CN115087656A - Atf6调节剂及其用途 - Google Patents

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Abstract

提供了作为激活转录因子6(ATF6)的调节剂的化合物(I‑2)。这些化合物可以用作用于治疗通过ATF6介导的疾病或障碍的治疗剂，并且特别可以用于治疗病毒感染、神经变性疾病、血管疾病或癌症。(式(I‑2))

Description

ATF6调节剂及其用途
相关申请的交叉引用
本申请要求2019年10月9日提交的美国临时专利申请号62/913,125和2019年10月9日提交的美国临时专利申请号62/913,122的优先权益，将每个申请的公开文本通过引用以其整体特此并入本文。
技术领域
本公开文本总体上涉及可能用作激活转录因子6(ATF6)的调节剂的治疗剂。
ASCII文本文件序列表的提交
以下以ASCII文本文件提交的内容通过引用以其整体并入本文：计算机可读形式(CRF)的序列表(文件名：196052001540SEQLIST.TXT，记录日期：2020年10月8日，大小：1KB)。
背景技术
哺乳动物细胞的EP中错误折叠的蛋白的积累导致折叠机构变得不堪重负，并且导致应激反应。细胞试图通过将信号从ER发送到细胞核来减少ER蛋白负载，从而激活一个庞大的基因表达程序，从而增加了ER中的蛋白质折叠能力。然而，如果此系统失败并且无法重新建立稳态，则细胞会因参与细胞凋亡而死亡。未折叠蛋白反应(UPR)是一种进化保守的信号转导通路，所述通路响应于ER应激而保持蛋白质稳态。
三个相互交织的信号传导通路包括UPR：(1)PERK(蛋白激酶RNA样ER激酶)；(2)IRE1(需肌醇酶1α)；和(3)ATF6(激活转录因子6)(McKimpson,W.M.等人,Circ Res,2017,120(5):759-761)。ATF6通路的激活导致基因(如BIP(Grp78)、CHOP或XBP-1)的上调，从而增强了内质网折叠蛋白质或介导质量控制的能力。ATF6与IRE1合作起作用，因为ATF6的靶基因之一是XBP1(IRE1的关键底物)(Yoshida,H.等人,Cell,2001,107(7):881-891)。PERK发挥几种其他作用，包括暂停新蛋白质的产生，以暂时降低蛋白质折叠负担。
ATF6是定位于ER中的II型跨膜蛋白，作为ER应激传感器和转录因子发挥作用(Adachi,Y.等人,Cell Struct Funct,2008,33(1):75-89；Wu,J.等人,Dev Cell,2007,13(3):351-64)。当需求超过ER的折叠能力时，ATF6从ER被转移到高尔基体，在所述高尔基体中通过两种高尔基驻留蛋白酶(位点1和位点2蛋白酶(S1P和S2P))顺序裂解，将其N末端结构域(ATF6N)从要输入的高尔基膜释放到细胞核中，在所述细胞核中它激活其靶基因的转录(Ye,J.等人,Mol Cell,2000,6(6):1355-64)。这种激活涉及ATF6与称为ER应激反应元件(ERSE)的共有序列的结合。ERSE的共有序列是CCAATCGGCG GCGGCCACG(SEQ ID NO.1)。
与通过PERK和IRE1调节的UPR的其他臂不同，ATF6臂尚未与促凋亡信号传导实质性联系(Hetz,C.和Papa,F.R.2018；Sano,R.和Reed,J.C.2013)。相反，ATF6主要在所谓的“适应性UPR”中发挥作用，旨在促进急性生理性和病理性损伤后的细胞生理学的保护性、适应性重塑和恢复。作为适应性UPR的一部分，ATF6与多个其他应激响应信号传导通路整合，以针对多种类型的ER损伤灵敏地调整细胞生理学。
在UPR的背景下，这种整合可以通过ATF6与其他UPR调节的bZIP转录因子(如XBP1(Yamamoto,K.等人2007；Shoulders,M.D.等人2013)或ATF6b(Thuerauf,D.J.等人2007；Thuerauf,D.J.等人2004；Forouhan,M.等人2018；Pieper,L.A.等人2017)的异二聚化实现。ATF6也具有与其他bZIP转录因子异二聚化的潜力，所述其他转录因子通过涉及S1P/S2P依赖性蛋白水解的机制而被类似地调节，如CREB-H(Asada,R.等人2011；Zhang,K.等人2006)。除了异二聚化之外，ATF6信号传导还跟与其他转录因子(如NRF1、PGC1a、PPARa和ERRg)相互作用的其他应激响应信号传导通路整合(Chen,X.等人2016；Wu,J.等人2011；Misra,J.等人2013；Baird,L.等人2017)。
ATF6与经由多种机制的其他信号传导通路整合的能力反映了除了ER蛋白质稳态重塑之外，此UPR信号传导臂针对诱导ER应激的一系列病理性损伤协调保护性细胞应答的独特潜力。抑制和激活ATF6信号传导的新的药理学方法的建立提供了仔细分析参与针对癌症、自身免疫性疾病、神经变性、代谢疾病或I/R保护不同组织的ATF6信号传导的时机和程度的新的机会。
已经利用了一些操纵UPR的策略来定义ER应激与人类疾病之间可能的联系，且在癌症和神经变性方面获得巨大进展。
在癌症中，除了重塑肿瘤微环境和抗癌免疫应答(Song,M和Cubillos-Ruiz,J.R.2019)，以及影响癌症的其他中心标志(Urra,H.等人2016)外，肿瘤生长依赖于UPR作为一种选择性力量来驱动恶性转化(Cubillos-Ruiz,J.R.等人2016)。
例如，尽管有高剂量化学疗法、自体干细胞移植和新型药剂，但是多发性骨髓瘤(MM)仍然是基本上不可治愈的恶性肿瘤。蛋白酶体抑制剂(PI)(如硼替佐米)增加了MM患者的反应率和存活率。新诊断的MM对硼替佐米和地塞米松的总体患者反应率是约67％。在复发难治性MM中，反应率降至约40％-60％。因此，存在大量的对硼替佐米耐药的MM患者。MM细胞由于其大量的免疫球蛋白产生需要生理UPR基因的组成型表达而固有地对PI敏感。这似乎降低了其响应于PI诱导的内质网(ER)应激而诱导促凋亡/终末UPR的阈值。UPR诱导的标志之一是ER分子伴侣的转录和翻译增加。这些基因是通过UPR转录因子XBP1和ATF6诱导的。尽管已经显示XBP1剪接及其所致激活在PI处理的MM细胞中受到抑制，但是发现显示，PI处理没有减少2种XBP1靶基因产物GRP78和GRP94的高组成型表达，并且XBP1依赖性UPR靶基因ERdj4通常由PI诱导的观察结果表明，UPR在PI处理的MM细胞中保持功能。由于XBP1和ATF6二者可以与UPR靶基因的启动子中的ER应激反应元件结合，因此已经表明ATF6可以补偿PI处理的MM细胞中降低的XBP1活性。与此一致，已经表明，GRP78和GRP94的诱导在XBP1–/–B细胞中仅略有损害，并且GRP94的表达需要ATF6或XBP1，但不同时需要二者。有趣的是，先前的研究表明，XBP1预测了对硼替佐米的敏感性，并且其水平与对硼替佐米的敏感性成比例相关。最近，Harnoss JM等人使用遗传学和药理学破坏证明，在体外和在体内，IRE1a-XBP1通路在MM生长中起关键作用。实际上，证明使用小分子对IRE1α激酶活性的抑制是一种用于在临床上治疗MM的潜在的有效且安全的疗法M。
除了量以外，PI敏感性似乎还涉及MM细胞内免疫球蛋白折叠的效率。MM细胞系中ER驻留分子伴侣GRP78和GRP94的高组成型表达与专门分泌细胞功能需要生理UPR基因表达的报道一致。ER分子伴侣的水平升高是浆细胞的特征，并且它们的表达对于适当的抗体组装和分泌至关重要。已经显示GRP78与尚未与免疫球蛋白轻链缔合的免疫球蛋白重链稳定结合，并且有助于免疫球蛋白组装。此外，GRP78和GRP94二者均对免疫球蛋白轻链折叠和靶向未组装亚基以供降解很重要。在用PI和经典的ER应激药剂处理的MM细胞中GRP78和GRP94的表达仅略有增加的事实表明它们已经表达了近乎最大水平的细胞保护性UPR蛋白以充当分泌细胞。因此，对于在对ER的任何另外的应激后诱导终末UPR，这些细胞可能具有较低的阈值(与非分泌细胞相比)。因此，通过将硼替佐米与干扰UPR的药剂(如ATF6信号传导通路的调节剂)结合，可以使更具耐药性的骨髓瘤克隆以及其他非分泌恶性肿瘤对硼替佐米敏感。
另一方面，专门分泌细胞的蛋白质折叠能力在几种疾病中被压倒，这导致通过终末UPR信号传导引起细胞变性和死亡。例如，在分泌胰岛素的胰腺β细胞中的UPR信号传导失调导致过早的细胞丧失、胰岛素缺乏和糖尿病。尽管通常认为神经元不是经典的分泌细胞，但是异常聚集体的积累仍可能诱导神经元中的终末UPR并且导致神经变性(Hetz,C.和Saxena,S.2017)。在眼部疾病中和在神经元感光细胞的死亡中牵涉到ER应激(Kroeger,H.等人2019)。
此外，许多疾病导致循环受损，这可能导致各种器官(包括脑、心脏和肾脏)的缺血性病症(Benjamin,E.J.等人2018)。在这些情况下，长时间的缺血导致不可逆的损害，所述损害可以通过临床干预(通过再灌注恢复血液流动)来部分缓解(Hausenloy,D.J.和Yellon,D.M.2016)。虽然再灌注对于减轻持续缺血的损害是有必要的，但是已知再灌注本身会造成一些通常由活性氧(ROS)导致的另外的损害(Murphy,E.和Steenbergen,C.2008)。先前已经证明与缺血或缺血后再灌注(I/R)相关的细胞损伤的复杂性质会影响多种信号传导通路和转录因子的水平和活性。最近研究的一种I/R激活的通路涉及对蛋白质稳态的破坏。为了针对由I/R诱导的病理性ER应激进行保护，组织激活内源性适应性应激响应性信号传导通路，如未折叠蛋白反应(UPR)。
最近的证据突出显示了在多种疾病模型中UPR的ATF6臂在减轻与缺血/再灌注(I/R)损伤相关的不良结局中的保护作用(Kudo,T.等人2008；Oida,Y.等人2008；Prachasilchai,W.等人2009；Oida,Y.等人2010；Blackwood,E.A.等人2019；Yu,Z.等人2017；Bi,X.等人2018)，这表明在多种缺血相关障碍中ATF6是用激活剂化合物进行药理学干预的潜在治疗靶标(Plate,L.等人2016；Glembotski,C.C.等人2019)。
ATF6激活的转录靶标在多种疾病的发病和发展中起作用，所述疾病包括病毒感染、癌症、神经变性、阿尔茨海默病、脑缺血、遗传性小脑萎缩和共济失调、2型糖尿病和糖尿病性肾病、以及心血管疾病(如心肌萎缩、心力衰竭、缺血性心脏病和动脉粥样硬化)(Chu,W.S.等人,Diabetes,2007,56(3):856-62；Vekich,J.A.等人,J Mol Cell Cardiol,2012,53(2):259-67；Liu,C.L.等人,Int J Mol Med,2016,37(2):407-14)。因此，调节ATF6介导的转录可能提供了这些疾病和牵涉ATF6活性的其他疾病的治疗策略。
发明内容
在一个方面，提供了一种式(I-1)的化合物：
Figure BDA0003673001920000031
或其药学上可接受的盐，其中A、B、R1、n、L、R2、R3、R4、R5、R6、R7和R8是如本文详述的。
在一个方面，提供了一种式(I-2)的化合物：
Figure BDA0003673001920000032
或其药学上可接受的盐，其中A、B、L、n、R1、R7和R8是如本文所定义的。
在另一个方面，提供了一种治疗有需要的个体的通过激活转录因子6(ATF6)介导的疾病或障碍的方法，其中所述方法包括向所述个体施用有效量的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐或包含所述化合物的药物组合物。在一些实施方案中，通过激活转录因子6(ATF6)介导的疾病或障碍是病毒感染、癌症、神经变性疾病或血管疾病。在某些实施方案中，所述疾病或障碍是病毒感染、遗传性小脑萎缩和共济失调、阿尔茨海默病、2型糖尿病、糖尿病性肾病、心肌萎缩、心力衰竭、动脉粥样硬化、缺血、缺血性心脏病、或脑缺血。在一些实施方案中，特征在于激活转录因子6(ATF6)的疾病或障碍是癌症。在一些实施方案中，ATF6是ATF6α。
在另一个方面，提供了一种治疗有需要的个体的特征在于激活转录因子6(ATF6)的疾病或障碍的方法，其中所述方法包括向所述个体施用有效量的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐或包含所述化合物的药物组合物。在一些实施方案中，特征在于ATF6的激活的疾病或障碍是病毒感染、癌症、神经变性疾病或血管疾病。在某些实施方案中，所述疾病或障碍是病毒感染、遗传性小脑萎缩和共济失调、阿尔茨海默病、2型糖尿病、糖尿病性肾病、心肌萎缩、心力衰竭、动脉粥样硬化、缺血、缺血性心脏病、或脑缺血。在一些实施方案中，特征在于激活转录因子6(ATF6)的疾病或障碍是癌症。在一些实施方案中，ATF6是ATF6α。
在另一个方面，提供了一种治疗有需要的个体的癌症的方法，所述方法包括向所述个体施用治疗有效量的式(I-1)/(I-2)的化合物或其药学上可接受的盐或包含所述化合物的药物组合物。
在一些实施方案中，所述癌症是乳腺癌、结直肠癌、卵巢癌、前列腺癌、胰腺癌、肾癌、肺癌、黑色素瘤、纤维肉瘤、骨肉瘤、结缔组织肉瘤、肾细胞癌、巨细胞癌、鳞状细胞癌、白血病、皮肤癌、软组织癌、肝癌、胃肠道癌或腺癌。在一些实施方案中，所述个体中的一种或多种癌细胞是休眠的癌细胞。
在一些实施方案中，所述个体已经进行先前的治疗。在一些实施方案中，所述癌症对先前的治疗耐药或难治。在一些实施方案中，所述癌症对用以下的治疗耐药：泛素蛋白酶体通路抑制剂、紫杉烷、Cox-2抑制剂、铂类抗肿瘤药物、蒽环素、嘧啶类似物、拓扑异构酶抑制剂、mTOR抑制剂、免疫检查点抑制剂、或用于免疫肿瘤学的药剂。
在一些实施方案中，所述方法进一步包括施用辐射。在一些实施方案中，所述方法进一步包括施用第二抗癌剂。在一些实施方案中，所述第二抗癌剂靶向免疫检查点蛋白。
在另一个方面，提供了一种治疗有需要的个体的与血管生成相关的疾病或障碍的方法，其中所述方法包括向所述个体施用有效量的式(I-1)/(I-2)的化合物或其药学上可接受的盐或包含所述化合物的药物组合物。在一些实施方案中，所述方法进一步包括施用第二抗血管生成剂。
在本文公开的方法的一些实施方案中，所述方法进一步包括施用第二药剂，所述第二药剂调节未折叠蛋白反应或整合应激反应。在一些实施方案中，所述第二药剂抑制IRE1/XBP1通路。
在另一个方面，提供了一种调节(激活或抑制)个体中的ATF6的方法，所述方法包括向所述个体施用式(I-1)/(I-2)的化合物或其药学上可接受的盐或包含所述化合物的药物组合物。
在另一个方面，提供了一种调节(激活或抑制)细胞中的ATF6的方法，所述方法向所述细胞递送式(I-1)/(I-2)的化合物或其药学上可接受的盐或包含所述化合物的药物组合物。
还提供了包含以下的药物组合物：(A)本文详述的化合物，如式(I-1)/(I-2)的化合物或其药学上可接受的盐、或式(I-1)/(I-2)的化合物或其药学上可接受的盐；和(B)药学上可接受的载体或赋形剂。还提供了包含本文详述的化合物或其盐和任选地使用说明书的试剂盒。还提供了如本文详述的化合物或其药学上可接受的盐，其用于制造用于治疗特征在于ATF6的激活的疾病或障碍的药剂。在一些实施方案中，所述疾病或障碍是癌症、神经变性疾病、或血管疾病。在某些实施方案中，所述疾病或障碍是病毒感染、遗传性小脑萎缩和共济失调、阿尔茨海默病、2型糖尿病、糖尿病性肾病、心肌萎缩、心力衰竭、动脉粥样硬化、缺血、缺血性心脏病、或脑缺血。
具体实施方式
定义
对于在本文中使用，除非另有明确说明，否则术语“一个/一种(a或an)”等的使用是指一个/一种或多个/多种。
本文对“约”某一值或参数的提及包括(并且描述)针对该值或参数本身的实施方案。例如，提及“约X”的描述包括“X”的描述。
除非另有说明，否则如本文所用的“烷基”是指并且包括饱和直链(即，无支链)或支链单价烃链或其组合，具有指定的碳原子数(即，C1-C10意指一至十个碳原子)。具体的烷基是具有1至20个碳原子(“C1-C20烷基”)、具有1至10个碳原子(“C1-C10烷基”)、具有6至10个碳原子(“C6-C10烷基”)、具有1至6个碳原子(“C1-C6烷基”)、具有2至6个碳原子(“C2-C6烷基”)或具有1至4个碳原子(“C1-C4烷基”)的那些。烷基的例子包括但不限于如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、异丁基、仲丁基、正戊基、正己基、正庚基、正辛基、正壬基、正癸基等基团。
“烷氧基”是指R-O-基团，其中R是烷基；并且包括例如甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、叔丁氧基、仲丁氧基、正戊氧基、正己氧基、1,2-二甲基丁氧基等。
如本文所用的“芳基”或“Ar”是指具有单环(例如，苯基)或多个稠环(例如，萘基或蒽基)的不饱和芳族碳环基团，所述稠环可以是或可以不是芳族的。具体的芳基是具有6至14个环碳原子的那些(“C6-C14芳基”)。具有多于一个环且其中至少一个环是非芳族的芳基可以在芳族环位置或非芳族环位置处与母体结构连接。在一个变型中，具有多于一个环且其中至少一个环是非芳族的芳基在芳族环位置处与母体结构连接。
除非另有说明，否则如本文所用的“环烷基”是指并且包括饱和环状单价烃结构，其具有指定的碳原子数(即，C3-C10意指一至十个碳原子)。环烷基可以由一个环(如环己基)或多个环(如金刚烷基)组成。包含多于一个环的环烷基可以是稠合的、螺环的或桥接的、或其组合。具体的环烷基是具有3至12个环碳原子的那些。优选的环烷基是具有3至8个环碳原子(“C3-C8环烷基”)、具有3至6个碳原子(“C3-C6环烷基”)、或具有3至4个环碳原子(“C3-C4环烷基”)的环烃。环烷基的例子包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、降冰片基等。
“卤基”或“卤素”是指具有9至85的原子序数的17族系列元素。优选的卤基包括氟、氯、溴和碘的基团。在残基被多于一个卤素取代的情况下，它可以通过使用对应于所附接的卤素部分的数量的前缀来提及，例如，二卤代芳基、二卤代烷基、三卤代芳基等是指被两个(“二”)或三个(“三”)卤基取代的芳基和烷基，所述卤基可以是但不一定是相同的卤素；因此4-氯-3-氟苯基在二卤代芳基的范围内。每个氢被卤基替代的烷基称为“全卤代烷基”。优选的全卤代烷基是三氟甲基(-CF3)。类似地，“全卤代烷氧基”是指在构成烷氧基的烷基部分的烃中卤素替代每个H的烷氧基。全卤代烷氧基的例子是三氟甲氧基(-OCF3)。
术语“卤代烷基”是指具有一个或多个卤基取代基、或一个、两个或三个卤基取代基的烷基。卤代烷基的例子包括-CF3、-(CH2)F、-CHF2、-CH2Br、-CH2CF3和-CH2CH2F。
如本文所用的“杂芳基”是指具有1至14个环碳原子和至少一个环杂原子(包括但不限于杂原子，如氮、氧和硫的)的不饱和芳族环状基团。杂芳基可以具有单环(例如，吡啶基、呋喃基)或多个稠环(例如，吲嗪基、苯并噻吩基)，所述稠环可以是或可以不是芳族的。具体的杂芳基是具有1至12个环碳原子和1至6个独立地选自氮、氧和硫的环杂原子的5至14元环，具有1至8个环碳原子和1至4个独立地选自氮、氧和硫的环杂原子的5至10元环，或具有1至5个环碳原子和1至4个独立地选自氮、氧和硫的环杂原子的5、6或7元环。在一个变型中，具体的杂芳基是具有1至6个环碳原子和1至4个独立地选自氮、氧和硫的环杂原子的单环芳族5、6或7元环。在另一个变型中，具体的杂芳基是具有1至12个环碳原子和1至6个独立地选自氮、氧和硫的环杂原子的多环芳族环。具有多于一个环且其中至少一个环是非芳族的杂芳基可以在芳族环位置或非芳族环位置处与母体结构连接。在一个变型中，具有多于一个环且其中至少一个环是非芳族的杂芳基在芳族环位置处与母体结构连接。杂芳基可以在环碳原子或环杂原子处与母体结构连接。
如本文所用的“杂环”、“杂环的”或“杂环基”是指具有单环或多个稠环并且具有1至14个环碳原子和1至6个环杂原子(如氮、硫或氧)的饱和或不饱和非芳族环状基团等。包含多于一个环的杂环可以是稠合的、桥接的或螺环的或其任何组合，但是不包括杂芳基。杂环基可以任选独立地被一个或多个本文所述的取代基取代。具体的杂环基是具有1至13个环碳原子和1至6个独立地选自氮、氧和硫的环杂原子的3至14元环，具有1至11个环碳原子和1至6个独立地选自氮、氧和硫的环杂原子的3至12元环，具有1至9个环碳原子和1至4个独立地选自氮、氧和硫的环杂原子的3至10元环，具有1至7个环碳原子和1至4个独立地选自氮、氧和硫的环杂原子的3至8元环，或具有1至5个环碳原子和1至4个独立地选自氮、氧和硫的环杂原子的3至6元环。在一个变型中，杂环基包括具有1至2、1至3、1至4、1至5、或1至6个环碳原子和1至2、1至3、或1至4个独立地选自氮、氧和硫的环杂原子的单环3、4、5、6或7元环。在另一个变型中，杂芳基包括具有1至12个环碳原子和1至6个独立地选自氮、氧和硫的环杂原子的多环非芳族环。
“药学上可接受的载体”是指药物配制品中除了活性成分以外的对受试者无毒的成分。药学上可接受的载体包括但不限于缓冲剂、赋形剂、稳定剂或防腐剂。
如本文所用，“治疗”(“treatment”或“treating”)是用于获得有益或所需结果(包括临床结果)的方法。例如，有益或所需结果包括但不限于以下中的一种或多种：减少由疾病引起的症状、提高患有疾病的患者的生活质量、降低治疗疾病所需的其他药物的剂量、延迟疾病进展和/或延长个体的存活。关于癌症或其他不需要的细胞增殖，有益或所需结果包括缩小肿瘤(减小肿瘤大小)；降低肿瘤的生长速率(如抑制肿瘤生长)；减少癌细胞的数量；在一定程度上抑制、减缓或减慢并且优选停止癌细胞向外周器官的浸润；抑制(在一定程度上减慢并且优选停止)肿瘤转移；抑制肿瘤生长；预防或延迟肿瘤的发生和/或复发；和/或在一定程度上缓解与癌症相关的一种或多种症状。在一些实施方案中，有益或所需结果包括预防或延迟复发，如不需要的细胞增殖的复发。
如本文所用，化合物或其盐或药物组合物的“有效剂量”或“有效量”是足以实现有益或所需结果的量。对于预防性使用，有益或所需结果包括诸如以下的结果：消除或降低疾病的风险、减轻疾病的严重程度或延迟疾病的发作，所述疾病包括所述疾病的生化、组织学和/或行为症状、其并发症以及在所述疾病发展期间呈现出的中间病理表型。对于治疗性用途，有益或所需结果包括改善、缓解、减轻、延迟或减少由疾病引起的一种或多种症状；提高患有所述疾病的那些的生活质量；减少治疗所述疾病所需的其他药物的剂量；如经由靶向来增强另一种药物的作用；延迟疾病的进展；和/或延长存活。关于癌症或其他不需要的细胞增殖，有效量包含如下量：足以引起肿瘤缩小和/或降低肿瘤的生长速率(如抑制肿瘤生长)，或者预防或延迟其他不期望的细胞增殖。在一些实施方案中，有效量是足以延迟发展的量。在一些实施方案中，有效量是足以预防或延迟复发的量。可以在一次或多次施用中施用有效量，在癌症的情况下，药物或组合物的有效量可以：(i)减少癌细胞的数量；(ii)减小肿瘤大小；(iii)抑制、延缓、减缓到一定程度，优选地阻止癌细胞浸润到外周器官中；(iv)抑制(即，减缓到一定程度，优选地阻止)肿瘤转移；(v)抑制肿瘤生长；(vi)预防或延迟肿瘤的复发；和/或(vii)将与癌症相关的一种或多种症状缓解到一定程度。可以在一次或多次施用中施用有效剂量。出于本公开文本的目的，化合物或其盐或药物组合物的有效剂量是足以直接或间接地完成预防性或治疗性治疗的量。预期并且理解的是，化合物或其盐或药物组合物的有效剂量可以与或可以不与另一种药物、化合物或药物组合物结合实现。因此，可以在施用一种或多种治疗剂的情况下考虑“有效剂量”，并且如果与一种或多种其他药剂结合可以实现或实现了所需结果，则可以考虑以有效量给予单一药剂。
如本文所用，术语“个体”是哺乳动物，包括人。个体包括但不限于人、牛、马、猫、犬、啮齿类动物或灵长类动物。在一些实施方案中，所述个体是人。所述个体(如人)可能患有晚期疾病或较低程度的疾病，如低肿瘤负荷。在一些实施方案中，所述个体处于增殖性疾病(如癌症)的早期阶段。在一些实施方案中，所述个体处于增殖性疾病的晚期阶段(如晚期癌症)。
应理解，本文所述的方面和变型还包括“由方面和变型组成”和/或“基本上由方面和变型组成”。
将全文中的所有参考文献，如出版物、专利、专利申请和公开的专利申请，均通过引用以其整体并入本文。
化合物
式(I-1)
在一个方面，提供了一种式(I-1)的化合物：
Figure BDA0003673001920000071
或其药学上可接受的盐，其中：
R1是H、C1-C6烷基、C3-C8环烷基、或C1-C6卤代烷基；
n是0或1；
L是-CH2-或不存在；
B是-CH2CH2-、-CH＝CH-、或-C≡C-；
R2、R3、R4、R5和R6各自独立地是H、卤基、CN、-OH、-NH2、C1-6烷氧基、C1-C6烷基、或C1-C6卤代烷基；
或者R2、R4、R5和R6各自独立地是H、卤基、CN、-OH、-NH2、C1-6烷氧基、C1-C6烷基、或C1-C6卤代烷基并且R3与R1和它们附接的原子一起形成5或6元碳环，其中所述5或6元碳环是未经取代的或被一至三个选自以下的基团取代：卤基、CN、-OH、C1-C6烷基、和C1-C6卤代烷基；
A是
Figure BDA0003673001920000072
Ra是5或6元杂芳基，其中所述5或6元杂芳基是未经取代的或被一个至四个选自以下的基团取代：OH、卤基、C1-C6烷基和C1-C6烷氧基，
R7是H、C1-C6烷基或或C1-C6卤代烷基；并且
R8是H或C1-C6烷基。
在一个变型中提供了一种式(I-1)的化合物或其盐，其中带有R1的碳在R1不是H时(即，C1-C6烷基、C3-C8环烷基、或C1-C6卤代烷基)呈“S”构型。在另一个变型中提供了一种式(I-1)的化合物或其盐，其中带有R1的碳在R1不是H时(即，C1-C6烷基、C3-C8环烷基、或C1-C6卤代烷基)呈“R”构型。还包含式(I-1)的化合物的混合物，包括给定化合物的外消旋和非外消旋混合物、和不同化学式的两种或更多种化合物的混合物。
在本文的描述中，应理解部分的每个描述、变化、实施方案或方面可以与其他部分的每个描述、变化、实施方案或方面组合，就好像描述的每一种组合被具体地且单独地列出一样。例如，本文所提供的关于式(I-1)的R1的每个描述、变化、实施方案或方面可以与关于式(I-1)的A的每个描述、变化、实施方案或方面组合，就好像描述的每一种组合被具体地且单独地列出一样。
在式(I-1)的化合物的一些实施方案中，n是1并且R1是H。在一些实施方案中，n是1并且R1是C1-C6烷基。在其他实施方案中，n是1并且R1是C3-C8环烷基。在一些实施方案中，n是1并且R1是C1-C6卤代烷基。在某些实施方案中，n是1并且R1是甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、或叔丁基。在一些实施方案中，n是1并且R1是甲基。在一些实施方案中，n是1并且R1是乙基。在一些实施方案中，n是1并且R1是环丙基、环丁基、环戊基、或环己基。在一些实施方案中，n是1并且R1是环丙基。在式(I-1)的化合物的一些实施方案中，n是0。
在式(I-1)的化合物的一些实施方案中，L不存在。在其他实施方案中，L是-CH2-。
在一些实施方案中，n是1，L不存在，并且R1是H。在一些实施方案中，n是1，L不存在，并且R1是C1-C6烷基。在其他实施方案中，n是1，L不存在，并且R1是C3-C8环烷基。在一些实施方案中，n是1，L不存在，并且R1是C1-C6卤代烷基。在某些实施方案中，n是1，L不存在，并且R1是甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、或叔丁基。在一些实施方案中，n是1，L不存在，并且R1是甲基。在一些实施方案中，n是1，L不存在，并且R1是乙基。在一些实施方案中，n是1，L不存在，并且R1是环丙基、环丁基、环戊基、或环己基。在一些实施方案中，n是1，L不存在，并且R1是环丙基。
在式(I-1)的化合物的一些实施方案中，n是0并且L不存在。
在式(I-1)的化合物的一些实施方案中，n是1，L是-CH2-，并且R1是H。在一些实施方案中，n是1，L是-CH2-，并且R1是C1-C6烷基。在其他实施方案中，n是1，L是-CH2-，并且R1是C3-C8环烷基。在一些实施方案中，n是1，L是-CH2-，并且R1是C1-C6卤代烷基。在某些实施方案中，n是1，L是-CH2-，并且R1是甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、或叔丁基。在一些实施方案中，n是1，L是-CH2-，并且R1是甲基。在一些实施方案中，n是1，L是-CH2-，并且R1是乙基。在一些实施方案中，n是1，L是-CH2-，并且R1是环丙基、环丁基、环戊基、或环己基。在一些实施方案中，n是1，L是-CH2-，并且R1是环丙基。
在式(I-1)的化合物的一些实施方案中，n是0并且L是-CH2-。
在式(I-1)的一些实施方案中，R3与R1和它们附接的原子一起形成5或6元碳环。在一些实施方案中，R3与R1和它们所附接的原子一起形成未经取代的5元碳环。在一些实施方案中，R3与R1和它们所附接的原子一起形成未经取代的6元碳环。在一些实施方案中，R3与R1和它们所附接的原子一起形成被一个至三个选自以下的基团取代的5元碳环：卤基、CN、-OH、C1-C6烷基和C1-C6卤代烷基。在一些实施方案中，R3与R1和它们所附接的原子一起形成被一个至三个选自以下的基团取代的6元碳环：卤基、CN、-OH、C1-C6烷基和C1-C6卤代烷基。在一些实施方案中，R3与R1和它们所附接的原子一起形成5或6元杂环，其中所述5或6元杂环是未经取代的或被一至三个选自以下的基团取代：卤基、CN、-OH、C1-C6烷基和C1-C6卤代烷基。
在式(I-1)的化合物的一些实施方案中，L不存在，并且R3与R1和它们附接的原子一起形成5或6元碳环。在一些实施方案中，L不存在，并且R3与R1和它们所附接的原子一起形成未经取代的5元碳环。在一些实施方案中，L不存在，并且R3与R1和它们所附接的原子一起形成未经取代的6元碳环。在一些实施方案中，L不存在，并且R3与R1和它们所附接的原子一起形成被一至三个选自以下的基团取代的5元碳环：卤基、CN、-OH、C1-C6烷基和C1-C6卤代烷基。在一些实施方案中，L不存在，并且R3与R1和它们所附接的原子一起形成被一至三个选自以下的基团取代的6元碳环：卤基、CN、-OH、C1-C6烷基和C1-C6卤代烷基。在一些实施方案中，L不存在，并且R3与R1和它们所附接的原子一起形成5或6元杂环，其中所述5或6元杂环是未经取代的或被一至三个选自以下的基团取代：卤基、CN、-OH、C1-C6烷基和C1-C6卤代烷基。在一些实施方案中，L不存在，并且R3与R1和它们所附接的原子一起形成5元碳环，其中所述5元碳环是未经取代的或被卤基、CN、-OH、C1-C6烷基、或C1-C6卤代烷基取代并且R2、R4、R5和R6中的一个或两个独立地选自卤基、CN、C1-C6烷基和C1-C6卤代烷基。在某些实施方案中，L不存在，并且R3与R1和它们所附接的原子一起形成未经取代的5元碳环，并且R2、R4、R5和R6各自是H。在一个变型中，L不存在，并且R3与R1和它们所附接的原子一起形成5元碳环，当带有R1的碳呈“S”构型时。在另一个变型中，L不存在，并且R3与R1和它们所附接的原子一起形成5元碳环，当带有R1的碳呈“R”构型时。
