-7-基)-7-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺；

5-(3-(3,5-二甲基苄基)异喹啉-7-基)-7-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺；

5-(3-苄基-8-氟异喹啉-7-基)-7-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺；

5-(3-(3,5-二氟苄基)-8-氟异喹啉-7-基)-7-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺；

7-环丙基-5-(3-(2,3-二氟苄基)-8-氟异喹啉-7-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺；

5-(3-(3,5-二氟苄基)-8-氟异喹啉-7-基)-7-乙基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺；

(7-(4-氨基-7-环丙基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)-8-氟异喹啉-3-基)(3,5-二氟苯基)甲醇；

7-环丙基-5-(3-(3,5-二氟苄基)-5-氟异喹啉-7-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺；

5-(3-(3,5-二氟苄基)-8-氟异喹啉-7-基)-7-(2,2-二氟环丙基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺；

3-(3-(3,5-二氟苄基)-8-氟异喹啉-7-基)-7-氟-1-甲基-1H-吡咯并[3,2-c]吡啶-4-胺；

5-(3-(3,5-二氟苄基)-8-氟异喹啉-7-基)-7-(氧杂环丁烷-3-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺；

7-环丙基-5-(3-(3,5-二氟苄基)-8-氟-4-甲基异喹啉-7-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺；

(7-(4-氨基-7-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)异喹啉-3-基)(3,5-二甲基苯基)甲酮；

5-(3-(3,4-二氟苄基)-8-氟异喹啉-7-基)-7-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺；

5-(3-(2,5-二氟苄基)-8-氟异喹啉-7-基)-7-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺；

5-(8-氟-3-(3-氟-5-(三氟甲基)苄基)异喹啉-7-基)-7-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺；

5-(8-氟-3-(3-(三氟甲基)苄基)异喹啉-7-基)-7-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺；

7-环丙基-5-(8-氟-3-(3-氟苄基)异喹啉-7-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺；

7-环丙基-5-(8-氟-3-(4-氟苄基)异喹啉-7-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺；

7-环丙基-5-(3-(2,5-二甲基苄基)-8-氟异喹啉-7-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺；

5-(3-(3,5-二氟苄基)-8-氟异喹啉-7-基)-7-(2,2,2-三氟乙基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺；

5-(3-(3,5-二氟苄基)-8-氟异喹啉-7-基)-7-异丙基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺；

5-(3-(3,5-二氟苄基)-8-氟异喹啉-7-基)-2,7-二甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺；

7-环丙基-5-(3-(3,5-二氟苄基)-8-氟异喹啉-7-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺；

3-(3-(3,5-二氟苄基)-8-氟异喹啉-7-基)-1-甲基-1H-吡咯并[3,2-c]吡啶-4-胺；

7-环丙基-5-(3-(3,5-二氟苄基)-8-氟异喹啉-7-基)-2-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺；

1-环丙基-3-(3-(3,5-二氟苄基)-8-氟异喹啉-7-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺；

7-环丙基-5-(3-((3,5-二氟苯基)(甲氧基)甲基)-8-氟异喹啉-7-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺；

7-(2-(2-氨基乙氧基)乙基)-5-(3-(3,5-二氟苄基)-8-氟异喹啉-7-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺；

7-(2-氨基乙基)-5-(3-(3,5-二氟苄基)-8-氟异喹啉-7-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺；

7-环丙基-5-(3-(3-乙炔基-5-氟苄基)-8-氟异喹啉-7-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺；

7-环丙基-5-(3-(2,5-二氟苄基)-8-氟异喹啉-7-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺；

5-(3-(3,5-二氟苄基)-8-氟异喹啉-7-基)-7-(1-甲基哌啶-4-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺；

5-(3-(3,5-二氟苄基)-8-氟异喹啉-7-基)-7-(2-吗啉代乙基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺；

5-(3-(5-氯-2-甲基苄基)-8-氟异喹啉-7-基)-7-环丙基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺；

7-环丙基-5-(8-氟-3-(2-甲基苄基)异喹啉-7-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺；

5-(3-(3,5-二氟苄基)-8-氟异喹啉-7-基)-7-(1-甲基氮杂环丁烷-3-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺；

7-环丙基-5-(3-(1-(3,5-二氟苯基)乙基)-8-氟异喹啉-7-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺；

7-环丙基-5-(8-氟-3-(2-氟-5-(三氟甲基)苄基)异喹啉-7-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺；

5-(3-(3,5-二氟苄基)异喹啉-7-基)-7-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺；

5-(3-(3-氯苄基)-8-氟异喹啉-7-基)-7-环丙基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺；

5-(3-(2-氯苄基)-8-氟异喹啉-7-基)-7-环丙基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺；

7-环丙基-5-(8-氟-3-(3-氟-5-甲基苄基)异喹啉-7-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺；

7-环丙基-5-(3-(3,5-二氯苄基)-8-氟异喹啉-7-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺；

5-(3-(3,5-二氟苄基)-8-氟异喹啉-7-基)-7-(2-(二甲基氨基)乙基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺；

5-(8-氟-3-(3-氟苄基)异喹啉-7-基)-7-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺；

5-(3-(3-氯苄基)-8-氟异喹啉-7-基)-7-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺；

7-环丁基-5-(3-(3,5-二氟苄基)-8-氟异喹啉-7-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺；

5-(3-(3-氯-2-氟苄基)-8-氟异喹啉-7-基)-7-环丙基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺；

7-环丙基-5-(3-(2,3-二氟苄基)-8-氟异喹啉-7-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺；

7-环丙基-5-(8-氟-3-((5-氟吡啶-3-基)甲基)异喹啉-7-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺；

7-(环丙基甲基)-5-(3-(3,5-二氟苄基)-8-氟异喹啉-7-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺；

5-(3-(3,5-二氟苄基)-8-氟异喹啉-7-基)-7-(2-甲氧基乙基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺；

5-(3-(3,5-二氟苄基)-8-氟异喹啉-7-基)-7-((3-甲基氧杂环丁烷-3-基)甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺；

7-环丙基-5-(3-(3,5-二氟苄基)-8-氟异喹啉-7-基)-6-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺；

5-(3-(3,5-二氟苄基)-8-氟异喹啉-7-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺；

5-(3-(3,5-二氟苄基)-8-氟异喹啉-7-基)-7-乙基-6-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺；和

5-(3-(3-氯-5-氟苄基)-8-氟异喹啉-7-基)-7-环丙基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺；

及其盐，包括其药学上可接受的盐。

本领域技术人员将会理解，可以制备式(I)化合物的盐(包括药学上可接受的盐)。事实上，在本发明的某些实施方案中，式(I)化合物的盐(包括药学上可接受的盐)可以优于相应的游离化合物或未盐化的化合物。因此，本发明还涉及根据式(I)的化合物的盐(包括药学上可接受的盐)。

本发明化合物的盐(包括药学上可接受的盐)由本领域技术人员容易地制备。

式(I)化合物可以含有一个或多个不对称中心(也称为手性中心)，并且因此可以各自的对映异构体、非对映异构体、或其它立体异构的形式，或其混合物存在。手性中心，例如手性碳原子，可以存在于取代基例如烷基中。当手性中心的立体化学存在于式(I)化合物中，或本文例示的任何化学结构中时，若未指定，所述结构包括所有单独的立体异构体和它们的混合物。因此，含有一个或多个手性中心的式(I)化合物可以以外消旋混合物、对映异构体富集的混合物，或以对映异构体纯的单独立体异构体使用。

式(I)化合物还可包含双键或其它几何不对称中心。当几何不对称的中心的立体化学存在于式(I)中，或本文例示的任何化学结构中时，若未指定，所述结构包括反式(E)几何异构体、顺式(Z)几何异构体，以及它们的混合物。同样，所有互变异构形式也包括在式(I)中，无论该互变异构以平衡存在还是主要一种形式存在。

式(I)化合物或其盐(包括药学上可接受的盐)，可以以固体或液体形式存在。以固态形式，本发明化合物可以以晶型或非晶型，或其混合物存在。对于以晶型存在的本发明化合物，本领域技术人员将理解，可以形成药学上可接受的溶剂合物，其中溶剂分子在结晶过程中掺入晶格中。其中水为掺入晶格中的溶剂的溶剂合物通常称为”水合物”。水合物包含化学计量的水合物以及包含可变量水的组合物。

本领域技术人员还将理解，一些以晶型存在的式(I)化合物或其盐(包括药学上可接受的盐)，包括其各种溶剂合物，可以显示多晶型性(即以不同结晶结构存在的能力)。这些不同的晶型通常称为”多晶型体”。多晶型体具有相同的化学组成，但堆积(packing)、几何排列和其它结晶固态的描述性特征不同。因此，多晶型体可以具有不同的物理性质，例如形状、密度、硬度、变形性、稳定性和溶出性质。多晶型体通常具有不同的熔点、IR光谱和X-射线粉末衍射图，其可以用于鉴定。本领域技术人员将理解，可以制备不同的多晶型体，例如，通过改变或调节用于制备化合物的反应条件或试剂。例如，改变温度、压力或溶剂可以产生多晶型体。另外，在一定条件下，一种多晶型体可以自发转化为另一种多晶型体。本发明包括所有这些多晶型体。

定义

“烷基(alkyl)”是指具有指定数量的“成员原子”的烃链。例如，C₁-C₆烷基是指具有1至6个成员原子的烷基。烷基可以为饱和、不饱和、直链或支链的。代表性支链烷基具有1、2或3个支链。烷基包括，但不限于：甲基、乙基、亚乙基、炔基(如乙炔基)、丙基(正丙基和异丙基)、丁烯基、丁基(正丁基、异丁基和叔丁基)、戊基和己基。

“烷氧基(Alkoxy)”是指-O-烷基，其中”烷基”如本文定义。例如，C₁-C₄烷氧基是指具有1至4个成员原子的烷氧基。代表性支链烷氧基具有1、2或3个支链。所述基团的实例包括甲氧基、乙氧基、丙氧基和丁氧基。

“芳基”是指芳香烃环。芳基为单环、双环和三环体系，其具有总共5-14个环原子，其中至少一个环系是芳香族的，并且其中该系统中的每个环含有3-7个成员原子，例如苯基、萘、四氢化萘和联苯。合适地，芳基是苯基。

“双环杂芳基”是指含有1至6个杂原子作为成员原子的两个稠合的芳香环。含有超过1个杂原子的双环杂芳基可含有不同的杂原子。双环杂芳基环具有6至11个成员原子。双环杂芳基包括：1H-吡咯并[3,2-c]吡啶、1H-吡唑并[4,3-c]吡啶、1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶、1H-吡咯并[2,3-d]嘧啶、7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶、噻吩并[3,2-c]吡啶、噻吩并[2,3-d]嘧啶、呋喃并[2,3-c]吡啶、呋喃并[2,3-d]嘧啶、吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺、吲哚基、异吲哚基、中氮茚基、吲唑基、嘌呤基、喹啉基、异喹啉基、喹喔啉基、喹唑啉基、蝶啶基、噌啉基、氮杂苯并咪唑基、四氢苯并咪唑基、苯并咪唑基、苯并吡喃基、苯并噁唑基、苯并呋喃基、异苯并呋喃基、苯并噻唑基、苯并噻吩基、咪唑并[4.5-c]吡啶、咪唑并[4.5-b]吡啶、呋喃并吡啶基和萘啶基。

合适的"双环杂芳基"包括：1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶、1H-吡咯并[2,3-d]嘧啶、7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶、噻吩并[3,2-c]吡啶、噻吩并[2,3-d]嘧啶、呋喃并[2,3-c]吡啶、吲哚基、异吲哚基、中氮茚基、吲唑基、嘌呤基、喹啉基、异喹啉基、喹喔啉基、喹唑啉基、蝶啶基、噌啉基、氮杂苯并咪唑基、四氢苯并咪唑基、苯并咪唑基、苯并吡喃基、苯并噁唑基、苯并呋喃基、异苯并呋喃基、苯并噻唑基、苯并噻吩基、咪唑并[4.5-c]吡啶、咪唑并[4.5-b]吡啶、呋喃并吡啶基和萘啶基。合适的1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶、1H-吡咯并[2,3-d]嘧啶、噻吩并[3,2-c]吡啶、噻吩并[2,3-d]嘧啶、吲唑基、喹啉基、喹唑啉基或苯并噻唑基。合适的1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶、噻吩并[2,3-d]嘧啶或1H-吡咯并[2,3-d]嘧啶。合适的为1H-吡咯并[2,3-d]嘧啶。

“环烷基(Cycloalkyl)”，除非另有定义，是指具有3-7个碳原子的饱和或不饱和的非芳族烃环。环烷基为单环环体系。例如，C₃-C₇环烷基是指具有3至7个成员原子的环烷基。本文所用的环烷基的实例包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环丁烯基、环戊烯基、环己烯基和环庚基。

“卤”是指卤素基团氟、氯、溴和碘。

“杂芳基”是指含有1至7个碳原子，且含有1至4个杂原子的单环芳族4至8元环，条件是当碳原子数为3时，芳环含有至少两个杂原子。含有超过1个杂原子的杂芳基可含有不同的杂原子。杂芳基包括吡咯基、吡唑基、咪唑基、唑基、异唑基、噻唑基、异噻唑基、呋喃基、呋咱基、噻吩基、三唑基、吡啶基、嘧啶基、哒嗪基、吡嗪基、三嗪基、四嗪基。适当地，“杂芳基”包括：吡唑、吡咯、异噁唑、吡啶、嘧啶、哒嗪和咪唑。

“杂环烷基”是指含有4至12个成员原子的饱和或不饱和的非芳族环，其中1至11个为碳原子和1至6个为杂原子。含有多于一个杂原子的杂环烷基可以含有不同的杂原子。杂环烷基为单环体系或与具有3至6个成员原子的芳环或杂芳环稠合的单环。杂环烷基包括：吡咯烷基、四氢呋喃基、二氢呋喃基、吡喃基、四氢吡喃基、二氢吡喃基、四氢噻吩基、吡唑烷基、噁唑烷基、氧杂环丁烷基、噻唑烷基、哌啶基、高哌啶基、哌嗪基、吗啉基、硫吗啉基、1,3-二氧杂环戊基、1,3-二氧杂环己基、1,4-二氧杂环己基、1,3-氧杂硫杂环戊基、1,3-氧杂硫杂环己基、1,3-二噻烷基、1,3-唑烷-2-酮基、六氢-1H-氮杂环庚三烯基、4,5,6,7-四氢-1H-苯并咪唑基、哌啶基、1,2,3,6-四氢-吡啶基和氮杂环丁烷基。

“杂原子”是指氮、硫或氧原子。

用于这些方法、方案和实施例中的本文所用的符号和常规术语与同时期的科学文献，例如，Journal of the American Chemical Society或Journal of BiologicalChemistry中所用的一致。标准的单字母或三字母缩写通常用于指定氨基酸残基，其假定为L-构型，除非另外指明。除非另外指明，否则所有的起始物料获自市售供应商，且不经进一步纯化直接使用。具体地，以下缩写可以用于实施例和整个说明书中：

Ac(乙酰基)；

Ac₂O(乙酸酐)；

ACN(乙腈)；

AIBN(偶氮二(异丁腈))；

BINAP(2,2'-二(二苯基膦基)-1,1'-联萘)；

BMS(硼烷-二甲硫醚复合物)；

Bn(苄基)；

Boc(叔丁氧基羰基)；

Boc₂O(焦碳酸二叔丁基酯)；

CSF(氟化铯)；

DCE(1,2-二氯乙烷)；

DCM(二氯甲烷)；

DDQ(2,3-二氯-5,6-二氰基-1,4-苯醌)；

DMS(二甲基硫醚)；

ATP(三磷酸腺苷)；

二-频哪醇合二硼(4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-二-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷)；

BSA(牛血清白蛋白)；

C18(指在HPLC固定相中硅胶上的18-碳烷基)

CH₃CN(乙腈)；

Cy(环己基)；

DIPEA(Hünig碱，N-乙基-N-(1-甲基乙基)-2-丙胺)；

二噁烷(1,4-二噁烷)；

DMAP(4D二甲基氨基吡啶)；

DME(1,2-二甲氧基乙烷)；

DMF(N,N-二甲基甲酰胺)；

DMSO(二甲基亚砜)；

DPPA(二苯基磷酰基叠氮化物)；

EtOAc(乙酸乙酯)；

EtOH(乙醇)；

Et₂O(乙醚)；

HOAc(乙酸)；

HPLC(高压液相色谱法)；

HMDS(六甲基二硅氮烷)；

IPA(异丙醇)；

LAH(氢化铝锂)；

LDA(二异丙基酰胺锂)；

LHMDS(六甲基二硅基氨基锂)；

MeOH(甲醇)；

MTBE(甲基叔丁基醚)；

mCPBA(间氯过苯甲酸)；

NaHMDS(六甲基二硅基胺基钠)；

NBS(N-溴代琥珀酰亚胺)；

Pd₂(dba)₃(三(二亚苄基丙酮)二钯(0)；

Pd(dppf)Cl₂.DCM复合物([1,1′-二(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II).二氯甲烷复合物)；

RPHPLC(反相高压液相色谱法)；

RT(室温)；

Sat.(饱和)

SGC(硅胶色谱法)；

SM(起始材料)；

TCL(薄层色谱法)；

TEA(三乙胺)；

TFA(三氟乙酸)；和

THF(四氢呋喃)。

所有提及的醚是指二乙醚且盐水是指饱和NaCl水溶液。

化合物制备

式(I)化合物使用常规的有机合成方法制备。合适的合成路线如下描述在以下的通用反应方案中。所有起始物质都是市售的，或者容易由本领域技术人员由市售原料制备。

本领域技术人员将理解，若此处所述的取代基与此处所用的合成方法不一致，则所述取代基可以用合适的对反应条件稳定的保护基保护。所述保护基可以在反应顺序中在合适的步骤脱除，得到所需中间体或目标化合物。合适的保护基和使用该合适的保护基保护和脱保护不同的取代基的方法是本领域熟练技术人员熟知的；其实例可见于T.Greene和P.Wuts,Protecting Groups in Organic Synthesis(4th ed.),John Wiley&Sons,NY(2006)。在一些情况下，可以具体选择取代基以在所用反应条件下具有反应性。在这些情况下，所述反应条件将所选取代基转化为另一取代基，其用作中间体化合物或为目标化合物中所需的取代基。

根据方案1制备具有在异喹啉的8-位取代的氟的本发明化合物。取代的苄胺C通过以下制备：使取代的苯甲醛A与O-甲基羟胺盐酸盐在碱存在下反应，得到相应的亚胺B，还原得到苄胺C。通过还原胺化C和1,1-二甲氧基丙-2-酮C1得到二取代胺D。通过与氯磺酸反应进行D的环化以得到异喹啉E。将甲基异喹啉E进行自由基溴化，然后与高碘酸钠反应，得到异喹啉醛G。在某些情况下，E的溴化导致甲基的单溴化，并且得到的化合物通过用NBS进一步处理，可以将其转化为二溴化合物F。异喹啉醛G与多种烷基/芳基溴化镁反应得到中间体H。转化为硼酸酯I后，钯催化的与双环杂芳基溴J的Suzuki-Miyaura反应生成化合物K。化合物K用亚硫酰氯处理后通过使用乙酸锌还原卤化物，得到化合物M，其代表本发明化合物的结构。双环杂芳基溴化物J按照J.Med.Chem.，2012，55(16)，pp 7193–7207和J.Med.Chem.，2015，58(3)，pp 1426–1441制备。

方案1:

具有通式M的本发明化合物可以如方案2中所述使用从中间体G的替代方法制备。醛中间体G与甲苯磺酰肼反应，得到相应的甲苯磺酰腙衍生物G3。一般中间体G3与多种硼酸/硼酸酯的碳-碳键形成使用碱如碳酸钾或氟化铯或磷酸钾在有机溶剂的存在下进行，得到中间体T，其按照Barluenga等人(Nat.Chem.2009，1，494-499)报道的方法。将T转化为硼酸酯U，然后与双环杂芳基溴化物J进行钯催化的Suzuki-Miyaura反应，得到通式M的本发明化合物。

方案2.

或者，具有通式M的本发明化合物可以按照方案3进行。通过锂化将1-溴-2-氟-4-碘苯N转化为相应的酸O，然后用二氧化碳猝灭，在甲醇存在下用亚硫酰氯处理得到酯P。将酯还原成醇，然后用Swern-氧化条件氧化得到取代的苯甲醛R。将苯甲醛R转化为叔丁基亚胺衍生物S，其通过在碘化铜和钯(II)二(三苯基膦)二氯化物存在下与取代的苄基乙炔S1反应以转化为异喹啉中间体T。硼酸酯形成和Suzuki-Miyaura偶联类似于方案2中所述进行，得到本发明的化合物M。

方案3.

可以根据方案4制备在异喹啉上不含氟的本发明化合物。通过使用硫酸中的甲醇将羧酸V转化为相应的酯。使用NBS对V1进行环溴化，得到相应的溴代化合物V2。使用硼氢化钠将V2酯还原为醇，然后进行Swern氧化，得到相应的醛V4。将醛V4转化为亚胺V5，然后如方案2中所述类似地进行异喹啉形成和Suzuki-Miyaura偶联，得到本发明的化合物M。

方案4.

或者，具有通式M1的本发明化合物可以通过以下方案5制备。4-溴苯二甲酸W1被还原成相应的二醇W2，氧化后得到二醛W3。在碱性条件下使W3与2-氨基丙二酸二乙酯盐酸盐反应，得到异喹啉中间体W4。形成W4的反应产生区域异构体的混合物，从中分离出W4并用于后续反应。使用碱如氢氧化锂在异喹啉W4上水解酯基，并将所得的酸W5转化为Weinreb酰胺W6。使化合物W6与多种格氏试剂Y反应，得到酮W7。使用水合肼进行酮基的还原，得到中间体V6。如方案2中类似地进行硼酸酯形成和Suzuki-Miyaura偶联，以获得本发明的化合物M1。在一些实施例中，将W7转化为硼酸酯，然后进行与双环杂芳基溴化物J的Suzuki-Miyaura偶联，得到本发明的化合物M1。

方案5.

方案6.

按照方案6制备在异喹啉上具有烷基取代的本发明实施例。通过在四(三苯基膦)钯存在下使S与丁-2-炔-1-醇S2反应，将亚胺衍生物S转化为异喹啉中间体S3。通过使用Dess-Martin高碘烷等氧化剂将异喹啉醇S3转化为醛。

使用方法

根据式(I)的化合物及其药学上可接受的盐是PERK的抑制剂。这些化合物可能用于治疗以下病症，其中潜在的病理归因于(但不限于)UPR途径的活化，例如，神经退行性疾病、癌症、心血管疾病和代谢疾病。因此，另一方面，本发明涉及治疗这些病症的方法。

合适地，本发明涉及治疗乳腺癌(包括炎性乳腺癌、导管癌和小叶癌)或减轻乳腺癌(包括炎性乳腺癌、导管癌和小叶癌)的严重程度的方法。

合适地，本发明涉及治疗结肠癌或减轻结肠癌的严重程度的方法。

合适地，本发明涉及治疗胰腺癌(包括胰岛素瘤、腺癌、导管腺癌、腺鳞状癌、腺泡细胞癌和胰升糖素瘤)或减轻胰腺癌(包括胰岛素瘤、腺癌、导管腺癌、腺鳞状癌、腺泡细胞癌和胰升糖素瘤)的严重程度的方法。

合适地，本发明涉及用于治疗皮肤癌(包括黑素瘤，包括转移性黑色素瘤)或减轻皮肤癌(包括黑素瘤，包括转移性黑色素瘤)的严重程度的方法。

合适地，本发明涉及治疗包括小细胞肺癌、非小细胞肺癌、鳞状细胞癌、腺癌和大细胞癌在内的肺癌，或减轻包括小细胞肺癌、非小细胞肺癌、鳞状细胞癌、腺癌和大细胞癌在内的肺癌的严重程度的方法。

合适地，本发明涉及治疗以下癌症或减轻以下癌症的严重程度的方法，所述癌症选自：脑癌(胶质瘤)、胶质母细胞瘤、星形细胞瘤、多形性胶质母细胞瘤、巴-佐综合征、考登病、Lhermitte-Duclos病、肾母细胞瘤、尤因肉瘤、横纹肌肉瘤、室管膜瘤、髓母细胞瘤、头颈癌、肾癌、肝癌、黑素瘤、卵巢癌、胰腺癌、腺癌、导管腺癌、腺鳞状癌、腺泡细胞癌、胰升糖素瘤、胰岛素瘤、前列腺癌、肉瘤、骨肉瘤、骨的巨细胞瘤、甲状腺癌、成淋巴细胞性T细胞白血病、慢性髓细胞性白血病、慢性淋巴细胞白血病、毛细胞白血病、急性成淋巴细胞性白血病、急性髓性白血病、慢性嗜中性白细胞白血病、急性成淋巴细胞性T细胞白血病、浆细胞瘤、成免疫细胞性大细胞白血病、套细胞白血病、多发性骨髓瘤、巨核母细胞性白血病、多发性骨髓瘤、急性巨核细胞白血病、前髓细胞性白血病、红白血病、恶性淋巴瘤、何杰金淋巴瘤、非何杰金淋巴瘤、成淋巴细胞性T细胞淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、滤泡淋巴瘤、成神经细胞瘤、膀胱癌、泌尿道上皮癌、外阴癌、宫颈癌、子宫内膜癌症、肾癌、间皮瘤、食管癌、唾液腺癌、肝细胞癌、胃癌、鼻咽癌、颊癌、口腔癌、GIST(胃肠道间质瘤)、神经内分泌癌和睾丸癌。

合适地，本发明涉及治疗在哺乳动物(包括人)中癌前期综合征或减轻所述综合征的严重性的方法，其中所述癌前期综合征选自：宫颈上皮内瘤样病变、意义不明的单克隆丙种球蛋白病(MGUS)、骨髓增生异常综合征、再生障碍性贫血、宫颈病变、皮肤痣(前黑素瘤)、前列腺上皮内(导管内)瘤形成(PIN)、原位导管癌(DCIS)、结肠息肉和严重的肝炎或肝硬化。

合适地，本发明涉及治疗神经变性疾病/损伤或减轻神经变性疾病/损伤的严重程度的方法，所述神经变性疾病/损伤例如：阿尔茨海默病、脊髓损伤、外伤性脑损伤、缺血性中风、中风、帕金森病、代谢综合征、代谢失调、亨廷顿病、克雅氏病、家族致命性失眠症、格-施-沙综合征和相关的朊病毒病、进行性核上麻痹、肌萎缩侧索硬化和其他与UPR激活有关的疾病，包括：神经性疼痛、糖尿病、心肌梗死、心血管病、炎症、纤维化、慢性和急性肝脏疾病、脂肪肝病、肝脂肪变性、肝纤维化、慢性和急性肺部疾病、肺纤维化、慢性和急性肾脏疾病、肾脏纤维化、慢性损伤性脑病(CTE)、神经退行性疾病、痴呆、额颞叶痴呆、tau病变、皮克病、尼曼-皮克病、淀粉样变性、认知缺损、动脉粥样硬化、眼部疾病和心律失常。

合适地，本发明涉及在器官移植过程中和器官移植后以及运输用于移植的器官过程中防止器官损伤的方法。器官移植过程中和器官移植后防止器官损伤的方法将包括式(I)化合物的体内给药。运输用于移植的器官过程中防止器官损伤的方法将包括在运输过程中向贮存器官的溶液中加入式(I)化合物。

本发明化合物抑制血管生成，其涉及治疗眼部疾病。Nature Reviews DrugDiscovery 4,711-712(2005年9月)。合适地，本发明涉及治疗眼部疾病/血管生成或减轻眼部疾病/血管生成的严重性的方法。在本发明方法的实施方式中，所述眼部疾病，包括血管渗漏，可为：闭塞性或炎性视网膜血管疾病的水肿或新生血管形成，例如虹膜发红、新生血管性青光眼、翼状胬肉、血管性青光眼滤过泡、结膜乳头状瘤；脉络膜新血管生成，例如新生血管性年龄相关的黄斑变性(AMD)、近视、前葡萄膜炎、外伤或特发性损伤；黄斑水肿，例如术后黄斑水肿、继发于葡萄膜炎的黄斑水肿，包括视网膜和/或脉络膜炎症、继发于糖尿病的黄斑水肿，以及继发于视网膜血管闭塞疾病(即视网膜分支静脉闭塞和视网膜中央静脉阻塞)的黄斑水肿；由于糖尿病引起的视网膜新血管形成，例如视网膜静脉闭塞、葡萄膜炎、来自颈动脉疾病的眼局部缺血综合征、眼动脉或视网膜动脉闭塞、镰状红细胞视网膜病、其它局部缺血或闭塞性新生血管视网膜病、早产儿视网膜病或伊尔斯病；以及遗传疾病，例如VonHippel-Lindau综合征。

在一些实施方式中，新生血管性年龄相关的黄斑变性为湿性年龄相关的黄斑变性。在其他实施方式中，所述新生血管性年龄相关的黄斑变性为干性年龄相关的黄斑变性，且所述患者的特征在于发生湿性年龄相关的黄斑变性的风险增加。