在一些实施方案中，L是-CH2-，并且R1是C1-C6烷基。在其他实施方案中，L是-CH2-，并且R1是C3-C8环烷基。在一些实施方案中，L是-CH2-，并且R1是C1-C6卤代烷基。在某些实施方案中，L是-CH2-，并且R1是甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、或叔丁基。在一些实施方案中，L是-CH2-，并且R1是甲基。在一些实施方案中，L是-CH2-，并且R1是乙基。在一些实施方案中，L是-CH2-，并且R1是环丙基、环丁基、环戊基、或环己基。在一些实施方案中，L是-CH2-，并且R1是环丙基。在式(I-1)的化合物的一些实施方案中，L是-CH2-，并且R3与R1和它们附接的原子一起形成5或6元碳环。在一些实施方案中，L是-CH2-，并且R3与R1和它们所附接的原子一起形成未经取代的5元碳环。在一些实施方案中，L是-CH2-，并且R3与R1和它们所附接的原子一起形成未经取代的6元碳环。在一些实施方案中，L是-CH2-，并且R3与R1和它们所附接的原子一起形成被一至三个选自以下的基团取代的5元碳环：卤基、CN、-OH、C1-C6烷基、和C1-C6卤代烷基。在一些实施方案中，L是-CH2-，并且R3与R1和它们所附接的原子一起形成被一至三个选自以下的基团取代的6元碳环：卤基、CN、-OH、C1-C6烷基、和C1-C6卤代烷基。在一些实施方案中，L是-CH2-，并且R3与R1和它们所附接的原子一起形成5或6元杂环，其中所述5或6元杂环是未经取代的或被一至三个选自以下的基团取代：卤基、CN、-OH、C1-C6烷基、和C1-C6卤代烷基。在一些实施方案中，L是-CH2-，并且R3与R1和它们所附接的原子一起形成5元碳环，其中所述5元碳环是未经取代的或被卤基、CN、-OH、C1-C6烷基、或C1-C6卤代烷基取代并且R2、R4、R5和R6中的一个或两个独立地选自卤基、CN、C1-C6烷基、和C1-C6卤代烷基。在某些实施方案中，L是-CH2-，并且R3与R1和它们所附接的原子一起形成未经取代的6元碳环，并且R2、R4、R5和R6各自是H。在一个变型中，L是-CH2-，并且R3与R1和它们所附接的原子一起形成5或6元碳环，当带有R1的碳呈“S”构型时。在另一个变型中，L是-CH2-，并且R3与R1和它们所附接的原子一起形成5或6元碳环，当带有R1的碳呈“R”构型时。
在式(I-1)的化合物的一些实施方案中，n是1并且R1是H。在一些实施方案中，n是1并且R1是C1-C6烷基。在其他实施方案中，n是1并且R1是C3-C8环烷基。在一些实施方案中，n是1并且R1是C1-C6卤代烷基。在某些实施方案中，n是1并且R1是甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、或叔丁基。在一些实施方案中，n是1并且R1是甲基。在一些实施方案中，n是1并且R1是乙基。在一些实施方案中，n是1并且R1是环丙基、环丁基、环戊基、或环己基。在一些实施方案中，n是1并且R1是环丙基。在式(I-1)的化合物的一些实施方案中，n是1并且R3与R1和它们附接的原子一起形成5或6元碳环。在一些实施方案中，n是1并且R3与R1和它们所附接的原子一起形成未经取代的5元碳环。在一些实施方案中，n是1并且R3与R1和它们所附接的原子一起形成未经取代的6元碳环。在一些实施方案中，n是1并且R3与R1和它们附接的原子一起形成被一至三个选自以下的基团取代的5元碳环：卤基、CN、-OH、C1-C6烷基、和C1-C6卤代烷基。在一些实施方案中，n是1并且R3与R1和它们附接的原子一起形成被一至三个选自以下的基团取代的6元碳环：卤基、CN、-OH、C1-C6烷基、和C1-C6卤代烷基。在一些实施方案中，n是1并且R3与R1和它们附接的原子一起形成5或6元杂环，其中所述5或6元杂环是未经取代的或被一至三个选自以下的基团取代：卤基、CN、-OH、C1-C6烷基、和C1-C6卤代烷基。在式(I-1)的化合物的一些实施方案中，n是0。
在式(I-1)的化合物的一些实施方案中，L不存在。在其他实施方案中，L是-CH2-。在一些实施方案中，n是1，L不存在，并且R1是H。在一些实施方案中，n是1，L不存在，并且R1是C1-C6烷基。在其他实施方案中，n是1，L不存在，并且R1是C3-C8环烷基。在一些实施方案中，n是1，L不存在，并且R1是C1-C6卤代烷基。在某些实施方案中，n是1，L不存在，并且R1是甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、或叔丁基。在一些实施方案中，n是1，L不存在，并且R1是甲基。在一些实施方案中，n是1，L不存在，并且R1是乙基。在一些实施方案中，n是1，L不存在，并且R1是环丙基、环丁基、环戊基、或环己基。在一些实施方案中，n是1，L不存在，并且R1是环丙基。
在式(I-1)的化合物的一些实施方案中，n是1，L不存在，并且R3与R1和它们附接的原子一起形成5或6元碳环。在一些实施方案中，n是1，L不存在，并且R3与R1和它们所附接的原子一起形成未经取代的5元碳环。在一些实施方案中，n是1，L不存在，并且R3与R1和它们所附接的原子一起形成未经取代的6元碳环。在一些实施方案中，n是1，L不存在，并且R3与R1和它们附接的原子一起形成被一至三个选自以下的基团取代的5元碳环：卤基、CN、-OH、C1-C6烷基、和C1-C6卤代烷基。在一些实施方案中，n是1，L不存在，并且R3与R1和它们附接的原子一起形成被一至三个选自以下的基团取代的6元碳环：卤基、CN、-OH、C1-C6烷基、和C1-C6卤代烷基。在一些实施方案中，n是1，L不存在，并且R3与R1和它们附接的原子一起形成5或6元杂环，其中所述5或6元杂环是未经取代的或被一至三个选自以下的基团取代：卤基、CN、-OH、C1-C6烷基、和C1-C6卤代烷基。在一些实施方案中，n是1，L不存在，并且R3与R1和它们附接的原子一起形成5元碳环，其中所述5元碳环是未经取代的或被卤基、CN、-OH、C1-C6烷基、或C1-C6卤代烷基取代，并且R2、R4、R5和R6中的一个或两个独立地选自：卤基、CN、C1-C6烷基、和C1-C6卤代烷基。在某些实施方案中，n是1，L不存在，并且R3与R1和它们所附接的原子一起形成未经取代的5元碳环，并且R2、R4、R5和R6各自是H。在一个变型中，n是1，L不存在，并且R3与R1和它们附接的原子一起形成5元碳环，当带有R1的碳呈“S”构型时。在其他变型中，n是1，L不存在，并且R3与R1和它们附接的原子一起形成5元碳环，当带有R1的碳呈“R”构型时。
在式(I-1)的化合物的一些实施方案中，n是0并且L不存在。
在式(I-1)的化合物的一些实施方案中，n是1，L是-CH2-，并且R1是H。在一些实施方案中，n是1，L是-CH2-，并且R1是C1-C6烷基。在其他实施方案中，n是1，L是-CH2-，并且R1是C3-C8环烷基。在一些实施方案中，n是1，L是-CH2-，并且R1是C1-C6卤代烷基。在某些实施方案中，n是1，L是-CH2-，并且R1是甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、或叔丁基。在一些实施方案中，n是1，L是-CH2-，并且R1是甲基。在一些实施方案中，n是1，L是-CH2-，并且R1是乙基。在一些实施方案中，n是1，L是-CH2-，并且R1是环丙基、环丁基、环戊基、或环己基。在一些实施方案中，n是1，L是-CH2-，并且R1是环丙基。在式(I-1)的化合物的一些实施方案中，n是1，L是-CH2-，并且R3与R1和它们附接的原子一起形成5或6元碳环。在一些实施方案中，n是1，L是-CH2-，并且R3与R1和它们所附接的原子一起形成未经取代的5元碳环。在一些实施方案中，n是1，L是-CH2-，并且R3与R1和它们所附接的原子一起形成未经取代的6元碳环。在一些实施方案中，n是1，L是-CH2-，并且R3与R1和它们附接的原子一起形成被一至三个选自以下的基团取代的5元碳环：卤基、CN、-OH、C1-C6烷基、和C1-C6卤代烷基。在一些实施方案中，n是1，L是-CH2-，并且R3与R1和它们附接的原子一起形成被一至三个选自以下的基团取代的6元碳环：卤基、CN、-OH、C1-C6烷基、和C1-C6卤代烷基。在一些实施方案中，n是1，L是-CH2-，并且R3与R1和它们附接的原子一起形成5或6元杂环，其中所述5或6元杂环是未经取代的或被一至三个选自以下的基团取代：卤基、CN、-OH、C1-C6烷基、和C1-C6卤代烷基。在一些实施方案中，n是1，L是-CH2-，并且R3与R1和它们附接的原子一起形成5元碳环，其中所述5元碳环是未经取代的或被卤基、CN、-OH、C1-C6烷基、或C1-C6卤代烷基取代，并且R2、R4、R5和R6中的一个或两个独立地选自：卤基、CN、C1-C6烷基、和C1-C6卤代烷基。在某些实施方案中，n是1，L是-CH2-，并且R3与R1和它们所附接的原子一起形成未经取代的5元碳环，并且R2、R4、R5和R6各自是H。在一个变型中，n是1，L是-CH2-，并且R3与R1和它们附接的原子一起形成5元碳环，当带有R1的碳呈“S”构型时。在其他变型中，n是1，L是-CH2-，并且R3与R1和它们附接的原子一起形成5元碳环，当带有R1的碳呈“R”构型时。
在式(I-1)的化合物的一些实施方案中，n是0并且L是-CH2-。
在式(I-1)的化合物的一些实施方案中，R1是H。在一些实施方案中，R1是C1-C6烷基。在其他实施方案中，R1是C3-C8环烷基。在一些实施方案中，R1是C1-C6卤代烷基。在某些实施方案中，R1是甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、或叔丁基。在一些实施方案中，R1是甲基。在一些实施方案中，R1是乙基。在一些实施方案中，R1是环丙基、环丁基、环戊基、或环己基。在一些实施方案中，R1是环丙基。在式(I-1)的化合物的一些实施方案中，R3与R1和它们附接的原子一起形成5或6元碳环。在一些实施方案中，R3与R1和它们附接的原子一起形成5元碳环。在某些实施方案中，R3与R1和它们附接的原子一起形成5元碳环，并且R2、R4、R5和R6各自是H。
在式(I-1)的化合物的一些实施方案中，R2、R3、R4、R5和R6各自独立地是H、卤基、CN、C1-C6烷基、或C1-C6卤代烷基。在一些实施方案中，R2、R3、R4、R5和R6各自独立地是H、Cl、CN、或CF3。在一些实施方案中，R4和R5各自独立地是Cl、Br、I、CN、C1-C6烷基、或C1-C6卤代烷基。在一些实施方案中，R2、R3、R4、R5和R6中的一个不是H。在一些实施方案中，R2、R3、R4、R5和R6中的两个不是H。在一些实施方案中，R2、R3、R4、R5和R6中的至少两个不是H。在一些实施方案中，R2、R3、R4、R5和R6中的一个是CN。在一些实施方案中，R6是CN。在一些实施方案中，R2、R3、R4、R5和R6中的一个是CF3。在一些实施方案中，R2、R3、R4、R5和R6中的两个是CF3。在一些实施方案中，R2和R6各自是CF3，或者R4和R5各自是CF3，或者R3和R6各自是CF3。在一些实施方案中，R2、R3、R4、R5和R6中的一个或两个是Cl。在一些实施方案中，R4和R5各自是Cl。在一些实施方案中，R2、R4、R5和R6各自是H。
在式(I-1)的一些实施方案中，
Figure BDA0003673001920000111
是
Figure BDA0003673001920000112
其中R2和R6各自是C1-C6卤代烷基。在式(I-1)的一些实施方案中，
Figure BDA0003673001920000113
是
Figure BDA0003673001920000114
其中R2和R6各自是-CF3。在一些实施方案中，
Figure BDA0003673001920000115
是
Figure BDA0003673001920000116
其中R2和R6各自独立地选自卤基、C1-C6烷基、和C1-C6卤代烷基。在一些实施方案中，
Figure BDA0003673001920000121
是
Figure BDA0003673001920000122
其中R2和R6各自独立地选自Cl、C1-C6烷基、和C1-C6卤代烷基。在一些实施方案中，
Figure BDA0003673001920000123
是
Figure BDA0003673001920000124
其中R2和R3各自是卤基。在一些实施方案中，
Figure BDA0003673001920000125
是
Figure BDA0003673001920000126
其中R2和R3各自是Cl。在一些实施方案中，
Figure BDA0003673001920000127
是
Figure BDA0003673001920000128
其中R2和R3中的一个是Cl并且R2和R3中的一个是F。在一些实施方案中，
Figure BDA0003673001920000129
是
Figure BDA00036730019200001210
其中R5和R6各自独立地选自：Cl、Br、I、CN、C1-C6烷基、和C1-C6卤代烷基。在一些实施方案中，
Figure BDA00036730019200001211
是
Figure BDA00036730019200001212
在一些实施方案中，提供了一种式(I-1)的化合物，其中A是
Figure BDA00036730019200001213
在一些实施方案中，提供了一种式(I-1)的化合物，其中A是
Figure BDA00036730019200001214
在一些实施方案中，提供了一种式(I-1)的化合物，其中A是
Figure BDA0003673001920000131
在式(I-1)的化合物的一些实施方案中，Ra是5或6元杂芳基，其中所述5或6元杂芳基是未经取代的或被一至四个选自以下的基团取代：OH、卤基、和C1-C6烷基。在一些实施方案中，Ra是吡咯基、吡唑基、咪唑基、三唑基、四唑基、呋喃基、异噁唑基、噁唑基、噁二唑基、噻吩基、异噻唑基、噻唑基、噻二唑基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、吡嗪基、三嗪基、或四嗪基，其中的每个是未经取代的或被一至四个选自以下的基团取代：OH、卤基、C1-C6烷基、和C1-C6烷氧基。在一些实施方案中，Ra选自2-呋喃基、2-吡啶基、2-嘧啶基、4-嘧啶基、和2-吡嗪基，其中的每个是未经取代的或被一至四个选自以下的基团取代：OH、卤基、C1-C6烷基、和C1-C6烷氧基。
在式(I-1)的化合物的一些实施方案中，A是
Figure BDA0003673001920000132
并且Ra是是未经取代的或被一至四个选自以下的基团取代的5或6元杂芳基：OH、卤基、C1-C6烷基和C1-C6烷氧基。在一些实施方案中，A是
Figure BDA0003673001920000133
并且Ra是2-呋喃基、2-吡啶基、2-嘧啶基、4-嘧啶基、或2-吡嗪基，各自是未经取代的或被一至四个选自以下的基团取代：OH、卤基、和C1-C6烷基。在一些实施方案中，A是
Figure BDA0003673001920000134
并且Ra是5或6元杂芳基。在一些实施方案中，A是
Figure BDA0003673001920000135
并且Ra是2-呋喃基、2-吡啶基、2-嘧啶基、4-嘧啶基、或2-吡嗪基。在式(I-1)的一些实施方案中，A是
Figure BDA0003673001920000136
并且Ra是2-呋喃基。在式(I-1)的另一个实施方案中，A是
Figure BDA0003673001920000137
并且Ra是2-吡啶基。在式(I-1)的一些实施方案中，A是
Figure BDA0003673001920000138
并且Ra是2-嘧啶基。在式(I-1)的其他实施方案中，A是
Figure BDA0003673001920000139
并且Ra是4-嘧啶基。在式(I-1)的仍其他实施方案中，A是
Figure BDA00036730019200001310
并且Ra是2-吡嗪基。
在式(I-1)的化合物的一些实施方案中，A是
Figure BDA00036730019200001311
并且Ra是5或6元杂芳基，其中Ra的5或6元杂芳基是未经取代的或被一至四个选自以下的基团取代：OH、卤基、和C1-C6烷基。在一些实施方案中，A是
Figure BDA00036730019200001312
并且Ra是2-呋喃基、2-吡啶基、2-嘧啶基、4-嘧啶基、或2-吡嗪基，各自是未经取代的或被一至四个选自以下的基团取代：OH、卤基、和C1-C6烷基。在一些实施方案中，A是
Figure BDA00036730019200001313
并且Ra是5或6元杂芳基。在一些实施方案中，A是
Figure BDA0003673001920000141
并且Ra是2-呋喃基、2-吡啶基、2-嘧啶基、4-嘧啶基、或2-吡嗪基。在式(I-1)的一些实施方案中，A是
Figure BDA0003673001920000142
并且Ra是2-呋喃基。在式(I-1)的另一个实施方案中，A是
Figure BDA0003673001920000143
并且Ra是2-吡啶基。在式(I-1)的一些实施方案中，A是
Figure BDA0003673001920000144
并且Ra是2-嘧啶基。在式(I-1)的其他实施方案中，A是
Figure BDA0003673001920000145
并且Ra是4-嘧啶基。在式(I-1)的仍其他实施方案中，A是
Figure BDA0003673001920000146
并且Ra是2-吡嗪基。
在式(I-1)的化合物的一些实施方案中，A是
Figure BDA0003673001920000147
并且Ra是5或6元杂芳基，其中Ra的5或6元杂芳基是未经取代的或被一至四个选自以下的基团取代：OH、卤基、和C1-C6烷基。在一些实施方案中，A是
Figure BDA0003673001920000148
并且Ra是2-呋喃基、2-吡啶基、2-嘧啶基、4-嘧啶基、或2-吡嗪基，各自是未经取代的或被一至四个选自以下的基团取代：OH、卤基、和C1-C6烷基。在一些实施方案中，A是
Figure BDA0003673001920000149
并且Ra是5或6元杂芳基。在一些实施方案中，A是
Figure BDA00036730019200001410
并且Ra是2-呋喃基、2-吡啶基、2-嘧啶基、4-嘧啶基、或2-吡嗪基。在式(I-1)的一些实施方案中，A是
Figure BDA00036730019200001411
并且Ra是2-呋喃基。在式(I-1)的一些实施方案中，A是
Figure BDA00036730019200001412
并且Ra是2-吡啶基。在式(I-1)的其他实施方案中，A是
Figure BDA00036730019200001413
并且Ra是2-吡嗪基。在式(I-1)的仍其他实施方案中，A是
Figure BDA00036730019200001414
并且Ra是2-嘧啶基。在式(I-1)的其他实施方案中，A是
Figure BDA00036730019200001415
并且Ra是4-嘧啶基。
在本文提供的任何式的一些实施方案中，R8和R7是H，A是
Figure BDA00036730019200001416
Ra是2-呋喃基，R1是甲基，并且L不存在。在本文提供的任何式的一些实施方案中，R8是甲基，R7是H，A是
Figure BDA00036730019200001417
Ra是2-呋喃基，R1是甲基，并且L不存在。在本文提供的任何式的一些实施方案中，R8是H，R7是甲基，A是
Figure BDA0003673001920000151
Ra是2-呋喃基，R1是甲基，并且L不存在。在本文提供的任何式的一些实施方案中，R8和R7是H，A是
Figure BDA0003673001920000152
Ra是2-呋喃基，R3与R1和它们附接的原子一起形成未经取代的或被一至三个选自以下的基团取代的6元碳环：卤基、CN、-OH、C1-C6烷基、和C1-C6卤代烷基。在本文提供的任何式的一些实施方案中，R8和R7是H，A是
Figure BDA0003673001920000153
Ra是2-呋喃基，并且R3与R1和它们附接的原子一起形成未经取代的或被一至三个选自以下的基团取代的5元碳环：卤基、CN、-OH、C1-C6烷基、和C1-C6卤代烷基。
在本文提供的任何式的一些实施方案中，R8和R7是H，A是
Figure BDA0003673001920000154
Ra是2-呋喃基，R1是甲基，L不存在。在本文提供的任何式的一些实施方案中，R8是甲基，R7是H，A是
Figure BDA0003673001920000155
Ra是2-呋喃基，R1是甲基，并且L不存在。在本文提供的任何式的一些实施方案中，R8是H，R7是甲基，A是
Figure BDA0003673001920000156
Ra是2-呋喃基，R1是甲基，并且L不存在。在本文提供的任何式的一些实施方案中，R8和R7是H，A是
Figure BDA0003673001920000157
Ra是2-呋喃基，并且R3与R1和它们所附接的原子一起形成未经取代的未经取代的或被一至三个选自以下的基团取代的6元碳环：卤基、CN、-OH、C1-C6烷基、和C1-C6卤代烷基。在本文提供的任何式的一些实施方案中，R8和R7是H，A是
Figure BDA0003673001920000158
Ra是2-呋喃基，R3与R1和它们附接的原子一起形成未经取代的或被一至三个选自以下的基团取代的经取代的5元碳环：卤基、CN、-OH、C1-C6烷基、和C1-C6卤代烷基。
在本文提供的任何式的一些实施方案中，R8和R7是H，A是
Figure BDA0003673001920000159
Ra是2-呋喃基，R1是甲基，并且L不存在。在本文提供的任何式的一些实施方案中，R8和R7是H，A是
Figure BDA00036730019200001510
Ra是2-吡啶基，R1是甲基，并且L不存在。在本文提供的任何式的一些实施方案中，R8和R7是H，A是
Figure BDA00036730019200001511
Ra是2-吡嗪基，R1是甲基，并且L不存在。在本文提供的任何式的一些实施方案中，R8是甲基，R7是H，A是
Figure BDA00036730019200001512
Ra是2-呋喃基，R1是甲基，并且L不存在。在本文提供的任何式的一些实施方案中，R8是甲基，R7是H，A是
Figure BDA0003673001920000161
Ra是2-吡啶基，R1是甲基，并且L不存在。在本文提供的任何式的一些实施方案中，R8是H，R7是甲基，A是
Figure BDA0003673001920000162
Ra是2-呋喃基，R1是甲基，L不存在。在本文提供的任何式的一些实施方案中，R8和R7是H，A是
Figure BDA0003673001920000163
Ra是2-呋喃基，R3与R1和它们附接的原子一起形成未经取代的或被一至三个选自以下的基团取代的6元碳环：卤基、CN、-OH、C1-C6烷基、和C1-C6卤代烷基。在本文提供的任何式的一些实施方案中，R8和R7是H，A是
Figure BDA0003673001920000164
Ra是2-呋喃基，R3与R1和它们附接的原子一起形成未经取代的或被一至三个选自以下的基团取代的经取代的5元碳环：卤基、CN、-OH、C1-C6烷基、和C1-C6卤代烷基。
应理解，A的每种描述可以与R2、R3、R4、R5和/或R6的每种描述组合，就好像每种组合被具体且单独地列出一样。例如，在一方面，应理解，A的每种描述可以在一方面与其中R2和R6各自是CF3并且R3、R4和R5各自是氢的变型组合。A的每种描述还可以与R1和n的每种描述组合，就好像每种组合被具体且单独地列出一样。类似地应理解，A的每种描述可以与R8和R7的每种描述组合，就好像每种组合被具体且单独地列出一样。
在式(I-1)的化合物的一些实施方案中，R7是H。在一些实施方案中，R7是C1-C6烷基。在一些实施方案中，R7是甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、或叔丁基。在某些实施方案中，R7是甲基。
在式(I-1)的化合物的一些实施方案中，R8是H或C1-C6烷基。在式(I-1)的一些实施方案中，R8是H。在式(I-1)的其他实施方案中，R8是甲基。
在一些实施方案中，R7和R8均是H。在一些实施方案中，R8是C1-C6烷基并且R7是H。在其他实施方案中，R8是H并且R7是C1-C6烷基。在某些实施方案中，R8是甲基并且R7是H。在其他实施方案中，R8是H并且R7是甲基。
代表性化合物列于表1-2中。
表1-2
Figure BDA0003673001920000165
Figure BDA0003673001920000171
Figure BDA0003673001920000181
Figure BDA0003673001920000191
在一些实施方案中，本文提供了表1-2中所述的化合物或其药学上可接受的盐、及其用途。
在适用的情况下，本文所述的实施方案和变型适用于本文详述的任何式的化合物。
本文提供了选自以下的化合物：
2-((1-(1-(2,4-双(三氟甲基)苯基)乙基)-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-5-(吡啶-2-基)-1,3,4-噻二唑；
2-((1-(2,4-双(三氟甲基)苄基)-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-5-(吡啶-2-基)-1,3,4-噻二唑；
(E)-2-(2-(1-(1-(2,4-双(三氟甲基)苯基)乙基)-1H-吡唑-4-基)乙烯基)-5-(吡啶-2-基)-1,3,4-噻二唑；
(Z)-2-(2-(1-(1-(2,4-双(三氟甲基)苯基)乙基)-1H-吡唑-4-基)乙烯基)-5-(吡啶-2-基)-1,3,4-噻二唑；
2-(2-(1-(1-(2,4-双(三氟甲基)苯基)乙基)-1H-吡唑-4-基)乙基)-5-(吡啶-2-基)-1,3,4-噻二唑；
2-((1-(1-(2,4-双(三氟甲基)苯基)乙基)-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-5-(吡嗪-2-基)-1,3,4-噻二唑；
2-((1-(1-(2,4-双(三氟甲基)苯基)乙基)-3-甲基-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-5-(吡啶-2-基)-1,3,4-噻二唑；
2-((1-(1-(2,6-二氯苯基)乙基)-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-5-(呋喃-2-基)-1,3,4-噻二唑；
2-((1-(1-(2,6-二氯苯基)乙基)-3-甲基-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-5-(呋喃-2-基)-1,3,4-噻二唑；
3-((1-(1-(2,6-二氯苯基)乙基)-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-5-(呋喃-2-基)异噁唑；
3-((1-(1-(2,6-二氯苯基)乙基)-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-5-(吡啶-2-基)异噁唑；
3-((1-(1-(2,6-二氯苯基)乙基)-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-5-(吡嗪-2-基)异噁唑；
3-((1-(1-(2-氯-6-氟苯基)乙基)-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-5-(呋喃-2-基)异噁唑；
3-((1-(1-(2-氯-6-氟苯基)乙基)-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-5-(吡啶-2-基)异噁唑；
3-((1-(1-(2-氯-6-氟苯基)乙基)-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-5-(吡嗪-2-基)异噁唑；和
2-((1-(1-(2,6-二氯苯基)乙基)-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-5-(吡啶-2-基)-1,3,4-噻二唑，或其药学上可接受的盐。在适用的情况下，本文还提供了本文所描绘化合物的任何和所有立体异构体，包括几何异构体(例如，顺式/反式异构体或E/Z异构体)、对映异构体、非对映异构体或其以任何比率的混合物(包括外消旋混合物)。
式(I-2)
在一个方面，提供了一种式(I-2)的化合物：
Figure BDA0003673001920000201
R1是H、C1-C6烷基、C3-C8环烷基、或C1-C6卤代烷基；
n是0或1；
L是-CH2-或不存在；
B是C3-C6环烷基、3-6元杂环基、或5-6元杂芳基，其中所述C3-C6环烷基和5-6元杂芳基各自独立任选地被一个或多个选自以下的基团取代：卤基、CN、-OH、
-NH2、C1-6烷基、C1-6烷氧基和C1-C6卤代烷基；
A是
Figure BDA0003673001920000202
Ra是任选地被一至四个卤基取代的5或6元杂芳基；
条件是，当A是
Figure BDA0003673001920000203
时，(i.)-(vii.)中的一个适用：
(i)B是C3-C6环烷基，任选地被一个或多个选自以下的基团取代：卤基、CN、-OH、-NH2、C1-6烷基、C1-6烷氧基和C1-C6卤代烷基；
(ii)B是具有一个或多个环杂原子的3-6元杂环基，其中所述3-6元杂环基任选地被一个或多个选自以下的基团取代：卤基、CN、-OH、-NH2、C1-6烷氧基和C1-C6卤代烷基，并且其中所述一个或多个环杂原子是氮；
(iii)B是
Figure BDA0003673001920000204
其中的每一个任选地被一个或多个选自以下的基团取代：卤基、CN、-OH、-NH2、C1-6烷基、C1-6烷氧基和C1-C6卤代烷基，n是1，R1是CH3，并且L不存在；
(iv)B是
Figure BDA0003673001920000211
其中的每一个被一个或多个选自以下的基团取代：卤基、CN、-OH、-NH2、C1-6烷基、C1-6烷氧基和C1-C6卤代烷基；
(v)B是
Figure BDA0003673001920000212
其中的每一个任选地被一个或多个选自以下的基团取代：卤基、CN、-OH、-NH2、C1-6烷基、C1-6烷氧基和C1-C6卤代烷基，并且Ra是
Figure BDA0003673001920000213
其中的每一个任选地被一至四个卤基取代；
(vi)B是4-6元桥接杂环基，任选地被一个或多个选自以下的基团取代：卤基、CN、-OH、-NH2、C1-6烷基、C1-6烷氧基和C1-C6卤代烷基；
或
(vii)B是5元杂芳基或
Figure BDA0003673001920000214
其中的每一个任选地被一个或多个选自以下的基团取代：卤基、CN、-OH、-NH2、C1-6烷基、C1-6烷氧基和C1-C6卤代烷基；
R7是H、C1-C6烷基或或C1-C6卤代烷基；并且
R8是H或C1-C6烷基。
在一些实施方案中，式(I-2)的化合物的药学上可接受的盐是盐酸盐。在一些实施方案中，式(I-2)的化合物的药学上可接受的盐是乙酸盐。
在一个变型中提供了一种式(I-2)的化合物或其盐，其中带有R1的碳在R1不是H时(即，C1-C6烷基、C3-C8环烷基、或C1-C6卤代烷基)呈“S”构型。在另一个变型中提供了一种式(I-2)的化合物或其盐，其中带有R1的碳在R1不是H时(即，C1-C6烷基、C3-C8环烷基、或C1-C6卤代烷基)呈“R”构型。还包含式(I-2)的化合物的混合物，包括给定化合物的外消旋和非外消旋混合物、和不同化学式的两种或更多种化合物的混合物。
还应理解，式(I-2)的任何变型的描述可以(当适用时)与任何其他变型的一种或多种描述组合，就好像变型的每一种组合被具体且单独地列出一样。例如，R1的每种描述可以与A的每种描述组合，就好像每一种组合被具体且单独地列出一样。同样，R1的每种描述可以与A、R7和R8的每种描述组合，就好像每一种组合被具体且单独地列出一样。
在式(I-2)的化合物的一些实施方案中，B是C3-C6环烷基。在式(I-2)的化合物的其他实施方案中，B是3-6元杂环基。在式(I-2)的化合物的仍其他实施方案中，B是5-6元杂芳基。在式(I-2)的化合物的某些实施方案中，B是未经取代的。在式(I-2)的化合物的其他实施方案中，B被一个或多个基团取代。在式(I-2)的化合物的某些实施方案中，B被一个或多个选自以下的基团取代：卤基、CN、-OH、-NH2、C1-6烷基、C1-6烷氧基和C1-C6卤代烷基。在一些实施方案中，B是未经取代的或被一个或多个选自以下的基团取代的C3-C6环烷基：卤基、CN、-OH、-NH2、C1-6烷基、C1-6烷氧基和C1-C6卤代烷基。在一些实施方案中，B是未经取代的或被一个或多个选自以下的基团取代的5-6元杂芳基：卤基、CN、-OH、-NH2、C1-6烷氧基和C1-C6卤代烷基。在某些实施方案中，B不是
Figure BDA0003673001920000215
Figure BDA0003673001920000221
在一些实施方案中，B是任选地被一个或多个选自以下的基团取代的C3-C6环烷基：卤基、CN、-OH、-NH2、C1-6烷基、C1-6烷氧基和C1-C6卤代烷基。在一些实施方案中，B是具有一个或多个环杂原子的3-6元杂环基，其中所述3-6元杂环基任选地被一个或多个选自以下的基团取代：卤基、CN、-OH、-NH2、C1-6烷氧基和C1-C6卤代烷基，并且其中所述一个或多个环杂原子是氮。在一些实施方案中，B是
Figure BDA0003673001920000222
Figure BDA0003673001920000223
其中的每一个任选地被一个或多个选自以下的基团取代：卤基、CN、-OH、-NH2、C1-6烷基、C1-6烷氧基和C1-C6卤代烷基，n是1，R1是CH3，并且L不存在。在一些实施方案中，(iv)B是
Figure BDA0003673001920000224
其中的每一个被一个或多个选自以下的基团取代：卤基、CN、-OH、-NH2、C1-6烷基、C1-6烷氧基和C1-C6卤代烷基。在一些实施方案中，B是
Figure BDA0003673001920000225
其中的每一个任选地被一个或多个选自以下的基团取代：卤基、CN、-OH、-NH2、C1-6烷基、C1-6烷氧基和C1-C6卤代烷基，并且Ra是
Figure BDA0003673001920000226
其中的每一个任选地被一至四个卤基取代。在一些实施方案中，B是4-6元桥接杂环基，任选地被一个或多个选自以下的基团取代：卤基、CN、-OH、-NH2、C1-6烷基、C1-6烷氧基和C1-C6卤代烷基。在一些实施方案中，B是5元杂芳基或
Figure BDA0003673001920000227
其中的每一个任选地被一个或多个选自以下的基团取代：卤基、CN、-OH、-NH2、C1-6烷基、C1-6烷氧基和C1-C6卤代烷基。
在式(I-2)的化合物的一些实施方案中，n是1并且R1是H。在一些实施方案中，n是1并且R1是C1-C6烷基。在其他实施方案中，n是1并且R1是C3-C8环烷基。在一些实施方案中，n是1并且R1是C1-C6卤代烷基。在某些实施方案中，n是1并且R1是甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、或叔丁基。在一些实施方案中，n是1并且R1是甲基。在一些实施方案中，n是1并且R1是乙基。在一些实施方案中，n是1并且R1是环丙基、环丁基、环戊基、或环己基。在一些实施方案中，n是1并且R1是环丙基。在式(I-2)的化合物的一些实施方案中，n是0。
在式(I-2)的化合物的一些实施方案中，L不存在。在其他实施方案中，L是-CH2-。
在一些实施方案中，n是1，L不存在，并且R1是H。在一些实施方案中，n是1，L不存在，并且R1是C1-C6烷基。在其他实施方案中，n是1，L不存在，并且R1是C3-C8环烷基。在一些实施方案中，n是1，L不存在，并且R1是C1-C6卤代烷基。在某些实施方案中，n是1，L不存在，并且R1是甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、或叔丁基。在一些实施方案中，n是1，L不存在，并且R1是甲基。在一些实施方案中，n是1，L不存在，并且R1是乙基。在一些实施方案中，n是1，L不存在，并且R1是环丙基、环丁基、环戊基、或环己基。在一些实施方案中，n是1，L不存在，并且R1是环丙基。
在式(I-2)的化合物的一些实施方案中，n是0并且L不存在。
在式(I-2)的化合物的一些实施方案中，n是1，L是-CH2-，并且R1是H。在一些实施方案中，n是1，L是-CH2-，并且R1是C1-C6烷基。在其他实施方案中，n是1，L是-CH2-，并且R1是C3-C8环烷基。在一些实施方案中，n是1，L是-CH2-，并且R1是C1-C6卤代烷基。在某些实施方案中，n是1，L是-CH2-，并且R1是甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、或叔丁基。在一些实施方案中，n是1，L是-CH2-，并且R1是甲基。在一些实施方案中，n是1，L是-CH2-，并且R1是乙基。在一些实施方案中，n是1，L是-CH2-，并且R1是环丙基、环丁基、环戊基、或环己基。在一些实施方案中，n是1，L是-CH2-，并且R1是环丙基。
在式(I-2)的化合物的一些实施方案中，n是0并且L是-CH2-。
在式(I-2)的化合物的一些实施方案中，Ra是5或6元杂芳基。在一些实施方案中，Ra是吡咯基、吡唑基、咪唑基、三唑基、四唑基、呋喃基、异噁唑基、噁唑基、噁二唑基、噻吩基、异噻唑基、噻唑基、噻二唑基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、吡嗪基、三嗪基、或四嗪基，其中的每个是未经取代的或被一至四个选自以下的基团取代：OH、卤基、C1-C6烷基、和C1-C6烷氧基。在一些实施方案中，Ra选自2-呋喃基、2-吡啶基、2-嘧啶基、4-嘧啶基、和2-吡嗪基。
在一些实施方案中，提供了一种式(I-2)的化合物，其中A是
Figure BDA0003673001920000231
在一些实施方案中，提供了一种式(I-2)的化合物，其中A是
Figure BDA0003673001920000232
在一些实施方案中，提供了一种式(I-2)的化合物，其中A是
Figure BDA0003673001920000233
在式(I-2)的化合物的一些实施方案中，A是
Figure BDA0003673001920000234
并且Ra是5或6元杂芳基。在一些实施方案中，A是
Figure BDA0003673001920000235
并且Ra是2-呋喃基、2-吡啶基、2-嘧啶基、4-嘧啶基、或2-吡嗪基。在一些实施方案中，A是
Figure BDA0003673001920000236
并且Ra是2-呋喃基。在一些实施方案中，A是
Figure BDA0003673001920000237
并且Ra是2-吡啶基。在其他实施方案中，A是
Figure BDA0003673001920000238
并且Ra是2-吡嗪基。在其他实施方案中，A是
Figure BDA0003673001920000239
并且Ra是2-嘧啶基。在仍其他实施方案中，A是
Figure BDA00036730019200002310
并且Ra是4-嘧啶基。
在式(I-2)的化合物的一些实施方案中，A是
Figure BDA00036730019200002311
并且Ra是5或6元杂芳基。在一些实施方案中，A是
Figure BDA0003673001920000241
并且Ra是2-呋喃基、2-吡啶基、2-嘧啶基、4-嘧啶基、或2-吡嗪基。在一些实施方案中，A是
Figure BDA0003673001920000242
并且Ra是2-呋喃基。在一些实施方案中，A是
Figure BDA0003673001920000243
并且Ra是2-吡啶基。在其他实施方案中，A是
Figure BDA0003673001920000244
并且Ra是2-吡嗪基。在其他实施方案中，A是
Figure BDA0003673001920000245
并且Ra是2-嘧啶基。在仍其他实施方案中，A是
Figure BDA0003673001920000246
并且Ra是4-嘧啶基。
在式(I-2)的化合物的一些实施方案中，A是
Figure BDA0003673001920000247
并且Ra是5或6元杂芳基。在一些实施方案中，A是
Figure BDA0003673001920000248
并且Ra是2-呋喃基、2-吡啶基、2-嘧啶基、4-嘧啶基、或2-吡嗪基。在一些实施方案中，A是
Figure BDA0003673001920000249
并且Ra是2-呋喃基。在一些实施方案中，A是
Figure BDA00036730019200002410
并且Ra是2-吡啶基。在其他实施方案中，A是
Figure BDA00036730019200002411
并且Ra是2-吡嗪基。在其他实施方案中，A是
Figure BDA00036730019200002412
并且Ra是2-嘧啶基。在仍其他实施方案中，A是
Figure BDA00036730019200002413
并且Ra是4-嘧啶基。
在式(I-2)的化合物的一些实施方案中，A是
Figure BDA00036730019200002414
Figure BDA00036730019200002415
并且B是C3-C6环烷基。在式(I-2)的化合物的其他实施方案中，A是
Figure BDA00036730019200002416
并且B是3-6元杂环基。在式(I-2)的化合物的仍其他实施方案中，A是
Figure BDA00036730019200002417
并且B是5-6元杂芳基。在式(I-2)的化合物的某些实施方案中，A是
Figure BDA00036730019200002418
并且B是未经取代的。在一些实施方案中，A是
Figure BDA00036730019200002419
并且B是未经取代的或被一个或多个选自以下的基团取代的C3-C6环烷基：卤基、CN、-OH、-NH2、C1-6烷氧基和C1-C6卤代烷基。在一些实施方案中，A是
Figure BDA0003673001920000251
Figure BDA0003673001920000252
并且B是未经取代的或被一个或多个选自以下的基团取代的5-6元杂芳基：卤基、CN、-OH、-NH2、C1-6烷基、C1-6烷氧基和C1-C6卤代烷基。在某些实施方案中，A是
Figure BDA0003673001920000253
并且B不是
Figure BDA0003673001920000254
在式(I-2)的化合物的一些实施方案中，R7是H。在一些实施方案中，R7是C1-C6烷基。在一些实施方案中，R7是C1-C6卤代烷基。在一些实施方案中，R7是甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、或叔丁基。在某些实施方案中，R7是甲基。
在式(I-2)的化合物的一些实施方案中，R8是H。在一些实施方案中，R8是C1-C6烷基。在一些实施方案中，R8是甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、或叔丁基。在某些实施方案中，R8是甲基。
在式(I-2)的化合物的一些实施方案中，R7和R8均是H。在一些实施方案中，R8是C1-C6烷基并且R7是H。在其他实施方案中，R8是H并且R7是C1-C6烷基。在一些实施方案中，R8和R7是C1-C6烷基。在某些实施方案中，R8是甲基并且R7是H。在其他实施方案中，R8是H并且R7是甲基。在一些实施方案中，R8和R7是H。
在本文提供的任何式的一些实施方案中，R8和R7是H，A是
Figure BDA0003673001920000255
Ra是2-呋喃基，R1是甲基，L不存在。在本文提供的任何式的一些实施方案中，R8是甲基，R7是H，A是
Figure BDA0003673001920000256
Ra是2-呋喃基，R1是甲基，L不存在。在本文提供的任何式的一些实施方案中，R8是H，R7是甲基，A是
Figure BDA0003673001920000257
Ra是2-呋喃基，R1是甲基，L不存在。
在本文提供的任何式的一些实施方案中，R8和R7是H，A是
Figure BDA0003673001920000258
Ra是2-呋喃基，R1是甲基，L不存在。在本文提供的任何式的一些实施方案中，R8是甲基，R7是H，A是
Figure BDA0003673001920000259
Ra是2-呋喃基，R1是甲基，L不存在。在本文提供的任何式的一些实施方案中，R8是H，R7是甲基，A是
Figure BDA00036730019200002510
Ra是2-呋喃基，R1是甲基，L不存在。
在本文提供的任何式的一些实施方案中，R8和R7是H，A是
Figure BDA00036730019200002511
Ra是2-呋喃基，R1是甲基，L不存在。在本文提供的任何式的一些实施方案中，R8是甲基，R7是H，A是
Figure BDA00036730019200002512
Ra是2-呋喃基，R1是甲基，L不存在。在本文提供的任何式的一些实施方案中，R8是H，R7是甲基，A是
Figure BDA0003673001920000261
Ra是2-呋喃基，R1是甲基，L不存在。
代表性化合物列于表1-3中。
表1-3
Figure BDA0003673001920000262
Figure BDA0003673001920000271
Figure BDA0003673001920000281
Figure BDA0003673001920000291
在一些实施方案中，本文提供了表1-3中所述的化合物或其药学上可接受的盐、及其用途。在某些变型中，所述其药学上可接受的盐是盐酸盐。在一个实施方案中，所述盐酸盐是N-(1-(氮杂环丁-3-基)-1H-吡唑-4-基)-5-(呋喃-2-基)异噁唑-3-甲酰胺盐酸盐。在另一个实施方案中，所述盐酸盐是5-(呋喃-2-基)-N-(1-(吡咯烷-3-基)-1H-吡唑-4-基)异噁唑-3-甲酰胺盐酸盐。在一个实施方案中，所述盐酸盐是N-(1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)-5-(吡嗪-2-基)异噁唑-3-甲酰胺盐酸盐。在另一个实施方案中，所述盐酸盐是N-(1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)-5-(吡啶-2-基)异噁唑-3-甲酰胺盐酸盐。在另一个实施方案中，所述盐酸盐是N-(1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)-5-(吡嗪-2-基)-1,3,4-噻二唑-2-甲酰胺盐酸盐。在其他实施方案中，所述其药学上可接受的盐是乙酸盐。在一个实施方案中，所述乙酸盐是5-(呋喃-2-基)-N-(1-(吡咯烷-3-基)-1H-吡唑-4-基)异噁唑-3-甲酰胺乙酸盐。在另一个实施方案中，所述乙酸盐是N-(1-(氮杂环丁-3-基)-1H-吡唑-4-基)-5-(呋喃-2-基)异噁唑-3-甲酰胺乙酸盐。在一些实施方案中，所述其药学上可接受的盐是三氟乙酸盐。在一个实施方案中，所述三氟乙酸盐是N-(1-(1-(哌啶-4-基)乙基)-1H-吡唑-4-基)-5-(吡嗪-2-基)异噁唑-3-甲酰胺三氟乙酸盐。在另一个实施方案中，所述三氟乙酸盐是N-(1-(1-(哌啶-4-基)乙基)-1H-吡唑-4-基)-5-(吡嗪-2-基)-1,3,4-噻二唑-2-甲酰胺三氟乙酸盐。
在适用的情况下，本文所述的实施方案和变型适用于本文详述的任何式的化合物。
本文提供了选自以下的化合物：
N-(1-环戊基-1H-吡唑-4-基)-5-(呋喃-2-基)异噁唑-3-甲酰胺；
N-(1-(环戊基甲基)-1H-吡唑-4-基)-5-(呋喃-2-基)异噁唑-3-甲酰胺；
N-(1-(氮杂环丁-3-基)-1H-吡唑-4-基)-5-(呋喃-2-基)异噁唑-3-甲酰胺；
5-(呋喃-2-基)-N-(1-(吡咯烷-3-基)-1H-吡唑-4-基)异噁唑-3-甲酰胺；
N-(1-(1-环戊基乙基)-1H-吡唑-4-基)-5-(呋喃-2-基)异噁唑-3-甲酰胺；
N-(1-((3,5-二氯吡啶-4-基)甲基)-1H-吡唑-4-基)-5-(呋喃-2-基)异噁唑-3-甲酰胺；
N-(1-(2-吗啉代乙基)-1H-吡唑-4-基)-5-(吡嗪-2-基)-1,3,4-噻二唑-2-甲酰胺；
N-(1-(2-吗啉代乙基)-1H-吡唑-4-基)-5-(吡嗪-2-基)异噁唑-3-甲酰胺；
N-(1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)-5-(吡啶-2-基)异噁唑-3-甲酰胺；
N-(1-(1-(哌啶-4-基)乙基)-1H-吡唑-4-基)-5-(吡嗪-2-基)异噁唑-3-甲酰胺；
N-(1-(1-(哌啶-4-基)乙基)-1H-吡唑-4-基)-5-(吡嗪-2-基)-1,3,4-噻二唑-2-甲酰胺；
5-(吡嗪-2-基)-N-(1-(1-(4-(三氟甲基)环己基)乙基)-1H-吡唑-4-基)异噁唑-3-甲酰胺；
N-(1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)-5-(吡嗪-2-基)异噁唑-3-甲酰胺；
N-(1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)-5-(吡嗪-2-基)-1,3,4-噻二唑-2-甲酰胺；
5-(呋喃-2-基)-N-(1-(反式-4-羟基环己基)-1H-吡唑-4-基)异噁唑-3-甲酰胺；
N-(1-(四氢呋喃-3-基)-1H-吡唑-4-基)-5-(噻吩-2-基)异噁唑-3-甲酰胺；
5-(吡啶-2-基)-N-(1-(四氢呋喃-3-基)-1H-吡唑-4-基)异噁唑-3-甲酰胺；
5-(5-氟吡啶-2-基)-N-(1-(四氢呋喃-3-基)-1H-吡唑-4-基)异噁唑-3-甲酰胺；
5-(5-氯吡啶-2-基)-N-(1-(四氢呋喃-3-基)-1H-吡唑-4-基)异噁唑-3-甲酰胺；
5-(吡嗪-2-基)-N-(1-(四氢呋喃-3-基)-1H-吡唑-4-基)异噁唑-3-甲酰胺；
5-(吡啶-2-基)-N-(1-(四氢呋喃-3-基)-1H-吡唑-4-基)-1,3,4-噻二唑-2-甲酰胺；
5-(吡嗪-2-基)-N-(1-(四氢呋喃-3-基)-1H-吡唑-4-基)-1,3,4-噻二唑-2-甲酰胺；
N-(1-(4-氟四氢呋喃-3-基)-1H-吡唑-4-基)-5-(吡啶-2-基)异噁唑-3-甲酰胺；
N-(1-(4,4-二氟四氢呋喃-3-基)-1H-吡唑-4-基)-5-(吡啶-2-基)异噁唑-3-甲酰胺；
N-(1-(2-氧杂双环[2.1.1]己-5-基)-1H-吡唑-4-基)-5-(吡啶-2-基)异噁唑-3-甲酰胺；和
N-(1-(4,4-二甲基四氢呋喃-3-基)-1H-吡唑-4-基)-5-(吡啶-2-基)异噁唑-3-甲酰胺，或其药学上可接受的盐。在适用的情况下，本文还提供了本文所描绘化合物的任何和所有立体异构体，包括几何异构体(例如，顺式/反式异构体或E/Z异构体)、对映异构体、非对映异构体或其以任何比率的混合物(包括外消旋混合物)。
本文描绘了本文详述的化合物的所有代表性例子，包括根据本公开文本的中间体和最终化合物。应当理解，在一个方面，任一种所述化合物可用于本文详述的方法中，包括(在适用的情况下)可分离并且向个体施用的中间体化合物。
即使未描绘盐，本文描绘的化合物也可以以盐存在，并且应当理解，本公开文本包括本文描绘的化合物的所有盐和溶剂化物，以及所述化合物的非盐和非溶剂化物形式，如本领域技术人员充分理解的。在一些实施方案中，本文提供的化合物的盐是药学上可接受的盐。在所述化合物中存在一个或多个叔胺部分的情况下，还提供并且描述了N-氧化物。
在本文所述的任一种化合物可能存在互变异构形式的情况下，即使仅可以明确地描绘一种或一些互变异构形式，也预期了每一种互变异构形式。具体描绘的互变异构形式在溶液中或当根据本文所述的方法使用时可以是或可以不是主要形式。
本公开文本还包括所述化合物的任何或所有立体化学形式，包括任何对映异构体或非对映异构体形式。本文给出的任何式的化合物都可能具有不对称中心，并且因此以不同的对映异构体或非对映异构体的形式存在。在所述式的范围内，考虑了通式的化合物的所有光学异构体和立体异构体，及其以任何比率的混合物。因此，本文给出的任何式均旨在代表外消旋体、一种或多种对映异构体形式、一种或多种非对映异构体形式、一种或多种阻转异构体形式及其以任何比率的混合物，除非另外指示特定的立体化学。在用特定的立体化学构型描绘表1-2/1-3的化合物的情况下，本文也提供了所述化合物的任何可替代的立体化学构型，以及所述化合物的立体异构体以任何比率的混合物。例如，在任何表的化合物具有呈“S”立体化学构型的立体中心的情况下，本文也提供了所述化合物的对映异构体，其中该立体中心呈“R”立体化学构型。同样，当任何表的化合物具有呈“R”构型的立体中心时，本文也提供了所述化合物的呈“S”立体化学构型的对映异构体。还提供了具有“S”和“R”两种立体化学构型的混合物。此外，某些结构可能以几何异构体(即顺式和反式异构体)、互变异构体或阻转异构体存在。例如，本文给出的任何式的化合物都可能含有限制旋转的键，并且因此以不同的几何构型存在。在任何表的化合物被描述为特定的几何异构体(例如E或Z异构体或顺式或反式异构体)的情况下，本文也提供了所述化合物的任何可替代几何构型，以及所述化合物的几何异构体以任何比率的混合物。例如，在任何表的化合物被描述为“Z”异构体的情况下，本文也提供了所述化合物的“E”异构体。同样，在任何表的化合物被描述为“E”异构体的情况下，本文也提供了所述化合物的“Z”异构体。还提供了具有“E”和“Z”两种立体化学构型的所述化合物的混合物，其中所述混合物是以任何比率的。类似地，在任何表的化合物被描述为“顺式”异构体的情况下，本文也提供了所述化合物的“反式”异构体；以及在化合物被描述为“反式”异构体的情况下，本文也提供了所述化合物的“顺式”异构体。还提供了具有“顺式”和“反式”两种立体化学构型的所述化合物的混合物，其中所述混合物是以任何比率的。本发明也涵盖化合物的所有形式，如化合物的结晶形式或非结晶形式。还预期包含本发明的化合物的组合物，如基本上纯的化合物(包括其特定的立体化学形式)的组合物，或包含本发明的化合物的以任何比率的混合物的组合物(包括两种或更多种立体化学形式，如在外消旋或非外消旋混合物中)。
本发明还涉及本文所述的化合物的同位素标记形式和/或同位素富集形式。本文的化合物可以在构成此类化合物的原子中的一个或多个处含有非天然比例的原子同位素。在一些实施方案中，所述化合物是同位素标记的，如同位素标记的本文所述的式(I-1)/(I-2)的化合物或其变体，其中一个或多个原子的一部分被相同元素的同位素替代。可以掺入本发明化合物中的示例性同位素包括氢、碳、氮、氧、磷、硫、氯的同位素，如2H、3H、11C、13C、14C、13N、15O、17O、32P、35S、18F、36Cl。某些同位素标记的化合物(例如3H和14C)可用于化合物或底物组织分布研究。掺入较重同位素如氘(2H)可以由于较大代谢稳定性而提供某些治疗优势，例如体内半衰期增加或剂量要求降低，并且因此，在一些情况下可以是优选的。
本发明的同位素标记的化合物通常可以通过本领域技术人员已知的标准方法和技术或通过与所附实施例中所述的那些类似的程序，使用适当的同位素标记的试剂代替相应的未标记的试剂来制备。
本发明还包括任一种所述化合物的任何或所有代谢物。代谢物可以包括通过所描述的任一种化合物的生物转化产生的任何化学物质，如所述化合物的代谢的中间体和产物，如将在向人类施用后在体内产生。
提供了在合适的容器中包含本文所述的化合物或其盐或溶剂化物的制品。所述容器可以是小瓶、罐、安瓿、预装载注射器、静脉注射袋等。
优选地，本文详述的化合物是口服可生物利用的。然而，也可以将所述化合物配制用于肠胃外(例如，静脉内)施用。
本文所述的一种或几种化合物可以用于通过将作为活性成分的一种或多种化合物与本领域已知的药理学上可接受的载体组合来制备药物。根据所述药物的治疗形式，所述载体可以是各种形式的。在一个变型中，制造药物是用于本文所公开的任何方法，例如用于治疗癌症。
通用合成方法
本发明的化合物可以通过总体上如下所述的许多方法来制备。在以下的方法描述中，当在所描绘的式中使用时，符号应被理解为表示上文关于本文的式描述的那些基团。
在需要获得化合物的特定对映异构体的情况下，这可以从相应的对映异构体的混合物中使用用于分离或拆分对映异构体的任何合适的常规程序来实现。因此，例如，非对映异构衍生物可通过使对映异构体混合物(例如外消旋体)与适当手性化合物反应来制备。然后可以通过任何便利的手段(例如，通过结晶)分离非对映异构体并且回收所需对映异构体。在另一种拆分方法中，可以使用手性高效液相色谱法来分离外消旋体。可替代地，如果需要，可以通过在所述方法之一中使用适当的手性中间体来获得具体的对映异构体。
在需要获得化合物的特定异构体或以其他方式纯化反应产物的情况下，色谱法、重结晶和其他常规分离程序也可以与中间体或最终产物一起使用。
还考虑了本文提供的化合物或其药学上可接受的盐的溶剂化物和/或多晶型物。溶剂化物含有化学计量量或非化学计量量的溶剂，并且通常在结晶过程中形成。当溶剂是水时，形成水合物，或者当溶剂是醇时，形成醇化物。多晶型物包括化合物的相同的元素组成的不同晶体堆积排列。多晶型物通常具有不同的X射线衍射图、红外光谱、熔点、密度、硬度、晶体形状，光学和电特性、稳定性和/或溶解性。各种因素(如重结晶溶剂、结晶速率、和储存温度)均可能导致单晶形式占主导地位。
在以下实施例部分中提供了具体的例子。应当理解，可以将上述方案修改成通过选择适当的试剂和起始材料来获得本发明的各种化合物。对于保护基团及其使用的一般描述，参见P.G.M.Wuts和T.W.Greene,Greene's Protective Groups in Organic Synthesis第4版,Wiley-Interscience,纽约,2006。
药物组合物和配制品
本公开文本包括本文详述的任一种化合物的药物组合物。因此，本公开文本包括包含如本文详述的化合物或其药学上可接受的盐和药学上可接受的载体或赋形剂的药物组合物。在一个方面，所述药学上可接受的盐是酸加成盐，如与无机酸或有机酸形成的盐。药物组合物可以采取适于口服、经颊、肠胃外、鼻、局部或直肠施用的形式或适于通过吸入施用的形式。
在一个方面，如本文详述的化合物可以呈纯化的形式，并且在本文中详述了包含呈纯化的形式的化合物的组合物。提供了包含如本文详述的化合物或其盐的组合物，如基本上纯的化合物的组合物。在一些实施方案中，含有如本文详述的化合物或其盐的组合物呈基本上纯的形式。
在一个变型中，本文的化合物是制备用于向个体施用的合成化合物。在另一个变型中，提供了含有呈基本上纯的形式的化合物的组合物。在另一个变型中，本公开文本涵盖包含本文详述的化合物和药学上可接受的载体的药物组合物。在另一个变型中，提供了施用化合物的方法。纯化的形式、药物组合物和施用所述化合物的方法适用于本文详述的任何化合物或其形式。
本文详述的化合物或其盐可以配制用于任何可用的递送途径，包括口服、粘膜(例如，鼻、舌下、阴道、经颊或直肠)、肠胃外(例如，肌内、皮下或静脉内)、局部或经皮递送形式。可以将化合物或其盐与合适的载体一起配制以提供递送形式，包括但不限于片剂、囊片、胶囊(如硬明胶胶囊或软弹性明胶胶囊)、扁囊剂、糖锭剂、锭剂、胶质、分散体、栓剂、软膏、泥敷剂(泥罨剂)、糊剂、粉剂、敷料、乳膏、溶液、贴剂、气雾剂(例如，鼻喷雾剂或吸入器)、凝胶、混悬剂(例如，水性或非水性液体混悬剂、水包油乳液或油包水液体乳液)、溶液和酏剂。
本文所述的一种或几种化合物或其盐可以用于通过将作为活性成分的一种或多种化合物或其盐与药学上可接受的载体(如以上提到的那些)组合制备配制品，如药物配制品。取决于系统的治疗形式(例如，透皮贴剂与口服片剂)，载体可以呈各种形式。此外，药物配制品可以含有防腐剂、增溶剂、稳定剂、再润湿剂、乳化剂、甜味剂、染料、调节剂和用于调节渗透压的盐、缓冲剂、包衣剂或抗氧化剂。包含所述化合物的配制品还可以含有具有有价值的治疗特性的其他物质。药物配制品可以通过已知的制药方法来制备。合适的配制品可见于例如Remington’s Pharmaceutical Sciences,Mack Publishing Company,宾夕法尼亚州费城,第20版.(2000)中，将其通过引用并入本文。
如本文所述的化合物可以以通常接受的口服组合物的形式(如片剂、包衣片剂和在硬壳或软壳中的凝胶胶囊、乳液或悬浮液)向个体施用。可用于制备此类组合物的载体的例子是乳糖、玉米淀粉或其衍生物、滑石、硬脂酸酯或其盐等。用于软壳凝胶胶囊的可接受的载体是例如植物油、蜡、脂肪、半固体和液体多元醇等。此外，药物配制品可以含有防腐剂、增溶剂、稳定剂、再润湿剂、乳化剂、甜味剂、染料、调节剂和用于调节渗透压的盐、缓冲剂、包衣剂或抗氧化剂。
任一种本文所述的化合物可以被配制在以所述的任何剂型的片剂中，例如，本文所述的化合物或其药学上可接受的盐可以被配制成10mg片剂。
还描述了包含本文所提供的化合物的组合物。在一个变型中，所述组合物包含化合物或其盐和药学上可接受的载体或赋形剂。在另一个变型中，提供了基本上纯的化合物的组合物。
使用方法和用途
本文详述的化合物和组合物(如含有本文提供的任何式的化合物或其盐和药学上可接受的载体或赋形剂的药物组合物)可以用于如本文提供的施用和治疗方法。所述化合物和组合物也可以用于体外方法，如将化合物或组合物施用于细胞用于筛选目的和/或进行质量控制测定的体外方法。
在一些实施方案中，本文提供了一种调节ATF6通路的方法。在一些实施方案中，本文提供了一种调节ATF6的方法。在一些实施方案中，本文提供了一种激活ATF6通路的方法。在一些实施方案中，本文提供了一种激活ATF6的方法。在一些实施方案中，本文提供了一种抑制ATF6通路的方法。在一些实施方案中，本文提供了一种抑制ATF6的方法。在一些实施方案中，所述ATF6是ATF6α。据信本文所述的化合物或其盐和本文所述的组合物有效地抑制ATF6通路、ATF6和/或ATF6α。
在一些实施方案中，调节ATF6通路、ATF6或ATF6α的方法包括向包含ATF6或ATF6α的细胞施用或递送本文所述的化合物或其药学上可接受的盐或本文所述的药物组合物。在一些实施方案中，激活ATF6通路、ATF6或ATF6α的方法包括向包含ATF6或ATF6α的细胞施用或递送本文所述的化合物或其药学上可接受的盐或本文所述的药物组合物。在一些实施方案中，抑制ATF6通路、ATF6、或ATF6α的方法包括向包含ATF6或ATF6α的细胞施用或递送本文所述的化合物或其药学上可接受的盐或本文所述的药物组合物。在一些实施方案中，所述细胞是患病细胞，如癌细胞。在一些实施方案中，所述细胞具有激活的ATF6通路。在一些实施方案中，所述细胞已经暴露于ER应激诱导条件。几种ER应激诱导条件是本领域已知的，如葡萄糖剥夺、异常Ca2+调节、病毒感染、缺氧和暴露于ER应激诱导分子(如毒胡萝卜素、离子霉素或衣霉素)。
在一些实施方案中，调节ATF6通路、ATF6、或ATF6α的方法包括向肿瘤施用或递送本文所述的化合物或其药学上可接受的盐或者本文所述的药物组合物。在一些实施方案中，激活ATF6通路、ATF6、或ATF6α的方法包括向肿瘤施用或递送本文所述的化合物或其药学上可接受的盐或者本文所述的药物组合物。在一些实施方案中，抑制ATF6通路、ATF6、或ATF6α的方法包括向肿瘤施用或递送本文所述的化合物或其药学上可接受的盐或者本文所述的药物组合物。
在一些实施方案中，ATF6通路、ATF6、或ATF6α的调节包括调节ATF6和/或ATF6α靶基因的表达。在一些实施方案中，ATF6通路、ATF6、或ATF6α的调节包括调节ATF6α靶基因的表达。在一些实施方案中，ATF6和/或ATF6α靶基因的表达被调节至少约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、或98％。在一些实施方案中，ATF6通路、ATF6、或ATF6α的激活包括激活ATF6和/或ATF6α靶基因的表达。在一些实施方案中，ATF6通路、ATF6、或ATF6α的激活包括激活ATF6α靶基因的表达。在一些实施方案中，ATF6和/或ATF6α靶基因的表达被激活至少约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、或98％。在一些实施方案中，ATF6通路、ATF6、或ATF6α的抑制包括抑制ATF6和/或ATF6α靶基因的表达。在一些实施方案中，ATF6通路、ATF6、或ATF6α的抑制包括抑制ATF6α靶基因的表达。在一些实施方案中，ATF6和/或ATF6α靶基因的表达被抑制至少约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、或98％。