本发明的治疗方法包括给药有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐至需要治疗的患者。

本发明还提供式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其用于医学治疗，特别是用于治疗在器官移植和运输用于移植的器官中的下列疾病：癌症、癌变前综合征、阿尔茨海默病、神经性疼痛、脊髓损伤、外伤性脑损伤、缺血性中风、中风、糖尿病、帕金森病、代谢综合征、代谢失调、亨廷顿病、克雅氏病、家族致命性失眠症、格-施-沙综合征和相关的朊病毒病、肌萎缩侧索硬化、进行性核上麻痹、心肌梗死、心血管病、炎症、器官纤维化、慢性和急性肝脏疾病、脂肪肝病、肝脂肪变性、肝纤维化、慢性和急性肺部疾病、肺纤维化、慢性和急性肾脏疾病、肾脏纤维化、慢性损伤性脑病(CTE)、神经退行性疾病、痴呆、额颞叶痴呆、tau病变、皮克病、尼曼-皮克病、淀粉样变性、认知缺损、动脉粥样硬化、眼部疾病、心律失常。因此，在另一方面，本发明涉及式(I)化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗特征在于UPR活化的病症(例如癌症)的药物中的用途。

合适地，本发明涉及治疗在哺乳动物(包括人)中癌前期综合征或减轻所述综合征的严重性的方法，其中所述癌前期综合征选自：宫颈上皮内瘤样病变、意义不明的单克隆丙种球蛋白病(MGUS)、骨髓增生异常综合征、再生障碍性贫血、宫颈病变、皮肤痣(前黑素瘤)、前列腺上皮内(导管内)瘤形成(PIN)、原位导管癌(DCIS)、结肠息肉和严重的肝炎或肝硬化。

合适地，本发明涉及治疗神经变性疾病/损伤或减轻神经变性疾病/损伤的严重程度的方法，所述神经变性疾病/损伤例如：阿尔茨海默病、脊髓损伤、外伤性脑损伤、缺血性中风、中风、帕金森病、代谢综合征、代谢失调、亨廷顿病、克雅氏病、家族致命性失眠症、格-施-沙综合征和相关的朊病毒病、进行性核上麻痹、肌萎缩侧索硬化和其他与UPR激活有关的疾病，包括：神经性疼痛、糖尿病、心肌梗死、心血管病、炎症、纤维化、慢性和急性肝脏疾病、脂肪肝病、肝脂肪变性、肝纤维化、慢性和急性肺部疾病、肺纤维化、慢性和急性肾脏疾病、肾脏纤维化、慢性损伤性脑病(CTE)、神经退行性疾病、痴呆、额颞叶痴呆、tau病变、皮克病、尼曼-皮克病、淀粉样变性、认知缺损、动脉粥样硬化、眼部疾病和心律失常。

合适地，本发明涉及在器官移植过程中和器官移植后以及运输用于移植的器官过程中防止器官损伤的方法。器官移植过程中和器官移植后防止器官损伤的方法将包括式(I)化合物的体内给药。运输用于移植的器官过程中防止器官损伤的方法将包括在运输过程中向贮存器官的溶液中加入式(I)化合物。

本发明化合物抑制血管生成，其涉及治疗眼部疾病。Nature Reviews DrugDiscovery 4,711-712(2005年9月)。合适地，本发明涉及治疗眼部疾病/血管生成或减轻眼部疾病/血管生成的严重性的方法。在本发明方法的实施方式中，所述眼部疾病，包括血管渗漏，可为：闭塞性或炎性视网膜血管疾病的水肿或新生血管形成，例如虹膜发红、新生血管性青光眼、翼状胬肉、血管性青光眼滤过泡、结膜乳头状瘤；脉络膜新血管生成，例如新生血管性年龄相关的黄斑变性(AMD)、近视、前葡萄膜炎、外伤或特发性损伤；黄斑水肿，例如术后黄斑水肿、继发于葡萄膜炎的黄斑水肿，包括视网膜和/或脉络膜炎症、继发于糖尿病的黄斑水肿，以及继发于视网膜血管闭塞疾病(即视网膜分支静脉闭塞和视网膜中央静脉阻塞)的黄斑水肿；由于糖尿病引起的视网膜新血管形成，例如视网膜静脉闭塞、葡萄膜炎、来自颈动脉疾病的眼局部缺血综合征、眼动脉或视网膜动脉闭塞、镰状红细胞视网膜病、其它局部缺血或闭塞性新生血管视网膜病、早产儿视网膜病或伊尔斯病；以及遗传疾病，例如VonHippel-Lindau综合征。

在一些实施方式中，新生血管性年龄相关的黄斑变性为湿性年龄相关的黄斑变性。在其他实施方式中，所述新生血管性年龄相关的黄斑变性为干性年龄相关的黄斑变性，且所述患者的特征在于发生湿性年龄相关的黄斑变性的风险增加。

本发明的治疗方法包括给药有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐至需要治疗的患者。

本发明还提供式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其用于医学治疗，特别是用于治疗在器官移植和运输用于移植的器官中的下列疾病：癌症、癌变前综合征、阿尔茨海默病、神经性疼痛、脊髓损伤、外伤性脑损伤、缺血性中风、中风、糖尿病、帕金森病、代谢综合征、代谢失调、亨廷顿病、克雅氏病、家族致命性失眠症、格-施-沙综合征和相关的朊病毒病、肌萎缩侧索硬化、进行性核上麻痹、心肌梗死、心血管病、炎症、器官纤维化、慢性和急性肝脏疾病、脂肪肝病、肝脂肪变性、肝纤维化、慢性和急性肺部疾病、肺纤维化、慢性和急性肾脏疾病、肾脏纤维化、慢性损伤性脑病(CTE)、神经退行性疾病、痴呆、额颞叶痴呆、tau病变、皮克病、尼曼-皮克病、淀粉样变性、认知缺损、动脉粥样硬化、眼部疾病、心律失常。因此，在另一方面，本发明涉及式(I)化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗特征在于UPR活化的病症(例如癌症)的药物中的用途。

本文所用的术语"治疗"及其衍生词是指预防和治疗性治疗。例如，当受试者具有强大的癌症家族史或被认为具有发生癌症的高风险时，或当受试者已暴露于致癌物时，预防性疗法是适当的。

本文所用的术语“有效量”及其衍生词是指药物或药剂的量将会引起例如由研究者或临床医生正在寻求的组织、系统、动物或人的生物学或医学响应。另外，术语“治疗有效量”及其衍生词是指与没有接受该量的相应受试者相比，任何可导致改进的治疗、治愈、预防或改善疾病、病症或副作用，或降低疾病或病症发展的速度的量。该术语还在其范围内包括有效增强正常生理功能的量。

本文所用的“患者”或“受试者”是指人或其它动物。合适地，所述患者或受试者为人。

式(I)化合物或其药学上可接受的盐可以通过任何合适的给药途径给药，包括全身给药。全身给药包括口服给药和肠胃外给药。肠胃外给药是指除了肠内、经皮或吸入以外的其它给药途径，并且通常为注射或输注。肠胃外给药包括静脉内、肌内和皮下注射或输注。

式(I)化合物或其药学上可接受的盐可以一次给药，或根据给药方案，其中在给定的时间内以不同时间间隔给药多个剂量。例如，剂量可以每天给药1、2、3或4次。可以给药剂量直至达到所需治疗效果或不确定地维持所需治疗效果。本发明化合物的合适的给药方案取决于化合物的药代动力学性质，例如吸收、分布和半衰期，其可由本领域技术人员确定。另外，本发明化合物的合适的给药方案(包括给予该给药方案的持续时间)取决于待治疗的病症、待治疗病症的严重性、待治疗患者的年龄和身体状况、待治疗患者的医疗史、同时治疗的性质、所需治疗效果、以及本领域技术人员的知识或经验内的类似因素。本领域技术人员还理解，合适的给药方案可能需要根据个体患者对所述给药方案的响应或随着个体患者需要改变随时间进行调整。

此外，式(I)化合物或其药学上可接受的盐可以以前药给药。本文所用的本发明化合物的“前药”是所述化合物的功能性衍生物，其一旦给药于患者，最终在体内释放本发明化合物。本发明化合物以前药给药可能促使本领域技术人员进行以下一项或多项：(a)改变所述化合物在体内的开始；(b)改变所述化合物在体内作用的持续时间；(c)改变所述化合物在体内的运输或分布；(d)改变所述化合物在体内的溶解度；以及(e)克服化合物的副作用或化合物遇到的其它困难。当存在-COOH或-OH基团时，可以应用药学上可接受的酯，例如-COOH的甲酯、乙酯等，以及-OH的乙酸酯、马来酸酯等，并且那些酯在本领域中已知用于改变溶解度或水解特征。

所述式(I)化合物及其药学上可接受的盐可以与至少一种其它已知用于治疗癌症或癌变前综合征的活性剂共同给药。

本文所用的术语“共同给药”是指同时给药或以任何方式的分开连续给药本文所述的PERK抑制化合物，以及已知可用于治疗癌症(包括化疗和放射治疗)的其它活性成分或药剂。本文所用的术语“其它活性成分或药剂”包括任何化合物或治疗剂，当给药于需要癌症治疗的患者时，其具有已知的或证明有利的性质。优选地，如果给药不是同时进行，则所述化合物以相互接近的时间给药。另外，所述化合物是否以相同剂型给药是不重要的，例如一个化合物可以注射给药且另一个化合物可以口服给药。

典型地，在治疗本发明中的癌症时，可以共同给药对待治疗的敏感的肿瘤具有活性的任何抗肿瘤药物。该药物的实例可参考V.T.Devita和S.Hellman(主编)的CancerPrinciples and Practice of Oncology，第6版(2001年2月15日)，Lippincott Williams&Wilkins Publishers。本领域一般技术人员将能够根据药物的具体特征和所涉及癌症辨别药物的何种组合将是有用的。可用于本发明的典型抗肿瘤药物包括，但不限于，抗微管剂例如二萜类化合物和长春花生物碱；铂配位络合物；烷基化剂例如氮芥、氧氮磷杂环己二烯(oxazaphosphorine)、烷基磺酸盐、亚硝基脲和三氮烯；抗生素例如蒽环类(anthracyclin)、放线菌素和博莱霉素；拓扑异构酶II抑制剂例如表鬼臼毒素；抗代谢剂例如嘌呤和嘧啶类似物和抗叶酸化合物；拓扑异构酶I抑制剂例如喜树碱；激素和激素类似物；信号转导途径抑制剂；非-受体酪氨酸激酶血管生成抑制剂；免疫治疗剂；促细胞凋亡剂；细胞周期信号抑制剂；蛋白酶体抑制剂；以及癌症代谢的抑制剂。

用于与本发明的PERK抑制性化合物组合或共同给药的一种或多种其它活性成分(抗肿瘤药物)的实例为化疗剂。

合适地，本发明的药物活性化合物与VEGFR抑制剂组合使用，该VEGFR抑制剂合适地为5-[[4-[(2,3-二甲基-2H-吲唑-6-基)甲基氨基]-2-嘧啶基]氨基]-2-甲基苯磺酰胺或其药学上可接受的盐(合适地为其单盐酸盐)，其在国际申请号PCT/US01/49367(国际申请日期为2001年12月19日)、国际公开号WO02/059110(国际公布日为2002年8月1日)中公开并要求保护，其全部公开内容通过引用并入本文，并且其为实施例69的化合物。5-[[4-[(2,3-二甲基-2H-吲唑-6-基)甲基氨基]-2-嘧啶基]氨基]-2-甲基苯磺酰胺可以如国际申请号PCT/US01/49367中所述制备。

合适地，5-[[4-[(2,3-二甲基-2H-吲唑-6-基)甲基氨基]-2-嘧啶基]氨基]-2-甲基苯磺酰胺为单盐酸盐形式。该盐形式可以由本领域技术人员根据国际申请号PCT/US01/49367(国际申请日为2001年12月19日)中的说明书制备。

5-[[4-[(2,3-二甲基-2H-吲唑-6-基)甲基氨基]-2-嘧啶基]氨基]-2-甲基苯磺酰胺以单盐酸盐的形式在市场上出售，并且已知其通用名为帕唑帕尼且商品名为

帕唑帕尼涉及癌症和眼部疾病/血管生成的治疗。合适地，本发明涉及治疗癌症和眼部疾病/血管生成，合适地为年龄相关性黄斑变性，该方法包括单独给药式(I)化合物或与帕唑帕尼组合给药。

在一个实施方案中，本发明化合物可以与癌症治疗的其他治疗方法一起使用。特别地，在抗肿瘤治疗中，设想了与除上述那些之外的其他化学治疗、激素、抗体试剂以及手术和/或放射治疗的组合治疗。

在一个实施方案中，所述其它抗癌治疗为手术和/或放射治疗。

在一个实施方案中，所述其它抗癌治疗为至少一种其它抗肿瘤剂。

在另一方面，提供了包含式(I)的化合物或其药学上可接受的盐和至少一种抗肿瘤剂的组合。

在另一方面，提供了包含式(I)的化合物或其药学上可接受的盐和至少一种抗肿瘤剂的组合，其用于治疗。

在另一方面，提供了包含式(I)的化合物或其药学上可接受的盐和至少一种抗肿瘤剂的组合，其用于治疗癌症和/或癌前期综合征。

在另一方面，提供了包含式(I)的化合物或其药学上可接受的盐和至少一种抗肿瘤剂的组合在制备用于治疗癌症和/或癌前期综合征的药物的用途。

在另一方面，提供了治疗癌症的方法，包括向需要的人给予治疗有效量的包含式(I)的化合物或其药学上可接受的盐和至少一种抗肿瘤剂的组合。

在另一方面，提供了药物组合物，其包含含有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐和至少一种其它治疗剂，特别是至少一种抗肿瘤剂和一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂和赋形剂的组合。

可以在组合中使用任何具有对被治疗的易感肿瘤具有活性的抗肿瘤剂。典型的可用抗肿瘤剂包括，但不限于，抗微管剂如二萜类化合物和长春花生物碱；铂配位络合物；烷基化剂例如氮芥、氧氮磷杂环己二烯(oxazaphosphorine)、烷基磺酸盐、亚硝基脲和三氮烯；抗生素例如蒽环类(anthracyclin)、放线菌素和博莱霉素；拓扑异构酶II抑制剂例如表鬼臼毒素；抗代谢剂例如嘌呤和嘧啶类似物和抗叶酸化合物；拓扑异构酶I抑制剂例如喜树碱；激素和激素类似物；信号转导途径抑制剂；非-受体酪氨酸激酶血管生成抑制剂；免疫治疗剂；促细胞凋亡剂；细胞周期信号抑制剂；蛋白酶体抑制剂；以及癌症代谢的抑制剂。

抗微管或抗有丝分裂剂：

抗微管或抗有丝分裂剂是在细胞周期的M期或有丝分裂期对肿瘤细胞的微管具有活性的时相特异性药物。抗微管剂的实例包括，但不限于，二萜类化合物和长春花生物碱。

源自天然来源的二萜类化合物是在细胞周期的G2/M期起作用的时相特异性抗癌剂。据信二萜类化合物通过与该蛋白质结合来稳定微管的β-微管蛋白亚单位。然后蛋白质的分解似乎受到抑制，同时阻止有丝分裂，随后细胞死亡。二萜类化合物的实例包括，但不限于，紫杉醇及其类似物多西他赛。

紫杉醇，5β,20-环氧-1,2α,4,7β,10β,13α-六羟基紫杉烷-11-烯-9-酮4,10-二乙酸酯2-苯甲酸酯13-[(2R,3S)-N-苯甲酰基-3-苯基异丝氨酸酯]，是从太平洋紫衫树短叶红豆杉(Taxus brevifolia)中分离的天然二萜产物，并且可作为注射液商购得到。它是萜烯的紫杉烷家族的成员。紫杉醇已被批准临床用于治疗难治性卵巢癌(在美国)(Markman et al.,Yale Journal of Biology and Medicine,64:583,1991；McGuireetal.,Ann.lntem,Med.,111:273,1989)和用于治疗乳腺癌(Holmes et al.,J.Nat.CancerInst.,83:1797,1991)。其是治疗皮肤肿瘤(Einzig et.al.,Proc.Am.Soc.Clin.Oncol.,20:46)和头颈癌(Forastire et.al.,Sem.Oncol.,20:56,1990)的潜在候选物。该化合物还显示了治疗多囊性肾病(Woo et.al.,Nature,368:750.1994)、肺癌和疟疾的潜力。用紫杉醇治疗患者导致骨髓抑制(multiple celllineages,Ignoff,R.J.et.al,CancerChemotherapy Pocket Guide,1998)，涉及高于阈浓度(50nM)的药量持续时间(Kearns,C.M.et.al.,Seminars in Oncology,3(6)p.16-23,1995)。

多西他赛，(2R,3S)-N-羧基-3-苯基异丝氨酸，N-叔丁基酯，13-[5β-20-环氧-1,2α,4,7β,10β,13α-六羟基紫杉烷-11-烯-9-酮4-乙酸酯2-苯甲酸酯]，三水合物；可作为注射液以商购得到。多西他赛被指示用于治疗乳腺癌。多西他赛是使用从欧洲紫杉树的针叶提取的天然前体10-去乙酰基-浆果赤霉素III制备的紫杉醇q.v.的半合成衍生物。

长春花生物碱是源自长春花植物的时相特异性抗肿瘤剂。长春花生物碱通过与微管蛋白特异性结合而作用于细胞周期的M期(有丝分裂)。因此，结合的微管蛋白分子不能聚合成微管。有丝分裂被认为在中期停止，随后细胞死亡。长春花生物碱的实例包括但不限于长春碱、长春新碱和长春瑞滨。

长春碱，长春花碱硫酸盐，可作为注射液以商购得到。尽管其可能指示作为各种实体瘤的二线治疗，但其主要指示用于治疗睾丸癌和各种淋巴瘤，包括霍奇金病；以及淋巴细胞性和组织细胞性淋巴瘤。骨髓抑制是长春碱的剂量限制性副作用。

长春新碱，22-氧代-长春花碱硫酸盐，可以作为注射液以商购得到。长春新碱被指示用于治疗急性白血病，并且还发现可用于霍奇金和非霍奇金恶性淋巴瘤的治疗方案。脱发和神经系统的影响是长春新碱的最常见的副作用，并且在较小程度上发生骨髓抑制和胃肠道粘膜炎效应。

长春瑞滨，3’,4’-二去氢-4’-去氧-C’-去甲长春碱[R-(R*,R*)-2,3-二羟基丁二酸(1:2)(盐)]，可作为酒石酸长春瑞滨注射液商购得到，其是一种半合成长春花生物碱。长春瑞滨被指示作为单一药剂或与其它化疗剂如顺铂组合用于治疗各种实体瘤，特别是非小细胞肺癌、晚期乳腺癌和激素难治性前列腺癌。骨髓抑制是长春瑞滨的最常见的剂量限制性副作用。

铂配位络合物：

铂配位络合物是非时相特异性抗癌剂，其与DNA相互作用。铂络合物进入肿瘤细胞，经历水合作用并与DNA形成链内和链间交联，导致对肿瘤不利的生物效应。铂配位络合物的实例包括但不限于奥沙利铂、顺铂和卡铂。

顺铂，顺式-二氨二氯铂，可作为注射液以商购得到。顺铂被主要指示用于治疗转移性睾丸癌和卵巢癌以及晚期膀胱癌。

卡铂，二氨[1,1-环丁烷-二羧酸根(2-)-O,O’]合铂，可以作为注射液以商购得到。卡铂被主要指示用于晚期卵巢癌的一线和二线治疗。

烷化剂：

烷化剂是非时相特异性抗癌剂和强亲电子药剂。通常，烷化剂通过烷基化经DNA分子的亲核部分如磷酸基(phosphate)、氨基、巯基、羟基、羧基和咪唑基与DNA形成共价键。这种烷基化破坏了核酸功能，导致细胞死亡。烷化剂的实例包括但不限于氮芥，例如环磷酰胺，美法仑和苯丁酸氮芥；烷基磺酸酯，例如白消安；亚硝基脲，例如卡莫司汀；和三氮烯类，例如达卡巴嗪。

环磷酰胺，2-[双(2-氯乙基)氨基]四氢-2H-1,3,2-氧氮磷杂环己烷2-氧化物一水合物，可作为注射液或片剂以商购得到。环磷酰胺被指示为单一药剂或与其它化疗剂组合用于治疗恶性淋巴瘤、多发性骨髓瘤和白血病。

美法仑，4-[双(2-氯乙基)氨基]-L-苯丙氨酸，可作为注射液或片剂以商购得到。美法仑被指示用于姑息性治疗多发性骨髓瘤和不可切除的卵巢上皮癌。骨髓抑制是美法仑的最常见的剂量限制性副作用。

苯丁酸氮芥，4-[双(2-氯乙基)氨基]苯丁酸，可作为片剂商购得到。苯丁酸氮芥被指示用于姑息性治疗慢性淋巴性白血病和恶性淋巴瘤如淋巴肉瘤、巨滤泡型淋巴瘤和霍奇金病。

白消安，二甲磺酸-1,4-丁二醇酯，可作为片剂商购得到。白消安被指示用于姑息性治疗慢性骨髓性白血病。

卡莫司汀，1,3-[双(2-氯乙基)-1-亚硝基脲，可作为单瓶的冻干材料以商购获得。卡莫司汀被指示作为单一药剂或与其它药剂组合用于姑息性治疗脑肿瘤、多发性骨髓瘤、霍奇金病和非霍奇金淋巴瘤。

达卡巴嗪，5-(3,3-二甲基-1-三氮烯基)-咪唑-4-甲酰胺，可作为单瓶的物质以商购获得。达卡巴嗪被指示用于治疗转移性恶性黑素瘤并且与其它药剂组合用于霍奇金病的二线治疗。

抗生素抗肿瘤剂：

抗生素抗肿瘤剂是非时相特异性药剂，其结合或插入DNA。通常，这种作用导致稳定的DNA络合物或链断裂，这破坏核酸的正常功能，导致细胞死亡。抗生素抗肿瘤剂的实例包括但不限于放线菌素如更生霉素、蒽环类如柔红霉素和多柔比星；和博来霉素。

更生霉素，也称为放线菌素D，可以注射形式以商购得到。更生霉素被指示用于治疗Wilm肿瘤和横纹肌肉瘤。

柔红霉素，(8S-顺式)-8-乙酰基-10-[(3-氨基-2,3,6-三去氧-α-L-来苏-己吡喃糖基)氧基]-7,8,9,10-四氢-6,8,11-三羟基-1-甲氧基-5,12萘并萘二酮盐酸盐，可以脂质体注射形式以或作为注射剂以商购得到。柔红霉素被指示用于在急性非淋巴细胞性白血病和晚期HIV相关的卡波西肉瘤的治疗中诱导缓解。

多柔比星，(8S,10S)-10-[(3-氨基-2,3,6-三去氧-α-L-来苏-己吡喃糖基)氧基]-8-乙醇酰基，7,8,9,10-四氢-6,8,11-三羟基-1-甲氧基-5,12并四苯二酮盐酸盐，可作为注射形式以或商购得到。多柔比星被主要指示用于治疗急性成淋巴细胞性白血病和急性髓系白血病，但也是治疗一些实体瘤和淋巴瘤的有用成分。

博来霉素是从轮丝链霉菌(Streptomyces verticillus)菌株中分离的细胞毒性糖肽类抗生素的混合物，可以商购得到。博来霉素被指示作为单一药剂或与其它药剂组合用于姑息性治疗鳞状细胞癌、淋巴瘤和睾丸癌。

拓扑异构酶II抑制剂：

拓扑异构酶II抑制剂包括但不限于表鬼臼毒素。

表鬼臼毒素是源自曼陀罗花(mandrake)植物的时相特异性抗肿瘤剂。表鬼臼毒素通常通过与拓扑异构酶II和DNA形成三元复合物导致DNA链断裂而影响细胞周期的S和G2期中的细胞。链断裂积累，接着细胞死亡。表鬼臼毒素的实例包括但不限于依托泊苷和替尼泊苷。

依托泊苷，4’-去甲基-表鬼臼毒素9[4,6-0-(R)-亚乙基-β-D-吡喃葡萄糖苷]，可作为注射液或胶囊以商购获得，并且通常称为VP-16。依托泊苷被指示作为单一药剂或与其它化疗剂组合用于治疗睾丸癌和非小细胞肺癌。

替尼泊苷，4’-去甲基-表鬼臼毒素9[4,6-0-(R)-噻吩亚甲基-β-D-吡喃葡萄糖苷]，可作为注射液以商购获得，并且通常称为VM-26。替尼泊苷被指示作为单一药剂或与其它化疗剂组合用于治疗儿童的急性白血病。

抗代谢物肿瘤剂：

抗代谢物肿瘤剂是时相特异性抗肿瘤剂，其作用于细胞周期的S期(DNA合成)，通过抑制DNA合成或通过抑制嘌呤或嘧啶碱基合成从而限制DNA合成。因此，S期不继续进行，接着细胞死亡。抗代谢物抗肿瘤剂的实例包括但不限于氟尿嘧啶、甲氨蝶呤、阿糖胞苷、巯基嘌呤、硫鸟嘌呤和吉西他滨。

5-氟尿嘧啶，5-氟-2,4-(1H,3H)嘧啶二酮，可作为氟尿嘧啶商购获得。施用5-氟尿嘧啶导致抑制胸苷酸合成，并且也掺入到RNA和DNA二者中。结果通常是细胞死亡。5-氟尿嘧啶被指示作为单一药剂或与其它化疗剂组合用于治疗乳腺癌、结肠癌、直肠癌、胃癌和胰腺癌。其它氟嘧啶类似物包括5-氟脱氧尿苷(氟尿苷)和5-氟脱氧尿苷一磷酸。

阿糖胞苷，4-氨基-1-β-D-阿拉伯呋喃糖基-2(1H)-嘧啶酮，可作为CYTOSAR-商购获得，并且通常称为Ara-C。据信阿糖胞苷通过将阿糖胞苷末端掺入到生长的DNA链中来抑制DNA链延长，而在S期显示细胞时相特异性。阿糖胞苷被指示作为单一药剂或与其它化疗剂组合用于治疗急性白血病。其它胞苷类似物包括5-氮杂胞苷和2’,2’-二氟脱氧胞苷(吉西他滨)。

巯基嘌呤，1,7-二氢-6H-嘌呤-6-硫酮一水合物，可作为商购得到。巯基嘌呤通过至今尚未确定的机制抑制DNA合成，而在S期显示细胞时相特异性。巯基嘌呤被指示作为单一药剂或与其它化疗剂组合用于治疗急性白血病。有用的巯基嘌呤类似物是硫唑嘌呤。

硫鸟嘌呤，2-氨基-1,7-二氢-6H-嘌呤-6-硫酮，可作为商购得到。硫鸟嘌呤通过至今尚未确定的机制抑制DNA合成，而在S期显示细胞时相特异性。硫鸟嘌呤被指示作为单一药剂或与其它化疗剂组合指示用于治疗急性白血病。其它嘌呤类似物包括喷司他丁、赤羟基壬基腺嘌呤、磷酸氟达拉滨和克拉屈滨。

吉西他滨，2’-脱氧-2’,2’-二氟胞苷一盐酸盐(β-异构体)，可作为商购得到。吉西他滨通过阻断细胞通过G1/S边界的进展而在S期显示细胞时相特异性。吉西他滨被指示与顺铂组合用于治疗局部晚期非小细胞肺癌和单独用于治疗局部晚期胰腺癌。

甲氨蝶呤，N-[4[[(2,4-二氨基-6-蝶啶基)甲基]甲基氨基]苯甲酰基]-L-谷氨酸，可作为甲氨蝶呤钠商购得到。甲氨蝶呤通过抑制合成嘌呤核苷酸和胸苷酸所需的二氢叶酸还原酶抑制DNA合成、修复和/或复制，而在S期显示细胞时相特异性效应。甲氨蝶呤被指示作为单一药剂或与其它化疗剂组合用于治疗绒毛膜癌、脑膜白血病、非霍奇金淋巴瘤，以及乳腺癌、头癌、颈癌、卵巢癌和膀胱癌。

拓扑异构酶I抑制剂:

喜树碱，包括喜树碱和喜树碱衍生物，可作为拓扑异构酶I抑制剂得到或在开发中。喜树碱的细胞毒活性被认为与其拓扑异构酶I抑制活性有关。喜树碱的实例包括但不限于伊立替康、托泊替康和下文所述的7-(4-甲基哌嗪基-亚甲基)-10,11-亚乙基二氧基-20-喜树碱的各种光学形式。

盐酸伊立替康，(4S)-4,11-二乙基-4-羟基-9-[(4-哌啶基哌啶基)羰基氧基]-1H-吡喃并[3’,4’,6,7]氮茚并[1,2-b]喹啉-3,14(4H,12H)-二酮盐酸盐，可作为注射液商购得到。伊立替康是喜树碱的衍生物，其与其活性代谢物SN-38一起结合到拓扑异构酶I-DNA复合物。据信，细胞毒性是由于通过拓扑异构酶I:DNA:伊立替康或SN-38三元复合物与复制酶的相互作用导致了不可修复的双链断裂导致的结果。伊立替康被指示用于治疗结肠或直肠的转移性癌症。

盐酸托泊替康，(S)-10-[(二甲基氨基)甲基]-4-乙基-4,9-二羟基-1H-吡喃并[3’,4’,6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-3,14-(4H,12H)-二酮单盐酸盐，可作为注射液商购获得。托泊替康是喜树碱的衍生物，其结合拓扑异构酶I-DNA复合物并防止由拓扑异构酶I响应于DNA分子的扭转张力而引起的单链断裂的再连接。托泊替康被指示用于转移性卵巢癌和小细胞肺癌的二线治疗。