在一些实施方案中，ATF6和/或ATF6α靶基因包含含有ER应激反应元件(ERSE)的启动子。在一些实施方案中，所述启动子包含与CCAATCGGCGGCGGCCACG(SEQ ID NO.1)具有至少约70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、或99％序列同一性的序列。在一些实施方案中，所述启动子包含SEQ ID NO.1。在一些实施方案中，ATF6和/或ATF6α靶基因是GRP78、HERPUD1、或ERO1B。在一些实施方案中，ATF6α靶基因是GRP78。对ATF6和/或ATF6α靶基因的表达的调节、激活或抑制可以通过本领域已知的方法确定，如通过使用诸如PCR、qPCR、或RNA印迹的技术检测靶基因的mRNA，或者通过检测多肽基因产物(如通过蛋白质印迹或质谱法)确定。
在一些实施方案中，所述化合物、其盐或组合物调节、激活或抑制ATF6通路、ATF6、或ATF6α的IC50小于约10μM，如小于约5μM、2μM、1μM、900nM、800nM、700nM、或600nM。在一些实施方案中，所述化合物、其盐或组合物抑制ATF6通路、ATF6、或ATF6α的IC50在约10nM与5μM之间，如在约50nM与2μM之间、100nM与1μM之间、或20nM与1μM之间。半数最大抑制浓度(IC50)是物质在抑制特定的生物功能或生化功能方面的有效性的量度。IC50是一种定量量度，其指示将给定的生物过程或过程的组分(如酶、细胞、细胞受体或微生物)抑制一半需要多少抑制剂。在体外和体内确定IC50的方法是本领域已知的。
在一些实施方案中，本文所述的化合物或其盐和本文所述的组合物以这样的量施用，其中不调节(激活或抑制)ATF6β活性或在较小程度上调节(激活或抑制)所述ATF6β活性。在一些实施方案中，对ATF6α的调节(激活或抑制)比对ATF6β活性的抑制高至少或至少约2倍，例如高至少或至少约3倍、4倍、5倍、8倍、10倍、15倍、30倍、50倍、60倍、75倍或100倍。
本文提供了一种治疗个体的疾病的方法，所述方法包括向所述个体施用有效量的式(I)的化合物或其任何实施方案、变型或方面(统称为，式(I)的化合物或本发明化合物或本文详述或描述的化合物)或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，本文提供了一种治疗个体的通过ATF6通路介导的疾病的方法，所述方法包括向所述个体施用有效量的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，本文提供了一种治疗个体的通过ATF6通路的激活介导的疾病的方法，所述方法包括向所述个体施用有效量的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，本文提供了一种治疗个体的通过ATF6的激活介导的疾病的方法，所述方法包括向所述个体施用有效量的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，本文提供了一种治疗个体的通过ATF6α的激活介导的疾病的方法，所述方法包括向所述个体施用有效量的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，本文提供了一种治疗个体的特征在于ATF6通路的激活的疾病的方法，所述方法包括向所述个体施用有效量的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，本文提供了一种治疗个体的特征在于ATF6的激活的疾病的方法，所述方法包括向所述个体施用有效量的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，本文提供了一种治疗个体的特征在于ATF6α的激活的疾病的方法，所述方法包括向所述个体施用有效量的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，本文提供了一种治疗个体的特征在于ATF6靶基因的表达增加的疾病的方法，所述方法包括向所述个体施用有效量的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，本文提供了一种治疗个体的特征在于ATF6α靶基因的表达增加的疾病的方法，所述方法包括向所述个体施用有效量的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，所述表达增加是与非患病组织或细胞相比的。
据信本发明的化合物或其盐有效地治疗各种疾病和障碍，如其中ATF6激活的转录靶标在疾病的发病机制或发展中起作用的疾病。例如，在一些实施方案中，本发明的化合物和组合物可用于治疗病毒感染、癌症、神经变性疾病或血管疾病(如心血管疾病)。在一些实施方案中，所述疾病是病毒感染、遗传性小脑萎缩和共济失调、或阿尔茨海默病。在一些实施方案中，所述疾病是2型糖尿病或糖尿病性肾病。在一些实施方案中，所述疾病是心肌萎缩、心力衰竭、动脉粥样硬化、或缺血，如缺血性心脏病或脑缺血。
已经证明，UPR的ATF6分支对于病毒感染最为重要。例如，ATF6对于在西尼罗河病毒感染期间维持细胞活力和调节免疫应答很重要(Ambrose R J.Virol.2013年2月第87卷第4期2206-2214)。此外，非洲猪瘟病毒激活ATF6分支以预防早期细胞凋亡并且确保病毒复制(Galindo I,Cell Death Dis 2012年7月5日；3:e341.doi:10.1038/cddis.2012.81)。因此，在一些实施方案中，本文所述的化合物或其盐或者本文所述的组合物可以用于治疗或预防病毒感染的方法中。在一些实施方案中，病毒感染是非洲猪瘟病毒、登革病毒、肠病毒、乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、流感病毒、蜱传脑炎病毒或西尼罗河病毒感染。在一些实施方案中，病毒感染是由在感染的细胞中激活ATF6的病毒引起的。
在一些实施方案中，本文所述的化合物或其盐或者本文所述的组合物可以用于治疗癌症的方法中，所述癌症是如乳腺癌、结直肠癌、卵巢癌、前列腺癌、胰腺癌、肾癌、肺癌、黑色素瘤、纤维肉瘤、骨肉瘤、结缔组织肉瘤、肾细胞癌、巨细胞癌、鳞状细胞癌、白血病、皮肤癌、软组织癌、肝癌、胃肠道癌或腺癌。在一些实施方案中，所述化合物、盐或组合物可以用于治疗转移性肾癌、慢性淋巴细胞性白血病、胰腺腺癌或非小细胞肺癌的方法中。
ATF6α转录靶标在癌细胞中高水平表达。例如，在细胞内GRP78水平与肿瘤大小之间存在相关性(Cai,J.W.等人,J Cell Physiol,1993,154(2):229-37)。此外，当在癌细胞(然后注入小鼠)中实验性抑制GRP78/BiP表达时，由于对细胞毒性T细胞(CTL)应答和肿瘤坏死因子(TNF)的敏感性增加，所述细胞无法形成肿瘤(Jamora,C.等人,Proc Natl AcadSci USA,1996,93(15):7690-7694；Sugawara,S.等人,Cancer Res,1993,53(24):6001-6005)。
细胞休眠的癌细胞缺乏增殖标记物，并且以静止状态存在。已知经历细胞休眠的细胞包括弥散性肿瘤细胞(DTC)和位于循环内的肿瘤细胞(称为循环肿瘤细胞(CTC))(Hensel,J.A.等人,Nat Rev Clin Oncol,2013,10(1):41-51)。由孤立性DTC引起的最小残留疾病是与不利的患者预后相关的公认事件。DTC(通常对增殖标记物(例如，Ki67)染色呈阴性)可能是在治疗原发性肿瘤后多达数十年可能发展的肿瘤复发的来源(Meng,S.等人,Clin Cancer Res,2004,10(24):8152-8162)。据报道，ATF6α是休眠癌细胞通过ATF6α-Rheb-mTOR通路的转导存活信号(Schewe,D.M.等人,Proc Natl Acad Sci USA,2008,105(30):10519-10524)。ATF6α信号传导对于针对ER和低葡萄糖应激进行保护很重要，并且在ATF6α与MTOR信号传导之间的相互作用似乎赋予休眠癌细胞对多柔比星和mTOR抑制剂雷帕霉素的耐药性，从而揭示了潜在的耐药性机制(Schewe,D.M.等人,Proc Natl Acad SciUSA,2008,105(30):10519-10524)。
此外，一项多癌症研究示出了相比于原发性病变在转移中ATF6表达更高，并且在原发性肿瘤中ATF6α表达增加的结肠癌患者复发的机会更高(Ramaswamy,S.,等人,ProcNatl Acad Sci USA,2001,98(26):15149-15154)。
在一些实施方案中，本文所述的化合物或其盐或本文所述的组合物可以用于治疗个体的癌症的方法中，其中所述个体的一个或多个癌细胞是休眠的癌细胞。在一些实施方案中，一个或多个休眠的癌细胞是弥散性肿瘤细胞或循环肿瘤细胞。在一些实施方案中，一个或多个休眠的癌细胞是弥散性肿瘤细胞。
在一些实施方案中，本文所述的化合物或其盐或者本文所述的组合物可以用于治疗个体的癌症的方法中，其中所述个体已经进行先前的治疗。在一些实施方案中，所述癌症对先前的治疗耐药或难治。在一些实施方案中，所述癌症已经在先前的治疗中进展。在所述实施方案中，所述癌症是复发性癌症。在一些实施方案中，所述先前的治疗是用以下的治疗：泛素蛋白酶体通路抑制剂(例如，硼佐替米)、紫杉烷(例如，紫杉醇或多西紫杉醇)、Cox-2抑制剂(例如，塞来昔布)、铂类抗肿瘤药物(例如，顺铂或奥沙利铂)、蒽环素(例如多柔比星)、嘧啶类似物(例如5-氟尿嘧啶或吉西他滨)、拓扑异构酶抑制剂(例如，依托泊苷)、mTOR抑制剂(例如，雷帕霉素)、免疫检查点抑制剂、或用于免疫肿瘤学的药剂。在一些实施方案中，所述癌症对用以下的治疗耐药：泛素蛋白酶体通路抑制剂(例如，硼佐替米)、紫杉烷(例如，紫杉醇或多西紫杉醇)、Cox-2抑制剂(例如，塞来昔布)、铂类抗肿瘤药物(例如，顺铂或奥沙利铂)、蒽环素(例如多柔比星)、嘧啶类似物(例如5-氟尿嘧啶或吉西他滨)、拓扑异构酶抑制剂(例如，依托泊苷)、mTOR抑制剂(例如，雷帕霉素)、免疫检查点抑制剂、或用于免疫肿瘤学的药剂。在一些实施方案中，所述癌症对用多柔比星和/或雷帕霉素的治疗耐药。
在一些实施方案中，施用所述化合物、盐或组合物减少所述个体体内的肿瘤生长、肿瘤增殖或致瘤性。在一些实施方案中，所述化合物、盐或组合物可以用于减少有需要的个体体内的肿瘤生长、肿瘤增殖或致瘤性的方法中。在一些实施方案中，肿瘤生长减慢或停滞。在一些实施方案中，肿瘤生长减少至少约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％或90％。在一些实施方案中，肿瘤的尺寸减小。在一些实施方案中，肿瘤尺寸减小至少约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％或90％。在一些实施方案中，肿瘤转移得到预防或减慢。在一些实施方案中，将肿瘤生长、肿瘤增殖或致瘤性与施用所述化合物、盐或组合物之前所述个体体内的肿瘤生长、肿瘤增殖或致瘤性进行比较。在一些实施方案中，将肿瘤生长、肿瘤增殖或致瘤性与类似的个体或个体组体内的肿瘤生长、肿瘤增殖或致瘤性进行比较。测量肿瘤生长、肿瘤增殖和致瘤性的方法是本领域已知的，例如通过对所述个体进行重复成像。
据信本发明的化合物或其盐有效地抑制血管生成。ATF6和PERK的激活通过正向调节mTORC2介导的AKT对Ser473的磷酸化(这是AKT的完整活性所需的)来促进血管内皮生长因子(VEGF)对内皮细胞(EC)的存活作用。在小鼠Matrigel塞(标准血管生成测定)中，PLCγ、ATF6或eIF2a的耗尽显著抑制了体内VEGF诱导的血管化(Karali,E.等人,MolecularCell,2014,54:559-572)。因此，据信本发明的化合物或其盐有效地治疗与血管生成相关的各种疾病和障碍。
血管生成牵涉在各种疾病障碍的发病机制中，所述疾病障碍包括实体瘤和转移、动脉粥样硬化、晶体后纤维增生症、血管瘤、慢性炎症、眼内新血管疾病如增殖性视网膜病变(例如糖尿病性视网膜病变、年龄相关性黄斑变性(AMD)、新生血管性青光眼)、移植的角膜组织和其他组织的免疫排斥、类风湿性关节炎和银屑病。因此，在一些实施方案中，本发明的化合物和组合物用于治疗以下疾病的方法中：癌症(如本文所述的任何癌症)、不希望或异常的肥大、关节炎、类风湿关节炎(RA)、牛皮癣、银屑病斑块、结节病、动脉粥样硬化、动脉粥样硬化斑块、糖尿病和其他增殖性视网膜病变包括早产儿视网膜病变、晶体后纤维增生症、新生血管性青光眼、年龄相关性黄斑变性、糖尿病性黄斑水肿、角膜新生血管形成、角膜移植物新生血管形成、角膜移植物排斥、视网膜/脉络膜新生血管形成、角新生血管形成(虹膜发红)、新生血管性眼病、血管再狭窄、动静脉畸形(AVM)、脑膜瘤、血管瘤、血管纤维瘤、甲状腺增生(包括格雷夫斯病)、角膜及其他组织移植、慢性炎症、肺部炎症、急性肺损伤/ARDS、脓毒病、原发性肺动脉高压、恶性肺积液、脑水肿(例如、与急性中风/闭合头部损伤/创伤相关)、滑膜炎症、RA中血管翳形成、骨化性肌炎、肥厚型骨形成、骨关节炎(OA)、难治性腹水、多囊性卵巢病、子宫内膜异位、第3间隙体液病(3rd spacing of fluiddisease)(胰腺炎、隔室综合征、烧伤、肠病)、子宫肌瘤、早产、慢性炎症如IBD(克罗恩病和溃疡性结肠炎)、同种异体肾移植排斥、炎性肠病、肾病综合征、不希望的或异常的组织肿块生长(非癌症)、血友病性关节、增生性疤痕、毛发生长抑制、奥-韦综合征、化脓性肉芽肿晶体后纤维增生症、硬皮病、沙眼、血管粘连、滑膜炎、皮肤炎、子痫前期、腹水、心包积液(如与心包炎相关的心包积液)、和胸腔积液。
肠道屏障防御受损与微生物生态失调的联合作为多种障碍(包括炎性肠病、1型糖尿病、阿尔茨海默病和癌症)的关键促进因素而出现。特别地，在患有结直肠癌(CRC)的患者中，肿瘤组织中ATF6的高表达水平与肿瘤大小增加和无疾病存活降低相关。另一方面，微生物群改变与CRC相关。这些数据表明UPR的激活、微生物群与结肠肿瘤发生之间的联系。已经证明，经由ATF6的UPR激活与微生物群依赖性结肠肿瘤发生之间的新型关系。在肿瘤形成之前，发生杯状细胞损失和细菌浸润到上皮隐窝中，并且对nATF6IEC小鼠的抗生素治疗显著减轻了肿瘤负担。在ATF6激活的可诱导小鼠模型中，在第26周时肿瘤发生率为100％。激活的ATF6诱导后四天，细菌与结肠上皮的接近随着细胞增殖的增加而显著增加，这表明这些改变是ATF6激活下游的早期事件。一些研究人员发现，在5周龄时(在肿瘤发生开始之前)在nATF6IEC小鼠的盲肠中存在微生物生态失调以及微生物多样性降低，如通过16S rRNA基因扩增子测序评估的。与对照微生物群转移到nATF6IEC小鼠中相比，这种失调的微生物群在转移到无菌nATF6IEC小鼠中后增强了肿瘤形成。这些数据表明，在此模型中，上皮中的微生物生态失调和随后的STAT3信号传导显著导致肿瘤发生。
因此，在一些实施方案中，本文所述的化合物或其盐或者本文所述的组合物可以用于通过抑制ATF6预防杯状细胞损失和生态失调来预防或治疗CRC的方法中。在一些实施方案中，本文所述的化合物或其盐或者本文所述的组合物可以用于阻断ATF6信号传导并且逆转生态失调以拮抗CRC患者子集中的肿瘤进展的方法中。
UPR信号传导臂显著影响ER蛋白质稳态和功能的能力表明，这些通路的选择性激活具有改善与多种病因的人疾病相关的ER蛋白质稳态病理性失衡的重要潜力。特别地，已经显示ATF6信号传导臂的激活可用于改善与疾病相关的ER蛋白质稳态和功能的失衡。使用化学遗传学方法对ATF6转录因子的非应激依赖性激活诱导ER蛋白质稳态通路的保护性重塑，以选择性地减少失稳的淀粉样蛋白疾病相关蛋白(如甲状腺素转运蛋白和免疫球蛋白轻链)的分泌和细胞外聚集，而不会显著影响内源性蛋白质组的分泌(Shoulders等人,2013；Chen等人,2014；Cooley等人,2014；Plate等人,2016)。因此，本文所述的化合物或其盐或者本文所述的组合物可以用于在蛋白质错误折叠和聚集疾病的细胞和动物模型中改正ER蛋白质稳态的病理性失衡的方法中。
本发明的一个方面是基于这样的意外发现，细胞中ATF6的过表达阻止原本在该细胞中出现不需要的蛋白质积累时会发生的细胞死亡。因此，在一些实施方案中，本文所述的化合物或其盐或者本文所述的组合物可以用于治疗与分子的异常积累相关的病症如帕金森病(PD)的方法中，所述分子与帕金蛋白(parkin)相互作用并且在细胞内未被妥善处置。
在一些实施方案中，本文所述的化合物或其盐或者本文所述的组合物可以用于预防细胞死亡的方法中。例如，在本发明中考虑预防神经元细胞死亡，包括预防哺乳动物(包括人)的黑质神经元死亡。
在一些实施方案中，本文所述的化合物或其盐或者本文所述的组合物可以用于治疗与异常沉淀物和/或蛋白质聚集相关的神经变性疾病的方法中。例如，患有阿尔茨海默病的患者的大脑展现出神经元纤维缠结(NFT)、老年斑块和淀粉样蛋白β的脑血管沉积物；患有朊病毒障碍的患者的大脑展现出包含朊病毒蛋白的斑块；患有亨廷顿病的患者的大脑展现出亨廷顿沉淀物；患有显性遗传性脊髓小脑性共济失调的患者具有相应的ataxin蛋白沉淀物；患有多系统萎缩症的患者展现出α-突触核蛋白沉积物；患有进行性核上性麻痹的患者展现出τ蛋白沉淀物；并且患有家族性肌萎缩性侧索硬化症的患者展现出SOD1沉淀物(Johnson,W.G.,J.Anat.4:609-616(2000))。由于这些不同的疾病共有共同的病理学机制，因此它们可能共有导致蛋白质的异常聚集和/或沉淀的通路(Hardy,J.和Gwinn-Hardy,K.,Science 282(5391):1075-1079(1998))。
在一些实施方案中，本文所述的化合物或其盐或者本文所述的组合物可以用于作为独立疗法或作为与姑息性的其他药剂(例如，减轻待治疗的障碍的症状的药剂)和/或靶向障碍的病因的药剂的联合疗法的方法中。例如，向受试者施用增加ATF6表达的组合物可以与L-DOPA、多巴胺激动剂、单胺氧化酶B抑制剂或可用于治疗神经变性疾病(如帕金森病)的任何其他组合物联合进行。
也已经证明心脏中活性ATF6转录因子的过表达通过涉及抗氧化基因过氧化氢酶的ATF6依赖性调节的机制在缺血性心脏病小鼠模型中改善心脏表现(Jin等人,2017)。类似地，肝脏中活性ATF6转录因子的过表达改善了肥胖小鼠中的胰岛素敏感性(Ozcan等人,2016)。这些结果表明，ATF6激活提供了一种改善牵涉在不同疾病中的ER蛋白质稳态缺陷的独特的治疗机会。
在一些实施方案中，本文所述的化合物或其盐或者本文所述的组合物可以用于促进心肌I/R损伤恢复(特别地通过激活心脏中的内源性适应性ATF6基因程序)的方法中。
ATF6α通路也在应激诱导的脂质积累中起作用。在培养的肝细胞和肾细胞中，p50ATF6与SREBP-2的核形式相互作用，从而拮抗SREBP-2调节的脂肪生成基因的转录和脂质积累。此外，Atf6α缺失的小鼠响应于ER应激的药理学诱导而展示远长于野生型小鼠的肝功能障碍和脂肪变性。这可以通过CHOP的慢性表达和C/EBPα的持续抑制和/或ATF6α介导的编码蛋白质分子伴侣、运输和ERAD功能的基因的诱导的失效来解释。当饲喂HFD时，Atf6α-/-小鼠患上与SREBP-1c的表达增加相关的肝脏脂肪变性和葡萄糖耐受不良。另一方面，ATF6的功能活性核片段在斑马鱼中的过表达引起脂肪肝，这表明ATF6α的微调对于预防肝脏脂肪变性可能很重要。
在一些实施方案中，本文所述的化合物或其盐或者本文所述的组合物可以用于治疗代谢障碍的方法中，所述代谢障碍是如肥胖、I型和II型糖尿病、胰腺炎、血脂异常、高脂血症、非酒精性脂肪肝疾病(NAFLD)、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、胰岛素抵抗、高胰岛素血症、葡萄糖耐受不良、高血糖症、代谢综合征、急性心肌梗塞、高血压、心血管疾病、动脉粥样硬化、外周动脉疾病、中风、心力衰竭、冠状动脉性心脏病、肾病、糖尿病并发症、神经病、胃轻瘫、与胰岛素受体中的严重失活突变相关的障碍和其他代谢障碍。
在一些实施方案中，本文所述的化合物或其盐或者本文所述的组合物可以用于治疗缺血性心脏病或心肌缺血/再灌注(I/R)恢复的方法中。
根据本公开文本，在一些实施方案中，所述个体是哺乳动物。在一些实施方案中，所述个体是灵长类动物、牛、绵羊、猪、马、犬、猫、兔、或啮齿类动物。在一些实施方案中，所述个体是人。在一些实施方案中，所述个体患有本文公开的任何疾病或障碍。在一些实施方案中，所述个体具有患上本文公开的任何疾病或障碍的风险。
本文还提供了本文所述的化合物或其药学上可接受的盐或者本文所述的药物组合物在制造药剂中的用途。在一些实施方案中，药剂的制造用于治疗本文所述的障碍或疾病。在一些实施方案中，药剂的制造用于预防和/或治疗通过ATF6通路、ATF6、或ATF6α介导的障碍或疾病。
组合疗法
如本文所提供的，本文所述的化合物或其盐和本文所述的组合物可以与药剂一起施用以治疗本文所公开的任何疾病和障碍。在一些实施方案中，所述药剂调节未折叠蛋白反应或整合应激反应。在一些实施方案中，所述药剂是抗血管生成剂。在一些实施方案中，所述药剂是抗癌剂。在一些实施方案中，所述药剂靶向免疫检查点蛋白。
在一些实施方案中，依序施用、并行施用或同时施用(a)本文所述的化合物或其药学上可接受的盐或者本文所述的药物组合物和(b)药剂。在某些实施方案中，以约15分钟或更短时间(如约10分钟、5分钟或1分钟或更短时间中的任一个)的时间间隔施用(a)本文所述的化合物或其药学上可接受的盐或者本文所述的药物组合物和(b)药剂。在某些实施方案中，以约15分钟或更长时间(如约20分钟、30分钟、40分钟、50分钟、60分钟或更多分钟中的任一个)的时间间隔施用(a)本文所述的化合物或其药学上可接受的盐或者本文所述的药物组合物和(b)药剂。可以首先施用(a)本文所述的化合物或其药学上可接受的盐或者本文所述的药物组合物和(b)药剂中的任一种。在某些实施方案中，同时施用(a)本文所述的化合物或其药学上可接受的盐或者本文所述的药物组合物和(b)药剂。
在一些实施方案中，所述药剂调节未折叠蛋白反应或整合应激反应。在一些实施方案中，所述药剂抑制未折叠蛋白反应或整合应激反应。在一些实施方案中，所述药剂调节PERK通路。在一些实施方案中，所述药剂抑制PERK通路。在一些实施方案中，所述药剂抑制PERK。已知ATF6与IRE1合作起作用，因为ATF6的靶基因之一是XBP1(IRE1的关键底物)(Yoshida,H.等人,Cell,2001,107(7):881-891)，例如ATF6和IRE1信号传导对于经历ER应激的黑色素瘤细胞的存活很重要，这表明了ATF6抑制剂与IRE1抑制剂组合使用中的潜在益处(Tay,K.H.等人,Cell Signal,2014,26(2):287-294)。因此，在一些实施方案中，所述药剂调节IRE1/XBP1通路。在一些实施方案中，所述药剂抑制IRE1/XBP1通路。在一些实施方案中，所述药剂抑制IRE1或XBP1。
在一些实施方案中，所述药剂是抗血管生成剂。据信本发明的化合物或其盐有效地抑制血管生成并且治疗与血管生成相关的疾病和障碍。因此，本文提供了一种抑制血管生成的方法，所述方法包括向个体施用(a)本文所述的化合物、或其药学上可接受的盐或者本文所述的药物组合物和(b)抗血管生成剂。本文还提供了一种治疗与血管生成相关的疾病或障碍(如本文公开的与血管生成相关的任何疾病或障碍)的方法，所述方法包括向个体施用(a)本文所述的化合物、或其药学上可接受的盐或者本文所述的药物组合物和(b)抗血管生成剂。在一些实施方案中，所述抗血管生成剂是VEGF拮抗剂。在一些实施方案中，所述抗血管生成剂是贝伐单抗或兰尼单抗。
血管生成作为肿瘤微环境中的免疫调节介质的作用最近开始成为焦点。此外，新出现的证据表明，免疫疗法可以导致肿瘤中免疫介导的血管病变，这表明肿瘤脉管系统可能是肿瘤定向的免疫应答与癌症本身之间的重要接口。免疫检查点抑制作为许多癌症的有效免疫治疗策略的引入使人们对此接口有更好的了解。对血管生成、VEGF信号传导与免疫系统之间复杂关系的初步研究表明，免疫检查点阻断与血管生成抑制的结合具有潜力，并且增强免疫疗法的努力将广泛影响肿瘤学的未来。ATF6对VEGF信号传导的影响加强了以与免疫检查点抑制剂的组合使用ATF6抑制剂的想法(Ott,P.A.,F.S.Hodi,和E.I.Buchbinder,Inhibition of Immune Checkpoints and Vascular EndothelialGrowth Factor as Combination Therapy for Metastatic Melanoma:An Overview ofRationale,Preclinical Evidence,and Initial Clinical Data.Front Oncol,2015.5:第202页)。
因此，在一些实施方案中，所述药剂靶向免疫检查点蛋白。在一些实施方案中，所述药剂是靶向免疫检查点蛋白的抗体。在一些实施方案中，所述药剂靶向PD-1、PD-L1、PD-L2、CTLA4、TIM3、LAG3、CCR4、OX40、OX40L、IDO和A2AR。在一些实施方案中，所述药剂是抗PD-1抗体、抗PD-L1抗体、或抗CTLA-4抗体。
本文提供了一种增强个体的免疫应答的方法，所述方法包括向所述个体施用(a)本文所述的化合物、或其药学上可接受的盐或者本文所述的药物组合物和(b)靶向免疫检查点蛋白的药剂。在一些实施方案中，所述个体患有癌症。在一些实施方案中，所述增强的免疫应答是针对肿瘤或癌细胞的。
本文还提供了治疗有需要的个体的癌症的方法，所述方法包括向所述个体施用(a)本文所述的化合物、或其药学上可接受的盐或者本文所述的药物组合物和(b)靶向免疫检查点蛋白的药剂，其中所述个体的免疫应答增加。
在一些实施方案中，所述药剂是抗癌剂。在一些实施方案中，抗癌剂是泛素蛋白酶体通路抑制剂(例如，硼佐替米)、紫杉烷(例如，紫杉醇或多西紫杉醇)、Cox-2抑制剂(例如，塞来昔布)、铂类抗肿瘤药物(例如，顺铂或奥沙利铂)、蒽环素(例如多柔比星)、嘧啶类似物(例如5-氟尿嘧啶或吉西他滨)、拓扑异构酶抑制剂(例如，依托泊苷)、或调节未折叠蛋白反应或整合应激反应的药剂(例如IRE1/XBP1抑制剂或PERK抑制剂)。在一些实施方案中，所述抗癌剂是奥沙利铂、5-氟尿嘧啶、或吉西他滨。在一些实施方案中，所述抗癌剂是免疫检查点抑制剂或用于免疫肿瘤学的药剂。
在一些实施方案中，将有效量的本文所述的化合物、或其药学上可接受的盐或者本文所述的药物组合物施用至患有癌症的个体以增加对一种或多种抗癌治疗的敏感性。
治疗耐药性是改善患有癌症的患者的结局的主要障碍。辐射可以诱导ER应激及其下游信号传导，并且似乎与继发于辐照的ROS平衡变化相关。以前，ATF6的敲低足以增强辐射诱导的细胞死亡(Dadey,D.Y.等人,Oncotarget,2016,7(2):2080-2092)。这表明ATF6作为潜在治疗靶标可增强辐射疗法的功效。
在一些实施方案中，将有效量的本文所述的化合物、或其药学上可接受的盐或者本文所述的药物组合物施用至患有癌症的个体以增加对辐射的敏感性。在一些实施方案中，本文提供了治疗有需要的个体的癌症的方法，所述方法包括向所述个体施用(a)本文所述的化合物或其药学上可接受的盐或者本文所述的药物组合物和(b)辐射。
在一些实施方案中，将有效量的本文所述的化合物、或其药学上可接受的盐或者本文所述的药物组合物施用至患有癌症的个体以增加对一种或多种抗癌剂的敏感性。在一些实施方案中，所述抗癌剂是泛素蛋白酶体通路抑制剂(例如，硼佐替米)、紫杉烷(例如，紫杉醇或多西紫杉醇)、Cox-2抑制剂(例如，塞来昔布)、铂类抗肿瘤药物(例如，顺铂或奥沙利铂)、蒽环素(例如多柔比星)、嘧啶类似物(例如5-氟尿嘧啶或吉西他滨)、拓扑异构酶抑制剂(例如，依托泊苷)、或调节未折叠蛋白反应或整合应激反应的药剂(例如IRE1/XBP1抑制剂或PERK抑制剂)。在一些实施方案中，所述抗癌剂是奥沙利铂、5-氟尿嘧啶、或吉西他滨。在一些实施方案中，所述抗癌剂是免疫检查点抑制剂或用于免疫肿瘤学的药剂。
本文提供了治疗个体的代谢性疾病和/或纤维化疾病的方法，所述方法包括向所述个体施用(a)本文所述的化合物、或其药学上可接受的盐或者本文所述的药物组合物和(b)药剂。在一些实施方案中，所述药剂是蛋白酶体抑制剂，例如硼替佐米、卡非佐米和伊沙佐米。在一些实施方案中，所述药剂是单克隆抗体，例如达雷木单抗和艾洛珠单抗。在一些实施方案中，所述药剂是组蛋白脱乙酰酶(HDAC)蛋白的抑制剂，例如帕比司他、罗米地辛和伏立诺他。在一些实施方案中，所述药剂是免疫调节性药物(IMiD)，例如沙利度胺、来那度胺和泊马度胺。在一些实施方案中，所述药剂是肾上腺皮质类固醇，例如地塞米松、泼尼松、泼尼松龙和甲基泼尼松龙。在一些实施方案中，所述药剂是靶向IRE1-XBP1的疗法。
给药和施用方法
向个体(如人)施用的化合物的剂量可以随具体的化合物或其盐、施用方法和所治疗的具体疾病(如癌症的类型和阶段)而变化。在一些实施方案中，所述化合物或其盐的量是治疗有效量。
在一方面，所述化合物的有效量可以是在约0.01与约100mg/kg之间的剂量。本发明的化合物的有效量或剂量可以通过常规方法确定，所述常规方法如建模、剂量递增或临床试验，其中考虑多种因素，例如施用或药物递送的方式或途径、药剂的药代动力学、待治疗疾病的严重程度和病程、受试者的健康状态、状况和体重。示例性剂量在每天约0.1mg至10g的范围内。
在一个方面，本文提供的任何方法可以包括向个体施用药物组合物，所述药物组合物含有有效量的本文提供的化合物或其盐和药学上可接受的赋形剂。
可以根据有效给药方案向个体施用本发明的化合物或组合物，持续所需时间段或持续时间，如至少约1个月、至少约2个月、至少约3个月、至少约6个月、或至少约12个月或更长时间，这在一些变型中可能持续个体的生命的持续时间。在一个变型中，所述化合物按每天或间歇的时间表施用。所述化合物可以在一段时间内连续(例如，每天至少一次)向个体施用。给药频率也可以少于每天一次，例如约每周一次给药。给药频率可以多于每天一次，例如每天两次或三次。给药频率也可以是间歇性的，包括“药物假期”(例如，每天一次给药持续7天，然后持续7天不给药，重复任何14天的时间段，如约2个月、约4个月、约6个月或更久)。任何给药频率可以采用本文所述的任何化合物以及本文所述的任何剂量。
本文提供的化合物或其盐可以经由各种途径向个体施用，所述途径包括例如静脉内、肌内、皮下、口服和透皮。在一些实施方案中，所述化合物或组合物是口服施用的。本文提供的化合物可以以低剂量频繁地施用，称为“节律性疗法”，或作为使用单独的或与一种或多种另外的药物组合的化合物的维持疗法的一部分施用。节律性疗法或维持疗法可以包括循环施用本文提供的化合物。节律性疗法或维持疗法可以包括肿瘤内施用本文提供的化合物。
本文还提供了用于治疗、预防本文所述的疾病和/或延迟所述疾病的发作和/或发展的如本文所述的组合物(包括药物组合物)和本文所述的其他方法。在某些实施方案中，所述组合物包含以单位剂型存在的药物配制品。
制品和试剂盒
本公开文本进一步提供了在合适包装中包含本文所述的本公开文本的化合物或其盐、组合物和单位剂量的制品。在某些实施方案中，所述制品用于本文所述的任何方法中。合适的包装是本领域已知的并且包括例如小瓶、器皿、安瓿、瓶、罐、柔性包装等。可以进一步将所述制品灭菌和/或密封。
本公开文本进一步提供了用于进行本公开文本的方法的试剂盒，所述试剂盒包含本文所述的一种或多种化合物或包含本文所述的化合物的组合物。所述试剂盒可以采用本文公开的任何化合物。在一个变型中，所述试剂盒采用本文所述的化合物或其药学上可接受的盐。所述试剂盒可以用于本文所述的任何一种或多种用途，并且相应地可以含有用于治疗本文所述的疾病(如癌症)的说明书。
试剂盒通常包含合适的包装。所述试剂盒可以包含含有本文所述的任何化合物的一个或多个容器。每种组分(如果存在多于一种组分)可以被包装在单独的容器中，或一些组分可以在交叉反应性和保质期允许的情况下组合在一个容器中。
所述试剂盒可以呈单位剂型、散装包装(例如，多剂量包装)或亚单位剂量。例如，可以提供含有足够剂量的如本文公开的化合物和/或可用于本文详述的疾病(例如，高血压)的第二药学活性化合物的试剂盒，以提供个体的有效治疗持续延长的时间段，如一周、2周、3周、4周、6周、8周、3个月、4个月、5个月、7个月、8个月、9个月或更长时间中的任一个。试剂盒还可以包含多个单位剂量的化合物和使用说明书，并且以足以在药房(例如，医院药房和复合药房)中储存和使用的数量进行包装。
所述试剂盒可以任选地包括一套与本发明方法的一种或多种组分的使用有关的说明书，通常是书面说明书，但是含有说明书的电子存储介质(例如，磁盘或光盘)也是可接受的。试剂盒中包括的说明书通常包括关于组分及其对个体的施用的信息。
通过参考以下实施例可以进一步理解本发明，所述实施例是通过说明的方式提供的，而不意欲具有限制性。
实施例
合成实施例
提供以下实施例以说明而不是限制本公开文本。本领域技术人员将认识到，以下合成反应和方案可以通过选择合适的起始材料和试剂来修改，以便得到式(I-1)/(I-2)的其他化合物或其盐。所述化合物使用上述通用方法来制备。
在整个实施例中使用以下缩写：DCM(二氯甲烷)、DIAD(偶氮二甲酸二异丙酯)、DIPEA或DIEA(N,N-二异丙基乙基胺)、DMF(N,N-二甲基甲酰胺)、DMSO(二甲基亚砜)、HATU((1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化六氟磷酸盐)、HPLC(高效液相色谱法)、IPA(异丙醇)、LCMS(液相色谱质谱法)、NMR(核磁共振)、PPh3(三苯基磷烷)、RT(室温)、TEA(三乙胺)、THF(四氢呋喃)和TLC(薄层色谱法)。
实施例S2
实施例S2-1. 2-((1-(1-(2,4-双(三氟甲基)苯基)乙基)-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-5-(吡啶-2-基)-1,3,4-噻二唑(化合物2-1)的合成。
Figure BDA0003673001920000431
步骤1：1-(1-(2,4-双(三氟甲基)苯基)乙基)-4-碘-1H-吡唑的合成。向PPh3(1.52g，0.0057mol，1.5当量)和DIAD(1.17g，0.0057mol，1.5当量)在THF(10mL)中的搅拌溶液中添加1-(2,4-双(三氟甲基)苯基)乙-1-醇(1g，0.0038mol，1当量)和4-碘-1H-吡唑(0.748g，0.0038mmol，1当量)并且允许在RT下搅拌16h。通过TLC和LCMS监测反应进程。反应完成后，将反应混合物用乙酸乙酯和水(2X50mL)萃取，将有机层分离并且在减压下蒸发以得到粗产物，将其通过Combi flash色谱法进一步纯化获得1-(1-(2,4-双(三氟甲基)苯基)乙基)-4-碘-1H-吡唑。分析数据：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 8.18(s,1H)8.08(d,J＝8.77Hz,1H)8.04(s,1H)7.67(d,J＝8.33Hz,1H)7.60(s,1H)5.93(q,J＝7.02Hz,1H)1.84(d,J＝7.02Hz,3H)。
步骤2：1-(1-(2,4-双(三氟甲基)苯基)乙基)-4-((三异丙基甲硅烷基)乙炔基)-1H-吡唑的合成。将1-(1-(2,4-双(三氟甲基)苯基)乙基)-4-碘-1H-吡唑(900mg，2.078mmol，1当量)、乙炔基三异丙基硅烷(492.60mg，3.117mmol，1.5当量)、CuI(39.48mg，0.2078mmol，0.1当量)、三乙胺(629.63mg，6.234mmol，3当量)在5mL二噁烷中的溶液用氮气吹扫并且添加Pd(PPh3)2Cl2(72.83mg，0.103mmol，0.05当量)并且在110℃下加热18h。将反应混合物用乙酸乙酯和水(2x50mL)萃取，将有机层收集并且浓缩以得到粗产物，将其通过Combi-flash色谱法纯化以获得纯的产物1-(1-(2,4-双(三氟甲基)苯基)乙基)-4-((三异丙基甲硅烷基)乙炔基)-1H-吡唑。LCMS：489[M+H]+。
步骤3：1-(1-(2,4-双(三氟甲基)苯基)乙基)-4-乙炔基-1H-吡唑的合成。在RT下在无水条件下向1-(1-(2,4-双(三氟甲基)苯基)乙基)-4-((三异丙基甲硅烷基)乙炔基)-1H-吡唑(200mg，0.461mmol，1当量)在4mL THF中的溶液中添加TBAF(1mL)持续3H。将反应混合物用乙酸乙酯和水(2X25mL)萃取，将有机层收集并且浓缩以得到粗产物，将其通过combiflash色谱法纯化以得到1-(1-(2,4-双(三氟甲基)苯基)乙基)-4-乙炔基-1H-吡唑。LCMS:333[M+H]+,1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 8.33(s,1H)8.02-8.11(m,2H)7.62-7.72(m,2H)5.86-5.95(m,1H)4.03(s,1H)1.85(d,J＝7.02Hz,3H)。
步骤4：5-(吡啶-2-基)-1,3,4-噻二唑-2-胺的合成。允许吡啶甲腈(500mg，4.807mmol，1当量)和氨基硫脲(481.25mg，5.28mmol，1.1当量)在TFA(3mL)中的溶液在80℃下加热2h。将冷水倒入反应混合物中，将获得的沉淀物滤除以得到5-(吡啶-2-基)-1,3,4-噻二唑-2-胺。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 8.59(d,J＝4.82Hz,1H)8.05(d,J＝8.33Hz,1H)7.92(td,J＝7.78,1.53Hz,1H)7.67(br.s.,2H)7.43(dd,J＝7.45,4.82Hz,1H)。
步骤5：2-溴-5-(吡啶-2-基)-1,3,4-噻二唑的合成。在0℃下向5-(吡啶-2-基)-1,3,4-噻二唑-2-胺(500mg，2.808mmol，1当量)在乙腈(5mL)中的溶液中添加CuBr2(626.40mg，2.808mmol，1当量)然后添加亚硝酸叔丁酯(0.66mL，5.616mmol，2当量)并且允许在0℃下搅拌3h。将反应混合物用饱和NH4Cl淬灭并且用乙酸乙酯和水萃取，将有机层蒸发以得到粗产物，将其通过CombiFlash色谱法纯化以得到2-溴-5-(吡啶-2-基)-1,3,4-噻二唑。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 8.72(d,J＝4.38Hz,1H)8.24(d,J＝8.33Hz,1H)8.07(t,J＝7.67Hz,1H)7.60-7.66(m,1H)。
步骤6：2-((1-(1-(2,4-双(三氟甲基)苯基)乙基)-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-5-(吡啶-2-基)-1,3,4-噻二唑的合成。将2-溴-5-(吡啶-2-基)-1,3,4-噻二唑(50mg，0.205mmol，1当量)在3mL DMF中的溶液、1-(1-(2,4-双(三氟甲基)苯基)乙基)-4-乙炔基-1H-吡唑(81.97mg，0.246mmol，1.2当量)、CuI(3.89mg，0.020mmol，0.1当量)、Et3N(62.11mg，0.615mmol，3当量)用氮气吹扫并且添加PdCl2(PPh3)2(7.18mg，0.010mmol，0.05当量)并且在110℃下加热18h。将反应混合物用乙酸乙酯和水(2*50mL)萃取。将有机层收集并且浓缩以得到粗产物，将其通过CombiFlash色谱法纯化以得到2-((1-(1-(2,4-双(三氟甲基)苯基)乙基)-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-5-(吡啶-2-基)-1,3,4-噻二唑(14mg，白色固体)。LCMS:494[M+H]+,1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 8.68-8.77(m,2H)8.31(d,J＝8.33Hz,1H)8.05-8.14(m,3H)8.00(s,1H)7.71(d,J＝8.33Hz,1H)7.59-7.66(m,1H)5.99(d,J＝7.02Hz,1H)1.90(d,J＝6.58Hz,3H)。
实施例S2-2. 2-((1-(1-(2,4-双(三氟甲基)苯基)乙基)-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-5-(吡啶-2-基)-1,3,4-噻二唑(化合物2-2和化合物2-3)的合成。
Figure BDA0003673001920000441
步骤1：1-(1-(2,4-双(三氟甲基)苯基)乙基)-4-碘-1H-吡唑的合成。向PPh3(1.52g，0.0057mol，1.5当量)和DIAD(1.17g，0.0057mol，1.5当量)在THF(10mL)中的搅拌溶液中添加1-(2,4-双(三氟甲基)苯基)乙-1-醇(1g，0.0038mol，1当量)和4-碘-1H-吡唑(0.748g，0.0038mmol，1当量)并且允许在RT下搅拌16h。通过TLC和LCMS监测反应进程。将反应混合物用乙酸乙酯和水(2X50mL)萃取，将有机层分离，经无水硫酸钠干燥，在减压下蒸发以得到粗产物，将其通过combiflash色谱法进一步纯化以产出1-(1-(2,4-双(三氟甲基)苯基)乙基)-4-碘-1H-吡唑。LCMS:435[M+H]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 8.18(s,1H)8.08(d,J＝8.77Hz,1H)8.04(s,1H)7.67(d,J＝8.33Hz,1H)7.60(s,1H)5.93(d,J＝7.02Hz,2H)1.84(d,J＝7.02Hz,3H)。
步骤2：1-(1-(2,4-双(三氟甲基)苯基)乙基)-4-((三异丙基甲硅烷基)乙炔基)-1H-吡唑的合成。将1-(1-(2,4-双(三氟甲基)苯基)乙基)-4-碘-1H-吡唑(900mg，2.078mmol，1当量)、乙炔基三异丙基硅烷(492.60mg，3.117mmol，1.5当量)、CuI(39.48mg，0.2078mmol，0.1当量)、三乙胺(629.63mg，6.234mmol，3当量)在5mL二噁烷中的溶液用氮气吹扫并且添加Pd(PPh3)2Cl2(72.83mg，0.103mmol，0.05当量)并且在110℃下加热18h。将反应混合物用乙酸乙酯和水(2*50mL)萃取。将有机层收集并且浓缩以得到粗产物。将粗产物通过combiflash色谱法纯化以获得纯的产物1-(1-(2,4-双(三氟甲基)苯基)乙基)-4-((三异丙基甲硅烷基)乙炔基)-1H-吡唑。LCMS：489[M+H]+。
步骤3：1-(1-(2,4-双(三氟甲基)苯基)乙基)-4-乙炔基-1H-吡唑的合成。在无水条件下向1-(1-(2,4-双(三氟甲基)苯基)乙基)-4-((三异丙基甲硅烷基)乙炔基)-1H-吡唑(200mg，0.461mmol，1当量)在4mL THF中的溶液中添加TBAF(1mL)。将反应混合物用乙酸乙酯和水(2X25mL)萃取，将有机层收集，经无水硫酸钠干燥并且浓缩以得到粗产物，将其通过combiflash色谱法纯化以得到1-(1-(2,4-双(三氟甲基)苯基)乙基)-4-乙炔基-1H-吡唑。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 8.33(s,1H)8.02-8.11(m,2H)7.62-7.72(m,2H)5.86-5.95(m,1H)4.03(s,1H)1.85(d,J＝7.02Hz,3H)。
步骤4：5-(吡啶-2-基)-1,3,4-噻二唑-2-胺的合成。允许吡啶甲腈(500mg，4.807mmol，1当量)和氨基硫脲(481.25mg，5.28mmol，1.1当量)在TFA(3mL)中的溶液在80℃下加热2h。反应完成后，将反应混合物用冰水稀释，将获得的沉淀物滤除以得到5-(吡啶-2-基)-1,3,4-噻二唑-2-胺。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 8.59(d,J＝4.82Hz,1H)8.05(d,J＝8.33Hz,1H)7.92(td,J＝7.78,1.53Hz,1H)7.67(br.s.,2H)7.43(dd,J＝7.45,4.82Hz,1H)。
步骤5：2-溴-5-(吡啶-2-基)-1,3,4-噻二唑的合成。在0℃下向5-(吡啶-2-基)-1,3,4-噻二唑-2-胺(500mg，2.808mmol，1当量)在ACN(5mL)中的溶液中添加CuBr2(626.40mg，2.808mmol，1当量)然后添加亚硝酸叔丁酯(0.66mL，5.616mmol，2当量)并且允许在0℃下搅拌3h。完成后，将反应混合物用NH4Cl淬灭并且用乙酸乙酯和水萃取。将有机层蒸发以得到粗产物，将其通过combiflash色谱法纯化以得到2-溴-5-(吡啶-2-基)-1,3,4-噻二唑。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 8.72(d,J＝4.38Hz,1H)8.24(d,J＝8.33Hz,1H)8.07(t,J＝7.67Hz,1H)7.60-7.66(m,1H)。
步骤6：2-((1-(1-(2,4-双(三氟甲基)苯基)乙基)-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-5-(吡啶-2-基)-1,3,4-噻二唑的合成。将2-溴-5-(吡啶-2-基)-1,3,4-噻二唑(120mg，0.493mmol，1当量)在3mL DMF中的溶液、1-(1-(2,4-双(三氟甲基)苯基)乙基)-4-乙炔基-1H-吡唑(196.74mg，0.591mmol，1.2当量)、CuI(9.36mg，0.049mmol，0.1当量)、Et3N(149.37mg，1.479mmol，3当量)用氮气吹扫并且添加PdCl2(PPh3)2(17.27mg，0.024mmol，0.05当量)并且在110℃下加热18h。将反应混合物用乙酸乙酯和水(2X50mL)萃取，将有机层收集，经无水硫酸钠干燥，浓缩以得到粗产物，将其通过combiflash色谱法纯化。将纯的级分浓缩以得到化合物3(13mg白色固体)和化合物2(15mg白色固体)。LCMS：494[M+H]+。
化合物2：1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 8.65(d,J＝4.82Hz,1H)8.37(d,J＝7.89Hz,1H)7.94(s,1H)7.76-7.91(m,4H)7.68(d,J＝7.89Hz,1H)7.36-7.44(m,1H)5.95(d,J＝6.58Hz,1H)1.97(d,J＝7.02Hz,3H)。对映异构体的洗脱时间：5.2min)，通过手性SFC(Daicel
Figure BDA0003673001920000451
250×20mm，5μm)分离。使用分析级液体二氧化碳和HPLC级0.2％DEA的甲醇溶液的等度程序，总流速：51g/min，助溶剂百分比：18％。
化合物3：1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 8.65(d,J＝4.38Hz,1H)8.37(d,J＝7.89Hz,1H)7.94(s,1H)7.77-7.90(m,4H)7.69(d,J＝8.33Hz,1H)7.36-7.44(m,1H)5.95(d,J＝6.58Hz,1H)1.97(d,J＝6.58Hz,3H)。对映异构体的洗脱时间：4.7min)，通过手性SFC(Daicel
Figure BDA0003673001920000452
250×20mm，5μm)分离。使用分析级液体二氧化碳和HPLC级0.2％DEA的甲醇溶液的等度程序。总流速：51g/min，助溶剂百分比：18％。
实施例S2-3. 2-((1-(2,4-双(三氟甲基)苄基)-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-5-(吡啶-2-基)-1,3,4-噻二唑(化合物2-4)的合成。
Figure BDA0003673001920000461
步骤1：1-(2,4-双(三氟甲基)苄基)-4-碘-1H-吡唑的合成。向PPh3(1.57g，0.006mol，1.5当量)和DIAD(1.21g，0.006mol，1.5当量)在THF(10mL)中的搅拌溶液中添加(2,4-双(三氟甲基)苯基)甲醇(1g，0.0040mol，1当量)和4-碘-1H-吡唑(0.790g，0.0040mol，1当量)并且允许在RT下搅拌16h。通过TLC和LCMS监测反应进程。反应完成后，将反应混合物用乙酸乙酯和水(2X50mL)萃取，将有机层分离，经无水硫酸钠干燥，在减压下蒸发以得到粗产物，将其通过combiflash色谱法进一步纯化以产出1-(2,4-双(三氟甲基)苄基)-4-碘-1H-吡唑，LCMS：421[M+H]+。
步骤2：1-(2,4-双(三氟甲基)苄基)-4-((三异丙基甲硅烷基)乙炔基)-1H-吡唑的合成。将1-(2,4-双(三氟甲基)苄基)-4-碘-1H-吡唑(500mg，1.19mmol，1当量)、乙炔基三异丙基硅烷(325mg，1.78mmol，1.5当量)、CuI(22.61mg，0.119mmol，0.1当量)、三乙胺(360.57mg，3.57mmol，3当量)在5mL二噁烷中的溶液用氮气吹扫并且添加Pd(PPh3)2Cl2(41.70mg，0.059mmol，0.05当量)并且在110℃下加热18h。将反应混合物用乙酸乙酯和水(2*50mL)萃取。将有机层收集并且浓缩以得到粗产物。将粗产物通过combiflash色谱法纯化以获得纯的产物1-(2,4-双(三氟甲基)苄基)-4-((三异丙基甲硅烷基)乙炔基)-1H-吡唑，LCMS：475[M+H]+。
步骤3：1-(2,4-双(三氟甲基)苄基)-4-乙炔基-1H-吡唑的合成。在无水条件下向1-(2,4-双(三氟甲基)苄基)-4-((三异丙基甲硅烷基)乙炔基)-1H-吡唑(300mg，0.632mmol，1当量)在4mL THF中的溶液中添加TBAF(1mL)。将反应混合物用乙酸乙酯和水(2X25mL)萃取，将有机层收集，经无水硫酸钠干燥，浓缩以得到粗产物，将其通过combiflash色谱法纯化以得到1-(2,4-双(三氟甲基)苄基)-4-乙炔基-1H-吡唑，LCMS：319[M+H]+。
步骤4：2-((1-(2,4-双(三氟甲基)苄基)-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-5-(吡啶-2-基)-1,3,4-噻二唑的合成。将2-溴-5-(吡啶-2-基)-1,3,4-噻二唑(80mg，0.330mmol，1当量)在3mL DMF中的溶液、1-(2,4-双(三氟甲基)苄基)-4-乙炔基-1H-吡唑(126.14mg，0.396mmol，1.2当量)、CuI(6.27mg，0.033mmol，0.1当量)、Et3N(99.99mg，0.990mmol，3当量)用氮气吹扫并且添加PdCl2(PPh3)2(11.56mg，0.016mmol，0.05当量)并且在110℃下加热18h。将反应混合物用乙酸乙酯和水(2X50mL)萃取，将有机层收集并且浓缩以得到粗产物。将粗产物通过combiflash色谱法纯化。将纯的级分浓缩以得到2-((1-(2,4-双(三氟甲基)苄基)-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-5-(吡啶-2-基)-1,3,4-噻二唑(30mg，白色固体)，LCMS:480[M+H]+,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 8.74(br.s.,1H)8.58(s,1H)8.31(d,J＝7.89Hz,1H)8.06(s,2H)8.11(s,2H)7.64(d,J＝5.70Hz,1H)7.24(d,J＝8.33Hz,1H)5.72(s,2H)。
实施例S2-4.(E)-2-(2-(1-(1-(2,4-双(三氟甲基)苯基)乙基)-1H-吡唑-4-基)乙烯基)-5-(吡啶-2-基)-1,3,4-噻二唑(化合物2-5)的合成。
Figure BDA0003673001920000471
(E)-2-(2-(1-(1-(2,4-双(三氟甲基)苯基)乙基)-1H-吡唑-4-基)乙烯基)-5-(吡啶-2-基)-1,3,4-噻二唑的合成。向2-((1-(1-(2,4-双(三氟甲基)苯基)乙基)-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-5-(吡啶-2-基)-1,3,4-噻二唑(100mg，0.20mmol，1.0当量)在甲醇(20mL)中的搅拌溶液中在氮气下添加钯碳[Pd/C](10mg，10％w/w)。将反应混合物用H2气体吹扫过夜。通过TLC和LCMS确认产物形成。反应完成后，将反应混合物通过硅藻土床过滤并且将滤液在减压下浓缩以获得粗品，将其通过快速柱色谱法进一步纯化以获得纯的产物。(E)-2-(2-(1-(1-(2,4-双(三氟甲基)苯基)乙基)-1H-吡唑-4-基)乙烯基)-5-(吡啶-2-基)-1,3,4-噻二唑(5mg，作为棕色半固体)，LCMS:496[M+H]+,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.71(d,J＝4.8Hz,1H),8.45(s,1H),8.27(d,J＝7.9Hz,1H),8.13–7.99(m,4H),7.69(d,J＝8.3Hz,1H),7.58(dd,J＝7.6,4.9Hz,1H),7.51(d,J＝16.3Hz,1H),7.41(d,J＝16.3Hz,1H),5.95(p,J＝6.8,5.8Hz,2H),1.89(d,J＝6.9Hz,3H)。
实施例S2-5.(Z)-2-(2-(1-(1-(2,4-双(三氟甲基)苯基)乙基)-1H-吡唑-4-基)乙烯基)-5-(吡啶-2-基)-1,3,4-噻二唑(化合物2-6、化合物2-7和化合物2-8)的合成
Figure BDA0003673001920000472
步骤1：(Z)-2-(2-(1-(1-(2,4-双(三氟甲基)苯基)乙基)-1H-吡唑-4-基)乙烯基)-5-(吡啶-2-基)-1,3,4-噻二唑的合成。向2-((1-(1-(2,4-双(三氟甲基)苯基)乙基)-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-5-(吡啶-2-基)-1,3,4-噻二唑(100mg，0.20mmol，1.0当量)在甲醇(20mL)中的搅拌溶液中在氮气下添加钯碳[Pd/C](10mg，10％w/w)。将反应混合物用H2气体吹扫过夜。通过TLC和LCMS确认产物形成。反应完成后，将反应混合物通过硅藻土床过滤并且将滤液在减压下浓缩以获得粗品，将其通过快速柱色谱法进一步纯化以获得(Z)-2-(2-(1-(1-(2,4-双(三氟甲基)苯基)乙基)-1H-吡唑-4-基)乙烯基)-5-(吡啶-2-基)-1,3,4-噻二唑(30mg，作为棕色半固体)，化合物6，LCMS:496[M+H]+,1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.76(s,1H),8.68(d,J＝4.6Hz,1H),8.30(d,J＝8.0Hz,1H),8.12–7.97(m,4H),7.75(d,J＝8.3Hz,1H),7.63–7.55(m,1H),6.92(d,J＝12.5Hz,1H),6.81(d,J＝12.5Hz,1H),5.99(q,J＝6.8Hz,1H),1.90(d,J＝6.9Hz,3H)。
步骤2：(Z)-2-(2-(1-(1-(2,4-双(三氟甲基)苯基)乙基)-1H-吡唑-4-基)乙烯基)-5-(吡啶-2-基)-1,3,4-噻二唑的合成。将(Z)-2-(2-(1-(1-(2,4-双(三氟甲基)苯基)乙基)-1H-吡唑-4-基)乙烯基)-5-(吡啶-2-基)-1,3,4-噻二唑的对映异构体(洗脱时间5.7min和7.06min)通过手性正相HPLC(Daicel
Figure BDA0003673001920000482
250×20mm，5μm)分离。使用HPLC级正己烷和HPLC级异丙醇的等度程序，总流速：56g/min，助溶剂百分比：10％以获得化合物7(10mg)和化合物8(5mg)。化合物2-7，LCMS:496[M+H]+,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.76(s,1H),8.68(d,J＝4.6Hz,1H),8.30(d,J＝8.0Hz,1H),8.12–7.97(m,4H),7.75(d,J＝8.3Hz,1H),7.63–7.55(m,1H),6.92(d,J＝12.5Hz,1H),6.81(d,J＝12.5Hz,1H),5.99(q,J＝6.8Hz,1H),1.90(d,J＝6.9Hz,3H),化合物2-8，LCMS:496[M+H]+,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.76(s,1H),8.68(d,J＝4.6Hz,1H),8.30(d,J＝8.0Hz,1H),8.12–7.97(m,4H),7.75(d,J＝8.3Hz,1H),7.63–7.55(m,1H),6.92(d,J＝12.5Hz,1H),6.81(d,J＝12.5Hz,1H),5.99(q,J＝6.8Hz,1H),1.90(d,J＝6.9Hz,3H)。
实施例S2-6. 2-(2-(1-(1-(2,4-双(三氟甲基)苯基)乙基)-1H-吡唑-4-基)乙基)-5-(吡啶-2-基)-1,3,4-噻二唑(化合物2-9)的合成。
Figure BDA0003673001920000481
步骤1：2-(2-(1-(1-(2,4-双(三氟甲基)苯基)乙基)-1H-吡唑-4-基)乙基)-5-(吡啶-2-基)-1,3,4-噻二唑的合成。向2-((1-(1-(2,4-双(三氟甲基)苯基)乙基)-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-5-(吡啶-2-基)-1,3,4-噻二唑(100mg，0.202mmol，1当量)在20mL MeOH中的溶液中添加Pd/C(15.02mg，0.141mmol，0.7当量)并且允许在RT下用氢气吹扫24h。反应完成后，将反应混合物通过硅藻土垫过滤并且用乙酸乙酯和水萃取，将有机层蒸发并且浓缩以得到产物。LCMS:498[M+H+],1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 8.67(d,J＝4.39Hz,1H)8.22(d,J＝7.89Hz,1H)7.91-8.08(m,3H)7.85(s,1H)7.51-7.60(m,2H)7.42(s,1H)5.84(d,J＝6.58Hz,1H)3.42(t,J＝7.45Hz,2H)2.94(t,J＝7.24Hz,2H)1.81(d,J＝7.02Hz,3H)。
实施例S2-7. 2-((1-(1-(2,4-双(三氟甲基)苯基)乙基)-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-5-(吡嗪-2-基)-1,3,4-噻二唑(化合物2-10)的合成。
Figure BDA0003673001920000491
步骤1：5-(吡嗪-2-基)-1,3,4-噻二唑-2-胺的合成。允许吡嗪-2-甲腈(2g，0.019mmol，1当量)和氨基硫脲(1.90g，0.020mmol，1.1当量)在TFA(3mL)中的溶液在80℃下加热2h。将冷水倒入反应混合物中，将获得的沉淀物滤除以得到5-(吡嗪-2-基)-1,3,4-噻二唑-2-胺(1.8g)。LCMS：180[M+H]+。
步骤2：2-溴-5-(吡嗪-2-基)-1,3,4-噻二唑的合成。在0℃下向5-(吡嗪-2-基)-1,3,4-噻二唑-2-胺(500mg，2.793mmol，1当量)在ACN(5mL)中的溶液中添加CuBr2(747mg，3.351mmol，1当量)然后添加t-BuNO2(431mg，4.189mmol，1.5当量)并且允许在0℃下搅拌3h。将反应混合物用NH4Cl淬灭并且用乙酸乙酯和水萃取。将有机层蒸发以得到粗产物，将其通过combiflash色谱法纯化以得到2-溴-5-(吡嗪-2-基)-1,3,4-噻二唑(200mg)。LCMS：244[M+H]+。
步骤3：2-((1-(1-(2,4-双(三氟甲基)苯基)乙基)-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-5-(吡嗪-2-基)-1,3,4-噻二唑的合成。将2-溴-5-(吡嗪-2-基)-1,3,4-噻二唑(72mg，0.30mmol，1当量)在DMF(3mL)中的溶液、1-(1-(2,4-双(三氟甲基)苯基)乙基)-4-乙炔基-1H-吡唑(100mg，0.30mmol，1.0当量)、CuI(5.7mg，0.030mmol，0.1当量)、Et3N(90mg，0.900mmol，3当量)用氮气吹扫并且添加PdCl2(PPh3)2(10mg，0.015mmol，0.05当量)并且在110℃下加热过夜。将反应混合物用水(30mL)稀释并且用EtOAc(100mL)萃取，并且再次用水(30mL X 4)洗涤。将反应混合物在减压下浓缩以得到粗产物。将粗产物通过combi-flash色谱法纯化。将纯的级分浓缩以得到2-((1-(1-(2,4-双(三氟甲基)苯基)乙基)-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-5-(吡嗪-2-基)-1,3,4-噻二唑(15mg，白色固体)。LCMS:495[M+H]+,1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm 9.48(s,1H)8.86(s,1H)8.81(br.s.,1H)8.71(s,1H)8.03-8.12(m,2H)7.99(s,1H)7.70(d,J＝8.33Hz,1H)5.97(d,J＝6.58Hz,1H)1.88(d,J＝7.02Hz,3H)。
实施例S2-8. 2-((1-(1-(2,4-双(三氟甲基)苯基)乙基)-3-甲基-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-5-(吡啶-2-基)-1,3,4-噻二唑(化合物2-11)的合成。
Figure BDA0003673001920000501
步骤1：1-(1-(2,4-双(三氟甲基)苯基)乙基)-4-碘-3-甲基-1H-吡唑的合成。向PPh3(0.20g，1.20mmol，1.5当量)和DIAD(0.264g，1.31mmol，1.6当量)在THF(5mL)中的搅拌溶液中添加1-(2,4-双(三氟甲基)苯基)乙-1-醇(0.200g，0.81mmol，1当量)和4-碘-3-甲基-1H-吡唑(0.213g，1.20mmol，1.5当量)并且允许在RT下搅拌16h。通过TLC和LCMS监测反应进程。反应完成后，将反应混合物用乙酸乙酯和水(2X50mL)萃取。将有机层分离并且在减压下蒸发以得到粗产物，将其通过combiflash色谱法进一步纯化以产出1-(1-(2,4-双(三氟甲基)苯基)乙基)-4-碘-3-甲基-1H-吡唑(50mg)，LCMS：449[M+1]+。
步骤2：1-(1-(2,4-双(三氟甲基)苯基)乙基)-4-((三异丙基甲硅烷基)乙炔基)-1H-吡唑的合成。向1-(1-(2,4-双(三氟甲基)苯基)乙基)-4-碘-3-甲基-1H-吡唑(200mg，0.82mmol，1当量)、Pd(PPh3)2Cl2(60mg，0.082mmol，0.1当量)在DCM(10ml)中的溶液中添加三乙胺(0.3ml，2.48mmol，3当量)，用氮气吹扫2-3次，添加乙炔基三异丙基硅烷(0.196mg，1.07mmol，1.3当量)、CuI(31mg，0.165mmol，0.2当量)。将反应混合物在RT下搅拌16h。通过TLC和LCMS监测反应进程。将反应混合物用水(2*50mL)淬灭并且用乙酸乙酯萃取，并且将有机层收集并且浓缩以得到粗产物，将其通过combiflash色谱法纯化以获得纯的产物1-(1-(2,4-双(三氟甲基)苯基)乙基)-4-((三异丙基甲硅烷基)乙炔基)-1H-吡唑(50mg)。LCMS：489[M+H]+。