激素和激素类似物：

激素和激素类似物是用于治疗癌症的有用化合物，其中在激素和癌症的生长和/或生长缺乏之间存在关系。可用于癌症治疗的激素和激素类似物的实例包括但不限于肾上腺皮质类固醇，例如泼尼松和泼尼松龙，其可用于治疗儿童的恶性淋巴瘤和急性白血病；氨鲁米特和其它芳香酶抑制剂，例如阿那曲唑、来曲唑、伏氯唑和依西美坦，其可用于治疗肾上腺皮质癌和激素依赖性乳腺癌，其含有雌激素受体；孕激素，例如醋酸甲地孕酮，其可用于治疗激素依赖性乳腺癌和子宫内膜癌；雌激素、雌激素和抗雌激素，例如氟维司群、氟他胺、尼鲁米特、比卡鲁胺、乙酸环丙孕酮和5α-还原酶例如非那雄胺和度他雄胺，其用于治疗前列腺癌和良性前列腺增生；抗雌激素，例如他莫昔芬、托瑞米芬、雷洛昔芬、屈洛昔芬、吲哚昔芬(iodoxyfene)，以及选择性雌激素受体调节剂(SERMS)，如美国专利号5,681,835、5,877,219和6,207,716中描述的那些，其可用于治疗激素依赖性乳腺癌和其它易受影响的癌症；和促性腺激素释放激素(GnRH)及其类似物，其刺激促黄体生成素(LH)和/或促卵泡激素(FSH)的释放，可用于治疗前列腺癌，例如LHRH激动剂和拮抗剂如醋酸戈舍瑞林和亮丙瑞林。

信号转导通路抑制剂：

信号转导通路抑制剂是阻断或抑制引起细胞内变化的化学过程的那些抑制剂。如本文所用，这种变化是细胞增殖或分化。可用于本发明的信号转导抑制剂包括下列的抑制剂：受体酪氨酸激酶、非受体酪氨酸激酶、SH2/SH3结构域阻断剂、丝氨酸/苏氨酸激酶、磷脂酰肌醇-3激酶、肌醇信号转导和Ras致癌基因。

几种蛋白酪氨酸激酶催化参与调节细胞生长的各种蛋白质中特定酪氨酰残基的磷酸化。这种蛋白酪氨酸激酶可以广义地分类为受体或非受体激酶。

受体酪氨酸激酶是具有胞外配体结合结构域、跨膜结构域和酪氨酸激酶结构域的跨膜蛋白。受体酪氨酸激酶参与细胞生长的调节，并通常称为生长因子受体。许多这些激酶的不适当或不受控制的活化，即异常激酶生长因子受体活性，例如通过过表达或突变导致，已显示导致不受控制的细胞生长。因此，这种激酶的异常活性已经与恶性组织生长相联系。因此，这种激酶的抑制剂可以提供癌症治疗方法。生长因子受体包括例如表皮生长因子受体(EGFr)、血小板衍生生长因子受体(PDGFr)、erbB2、erbB4、ret、血管内皮生长因子受体(VEGFr)、具有免疫球蛋白样和表皮生长因子同源结构域的酪氨酸激酶(TIE-2)、胰岛素样生长因子-I(IGFI)受体、巨噬细胞集落刺激因子(cfms)、BTK、ckit、cmet、成纤维细胞生长因子(FGF)受体、Trk受体(TrkA、TrkB和TrkC)、肝配蛋白(eph)受体和RET原癌基因。几种生长受体抑制剂正在开发中，包括配体拮抗剂、抗体、酪氨酸激酶抑制剂和反义寡核苷酸。生长因子受体和抑制生长因子受体功能的药剂描述于例如Kath,John C.,Exp.Opin.Ther.Patents(2000)10(6):803-818；Shawver et al DDT Vol 2,No.2February1997；和Lofts,F.J.et al,“Growth factor receptors as targets”,NewMolecular Targets for Cancer Chemotherapy,ed.Workman,Paul and Kerr,David,CRC press 1994,London中。

酪氨酸激酶，其不是生长因子受体激酶，被称为非受体酪氨酸激酶。可用于本发明的作为抗癌药物靶标或潜在靶标的非受体酪氨酸激酶包括cSrc、Lck、Fyn、Yes、Jak、cAb1、FAK(粘着斑激酶)、Brutons酪氨酸激酶和Bcr-Abl。这种非受体激酶和抑制非受体酪氨酸激酶功能的药剂描述于Sinh,S.and Corey,S.J.,(1999)Journal of HematotherapyandStem Cell Research 8(5):465-80；和Bolen,J.B.,Brugge,J.S.,(1997)Annual reviewof Immunology.15:371-404中。

SH2/SH3结构域阻断剂是破坏各种酶或衔接蛋白中的SH2或SH3结构域结合的药剂，所述酶或衔接蛋白包括PI3-K p85亚单元、Src家族激酶、衔接分子(Shc、Crk、Nck、Grb2)和Ras-GAP。作为抗癌药物靶标的SH2/SH3结构域论述于Smithgall,T.E.(1995),Journalof Pharmacological and Toxicological Methods.34(3)125-32中。

丝氨酸/苏氨酸激酶抑制剂，包括MAP激酶级联阻断剂，其包括Raf激酶(rafk)、丝裂原或细胞外调节激酶(MEK)和细胞外调节激酶(ERK)的阻断剂；和蛋白激酶C家族成员阻断剂，包括PKC(α、β、γ、ε、μ、λ、ι、ζ)、IkB激酶家族(IKKa、IKKb)、PKB家族激酶、akt激酶家族成员和TGFβ受体激酶的阻断剂。这种丝氨酸/苏氨酸激酶及其抑制剂描述于Yamamoto,T.,Taya,S.,Kaibuchi,K.,(1999),Journal of Biochemistry.126(5)799-803；Brodt,P,Samani,A.,and Navab,R.(2000),Biochemical Pharmacology,60.1101-1107；Massague,J.,Weis-Garcia,F.(1996)Cancer Surveys.27:41-64；Philip,P.A.,and Harris,A.L.(1995),Cancer Treatment and Research.78:3-27；Lackey,K.et al Bioorganic andMedicinal Chemistry Letters,(10),2000,223-226；美国专利No.6,268,391；和Martinez-Iacaci,L.,et al,Int.J.Cancer(2000),88(1),44-52中。

磷脂酰肌醇-3激酶家族成员的抑制剂，包括PI3激酶、ATM、DNA-PK和Ku的阻断剂也可用于本发明。这种激酶论述于Abraham,R.T.(1996),Current Opinion inImmunology.8(3)412-8；Canman,C.E.,Lim,D.S.(1998),Oncogene 17(25)3301-3308；Jackson,S.P.(1997),International Journal of Biochemistry andCell Biology.29(7):935-8；和Zhong,H.et al,Cancer res,(2000)60(6),1541-1545中。

还可用于本发明的是肌醇信号转导抑制剂，例如磷脂酶C阻断剂和肌醇类似物。这种信号抑制剂描述于Powis,G.,and Kozikowski A.,(1994)New Molecular TargetsforCancer Chemotherapy ed.,Paul Workman and David Kerr,CRC press 1994,London中。

另一组信号转导通路抑制剂是Ras致癌基因的抑制剂。这种抑制剂包括法尼基转移酶、香叶基香叶基转移酶和CAAX蛋白酶的抑制剂以及反义寡核苷酸、核酶和免疫疗法。这种抑制剂已经显示阻断含有野生型突变ras的细胞中的ras活化，从而起到抗增殖剂的作用。Ras致癌基因抑制论述于Scharovsky,O.G.,Rozados,V.R.,Gervasoni,S.I.Matar,P.(2000),Journal of Biomedical Science.7(4)292-8；Ashby,M.N.(1998),CurrentOpinion in Lipidology.9(2)99–102；和BioChim.Biophys.Acta,(19899)1423(3):19-30中。

如上所述，受体激酶配体结合的抗体拮抗剂也可以用作信号转导抑制剂。这组信号转导通路抑制剂包括将人源化抗体用于受体酪氨酸激酶的细胞外配体结合结构域。例如Imclone C225EGFR特异性抗体(参见Green,M.C.et al,Monoclonal AntibodyTherapy forSolid Tumors,Cancer Treat.Rev.,(2000),26(4),269-286)；erbB2抗体(参见Tyrosine Kinase Signalling in Breast cancer:erbBFamily Receptor TyrosineKinases,Breast cancer Res.,2000,2(3),176-183)；和2CB VEGFR2特异性抗体(参见Brekken,R.A.et al,Selective Inhibition of VEGFR2Activity by a monoclonalAnti-VEGF antibody blocks tumor growth in mice,Cancer Res.(2000)60,5117-5124)。

抗血管生成剂:

(i)包括非受体MEK血管生成抑制剂的抗血管生成剂也可能是有用的。抗血管生成剂例如抑制血管内皮生长因子的作用的那些(例如抗血管内皮细胞生长因子抗体贝伐单抗[Avastin^TM]，以及通过其它机制起作用的化合物(例如利诺胺、整联蛋白αvβ3功能抑制剂、内皮他丁(endostatin)和血管他丁(angiostatin))。

免疫治疗剂：

用于免疫治疗方案的药剂也可以与式(I)化合物组合使用。免疫治疗方法，包括例如增加患者肿瘤细胞的免疫原性的离体和体内方法，例如用细胞因子如白细胞介素2、白细胞介素4或粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子转染，降低T细胞无能的方法，使用转染的免疫细胞例如细胞因子转染的树突细胞的方法，使用细胞因子转染的肿瘤细胞系的方法和使用抗独特型抗体的方法。

促凋亡剂：

用于促凋亡方案的药剂(例如，bcl-2反义寡核苷酸)也可用于本发明的组合中。

细胞周期信号传导抑制剂

细胞周期信号传导抑制剂抑制参与细胞周期控制的分子。称为细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)的蛋白激酶家族及其与称为细胞周期蛋白的蛋白质家族的相互作用控制通过真核细胞周期的进展。不同细胞周期蛋白/CDK复合物的配位活化和失活对于通过细胞周期的正常进展是必需的。几种细胞周期信号转导的抑制剂正在开发中。例如，细胞周期蛋白依赖性激酶(包括CDK2、CDK4和CDK6及其抑制剂)的实例描述于例如Rosania et al,Exp.Opin.Ther.Patents(2000)10(2):215-230中。

在一个实施方案中，本发明的组合包含式I的化合物或其盐或溶剂合物和至少一种抗肿瘤剂，所述抗肿瘤剂选自抗微管剂、铂配位络合物、烷化剂、抗生素、拓扑异构酶II抑制剂、抗代谢物、拓扑异构酶I抑制剂、激素和激素类似物、信号转导通路抑制剂、非受体酪氨酸MEK血管生成抑制剂、免疫治疗剂、促凋亡剂和细胞周期信号传导抑制剂。

在一个实施方案中，本发明的组合包含式I的化合物或其盐或溶剂合物和至少一种抗肿瘤剂，所述抗肿瘤剂是选自二萜类化合物和长春花生物碱的抗微管剂。

在另一实施方案中，至少一种抗肿瘤剂是二萜类化合物。

在另一实施方案中，至少一种抗肿瘤剂是长春花生物碱。

在一个实施方案中，本发明的组合包含式I的化合物或其盐或溶剂合物和至少一种抗肿瘤剂，所述抗肿瘤剂是铂配位络合物。

在另一实施方案中，至少一种抗肿瘤剂是紫杉醇、卡铂或长春瑞滨。

在另一实施方案中，至少一种抗肿瘤剂是卡铂。

在另一实施方案中，至少一种抗肿瘤剂是长春瑞滨。

在另一实施方案中，至少一种抗肿瘤剂是紫杉醇。

在一个实施方案中，本发明的组合包含式I的化合物及其盐或溶剂合物和至少一种抗肿瘤剂，所述抗肿瘤剂是信号转导通路抑制剂。

在另一实施方案中，信号转导通路抑制剂是生长因子受体激酶VEGFR2、TIE2、PDGFR、BTK、erbB2、EGFr、IGFR-1、TrkA、TrkB、TrkC或c-fms的抑制剂。

在另一实施方案中，所述信号转导通路抑制剂是丝氨酸/苏氨酸激酶rafk、akt或PKC-ζ的抑制剂。

在另一实施方案中，所述信号转导通路抑制剂是选自src家族激酶的非受体酪氨酸激酶的抑制剂。

在另一实施方案中，所述信号转导通路抑制剂是c-src的抑制剂。

在另一实施方案中，所述信号转导通路抑制剂是Ras致癌基因的抑制剂，其选自法尼基转移酶和香叶基香叶基转移酶的抑制剂。

在另一实施方案中，所述信号转导通路抑制剂是选自PI3K的丝氨酸/苏氨酸激酶的抑制剂。

在另一实施方案中所述信号转导通路抑制剂为双重EGFr/erbB2抑制剂，例如N-{3-氯-4-[(3-氟苄基)氧基]苯基}-6-[5-({[2-(甲烷磺酰基)乙基]氨基}甲基)-2-呋喃基]-4-喹唑啉胺(以下结构)：

在一个实施方案中，本发明的组合包含式I的化合物或其盐或溶剂合物和至少一种抗肿瘤剂，所述抗肿瘤剂是细胞周期信号传导抑制剂。

在其它实施方案中，细胞周期信号传导抑制剂是CDK2、CDK4或CDK6的抑制剂。

免疫刺激剂:

本文所用的“免疫刺激剂”是指可以刺激免疫系统的任何药剂。本文所用的免疫刺激剂包括，但不限于，疫苗佐剂，如Toll-样受体激动剂，T-细胞检查点阻断剂，如对PD-1和CTL4的mAbs，和T-细胞检查点激动剂，如对OX-40和ICOS的激动剂mAbs。

用于与本发明式(I)的化合物组合或共同给药的其它活性成分或成分(抗肿瘤剂)的其它实例为抗PD-L1试剂。

抗PD-L1抗体及其制备方法是本领域已知的。

一些PD-L1的这种抗体可为多克隆或单克隆的、和/或重组和/或人源化的。

示例性PD-L1抗体公开于：

美国专利号8,217,149；12/633,339；

美国专利号8,383,796；13/091,936；

美国专利No 8,552,154；13/120,406；

美国专利公开号20110280877；13/068337；

美国专利公开号20130309250；13/892671；

WO2013019906；

WO2013079174；

美国申请号13/511,538(2012年8月7日提交)，其为国际申请号PCT/US10/58007(2010年提交)的美国国家阶段；

和

美国申请号13/478,511(2012年5月23日提交)。

另外的示例性的针对PD-L1(也称为CD274或B7-H1)的抗体和使用方法公开于美国专利号7,943,743；US20130034559，WO2014055897，美国专利号8,168,179；和美国专利号7,595,048。正在开发PD-L1抗体作为治疗癌症的免疫调节剂。

在一个实施方案中，PD-L1抗体是美国专利No.8,217,149中公开的抗体。在另一个实施方案中，抗PD-L1抗体包含美国专利No.8,217,149中公开的抗体的CDR。

在另一个实施方案中，PD-L1抗体是美国申请No.13/511,538中公开的抗体。在另一个实施方案中，抗PD-L1抗体包含美国申请No.13/511,538中公开的抗体的CDR。

在另一个实施方案中，PD-L1抗体是美国申请No.13/478,511中公开的抗体。在另一个实施方案中，抗PD-L1抗体包含美国申请No.13/478,511中公开的抗体的CDR。

在一个实施方案中，抗PD-L1抗体为BMS-936559(MDX-1105)。在另一实施方案中，抗PD-L1抗体为MPDL3280A(RG7446)。在另一实施方案中，抗PD-L1抗体为MEDI4736。

用于与本发明的式(I)化合物组合或共同施用的另外的一种或多种活性成分(抗肿瘤剂)的另外的实例是PD-1拮抗剂。

“PD-1拮抗剂”是指阻断在癌细胞上表达的PD-L1与在免疫细胞(T细胞，B细胞或NKT细胞)上表达的PD-1结合，并且优选还阻断在癌细胞上表达的PD-L2与免疫细胞表达的PD-1结合的任何化学化合物或生物分子。PD-1及其配体的替代名称或同义词包括：用于PD-1的PDCD1、PD1、CD279和SLEB2；用于PD-L1的PDCD1L1、PDL1、B7H1、B7-4、CD274和B7-H；和用于PD-L2的PDCD1L2、PDL2、B7-DC、Btdc和CD273。在其中要治疗人类个体的本发明方面或实施方案的任何实施方案中，PD-1拮抗剂阻断人PD-L1与人PD-1的结合，并且优选同时阻断人PD-L1和PD-L2与人PD-1的结合。人PD-1氨基酸序列可以在NCBI Locus No.:NP_005009中找到。人PD-L1和PD-L2氨基酸序列分别可以在NCBI Locus No.:NP_054862和NP_079515中找到。

可用于本发明任何方面的PD-1拮抗剂包括特异性结合PD-1或PD-L1，并且优选特异性结合人PD-1或人PD-L1的单克隆抗体(mAb)或其抗原结合片段。所述mAb可以是人抗体，人源化抗体或嵌合抗体，并且可以包括人恒定区。在一些实施方案中，人恒定区选自IgG1、IgG2、IgG3和IgG4恒定区，并且在优选的实施方案中，人恒定区是IgG1或IgG4恒定区。在一些实施方案中，抗原结合片段选自Fab、Fab'-SH、F(ab')2、scFv和Fv片段。

结合人PD-1并且可用于本发明各个方面和实施方案的mAb的实例描述在US7488802、US7521051、US8008449、US8354509、US8168757、WO2004/004771、WO2004/072286、WO2004/056875和US2011/0271358中。

在本发明的任何方面和实施方案中用作PD-1拮抗剂的具体抗人PD-1mAb包括：MK-3475，一种人源化IgG4mAb，具有WHO Drug Information，Vol.27，No.2,pages 161-162(2013)中描述的结构，并且其包含图6所示的重链和轻链氨基酸序列；纳武单抗(nivolumab)，一种人IgG4mAb，具有WHO Drug Information，Vol.27,No.1,pages 68-69(2013)中描述的结构，并且其包含图7所示的重链和轻链氨基酸序列；人源化抗体h409A11、h409A16和h409A17(它们描述在WO2008/156712中)以及AMP-514(其正在由Medimmune开发)。

可用于本发明的任何方面和实施方案的其它PD-1拮抗剂包括特异性结合PD-1并优选特异性结合人PD-1的免疫粘附素，例如含有融合到免疫球蛋白分子的恒定区(如Fc区)的PD-L1或PD-L2的胞外或PD-1结合部分的融合蛋白。特异性结合PD-1的免疫粘附分子的实例描述于WO2010/027827和WO2011/066342中。在本发明的治疗方法、药物和用途中可用作PD-1拮抗剂的具体融合蛋白包括AMP-224(也称为B7-DCIg)，其为PD-L2-FC融合蛋白并结合人PD-1。

结合人PD-L1并可用于本发明的治疗方法、药物和用途中的mAb的其它实例描述于WO2013/019906，W02010/077634A1和US8383796。在本发明的治疗方法、药物和用途中可用作PD-1拮抗剂的具体的抗人PD-L1mAb包括MPDL3280A，BMS-936559，MEDI4736，MSB0010718C。

KEYTRUDA/派姆单抗(pembrolizumab)是由Merck销售用于治疗肺癌的抗PD-1抗体。派姆单抗的氨基酸序列和使用方法公开在美国专利No.8,168,757中。

Opdivo/纳武单抗是一种完全人单克隆抗体，由Bristol Myers Squibb销售，针对负免疫调节性人类细胞表面受体PD-1(程序性死亡-1或程序性细胞死亡-1/PCD-1)，具有免疫增强活性。纳武单抗通过其配体PD-L1和PD-L2结合并阻断PD-1(Ig超家族跨膜蛋白)的活化，导致T细胞的活化和针对肿瘤细胞或病原体的细胞介导的免疫应答。活化的PD-1通过抑制P13k/Akt通路激活来负调节T细胞活化和效应子功能。纳武单抗的其他名称包括：BMS-936558，MDX-1106和ONO-4538。纳武单抗的氨基酸序列以及使用和制备方法公开在美国专利No.US 8,008,449中。

用于与本发明的式(I)化合物组合或共同施用的另外的一种或多种活性成分(抗肿瘤剂)的另外的实例是免疫调节剂。

本文所用的“免疫调节剂”是指影响免疫系统的包括单克隆抗体在内的任何物质。本发明的ICOS结合蛋白可以被认为是免疫调节剂。免疫调节剂可用作抗肿瘤剂用于治疗癌症。例如，免疫调节剂包括但不限于抗CTLA-4抗体，例如伊匹单抗(ipilimumab)(YERVOY)和抗PD-1抗体(Opdivo/纳武单抗和Keytruda/派姆单抗(pembrolizumab))。其他免疫调节剂包括，但不限于，OX-40抗体、PD-L1抗体、LAG3抗体、TIM-3抗体、41BB抗体和GITR抗体。

Yervoy(伊匹单抗)是由Bristol Myers Squibb销售的全人CTLA-4抗体。伊匹单抗的蛋白质结构和使用的方法描述于美国专利No.6,984,720和7,605,238中。

CD134，也称为OX40，与CD28不同，其是不在静息的天然T细胞上组成性表达的受体的TNFR-超家族的成员。OX40是辅助共刺激分子(secondary costimulatorymolecule)，其在活化后24至72小时后表达；其配体OX40L也不在静息抗原呈递细胞上表达，而是在其活化之后表达。OX40的表达依赖于T细胞的完全活化；没有CD28，OX40的表达被延迟并且降低了四倍。OX-40抗体，OX-40融合蛋白及其使用方法公开于美国专利No.US 7,504,101；US 7,758,852；US 7,858,765；US 7,550,140；US 7,960,515；WO2012027328；WO2013028231。

本文所用的术语“Toll样受体”(或“TLR”)是指感测微生物产物和/或启动适应性免疫应答的蛋白或其片段的Toll样受体家族的成员。在一个实施方案中，TLR激活树突状细胞(DC)。Toll样受体(TLR)是模式识别受体家族，最初被确认为识别微生物病原体的天然免疫系统的传感器。TLR识别微生物中的不同结构，通常称为“PAMP”(病原体相关的分子模式)。与TLR结合的配体引起细胞内信号传导通路的级联，其诱导涉及炎症和免疫的因子的产生。在人类中，已经鉴定了十种TLR。在细胞表面表达的TLR包括TLR-1、-2、-4、-5和-6，而TLR-3、-7/8和-9用ER区表达。人类DC亚型可以根据不同的TLR表达模式进行鉴定。举例来说，DC的骨髓或“常规”亚型(mDC)在被刺激时表达TLR 1-8，并产生活化标记(例如，CD80，CD86，I类和II类MHC，CCR7)、促炎细胞因子和趋化因子的级联。这种刺激和产生的表达的结果是抗原特异性CD4+和CD8+T细胞的引发(priming)。这些DC获得增强的获取抗原的能力，并将其以适当的形式呈递给T细胞。相比之下，DC的浆细胞样亚型(pDC)在激活时仅表达TLR7和TLR9，导致激活NK细胞以及T细胞。因为死亡的肿瘤细胞可能不利地影响DC功能，已经提出用TLR激动剂激活DC可能有益于在用于治疗癌症的免疫治疗方法中引发抗肿瘤免疫。还有人建议，使用放射和化学疗法成功治疗乳腺癌需要TLR4激活。

本领域已知且在本发明中有用的TLR激动剂包括，但不限于，以下：Pam3Cys，一种TLRI/2激动剂；CFA，一种TLR2激动剂；MALP2，一种TLR2激动剂；Pam2Cys，一种TLR2激动剂；FSL-1，一种TLR-2激动剂；Hib-OMPC，一种TLR-2激动剂；polyribosinic:polyribocytidicacid(PolyI:C)，一种TLR3激动剂；聚腺苷多聚尿酸(poly AU)，一种TLR3激动剂；用聚-L-赖氨酸和羧甲基纤维素稳定的聚肌苷酸-聚胞苷酸(Hiltonol)，一种TLR3激动剂；细菌鞭毛蛋白，一种TLR5激动剂；咪喹莫特，一种TLR7激动剂；瑞喹莫德，一种TLR7/8激动剂；洛索立宾，一种TLR7/8激动剂；和未甲基化的CpG二核苷酸(CpG-ODN)，一种TLR9激动剂。

本领域已知的并且在本发明中有用的另外的TLR激动剂还包括，但不限于，氨基烷基氨基葡糖苷磷酸酯(AGP)，其结合TLR4受体，已知可用作疫苗佐剂和免疫刺激剂用于在免疫动物中刺激细胞因子产生，激活巨噬细胞，促进天然免疫应答，以及增强抗体产生。天然存在的TLR4激动剂的实例是细菌LPS。半合成TLR4激动剂的实例是单磷酰脂质A(MPL)。AGP及其通过TLR4的免疫调节作用公开在专利公开文献中，例如WO 2006/016997，WO 2001/090129和/或美国专利No.6,113,918，并已在文献中报道。另外的AGP衍生物公开在美国专利No.7,129,219，美国专利No.6,525,028和美国专利No.6,911,434中。一些AGP作为TLR4的激动剂起作用，而其他AGP被认为是TLR4拮抗剂。

除了上文所述的免疫刺激剂之外，本发明的组合物还可以包含一种或多种另外的物质，由于它们的佐剂性质，其可以起作用来刺激免疫系统对存在于灭活肿瘤细胞上的癌抗原作出响应。这些佐剂包括，但不限于，脂质，脂质体，诱导天然免疫的灭活的细菌(例如，灭活或减毒的I/ster/一种产单核细胞)，通过(NOD)样受体(NLDs)、基于视黄酸诱导基因(RIG)-I样受体(RLR)和/或C型凝集素受体(CLR)介导天然免疫激活的组合物。PAMP的实例包括脂蛋白、脂多肽、肽聚糖、酵母聚糖、脂多糖、奈瑟氏孔蛋白、鞭毛蛋白、抑制蛋白、半乳聚酰胺、胞壁酰二肽。肽聚糖、脂蛋白和脂磷壁酸是革兰氏阳性的细胞壁组分。脂多糖由大多数细菌表达，MPL是一个例子。鞭毛蛋白是指由致病菌和共生细菌分泌的细菌鞭毛的结构成分。rt.-半乳糖苷神经酰胺(rt.-GalCer)是自然杀伤T(NKT)细胞的激活剂。胞壁酰二肽是所有细菌共有的生物活性肽聚糖基序。

由于它们的佐剂特质，优选TLR激动剂与其它疫苗、佐剂和/或免疫调节剂组合使用，并且可以以各种组合产品进行组合。因此，在一些实施方案中，本文所述的结合STING并诱导STING依赖性TBKI活化的式(I)化合物和表达并分泌刺激DC诱导、募集和/或成熟的一种或多种细胞因子的灭活肿瘤细胞，如本文所述，可以与一种或多种TLR激动剂一起施用以用于治疗目的。

用于与本发明的式(I)化合物组合或共同施用的另外的一种或多种活性成分(抗肿瘤剂)的其它实例是ICOS抗体。

PCT/EP2012/055735(WO 2012/131004)显示了具有激动剂活性的人ICOS的鼠抗体的CDR。ICOS的抗体也公开在WO 2008/137915、WO 2010/056804、EP 1374902、EP 1374901和EP 1125585中。

吲哚胺2,3-双加氧酶1(IDO1)为调节抗肿瘤免疫应答的关键免疫抑制酶，其通过促进调节性T细胞的产生和阻断效应T细胞的活化，从而通过允许癌细胞避免免疫监视以促进肿瘤生长。(Lemos H等，Cancer Res。2016年4月15日；76(8)：2076-81)，(Munn DH等，Trends Immunol.2016Mar；37(3)：193-207)。与本发明的式(I)化合物联合或共同给药的其它活性成分(抗肿瘤剂)是IDO抑制剂。Epacadostat，((Z)-N-(3-溴-4-氟苯基)-N'-羟基-4-[2-(氨磺酰基氨基)乙基氨基]-1,2,5-噁二唑-3-甲脒)是高度有效且选择性的IDO1酶的口服抑制剂，其逆转肿瘤相关的免疫抑制并恢复有效的抗肿瘤免疫应答。Epacadostat公开于美国专利第8,034,953号。

与本发明的式(I)化合物组合或共同给药的其它的一种或多种活性成分(抗肿瘤剂)的另外的实例是CD73抑制剂和A2a和A2b腺苷拮抗剂。

在一个实施方案中，要求保护的本发明的癌症治疗方法包括共同给药式(I)化合物和/或其药学上可接受的盐和至少一种抗肿瘤剂，所述抗肿瘤剂例如选自以下的一种：抗微管剂、铂配位络合物、烷基化剂、抗生素、拓扑异构酶II抑制剂、抗代谢物、拓扑异构酶I抑制剂、激素和激素类似物、信号转导途径抑制剂、非受体酪氨酸激酶血管生成抑制剂、免疫治疗剂、促细胞凋亡剂、细胞周期信号抑制剂；蛋白酶体抑制剂；以及癌症代谢抑制剂。

在一个实施方案中，式(I)的化合物用作化疗增敏剂以增强肿瘤细胞杀死。

在一个实施方案中，式(I)的化合物与化疗增敏剂组合使用以增强肿瘤细胞杀死。

在一个实施方案中，式(I)的化合物与ATF-4调节剂组合使用。

在一个实施方案中，式(I)的化合物与ATF-4调节剂组合使用以治疗与活化的未折叠蛋白反应途径相关的疾病/损伤。

在一个实施方案中，式(I)的化合物与ATF-4调节剂组合使用以治疗神经退行性疾病。

在一个实施方案中，式(I)的化合物与ATF-4调节剂组合使用以治疗癌症。

在一个实施方案中，式(I)化合物与ATF-4调节剂组合使用，其中ATF-4调节剂是ISRIB或另一种结合eIF2B并增强整体翻译的化合物。

ISRIB描述于国际申请PCT/US2014/029568，其国际申请日为2014年3月14日，国际公开号为WO 2014/144952且国际公开日为2014年9月18日。

本发明一个实施方案提供组合，其包含：

a)式(I)的化合物或其药学上可接受的盐；和

b)ATF-4调节化合物。

ATF-4调节化合物可通过国际公开号WO 2014/144952中所述的测试鉴定。

合适地，所述式(I)化合物及其药学上可接受的盐可与已知用于治疗神经变性疾病/损伤的至少一种其他活性剂共同给药。

合适地，所述式(I)化合物及其药学上可接受的盐可与已知用于治疗糖尿病的至少一种其他活性剂共同给药。

合适地，所述式(I)化合物及其药学上可接受的盐可与已知用于治疗心血管病的至少一种其他活性剂共同给药。

合适地，所述式(I)化合物及其药学上可接受的盐可与已知用于眼部疾病的至少一种其他活性剂共同给药。

合适地，所述式(I)化合物及其药学上可接受的盐可与已知用于防止器官移植期间和之后以及运输用于移植的器官中的器官损伤的至少一种其他活性剂共同给药。

组合物

本发明范围内的药学活性化合物用作在需要的哺乳动物(尤其人)中的PERK抑制剂。

因此，本发明提供了治疗癌症、神经退行性疾病和其它需要PERK抑制的病症的方法，其包括给药有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。式(I)化合物还提供了治疗上述疾病状态的方法，因为它们表现出作为PERK抑制剂的能力。该药物可以通过任何常规给药途径，包括但不限于静脉内、肌内、口服、局部、皮下、经动脉、皮内、眼内和肠胃外给药于有需要的患者。合适地，PERK抑制剂可通过鞘内或心室内途径直接递送至大脑，或植入持续释放PERK抑制剂药物的装置或泵内合适的解剖位置。

将药学活性的本发明化合物掺入方便的剂型(例如胶囊、片剂或注射制剂)中。应用固体或液体药学载体。固体载体包括淀粉、乳糖、硫酸钙二水合物、白陶土、蔗糖、滑石、明胶、琼脂、果胶、阿拉伯胶、硬脂酸镁和硬脂酸。液体载体包括糖浆、花生油、橄榄油、盐水和水。同样地，所述载体或稀释剂可以包括任何延长释放的材料，例如单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯，其单独或与蜡混合。固体载体的量可以大范围变化，但是优选地，将为每剂量单位大约25mg至大约1g。当使用液体载体时，制剂将为糖浆、酏剂、乳剂、软明胶胶囊、无菌可注射液体例如安瓿，或含水或非水性液体悬浮液的形式。

所述药物组合物按照药物化学工作者的常规技术制备，包括混合、制粒和压制，必要时，对于片剂形式，或合适地混合、填充并溶解所述成分，得到所需口服或肠胃外产品。

本发明药学活性化合物在上述药物剂量单位中的剂量将为有效的无毒量，优选地选自0.001-500mg/kg的活性化合物，优选0.001-100mg/kg。当治疗需要PERK抑制剂的人患者时，所选剂量优选每天给药1-6次，以口服或肠胃外方式。优选的肠胃外给药形式包括局部、经直肠、经皮、注射和连续输注。用于人给药的口服剂量单位优选含有0.05至3500mg活性化合物。优选使用较低剂量的口服给药。然而，当安全和方便于患者时，也可使用以高剂量的肠胃外给药。

待给药的最佳剂量可以容易地由本领域熟练技术人员确定，并且将根据具体使用的PERK抑制剂、制剂的强度、给药方式以及疾病状态的进展而改变。取决于待治疗的具体患者的其它因素将导致需要调整剂量，所述因素包括患者年龄、体重、饮食和给药时间。

当为了防止运输用于移植的器官中的器官损伤而给药时，在运输过程中向贮存器官的溶液中(合适地在缓冲溶液中)加入式(I)化合物。

本发明的在哺乳动物(包括人)中诱导PERK抑制活性的方法包括向需要该活性的受试者给药有效的PERK抑制量的药学活性本发明化合物。

本发明还提供式(I)化合物或其药学上可接受的盐在制备用作PERK抑制剂的药物中的用途。

本发明还提供式(I)化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗的药物中的用途。

本发明还提供了式(I)化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗疾病的药物中的用途，所述疾病为癌症、癌变前综合征、阿尔茨海默病、神经性疼痛、脊髓损伤、外伤性脑损伤、缺血性中风、中风、帕金森病、糖尿病、代谢综合征、代谢失调、亨廷顿病、克雅氏病、家族致命性失眠症、格-施-沙综合征和相关的朊病毒病、肌萎缩侧索硬化、进行性核上麻痹、心肌梗死、心血管病、炎症、器官纤维化、慢性和急性肝脏疾病、脂肪肝病、肝脂肪变性、肝纤维化、慢性和急性肺部疾病、肺纤维化、慢性和急性肾脏疾病、肾脏纤维化、慢性损伤性脑病(CTE)、神经退行性疾病、痴呆、额颞叶痴呆、tau病变、皮克病、尼曼-皮克病、淀粉样变性、认知缺损、动脉粥样硬化、眼部疾病和心律失常。

本发明还提供式(I)化合物或其药学上可接受的盐在制备用于防止在运输用于移植的器官过程中的器官损伤的药物中的用途。

本发明还提供用作PERK抑制剂的药物组合物，其包含式(I)化合物或其药学上可接受的盐以及药学上可接受的载体。

本发明还提供用于治疗癌症的药物组合物，其包含式(I)化合物或其药学上可接受的盐以及药学上可接受的载体。

另外，药学活性的本发明化合物可以与其它活性成分共同给药，所述其它活性成分例如已知用于治疗癌症的其它化合物，或当与PERK抑制剂组合使用时已知具有用途的化合物。

本发明还提供药物组合物，其包含0.5至1,000mg的式(I)化合物或其药学上可接受的盐以及0.5至1,000mg的药学上可接受的赋形剂。

不需要进一步详细说明，相信本领域技术人员可以使用上述说明，以最大程度使用本发明。因此，以下实施例仅作为例示，并不以任何方式限制本发明的范围。

实施例

以下实施例说明了本发明。这些实施例并不意图限制本发明的范围，而是为了向本领域技术人员提供制备和使用本发明的化合物、组合物和方法的指导。尽管描述了本发明的特定实施例，但本领域技术人员将会理解，可以在不脱离本发明的精神和范围的情况下进行各种改变和修改。

实施例1

5-(3-苄基异喹啉-7-基)-7-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺

步骤1：在0℃向2-碘代苯甲酸(10.0g，40.32mmol，1当量)在MeOH(100mL)中的搅拌溶液中滴加H₂SO₄(10mL)。将反应混合物温热至90℃且搅拌8小时。反应混合物冷却且浓缩。残余物用饱和碳酸氢钠在0℃碱化且用乙酸乙酯(2 x 150mL)萃取。有机层用水和盐水溶液洗涤然后用硫酸钠干燥且蒸发以得到2-碘代苯甲酸甲酯，其为无色液体(9.0g，85％)。

¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δppm 3.93(s，3H)，7.15(t，J＝8.0Hz，1H)，7.40(t，J＝7.2Hz，1H)，7.80(d，J＝8.0Hz，1H)，7.99(d，J＝8.0Hz，1H)。

步骤2：在20-40℃向2-碘代苯甲酸甲酯(5.0g，19.08mmol，1当量)和NBS(3.73g，20.99mmol，1.1当量)在乙酸(10mL)中的搅拌溶液中滴加H₂SO₄(10mL)。在室温将反应混合物搅拌88h，然后加热至50℃且搅拌4h。将反应混合物冷却至10℃且用冷却水(40mL)淬灭且用DCM(3 x 50mL)萃取。有机层用5％碳酸氢钠(2 x 50mL)、10％Na₂SO₃溶液(50mL)和水(50mL)洗涤，然后用硫酸钠干燥，且蒸发以得到5-溴-2-碘代苯甲酸甲酯，其为粗产物，其通过硅胶快速柱色谱法纯化。化合物在己烷中的10％乙酸乙酯中洗脱出来。将纯的级分蒸发以得到5-溴-2-碘代苯甲酸甲酯，其为灰白色固体(5g，77％)。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δppm 3.94(s，3H)。7.26-7.29(m，1H)，7.83(d，J＝8.4Hz，1H)，7.93(d，J＝8.8Hz，1H)。

步骤3：在5℃向硼氢化钠(1.1g，14.7mmol，2当量)在乙醇(20mL)中的搅拌溶液中添加THF(10mL)中的5-溴-2-碘代苯甲酸甲酯。在氮气氛下将反应混合物温热至室温且搅拌18h。添加额外量的硼氢化钠(0.84g，22mmol，1.5当量)且将混合物搅拌22h。将反应混合物冷却至0℃，用10mL15％柠檬酸缓慢处理。反应混合物用DCM(2 x 75mL)萃取。有机层用15％aq.NaCl(100mL)洗涤，然后用硫酸钠干燥且蒸发以得到(5-溴-2-碘苯基)甲醇(4.5g，100％)，其为白色固体。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δppm 1.83–1.88(m，1H)，4.63(s，2H)，7.12(dd，J＝2.8，8.4Hz，1H)，7.62-7.66(m，2H)。

步骤4：将草酰氯(1.99mL，23.04mmol，1.6当量)在DCM(25mL)中的溶液冷却至-70℃且在-65℃至-70℃添加DMSO(2.44mL，34.5mmol，2.4当量)在DCM(25mL)中的溶液。反应混合物在氮气氛在-70℃搅拌10分钟，然后添加(5-溴-2-碘苯基)甲醇(4.55g，14.4mmol，1.0当量)在DCM(100mL)中的溶液。将反应混合物在-65℃搅拌15分钟且添加三乙胺(10mL，72mmol，5.0当量)。反应混合物温热至-10℃且搅拌1h。添加水(40mL)且将反应混合物温热至室温。分离有机层且蒸发以得到5-溴-2-碘苯甲醛(4.2g，93％)，其为白色固体。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δppm 7.45(d，J＝7.6Hz，1H)，7.81(d，J＝11.6Hz，1H)，7.98(d，J＝1.6Hz，1H)，9.97(s，1H)。

步骤5：在室温在氮气氛向5-溴-2-碘苯甲醛(4.2g，13.5mmol，1.0当量)在THF(20mL)中的搅拌溶液中添加叔丁基胺(4.26mL，40.6mmol，3.0当量)。在室温将反应混合物搅拌40h且真空蒸发以得到残余物。将残余物溶于DCM(100mL)，用H2O(50mL)洗涤，用硫酸钠干燥且蒸发以得到(E)-N-(5-溴-2-碘代亚苄基)-2-甲基丙-2-胺(3.0g，粗物质)，其为黄色油状化合物。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δppm 1.32(s，9H)，7.20(dd，J＝2.8，8.4Hz，1H)，7.68(d，J＝8.4Hz，1H)，8.07(d，J＝2.4Hz，1H)，8.31(s，1H)。

步骤6：向(E)-N-(5-溴-2-碘代亚苄基)-2-甲基丙-2-胺(1.0g，2.73mmol,1当量)在甲苯(20mL)中的搅拌溶液中添加丙-2-炔-1-基苯(0.38g，3.26mmol，1.2当量)，然后添加碘化铜(0.1g，0.54mmol，0.2当量)和PdCl₂(PPh₃)₂(0.058g，0.08mmol，0.03当量)。将反应混合物在室温在氮气氛下搅拌4h。添加额外碘化铜(0.065g，0.35mmol)且将混合物在100℃搅拌4小时。将反应混合物冷却至室温，用乙酸乙酯(20mL)稀释，通过硅藻土过滤且将滤液浓缩以得到粗产物。粗产物通过硅胶快速柱色谱法纯化。化合物在20％EtOAc：己烷中洗脱出来。将具有纯的产物的级分蒸发以得到3-苄基-7-溴异喹啉(0.5g，61％)，其为棕色半固体。LCMS(ES)m/z＝298.0，300.0[M+H]⁺.¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δppm 4.38(s，2H)，7.25(s，1H)，7.32(s，4H)，7.40(s，1H)，7.60(d，J＝8.8Hz，1H)，7.72(dd，J＝1.2，8.8Hz，1H)，8.10(s，1H)，9.15(s，1H)。

步骤7：向3-苄基-7-溴异喹啉(0.2g，0.67mmol，1当量)在1,4-二噁烷(10mL)中的搅拌溶液中添加二(频哪醇合)二硼(0.17g，067mmol，1当量)和乙酸钾(0.19g，2.01mmol，3当量)。反应混合物用N₂脱气10分钟。添加PdCl₂(dppf)-CH₂Cl₂加合物(0.027g，0.033mmol，0.05当量)且将混合物用N₂再脱气5分钟。将反应混合物在100℃在密封容器中搅拌3小时。将反应混合物冷却至室温。添加5-溴-7-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(0.15g，0.67mmol，1.0当量)、饱和NaHCO₃水溶液(4mL)和PdCl₂(dppf)-CH₂Cl₂加合物(0.027g，0.033mmol，0.05当量)且将反应混合物用氮气脱气5分钟。将容器密封且将反应混合物在100℃搅拌12小时。将反应混合物冷却至室温且通过硅藻土过滤。将滤液蒸发以得到粗产物，其通过硅胶快速柱色谱法纯化。将化合物在DCM中的3％甲醇中作为混合物洗脱出来。将级分蒸发以得到5-(3-苄基异喹啉-7-基)-7-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(0.09g，36％)，其为灰白色固体。LCMS(ES)m/z＝366[M+H]⁺.¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 3.76(s，3H)，4.26(s，2H)，6.14(br.s.，2H)，7.17–7.24(m，1H)，7.26–7.32(m，2H)，7.45(s，1H)，7.69(s，1H)，7.83(d，J＝8.4Hz，1H)，7.95(d，J＝8.4Hz，1H)，8.06(s，1H)，8.17(s，1H)，9.25(s，1H)。

实施例2

5-(3-(3,5-二甲基苄基)异喹啉-7-基)-7-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺

步骤1：在0℃向4-溴苯二甲酸(9.0g，37.55mmol，1当量)在THF(90mL)中的搅拌溶液中滴加BH₃.DMS(35mL，375mmol，10当量)。将反应混合物温热至室温且搅拌过夜。反应混合物冷却且用MeOH缓慢淬灭，然后蒸发以得到粗产物，其通过硅胶快速柱色谱法纯化。化合物在1.5％MeOH:DCM中洗脱出来。将具有产物的级分蒸发以得到(4-溴-1,2-亚苯基)二甲醇，其为白色固体(6.0g，75.9％)。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 4.45(d，J＝5.2Hz，2H)，4.51(d，J＝5.2Hz，2H)，5.12(t，J＝5.6Hz，1H)，5.20(t，J＝11.4Hz，1H)，7.31(d，J＝8.0Hz，1H)，7.40(t，J＝8.0Hz，1H)，7.54(s，1H)。

步骤2：将草酰氯(14.2mL，165mmol，6.0当量)在DCM(120mL)中的溶液冷却至-70℃且在-65℃至-70℃添加DMSO(11.7mL，165mmol，6.0当量)。将反应混合物在氮气氛在-70℃搅拌30分钟。添加(4-溴-1,2-亚苯基)二甲醇(6.0g，27.64mmol，1.0当量)在DCM(25mL)中的溶液且将反应混合物在-65℃搅拌2h。添加三乙胺(69mL，495mmol，17.5当量)且将反应混合物在室温搅拌6h，然后用处理水(40mL)。分离有机层且蒸发以得到粗产物，其通过硅胶快速柱色谱法纯化。产物化合物在8.0％EtOAc:己烷中洗脱出来。将具有产物的级分蒸发以得到(4-溴-1,2-亚苯基)二甲醇(5.0g，83.3％)，其为淡黄色固体。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 7.90(d，J＝8.4Hz，1H)，8.07(d，J＝8.4Hz，1H)，8.11(s，1H)，10.46(s，2H)。

步骤3：运行1；在室温向4-溴酞醛(1.6g，7.74mmol，1.0当量)在乙醇(20mL)中的搅拌溶液中添加2-氨基丙二酸二乙酯盐酸盐(1.63g，7.74mmol，1.0当量)和乙醇钠(3.9mL，11.61mmol，1.5当量)，且将混合物在氮气氛在80℃搅拌4h。将反应混合物冷却至室温且用饱和氯化铵淬灭。反应混合物用乙酸乙酯(2 x 50mL)萃取。合并的有机层用硫酸钠干燥且蒸发以得到粗产物。

运行2；在室温向4-溴酞醛(1.6g，7.74mmol，1.0当量)在乙醇(20mL)中的搅拌溶液中添加2-氨基丙二酸二乙酯盐酸盐(1.63g，7.74mmol，1.0当量)和乙醇钠(3.9mL，11.61mmol，1.5当量)，且将混合物在氮气氛在80℃搅拌4h。将反应混合物冷却至室温，且用饱和氯化铵淬灭。反应混合物用乙酸乙酯(2 x 50mL)萃取。合并的有机层用硫酸钠干燥且蒸发以得到粗产物。将源自运行1和运行2的粗产物合并且通过硅胶快速柱色谱法纯化。化合物在15-25％EtOAc：己烷中洗脱出来。将级分蒸发以得到7-溴异喹啉-3-甲酸乙酯(1.2g，28％)，其为棕色固体。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δppm 1.49(t，J＝7.2Hz，3H)，4.51–4.57(m，2H)，7.86(s，2H)，8.24(s，1H)，8.56(s，1H)，9.28(s，1H)。

步骤4：在0℃向7-溴异喹啉-3-甲酸乙酯(1.2g，4.28mmol，1.0当量)在MeOH：THF：H₂O(2:2:1)(35mL)中的搅拌溶液中添加LiOH一水合物(0.9g，21.42mmol，5当量)且搅拌在室温持续0.5h。将反应混合物蒸发且用1N HCl淬灭。反应混合物用DCM中的5％MeOH(3 x50mL)萃取，且合并的有机物用硫酸钠干燥，过滤且浓缩以得到7-溴异喹啉-3-甲酸(1.0g，粗物质)，其为灰白色固体。LCMS(ES)m/z＝252.0，254.0[M+H]⁺.¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 8.01(dd，J＝2.0，8.8Hz，1H)，8.16((d，J＝8.8Hz，1H)，8.54(s，1H)，8.64(s，1H)，9.37(s，1H)，13.16(br.s.，1H)。

步骤5：向7-溴异喹啉-3-甲酸(1.0g，3.96mmol，1.0当量)在DMF(20mL)中的搅拌溶液中添加N,O-二甲基羟胺盐酸盐(0.77g，7.93mmol，2当量)和HATU(1.8g，4.76mmol，1.2当量)。将反应混合物在室温搅拌5分钟。滴加三乙胺(1.6mL，11.90mmol，3当量)，然后将混合物在室温搅拌40分钟。反应混合物用水(40mL)淬灭且用DCM(3 x 50mL)萃取。合并有机层，用硫酸钠干燥，过滤且蒸发以得到粗产物，其通过硅胶快速柱色谱法纯化。化合物在1.2％MeOH:DCM中洗脱出来。将具有产物的级分蒸发以得到7-溴-N-甲氧基-N-甲基异喹啉-3-甲酰胺(1.0g，90.9％)，其为白色固体。LCMS(ES)m/z＝295.0，297.0[M+H]⁺.¹H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 2.72(s，3H)，3.69(s，3H)，7.95(d，J＝8.4Hz，1H)，8.06(d，J＝8.8Hz，1H)，8.15(s，1H)，8.50(s，1H)，9.32(s，1H)。

步骤6：在氮气氛向镁(0.048g，2.03mmol，1.2当量)在THF(20mL)中的搅拌悬浮液中添加1-溴-3,5-二甲基苯(0.37g，2.03mmol，1.2当量)，且添加少量碘且将反应加热至回流，搅拌1h且冷却至室温。在单独的圆底烧瓶中，将7-溴-N-甲氧基-N-甲基异喹啉-3-甲酰胺(0.5g，1.64mmol，1.0当量)在THF(20mL)中的溶液冷却至0℃，滴加上述(3,5-二甲基苯基)溴化镁的溶液且所得反应混合物在室温搅拌1h。反应混合物用水(10mL)淬灭且用乙酸乙酯(3 x 25mL)萃取。合并的有机物用硫酸钠干燥，过滤且浓缩以得到(7-溴异喹啉-3-基)(3,5-二甲基苯基)甲酮(0.3g，55％)，其为灰白色固体。LCMS(ES)m/z＝340.0，342.0[M+H]⁺.¹HNMR(400MHz，CDCl₃)δppm 2.38(s，6H)，7.62(s，1H)，7.87(s，2H)，8.25(s，1H)，8.40(s，1H)，9.26(s，1H)。

步骤7：运行1；向(7-溴异喹啉-3-基)(3,5-二甲基苯基)甲酮(0.05g，0.146mmol，1.0当量)在乙二醇(3mL)中的搅拌溶液中添加水合肼(1.6g，31.96mmol，219当量)。将反应混合物加热至150℃且搅拌40分钟。添加氢氧化钾(粉状)(0.6g，10.69mmol，73当量)且将反应混合物加热至180℃；通过迪安-斯塔克冷凝器去除水。将反应混合物在180℃搅拌2h，然后冷却至室温。添加水(30mL)，反应混合物用乙醚(2 x 15mL)萃取。有机层用盐水(10mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤且浓缩以得到7-溴-3-(3,5-二甲基苄基)异喹啉(0.045g，粗物质)，其为棕色粘性化合物。LCMS(ES)m/z＝326.0，328.1[M+H]⁺.

运行2；向(7-溴异喹啉-3-基)(3,5-二甲基苯基)甲酮(0.2g，0.58mmol，1.0当量)在乙二醇(8mL)中的搅拌溶液中添加水合肼(6.35g，127mmol，219当量)。将反应混合物加热至150℃且搅拌40分钟。添加氢氧化钾(粉状)(2.37g，42.34mmol，73当量)且将反应混合物加热至180℃；通过迪安-斯塔克冷凝器去除水。反应混合物在180℃搅拌2h，然后冷却至室温。添加水(30mL)且反应混合物用乙醚(2 x 50mL)萃取。有机层用盐水(25mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤且浓缩以得到粗产物。将源自运行1和运行2的粗产物合并且通过硅胶快速柱色谱法纯化。化合物在14％EtOAc：己烷中洗脱出来。将具有产物的级分蒸发以得到7-溴-3-(3,5-二甲基苄基)异喹啉(0.17g，71％)，其为黄色固体。LCMS(ES)m/z＝326.0，328.1[M+H]⁺.¹HNMR(400MHz，CDCl₃)δppm 2.28(s，6H)，4.21(s，1H)，6.87(s，1H)，6.92(s，1H),7.41(s,1H)，7.61(d，J＝8.8Hz，1H)，7.70(d，J＝8.8Hz，1H)8.09(s，1H)，9.14(s，1H)。

步骤8：向7-溴-3-(3,5-二甲基苄基)异喹啉(0.16g，0.49mmol，1当量)在1,4-二噁烷(8mL)中的搅拌溶液中添加二(频哪醇合)二硼(0.124g，0.49mmol，1当量)和乙酸钾(0.144g，1.47mmol，3当量)。反应混合物用N₂脱气10分钟。添加PdCl₂(dppf)-CH₂Cl₂加合物(0.02g，0.024mmol，0.05当量)且混合物用N₂再脱气5分钟。将反应混合物在100℃在密封容器中搅拌5小时。将反应冷却至室温，添加5-溴-7-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(0.11g，0.49mmol，1.0当量)、饱和NaHCO₃水溶液(3.2mL)和PdCl₂(dppf)-CH₂Cl₂加合物(0.02g，0.024mmol，0.05当量)且反应混合物用N₂脱气5分钟。将容器密封且将反应混合物在100℃搅拌12小时。将反应混合物冷却至室温，通过硅藻土过滤且将滤液蒸发以得到粗产物，其通过硅胶快速柱色谱法纯化。化合物在4％MeOH:DCM中洗脱出来。将级分蒸发以得到5-(3-(3,5-二甲基苄基)异喹啉-7-基)-7-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(0.04g，21％)，其为白色固体。LCMS(ES)m/z＝394.2[M+H]⁺.¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 2.21(s，6H)，3.76(s，3H)，4.13(s，2H)，6.15(br.s.，2H)，6.81(s，1H)，6.91(s，2H)，7.45(s，1H)，7.67(s，1H)，7.82(d，J＝8.4Hz，1H)，7.95(d，J＝8.4Hz，1H)，8.05(s，1H)，8.17(s，1H)，9.24(s，1H)。

实施例3:

5-(3-苄基-8-氟异喹啉-7-基)-7-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺

步骤1：在-78℃向1-溴-2-氟-4-碘苯(5.0g，16.66mmol，1当量)在THF(50mL)中的搅拌溶液中滴加LDA(8.3mL，16.66mmol，1.0当量)。将反应混合物搅拌1h，然后在-78℃分批添加干冰。将反应混合物温热且在室温搅拌过夜。反应混合物用1N HCl淬灭且用DCM中的5％MeOH(3 x 60mL)萃取。有机层用硫酸钠干燥，过滤且浓缩以得到3-溴-2-氟-6-碘代苯甲酸(3.5g，61.4％)，其为棕色固体。LCMS(ES)m/z＝344.0，346.0[M+H]⁺.¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 7.53(t，J＝8.4Hz，1H)，7.65(d，J＝8.0Hz，1H)，14.18(s,1H)。

步骤2：在0℃向3-溴-2-氟-6-碘代苯甲酸(3.3g，9.59mmol，1当量)在DCM(50mL)中的搅拌溶液中滴加SOCl₂(50mL)。将反应混合物温热至室温且搅拌16小时。将反应混合物浓缩且添加MeOH(50mL)，然后在室温将混合物搅拌1h。将反应混合物蒸发且在0℃用饱和碳酸氢钠淬灭，且用乙酸乙酯(2 x 150mL)萃取。合并的有机层用水，盐水溶液洗涤，用硫酸钠干燥且蒸发以得到2-碘代苯甲酸甲酯，其为无色液体(3.4g，99％)。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δppm 3.91(s，3H)，7.60(t，J＝8.0Hz，1H)，7.70(d，J＝8.4Hz，1H)。

步骤3：运行1；在-15℃向3-溴-2-氟-6-碘代苯甲酸甲酯(0.2g，0.55mmol，1当量)在THF(10mL)中的搅拌溶液中滴加LiBH4(0.55mL，1.11mmol，2.0当量)。将反应混合物温热至室温且搅拌4h。添加水(5mL)，反应混合物用乙酸乙酯(2 x 10mL)萃取。合并的有机层用硫酸钠干燥，过滤且浓缩以得到粗化合物。

运行2；在-15℃向3-溴-2-氟-6-碘代苯甲酸甲酯(3.0g，8.35mmol，1当量)在THF(30mL)中的搅拌溶液中滴加LiBH₄(8.35mL，16.7mmol，2.0当量)。将反应混合物温热至室温且搅拌4h。添加水(50mL)，反应混合物用乙酸乙酯(3 x 100mL)萃取。合并的有机层用硫酸钠干燥，过滤且浓缩以得到粗化合物。将源自运行1和运行2的粗化合物混合且通过硅胶快速柱色谱法纯化。化合物在5％EtOAc:己烷中洗脱出来。将纯的级分蒸发以得到(3-溴-2-氟-6-碘苯基)甲醇(1.61g，55％)，其为白色固体。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 4.56–4.58(m，2H)，5.25(t，J＝5.2Hz，1H)，7.40(t，J＝7.6Hz，1H)，7.63(d，J＝8.4Hz，1H)。

步骤4：将草酰氯(0.73mL，8.46mmol，2.0当量)在DCM(15mL)中的搅拌溶液冷却至-70℃且在-65℃至-70℃添加DMSO(0.72mL，34.5mmol，2.4当量)。在氮气氛在-70℃将反应混合物搅拌10分钟，然后添加(3-溴-2-氟-6-碘苯基)甲醇(1.4g，4.23mmol，1.0当量)在DCM(10mL)中的溶液。将反应混合物在-65℃搅拌15分钟且添加三乙胺(2.94mL，10.15mmol，5.0当量)。反应混合物温热至-10℃且搅拌2h。添加水(10mL)且将反应温热至室温。分离有机层且蒸发以得到粗产物。粗化合物通过硅胶快速柱色谱法纯化。化合物在5％EtOAc：己烷中洗脱出来。将纯的级分蒸发以得到3-溴-2-氟-6-碘苯甲醛(1.3g，95％)，其为白色固体。¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆)δppm 7.67-7.71(m，1H)，7.82(d，J＝8.4Hz，1H)，9.92(s，1H)。

步骤5：将3-溴-2-氟-6-碘苯甲醛(1.0g，3.04mmol，1.0当量)、活化的分子筛(1.0g)、叔丁基胺(0.95mL，9.12mmol，3.0当量)和甲苯(10mL)放入封闭管中且在100℃加热24h。将反应混合物冷却至室温，通过硅藻土过滤，用乙酸乙酯洗涤。将滤液蒸发以得到(E)-N-(3-溴-2-氟-6-碘代亚苄基)-2-甲基丙-2-胺(0.9g，粗物质)，其为油性化合物。

步骤6：向(E)-N-(3-溴-2-氟-6-碘代亚苄基)-2-甲基丙-2-胺(0.8g，2.08mmol,1当量)在甲苯(10mL)中的搅拌溶液中添加丙-2-炔-1-基苯(0.289g，2.49mmol，1.2当量)、碘化铜(0.04g，0.208mmol，0.1当量)和PdCl₂(PPh₃)₂(0.044g，0.06mmol，0.03当量)。将反应混合物在室温在N₂下搅拌4h。添加额外量的碘化铜(0.04g，0.208mmol，0.1当量)且将反应混合物在100℃搅拌4小时。将反应混合物冷却至室温，用乙酸乙酯(20mL)稀释，且通过硅藻土过滤。将滤液浓缩以得到粗产物，其通过硅胶快速柱色谱法纯化。该化合物作为与杂质的混合物在20％EtOAc：己烷中洗脱出来。将包含产物的级分蒸发以得到3-苄基-7-溴-8-氟异喹啉(0.13g，粗物质)，其为棕色颜色半固体。LCMS(ES)m/z＝316,318[M+H]⁺.