步骤3：1-(1-(2,4-双(三氟甲基)苯基)乙基)-4-乙炔基-3-甲基-1H-吡唑的合成。在无水条件下向1-(1-(2,4-双(三氟甲基)苯基)乙基)-4-((三异丙基甲硅烷基)乙炔基)-1H-吡唑(1.0g，1.99mmol，1当量)在THF(12ml)中的溶液中添加TBAF(4mL)。将反应混合物用水(2X25mL)淬灭，用乙酸乙酯萃取，将有机层收集并且浓缩以得到粗产物，将其通过combiflash色谱法纯化以得到1-(1-(2,4-双(三氟甲基)苯基)乙基)-4-乙炔基-3-甲基-1H-吡唑(300mg)。LCMS：347[M+H]+。
步骤4：2-((1-(1-(2,4-双(三氟甲基)苯基)乙基)-3-甲基-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-5-(吡啶-2-基)-1,3,4-噻二唑的合成。向2-溴-5-(吡啶-2-基)-1,3,4-噻二唑(100mg，0.28mmol，1当量)、Pd(PPh3)2Cl2(20mg，0.028mmol，0.1当量)在DCM(15ml)中的溶液中添加三乙胺(0.12ml，0.86mmol，3当量)，用氮气吹扫2-3次，添加1-(1-(2,4-双(三氟甲基)苯基)乙基)-4-乙炔基-3-甲基-1H-吡唑(69mg，1.07mmol，1.0当量)、CuI(11mg，0.057mmol，0.2当量)。将反应混合物在RT下搅拌16h。通过TLC和LCMS监测反应进程。将反应混合物用水(2X50mL)淬灭并且用乙酸乙酯萃取，并且将有机层收集并且经硫酸钠干燥并且浓缩以得到粗产物，将所述粗产物通过使用己烷:乙酸乙酯通过combi flash色谱法纯化以获得产物，将所述产物通过反相色谱法进一步纯化以获得纯的产物2-((1-(1-(2,4-双(三氟甲基)苯基)乙基)-3-甲基-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-5-(吡啶-2-基)-1,3,4-噻二唑(15mg)，LCMS:507[M+H]+,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 8.73(d,J＝4.82Hz,1H)8.61(s,1H)8.31(d,J＝7.89Hz,1H)8.01-8.12(m,3H)7.8(d,J＝7.89Hz,1H)7.57-7.67(m,1H))5.9(br.s.,1H)2.27(s,3H)1.82-1.94(m,3H)。
实施例S2-9. 2-((1-(1-(2,6-二氯苯基)乙基)-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-5-(呋喃-2-基)-1,3,4-噻二唑(化合物2-12)的合成。
Figure BDA0003673001920000511
步骤1：1-(1-(2,6-二氯苯基)乙基)-4-碘-1H-吡唑的合成。向PPh3(3.0g，11.78mmol，1.5当量)和DIAD(2.38g，11.78mmol，1.5当量)在THF(10mL)中的搅拌溶液中在0℃下添加1-(2,6-二氯苯基)乙醇(1.5g，7.85mmol，1.0当量)和4-碘-1H-吡唑(3.04g，15.70，2.0当量)。添加后允许反应混合物在RT下搅拌3h。通过TLC和LCMS监测反应进程。反应完成后，将反应混合物用水(2X30mL)和乙酸乙酯(2X100mL)淬灭，将有机层分离并且在减压下蒸发以得到粗产物，将其通过combi flash色谱法进一步纯化以产出1-(1-(2,6-二氯苯基)乙基)-4-碘-1H-吡唑(1.6g)，分析数据：LCMS：367[M+H]。
步骤2：1-(1-(2,6-二氯苯基)乙基)-4-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)-1H-吡唑的合成。将1-(1-(2,6-二氯苯基)乙基)-4-碘-1H-吡唑(1.1g，3.00mmol，1当量)、乙炔基三甲基硅烷(442mg，4.50mmol，1.5当量)、CuI(57mg，0.300mmol，0.1当量)、TEA(1.25mL，9.01mmol，3当量)在二噁烷(10ml)中的溶液用氮气吹扫脱气15min，添加Pd(PPh3)2Cl2(110mg，0.150mmol，0.05当量)并且在110℃下加热18h。反应完成后，将混合物用水(2X50mL)和乙酸乙酯(2X100mL)淬灭，将有机层分离并且在减压真空下浓缩以得到粗产物，并且通过Combiflash柱色谱法纯化以获得产物1-(1-(2,6-二氯苯基)乙基)-4-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)-1H-吡唑(0.710g)，分析数据：LCMS：337[M+H]。
步骤3：1-(1-(2,6-二氯苯基)乙基)-4-乙炔基-1H-吡唑的合成。在无水条件下向1-(1-(2,6-二氯苯基)乙基)-4-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)-1H-吡唑(700mg，2.07mmol，1当量)在THF(15ml)中的溶液中逐滴添加TBAF(4mL)。将反应混合物在RT下搅拌2h。完成后，将反应混合物用EtOAC(50mL)稀释并且用水(2X10mL)洗涤，将有机层分离，浓缩以得到粗产物，将其通过combi flash色谱法纯化至1-(1-(2,6-二氯苯基)乙基)-4-乙炔基-1H-吡唑(500mg)，分析数据：LCMS：265[M+H]。
步骤4：2-((1-(1-(2,6-二氯苯基)乙基)-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-5-(呋喃-2-基)-1,3,4-噻二唑的合成。将2-溴-5-(呋喃-2-基)-1,3,4-噻二唑(300mg，1.30mmol，1当量)在DCM(10mL)中的溶液用氮气吹扫10min，添加PdCl2(PPh3)2(91mg，0.130mmol，0.1当量)并且用氮气再吹扫15min，添加TEA(0.54mL，3.91mmol，3.0当量)、CuI(49mg，0.260mmol，0.2当量)和1-(1-(2,6-二氯苯基)乙基)-4-乙炔基-1H-吡唑(344mg，1.30mmol，1.0当量)并且将RM在RT下搅拌过夜。完成后，将反应混合物用水(40mL)淬灭并且用DCM(2X50mL)萃取，将有机层分离并且在减压真空下浓缩以得到粗产物，并且通过combi flash柱色谱法纯化以获得产物2-((1-(1-(2,6-二氯苯基)乙基)-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-5-(呋喃-2-基)-1,3,4-噻二唑(100mg)。LCMS:415[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 8.70(d,J＝4.82Hz,1H)8.10(s,1H)7.90(d,J＝3.95Hz,1H)7.52(d,J＝7.89Hz,2H)7.41(d,J＝7.89Hz,2H)6.82(d,J＝7.89Hz,1H)6.28(d,J＝7.02Hz,1H)1.98(d,J＝7.02Hz,3H)。
实施例S2-10. 2-((1-(1-(2,6-二氯苯基)乙基)-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-5-(吡啶-2-基)-1,3,4-噻二唑(化合物2-20)的合成。
Figure BDA0003673001920000521
步骤1：1-(1-(2,6-二氯苯基)乙基)-4-碘-1H-吡唑的合成。向PPh3(3.0g，0.0117mmol，1.5当量)和DIAD(2.38g，0.0117mmol，1.5当量)在THF(10mL)中的搅拌溶液中添加1-(2,6-二氯苯基)乙-1-醇(1.5g，0.007mmol，1.0当量)和4-碘-1H-吡唑(3.0g，0.0157mmol，3.0当量)并且允许在RT下搅拌1h。通过TLC和LCMS监测反应进程。反应完成后，将反应混合物用乙酸乙酯和水(2X500mL)萃取。将有机层分离并且在减压下蒸发以得到粗产物，将其通过Combi flash色谱法进一步纯化以产出1-(1-(2,6-二氯苯基)乙基)-4-碘-1H-吡唑(1.6g)，LCMS：366.92[M+1]+。
步骤2：1-(1-(2,6-二氯苯基)乙基)-4-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)-1H-吡唑的合成。将1-(1-(2,6-二氯苯基)乙基)-4-碘-1H-吡唑(1.1g，0.003mmol，1当量)、乙炔基三甲基硅烷(0.700mg，0.0045mmol，1.5当量)、CuI(60mg，3.006mmol，0.1当量)、三乙胺(1.7mL，0.0090mmol，3当量)在10mL二噁烷中的溶液用氮气吹扫并且添加Pd(PPh3)2Cl2(110mg，0.0090mmol，0.05当量)并且在120℃下加热18h。将反应混合物用乙酸乙酯和水(2X50mL)萃取。将有机层收集并且浓缩以得到粗产物。将粗产物通过combi flash色谱法纯化以获得产物1-(1-(2,6-二氯苯基)乙基)-4-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)-1H-吡唑(0.710g)，LCMS：337.06。
步骤3：1-(1-(2,6-二氯苯基)乙基)-4-乙炔基-1H-吡唑的合成。在无水条件下向1-(1-(2,6-二氯苯基)乙基)-4-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)-1H-吡唑(700mg，6.516mmol，1当量)在5mL THF中的溶液中添加TBAF(4mL)并且在RT下搅拌。将反应混合物用乙酸乙酯和水(2X25mL)萃取。将有机层收集并且浓缩以得到粗产物，将其通过combi flash色谱法纯化以得到1-(1-(2,6-二氯苯基)乙基)-4-乙炔基-1H-吡唑(500mg)，LCMS：265.02[M+1]+。
步骤4：2-((1-(1-(2,6-二氯苯基)乙基)-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-5-(吡啶-2-基)-1,3,4-噻二唑的合成。向2-溴-5-(吡啶-2-基)-1,3,4-噻二唑(90mg，3.7mmol，1当量)在DCM(5mL)中的溶液中添加PdCl2(PPh3)2(26mg，3.75mmol，0.1当量)并且用氮气吹扫10min。吹扫后，将TEA(2mL，0.00112mmol，3.0当量)、CuI(20mg，7.5mmol，0.2当量)添加至反应混合物中，然后添加1-(1-(2,6-二氯苯基)乙基)-4-乙炔基-1H-吡唑(100mg，3.75mmol，1.0当量)并且将RM在RT下搅拌过夜。将反应混合物用乙酸乙酯和水(2X50mL)萃取。将有机层收集并且浓缩以得到粗产物，将所述粗产物通过combi-flash色谱法纯化以得到作为产物的2-((1-(1-(2,6-二氯苯基)乙基)-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-5-(吡啶-2-基)-1,3,4-噻二唑(21mg)，LCMS:426[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 8.73(d,J＝4.82Hz,1H)8.68(s,1H)8.31(d,J＝7.89Hz,1H)8.08(s,1H)7.93(s,1H)7.64(d,J＝3.95Hz,1H)7.49(d,J＝7.89Hz,1H)7.32-7.40(m,1H)6.23(d,J＝7.02Hz,1H)1.98(d,J＝7.02Hz,3H)。
实施例S2-11. 2-((1-(1-(2,4-双(三氟甲基)苯基)乙基)-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-5-(吡嗪-2-基)-1,3,4-噻二唑(化合物2-21和化合物2-22)的合成。
Figure BDA0003673001920000531
将2-((1-(1-(2,4-双(三氟甲基)苯基)乙基)-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-5-(吡嗪-2-基)-1,3,4-噻二唑(260mg)的外消旋混合物通过手性HPLC纯化以获得第一洗脱异构体(化合物2-21)和第二洗脱异构体(化合物2-22)。将异构体通过手性SFC(Daicel
Figure BDA0003673001920000532
250×21mm，5μm)分离。使用分析级液体二氧化碳和HPLC级甲醇:乙腈(1:1)的等度程序，总流速：56g/min，助溶剂百分比：35％。
化合物2-21：产量＝62mg；洗脱时间＝4.2min。化合物2-22：产量＝60mg；洗脱时间＝7.2min。
化合物2-21：LCMS:495.07[M+H]+,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm9.50(d,J＝1.32Hz,1H)8.80-8.95(m,2H)8.73(s,1H)8.06-8.18(m,2H)8.01(s,1H)7.71(d,J＝8.33Hz,1H)5.99(d,J＝6.58Hz,1H)1.90(d,J＝7.02Hz,3H).化合物2-22：LCMS:495.07[M+H]+；1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 9.51(d,J＝1.32Hz,1H)8.82-8.95(m,2H)8.70(s,1H)8.01-8.18(m,2H)8.00(s,1H)7.73(d,J＝8.33Hz,1H)5.97(d,J＝6.58Hz,1H)1.92(d,J＝7.02Hz,3H)。
实施例S2-12. 2-((1-(1-(2,4-双(三氟甲基)苯基)乙基)-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-5-(吡嗪-2-基)-1,3,4-噻二唑(化合物2-23和化合物2-24)的合成。
Figure BDA0003673001920000541
步骤1：1-(1-(2,4-双(三氟甲基)苯基)乙基)-4-碘-3-甲基-1H-吡唑的合成。将1-(2,4-双(三氟甲基)苯基)乙醇(1.00g，3.875mmol，1.0当量)和4-碘-3-甲基-1H-吡唑(886mg，4.2635mmol，1.1当量)和TPP(1.52g，5.813mmol，1.5当量)在THF(10mL)中的搅拌溶液冷却至0℃并且逐滴添加DIAD(1.17ml，5.813mmol，1.5当量)，添加后在RT下搅拌16h。通过TLC和LCMS监测反应进程。反应完成后，将反应混合物用乙酸乙酯和水(2X15ml)萃取。将有机层分离并且在减压下蒸发以得到粗产物，将其通过combiflash色谱法进一步纯化以获得1-(1-(2,4-双(三氟甲基)苯基)乙基)-4-碘-3-甲基-1H-吡唑(700mg)，LCMS：448.9[M+1]。
步骤2：1-(1-(2,4-双(三氟甲基)苯基)乙基)-3-甲基-4-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)-1H-吡唑的合成。向1-(1-(2,4-双(三氟甲基)苯基)乙基)-4-碘-3-甲基-1H-吡唑(900mg，2.013mmol，1.0当量)和乙炔基三甲基硅烷(42ml，3.020mmol，1.5当量)在DCM(10ml)中的溶液中添加三乙胺(0.82ml，6.040mmol，3当量)和CuI(40mg，0.201mmol，0.1当量)，用氮气吹扫10min并且添加Pd(PPh3)2Cl2(90mg，0.201mmol，0.1当量)，将反应混合物在RT下搅拌16h。通过TLC和LCMS监测反应进程，反应完成后，将反应混合物用DCM和水(2X15ml)萃取。将有机层分离并且在减压下蒸发以得到粗产物，将其通过combiflash色谱法进一步纯化以产出1-(1-(2,4-双(三氟甲基)苯基)乙基)-3-甲基-4-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)-1H-吡唑(50mg)，LCMS：489.21[M+H]。
步骤3：1-(1-(2,4-双(三氟甲基)苯基)乙基)-4-乙炔基-3-甲基-1H-吡唑的合成。将1-(1-(2,4-双(三氟甲基)苯基)乙基)-3-甲基-4-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)-1H-吡唑(700mg，1.6706mmol，1.0当量)在THF(10ml)中的溶液冷却至0℃并且在无水条件下逐滴添加TBAF(0.43ml，0.835mmol，0.5当量)。通过TLC和LCMS监测反应进程。反应完成后，将反应混合物用乙酸乙酯和水(2X15ml)萃取。将有机层分离并且在减压下蒸发以得到粗产物，将其通过combiflash色谱法进一步纯化以产出1-(1-(2,4-双(三氟甲基)苯基)乙基)-4-乙炔基-3-甲基-1H-吡唑(300mg)，LCMS：347[M+H]。
步骤4：2-((1-(1-(2,4-双(三氟甲基)苯基)乙基)-3-甲基-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-5-(吡啶-2-基)-1,3,4-噻二唑的合成。向2-溴-5-(吡啶-2-基)-1,3,4-噻二唑(312mg，1.3005mmol，1.0当量)和Pd(PPh3)2Cl2(80mg，0.1300mmol，0.1当量)在DCM(10ml)中的溶液中添加三乙胺(0.53ml，3.9017mmol，3.0当量)并且用氮气吹扫10min并且添加1-(1-(2,4-双(三氟甲基)苯基)乙基)-4-乙炔基-3-甲基-1H-吡唑(450mg，1.3005mmol，1.0当量)和CuI(50mg，0.2601mmol，0.2当量)，所有添加后，将反应混合物在RT下搅拌16h。通过TLC和LCMS监测反应进程，反应完成后，将反应混合物用DCM和水(2X15mL)萃取并且将有机层收集并且经硫酸钠干燥并且浓缩以得到粗产物，将其通过combi flash色谱法纯化以获得产物，将其通过反相色谱法进一步纯化以获得纯的产物2-((1-(1-(2,4-双(三氟甲基)苯基)乙基)-3-甲基-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-5-(吡啶-2-基)-1,3,4-噻二唑(130mg)，LCMS:507[M+H],1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 8.73(d,J＝4.82Hz,1H)8.61(s,1H)8.31(d,J＝7.89Hz,1H)8.01-8.12(m,3H)7.8(d,J＝7.89Hz,1H)7.57-7.67(m,1H))5.9(br.s.,1H)2.27(s,3H)1.82-1.94(m,3H)。
步骤5：2-((1-(1-(2,4-双(三氟甲基)苯基)乙基)-3-甲基-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-5-(吡啶-2-基)-1,3,4-噻二唑的异构体的分离。将2-((1-(1-(2,4-双(三氟甲基)苯基)乙基)-3-甲基-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-5-(吡啶-2-基)-1,3,4-噻二唑的对映异构体通过手性SFC(Daicel
Figure BDA0003673001920000551
250×20mm，5μm)分离。使用分析级液体二氧化碳和HPLC级异丙醇的等度程序，总流速：52g/min，助溶剂百分比：20％以获得第一洗脱异构体(化合物2-23)和第二洗脱异构体(化合物2-24)。
化合物2-23：产量＝30mg；洗脱时间＝4.2min；化合物2-24：产量＝28mg；洗脱时间＝6.5min。
化合物2-23:1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ8.69(d,J＝1.9Hz,1H),8.11(dd,J＝8.7,1.7Hz,1H),8.01–7.92(m,3H),7.88(dd,J＝8.8,2.4Hz,2H),7.65–7.57(m,3H),7.54(td,J＝7.5,6.8,1.4Hz,1H),7.49–7.36(m,5H),7.08(s,1H).LCMS:401[M+H]+。
化合物2-24:1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ8.69(d,J＝1.9Hz,1H),8.11(dd,J＝8.7,1.7Hz,1H),8.01–7.92(m,3H),7.88(dd,J＝8.8,2.4Hz,2H),7.65–7.57(m,3H),7.54(td,J＝7.5,6.8,1.4Hz,1H),7.49–7.36(m,5H),7.08(s,1H),401[M+H]+。
实施例S3
实施例S3-1.N-(1-环戊基-1H-吡唑-4-基)-5-(呋喃-2-基)异噁唑-3-甲酰胺(化合物3-1)的合成。
Figure BDA0003673001920000561
步骤1：1-环戊基-4-硝基-1H-吡唑的合成。向PPh3(2.14g，8.71mmol，1.5当量)在THF(10mL)中的搅拌溶液中添加DIAD(1.75g，8.71mmol，1.5当量)并且允许在RT下搅拌15min。然后添加环戊醇(500mg，5.813mmol，1当量)和4-硝基-1H-吡唑(656.86mg，5.813mmol，1当量)并且允许在RT下搅拌16h。通过TLC和LCMS监测反应进程。反应完成后，将反应混合物用乙酸乙酯和水萃取2次。将有机层分离并且在减压下蒸发以得到粗产物，将其通过使用combiflash色谱法进一步纯化以产出1-环戊基-4-硝基-1H-吡唑，1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 8.92(s,1H)8.26(s,1H)4.78(t,J＝6.80Hz,1H)2.04-2.16(m,2H)1.86-2.01(m,2H)1.71-1.85(m,2H)1.54-1.71(m,2H)。
步骤2：1-环戊基-1H-吡唑-4-胺的合成。向1-环戊基-4-硝基-1H-吡唑(500mg，2.762mmol，1当量)在10mL EtOH/水(1:1)中的搅拌溶液中添加Fe(759.66mg，13.81mmol，5当量)和氯化铵(731.53mg，13.81mmol，5当量)并且允许在80℃下加热2h。通过TLC和LCMS监测反应进程。反应完成后，将反应混合物通过硅藻土垫过滤并且将滤液蒸发并且用DCM/水萃取2次。将有机层收集并且在减压下蒸发以得到1-环戊基-1H-吡唑-4-胺，LCMS：152[M+H]+。
步骤3：N-(1-环戊基-1H-吡唑-4-基)-5-(呋喃-2-基)异噁唑-3-甲酰胺的合成。向5-(呋喃-2-基)异噁唑-3-甲酸(118.54mg，0.662mmol，和1当量)在DMF(4mL)中的搅拌溶液中添加HATU(251.56mg，0.662mmol，1当量)并且允许在RT下搅拌15min。然后添加1-环戊基-1H-吡唑-4-胺(100mg，0.662mmol，1当量)和DIPEA(256.19mg，1.986mmol，3当量)的搅拌溶液。允许反应混合物在RT下搅拌18h。反应完成后，将反应混合物用乙酸乙酯和水萃取2次。将有机层收集并且蒸发以得到粗产物。将粗产物通过使用combiflash色谱法纯化并且使用乙醚和戊烷进一步研磨以产出N-(1-环戊基-1H-吡唑-4-基)-5-(呋喃-2-基)异噁唑-3-甲酰胺(70mg白色固体)，LCMS 313[M+H]+,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 10.96(s,1H)7.98-8.07(m,2H)7.63(s,1H)7.29(d,J＝3.51Hz,1H)7.15(s,1H)6.77(br.s.,1H)4.66-4.74(m,1H)2.05(br.s.,2H)1.89(d,J＝5.26Hz,2H)1.77(br.s.,2H)1.63(br.s.,2H)。
实施例S3-2.N-(1-(环戊基甲基)-1H-吡唑-4-基)-5-(呋喃-2-基)异噁唑-3-甲酰胺(化合物3-2)的合成。
Figure BDA0003673001920000571
步骤1：环戊基甲醇的合成。在0℃下向环戊烷甲醛(500mg，5.10mmol，1.0当量)在甲醇(5mL)中的搅拌溶液中分批添加NaBH4(298mg，7.65mmol，1.5当量)并且搅拌10分钟。允许反应混合物在RT下搅拌1小时。通过TLC和LCMS确认产物形成。反应完成后，将反应混合物用水淬灭并且用乙酸乙酯(50mL X 3)萃取。将合并的有机萃取物用水(50mL X 2)洗涤，经无水Na2SO4干燥并且在减压下浓缩以获得环戊基甲醇(500mg，呈无色液体)。
步骤2：1-(环戊基甲基)-4-硝基-1H-吡唑的合成。向PPh3(1.45g，5.1mmol，1.1当量)和DIAD(1.09ml，5.1mmol，1.1当量)在THF(10mL)中的搅拌溶液中添加环戊基甲醇(500mg，5.05mmol，1当量)和4-硝基-1H-吡唑(570mg，5.05mmol，1当量)并且允许在RT下搅拌16h。通过TLC和LCMS监测反应进程。反应完成后，将反应混合物用乙酸乙酯和水(2x25mL)萃取。将有机层分离并且在减压下蒸发以得到粗产物，将其通过使用Combiflash色谱法进一步纯化以获得1-(环戊基甲基)-4-硝基-1H-吡唑(270mg)。
步骤3：1-(环戊基甲基)-1H-吡唑-4-胺的合成。向1-(环戊基甲基)-4-硝基-1H-吡唑(200mg，1.025mmol，1当量)在10mL EtOH/水(1:1)中的搅拌溶液中添加Fe(287.17mg，5.128mmol，5当量)和氯化铵(276.9mg，5.128mmol，5当量)并且允许在80℃下加热12h。通过TLC和LCMS监测反应进程。反应完成后，将反应混合物通过硅藻土垫过滤并且将滤液蒸发并且用DCM/水(2x25mL)萃取。将有机层收集并且在减压下蒸发以得到1-(环戊基甲基)-1H-吡唑-4-胺(180mg)，LCMS：166[M+H]+。
步骤4：N-(1-(环戊基甲基)-1H-吡唑-4-基)-5-(呋喃-2-基)异噁唑-3-甲酰胺的合成。向5-(呋喃-2-基)异噁唑-3-甲酸(50mg，0.279mmol，1当量)在DMF(4mL)中的搅拌溶液中添加HATU(106mg，0.279mmol，1当量)并且允许在RT下搅拌15min。然后，添加1-(环戊基甲基)-1H-吡唑-4-胺(55mg，0.279mmol，1当量)和DIPEA(0.145ml，0.837mmol，3当量)的搅拌溶液。允许反应混合物在RT下搅拌18h。反应完成后，将反应混合物倒入冰水中；将获得的沉淀物滤除以获得粗产物，将其通过使用combiflash色谱法纯化以产出N-(1-(环戊基甲基)-1H-吡唑-4-基)-5-(呋喃-2-基)异噁唑-3-甲酰胺(20mg白色固体)，1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.97(s,1H),8.05(s,1H),8.01(d,J＝1.32Hz,1H),7.62(s,1H),7.28(d,J＝3.51Hz,1H),7.15(s,1H),6.77(dd,J＝1.75,3.51Hz,1H),4.01(d,J＝7.45Hz,2H),2.34(quin,J＝7.34Hz,2H),1.59(br.s.,4H),1.51(d,J＝8.33Hz,2H),1.16-1.30(m,3H),LCMS 327[M+H]+。
实施例S3-3.N-(1-(氮杂环丁-3-基)-1H-吡唑-4-基)-5-(呋喃-2-基)异噁唑-3-甲酰胺(化合物3)的合成。
Figure BDA0003673001920000581
步骤1：3-((甲基磺酰基)氧基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯的合成。向3-羟基氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(500mg，2.67mmol，1当量)在THF(10mL)中的搅拌溶液中在0℃下添加三乙胺(0.446mL，3.24mmol，和1.2当量)。将反应混合物在0℃下搅拌10min后，在相同温度下向反应混合物中添加甲磺酰氯(0.218ml，3.2mmol，和1.2当量)。将反应混合物再搅拌3h。通过TLC监测反应的进程。反应完成后，向反应混合物中添加水并且将水层用乙酸乙酯(3X30mL)萃取。将合并的有机层经无水Na2SO4干燥并且在减压下浓缩以获得3-((甲基磺酰基)氧基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(509mg)。
步骤2：3-(4-硝基-1H-吡唑-1-基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯的合成。向4-硝基-1H-吡唑(225mg，1.99mmol，1当量)在DMF(10mL)中的搅拌溶液中在氮气氛下添加Cs2CO3(980mg，2.98mmol，1.5当量)和TBAI(1.10g，2.98mmol，1.5当量)然后添加3-((甲基磺酰基)氧基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(500mg，1.99mmol，1.0当量)。将反应混合物在100℃下加热过夜。反应完成后，将冰水添加至反应混合物中并且用乙酸乙酯(2X25mL)萃取。将有机层合并，用冷水洗涤，收集，经无水Na2SO4干燥并且在减压下浓缩以获得3-(4-硝基-1H-吡唑-1-基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯，将其通过快速柱色谱法纯化(290mg)，LCMS：269[M+H+]。
步骤3：3-(4-氨基-1H-吡唑-1-基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯的合成。向3-(4-硝基-1H-吡唑-1-基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(250mg)在MeOH(10mL)中的搅拌溶液中在氮气氛下添加Pd/C(25mg，按wt计10％)。将所得的混合物在氢气氛下搅拌2-3小时。将反应混合物通过硅藻土床小心过滤并且用甲醇(2x20mL)洗涤。将甲醇层收集并且在减压下蒸发以获得3-(4-氨基-1H-吡唑-1-基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(210mg)，LCMS：239[M+H]+。
步骤4：3-(4-(5-(呋喃-2-基)异噁唑-3-甲酰胺基)-1H-吡唑-1-基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯的合成。向5-(呋喃-2-基)异噁唑-3-甲酸，1当量)在DMF(4mL)中的搅拌溶液中添加HATU(210.4mg，0.552mmol，1当量)并且允许在RT下搅拌15min。然后，添加3-(4-氨基-1H-吡唑-1-基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(131mg，0.552mmol，1当量)和DIPEA(0.286ml，1.656mmol，3当量)的搅拌溶液。允许反应混合物在RT下搅拌18h。反应完成后，将反应混合物倒入冰水中，将获得的沉淀物滤除以获得粗产物。将粗产物通过使用combiflash色谱法纯化以产出3-(4-(5-(呋喃-2-基)异噁唑-3-甲酰胺基)-1H-吡唑-1-基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(120mg，白色固体)，LCMS：400[M+H]+。