步骤7：向3-苄基-7-溴-8-氟异喹啉(0.13g，0.411mmol，1当量)在1,4-二噁烷(10mL)中的搅拌溶液中添加二(频哪醇合)二硼(0.10g，0.411mmol，1当量)和乙酸钾(0.12g，1.23mmol，3当量)。反应混合物用N₂脱气10分钟。添加PdCl₂(dppf)-CH₂Cl₂加合物(0.0167g，0.02mmol，0.05当量)且将混合物用N₂脱气5分钟。将反应混合物在100℃在密封容器中搅拌12小时。将反应冷却至室温。添加5-溴-7-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(0.094g，0.411mmol，1.0当量)、饱和NaHCO₃水溶液(3mL)和PdCl₂(dppf)-CH₂Cl₂加合物(0.0167g，0.02mmol，0.05当量)且将反应混合物用N₂脱气5分钟。将容器密封且将反应混合物在100℃搅拌8小时。将混合物通过硅藻土过滤且将滤液蒸发以得到粗产物，其通过硅胶快速柱色谱法纯化。化合物在3％MeOH:DCM中洗脱出来。将包含产物的级分蒸发以得到5-(3-苄基-8-氟异喹啉-7-基)-7-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(0.012g，8％)，其为灰白色固体。LCMS(ES)m/z＝384.2[M+H]⁺.¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 3.76(s，3H)，4.26(s，2H)，6.13(br.s.，2H)，7.19(t，J＝6.8Hz，1H)，7.27–7.35(m，4H)，7.42(s，1H)，7.70(t，J＝8.0Hz，1H)，7.78–7.80(m，2H)，8.15(s，1H)，9.41(s，1H)。

实施例4

5-(3-(3,5-二氟苄基)-8-氟异喹啉-7-基)-7-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-

胺

步骤1：运行1：将3-溴-2-氟苯甲醛(5.0g，24.63mmol，1当量)添加至O-甲基羟胺盐酸盐(2.4g，29.55mmol，1.2当量)和吡啶(7.9mL，98.52mmol，4当量)在DCM(50mL)中的搅拌溶液中。将反应混合物在室温搅拌1小时。起始材料消耗后，将反应混合物真空蒸发以得到粗产物。粗产物通过快速柱色谱法纯化(100-200硅胶，80g柱)，使用己烷中的10％EtOAc作为流动相以得到所需产物(E)-3-溴-2-氟苯甲醛O-甲基肟，为无色液体(5.4g，94％)。LC-MS(ES)m/z＝232.0，234.0[M+H]⁺。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δppm 3.99(s，3H)，7.02(t，J＝8Hz，1H)，7.52–7.57(m，1H)，7.74-7.78(m，1H)，8.27(s，1H)。

运行2：将3-溴-2-氟苯甲醛(9.5g，46.79mmol，1当量)添加至O-甲基羟胺盐酸盐(4.68g，56.15mmol，1.2当量)和吡啶(15mL，187.19mmol，4当量)在DCM(100mL)中的搅拌溶液中。将反应混合物在室温搅拌1小时，起始材料消耗后，将反应混合物真空蒸发以得到粗产物。粗产物通过快速柱色谱法纯化(100-200硅胶，80g柱)，使用己烷中的10％EtOAc作为流动相以得到所需产物(E,Z)-3-溴-2-氟苯甲醛O-甲基肟，其为无色液体(10.3g，94％)。LC-MS(ES)m/z＝232.0，234.0[M+H]⁺。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δppm 3.99(s，3H)，7.02(t，J＝8Hz，1H)，7.52–7.57(m，1H)，7.74-7.78(m，1H)，8.27(s，1H)。

步骤2：运行1：在0℃向(E,Z)-3-溴-2-氟苯甲醛O-甲基肟(1.0g，4.31mmol，1当量)在THF(10mL)中的搅拌溶液中添加硼烷二甲硫复合物(4mL，43.10mmol，10当量)，然后将混合物在80℃搅拌5h。起始材料消耗后，将反应混合物冷却至0℃，且用甲醇逐滴淬灭。将二噁烷中的20％HCl(5mL)添加至该反应混合物，然后将其在90℃搅拌1h。将反应混合物真空蒸发以得到固体产物。固体产物用正戊烷(10mL)和醚(10mL)研磨以得到(3-溴-2-氟苯基)甲胺盐酸盐，其为灰白色固体(0.9g，87％)。LC-MS(ES)m/z＝204.0,206.0[M+H]⁺.¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 4.07(s，2H)，7.21(t，J＝8Hz，1H)，7.58(s，1H)，7.67–7.74(m，1H)，8.47(br.s，3H)。

运行2：在0℃向(E,Z)-3-溴-2-氟苯甲醛O-甲基肟(14.3g，61.63mmol，1当量)在THF(150mL)中的搅拌溶液中添加硼烷二甲硫复合物(58mL，616.37mmol，10当量)，且在80℃搅拌5h。起始材料消耗后，将反应混合物冷却至0℃，用甲醇逐滴淬灭。将二噁烷中的20％HCl(50mL)添加至反应混合物，然后将其在90℃搅拌1h。将反应混合物真空蒸发以得到固体产物。固体产物用正戊烷(50mL)和醚(50mL)研磨以得到(3-溴-2-氟苯基)甲胺盐酸盐，其为灰白色固体(14.2g，96％)。LC-MS(ES)m/z＝204.0,206.0[M+H]⁺.¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 4.06(s，2H)，7.20(t，J＝7.6Hz，1H)，7.60(t，J＝7.2Hz，1H)，7.71(t，J＝7.2Hz，1H)，8.59(br.s，3H)。

步骤3：在室温向(3-溴-2-氟苯基)甲胺盐酸盐(15.0g，62.5mmol，1当量)和1,1-二甲氧基丙-2-酮(9.58g，81.25mmol，1.3当量)在DCE(150mL)中的搅拌溶液中添加三乙酰氧基硼氢化钠(17.22g，81.25mmol，1.3当量)且将混合物搅拌过夜。将30％K₃PO₄水溶液(pH＝14)添加至反应混合物，将层分隔且水层用EtOAc(2 x 200mL)萃取，且将有机物合并且用盐水(100mL)洗涤，且用Na₂SO₄干燥。将有机溶剂浓缩以得到N-(3-溴-2-氟苄基)-1,1-二甲氧基丙-2-胺，其为无色液体(19g，粗物质)。LC-MS(ES)m/z＝306.2，308.0[M+H]⁺.¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 0.94(d，J＝6.4Hz，3H)，1.89(br.s，1H)，2.62(t，J＝6Hz，1H)，3.22(s，3H)，3.25(s，3H)，3.73–3.76(m，1H)，3.80–3.84(m，1H)，4.06(d，J＝5.6Hz，1H)，7.09(t，J＝8Hz，1H)，7.44(t，J＝6.8Hz，1H)，7.53(t，J＝7.2Hz，1H)。

步骤4：在0℃向氯磺酸(42mL，620.91mmol，10当量)的搅拌溶液添加至N-(3-溴-2-氟苄基)-1,1-二甲氧基丙-2-胺(19g，62.09mmol，1当量)，然后将混合物加热至100℃保持10分钟。反应混合物用冰淬灭，用10％NaOH溶液碱化且用EtOAc(2 x 300mL)萃取且将有机物合并，然后用Na₂SO₄干燥。将有机溶剂浓缩以得到粗产物。粗产物通过硅胶快速柱色谱法纯化。化合物在10％EtOAc：己烷中洗脱出来。将纯的级分蒸发以得到7-溴-8-氟-3-甲基异喹啉，其为灰白色固体(6.3g，42％)。

LC-MS(ES)m/z＝240.0，242.0[M+H]⁺.¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δppm2.70(s，3H)，7.40(d，J＝8.8Hz，1H)，7.46(s，1H)，7.69(t，J＝7.6Hz，1H)，9.42(s，1H)。

步骤5：运行1：在室温向7-溴-8-氟-3-甲基异喹啉(3g，12.50mmol，1.0当量)在CCl₄(30mL)中的搅拌溶液中添加过氧化苯甲酰(0.3g，1.25mmol，0.1当量)和N-溴代琥珀酰亚胺(4.45g，25.00mmol，2.0当量)且将反应混合物回流5h。起始材料消耗后，将反应混合物冷却至室温，过滤且将滤液浓缩以得到7-溴-3-(溴甲基)-8-氟异喹啉和7-溴-3-(二溴甲基)-8-氟异喹啉的粗混合物，其为棕色液体(3.6g，粗物质)。LC-MS(ES)m/z＝317.9，319.9[M+H]⁺单溴代产物，和LC-MS(ES)m/z＝398.0,399.8[M+H]⁺二溴代产物。

运行2：在室温向7-溴-8-氟-3-甲基异喹啉(2.9g，12.08mmol，1.0当量)在CCl4(30mL)中的搅拌溶液中添加过氧化苯甲酰(0.29g，1.20mmol，0.1当量)和N-溴代琥珀酰亚胺(4.3g，24.16mmol，2.0当量)，且将反应混合物回流5h。起始材料消耗后，将反应混合物冷却至室温，过滤且将滤液浓缩以得到7-溴-3-(溴甲基)-8-氟异喹啉和7-溴-3-(二溴甲基)-8-氟异喹啉的粗混合物，其为棕色液体(3g，粗物质)。LC-MS(ES)m/z＝317.9，319.9[M+H]⁺单溴代产物和LC-MS(ES)m/z＝398.0,399.8[M+H]⁺二溴代产物。

步骤6：运行1：在室温向7-溴-3-(溴甲基)-8-氟异喹啉和7-溴-3-(二溴甲基)-8-氟异喹啉(3.6g，9.04mmol，1当量)在DMF(30mL)中的搅拌溶液中添加NaIO₄(1.9g，9.04mmol，1当量)且将反应混合物在160℃回流过夜。起始材料消耗后，将反应混合物冷却至室温，且用冰水(200mL)稀释且用EtOAc(2×200mL)萃取。将有机物合并且用Na₂SO₄干燥。将有机溶剂浓缩以得到粗产物。粗产物通过硅胶快速柱色谱法纯化。化合物在10％EtOAc：己烷中洗脱出来。将纯的级分蒸发以得到7-溴-8-氟异喹啉-3-甲醛(1.2g，粗物质)。LC-MS(ES)m/z＝254.0，256.0[M+H]⁺.¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δppm7.72(d，J＝8.8Hz，1H)，7.89-7.92(m，1H)，8.36(s，1H)，9.64(s，1H)，10.28(s，1H)。

运行2：在室温向7-溴-3-(溴甲基)-8-氟异喹啉和7-溴-3-(二溴甲基)-8-氟异喹啉(3g，9.4mmol，1当量)在DMF(30mL)中的搅拌溶液中添加NaIO₄(2g，9.4mmol，1当量)且将反应混合物在160℃回流过夜。起始材料消耗后，将反应混合物冷却至室温，用冰水(200mL)稀释且用EtOAc(2×200mL)萃取。将有机物合并且用Na₂SO₄干燥。将有机溶剂浓缩以得到粗产物。粗产物通过硅胶快速柱色谱法纯化。化合物在10％EtOAc：己烷中洗脱出来。将纯的级分蒸发以得到7-溴-8-氟异喹啉-3-甲醛(1.25g，52％)。LC-MS(ES)m/z＝254.0，256.0[M+H]⁺.¹HNMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 7.72(d，J＝8.8Hz，1H)，7.86-7.92(m，1H)，8.36(s，1H)，9.64(s，1H)，10.28(s，1H)。

步骤7：在0℃向7-溴-8-氟异喹啉-3-甲醛(1.5g，5.9mmol，1当量)在THF(20mL)中的搅拌溶液中滴加0.5M(3,5-二氟苯基)溴化镁在THF(23mL，11.81mmol，2当量)中的溶液。将反应混合物在室温搅拌过夜，且在0℃用饱和NH₄Cl(50mL)淬灭。反应混合物用EtOAc(2×100mL)萃取，且将有机物合并且用盐水溶液(100mL)洗涤。将有机溶剂浓缩以得到粗产物。粗产物通过硅胶快速柱色谱法纯化。化合物在10％EtOAc：己烷中洗脱出来。将纯的级分蒸发以得到(7-溴-8-氟异喹啉-3-基)(3,5-二氟苯基)甲醇(1.25g，57％)。LC-MS(ES)m/z＝368.0，370.0[M+H]⁺.¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 5.91(d，J＝4Hz，1H),6.49(d，J＝4Hz，1H)，7.04(t，J＝8.8Hz，1H)，7.12(d，J＝7.2Hz，2H)，7.84(d，J＝8.4Hz，1H)，7.96(t，J＝8.4Hz，1H)，8.11(s，1H)，9.37(s，1H)。

步骤8：向(7-溴-8-氟异喹啉-3-基)(3,5-二氟苯基)甲醇(1.25g，3.39mmol，1当量)在1,4-二噁烷(40mL)中的搅拌溶液中添加二(频哪醇合)二硼(1.29g，5.09mmol，1.5当量)和乙酸钾(0.83g，8.49mmol，2.5当量)。反应混合物用N₂脱气15分钟。添加PdCl₂(dppf)-CH₂Cl₂加合物(0.138g，0.16mmol，0.05当量)。将反应混合物在100℃在密封容器中搅拌5小时。将反应混合物通过硅藻土过滤且将滤液浓缩以得到粗产物。粗产物使用硅胶快速柱色谱法纯化。化合物在20-50％EtOAc：己烷中洗脱出来。将纯的级分蒸发以得到(3,5-二氟苯基)(8-氟-7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)异喹啉-3-基)甲醇，其为浅棕色液体(1.25g，粗物质)。LCMS(ES)m/z＝334.1[M+H]⁺-82

步骤9：向(3,5-二氟苯基)(8-氟-7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)异喹啉-3-基)甲醇(1.25g，3.01mmol，1当量)、5-溴-7-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(0.68g，3.01mmol，1当量)和磷酸钾(1.27g，6.02mmol，2当量)在1,4-二噁烷：水(30mL：10mL)中的搅拌溶液中添加Pd₂(dba)₃(0.13g，0.15mmol，0.05当量)且将反应混合物用N₂脱气5分钟。添加三叔丁基鏻四氟硼酸盐(0.08g，0.3mmol，0.1当量)且反应混合物进一步脱气5分钟。将瓶密封且将反应混合物加热至100℃过夜。反应混合物冷却且通过硅藻土过滤且将滤液浓缩以得到粗化合物。粗化合物通过快速柱色谱法使用硅胶柱纯化，且化合物以3％MeOH：DCM洗脱，将纯的级分蒸发以得到(7-(4-氨基-7-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)-8-氟异喹啉-3-基)(3,5-二氟苯基)甲醇(0.6g，粗物质)，其为淡黄色液体。LCMS(ES)m/z＝436.1[M+H]⁺.

步骤10：在0℃向(7-(4-氨基-7-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)-8-氟异喹啉-3-基)(3,5-二氟苯基)甲醇(0.6g，1.37mmol，1当量)在DCM(10mL)中的搅拌溶液中滴加亚硫酰氯(5mL)。将反应混合物在室温搅拌2h。将反应混合物浓缩，且用DCM(100mL)稀释，用饱和NaHCO₃和盐水溶液洗涤。将有机溶剂浓缩以得到粗产物。粗产物通过硅胶快速柱色谱法纯化。化合物在2％MeOH：DCM中洗脱出来。将纯的级分蒸发以得到5-(3-(氯(3,5-二氟苯基)甲基)-8-氟异喹啉-7-基)-7-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(0.3g，粗物质)。LC-MS(ES)m/z＝454.1[M+H]⁺.¹H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 3.76(s，3H)，6.18(br.s，2H)，6.70(s，1H)，7.21(t，J＝9.2Hz，1H)，7.35(d，J＝7.2Hz，2H)，7.44(s，1H)，7.78(t，J＝8Hz，1H)，7.91–7.93(m，1H)，8.15(d，J＝4.8Hz，2H)，9.48(s，1H)。

步骤11：在室温向5-(3-(氯(3,5-二氟苯基)甲基)-8-氟异喹啉-7-基)-7-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(0.3g，0.66mmol，1当量)在NMP(10mL)和AcOH(5mL)中的搅拌溶液中添加锌粉(0.64g，9.93mmol，15当量)且将混合物在110℃加热2小时。反应混合物冷却且用饱和NaHCO₃溶液碱化。添加EtOAc(200mL)且将混合物通过硅藻土床过滤。分离有机层，用Na₂SO₄干燥且浓缩以得到粗化合物。粗化合物通过快速柱色谱法使用硅胶柱纯化，且化合物以2％MeOH:DCM洗脱，将纯的级分蒸发以得到5-(3-(3,5-二氟苄基)-8-氟异喹啉-7-基)-7-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(0.045g，16％)，其为灰白色.LCMS(ES)m/z＝420.2[M+H]⁺。¹H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 3.75(s，3H)，4.29(s，2H)，6.14(br.s，2H)，7.03–7.05(m，3H)，7.41(s，1H)，7.71(t，J＝8Hz，1H)，7.79–7.83(m，2H)，8.14(s，1H)，9.41(s，1H)。

实施例5:

7-环丙基-5-(3-(2,3-二氟苄基)-8-氟异喹啉-7-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4- 胺

步骤1a：运行1：在室温向4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(0.25g，1.63mmol，1.0eq)、环丙基硼酸(0.28g，3.27mmol，2.0eq)和碳酸钠(0.35g，3.27mmol，2.0eq)在DCE(5mL)中的搅拌悬浮液中添加Cu(OAc)2(0.29g，1.63mmol，1.0eq)和2,2’-联吡啶(0.25g，1.63mmol，1.0eq)在热DCE(3mL)中的悬浮液。将混合物加热至70℃且搅拌5h。将反应混合物冷却至室温且添加1N HCl。分离有机相且水相用DCM(3 x 30mL)萃取。合并的有机层用盐水洗涤，用Na₂SO₄干燥，过滤且蒸发。

运行2：在室温向4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(2.50g，16.27mmol，1.0eq)、环丙基硼酸(2.80g，32.552mmol，2.0eq)和碳酸钠(3.45g，32.55mmol，2.0eq)在DCE(30mL)中的搅拌悬浮液中添加Cu(OAc)2(2.95g，16.27mmol，1.0eq)和2,2’-联吡啶(2.54g，16.27mmol，1.0eq)在热DCE(20mL)中的悬浮液。将混合物加热至70℃且搅拌5h。将反应混合物冷却至室温且添加1N HCl。分离有机相且水相用DCM(3 x 30mL)萃取。合并的有机层用盐水洗涤，用Na₂SO₄干燥，过滤且蒸发。粗产物通过硅胶快速色谱法纯化。所需产物在己烷中的12％EtOAc中洗脱出来。将包含纯的产物的级分合并且真空浓缩以得到所需产物4-氯-7-环丙基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(1.85g，53％)，其为灰白色固体。LC-MS(ES)m/z＝194.1[M+H]⁺.¹H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.67(s，1H)，7.23(s，1H)，6.54(s，1H)，3.58–3.49(m，1H)，1.21-1.18(m，2H)，1.12-1.05(s，2H)。

步骤1b：向4-氯-7-环丙基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(1.85g，9.55mmol，1.0eq)在DCM在0℃中的搅拌溶液中缓慢添加NBS(2.04g，11.47mmol，1.2eq)。将混合物在室温搅拌2h。起始材料消耗后，反应混合物用DCM稀释，且用水洗涤。有机相用盐水洗涤，用Na₂SO₄干燥，过滤且蒸发。粗产物通过硅胶快速色谱法纯化。所需产物在己烷中的12％EtOAc中洗脱出来。将纯的产物级分合并且真空浓缩以得到所需产物5-溴-4-氯-7-环丙基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(2.28g，88％)，其为灰白色绒状固体。LC-MS(ES)m/z＝272.0，274.0[M+H]⁺.¹HNMR(400MHz，CDCl3)δ8.66(s，1H)，72.8(s，1H)，3.54–3.48(m，1H)，1.28–1.16(m，2H)，1.09–1.05(m，2H)。

步骤1c：在不锈钢高压灭菌容器(钢制反应釜)中向5-溴-4-氯-7-环丙基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(2.28g，8.37mmol，1.0eq)在二噁烷(10mL)中的溶液中添加25％aq.NH3(40mL)且将容器封闭且加热至100℃过夜。14h后LCMS显示完全转化。将反应混合物冷却至25℃且将悬浮液过滤。滤饼用水(3 x 5mL)洗涤，然后用戊烷(10ml)洗涤，且彻底真空干燥以得到所需产物5-溴-7-环丙基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(1.58g，75％)，其为米色固体。LC-MS(ES)m/z＝253.0，255.0[M+H]⁺.¹H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.09(s，1H)，7.32(s，1H)，6.64(br.s.，2H)，3.52–3.45(m，1H)，0.98–0.92(m，4H)。

步骤1：在80℃将7-溴-8-氟异喹啉-3-甲醛(0.5g，1.96mmol，1.0eq)和4-甲基苯磺酰肼(0.40g，2.16mmol，1.1eq)在1,4-二噁烷(12mL)中的溶液搅拌1.5h。将碳酸钾(0.408g，2.95mmol，1.5eq)和(3,4-二氟苯基)硼酸(0.47g，2.95mmol，1.5eq)添加至反应混合物。将系统加热至95-100℃且搅拌1.5h。将反应调至室温，且蒸发溶剂。粗物质在DCM和饱和NaHCO3之间分配。分离两层且水相用DCM萃取。合并的有机层用饱和NaHCO3、盐水洗涤，然后用MgSO₄干燥且过滤。在减压下去除溶剂且粗产物通过硅胶快速色谱法纯化。所需产物在己烷中的6％EtOAc中洗脱。将收集的具有纯的产物的级分合并且真空浓缩以得到所需产物7-溴-3-(3,4-二氟苄基)-8-氟异喹啉(0.20g，29％)，其为黄色固体。LC-MS(ES)m/z＝352.0，354.0[M+H]⁺.¹H NMR(400MHz，CDCl3)δ4.25(s，2H)，7.04–6.98(m，1H)，7.13–7.06(m，2H)，9.43(s，1H)，7.43–7.41(m，2H)，7.73(t，J＝8.0Hz，1H)。

步骤2：在50mL单颈圆底烧瓶中将7-溴-3-(3,4-二氟苄基)-8-氟异喹啉(0.19g，0.54mmol，1.0eq)、4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-二(1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷)(0.20g，081mmol，1.5eq)、乙酸钾(0.13g，1.35mmol，2.5eq)和PdCl2(dppf)-CH₂Cl₂加合物(22mg，0.03mmol，0.05当量)在12mL 1,4-二噁烷中的混合物在氩气下脱气5分钟。然后在油浴中在100℃加热12h。将混合物冷却至室温且通过硅藻土过滤，硅藻土垫用DCM洗涤。滤液用Na₂SO₄干燥，过滤，且真空浓缩。粗产物通过硅胶快速色谱法纯化。所需产物在己烷中的9％EtOAc中洗脱。将包含纯的产物的级分合并且浓缩以得到所需产物3-(3,4-二氟苄基)-8-氟-7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)异喹啉(92mg，43％)，其为白色固体。LC-MS(ES)m/z＝318.1[M+H]⁺-82.¹H NMR(400MHz，CDCl3)δ1.31(s，12H)，4.24(s，2H)，7.12-7.18(m，1H)，7.29–07.41(m，2H)，7.68(d，J＝8.4Hz，1H)，7.76(s，1H)，7.82(t，J＝8.0Hz，1H)，9.40(s，1H)。

步骤3：将3-(3,4-二氟苄基)-8-氟-7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)异喹啉(0.08g，0.21mmol，1.0eq)、5-溴-7-环丙基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(0.4g，0.16mmol，0.8eq)、Pd₂(dba)₃(10mg，0.01mmol，0.05当量)和K₃PO₄(0.09g，0.43mmol，2.0当量)在8mL二噁烷和1.0mL水中的混合物用氩气鼓泡5分钟，然后添加三-(叔丁基)鏻四氟硼酸盐(6mg，0.02mmol，0.1当量)。将混合物加热至110℃且搅拌1h。将反应混合物冷却至环境温度且通过硅藻土过滤。硅藻土垫用DCM中的5％MeOH洗涤。滤液用Na₂SO₄干燥，过滤且蒸发。粗产物通过硅胶快速色谱法纯化。所需产物在DCM中的2.5％MeOH中洗脱。将包含纯的产物的级分合并且浓缩以得到所需产物7-环丙基-5-(3-(2,3-二氟苄基)-8-氟异喹啉-7-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(41mg，43％)，其为灰白色固体。LC-MS(ES)m/z＝446.0[M+H]⁺.¹H NMR(400MHz，DMSO-d6)0.98–1.05(m，4H)，3.58–3.62(m，1H)，4.25(s，2H)，6.12(br.s.，2H)，7.12–7.18(m，1H)，7.30–7.40(m，3H)，7.71(t，J＝8.0Hz，1H)，7.76–7.81(m，2H)，8.14(s，1H)，9.40(s，1H)。

实施例6:

5-(3-(3,5-二氟苄基)-8-氟异喹啉-7-基)-7-乙基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺

步骤1：向1-溴-2-氟-4-碘苯(25g，83.09mmol，1.0当量)在THF(300mL)在-78℃中的搅拌溶液中滴加LDA(62mL，124.63mmol，1.5当量)(2M在THF/庚烷/乙基苯中的溶液)且所得混合物在相同温度搅拌2h。然后滴加DMF(19.4mL，249.3mmol，3.0当量)在THF(20mL)中的溶液且在相同温度(-78℃)搅拌1-2h。反应完成后，将混合物用饱和NH4Cl溶液在-78℃淬灭且使之达到室温。反应混合物用EtOAc稀释且分离两层。水相用EtOAc(3 x 20mL)萃取，且合并的有机物用盐水洗涤，用Na₂SO₄干燥，过滤且蒸发以得到粗产物。

将反应按所述进行3次，且将从所有运行获得的粗产物合并且通过硅胶柱色谱法纯化。所需产物在1-3％EtOAc：己烷中洗脱出来。将包含纯的产物的级分合并且浓缩以得到所需产物3-溴-2-氟-6-碘苯甲醛(合并产量＝42.81g，69％；将不纯的级分浓缩以得到收获物-2：15g，～85％纯的)，其为淡黄色固体。¹H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 7.67(t，J＝8.0Hz，1H)，7.81(d，J＝8.4Hz，1H)，9.91(s，1H)。

步骤2:运行1：在0℃向3-溴-2-氟-6-碘苯甲醛(21g，63.85mmol，1.0当量)在水(16mL)中的搅拌溶液中添加叔丁基胺(20mL，191.55mmol，3.0当量)。然后将反应混合物在室温搅拌14h。反应混合物在减压下蒸发以去除过量叔丁基胺。粗反应混合物与运行2混合。

运行2：在0℃向3-溴-2-氟-6-碘苯甲醛(21g，63.85mmol，1.0当量)在水(16mL)中的搅拌溶液中添加叔丁胺(20mL，191.55mmol，3.0当量)。然后将反应混合物在室温搅拌14h。反应混合物在减压下蒸发以去除过量叔丁基胺。运行1和2的合并的粗混合物用EtOAc稀释。分离有机层，用Na₂SO₄干燥且过滤，且真空蒸发以得到所需化合物1-(3-溴-2-氟-6-碘苯基)-N-(叔丁基)甲亚胺(methanimine)(48.03g，粗物质)，其为黄色油状物。¹H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 1.24(s，9H)，7.47(t，J＝8.0Hz，1H)，7.68(d，J＝8.4Hz，1H)，8.12(s，1H)。

步骤3：运行1：向1-(3-溴-2-氟-6-碘苯基)-N-(叔丁基)甲亚胺(24.0g，62.5mmol，1.0当量)在Et3N(300mL)中的搅拌溶液中添加3,3-二乙氧基丙-1-炔(9.9mL，68.75mmol，1.1当量)且混合物在氮气下脱气5min。添加二(三苯基膦)二氯化钯(ii)(0.88g，1.25mmol，0.02当量)，然后添加CuI(0.24g，1.25mmol，0.02当量)，且将反应加热至55℃保持2h。起始材料的消耗通过TLC监测。将反应混合物冷却至室温且沉淀通过硅藻土过滤掉，且将硅藻土垫用醚(2 x 25mL)洗涤。滤液用Na₂SO₄干燥，过滤且真空蒸发。粗产物溶于DMF(250mL)，在氮气下脱气5分钟，然后添加CuI(1.19g，6.25mmol，0.1当量)。将反应混合物加热至100℃保持6h。将反应冷却至室温，用EtOAc稀释，用饱和NH4Cl溶液洗涤，然后用盐水溶液，用Na₂SO₄干燥，过滤且蒸发以得到所需产物(31.06g，粗物质)。LC-MS(ES)m/z＝328.0，330.0[M+H]⁺.

运行2：向1-(3-溴-2-氟-6-碘苯基)-N-(叔丁基)甲亚胺(24.0g，62.5mmol，1.0当量)在Et3N(300mL)中的搅拌溶液中添加3,3-二乙氧基丙-1-炔(9.9mL，68.75mmol，1.1当量)且将混合物在氮气下脱气5min。添加二(三苯基膦)二氯化钯(ii)(0.88g，1.25mmol，0.02当量)，然后添加CuI(0.24g，1.25mmol，0.02当量)且加热至55℃保持2h。起始材料的消耗通过TLC监测。将反应混合物冷却至室温且沉淀通过硅藻土过滤掉，且硅藻土垫用醚(2 x25mL)洗涤。滤液用Na₂SO₄干燥，过滤且真空蒸发。粗产物溶于DMF(250mL)，在氮气下脱气5分钟，然后添加CuI(1.19g，6.25mmol，0.1当量)。将反应混合物加热至100℃保持6h。将反应冷却至室温，用EtOAc稀释，用饱和NH4Cl溶液洗涤，然后用盐水溶液洗涤，用Na₂SO₄干燥，过滤且蒸发以得到所需产物。将运行1和运行2粗产物合并且通过硅胶快速色谱法纯化。所需产物在6％EtOAc：己烷中洗脱出来。将包含产物的级分合并且蒸发以得到所需产物7-溴-3-(二乙氧基甲基)-8-氟异喹啉(合并产量25.5g，62％)，其为棕色固体。LC-MS(ES)m/z＝328.0，330.0[M+H]⁺.¹H NMR(400MHz，CDCl3)δppm 1.28(t，J＝7.2Hz，6H)，3.63–3.76(m，4H)，5.68(s，1H)，7.55(d，J＝8.8Hz，1H)，7.75–7.79(m，1H)，7.95(s，1H)，9.51(s，1H)。

步骤4：在室温向7-溴-3-(二乙氧基甲基)-8-氟异喹啉(25.0g，76.18mmol，1.0当量)在丙酮：水(250mL；250mL)中的搅拌溶液中添加对甲苯磺酸(1.32g，7.62mmol，0.1当量)且将溶液加热至80℃，搅拌6h。TLC显示完全转化且将反应混合物蒸发以完全去除丙酮。水相用饱和NaHCO3溶液碱化且形成的沉淀用DCM(3 x 50mL)萃取。合并的有机相用盐水洗涤，用Na₂SO₄干燥，过滤且蒸发以得到所需产物7-溴-8-氟异喹啉-3-甲醛，其为黄色固体(13.98g，72％)。LC-MS(ES)m/z＝253.9，255.9[M+H]⁺.¹H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 8.08(d，J＝9.2Hz，1H)，8.15(t，J＝6.4Hz，1H)，8.60(s，1H)，9.63(s，1H)，10.17(s，1H)。

步骤5：运行1：在80℃将7-溴-8-氟异喹啉-3-甲醛(3.0g，11.81mmol，1.0当量)和4-甲基苯磺酰肼(2.41g，12.99mmol，1.1当量)在1,4-二噁烷(60mL)中的溶液搅拌2h。添加磷酸钾(3.76g，17.71mmol，1.5当量)和(3,4-二氟苯基)硼酸(3.73g，23.62mmol，2.0当量)且加热至110℃且搅拌16h。将反应物质调节至室温，且蒸发溶剂。粗物质在EtOAc和饱和NaHCO3之间分配。分离两层且水相用EtOAc(2 x 10mL)萃取。合并的有机层用饱和NaHCO3、盐水溶液洗涤，用Na₂SO₄干燥且过滤。在减压下去除溶剂且粗产物通过硅胶快速色谱法纯化。所需产物在6％EtOAc:Hex中洗脱。具有纯的产物的收集的级分合并且真空浓缩以得到所需产物7-溴-3-(3,5-二氟苄基)-8-氟异喹啉(0.609g，15％)，其为淡黄色固体。LC-MS(ES)m/z＝352.1，354.1[M+H]⁺.¹H NMR(400MHz，CDCl3)δppm 4.27(s，2H)，6.65–6.70(m，1H)，6.82(d，J＝6.4Hz，2H)，7.43–7.45(m，2H)，7.72–7.76(m，1H)，9.48(s，1H)。

运行2：在80℃将7-溴-8-氟异喹啉-3-甲醛(3.0g，11.81mmol，1.0当量)和4-甲基苯磺酰肼(2.41g，12.99mmol，1.1当量)在1,4-二噁烷(60mL)中的溶液搅拌2h。添加磷酸钾(3.76g，17.71mmol，1.5当量)和(3,4-二氟苯基)硼酸(3.73g，23.62mmol，2.0当量)且加热至110℃且搅拌16h。将反应冷却至室温，且蒸发溶剂。粗物质在EtOAc和饱和NaHCO3之间分配。分离两层且水相用EtOAc(2 x 10mL)萃取。合并的有机层用饱和NaHCO3、盐水溶液洗涤，用Na₂SO₄干燥且过滤。在减压下去除溶剂且粗产物通过硅胶快速色谱法纯化。所需产物在6％EtOAc:Hex中洗脱。将具有纯的产物的收集的级分合并且真空浓缩以得到所需产物7-溴-3-(3,5-二氟苄基)-8-氟异喹啉(0.52g，13％)，其为淡黄色固体。LC-MS(ES)m/z＝352.1，354.1[M+H]⁺.¹H NMR(400MHz，CDCl3)δppm 4.27(s，2H)，6.65–6.70(m，1H)，6.82(d，J＝6.4Hz，2H)，7.43–7.45(m，2H)，7.72–7.76(m，1H)，9.48(s，1H)。

步骤6：将7-溴-3-(3,5-二氟苄基)-8-氟异喹啉(1.1g，3.12mmol，1.0当量)、4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-二(1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷)(1.03g，4.06mmol，1.3当量)、乙酸钾(0.92g，9.37mmol，3.0当量)和PdCl2(dppf)-CH₂Cl₂加合物(0.13g，0.16mmol，0.05当量)在40mL1,4-二噁烷中的混合物在氩气下脱气5分钟。且在油浴中在100℃加热16h。混合物通过硅藻土过滤且硅藻土垫用DCM洗涤。将滤液真空浓缩。有机层用Na₂SO₄干燥，过滤，且真空浓缩。粗产物通过硅胶快速色谱法纯化。所需产物在8％EtOAc:Hex中洗脱。将包含纯的产物的级分合并且浓缩以得到所需产物3-(3,5-二氟苄基)-8-氟-7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)异喹啉(0.39g，32％)，其为白色固体。将不纯的级分浓缩以得到收获物-2(0.36g，～60％纯)。LC-MS(ES)m/z＝318.1[M+H]⁺-81.¹H NMR(400MHz，CDCl3)δppm 1.39(s，12H)，4.26(s，2H)，6.65–6.70(m，1H)，6.82–6.84(m，2H)，7.43(s，1H)，7.48(d，J＝8.4Hz，1H)，7.89-7.93(m，1H)，9.51(s，1H)。

步骤7：将3-(3,5-二氟苄基)-8-氟-7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)异喹啉(0.3g，0.75mmol，1.0当量)、5-溴-7-乙基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(0.145g，0.601mmol，0.8当量)、Pd₂(dba)₃(0.036g，0.04mmol，0.05当量)和K₃PO₄(0.319g，1.50mmol，2.0当量)在25mL二噁烷和1.0mL水中的混合物在氩气下脱气5分钟，然后添加三-(叔丁基)鏻四氟硼酸盐(0.022g，0.08mmol，0.1当量)。混合物在110℃加热1h。将反应混合物冷却至环境温度且通过硅藻土过滤。硅藻土垫用5％MeOH：DCM洗涤。滤液用Na₂SO₄干燥，过滤且蒸发。粗产物通过硅胶快速色谱法纯化。所需产物在3％MeOH：DCM中洗脱。将包含纯的产物的级分合并且浓缩以得到所需产物(0.16g，49％)，其为灰白色固体。LC-MS(ES)m/z＝434.2[M+H]⁺.¹H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 1.38(t，J＝7.2Hz，3H)，4.22(q，J＝7.2Hz，2H)，4.29(s，2H)，6.13(br.s.，2H)，7.01–7.08(m，3H)，7.49(s，1H)，7.73(t，J＝8.0Hz，1H)，7.80(d，J＝8.4Hz，1H)，7.84(s，1H)，8.13(s，1H)，9.42(s，1H)。

实施例7、8和9

(7-(4-氨基-7-环丙基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)-8-氟异喹啉-3-基)(3,5- 二氟苯基)甲醇及其对映异构体

步骤1：向5-溴-7-环丙基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(3.0g，11.85mmol，1当量)在THF(40mL)中的搅拌溶液中添加Boc酸酐(6.8mL，29.6mmol，2.5当量)，然后添加DMAP(0.3g，2.3mmol，0.2当量)。将反应混合物在室温搅拌24h。将溶剂完全蒸发且粗物质用乙酸乙酯萃取。有机层用硫酸钠干燥，过滤且蒸发以得到N,N-二(叔丁氧基羰基)5-溴-7-环丙基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(5g，93.1％产率)。LCMS(ES)m/z＝453.1，455.10[M+H]⁺.¹HNMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 1.03–1.06(m，4H)，1.38(s，9H)，1.43(s，9H)，3.63–3.69(m，1H)，7.88(s，1H)，8.78(s，1H)。

步骤2：向N,N-二(叔丁氧基羰基)5-溴-7-环丙基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(4.0g，8.83mmol，1当量)在1,4-二噁烷(40mL)中的搅拌溶液中添加4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷(5.1mL，35.30mmol，4当量)和三乙胺(5mL，35.30mmol，4当量)。反应混合物脱气5分钟。添加X-Phos(0.42g，0.8mmol，0.1当量)，然后添加Pd₂(dba)₃(0.8g，0.8mmol，0.1当量)且反应混合物进一步脱气5分钟。将反应混合物加热至100℃保持6h。将反应混合物冷却至室温且完全蒸发以得到粗化合物，将其通过硅胶快速柱色谱法纯化。化合物在50％EtOAc：己烷中洗脱出来。将级分蒸发以得到N,N-二(叔丁氧基羰基)7-环丙基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(3.3g，粗物质)，其为黄色固体。LCMS(ES)m/z＝401.2[M+H]⁺-100.

步骤3：在多颈圆底烧瓶中将(7-溴-8-氟异喹啉-3-基)(3,5-二氟苯基)甲醇(0.3g，0.814mmol，1.0当量)、N,N-二(叔丁氧基羰基)7-环丙基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(0.36g，0.73mmol，0.9当量)和磷酸钾(0.345g，1.628mmol，2当量)在1,4-二噁烷：水(16mL：4mL)中的混合物用N₂鼓泡15min。添加Pd₂(dba)₃(0.037g，0.040mmol，0.05当量)和三叔丁基鏻四氟硼酸盐(0.023g，0.0814mmol，0.1当量)且在100℃加热2h。反应混合物冷却且通过硅藻土床过滤。分离有机层且水层用EtOAc萃取。合并的有机层用盐水溶液洗涤，用Na₂SO₄干燥，过滤且蒸发以得到粗产物。粗产物通过硅胶快速柱色谱法纯化。化合物在2.0％MeOH：DCM中洗脱出来。将纯的级分蒸发以得到N,N-二(叔丁氧基羰基(7-(4-氨基-7-环丙基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)-8-氟异喹啉-3-基)(3,5-二氟苯基)甲醇(0.4g，粗物质)，其为粘性化合物。LCMS(ES)m/z＝662.2[M+H]⁺.

步骤4：在-0℃向N,N-二(叔丁氧基羰基(7-(4-氨基-7-环丙基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)-8-氟异喹啉-3-基)(3,5-二氟苯基)甲醇(0.4g，0.60mmol，1eq)在DCM(10mL)中的搅拌溶液中滴加三氟乙酸(4mL)。将反应混合物在室温搅拌3h。反应完成后，将混合物蒸发，且将残余物溶于DCM，且用饱和碳酸氢钠溶液洗涤。有机层用Na₂SO₄干燥，过滤且蒸发以得到粗产物。粗产物通过硅胶快速柱色谱法纯化。化合物在5％MeOH：DCM中洗脱出来。产物进一步通过制备型HPLC纯化。条件：柱：Intersill ODA 3V(250mm x 20mm x 5mic)，流动相(A):0.1％氨水，流动相(B)：ACN，流速19mL/min。将纯的级分蒸发以得到(7-(4-氨基-7-环丙基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)-8-氟异喹啉-3-基)(3,5-二氟苯基)甲醇(0.038g,14％)，其为白色固体。LCMS(ES)m/z＝462.1[M+H]⁺.¹H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 1.04–1.05(m，4H)，3.59(bs，1H),5.94(d,J＝4.0Hz,1H)，6.13(bs，2H),6.47(d，J＝4.0Hz，1H)，7.04(s，1H)，7.14(d，J＝6.8Hz，2H),7.34(s，1H),7.73(t，J＝7.8Hz，1H),7.89(d，J＝8.4Hz，1H),8.09(s，1H)，8.14(s，1H),9.37(s，1H)。HPLC：99.56％纯度，通过HPLC@242nM.

步骤5：异构体的手性分离：

将0.132g外消旋化合物(7-(4-氨基-7-环丙基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)-8-氟异喹啉-3-基)(3,5-二氟苯基)甲醇通过手性制备型HPLC分离，条件：柱：CHIRALPAK IC(250mm x 20mm x 5mic)；流动相：具有0.1％DEA的正己烷：EtOH(50:50)；流速：15.0mL/min。将在保留时间8.67分钟的纯级分浓缩以得到对映异构体1，其为灰白色固体(0.026g，39％产率)。LCMS(ES)m/z＝462.1[M+H]⁺.¹H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 0.99–1.05(m，4H)，3.58–3.60(m，1H)，5.94(d，J＝4.0Hz，1H)，6.13(br.s.，2H)，6.47(d，J＝4.4Hz，1H)，7.04(t，J＝9.2Hz，1H)，7.14(d，J＝7.2Hz，2H)，7.34(s，1H)，7.73(t，J＝7.2Hz，1H)，7.89(d，J＝8.4Hz，1H)，8.09(s,,1H)，8.14(s，1H)，9.37(s，1H)：HPLC分析条件：柱：CHIRALPAK IC(250mm x 4.6mm x 5mic)；流动相：具有0.1％DEA的正己烷：EtOH(50:50)；流速：1.0mL/min；99.99％纯度，保留时间5.965分钟@282nm。将在保留时间11.423分钟的纯的级分浓缩以得到对映异构体2，其为灰白色固体(0.028g，42％产率)。LCMS(ES)m/z＝462.1[M+H]⁺.¹HNMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 0.99–1.05(m，4H)，3.56–3.62(m，1H)，5.94(d，J＝4.0Hz，1H)，6.13(br.s.，2H)，6.47(d，J＝4.4Hz，1H)，7.04(t，J＝9.2Hz，1H)，7.14(d，J＝7.2Hz，2H)，7.34(s，1H)，7.73(t，J＝7.2Hz，2H)，7.89(d，J＝8.4Hz，1H)，8.09(s，1H)，8.14(s，1H)，9.37(s，1H)：HPLC分析条件：柱：CHIRALPAK IC(250mm x 4.6mm x 5mic)；流动相：具有0.1％DEA的正己烷：EtOH(50:50)；流速：1.0mL/min；98.53％纯度，保留时间6.432分钟(6.028分钟，1.47％对映体1)@282nm

实施例10:

7-环丙基-5-(3-(3,5-二氟苄基)-5-氟异喹啉-7-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4- 胺

步骤1：运行1；在0℃向2-氨基-3-氟苯甲酸(1.0g，6.45mmol，1.0当量)在氯仿(10mL)中的搅拌溶液中滴加溴(0.36mL，70.9mmol，1.1当量)在氯仿中的溶液。反应混合物逐渐温热至室温且搅拌过夜。沉淀的固体在真空过滤。残余物用DCM充分洗涤且真空干燥以得到2-氨基-5-溴-3-氟苯甲酸氢溴化物，其为灰白色固体(2.5g粗物质)。LCMS(ES)m/z＝234.1，236.1[M+H]⁺.¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 4.8–6.4(br.s)，7.48–7.51(m,1H)，7.61(s，1H)。

运行2；在0℃向2-氨基-3-氟苯甲酸(6.9g，44.5mmol，1.0当量)在氯仿(70mL)中的搅拌溶液中滴加溴(2.5mL，48.96mmol，1.1当量)在氯仿中的溶液。反应混合物逐渐温热至室温且搅拌过夜。沉淀的固体在真空过滤。残余物用DCM彻底洗涤且真空干燥以得到2-氨基-5-溴-3-氟苯甲酸氢溴化物，其为灰白色固体(12g粗物质)。LCMS(ES)m/z＝233.9，235.9[M+H]⁺.¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 5.8–6.8(br.s)，7.46–7.49(m,1H)，7.60(s，1H)

步骤2：运行1；在0℃向2-氨基-5-溴-3-氟苯甲酸氢溴化物(2.5g，7.98mmol，1.0当量)在硫酸(2mL)中的搅拌溶液中添加HCl(2mL)。滴加亚硝酸钠(0.55g，7.98mmol，1当量)在水(7mL)中的溶液且在相同温度搅拌1小时。添加碘化钾(2.65g，15.97mmol，2当量)在水(8mL)中的溶液且在室温再搅拌3小时。将反应混合物真空过滤。残余物用水彻底洗涤且真空干燥以得到5-溴-3-氟-2-碘代苯甲酸(0.8g，30％)，其为棕色固体。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 7.65(s，1H)，7.71–7.73(m,1H)，13.77(s，1H)。

运行2：在0℃向2-氨基-5-溴-3-氟苯甲酸氢溴化物(12g，38.33mmol，1.0当量)在硫酸(12mL)中的搅拌溶液中添加HCl(12mL)。滴加亚硝酸钠(0.55g，38.33mmol，1当量)在水(10mL)中的溶液且在相同温度搅拌1小时。将碘化钾(12.72g，76.67mmol，2当量)在水(10mL)中的溶液添加至其中且在室温再搅拌3小时。将反应混合物真空过滤。残余物用水彻底洗涤且真空干燥以得到5-溴-3-氟-2-碘代苯甲酸(6.5g粗物质)，其为黄色固体。LCMS(ES)m/z＝344.9，346.9[M+H]⁺.

步骤3：运行1；在0℃向5-溴-3-氟-2-碘代苯甲酸(0.8g，2.32mmol，1.0当量)在THF(15mL)中的搅拌溶液中添加硼烷-二甲硫复合物(1.1mL，11.6mmol，5当量)。将反应混合物温热至室温且搅拌过夜。反应混合物用甲醇逐滴淬灭且完全蒸发以得到粗(5-溴-3-氟-2-碘苯基)甲醇(0.6g粗物质)，其为灰白色固体。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 4.42(d，J＝5.6Hz，2H)，5.64(t，J＝6.0Hz)，7.42(s,1H)，7.46–7.48(m，1H)。

运行2：在0℃向5-溴-3-氟-2-碘代苯甲酸(6g，17.44mmol，1.0当量)在THF(50mL)中的搅拌溶液中添加硼烷-二甲硫复合物(6.6mL，87.2mmol，5当量)。将反应混合物温热至室温且搅拌过夜。反应混合物用甲醇逐滴淬灭且完全蒸发以得到粗(5-溴-3-氟-2-碘苯基)甲醇(3.8g，66.6％)，其为灰白色固体。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 4.42(d，J＝5.6Hz，2H)，5.64(t，J＝6.0Hz)，7.42(s,1H)，7.45–7.47(m，1H)。

步骤4：运行1；在室温向(5-溴-3-氟-2-碘苯基)甲醇(0.2g，0.606mmol，1.0当量)在DCM(10mL)中的搅拌溶液中添加二氧化锰(0.37g，4.24mmol，7当量)且搅拌24小时。反应混合物通过硅藻土过滤且滤液完全蒸发以得到5-溴-3-氟-2-碘苯甲醛(0.16g，80.8％)，其为灰白色固体。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 7.72(s,1H)，7.92–7.93(m，1H)，9.91(s，1H)。

运行2：在室温向(5-溴-3-氟-2-碘苯基)甲醇(3.6g，10.9mmol，1.0当量)在DCM(40mL)中的搅拌溶液中添加二氧化锰(6.6g，76.3mmol，7当量)且搅拌24小时。反应混合物通过硅藻土过滤且滤液完全蒸发以得到5-溴-3-氟-2-碘苯甲醛(3.3g，92％)，其为灰白色固体。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 7.72(s,1H)，7.92–7.93(m，1H)，9.91(s，1H)。

步骤5：运行1；在室温向5-溴-3-氟-2-碘苯甲醛(0.16g，0.48mmol，1.0当量)在水(0.12mL)中的搅拌溶液中添加2-甲基丙-2-胺(0.16mL，1.46mmol，3当量)且搅拌12小时。将溶剂完全蒸发且粗物质用乙酸乙酯萃取。有机层用硫酸钠干燥且蒸发以得到粗1-(5-溴-3-氟-2-碘苯基)-N-(叔丁基)甲亚胺(0.2g粗物质)，其为油性化合物。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 1.25(s，9H)，7.68(d，J＝7.6Hz，1H)，7.74(s，1H)，8.33(s，1H)。

运行2：在室温向5-溴-3-氟-2-碘苯甲醛(2.8g，8.5mmol，1.0当量)在水(2.1mL)中的搅拌溶液中添加2-甲基丙-2-胺(2.7mL，25.6mmol，3当量)且搅拌12小时。将溶剂完全蒸发且粗物质用乙酸乙酯萃取。有机层用硫酸钠干燥且蒸发以得到粗1-(5-溴-3-氟-2-碘苯基)-N-(叔丁基)甲亚胺(3g粗物质)，其为油性化合物。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 1.25(s，9H)，7.65–7.68(m,1H)，7.73–7.74(m，1H)，8.34(s，1H)。

步骤6：向1-(5-溴-3-氟-2-碘苯基)-N-(叔丁基)甲亚胺(3g，7.8mmol，1.0当量)在三乙胺(20mL)中的搅拌溶液中添加(1.2g，9.3mmol，1.2当量)3,3-二乙氧基丙-1-炔。反应混合物用N₂气吹洗且添加二(三苯基膦)二氯化钯(II)(0.11g，0.156mmol，0.02当量)，然后添加碘化铜(0.03g，0.156mmol，0.02当量)。反应混合物进一步用N2气吹洗且加热至55℃保持2小时。将反应混合物冷却至室温且通过硅藻土过滤。滤液完全蒸发以得到粗1-(5-溴-2-(3，3-二乙氧基丙-1-炔-1-基)-3-氟苯基)-N-(叔丁基)甲亚胺(3.0g)，其为粘性固体。¹HNMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 1.15(t，J＝6.8Hz，6H)，1.23(s，9H)，3.57–3.61(m，2H)，3.66–3.70(m，2H)，5.63(s，1H)，7.78(d，J＝8.0Hz，1H)，7.87(s，1H)，8.53(s，1H)。

步骤7：向1-(5-溴-2-(3,3-二乙氧基丙-1-炔-1-基)-3-氟苯基)-N-(叔丁基)甲亚胺(3g，7.8mmol，1.0当量)在DMF中的搅拌溶液中添加碘化铜(0.15g，0.78mmol，0.1当量)。将反应混合物加热至100℃保持6小时。将反应混合物冷却至室温且通过硅藻土过滤。滤液用水处理且在乙酸乙酯中萃取。有机层用硫酸钠干燥且蒸发以得到粗物质，其通过硅胶快速柱色谱法纯化。化合物在30％EtOAc：己烷中洗脱出来。将纯的级分蒸发以得到7-溴-3-(二乙氧基甲基)-5-氟异喹啉(1.4g，56％)，其为灰白色固体。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm1.15(t，J＝7.2Hz，6H)，3.60(q，J＝7.2Hz，4H)，5.60(s，1H)，7.91–7.94(m，2H)，8.32(s，1H)，9.35(s，1H)。

步骤8：在室温向7-溴-3-(二乙氧基甲基)-5-氟异喹啉(1.4g，4.26mmol，1.0当量)在丙酮：水(10mL：10mL)中的搅拌溶液中添加对甲苯磺酸(0.08g，0.426mmol，0.1当量)。将反应混合物加热至80℃保持12小时。将反应混合物冷却至室温且蒸发溶剂。反应混合物用饱和NaHCO3溶液中和且在DCM中萃取。有机层用硫酸钠干燥且蒸发以得到粗化合物，其在乙醚中研磨。将沉淀的固体过滤且真空干燥以得到7-溴-5-氟异喹啉-3-甲醛(0.8g，74％)，其为棕色固体。LCMS(ES)m/z＝254.0，256.0[M+H]⁺.¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 8.08–8.11(m，1H)，8.45–8.46(m，2H)，9.54(s，1H)，10.16(s，1H)。

步骤9：运行1；在室温向7-溴-5-氟异喹啉-3-甲醛(0.05g，0.196mmol，and 1.0当量)在THF(5mL)中的搅拌溶液中滴加3,5-二氟苯基溴化镁(0.5M在THF中)(0.6mL，1.5当量)且加热至50℃保持12小时。将反应混合物冷却至室温且用饱和氯化铵淬灭溶液。粗物质在乙酸乙酯中萃取。有机层用硫酸钠干燥且蒸发以得到油性化合物，其通过硅胶快速柱色谱法纯化。化合物在30％EtOAc：己烷中洗脱出来。将纯的级分蒸发以得到(7-溴-5-氟异喹啉-3-基)(3,5-二氟苯基)甲醇(0.025g，35％)，其为油性化合物。LCMS(ES)m/z＝368.0，370.0[M+H]⁺.¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 5.91(d，J＝4.8Hz，1H)，6.49(d，J＝4.8Hz，1H)，7.02–7.06(m，1H)，7.12–7.14(m，2H)，7.91(d，J＝9.6Hz，1H)，8.05(s，1H)，8.26(s，1H)，9.28(s，1H)。

运行2；在室温向7-溴-5-氟异喹啉-3-甲醛(0.65g，2.56mmol，and 1.0当量)在THF(25mL)中的搅拌溶液中滴加3,5二氟苯基溴化镁(0.5M在THF中)(7.7mL，1.5当量)且加热至50℃保持12小时。将反应混合物冷却至室温且用饱和氯化铵溶液淬灭。粗物质在乙酸乙酯中萃取。有机层用硫酸钠干燥且蒸发以得到油性化合物，其通过硅胶快速柱色谱法纯化。化合物在30％EtOAc：己烷中洗脱出来。将级分蒸发以得到(7-溴-5-氟异喹啉-3-基)(3,5-二氟苯基)甲醇(0.55g粗物质)，其为油性化合物。LCMS(ES)m/z＝368.0，370.0[M+H]⁺.¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 5.91(d，J＝4.8Hz，1H)，6.49(d，J＝4.8Hz，1H)，7.02–7.06(m，1H)，7.12–7.14(m，2H)，7.89–7.92(m，1H)，8.05(s，1H)，8.25(s，1H)，9.28(s，1H)。

步骤10：运行1；在0℃向(7-溴-5-氟异喹啉-3-基)(3,5-二氟苯基)甲醇(0.025g，0.06mmol，1.0当量)在DCM(5mL)中的搅拌溶液中滴加亚硫酰氯(5mL)。将反应混合物温热至室温且搅拌2小时。将溶剂完全蒸发且粗物质用正戊烷研磨。将沉淀的固体过滤且真空干燥以得到7-溴-3-(氯(3,5-二氟苯基)甲基)-5-氟异喹啉(0.02g粗物质)，其为棕色固体。LCMS(ES)m/z＝385.9，387.9[M+H]⁺.¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 6.72(s，1H)，7.18–7.23(m，1H)，7.34–7.35(m，2H)，7.98(d，J＝10Hz，1H)，8.15(s，1H)，8.31(s，1H)，9.38(s，1H)。

运行2；在0℃向(7-溴-5-氟异喹啉-3-基)(3,5-二氟苯基)甲醇(0.55g，1.49mmol，1.0当量)在DCM(10mL)中的搅拌溶液中滴加亚硫酰氯(10mL)。将反应混合物温热至室温且搅拌2小时。将溶剂完全蒸发且粗物质用正戊烷研磨。将沉淀的固体过滤且真空干燥以得到7-溴-3-(氯(3,5-二氟苯基)甲基)-5-氟异喹啉(0.58g粗物质)，其为棕色固体。LCMS(ES)m/z＝386.0，388.0[M+H]⁺.¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 6.72(s，1H)，7.21(t，J＝8.8Hz，1H)，7.34–7.35(m，2H)，7.98(d，J＝9.2Hz，1H)，8.15(s，1H)，8.31(s，1H)，9.38(s，1H)。

步骤11：运行1；在0℃向7-溴-3-(氯(3,5-二氟苯基)甲基)-5-氟异喹啉(0.02g，0.05mmol，1.0当量)在MeOH(5mL)中的搅拌溶液中添加锌金属粉末–325筛目(0.007g，0.05mmol，2.0当量)，然后添加氯化铵(0.006mg，0.05mmol，2.0当量)。将反应混合物温热至室温且搅拌2小时。反应混合物通过硅藻土过滤且滤液完全蒸发以得到粗7-溴-3-(3,5-二氟苄基)-5-氟异喹啉(0.02g粗物质)，其为粘性固体。LCMS(ES)m/z＝352.0，354.0[M+H]⁺.¹HNMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 4.28(s，2H)，7.01–7.06(m，3H)，7.85–7.93(m，2H)，8.26(s，1H)，9.31(s，1H)。

运行2；在0℃向7-溴-3-(氯(3,5-二氟苯基)甲基)-5-氟异喹啉(0.58g，1.5mmol，1.0当量)在MeOH(20mL)中的搅拌溶液中添加锌金属粉末–325筛目(0.3g，4.5mmol，3.0当量)，然后添加氯化铵(0.24mg，4.5mmol，3.0当量)。将反应混合物温热至室温且搅拌2小时。反应混合物通过硅藻土过滤且滤液完全蒸发以得到7-溴-3-(3,5-二氟苄基)-5-氟异喹啉(0.26g，50％)，其为灰白色固体。LCMS(ES)m/z＝352.0，354.0[M+H]⁺.¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 4.28(s，2H)，7.01–7.06(m，3H)，7.85(s，1H)，7.87–7.89(m，1H)，8.25(s，1H)，9.30(s，1H)。

步骤12：运行1；向7-溴-3-(3,5-二氟苄基)-5-氟异喹啉(0.03g，0.08mmol，1.0当量)在1,4-二噁烷中的搅拌溶液中添加二(频哪醇合)二硼(0.025g，0.093mmol，1.1当量)和乙酸钾(0.025g，0.255mmol，3.0当量)。反应混合物用N₂吹洗5分钟。添加PdCl₂(dppf)DCM(0.007g，0.008mmol，0.1当量)且反应混合物进一步用N₂吹洗5分钟且加热至100℃保持2小时。将反应混合物冷却至室温且将溶剂完全蒸发，所得粗物质通过硅胶快速柱色谱法纯化。化合物在30％EtOAc：己烷中洗脱出来。将级分蒸发以得到粗3-(3,5-二氟苄基)-5-氟-7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)异喹啉(0.03g粗物质)，其为粘性固体。LCMS(ES)m/z＝400.1[M+H]⁺.