步骤5：N-(1-(氮杂环丁-3-基)-1H-吡唑-4-基)-5-(呋喃-2-基)异噁唑-3-甲酰胺乙酸盐的合成。将3-(4-(5-(呋喃-2-基)异噁唑-3-甲酰胺基)-1H-吡唑-1-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(120mg)的溶液溶解于二噁烷(5mL)中并且用在二噁烷(1mL)中的4M HCl处理。2h后形成沉淀物。将溶剂在真空中去除并且将所得的固体溶解并且用乙醚洗涤并且在真空下干燥以获得粗品，将其通过反相HPLC纯化得到N-(1-(氮杂环丁-3-基)-1H-吡唑-4-基)-5-(呋喃-2-基)异噁唑-3-甲酰胺乙酸盐(25mg)，LCMS:300[M+H]+,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.15(br.s.,1H),8.20(s,1H),8.01(s,2H),7.84(s,1H),7.29(d,J＝3.07Hz,1H),7.20-7.23(m,1H),6.78(dd,J＝1.75,3.51Hz,1H),5.25(t,J＝7.67Hz,1H),4.06-4.13(m,1H),3.93-4.01(m,2H),3.78(m,J＝6.14Hz,2H)。
实施例S3-4. 5-(呋喃-2-基)-N-(1-(吡咯烷-3-基)-1H-吡唑-4-基)异噁唑-3-甲酰胺(化合物3-4)的合成。
Figure BDA0003673001920000591
步骤1：3-((甲基磺酰基)氧基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯的合成。向3-羟基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(500mg，2.67mmol，1当量)在THF(10mL)中的搅拌溶液中在0℃下添加三乙胺(0.446mL，3.24mmol，1.2当量)。将反应混合物在0℃下搅拌10min后，添加甲磺酰氯(0.218ml，3.2mmol，1.2当量)。在RT下将反应混合物再搅拌3h。通过TLC监测反应进程。反应完成后，向反应混合物中添加水并且将水层用乙酸乙酯(3X30mL)萃取。将合并的有机层经无水Na2SO4干燥并且在减压下浓缩以获得3-((甲基磺酰基)氧基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(520mg)。
步骤2：3-(4-硝基-1H-吡唑-1-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯的合成。向4-硝基-1H-吡唑(191mg，1.69mmol，0.9当量)在DMF(10mL)中的搅拌溶液中在氮气氛下添加Cs2CO3(928.3mg，2.83mmol，1.5当量)和TBAI(1.04g，2.83mmol，1.5当量)然后添加3-((甲基磺酰基)氧基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(500mg，1.88mmol，1.0当量)。将反应混合物在100℃下加热过夜。反应完成后，将冰水添加至反应混合物中并且用乙酸乙酯(2X25mL)萃取。将有机层合并，用冷水洗涤，收集，经无水Na2SO4干燥并且在减压下浓缩以获得3-(4-硝基-1H-吡唑-1-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯，将其通过快速柱色谱法纯化(420mg)，LCMS 283[M+H]+。
步骤3：3-(4-氨基-1H-吡唑-1-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯的合成。向3-(4-硝基-1H-吡唑-1-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(300mg，0.551mmol)在MeOH(10mL)中的搅拌溶液中在氮气氛下添加Pd/C(30mg，按wt计10％)。将所得的混合物在氢气氛下搅拌2-3小时。将反应混合物通过硅藻土床小心过滤并且用甲醇(2x20mL)洗涤。将甲醇层收集并且在减压下蒸发以获得3-(4-氨基-1H-吡唑-1-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(240mg)，LCMS：253[M+H]+。
步骤4：3-(4-(5-(呋喃-2-基)异噁唑-3-甲酰胺基)-1H-吡唑-1-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯的合成。向5-(呋喃-2-基)异噁唑-3-甲酸(50mg，0.27mmol，1当量)在DMF(4mL)中的搅拌溶液中添加HATU(102.8mg，0.27mmol，1当量)并且允许在RT下搅拌15min。然后，添加3-(4-氨基-1H-吡唑-1-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(70mg，0.27mmol，1当量)和DIPEA(0.14ml，0.833mmol，3当量)的搅拌溶液。允许反应混合物在RT下搅拌18h。反应完成后，将反应混合物倒入冰水中，将获得的沉淀物滤除以获得粗产物。将粗产物通过使用combiflash色谱法纯化以产出3-(4-(5-(呋喃-2-基)异噁唑-3-甲酰胺基)-1H-吡唑-1-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(52mg白色固体)。LCMS：414[M+H]+。
步骤5：5-(呋喃-2-基)-N-(1-(吡咯烷-3-基)-1H-吡唑-4-基)异噁唑-3-甲酰胺乙酸盐的合成。将3-(4-(5-(呋喃-2-基)异噁唑-3-甲酰胺基)-1H-吡唑-1-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(50mg)在二噁烷(5mL)中的搅拌溶液用在二噁烷(1mL)中的4M HCl处理。2h后形成沉淀物。将溶剂在真空中去除并且将所得的固体用乙醚洗涤并且在真空下干燥以获得粗品，将其通过反相HPLC纯化以获得5-(呋喃-2-基)-N-(1-(吡咯烷-3-基)-1H-吡唑-4-基)异噁唑-3-甲酰胺乙酸盐(24mg)，LCMS:314[M+H]+,1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.99(br.s.,1H),8.09(s,1H),8.01(s,1H),7.61-7.70(m,1H),7.28(d,J＝3.51Hz,1H),7.17(s,1H),6.77(dd,J＝1.75,3.51Hz,1H),4.81(br.s.,1H),3.12(m,J＝6.58Hz,2H),1.92-2.01(m,2H),1.75-1.83(m,2H)。
实施例S3-5.N-(1-(1-环戊基乙基)-1H-吡唑-4-基)-5-(呋喃-2-基)异噁唑-3-甲酰胺(化合物3-5)的合成。
Figure BDA0003673001920000601
步骤1：1-环戊基乙-1-醇的合成。在0℃下向1-环戊基乙-1-酮(500mg，4.46mmol，1.0当量)在甲醇(5mL)中的搅拌溶液中分批添加NaBH4(262mg，6.69mmol，1.2当量)并且搅拌10分钟。允许反应混合物在RT下搅拌1小时。通过TLC和LCMS确认产物形成。反应完成后，将反应混合物用水淬灭并且用乙酸乙酯(50mL X 3)萃取，将合并的有机萃取物用水(50mLX 2)洗涤，经无水Na2SO4干燥并且在减压下浓缩以获得1-环戊基乙-1-醇(499mg，呈无色液体)。
步骤2：1-(1-环戊基乙基)-4-硝基-1H-吡唑的合成。向PPh3(1.264g，4.82mmol，1.1当量)和DIAD(0.9ml，4.82mmol，1.1当量)在THF(10mL)中的搅拌溶液中添加1-环戊基乙-1-醇(500mg，4.38mmol，1当量)和4-硝基-1H-吡唑(495mg，4.38mmol，1当量)并且允许在RT下搅拌16h。通过TLC和LCMS监测反应进程。反应完成后，将反应混合物用乙酸乙酯和水(2x25mL)萃取。将有机层分离并且在减压下蒸发以得到粗产物，将其通过使用combiflash色谱法进一步纯化以获得1-(1-环戊基乙基)-4-硝基-1H-吡唑(230mg)，LCMS:210[M+H]+,1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.92(s,1H),8.30(s,1H),5.11(dd,J＝5.48,8.11Hz,1H),3.89-4.03(m,1H),,2.28-2.47(m,1H).,1.5-1.8(m,1H),1.4(d,3H),1.1-1.25(m,4H)。
步骤3：1-(1-环戊基乙基)-1H-吡唑-4-胺的合成。向1-(1-环戊基乙基)-4-硝基-1H-吡唑(250mg，0.717mmol，1当量)在10mL EtOH/水(1:1)中的搅拌溶液中添加Fe(194mg，3.58mmol，5当量)和氯化铵(200mg，3.58mmol，5当量)并且允许在80℃下加热12h。通过TLC和LCMS监测反应进程。反应完成后，将反应混合物通过硅藻土垫过滤并且将滤液蒸发并且用DCM/水(2x25mL)萃取。将有机层收集并且在减压下蒸发以得到1-(1-环戊基乙基)-1H-吡唑-4-胺(210mg)，LCMS：180[M+H]+。
步骤4：N-(1-(1-环戊基乙基)-1H-吡唑-4-基)-5-(呋喃-2-基)异噁唑-3-甲酰胺的合成。向5-(呋喃-2-基)异噁唑-3-甲酸(50mg，0.27mmol，1当量)在DMF(4mL)中的搅拌溶液中添加HATU(106mg，0.27mmol，1当量)并且允许在RT下搅拌15min。然后，添加1-(1-环戊基乙基)-1H-吡唑-4-胺(59mg，0.27mmol，1当量)和DIPEA(0.14ml，0.83mmol，3当量)的搅拌溶液。允许反应混合物在RT下搅拌18h。反应完成后，将反应混合物倒入冰水中；将获得的沉淀物滤除以获得粗产物，将其通过使用combiflash色谱法纯化以产出N-(1-(1-环戊基乙基)-1H-吡唑-4-基)-5-(呋喃-2-基)异噁唑-3-甲酰胺(17mg白色固体)，LCMS 341[M+H]+,1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.96(s,1H),8.04(s,1H),8.01(d,J＝1.75Hz,1H),7.62(s,1H),7.29(d,J＝3.51Hz,1H),7.15(s,1H),6.78(dd,J＝1.75,3.51Hz,1H),4.10(dd,J＝6.80,9.43Hz,1H),2.23(d,J＝8.33Hz,1H),1.42-1.62(m,4H),1.40(d,J＝6.58Hz,3H),1.19-1.31(m,2H),1.11(d,J＝7.89Hz,2H)。
实施例S3-6.N-(1-((3,5-二氯吡啶-4-基)甲基)-1H-吡唑-4-基)-5-(呋喃-2-基)异噁唑-3-甲酰胺(化合物3-6)的合成。
Figure BDA0003673001920000611
步骤1：(3,5-二氯吡啶-4-基)甲醇的合成。在0℃下向3,5-二氯异烟醛(500mg，2.808mmol，1.0当量)在甲醇(5mL)中的搅拌溶液中分批添加NaBH4(165mg，4.213mmol，1.5当量)并且搅拌10分钟。允许反应混合物在RT下搅拌1小时。通过TLC和LCMS确认产物形成。反应完成后，将反应混合物用水淬灭并且用乙酸乙酯(50mL X 3)萃取。将合并的有机萃取物用水(50mL X 2)洗涤，经无水Na2SO4干燥并且在减压下浓缩以获得(3,5-二氯吡啶-4-基)甲醇(390mg，呈无色液体)，1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.62(s,2H),5.53(t,J＝5.48Hz,1H),4.66(d,J＝5.26Hz,2H)。
步骤2：3,5-二氯-4-((4-硝基-1H-吡唑-1-基)甲基)吡啶的合成。向PPh3(520g，1.94mmol，1当量)和DIAD(391.8mg，1.94mmol，1当量)在THF(10mL)中的搅拌溶液中添加3,5-二氯异烟醛(350mg，1.94mmol，1当量)和4-硝基-1H-吡唑(220mg，1.94mmol，1当量)并且允许在RT下搅拌16h。通过TLC和LCMS监测反应进程。反应完成后，将反应混合物用乙酸乙酯和水(2x25mL)萃取。将有机层分离并且在减压下蒸发以得到粗产物，将其通过使用combiflash色谱法进一步纯化以获得3,5-二氯-4-((4-硝基-1H-吡唑-1-基)甲基)吡啶(220mg)，1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.15(s,1H),8.88(s,1H),8.71(s,2H),),5.66(s,2H)。
步骤3：1-((3,5-二氯吡啶-4-基)甲基)-1H-吡唑-4-胺的合成。向3,5-二氯-4-((4-硝基-1H-吡唑-1-基)甲基)吡啶(100mg，0.369mmol，1当量)在10mL EtOH/水(1:1)中的搅拌溶液中添加Fe(101.47mg，1.845mmol，5当量)和氯化铵(104mg，1.845mmol，5当量)并且允许在80℃下加热12h。通过TLC和LCMS监测反应进程。反应完成后，将反应混合物通过硅藻土垫过滤并且将滤液蒸发并且用DCM/水(2x25mL)萃取。将有机层收集并且在减压下蒸发以得到1-((3,5-二氯吡啶-4-基)甲基)-1H-吡唑-4-胺(88mg)，LCMS 243[M+H]+。
步骤4：N-(1-((3,5-二氯吡啶-4-基)甲基)-1H-吡唑-4-基)-5-(呋喃-2-基)异噁唑-3-甲酰胺的合成。向5-(呋喃-2-基)异噁唑-3-甲酸(50mg，0.206mmol，1当量)在DMF(4mL)中的搅拌溶液中添加HATU(79mg，0.206mmol，1当量)并且允许在RT下搅拌15min。然后，添加1-((3,5-二氯吡啶-4-基)甲基)-1H-吡唑-4-胺(37mg，0.206mmol，1当量)和DIPEA(0.107ml，0.619mmol，3当量)的搅拌溶液。允许反应混合物在RT下搅拌18h。反应完成后，将反应混合物倒入冰水中，将获得的沉淀物滤除以获得粗产物，将其通过使用combiflash色谱法纯化以获得N-(1-((3,5-二氯吡啶-4-基)甲基)-1H-吡唑-4-基)-5-(呋喃-2-基)异噁唑-3-甲酰胺(35mg白色固体)，LCMS 404[M+H]+,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.04(s,1H),8.70(s,1H),8.23(s,1H),8.01(d,J＝1.32Hz,1H),7.63(s,1H),7.28(d,J＝3.51Hz,1H),7.15(s,1H),6.77(dd,J＝1.75,3.51Hz,1H),5.58(s,2H),
实施例S3-7.N-(1-(2-吗啉代乙基)-1H-吡唑-4-基)-5-(吡嗪-2-基)-1,3,4-噻二唑-2-甲酰胺(化合物3-7)的合成。
Figure BDA0003673001920000621
步骤1：4-(2-(4-硝基-1H-吡唑-1-基)乙基)吗啉的合成。向PPh3(2.98g，0.0114mol，1.5当量)、DIAD(2.30g，0.0114mol，1.5当量)在THF(10mL)中的搅拌溶液中在RT下添加2-吗啉代乙-1-醇(1g，0.0076mol，1当量)和4-硝基-1H-吡唑(0.86g，0.0076mol，1当量)。将反应混合物在RT下搅拌16h。通过TLC和LCMS监测反应进程。反应完成后，将反应混合物用乙酸乙酯和水萃取2次。将有机层分离并且在减压下蒸发以得到粗产物，将其通过使用combiflash色谱法进一步纯化以产出4-(2-(4-硝基-1H-吡唑-1-基)乙基)吗啉。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 8.88(s,1H)8.26(s,1H)4.29(t,J＝6.14Hz,2H)3.46-3.58(m,4H)2.73(t,J＝6.36Hz,2H)2.40(d,J＝3.95Hz,4H)。
步骤2：1-(2-吗啉代乙基)-1H-吡唑-4-胺的合成。向4-(2-(4-硝基-1H-吡唑-1-基)乙基)吗啉(500mg，2.212mmol，1当量)在10mL EtOH/水(1:1)中的搅拌溶液中添加Fe(608.40mg，11.06mmol，5当量)和氯化铵(586.18mg，11.06mmol，5当量)并且允许在80℃下加热2h。通过TLC和LCMS监测反应进程。反应完成后，将反应混合物通过硅藻土垫过滤并且将滤液蒸发并且用DCM(100ml X 2)萃取，将有机层收集并且在减压下蒸发以得到1-(2-吗啉代乙基)-1H-吡唑-4-胺。LCMS：197[M+H]+。
步骤3：N-(1-(2-吗啉代乙基)-1H-吡唑-4-基)-5-(吡嗪-2-基)-1,3,4-噻二唑-2-甲酰胺的合成。向5-(吡嗪-2-基)-1,3,4-噻二唑-2-甲酸乙酯(100mg，0.510mmol，1当量)和1-(2-吗啉代乙基)-1H-吡唑-4-胺(120mg，0.510mmol，1当量)在5mL甲苯中的搅拌溶液中添加TMA(0.293mL，2.04mmol，4当量)并且允许在120℃下加热16h。反应完成后，将水添加至反应混合物中，将形成的沉淀滤除以得到粗产物。将此粗产物用DCM和水进一步萃取。将有机层收集并且蒸发以得到N-(1-(2-吗啉代乙基)-1H-吡唑-4-基)-5-(吡嗪-2-基)-1,3,4-噻二唑-2-甲酰胺(90mg黄色固体)。LCMS 387[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 11.59(s,1H)9.54(s,1H)8.91(d,J＝2.19Hz,1H)8.87(s,1H)8.15(s,1H)7.73(s,1H)4.23(t,J＝6.58Hz,2H)3.51-3.59(m,4H)2.66-2.71(m,2H)2.41(br.s.,4H)。
实施例S3-8.N-(1-(2-吗啉代乙基)-1H-吡唑-4-基)-5-(吡嗪-2-基)异噁唑-3-甲酰胺(化合物3-8)的合成。
Figure BDA0003673001920000631
步骤1：4-(2-(4-硝基-1H-吡唑-1-基)乙基)吗啉的合成。向PPh3(2.98g，0.0114mol，1.5当量)、DIAD(2.30g，0.0114mol，1.5当量)在THF(10mL)中的搅拌溶液中添加2-吗啉代乙-1-醇(1g，0.0076mol，1当量)和4-硝基-1H-吡唑(0.86g，0.0076mol，1当量)并且允许在RT下搅拌16h。通过TLC和LCMS监测反应进程。将反应混合物用水稀释并且用乙酸乙酯萃取，将有机层分离并且在减压下蒸发以得到粗产物，将其通过使用combiflash色谱法进一步纯化以产出4-(2-(4-硝基-1H-吡唑-1-基)乙基)吗啉。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 8.88(s,1H)8.26(s,1H)4.29(t,J＝6.14Hz,2H)3.46-3.58(m,4H)2.73(t,J＝6.36Hz,2H)2.40(d,J＝3.95Hz,4H)。
步骤2：1-(2-吗啉代乙基)-1H-吡唑-4-胺的合成。向4-(2-(4-硝基-1H-吡唑-1-基)乙基)吗啉(500mg，2.212mmol，1当量)在10mL EtOH/水(1:1)中的搅拌溶液中添加Fe(608.40mg，11.06mmol，5当量)和氯化铵(586.18mg，11.06mmol，5当量)并且允许在80℃下加热2h。通过TLC和LCMS监测反应进程。反应完成后，将反应混合物通过硅藻土垫过滤并且将滤液蒸发并且用DCM萃取，将有机层收集并且在减压下蒸发以得到1-(2-吗啉代乙基)-1H-吡唑-4-胺。LCMS：197[M+H]+。
步骤3：N-(1-(2-吗啉代乙基)-1H-吡唑-4-基)-5-(吡嗪-2-基)异噁唑-3-甲酰胺的合成。向5-(吡嗪-2-基)异噁唑-3-甲酸(97.95mg，0.510mmol，1当量)、HATU(193.8mg，0.510mmol，1当量)在DMF(4mL)中的搅拌溶液中添加1-(2-吗啉代乙基)-1H-吡唑-4-胺盐酸盐(100mg，0.510mmol，1当量)和DIPEA(197.37mg，1.53mmol，3当量)。允许反应混合物在RT下搅拌18h。反应完成后，将反应混合物用乙酸乙酯萃取。将有机层收集并且蒸发以得到粗产物。将粗产物通过使用combiflash色谱法进一步纯化以产出N-(1-(2-吗啉代乙基)-1H-吡唑-4-基)-5-(吡嗪-2-基)异噁唑-3-甲酰胺(10mg白色固体)。LCMS:370[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 11.08(s,1H)9.35(d,J＝1.32Hz,1H)8.83-8.88(m,1H)8.82(d,J＝2.63Hz,1H)8.13(s,1H)7.70(s,1H)7.66(s,1H)4.24(br.s.,2H)3.56(br.s.,4H)2.67(br.s.,2H)2.33(br.s.,4H)。
实施例S3-9.N-(1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)-5-(吡啶-2-基)异噁唑-3-甲酰胺(化合物3-9)的合成。
Figure BDA0003673001920000641
步骤1：4-(4-氨基-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯的合成。向4-(4-硝基-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(500mg，1.68mmol，1.0当量)在甲醇(15mL)中的搅拌溶液中在氮气下添加钯碳(125mg，10％w/w)。将反应混合物用H2气体吹扫2h。通过LCMS确认产物形成。反应完成后，将反应混合物通过硅藻土床过滤并且将滤液在减压下浓缩以获得基4-(4-氨基-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(300mg，呈棕色液体)。LCMS：211[M-56]+。
步骤2：4-(4-(5-(吡啶-2-基)异噁唑-3-甲酰胺基)-1H-吡唑-1基)哌啶-1-甲酸叔丁酯。向5-(吡啶-2-基)异噁唑-3-甲酸(100mg，0.52mmol，1当量)、HATU(219mg，0.57mmol，1.1当量)和DIPEA(217mg，1.68mmol，3.2当量)在DMF(1mL)中的搅拌溶液中添加4-(4-氨基-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(139mg，0.52mmol，1当量)在DMF(2mL)中的溶液。将反应混合物在RT下搅拌24h。用TLC和LCMS确认产物形成并且将反应混合物用水稀释并且用EtOAc(50mL)萃取并且用水(2x50mL)洗涤。将有机层经Na2SO4干燥并且在减压下浓缩以获得粗品，将其通过快速柱色谱法进一步纯化以获得纯的产物4-(4-(5-(吡啶-2-基)异噁唑-3-甲酰胺基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(80mg，呈灰白色固体)。LCMS：439[M+H]+。
步骤3：N-(1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)-5-(吡啶-2-基)异噁唑-3-甲酰胺盐酸盐的合成。将4-(4-(5-(吡啶-2-基)异噁唑-3-甲酰胺基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(80mg)的搅拌溶液溶解于二噁烷(5mL)中并且用在二噁烷(1mL)中的4M HCl处理。2h后形成沉淀物。将溶剂在真空下去除并且将所得的固体用乙醚洗涤并且在真空下干燥以获得N-(1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)-5-(吡啶-2-基)异噁唑-3-甲酰胺盐酸盐(40mg)。LCMS:339[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.08(s,1H),8.77(d,J＝4.4Hz,1H),8.12-8.07(m,2H),8.05(d,J＝7.0Hz,1H),7.71(s,1H),7.60-7.54(m,1H),7.50(s,1H),4.55-4.50(m,1H),3.40(d,J＝13.6Hz,2H),3.05(d,J＝12.3Hz,2H),2.16(br.s.,4H)。
实施例S3-10.N-(1-(1-(哌啶-4-基)乙基)-1H-吡唑-4-基)-5-(吡嗪-2-基)异噁唑-3-甲酰胺(化合物3-10)的合成。
Figure BDA0003673001920000651
步骤1：4-乙酰基哌啶-1-甲酸叔丁酯的合成。在RT下向4-(甲基(甲基)氨甲酰基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(600mg，2.20mmol，1.0当量)在THF(5mL)中的搅拌溶液中逐滴添加MeMgBr(在醚中的3.0M)(1.42mL，4.40mmol，2.0当量)。然后，允许将反应混合物在RT下搅拌1h 45min。通过TLC和NMR监测反应进程。反应完成后，将反应通过使用NH4Cl溶液淬灭。将产物使用乙酸乙酯(3x50mL)萃取。将分离的有机层使用盐水洗涤并且使用Na2SO4干燥，过滤并且在减压下浓缩以获得呈黄色液体的标题化合物(470mg)。
步骤2：4-(1-羟基乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯的合成。在0℃下向4-乙酰基哌啶-1-甲酸叔丁酯(390mg，1.715mmol，1.0当量)在MeOH(7mL)中的搅拌溶液中分批添加NaBH4(97mg，2.57mmol，1.5当量)并且搅拌10分钟。允许将反应混合物在RT下搅拌1小时30min。通过TLC和LCMS确认产物形成。反应完成后，将反应混合物用水淬灭并且用乙酸乙酯(3x50mL)萃取。将合并的有机萃取物用水(2x50mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥并且在减压下浓缩以获得呈无色液体的4-(1-羟基乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(380mg)。
步骤3：4-(1-(4-硝基-1H-吡唑-1-基)乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯的合成。向PPh3(650mg，2.48mmol，1.5当量)和DIAD(502mg，2.48mmol，1.5当量)在THF(10mL)中的搅拌溶液中添加4-硝基-1H-吡唑(227mg，1.98mmol，1.2当量)，然后添加4-(1-羟基乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(380mg，1.65mmol，1.0当量)。将所得的反应混合物在RT下搅拌24h。用TLC和LCMS确认产物形成。反应完成后将混合物用EtOAc(50mL)稀释并且用水(3x50mL)洗涤。将有机层经Na2SO4干燥并且在减压下浓缩以获得粗品，将其通过快速柱色谱法(EtOAc/己烷)进一步纯化以获得纯的产物4-(1-(4-硝基-1H-吡唑-1-基)乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(360mg)。
步骤4：4-(1-(4-氨基-1H-吡唑-1-基)乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯的合成。向4-(1-(4-硝基-1H-吡唑-1-基)乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(360mg，1.11mmol，1.0当量)在甲醇(20mL)中的搅拌溶液中在氮气下添加钯碳(50mg，10％w/w)。将反应混合物用H2气体吹扫2h。通过LCMS确认产物形成。反应完成后，将反应混合物通过硅藻土床过滤并且将滤液在减压下浓缩以获得4-(1-(4-氨基-1H-吡唑-1-基)乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯，呈棕色液体(350mg)。LCMS：295[M+H]+。
步骤5：4-(1-(4-(5-(吡嗪-2-基)异噁唑-3-甲酰胺基)-1H-吡唑-1-基)乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯的合成。向5-(吡嗪-2-基)异噁唑-3-甲酸(100mg，0.34mmol，1.0当量)在DMF(1.5mL)中的搅拌溶液中添加HATU(193mg，0.34mmol，1.0当量)并且将反应混合物搅拌15分钟并且添加4-(1-(4-氨基-1H-吡唑-1-基)乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(64mg，0.34mmol，1.0当量)和DIPEA(131mg，1.02mmol，3.0当量)将所得的反应混合物在室温下搅拌2h。用TLC和LCMS监测反应。将反应混合物用乙酸乙酯稀释并且用水洗涤，将收集的有机层经无水Na2SO4干燥并且在减压下浓缩以获得粗产物，将其通过正相硅胶色谱法进一步纯化以获得标题化合物(30mg)。LCMS：468[M+H]+。
步骤6：N-(1-(1-(哌啶-4-基)乙基)-1H-吡唑-4-基)-5-(吡嗪-2-基)异噁唑-3-甲酰胺2,2,2-三氟乙酸盐的合成。在RT下向4-(1-(4-(5-(吡嗪-2-基)异噁唑-3-甲酰胺基)-1H-吡唑-1-基)乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(20mg，0.042mmol，1.0当量)在DCM(2mL)中的搅拌溶液中添加TFA(0.2mL)并且允许将反应混合物在RT下搅拌16h。通过TLC和LCMS监测反应进程。反应完成后，蒸发DCM并且用醚(5mL)和戊烷(5mL)洗涤以获得作为N-(1-(1-(哌啶-4-基)乙基)-1H-吡唑-4-基)-5-(吡嗪-2-基)异噁唑-3-甲酰胺的标题化合物(13mg)。LCMS:368[M+H]+。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δppm 9.23(s,1H)8.73(s,1H)8.77(s,1H)8.16(br.s.,1H)7.73(s,1H)7.51(s,1H)4.20(br.s.,1H)3.44(d,J＝11.40Hz,1H)3.13(s,1H)3.01(br.s.,1H)2.90(br.s.,2H)1.95-2.23(m,4H)1.6(d,3H)。
实施例S3-11.N-(1-(1-(哌啶-4-基)乙基)-1H-吡唑-4-基)-5-(吡嗪-2-基)-1,3,4-噻二唑-2-甲酰胺(化合物3-11)的合成。
Figure BDA0003673001920000661
步骤1：4-(1-(4-(5-(吡嗪-2-基)-1,3,4-噻二唑-2-甲酰胺基)-1H-吡唑-1-基)乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯的合成。在0℃下向5-(吡嗪-2-基)-1,3,4-噻二唑-2-甲酸乙酯(100mg，0.423mmol，1.0当量)在THF(3mL)中的搅拌溶液中添加4-(1-(4-氨基-1H-吡唑-1-基)乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(124mg，0.423mmol，1.0当量)、TMA(在甲苯中的2.0M)(0.4ml，1.35mmol，4.0当量)。然后，允许将反应混合物在RT下搅拌30分钟。30分钟后，允许将反应混合物在60℃下搅拌1h。反应完成后，将反应使用NH4Cl溶液淬灭。然后将反应混合物用EtOAc(50mL)稀释并且用水(3x50mL)洗涤。将有机层经Na2SO4干燥并且在减压下浓缩以获得粗品，将其通过快速柱色谱法(EtOAc/己烷)进一步纯化以获得呈游离碱的标题化合物(25mg)。LCMS：486[M+H]+。