运行2；向7-溴-3-(3,5-二氟苄基)-5-氟异喹啉(0.23g，0.65mmol，1.0当量)在1,4-二噁烷中的搅拌溶液中添加二(频哪醇合)二硼(0.18g，0.718mmol，1.1当量)和乙酸钾(0.19g，1.96mmol，3.0当量)。反应混合物用N₂吹洗5分钟。添加PdCl₂(dppf)DCM(0.53g，0.065mmol，0.1当量)且反应混合物进一步用N2吹洗5分钟且加热至100℃保持2小时。将反应混合物冷却至室温且将溶剂完全蒸发，所得粗物质通过硅胶快速柱色谱法纯化。化合物在30％EtOAc：己烷中洗脱出来。将级分蒸发以得到3-(3,5-二氟苄基)-5-氟-7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)异喹啉(0.14g，48.2％)，其为粘性固体。LCMS(ES)m/z＝400.1[M+H]⁺.¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 1.32(s，12H)，4.29(s，2H)，7.01–7.07(m，3H)，7.58(d，J＝10.0Hz，1H)，7.89(s，1H)，8.31(s，1H)，9.43(s，1H)。

步骤13：向3-(3,5-二氟苄基)-5-氟-7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)异喹啉(0.14g，0.35mmol，1.0当量)在1,4-二噁烷：H₂O(18mL：6mL)中的搅拌溶液中添加5-溴-7-环丙基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(0.062g，0.024mmol，0.7当量)和磷酸钾(0.15g，0.07mmol，2.0当量)。反应混合物用N₂吹洗5分钟且添加Pd₂(dba)₃(0.016g，0.017mmol，0.05当量)，然后添加P(t-Bu)₃HBF₄(0.010g，0.035mmol，0.1当量)。反应混合物进一步用N2吹洗5分钟且加热至100℃保持1小时。将反应混合物冷却至室温且将溶剂完全蒸发以得到粗产物，其通过硅胶快速柱色谱法纯化。化合物在3％MeOH：DCM中洗脱出来。将纯的级分蒸发以得到7-环丙基-5-(3-(3,5-二氟苄基)-5-氟异喹啉-7-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(0.06g，38.4％)，其为灰白色固体。LCMS(ES)m/z＝446.2[M+H]⁺.¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm1.01–1.08(m，4H)，3.58–3.62(m，1H)，4.29(s，2H)，6.26(br.s，2H)，7.01–7.06(m，3H)，7.46(s，1H)，7.69(d，J＝10.8Hz，1H)，7.86(s，1H)，7.92(s，1H)，8.17(s，1H)，9.31(s，1H)。

实施例11:

5-(3-(3,5-二氟苄基)-8-氟异喹啉-7-基)-7-(2,2-二氟环丙基)-7H-吡咯并[2, 3-d]嘧啶-4-胺

步骤1：在室温经10分钟向THF的搅拌溶液(50mL)滴加n-BuLi。所得黄色溶液在室温搅拌3h。将上述溶液冷却至-78℃且在-78℃经10分钟滴加4-甲基苯磺酰氯(6.0g，31.57mmole，1.0当量)在THF(30mL)中的溶液。反应混合物在-78℃搅拌30分钟。将反应混合物缓慢温热至室温且在室温再搅拌30分钟。反应混合物用NH4Cl溶液淬灭且用EtOAc萃取。有机层用硫酸钠干燥且蒸发以得到粗产物。粗产物通过硅胶快速柱色谱法纯化。化合物在正己烷中的10％EtOAc中洗脱出来以得到4-甲基苯磺酸乙烯酯(2.0g，32％)，其为无色液体。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δppm–2.45(s，3H)，4.66-4.68(m，1H)，4.86-4.90(m，1H)，6.57-6.62(m，1H)，7.33-7.36(m，2H)，7.80(d，J＝8.0Hz，2H)

步骤2：在120℃向4-甲基苯磺酸乙烯酯(1.1g，5.55mmol，1.0当量)、氟化钠(0.023g，0.55mmol，0.1当量)和二甲苯(0.5mL，0.5V)的混合物中经15分钟滴加2,2-二氟-2-(氟磺酰基)乙酸三甲基甲硅烷基酯(8.3g，33.3mmol，6当量)。将反应混合物在120℃搅拌2h。将反应混合物冷却至室温且通过硅胶快速柱色谱法纯化。化合物在正己烷中的10％EtOAc中洗脱出来以得到4-甲基苯磺酸2,2-二氟环丙基酯(0.85g，粗物质)，其为浅棕色液体。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δppm–1.58-1.67(m，2H)，2.47(s，3H)，4.21-4.27(m，1H)，7.36-7.38(m，2H)，7.81-7.84(m，2H)。

步骤3：在0℃向4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(0.52g，3.42mmol，1.0当量)在DMF(15mL)中的搅拌溶液中添加60％氢化钠(0.15g，3.76mmol，1.1当量)且在相同温度搅拌15分钟。在0℃将4-甲基苯磺酸2,2-二氟环丙基酯(0.85g，3.42mmol，1.0当量)在DMF(3mL)中的溶液添加至反应混合物。将反应混合物温热至室温且搅拌2h。反应混合物用冰水淬灭。粗物质用乙酸乙酯萃取。有机层用硫酸钠干燥且蒸发以得到粗物质，其通过硅胶快速柱色谱法纯化。化合物在正己烷中的10％EtOAc中洗脱出来以得到4-氯-7-(2,2-二氟环丙基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(0.1g，13％)，其为淡黄色固体。LCMS(ES)m/z＝230.0[M+H]⁺.¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm-2.39(m，2H)，4.39-4.46(m，1H)，6.70(d，J＝3.2Hz，1H)，7.76(d，J＝3.6Hz，1H)，8.69(s，1H)。

步骤4：在0℃向4-氯-7-(2,2-二氟环丙基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(0.1g，0.43mmol，1当量)在DCM(5mL)中的搅拌溶液中添加NBS(0.077g，0.43mmol，1.0当量)。将反应混合物温热至室温且搅拌2h。反应混合物用水淬灭且用乙酸乙酯萃取。有机层用硫酸钠干燥且蒸发以得到5-溴-4-氯-7-(2,2-二氟环丙基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(0.11g，82％)，其为淡黄色固体。LCMS(ES)m/z＝308.0，310.0[M+H.]⁺.¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm–2.30-2.55(m，2H)，4.39-4.45(m，1H)，8.07(s，1H)，8.73(s，1H)

步骤5：在室温，向5-溴-4-氯-7-(2,2-二氟环丙基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(0.1g，0.32mmol，1当量)在1,4-二噁烷(5mL)中的搅拌溶液中添加NH₄OH(5mL)。反应混合物在高压灭菌器中在100℃加热16h。将反应混合物冷却且将形成的固体过滤以得到5-溴-7-(2,2-二氟环丙基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(0.06g，65％)，其为淡黄色固体。LCMS(ES)m/z＝289.0，291.0[M+H.]⁺.¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm–2.24-2.43(m，2H)，4.19-4.26(m，1H)，6.77(br.s，2H)，7.45(s，1H)，8.12(s，1H)。

步骤6：向3-(3,5-二氟苄基)-8-氟-7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)异喹啉(0.075g，0.23mmol，1当量)在1,4-二噁烷(30mL)中的搅拌溶液中添加5-溴-7-(2,2-二氟环丙基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(0.055g，0.18mmol，0.8当量)、磷酸三钾(0.1g，0.47mmol，2.0当量)和水(0.2mL)。反应混合物用N₂脱气15分钟。添加Pd₂(dba)₃(0.01g，0.011mmol，0.05当量)和(tBut)₃HPBF₄(0.006g，0.023mmol，0.1当量)且用N₂再脱气5分钟。将反应混合物在100℃在密封容器中搅拌10h。将反应冷却至室温。将反应混合物蒸发以得到粗产物。粗产物通过硅胶快速柱色谱法纯化。化合物在3％MeOH:DCM中洗脱出来以得到5-(3-(3,5-二氟苄基)-8-氟异喹啉-7-基)-7-(2,2-二氟环丙基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(0.03g，26％)，其为灰白色固体。LCMS(ES)m/z＝482.1[M+H]⁺.¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm-2.30-2.38(m，2H)，4.29-4.37(m，3H)，6.26(br.s，2H)，7.04-7.06(m，3H)，7.46(s，1H)，7.72(t，J＝8.0Hz，1H)，7.80-7.84(m，2H)，8.18(s，1H)，9.42(s，1H)。

实施例12:

3-(3-(3,5-二氟苄基)-8-氟异喹啉-7-基)-7-氟-1-甲基-1H-吡咯并[3,2-c]吡 啶-4-胺

步骤1：将2-氯-5-氟-4-碘代吡啶(5g，19.42mmol，1当量)、氨基甲酸叔丁酯(2.39g，20.4mmol，1.05eq)和碳酸铯(12.66g，38.85mmol，2当量)在甲苯(120ml)中的搅拌溶液用N₂脱气10min。添加Pd₂(dba)₃(0.36g，0.39mmol，0.02当量)和Xantphos(0.34g，0.58mmol，0.03当量)且将反应混合物在100℃搅拌16h。起始材料消耗后，将反应混合物冷却至室温且通过硅藻土床过滤且用EtOAc(100mL)洗涤。滤液用水，盐水溶液洗涤且浓缩以得到粗产物。粗产物通过硅胶快速柱色谱法纯化。化合物在40％EtOAc：己烷中洗脱出来。将纯的级分蒸发以得到(2-氯-5-氟吡啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯，其为淡黄色固体(3.6g，75％)。LCMS(ES)m/z＝247.1[M+H]⁺.¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 1.47(s，9H)，7.98(d，J＝5.6Hz，1H)，8.28(d，J＝2.8Hz，1H)，9.95(s，1H)。

步骤2：在室温将(2-氯-5-氟吡啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(3.5g，14.2mmol)在60％TFA/DCM(25ml)中的溶液搅拌1h。起始材料消耗后，反应混合物真空浓缩以得到粗产物。粗产物用饱和碳酸氢钠溶液碱化且用EtOAc(2 x 100ml)萃取。有机层用硫酸钠干燥且真空蒸发以得到2-氯-5-氟吡啶-4-胺，其为淡黄色固体(1.9g，91.4％)。LCMS(ES)m/z＝147.1[M+H]⁺.¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 6.54(s，2H)，6.65(d，J＝6.0Hz，1H)，7.89(d，J＝2.8Hz，1H)。

步骤3：向2-氯-5-氟吡啶-4-胺(1.9g，12.97mmol，1当量)和乙酸钠(2.13g，25.94mmol，2当量)在乙酸(20ml)中的搅拌溶液中添加ICl(2.1g，12.97mmol，1当量)在乙酸(5ml)中的溶液且在70℃搅拌3小时。起始材料消耗后，将反应混合物倒入冰冷却的水且用EtOAc(2 x 100ml)萃取。有机层用饱和碳酸氢钠溶液和10％硫代硫酸钠溶液洗涤。有机层用硫酸钠干燥且真空蒸发以得到粗产物。粗产物通过硅胶快速柱色谱法纯化。化合物在40％EtOAc:己烷中洗脱出来。将纯的级分蒸发以得到2-氯-5-氟-3-碘代吡啶-4-胺，其为浅棕色固体(2.5g，70.6％)。LCMS(ES)m/z＝272.9[M+H]⁺.¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 6.63(s，2H)，7.93(d，J＝2.0Hz，1H)。

步骤4：在0℃向乙氧基乙炔(2.5g，35.7mmol，1当量)在DCM(60ml)中的搅拌溶液中添加4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷(5.69ml，39.2mmol，1.1当量)和二(环戊二烯基)氯化锆(IV)氢化物(0.55g，2.14mmol，0.06eq)。将反应混合物在室温搅拌12h。起始材料消耗后，将反应混合物通过顶部具有硅藻土层的中性氧化铝垫过滤且用DCM(50ml)洗涤。所得滤液真空蒸发以得到粗(E)-2-(2-乙氧基乙烯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷，其为棕色液体(6.5g)。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δppm 1.25(s，12H)，1.25–1.29(m，3H)，3.81–3.91(m，2H)，4.43(d，J＝14.4Hz，1H)，7.03(d，J＝14.8Hz，1H)。

步骤5：将2-氯-5-氟-3-碘代吡啶-4-胺(2g，7.34mmol，1当量)、(E)-2-(2-乙氧基乙烯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷(2.91g，14.62mmol，2当量)、磷酸钾(3.1g，14.62mmol，2当量)在乙腈：水(3:2，30ml：20ml)中的搅拌溶液用N₂脱气10分钟。添加乙酸钯(49.4mg，0.22mmol，0.03当量)和‘S’phos(226mg，0.55mmol，0.075当量)且将反应混合物在110℃搅拌16h。起始材料消耗后，将反应混合物冷却至室温且通过硅藻土床过滤且用EtOAc(100mL)洗涤。滤液用水洗涤，盐水溶液且浓缩以得到粗产物。粗产物通过硅胶快速柱色谱法纯化。化合物在60％EtOAc：己烷中洗脱出来。将纯的级分蒸发以得到(E)-2-氯-3-(2-乙氧基乙烯基)-5-氟吡啶-4-胺，其为淡黄色固体(1.4g，88％)。LCMS(ES)m/z＝217.1[M+H]⁺.¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 1.25(t，J＝6.8Hz，3H)，3.94(q，J＝6.8Hz，2H)，5.42(d，J＝13.2Hz，1H)，6.23(s，2H)，6.82(d，J＝12.8Hz，1H)，7.80(d，J＝2.4Hz，1H)。

步骤6：将(E)-2-氯-3-(2-乙氧基乙烯基)-5-氟吡啶-4-胺(1.4g，6.46mmol)在乙醇(22ml)和浓HCl(5ml)中的搅拌溶液在90℃搅拌2h。起始材料消耗后，将反应混合物冷却至室温且用碳酸氢钠水溶液碱化。水溶液用EtOAc(5x100mL)萃取。有机层用硫酸钠干燥且真空蒸发以得到粗产物。粗产物通过硅胶快速柱色谱法纯化。化合物在40％EtOAc:己烷中洗脱出来。将纯的级分蒸发以得到4-氯-7-氟-1H-吡咯并[3,2-c]吡啶，其为淡黄色固体(0.9g，81.1％)。LCMS(ES)m/z＝170.9[M+H]⁺.¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 6.62(d，J＝2.0Hz，1H)，7.64(s，1H)，7.98(d，J＝2.0Hz，1H)，12.55(s，1H)。

步骤7：向4-氯-7-氟-1H-吡咯并[3,2-c]吡啶(0.4g，2.34mmol，1当量)在DMF(10ml)中的搅拌溶液中添加NBS(0.42g，2.34mmol，1当量)且在室温搅拌3h。起始材料消耗后，反应混合物用乙酸乙酯(50ml)稀释，用水(2 x 50ml)和盐水溶液洗涤。有机层用硫酸钠干燥且真空蒸发以得到3-溴-4-氯-7-氟-1H-吡咯并[3,2-c]吡啶，其为淡黄色固体(550mg，94.2％)。LCMS(ES)m/z＝249.0，250.0[M+H]⁺.

步骤8：在0℃向3-溴-4-氯-7-氟-1H-吡咯并[3,2-c]吡啶(540mg，2.16mmol，1当量)在DMF(15ml)中的搅拌溶液中添加氢化钠(103.8mg，2.60mmol，1.2当量)且搅拌10分钟。添加碘甲烷(0.2ml，3.25mmol，1.5当量)且在室温搅拌2小时。起始材料消耗后，反应混合物用水淬灭且用EtOAc(2 x 25ml)萃取。有机层用硫酸钠干燥且真空蒸发以得到粗产物。粗产物通过硅胶快速柱色谱法纯化。化合物在50％EtOAc:己烷中洗脱出来。将纯的级分蒸发以得到3-溴-4-氯-7-氟-1-甲基-1H-吡咯并[3,2-c]吡啶，其为淡黄色固体(400mg，70.3％)。LCMS(ES)m/z＝262.9，264.9[M+H]⁺.¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 3.95(s，3H)，7.82(s，1H)，8.04(d，J＝3.2Hz，1H)。

步骤9：将3-溴-4-氯-7-氟-1-甲基-1H-吡咯并[3,2-c]吡啶(160mg，0.61mmol，1当量)、3-(3,5-二氟苄基)-8-氟-7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)异喹啉(266.6mg，0.67mmol，1.1eq)和磷酸钾(257.4mg，1.21mmol，2当量)在二噁烷:水(21ml：7ml)中的搅拌溶液用N₂脱气10分钟。添加Pd₂(dba)₃(27.8mg，0.03mmol，0.05当量)和P(t-Bu)₃HBF₄(17.6mg，0.06mmol，0.1当量)且将反应混合物在110℃搅拌2小时。起始材料消耗后，反应混合物用乙酸乙酯(25ml)稀释且用水和盐水溶液洗涤。有机层用硫酸钠干燥且真空蒸发以得到粗产物。粗产物通过硅胶快速柱色谱法纯化。化合物在70％EtOAc：己烷中洗脱出来。将纯的级分蒸发以得到7-(4-氯-7-氟-1-甲基-1H-吡咯并[3,2-c]吡啶-3-基)-3-(3,5-二氟苄基)-8-氟异喹啉，其为淡黄色固体(240mg，86％)。LCMS(ES)m/z＝456.1[M+H]⁺.¹HNMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 4.07(s，3H)，4.30(s，2H)，7.00–7.12(m，3H)，7.74–7.84(m，3H)，7.86(s，1H)，8.07(d，J＝3.2Hz，1H)，9.44(s，1H)。

步骤10：将7-(4-氯-7-氟-1-甲基-1H-吡咯并[3,2-c]吡啶-3-基)-3-(3,5-二氟苄基)-8-氟异喹啉(220mg，0.48mmol，1当量)、叔二苯基甲亚胺(0.1ml，0.58mmol，1.2eq)和叔丁醇钠(92.8mg，0.96mmol，2当量)在甲苯(20ml)中的搅拌溶液用N₂脱气10min。添加Pd₂(dba)₃(22.1mg，0.024mmol，0.05当量)和BINAP(45.1mg，0.072mmol，0.15当量)且将反应混合物在110℃搅拌16小时。起始材料消耗后，反应混合物用乙酸乙酯(25ml)稀释，用水和盐水溶液洗涤。有机层用硫酸钠干燥且浓缩以得到粗产物。粗产物用戊烷洗涤且真空干燥以得到粗N-(3-(3-(3,5-二氟苄基)-8-氟异喹啉-7-基)-7-氟-1-甲基-1H-吡咯并[3,2-c]吡啶-4-基)-1,1-二苯基甲亚胺(400mg)。(LCMS(ES)m/z＝601.2[M+H]⁺.

步骤11：向N-(3-(3-(3,5-二氟苄基)-8-氟异喹啉-7-基)-7-氟-1-甲基-1H-吡咯并[3,2-c]吡啶-4-基)-1,1-二苯基甲亚胺(400mg，0.66mmol，1当量)在甲醇(25ml)中的搅拌溶液中添加NH₂OH.HCl的水溶液(462.9mg，6.66mmol，10当量)和碳酸氢钠的水溶液(559.4mg，6.66mmol，10当量)。将反应混合物在室温搅拌3小时。起始材料消耗后，反应混合物真空浓缩以得到粗产物。粗产物溶于乙酸乙酯(50ml)，用水和盐水溶液洗涤。有机层用硫酸钠干燥且真空蒸发以得到粗产物。粗产物通过硅胶快速柱色谱法纯化。产物在3％MeOH：DCM中洗脱出来。将纯的级分蒸发以得到3-(3-(3,5-二氟苄基)-8-氟异喹啉-7-基)-7-氟-1-甲基-1H-吡咯并[3,2-c]吡啶-4-胺，其为淡黄色固体(45mg，15.5％)。LCMS(ES)m/z＝437.1[M+H]⁺.¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 3.96(s，3H)，4.30(s，2H)，5.04(s，2H)，7.02–7.08(m，3H)，7.44(s，1H)，7.57(d，J＝4.0Hz，1H)，7.72(t，J＝7.6Hz，1H)，7.81(d，J＝8.4Hz，1H)，7.85(s，1H)，9.43(s，1H)。

实施例13:

5-(3-(3,5-二氟苄基)-8-氟异喹啉-7-基)-7-(氧杂环丁烷-3-基)-7H-吡咯并[2, 3-d]嘧啶-4-胺

步骤1：将2-(4,6-二氯嘧啶-5-基)乙醛(1)(3.1g，16.2mmol，1.0当量)和2-氨基丙烷-1,3-二醇(2)(3.69g，37.3mmol，2.3当量)在EtOH(60mL)中的搅拌溶液回流2h。起始材料完成后，将反应混合物浓缩且将残余物溶于DCM(150mL)。DCM层用水和盐水溶液洗涤，用Na₂SO₄干燥，过滤且浓缩以得到粗产物。粗产物通过快速色谱法在硅胶上纯化且化合物用DCM中的5％MeOH洗脱以得到2-(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)丙烷-1,3-二醇(2.29g，59.7％)，其为灰白色固体。LC-MS(ES)m/z＝228.1[M+H]⁺.¹H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 3.05–3.01(m，1H)，3.27–3.20(m，1H)，3.66–3.55(m，3H)，4.05–3.94(m，2H)，5.00(t，J＝5.6Hz，1H)，5.20(d，J＝6.4Hz，1H)，8.46(s，1H)。

步骤2：在-78℃向2-(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)丙烷-1,3-二醇(3)(2.23g，9.69mmol，1.0当量)在THF(50mL)中的搅拌溶液中添加nBuLi(1.2M在THF中)(8.8mL，10.6mmol，1.1当量)且将混合物在该温度搅拌2h，然后在-78℃添加pTsCl(2.03g，10.6mmol，1.1当量)在THF(15mL)中的溶液且将混合物缓慢温热至0℃且在0℃搅拌2h。然后在0℃再次添加nBuLi(1.2M在THF中)(8.8mL，10.6mmol，1.1当量)且在60℃搅拌过夜。将反应混合物冷却至室温且用饱和NH₄Cl溶液淬灭且用EtOAc(3x150mL)萃取。合并的有机层用水和盐水溶液洗涤，用Na₂SO₄干燥，过滤且浓缩以得到粗产物。粗产物通过快速色谱法在硅胶上纯化且化合物用20％EtOAc/己烷洗脱。将包含纯化合物的级分浓缩以得到4-氯-7-(氧杂环丁烷-3-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(0.26g，13％)，其为白色固体。LC-MS(ES)m/z＝210.1[M+H]⁺.¹H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 5.02–4.97(m，4H)，5.96–5.89(m，1H)，6.75(d，J＝3.6Hz，1H)，8.13(d，J＝4.0Hz，1H)，8.63(s，1H)。

步骤3：在0℃向4-氯-7-(氧杂环丁烷-3-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(4)(0.1g，0.37mmol，1.0当量)在DCM(5mL)中的搅拌溶液中添加NBS(0.072g，0.4mmol，1.1当量)且将混合物在室温搅拌2h。起始材料消耗后，反应混合物用DCM(50mL)稀释且用水、饱和NaHCO₃溶液和盐水溶液洗涤。有机层用Na₂SO₄干燥，过滤且浓缩以得到粗5-溴-4-氯-7-(氧杂环丁烷-3-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(0.1g，粗物质)，其为灰白色固体。LC-MS(ES)m/z＝287.9，289.0[M+H]⁺.¹H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 5.00–4.93(m，4H)，5.95–5..88(m，1H)，8.41(s，1H)，8.66(s，1H)。

步骤4：5-溴-4-氯-7-(氧杂环丁烷-3-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(0.25g，0.86mmol，1.0当量)和NH₃水溶液(10mL)在1,4-二噁烷(10mL)中的溶液放入钢制反应釜中且加热至100℃，搅拌15h。起始材料消耗后，将反应混合物浓缩以得到5-溴-7-(氧杂环丁烷-3-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺，其为灰白色固体(0.24g，粗物质)。LC-MS(ES)m/z＝269.0，271.0[M+H]⁺.

步骤5：将3-(3,5-二氟苄基)-8-氟-7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)异喹啉(0.42g，1.07mmol，1.2当量)、5-溴-7-(氧杂环丁烷-3-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(0.24g，0.89mmol，1.0当量)和磷酸钾(0.37g，0.17mmol，2.0当量)在1,4-二噁烷：水(4mL：1mL)(20mL)中的搅拌溶液用N₂脱气15分钟，然后添加Pd₂(dba)₃(0.041g，0.044mmol，0.05当量)、三叔丁基鏻四氟硼酸盐(0.025g，0.089mmol，0.1当量)，且反应混合物进一步脱气5分钟。将反应混合物加热至100℃保持3h。反应混合物通过硅藻土过滤且滤液用Na₂SO₄干燥，过滤且浓缩以得到粗化合物。粗产物通过快速柱色谱法使用硅胶柱纯化且化合物以2％MeOH：DCM洗脱。将包含纯化合物的级分浓缩以得到5-(3-(3,5-二氟苄基)-8-氟异喹啉-7-基)-7-(氧杂环丁烷-3-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(0.185g，38％)，其为灰白色固体。LCMS(ES)m/z＝462.1[M+H]⁺.¹H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 4.30(s，2H)，5.03–4.96(m，4H)，5.91–5.84(m，1H)，6.24(bs，2H)，7.05(d，J＝8.0Hz，3H)，7.85–7.75(m，4H)，8.13(s，1H)，9.43(s，1H)。HPLC：99.33％纯度，在254nM.

实施例14:

7-环丙基-5-(3-(3,5-二氟苄基)-8-氟-4-甲基异喹啉-7-基)-7H-吡咯并[2,3-d] 嘧啶-4-胺

步骤1：在N₂气氛向1-(3-溴-2-氟-6-碘苯基)-N-(叔丁基)甲亚胺和丁-2-炔-1-醇在DMF中的搅拌溶液中添加Na₂CO₃和Pd(PPh₃)₄，然后加热至100℃保持3h。3h后，反应混合物用水稀释且用EtOAc(3x100mL)萃取。合并的有机层用水和盐水溶液洗涤，用Na₂SO₄干燥，过滤且浓缩以得到粗产物。粗产物通过快速柱色谱法使用硅胶柱纯化且化合物以40％EtOAc/己烷洗脱。将包含化合物的级分浓缩以得到(7-溴-8-氟-4-甲基异喹啉-3-基)甲醇(0.9g，12.9％)，其为淡黄色固体。LCMS(ES)m/z＝269.0，271.0[M+H]⁺.¹H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 4.77(d，J＝5.6Hz，2H)，5.20(t，J＝5.6Hz，1H)，7.99–7.90(m，2H)，9.28(s，1H)。

步骤2：在0℃向(7-溴-8-氟-4-甲基异喹啉-3-基)甲醇(0.8g，2.98mmol，1.0当量)在DCM(30mL)中的搅拌溶液中添加Dess–Martin高碘烷(2.53g，5.97mmol，2.0当量)且搅拌3h。起始材料消耗后，反应混合物倒入饱和NaHCO₃和Na₂S₂O₃溶液的1:1混合物溶液(200mL)中且搅拌30min。分离的有机层用水和盐水溶液洗涤，用Na₂SO₄干燥，过滤且浓缩以得到粗产物。粗产物通过快速柱色谱法使用硅胶柱纯化且化合物以20％EtOAc/己烷洗脱。将包含产物的级分浓缩以得到7-溴-8-氟-4-甲基异喹啉-3-甲醛，其为灰白色固体(0.41g，52％)LCMS(ES)m/z＝267.0，269.0[M+H]⁺.¹H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 2.95(s，3H)，8.18–8.13(m，2H)，9.50(s，1H)，10.33(s，1H)。

步骤3：将7-溴-8-氟-4-甲基异喹啉-3-甲醛(0.4g，1.5mmol，1.0当量)和甲苯磺酰基肼(0.3g，1.64mmol，1.1当量)在1,4-二噁烷(30mL)中的搅拌溶液加热至80℃且搅拌2h。起始材料消耗后，添加(3,5-二氟苯基)硼酸(0.7g，4.47mmol，3.0当量)和K₃PO₄(0.63g，3.0mmol，2.0当量)且将混合物加热至110℃保持4h。反应混合物用EtOAc(100mL)稀释且用水、饱和NaHCO₃溶液和盐水溶液洗涤，用Na₂SO₄干燥，过滤且浓缩以得到粗产物。粗产物通过快速色谱法在硅胶上纯化且化合物用10％EtOAc/己烷洗脱。将包含产物的级分浓缩以得到7-溴-3-(3,5-二氟苄基)-8-氟-4-甲基异喹啉(0.25g，45％)，其为灰白色固体。LC-MS(ES)m/z＝366.0，368.0[M+H]⁺.¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δppm 2.58(s，3H)，4.38(s，2H)，6.62(t，J＝9.2Hz，1H)，6.71(d，J＝6.4Hz，2H)，6.66(d，J＝8.8Hz，1H)，7.78(t，J＝7.2Hz，1H)，9.39(s，1H)。

步骤4：将N,N-二(叔丁氧基羰基)7-环丙基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(0.19g，0.52mmol，1.0当量)、7-溴-3-(3,5-二氟苄基)-8-氟-4-甲基异喹啉(0.31g，0.62mmol，1.2当量)和磷酸钾(0.264g，1.24mmol，2.0当量)在1,4-二噁烷：水(6mL：2mL)中的搅拌溶液用N₂脱气15分钟。添加Pd₂(dba)₃(0.028g，0.031mmol，0.05当量)和三叔丁基鏻四氟硼酸盐(0.018g，0.062mmol，0.1当量)且反应混合物进一步脱气5分钟。将反应混合物加热至100℃保持2h。反应混合物通过硅藻土过滤且滤液用Na₂SO₄干燥，过滤且浓缩以得到粗化合物。粗产物通过快速柱色谱法使用硅胶柱纯化。产物以30％EtOAc/己烷洗脱。将包含产物的级分浓缩以得到N,N-二(叔丁氧基羰基)7-环丙基-5-(3-(3,5-二氟苄基)-8-氟-4-甲基异喹啉-7-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(0.22g，55％)，其为灰白色固体。LCMS(ES)m/z＝660.3[M+H]⁺.¹H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 1.05(bs，22H)，2.60(s，3H)，3.78–3.74(m，1H)，4.43(s，2H)，6.87(d，J＝7.2Hz，2H)，7.02(t，J＝9.2Hz，1H)，7.76(t，J＝8.0Hz，1H)，7.91(d，J＝8.8Hz，1H)，7.96(s，1H)，8.82(s，1H)，9.28(s，1H)。

步骤5：在0℃向N,N-二(叔丁氧基羰基)7-环丙基-5-(3-(3,5-二氟苄基)-8-氟-4-甲基异喹啉-7-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(0.22g，0.33mmol，1.0当量)在DCM(10mL)中的搅拌溶液中添加4M HCl在二噁烷(3mL)中的溶液且在室温搅拌5h。起始材料完成后，反应混合物在减压下浓缩且使用饱和NaHCO₃溶液调节至pH～8。所得固体过滤且用乙醚洗涤且干燥以得到7-环丙基-5-(3-(3,5-二氟苄基)-8-氟-4-甲基异喹啉-7-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺，其为灰白色固体(0.11g，72％)。LCMS(ES)m/z＝460.2[M+H]⁺.¹H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 1.05–1.02(m，4H)，2.61(s，3H)，3.62–3.58(m，1H)，4.04(s，2H)，6.18(br.s.，2H)，6.92(d，J＝7.2Hz，2H)，7.04–6.98(m，1H)，7.37(s，1H)，7.76(t，J＝8.4Hz，1H)，7.97(d，J＝8.4Hz，1H)，8.16(s，1H)，9.32(s，1H)。HPLC：99.46％纯度在254nM.

大体根据方案1至6和实施例1至14中描述的方法制备化合物15至60。

表1.

实施例61：PERK酶测试

使用先前报道的条件的修改测定本发明化合物的PERK酶抑制活性(Axten等人J.Med.Chem.,2012,55,7193-7207)。简而言之，将各种浓度的化合物(最大1％DMSO)分配到含有GST-PERK酶的384孔板中。加入ATP和生物素-eIF2α，并且在60分钟后将反应淬灭。2小时后，使用荧光分析仪测量抑制，并计算pIC50。化合物1的活性以ATP浓度＝5μM测定。对于化合物2-20，PERK活性以ATP浓度＝500μM ATP测定。

实施例62-胶囊组合物

通过按表2中所示比例，用各成分填充标准双部分硬明胶胶囊，制备用于将本发明的化合物给药的口服剂型。

表2

实施例63-可注射肠胃外组合物

用于给药本发明的可注射形式通过将1.7％重量的5-(3-(3,5-二甲基苄基)异喹啉-7-基)-7-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(实施例2的化合物)在10％体积丙二醇水溶液中搅拌而制备。

实施例64片剂组合物

如下表3中所示的蔗糖、硫酸钙二水合物和PERK抑制剂与10％明胶溶液以显示的比例混合并造粒。将湿颗粒过筛、干燥、与淀粉、滑石和硬脂酸混合、过筛并压成片剂。

表3

生物活性

在上述测试中检测本发明化合物对PERK的活性。

实施例2至60的化合物大体根据上述PERK酶测试检测且在至少一个实验运行中显示针对PERK的平均PERK酶(500μM ATP)pIC50值：>5.4，除了实施例15、18、19、23、25、29和58，它们显示的pIC50<5.4。

实施例51的化合物大体根据上述PERK酶测试检测且在至少一组实验运行中显示针对PERK的平均PERK酶(500μM ATP)pIC50值为8.5。

实施例53的化合物大体根据上述PERK酶测试检测且在至少一组实验运行中显示针对PERK的平均PERK酶(500μM ATP)pIC50值为6.2。

实施例47的化合物大体根据上述PERK酶测试检测且在至少一组实验运行中显示针对PERK的平均PERK酶(500μM ATP)pIC50值为5.8。

实施例41的化合物大体根据上述PERK酶测试检测且在至少一组实验运行中显示针对PERK的平均PERK酶(500μM ATP)pIC50值为7.0。

实施例6的化合物大体根据上述PERK酶测试检测且在至少一组实验运行中显示针对PERK的平均PERK酶(500μM ATP)pIC50值为6.8。

实施例28的化合物大体根据上述PERK酶测试检测且在至少一组实验运行中显示针对PERK的平均PERK酶(500μM ATP)pIC50值为5.6。

实施例17的化合物大体根据上述PERK酶测试检测且在至少一组实验运行中显示针对PERK的平均PERK酶(500μM ATP)pIC50值为6.0。

实施例38的化合物大体根据上述PERK酶测试检测且在至少一组实验运行中显示针对PERK的平均PERK酶(500μM ATP)pIC50值为7.9。

实施例4的化合物大体根据上述PERK酶测试检测且在至少一组实验运行中显示针对PERK的平均PERK酶(500μM ATP)pIC50值为6.6。

实施例1的化合物大体根据上述PERK酶测试检测且在至少一组实验运行中显示针对PERK的平均PERK酶(5μM ATP)pIC50值为7.8。(注：实施例1的化合物在5μM ATP测试)。

虽然以上说明了本发明的优选实施例，但应该理解的是，本发明不限于在此公开的确切说明，并且保留落入所附权利要求范围内的所有修改的权利。

Claims (30)

1.在需要的哺乳动物中治疗选自以下的疾病的方法：癌症、癌前期综合征、脊髓损伤、外伤性脑损伤、缺血性中风、中风、糖尿病、代谢综合征、代谢疾病、亨廷顿疾病、克-雅病、致死性家族失眠、格-施-沙综合征、和相关朊病毒病、肌萎缩侧索硬化、进行性核上性麻痹、心肌梗塞、心血管疾病、炎症、器官纤维化、肝的慢性和急性疾病、脂肪肝疾病、肝脂肪变性、肝纤维化、肺的慢性和急性疾病、肺纤维化、肾的慢性和急性疾病、肾纤维化、慢性创伤性脑病(CTE)、神经变性、痴呆、额颞痴呆、认知缺损、动脉粥样硬化、眼病、心律失常、器官移植和移植用器官的运输，其包括向该哺乳动物给药治疗有效量的式I的化合物:

其中：

R¹选自：

双环杂芳基,

取代的双环杂芳基,

杂芳基，和

取代的杂芳基,

其中所述取代的双环杂芳基和所述取代的杂芳基取代有1至5个独立选自以下的取代基：

氟,

氯,

溴,

碘,

C_1-6烷基，

取代有1至5个独立选自以下的取代基的C_1-6烷基：氟、氯、溴、碘、C_1-4烷基氧基、-OH、C_1-4烷基、环烷基、-COOH、-CF₃、-NO₂、-NH₂和–CN，

-OH，

羟基C_1-6烷基,

-COOH，

四唑，

环烷基，

氧代，

-OC_1-6烷基,

-CF₃，

-CF₂H,

-CFH₂,

-C_1-6烷基OC_1-4烷基，

-CONH₂,

-CON(H)C_1-3烷基，

二C_1-4烷基氨基C_1-4烷基,

氨基C_1-6烷基,

–CN，

杂环烷基，

取代有1至4个独立选自以下的取代基的杂环烷基：C_1-4烷基、C_1-4烷基氧基、-OH、-COOH、-CF₃、-C_1-4烷基OC_1-4烷基、氧代、-NO₂、-NH₂和–CN,

-NO₂，

-NH₂，

-N(H)C_1-3烷基，和

-N(C_1-3烷基)₂；

R²选自：

芳基，

取代有1至5个独立选自以下的取代基的芳基：氟、氯、溴、碘、C_1-4烷基、环烷基、C_1-4烷基氧基、-OH、-COOH、-CF₃、-C_1-4烷基OC_1-4烷基、-NO₂、-NH₂、-OC(H)F₂、-C(H)F₂、-OCH₂F、–CH₂F、-CHF₂、-OCF₃和–CN，

杂芳基，

取代有1至5个独立选自以下的取代基的杂芳基：氟、氯、溴、碘、C_1-4烷基、环烷基、C_1-4烷基氧基、-OH、-COOH、-CF₃、-C_1-4烷基OC_1-4烷基、-NO₂、-NH₂、-OC(H)F₂、-C(H)F₂、-OCH₂F、–CH₂F、-OCF₃和–CN,

双环杂芳基，

取代有1至5个独立选自以下的取代基的双环杂芳基：氟、氯、溴、碘、C_1-4烷基、C_1-4烷基氧基、-OH、-COOH、-CF₃、-C_1-4烷基OC_1-4烷基、-NO₂、-NH₂、环烷基、-OC(H)F₂、-C(H)F₂、-OCH₂F、–CH₂F、-CHF₂、-OCF₃、-CN和环烷基；

R³、R⁴、R⁵和R⁶各自独立地选自氢、氟、氯、溴、碘、-CF₃和-CH₃；且

R⁷选自：氢、C_1-6烷基、环烷基、氨基C_1-6烷基-CF₃、-CH₃、氟、氯、溴和碘；且

X为O、S、C(＝O)、NR¹⁰⁰、CR²⁰⁰R³⁰⁰,

其中R¹⁰⁰选自氢、C_1-6烷基；

R²⁰⁰和R³⁰⁰独立地选自氢、-CH₃、-CF₃、-OH和-NH₂,

或R²⁰⁰和R³⁰⁰与它们连接的碳原子一起表示3或4元环烷基；

或其药学上可接受的盐。

2.权利要求1所述的方法，其中所述哺乳动物为人。

3.在需要的哺乳动物中抑制PERK活性的方法，其包括向该哺乳动物给药治疗有效量的权利要求1所述的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。

4.权利要求3所述的方法，其中所述哺乳动物为人。

5.根据式(II)的化合物:

其中：

R¹¹选自：

双环杂芳基,

取代的双环杂芳基,

杂芳基，和

取代的杂芳基,

其中所述取代的双环杂芳基和所述取代的杂芳基取代有1至5个独立选自以下的取代基：

氟,

氯,

溴,

碘,

C_1-6烷基，

取代有1至5个独立选自以下的取代基的C_1-6烷基：氟、氯、溴、碘、C_1-4烷基氧基、-OH、C_1-4烷基、环烷基、-COOH、-CF₃、-NO₂、-NH₂和–CN，

-OH，

羟基C_1-6烷基,

-COOH，

四唑，

环烷基，

氧代，

-OC_1-6烷基,

-CF₃，

-CF₂H,

-CFH₂,

-C_1-6烷基OC_1-4烷基，

-CONH₂,

-CON(H)C_1-3烷基，

二C_1-4烷基氨基C_1-4烷基,

氨基C_1-6烷基,

–CN，

杂环烷基，

取代有1至4个独立选自以下的取代基的杂环烷基：C_1-4烷基、C_1-4烷基氧基、-OH、-COOH、-CF₃、-C_1-4烷基OC_1-4烷基，氧代、-NO₂、-NH₂和–CN,

-NO₂，

-NH₂，

-N(H)C_1-3烷基，和

-N(C_1-3烷基)₂；

R¹²选自：

芳基，

取代有1至5个独立选自以下的取代基的芳基：氟、氯、溴、碘、C_1-4烷基、环烷基、C_1-4烷基氧基、-OH、-COOH、-CF₃、-C_1-4烷基OC_1-4烷基、-NO₂、-NH₂、-OC(H)F₂、-C(H)F₂、-OCH₂F、–CH₂F、-CHF₂、-OCF₃和–CN，

杂芳基，

取代有1至5个独立选自以下的取代基的杂芳基：氟、氯、溴、碘、C_1-4烷基、环烷基、C_1-4烷基氧基、-OH、-COOH、-CF₃、-C_1-4烷基OC_1-4烷基、-NO₂、-NH₂、-OC(H)F₂、-C(H)F₂、-OCH₂F、–CH₂F、-OCF₃和–CN,

双环杂芳基，

取代有1至5个独立选自以下的取代基的双环杂芳基：氟、氯、溴、碘、C_1-4烷基、C_1-4烷基氧基、-OH、-COOH、-CF₃、-C_1-4烷基OC_1-4烷基、-NO₂、-NH₂、环烷基、-OC(H)F₂、-C(H)F₂、-OCH₂F、–CH₂F、-CHF₂、-OCF₃、-CN和环烷基；

R¹³、R¹⁴、R¹⁵和R¹⁶各自独立地选自氢、氟、氯、溴、碘、-CF₃和-CH₃；且

R¹⁷选自：氢、C_1-6烷基、环烷基、氨基C_1-6烷基、-CF₃、-CH₃、氟、氯、溴和碘；且

X为O、S、C(＝O)、CR²⁵⁰R³⁵⁰,

R²⁵⁰和R³⁵⁰独立地选自氢、-CH₃、-CF₃、-OH、-NH₂,

或R²⁵⁰和R³⁵⁰与它们连接的碳原子一起表示3或4元环烷基；

或其药学上可接受的盐。

6.权利要求5所述的化合物，其中：

R¹²选自：

芳基，和

取代有1至5个独立选自以下的取代基的芳基：氟、氯、溴、碘、C_1-4烷基、环烷基、C_1-4烷基氧基、-OH、-COOH、-CF₃、-C_1-4烷基OC_1-4烷基、-NO₂、-NH₂、-OC(H)F₂、-C(H)F₂、-OCH₂F、–CH₂F、-CHF₂、-OCF₃和–CN；

或其药学上可接受的盐。

7.权利要求5或6所述的化合物，其中:

R¹¹选自：取代的吡咯并[2,3-d]嘧啶、取代的吡唑并[3,4-d]嘧啶和取代的吡咯并[3,2-c]吡啶；

或其药学上可接受的盐。

8.权利要求5至7任一项的化合物，其中：R¹⁴为氟。

或其药学上可接受的盐。

9.权利要求4所述的化合物，其选自:

5-(3-苄基异喹啉-7-基)-7-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺；

5-(3-(3,5-二甲基苄基)异喹啉-7-基)-7-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺；

5-(3-苄基-8-氟异喹啉-7-基)-7-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺；

5-(3-(3,5-二氟苄基)-8-氟异喹啉-7-基)-7-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺；

7-环丙基-5-(3-(2,3-二氟苄基)-8-氟异喹啉-7-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺；

5-(3-(3,5-二氟苄基)-8-氟异喹啉-7-基)-7-乙基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺；

(7-(4-氨基-7-环丙基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)-8-氟异喹啉-3-基)(3,5-二氟苯基)甲醇；

7-环丙基-5-(3-(3,5-二氟苄基)-5-氟异喹啉-7-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺；

5-(3-(3,5-二氟苄基)-8-氟异喹啉-7-基)-7-(2,2-二氟环丙基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺；

3-(3-(3,5-二氟苄基)-8-氟异喹啉-7-基)-7-氟-1-甲基-1H-吡咯并[3,2-c]吡啶-4-胺；

5-(3-(3,5-二氟苄基)-8-氟异喹啉-7-基)-7-(氧杂环丁烷-3-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺；

7-环丙基-5-(3-(3,5-二氟苄基)-8-氟-4-甲基异喹啉-7-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺；

(7-(4-氨基-7-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)异喹啉-3-基)(3,5-二甲基苯基)甲酮；

5-(3-(3,4-二氟苄基)-8-氟异喹啉-7-基)-7-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺；

5-(3-(2,5-二氟苄基)-8-氟异喹啉-7-基)-7-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺；

5-(8-氟-3-(3-氟-5-(三氟甲基)苄基)异喹啉-7-基)-7-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺；

5-(8-氟-3-(3-(三氟甲基)苄基)异喹啉-7-基)-7-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺；

7-环丙基-5-(8-氟-3-(3-氟苄基)异喹啉-7-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺；

7-环丙基-5-(8-氟-3-(4-氟苄基)异喹啉-7-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺；

7-环丙基-5-(3-(2,5-二甲基苄基)-8-氟异喹啉-7-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺；

5-(3-(3,5-二氟苄基)-8-氟异喹啉-7-基)-7-(2,2,2-三氟乙基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺；

5-(3-(3,5-二氟苄基)-8-氟异喹啉-7-基)-7-异丙基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺；

5-(3-(3,5-二氟苄基)-8-氟异喹啉-7-基)-2,7-二甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺；

7-环丙基-5-(3-(3,5-二氟苄基)-8-氟异喹啉-7-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺；

3-(3-(3,5-二氟苄基)-8-氟异喹啉-7-基)-1-甲基-1H-吡咯并[3,2-c]吡啶-4-胺；

7-环丙基-5-(3-(3,5-二氟苄基)-8-氟异喹啉-7-基)-2-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺；

1-环丙基-3-(3-(3,5-二氟苄基)-8-氟异喹啉-7-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺；

7-环丙基-5-(3-((3,5-二氟苯基)(甲氧基)甲基)-8-氟异喹啉-7-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺；

7-(2-(2-氨基乙氧基)乙基)-5-(3-(3,5-二氟苄基)-8-氟异喹啉-7-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺；

7-(2-氨基乙基)-5-(3-(3,5-二氟苄基)-8-氟异喹啉-7-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺；

7-环丙基-5-(3-(3-乙炔基-5-氟苄基)-8-氟异喹啉-7-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺；

7-环丙基-5-(3-(2,5-二氟苄基)-8-氟异喹啉-7-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺；

5-(3-(3,5-二氟苄基)-8-氟异喹啉-7-基)-7-(1-甲基哌啶-4-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺；

5-(3-(3,5-二氟苄基)-8-氟异喹啉-7-基)-7-(2-吗啉代乙基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺；

5-(3-(5-氯-2-甲基苄基)-8-氟异喹啉-7-基)-7-环丙基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺；

7-环丙基-5-(8-氟-3-(2-甲基苄基)异喹啉-7-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺；

5-(3-(3,5-二氟苄基)-8-氟异喹啉-7-基)-7-(1-甲基氮杂环丁烷-3-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺；

7-环丙基-5-(3-(1-(3,5-二氟苯基)乙基)-8-氟异喹啉-7-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺；

7-环丙基-5-(8-氟-3-(2-氟-5-(三氟甲基)苄基)异喹啉-7-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺；

5-(3-(3,5-二氟苄基)异喹啉-7-基)-7-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺；

5-(3-(3-氯苄基)-8-氟异喹啉-7-基)-7-环丙基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺；

5-(3-(2-氯苄基)-8-氟异喹啉-7-基)-7-环丙基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺；

7-环丙基-5-(8-氟-3-(3-氟-5-甲基苄基)异喹啉-7-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺；

7-环丙基-5-(3-(3,5-二氯苄基)-8-氟异喹啉-7-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺；

5-(3-(3,5-二氟苄基)-8-氟异喹啉-7-基)-7-(2-(二甲基氨基)乙基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺；

5-(8-氟-3-(3-氟苄基)异喹啉-7-基)-7-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺；

5-(3-(3-氯苄基)-8-氟异喹啉-7-基)-7-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺；

7-环丁基-5-(3-(3,5-二氟苄基)-8-氟异喹啉-7-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺；

5-(3-(3-氯-2-氟苄基)-8-氟异喹啉-7-基)-7-环丙基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺；

7-环丙基-5-(3-(2,3-二氟苄基)-8-氟异喹啉-7-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺；

7-环丙基-5-(8-氟-3-((5-氟吡啶-3-基)甲基)异喹啉-7-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺；

7-(环丙基甲基)-5-(3-(3,5-二氟苄基)-8-氟异喹啉-7-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺；

5-(3-(3,5-二氟苄基)-8-氟异喹啉-7-基)-7-(2-甲氧基乙基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺；

5-(3-(3,5-二氟苄基)-8-氟异喹啉-7-基)-7-((3-甲基氧杂环丁烷-3-基)甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺；

7-环丙基-5-(3-(3,5-二氟苄基)-8-氟异喹啉-7-基)-6-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺；

5-(3-(3,5-二氟苄基)-8-氟异喹啉-7-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺；

5-(3-(3,5-二氟苄基)-8-氟异喹啉-7-基)-7-乙基-6-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺；和

5-(3-(3-氯-5-氟苄基)-8-氟异喹啉-7-基)-7-环丙基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺；

或其药学上可接受的盐。

10.药物组合物，其包含根据权利要求5至9任一项的式(II)的化合物或其药学上可接受的盐和药学上可接受的赋形剂。

11.制备包含药学上可接受的赋形剂和有效量的权利要求5至9任一项所述的式(II)的化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物的方法，该方法包括将式(II)的化合物或其药学上可接受的盐与药学上可接受的赋形剂组合。

12.在需要的哺乳动物中治疗选自以下的疾病的方法：癌症、癌前期综合征、阿尔茨海默病、脊髓损伤、外伤性脑损伤、缺血性中风、中风、帕金森疾病、糖尿病、代谢综合征、代谢疾病、亨廷顿疾病、克-雅病、致死性家族失眠、格-施-沙综合征、和相关朊病毒病、肌萎缩侧索硬化、进行性核上性麻痹、心肌梗塞、心血管疾病、炎症、器官纤维化、肝的慢性和急性疾病、脂肪肝疾病、肝脂肪变性、肝纤维化、肺的慢性和急性疾病、肺纤维化、肾的慢性和急性疾病、肾纤维化、慢性创伤性脑病(CTE)、神经变性、痴呆、额颞痴呆、tau病变、皮克病、尼曼-皮克病、淀粉样变性、认知缺损、动脉粥样硬化、眼病、心律失常、器官移植和移植用器官的运输，其包括向该哺乳动物给药治疗有效量的根据权利要求5至9任一项的式(II)的化合物或其药学上可接受的盐。

13.权利要求12所述的方法，其中所述哺乳动物为人。

14.根据权利要求13所述的方法，其中所述癌症选自：脑癌(神经胶质瘤)、成胶质细胞瘤、星形细胞瘤、多形性成胶质细胞瘤、巴-佐综合征、考登病、莱-杜病、乳腺癌、结肠癌、头颈癌、肾癌、肺癌、肝癌、黑素瘤、卵巢癌、胰腺、腺癌、导管腺癌、腺鳞癌、腺泡细胞癌、胰高血糖素瘤、胰岛素瘤、前列腺癌、肉瘤和甲状腺癌。

15.权利要求5至9任一项所述的式(II)的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗癌症或减轻癌症的严重性的药物中的用途。

16.在需要的哺乳动物中抑制PERK活性的方法，其包括向该哺乳动物给药治疗有效量的根据权利要求5至9任一项的式(II)的化合物或其药学上可接受的盐。

17.权利要求16所述的方法，其中所述哺乳动物为人。

18.在需要的哺乳动物中治疗癌症的方法，其包括：向该哺乳动物给药治疗有效量的

a)权利要求1所述的式(I)的化合物，或其药学上可接受的盐；和

b)至少一种抗肿瘤剂。

19.权利要求18所述的方法，其中所述至少一种抗肿瘤剂选自：抗微管剂、铂配位络合物、烷化剂、抗生素试剂、拓扑异构酶II抑制剂、抗代谢物、拓扑异构酶I抑制剂、激素和激素类似物、信号转导途径抑制剂、非受体酪氨酸激酶血管发生抑制剂、免疫治疗剂、促凋亡试剂、细胞周期信号传递抑制剂、蛋白酶体抑制剂、和癌症代谢抑制剂。

20.权利要求18中所述的药物组合，其用于治疗。

21.权利要求18中所述的药物组合在制备用于治疗癌症的药物中的用途。

22.根据权利要求13所述的方法，其中所述癌症选自：乳腺癌、炎性乳腺癌、导管癌、小叶癌、结肠癌、胰腺癌、胰岛素瘤、腺癌、导管腺癌、腺鳞癌、腺泡细胞癌、胰高血糖素瘤、皮肤癌、黑素瘤、转移性黑素瘤、肺癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、鳞状上皮细胞癌、腺癌、大细胞癌、脑癌(神经胶质瘤)、成胶质细胞瘤、星形细胞瘤、多形性成胶质细胞瘤、巴-佐综合征、考登病、莱-杜病、威尔姆斯肿瘤、尤因肉瘤、横纹肌肉瘤、室管膜瘤、成神经管细胞瘤、头颈癌、肾癌、肝癌、黑素瘤、卵巢癌、胰腺癌、腺癌、导管腺癌、腺鳞癌、腺泡细胞癌、胰高血糖素瘤、胰岛素瘤、前列腺癌、肉瘤、骨肉瘤、骨巨细胞肿瘤、甲状腺癌、成淋巴细胞性T细胞白血病、慢性髓细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病、毛细胞白血病、急性成淋巴细胞性白血病、急性骨髓性白血病、慢性中性粒细胞性白血病、急性成淋巴细胞性T细胞白血病、浆细胞瘤、成免疫细胞性大细胞白血病、套细胞白血病、多发性骨髓瘤、巨核细胞白血病、多发性骨髓瘤、急性巨核细胞性白血病、前髓细胞性白血病、红白血病、恶性淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、成淋巴细胞性T细胞淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、成神经细胞瘤、膀胱癌、尿路上皮癌、外阴癌、子宫颈癌、子宫内膜癌、肾癌、间皮瘤、食管癌、唾液腺癌、肝细胞癌、胃癌、鼻咽癌、颊癌、口腔癌、GIST(胃肠道间质瘤)、神经内分泌癌症和睾丸癌。

23.根据权利要求13所述的方法，其中所述癌前期综合征选自：宫颈上皮内瘤样病变、意义不明的单克隆丙种球蛋白病(MGUS)、骨髓增生异常综合征、再生障碍性贫血、宫颈病变、皮肤痣(前黑素瘤)、前列腺上皮内(导管内)瘤形成(PIN)、原位导管癌(DCIS)、结肠息肉和严重的肝炎或肝硬化。

24.在需要的人中治疗眼病或减轻眼病严重性的方法，其包括向所述人给药治疗有效量的权利要求5至9任一项所述的式II化合物或其药学上可接受的盐。

25.根据权利要求24所述的方法，其中所述眼病选自：虹膜发红；新生血管性青光眼；翼状胬肉；血管化青光眼滤过性水泡；结膜乳头状瘤；与年龄相关的黄斑变性(AMD)有关的脉络膜新血管形成、近视、前葡萄膜炎、创伤或特发性眼病；黄斑水肿；糖尿病引起的视网膜新生血管形成；年龄相关的黄斑变性(AMD)；黄斑变性(AMD)；源自颈动脉疾病的眼部缺血综合征；眼部或视网膜动脉闭塞；镰状细胞视网膜病；早产儿视网膜病；伊尔斯病；和希佩尔-林道综合征。

26.根据权利要求24所述的方法，其中所述眼病选自：年龄相关的黄斑变性(AMD)和黄斑变性。

27.在需要的人中治疗神经变性或减轻神经变性严重性的方法，其包括向所述人给药治疗有效量的权利要求5至9任一项所述的式(II)的化合物或其药学上可接受的盐。

28.在运输移植用器官的过程中防止器官损伤的方法，其包括在运输过程中向容纳器官的溶液添加权利要求5至9任一项所述的式(II)化合物或其药学上可接受的盐。

29.药物组合物，其包含0.5至1,000mg权利要求1和5至9任一项定义的化合物或其药学上可接受的盐，和0.5至1,000mg药学上可接受的赋形剂。

30.组合，其包含：

a)权利要求1所述的式(I)的化合物，或其药学上可接受的盐；和

b)ATF-4调节化合物。