步骤2：N-(1-(1-(哌啶-4-基)乙基)-1H-吡唑-4-基)-5-(吡嗪-2-基)-1,3,4-噻二唑-2-甲酰胺2,2,2-三氟乙酸盐的合成。在RT下向4-(1-(4-(5-(吡嗪-2-基)-1,3,4-噻二唑-2-甲酰胺基)-1H-吡唑-1-基)乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(20mg，0.042mmol，1.0当量)在DCM(2mL)中的搅拌溶液中添加TFA(0.2mL)并且允许将反应混合物在RT下搅拌16h。通过TLC和LCMS监测反应进程。反应完成后，蒸发DCM溶剂并且用醚(5mL)和戊烷(5mL)洗涤以获得呈TFA盐的标题化合物(11mg)。LCMS:386[M+H]+。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δppm 9.55(s,1H)8.78(d,J＝8.33Hz,2H)8.18(s,1H)7.78(s,1H)4.21(br.s.,1H)3.44(d,J＝11.40Hz,1H)3.13(br.s.,2H)2.96-3.11(m,2H)2.08(d,J＝15.79Hz,2H)1.57(d,J＝6.58Hz,3H)1.36-1.55(m,2H)。
实施例S3-12. 5-(吡嗪-2-基)-N-(1-(1-(4-(三氟甲基)环己基)乙基)-1H-吡唑-4-基)异噁唑-3-甲酰胺(化合物3-12和化合物3-13)的合成。
Figure BDA0003673001920000671
步骤1：N-甲氧基-N-甲基-4-(三氟甲基)环己烷-1-甲酰胺的合成。向4-(三氟甲基)环己烷-1-甲酸(1gm，5.1mmol，1当量)在DMF(1mL)中的溶液中添加HATU(1.94g，5mmol，1当量)。将混合物用DIPEA(2.65ml，1.5mmol，3当量)和DMAP(62mg，5mmol，0.1当量)逐滴处理。在RT下搅拌15分钟后，添加N,O-二甲基羟基胺盐酸盐(0.4940gm，5mmol，1当量)在DMF(1mL)中的溶液。将反应混合物在搅拌下保持24h。用TLC和LCMS确认产物形成并且将反应混合物用EtOAc(50mL)稀释并且用水(2x50mL)洗涤。将有机层经Na2SO4干燥并且在减压下浓缩以获得粗品，将其通过快速柱色谱法进一步纯化以获得纯的产物N-甲氧基-N-甲基-4-(三氟甲基)环己烷-1-甲酰胺(1.2g)。LCMS：240[M+H]+。
步骤2：1-(4-(三氟甲基)环己基)乙-1-酮的合成。向N-甲氧基-N-甲基-4-(三氟甲基)环己烷-1-甲酰胺(1.2g，5mmol，1当量)在THF(10mL)中的溶液中添加MeMgBr在THF中的溶液(2M，1.194gm，1mmol，2当量)。将反应混合物在搅拌下保持24h。用TLC和LCMS确认产物形成并且将反应混合物用EtOAc(50mL)稀释并且用NH4Cl(2x50mL)洗涤，将有机层经Na2SO4干燥并且在减压下浓缩以获得粗品，将其通过快速柱色谱法进一步纯化以获得纯的产物1-(4-(三氟甲基)环己基)乙-1-酮(450mg，呈白色固体)。LCMS：195[M+H]+。
步骤3：1-(4-(三氟甲基)环己基)乙-1-醇的合成。在0℃下向1-(4-(三氟甲基)环己基)乙-1-酮(0.450g，2.319mmol，1.0当量)在甲醇(20mL)中的搅拌溶液中分批添加NaBH4(132.2gm，3.47mmol，1.5当量)并且搅拌10分钟。允许反应混合物在RT下搅拌1小时。通过TLC和NMR确认产物形成。反应完成后，将反应混合物用水淬灭并且用乙酸乙酯(3x50mL)萃取，将合并的有机萃取物用水(2x50mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥并且在减压下浓缩以获得1-(4-(三氟甲基)环己基)乙-1-醇(0.375g)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ4.34-4.40(m,1H),3.56(dd,J＝5.92,13.81Hz,1H),1.94-2.01(m,3H),1.90(br.s.,2H),1.75(d,J＝6.58Hz,2H),1.51-1.63(m,2H),1.44-1.51(m,2H),1.26-1.39(m,2H),1.12-1.22(m,2H),
步骤4：4-硝基-1-(1-(4-(三氟甲基)环己基)乙基)-1H-吡唑和4-硝基-1-(1-(4-(三氟甲基)环己基)乙基)-1H-吡唑的合成。向PPh3(601mg，2.29mmol，1.2当量)和DIAD(464mg，2.29mmol，1.2当量)在THF(2mL)中的搅拌溶液中添加1-(4-(三氟甲基)环己基)乙-1-醇(375mg，1.913mmol，1.0当量)。随后逐滴添加4-硝基-1H-吡唑(216.1mg，1.913mmol，和1当量)，将反应混合物在RT下搅拌过夜。用TLC和LCMS确认产物形成。反应完成后将混合物用EtOAc(50mL)稀释并且用水(50mL X 3)洗涤。将有机层经Na2SO4干燥并且在减压下浓缩以获得粗品，将其通过快速柱色谱法进一步纯化以获得4-硝基-1-(1-(4-(三氟甲基)环己基)乙基)-1H-吡唑(85mg)和4-硝基-1-(1-(4-(三氟甲基)环己基)乙基)-1H-吡唑(68mg)，LCMS:292[M+H]+,峰1：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.03(s,1H),8.28(s,1H),4.53(dd,J＝6.80,9.87Hz,1H),2.04(br.s.,1H),1.98(d,J＝2.63Hz,2H),1.49-1.76(m,3H),1.44(d,J＝6.58Hz,3H),1.25(d,J＝9.21Hz,2H),0.94(br.s.,2H)；峰2：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.92(s,1H),8.27(s,1H),4.12-4.27(m,1H),2.19(br.s.,1H),1.69-1.96(m,3H),1.45(d,J＝7.02Hz,3H),1.30-1.41(m,2H),1.11-1.30(m,4H)。
步骤5和步骤6：1-(1-(4-(三氟甲基)环己基)乙基)-1H-吡唑-4-胺和1-(1-(4-(三氟甲基)环己基)乙基)-1H-吡唑-4-胺的合成。向4-硝基-1-(1-(4-(三氟甲基)环己基)乙基)-1H-吡唑(85mg)在甲醇(10mL)中的搅拌溶液中在氮气下添加钯碳(10％w/w，8mg)。将反应混合物用H2气体吹扫2h。通过LCMS确认产物形成。反应完成后，将反应混合物通过硅藻土床过滤并且将滤液在减压下浓缩以获得1-(1-(4-(三氟甲基)环己基)乙基)-1H-吡唑-4-胺(80mg粗品，呈棕色液体)。向4-硝基-1-(1-(4-(三氟甲基)环己基)乙基)-1H-吡唑(68mg)在甲醇(10mL)中的搅拌溶液中在氮气下添加钯碳(10％w/w，7mg)。将反应混合物用H2气体吹扫2h。通过LCMS确认产物形成。反应完成后，将反应混合物通过硅藻土床过滤并且将滤液在减压下浓缩以获得1-(1-(4-(三氟甲基)环己基)乙基)-1H-吡唑-4-胺(60mg粗品，呈棕色液体)。源自步骤4的峰1产物的组合物：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.05(s,1H),6.87(s,1H),4.10-4.23(m,1H),3.80(br.s.,2H),2.67(br.s.,1H),2.33(br.s.,1H),1.90(br.s.,2H),1.42-1.71(m,4H),1.28-1.36(m,3H),1.05(d,J＝6.14Hz,2H)；源自步骤4的峰2产物的组合物：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.00(s,1H),6.87(s,1H),4.08-4.14(m,1H),3.84(d,J＝8.33Hz,2H),2.15(br.s.,1H),1.91(br.s.,1H),1.79(br.s.,2H),1.56(br.s.,2H),1.32(d,J＝6.58Hz,3H),1.23(br.s.,2H),0.98-1.12(m,2H)。
步骤7和步骤8：1-(1-(4-(三氟甲基)环己基)乙基)-1H-吡唑-4-胺盐酸盐和1-(1-(4-(三氟甲基)环己基)乙基)-1H-吡唑-4-胺盐酸盐的合成。在RT下向1-(1-(4-(三氟甲基)环己基)乙基)-1H-吡唑-4-胺(80mg)在乙醇(1mL)中的溶液中添加2M HCl在乙醇(2ml)中的溶液持续2H。用TLC和1H NMR确认产物形成。将反应混合物在减压下浓缩以获得粗品，将其进一步与乙醚一起研磨并且冻干以获得纯的1-(1-(4-(三氟甲基)环己基)乙基)-1H-吡唑-4-胺盐酸盐(82mg，棕色固体)。在RT下向1-(1-(4-(三氟甲基)环己基)乙基)-1H-吡唑-4-胺(60mg)在乙醇(1mL)中的搅拌溶液中添加在乙醇(2ml)中的2MHCl持续2h。用TLC和1H NMR确认产物形成。将反应混合物在减压下浓缩以获得粗品，将其进一步与乙醚一起研磨并且冻干以获得纯的产物1-(1-(4-(三氟甲基)环己基)乙基)-1H-吡唑-4-胺盐酸盐(62mg，棕色固体)。源自步骤4的峰1产物的组合物：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.24(br.s.,2H),8.03(s,1H),7.54(s,1H),4.44-4.53(m,1H),2.33(br.s.,2H),2.00(br.s.,1H),1.53-1.71(m,.3H),1.51(br.s.,2H),1.36-1.43(m,3H),1.23(d,J＝4.38Hz,2H)；源自步骤4的峰2产物的组合物：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.03(br.s.,2H),7.94(s,1H),7.54(s,1H),4.10-4.18(m,1H),2.33(br.s.,1H),2.16(d,J＝8.77Hz,1H),1.74-1.96(m,3H),1.68(d,J＝8.33Hz,1H),1.40(d,J＝7.02Hz,2H),1.00-1.29(m,5H)。
步骤9和步骤10：5-(吡嗪-2-基)-N-(1-(1-(4-(三氟甲基)环己基)乙基)-1H-吡唑-4-基)异噁唑-3-甲酰胺和5-(吡嗪-2-基)-N-(1-(1-(4-(三氟甲基)环己基)乙基)-1H-吡唑-4-基)异噁唑-3-甲酰胺的合成。向5-(吡嗪-2-基)异噁唑-3-甲酸(51mg，0.269mmol，1当量)在DMF(1mL)中的溶液中添加HATU(102.62mg，0.269mmol，1当量)。将混合物用DIPEA(0.109ml，0.629mmol，3当量)逐滴处理。在RT下搅拌15分钟后，将混合物用1-(1-(4-(三氟甲基)环己基)乙基)-1H-吡唑-4-胺盐酸盐(80mg，0.269mmol，1当量)在DMF(1mL)中的溶液逐滴处理。将反应混合物在搅拌下保持24h。用TLC和LCMS确认产物形成并且将反应混合物用EtOAc(50mL)稀释并且用水(2x50mL)洗涤，将有机层经Na2SO4干燥并且在减压下浓缩以获得粗品，将其通过快速柱色谱法进一步纯化以获得纯的产物5-(吡嗪-2-基)-N-(1-(1-(4-(三氟甲基)环己基)乙基)-1H-吡唑-4-基)异噁唑-3-甲酰胺(40mg，呈白色固体)。向5-(吡嗪-2-基)异噁唑-3-甲酸(39mg，0.202mmol，1当量)在DMF(1mL)中的溶液中添加HATU(77mg，0.202mmol，1当量)。将混合物用DIPEA(0.104ml，0.606mmol，3当量)逐滴处理。在RT下搅拌15分钟后，将混合物用1-(1-(4-(三氟甲基)环己基)乙基)-1H-吡唑-4-胺盐酸盐(60mg，0.202mmol，1当量)在DMF(1mL)中的溶液逐滴处理。将反应混合物在搅拌下保持24h。用TLC和LCMS确认产物形成并且将反应混合物用EtOAc(50mL)稀释并且用水(2x50mL)洗涤。将有机层经Na2SO4干燥并且在减压下浓缩以获得粗品，将其通过快速柱色谱法进一步纯化以获得5-(吡嗪-2-基)-N-(1-(1-(4-(三氟甲基)环己基)乙基)-1H-吡唑-4-基)异噁唑-3-甲酰胺(15mg，呈白色固体)。LCMS：435[M+H]+。源自步骤4的峰1产物的组合物：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.07(br.s.,1H),9.35(s,1H),8.83(d,J＝11.84Hz,2H),8.05(s,1H),7.67(d,J＝9.21Hz,1H),4.04-4.16(m,1H),2.17(br.s.,1H),1.74-1.94(m,3H),1.68(br.s.,1H),1.41(d,J＝6.58Hz,2H),1.22(d,J＝10.52Hz,2H),0.91-1.17(m,4H)；源自步骤4的峰2产物的组合物：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.07(s,1H),9.35(s,1H),8.78-8.88(m,2H),8.12(s,1H),7.66(d,J＝9.21Hz,2H),4.45(dd,J＝6.58,10.09Hz,1H),2.33(br.s.,2H),2.01(br.s.,1H),1.55-1.76(m,5H),1.53(br.s.,1H),1.41(d,J＝6.58Hz,3H),1.21(d,J＝14.03Hz,1H)。
实施例S3-13.N-(1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)-5-(吡嗪-2-基)异噁唑-3-甲酰胺(化合物3-14)的合成。
Figure BDA0003673001920000701
步骤1：4-(4-(5-(吡嗪-2-基)异噁唑-3-甲酰胺基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯的合成向5-(吡嗪-2-基)异噁唑-3-甲酸(100mg，0.52mmol，1当量)在DMF(1mL)中的溶液中添加HATU(199.47mg，0.52mmol，1当量)。将混合物用DIPEA(0.271ml，1.68mmol，3.2当量)逐滴处理。在RT下搅拌15分钟后，将混合物用4-(4-氨基-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(139mg，0.52mmol，1当量)在DMF(2mL)中的溶液逐滴处理。将反应混合物在搅拌下保持24h。用TLC和LCMS确认产物形成并且将反应混合物用EtOAc(50mL)稀释并且用水(50mL X2)洗涤。将有机层经Na2SO4干燥并且在减压下浓缩以获得粗品，将其通过快速柱色谱法进一步纯化以获得纯的产物4-(4-(5-(吡嗪-2-基)异噁唑-3-甲酰胺基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(60mg，呈灰白色固体)。LCMS:440[M+H]+,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.07(s,1H),9.35(s,1H),8.85(s,1H),8.81(d,J＝2.19Hz,1H),8.09(s,1H),7.68(d,J＝2.19Hz,1H),4.37(br.s.,1H),4.04(d,J＝10.96Hz,2H),2.90(br.s.,2H),1.98-2.00(m,4H),1.5(s,9H)。
步骤2：N-(1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)-5-(吡嗪-2-基)异噁唑-3-甲酰胺盐酸盐的合成。向4-(4-(5-(吡嗪-2-基)异噁唑-3-甲酰胺基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(60mg)在二噁烷(5mL)中的搅拌溶液中添加在二噁烷(1mL)中的4M HCl并且在室温下搅拌2h。2h后形成沉淀物。将溶剂在真空中去除并且将所得的固体用乙醚洗涤并且在真空下干燥以获得N-(1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)-5-(吡嗪-2-基)异噁唑-3-甲酰胺盐酸盐(50mg)。LCMS:340[M+H]+,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.19(s,1H),9.31-9.43(m,1H),9.25(br.s.,2H),8.81-8.92(m,1H),8.10(s,1H),7.73(d,J＝4.38Hz,2H),4.43-4.61(m,1H),3.38(br.s.,2H),2.98-3.10(m,2H),2.04-2.22(m,4H)。
实施例S3-14.N-(1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)-5-(吡嗪-2-基)-1,3,4-噻二唑-2-甲酰胺(化合物3-15)的合成。
Figure BDA0003673001920000702
步骤1：4-(4-(5-(吡嗪-2-基)-1,3,4-噻二唑-2-甲酰胺基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯的合成。向5-(吡嗪-2-基)-1,3,4-噻二唑-2-甲酸乙酯(150mg，0.635mmol，1当量)和4-(4-氨基-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(169.06mg，0.635mmol，1当量)在甲苯(10mL)中的搅拌溶液中添加在甲苯中的3M三甲基铝(365.76mg，2.54mmol，4当量)。将反应混合物在RT下搅拌24h。将反应混合物用冷水稀释并且过滤以得到4-(4-(5-(吡嗪-2-基)-1,3,4-噻二唑-2-甲酰胺基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(100mg黄色固体)。LCMS：357[M-100]+。
步骤2：N-(1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)-5-(吡嗪-2-基)-1,3,4-噻二唑-2-甲酰胺的合成。向4-(4-(5-(吡嗪-2-基)-1,3,4-噻二唑-2-甲酰胺基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(100mg，0.109mmol，1当量)中添加在二噁烷中的4M HCl并且允许在RT下搅拌1h。反应完成后，将反应混合物浓缩以得到N-(1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)-5-(吡嗪-2-基)-1,3,4-噻二唑-2-甲酰胺(100mg黄色固体)。LCMS:357[M+H]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 11.63(s,1H)9.54(br.s.,1H)8.87(s,2H)8.92(s,1H)8.54(br.s.,2H)8.12(s,1H)7.79(s,1H)4.52(d,J＝4.38Hz,1H)3.96(br.s.,1H)3.07(br.s.,3H)2.16(br.s.,3H)。
实施例S3-15. 5-(呋喃-2-基)-N-(1-(反式4-羟基环己基)-1H-吡唑-4-基)异噁唑-3-甲酰胺(化合物3-16)的合成。
Figure BDA0003673001920000711
步骤1：5-(呋喃-2-基)-N-(1-(反式4-羟基环己基)-1H-吡唑-4-基)异噁唑-3-甲酰胺的合成。向5-(呋喃-2-基)异噁唑-3-甲酸(100mg，0.555mmol，1当量)在DMF(1mL)中的溶液中添加HATU(210g，0.555mmol，1.0当量)。将混合物用DIPEA(0.192ml，1.111mmol，2.0当量)逐滴处理。在RT下搅拌15分钟后，将混合物用反式-4-(4-氨基-1H-吡唑-1-基)环己-1-醇(100.55mg，0.555mmol，1当量)在DMF(1mL)中的溶液逐滴处理。将反应混合物在搅拌下保持24h。反应完成后将混合物用EtOAc(50mL)稀释并且用水(10mL X 3)洗涤。将有机层经Na2SO4干燥并且在减压下浓缩以获得粗品，将其通过与丙酮己烷(8:2)ml一起研磨进一步纯化以得到作为5-(呋喃-2-基)-N-(1-(反式-4-羟基环己基)-1H-吡唑-4-基)异噁唑-3-甲酰胺的沉淀物。LCMS:343[M+H]+,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.96(s,1H),7.91-8.15(m,2H),7.62(s,1H),7.28(d,J＝3.51Hz,1H),7.15(s,1H),6.77(br.s.,1H),4.65(d,J＝4.39Hz,1H),4.11(d,J＝11.40Hz,2H),3.49(br.s.,1H),1.93(t,J＝14.69Hz,3H),1.61-1.82(m,2H),1.19-1.44(m,2H)。
实施例S3-16.N-(1-(1-环戊基乙基)-1H-吡唑-4-基)-5-(呋喃-2-基)异噁唑-3-甲酰胺(化合物3-17和化合物3-18)的合成
Figure BDA0003673001920000721
将N-(1-(1-环戊基乙基)-1H-吡唑-4-基)-5-(呋喃-2-基)异噁唑-3-甲酰胺(160mg)的外消旋混合物通过手性HPLC纯化以获得第一洗脱异构体(化合物3-17)和第二洗脱异构体(化合物3-18)。将异构体通过手性SFC(Daicel Chiralpak·-IC，250x20 mm，5um)分离，使用分析级液体二氧化碳和HPLC级异丙醇的等度程序，总流速：56g/min，助溶剂百分比：18％。
化合物3-17：产量＝22mg；洗脱时间＝7.9min。化合物3-18：产量＝20mg；洗脱时间＝10.13min。
化合物3-17：LCMS:341[M+H]；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.95(s,1H),8.02(d,J＝13.59Hz,2H),7.62(s,1H),7.28(d,J＝3.51Hz,1H),7.15(s,1H),6.69-6.85(m,1H),4.02-4.24(m,1H),2.23(m,J＝8.51Hz,1H),1.71-1.88(m,2H),1.45-1.68(m,2H),1.35-1.45(m,3H),1.15-1.33(m,2H),1.00-1.14(m,2H).化合物3-18：LCMS:341[M+1)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.93(s,1H),8.01(d,J＝13.59Hz,2H),7.61(s,1H),7.28(d,J＝3.50Hz,1H),7.13(s,1H),6.69-6.83(m,1H),4.02-4.21(m,1H),2.21(m,J＝8.51Hz,1H),1.71-1.87(m,2H),1.45-1.63(m,2H),1.35-1.43(m,3H),1.15-1.31(m,2H),1.00-1.11(m,2H)。
实施例S3-17.N-(1-(四氢呋喃-3-基)-1H-吡唑-4-基)-5-(噻吩-2-基)异噁唑-3-甲酰胺(化合物3-19)的合成
Figure BDA0003673001920000722
步骤1：4-硝基-1-(四氢呋喃-3-基)-1H-吡唑的合成。向四氢呋喃-3-醇(1g，11.357mmol，1.0当量)和4-硝基-1H-吡唑(1.283g，11.357mmol，1.0当量)中的搅拌溶液中添加PPh3(4.46g，17.035mmol，1.5当量)并且将RM在0℃下在氮气氛下搅拌10min。此外，将DIAD(2.3mL，17.035mmol，1.5当量)缓慢添加至RM中并且允许在室温下搅拌18h。通过TLC和LCMS分析反应进程。反应完成后，将RM用乙酸乙酯萃取2×次(50mL)，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩并且通过使用快速色谱法进一步纯化以获得所希望的化合物4-硝基-1-(四氢呋喃-3-基)-1H-吡唑(1.5g)，LCMS(M+1)：184。
步骤2：1-(四氢呋喃-3-基)-1H-吡唑-4-胺的合成。向4-硝基-1-(四氢呋喃-3-基)-1H-吡唑(500mg，2.732mmol，1.0当量)在EtOH:H2O(1:1)5mL中的搅拌溶液中添加Fe(765mg，13.661mmol，5.0当量)和NH4Cl(738mg，13.661mmol，5.0当量)并且将RM在80℃下搅拌3h。通过LCMS分析反应进程。反应完成后，使RM通过硅藻土床然后在减压下浓缩。此外，通过EtOAc(25ml×2)完成萃取，将有机层经硫酸钠干燥并且在减压下浓缩以获得所希望的化合物1-(四氢呋喃-3-基)-1H-吡唑-4-胺(350mg)，LCMS(M+1)：155。
步骤3：N-(1-(四氢呋喃-3-基)-1H-吡唑-4-基)-5-(噻吩-2-基)异噁唑-3-甲酰胺的合成。向5-(噻吩-2-基)异噁唑-3-甲酸(100mg，0.513mmol，1.0当量)在DMF(2mL)中的搅拌溶液中添加HATU(195mg，0.513mmol，1.0当量)并且在RT下搅拌15min。向反应混合物中添加1-(四氢呋喃-3-基)-1H-吡唑-4-胺(78mg，0.513mmol，1.0当量)然后添加DIPEA(0.3mL，1.538mmol，3.0当量)并且允许在RT下搅拌3h。通过TLC和LCMS分析反应进程。反应完成后，将RM倒入冰冷的水中，过滤，然后排除滤液，通过使用快速色谱法完成进一步纯化以获得所希望的化合物N-(1-(四氢呋喃-3-基)-1H-吡唑-4-基)-5-(噻吩-2-基)异噁唑-3-甲酰胺(24mg)，LCMS(M+1):331.3,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.98(s,1H),8.10(s,1H),7.89(d,J＝5.26Hz,1H),7.81-7.86(m,1H),7.67(s,1H),7.23-7.33(m,2H),5.00-5.08(m,1H),3.91-4.01(m,2H),3.74-3.89(m,2H),2.29-2.43(m,1H),2.22(d,J＝3.95Hz,1H)。
实施例S3-18. 5-(吡啶-2-基)-N-(1-(四氢呋喃-3-基)-1H-吡唑-4-基)异噁唑-3-甲酰胺(化合物3-20和化合物3-21)的合成。
Figure BDA0003673001920000731
步骤1：4-硝基-1-(四氢呋喃-3-基)-1H-吡唑的合成。向四氢呋喃-3-醇(2.00g，22.72mmol，1当量)和4-硝基-1H-吡唑(2.568g，22.72mmol，1当量)和TPP(8.931mg，34.090mmol，1.5当量)在THF(10ml)中的搅拌溶液中逐滴添加DIAD(6.88ml，34.090mmol，1.5当量)，并且允许在RT下搅拌4h。通过TLC和LCMS监测反应进程。反应完成后，将反应混合物用乙酸乙酯和水(2X500mL)萃取。将有机层分离并且在减压下蒸发以得到粗产物，将其通过combi flash色谱法进一步纯化以产出4-硝基-1-(四氢呋喃-3-基)-1H-吡唑(1.6g)，LCMS：184.06[M+H]。
步骤2：1-(四氢呋喃-3-基)-1H-吡唑-4-胺的合成。向4-硝基-1-(四氢呋喃-3-基)-1H-吡唑(1.0g，5.464mmol，1当量)在10ml乙醇:水(1:1)中的溶液中添加NH4Cl(1.475g，27.322mmol，5当量)和Fe(1.530g，27.322mmol，5当量)，将所得的反应混合物在80℃下搅拌4h。通过TLC和LCMS监测反应进程。反应完成后，将RM通过硅藻土床过滤，将滤液浓缩，用乙酸乙酯和水(2X50mL)萃取，将有机层收集并且浓缩以得到粗产物1-(四氢呋喃-3-基)-1H-吡唑-4-胺(0.730g)，LCMS：154.02[M+H]。
步骤3：5-(吡啶-2-基)-N-(1-(四氢呋喃-3-基)-1H-吡唑-4-基)异噁唑-3-甲酰胺的合成。将5-(吡啶-2-基)异噁唑-3-甲酸(0.9189g，4.836mmol，1当量)和HATU(1.837g，4.836mmol，1当量)在DMF(5mL)中的溶液搅拌5min并且向其中添加DIPEA(2.52ml，14.509mmol，3当量)和1-(四氢呋喃-3-基)-1H-吡唑-4-胺(0.740g，4.836mmol，1当量)，将所得的反应混合物在RT下搅拌4h，通过TLC和LCMS监测反应进程，反应完成后，将反应混合物用乙酸乙酯和水(2X25mL)萃取。将有机层收集并且浓缩以得到粗产物，将其通过combiflash色谱法纯化以得到5-(吡啶-2-基)-N-(1-(四氢呋喃-3-基)-1H-吡唑-4-基)异噁唑-3-甲酰胺(200mg)，LCMS:326.0[M+H],1H NMR(400MHz,DMSO-d6)11.05(s,1H),8.76(d,J＝3.95Hz,1H),7.97-8.20(m,3H),7.68(s,1H),7.54-7.49(s,2H),5.05(br.s.,1H),3.96-3.90(m,4H),2.32-2.45(m,2H)。
步骤4：5-(吡啶-2-基)-N-(1-(四氢呋喃-3-基)-1H-吡唑-4-基)异噁唑-3-甲酰胺的异构体的分离。将5-(吡啶-2-基)-N-(1-(四氢呋喃-3-基)-1H-吡唑-4-基)异噁唑-3-甲酰胺(400mg)的外消旋混合物通过手性HPLC纯化以获得第一洗脱异构体(化合物3-20)和第二洗脱异构体(化合物3-21)。使用以下分离异构体：柱：Chiralcel-ODH，250X20 mm，5μm，流速：56mL/min，柱温箱温度：环境，等度程序：A：食品级液体二氧化碳，B：HPLC级异丙醇，ABPR：100巴，初始(时间min)，B(％)组合物(23％)，23min B(％)组合物(28％)，波长：最大图，样品制备：HPLC级甲醇，0.22μ过滤器。
化合物3-20：产量＝115mg；化合物3-21：产量＝110mg。
化合物3-20：LCMS:326[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)11.05(s,1H),8.76(d,J＝3.95Hz,1H),7.97-8.20(m,3H),7.68(s,1H),7.54-7.49(s,2H),5.05(br.s.,1H),3.96-3.90(m,4H),2.32-2.45(m,2H).化合物3-21：LCMS:326[M+H]+1H NMR(400MHz,DMSO-d6)11.05(s,1H),8.76(d,J＝3.95Hz,1H),7.97-8.20(m,3H),7.68(s,1H),7.54-7.49(s,2H),5.05(br.s.,1H),3.96-3.90(m,4H),2.32-2.45(m,2H)。
实施例S3-19.N-(1-(四氢呋喃-3-基)-1H-吡唑-4-基)-5-(噻吩-2-基)异噁唑-3-甲酰胺(化合物3-22和化合物3-23)的合成
Figure BDA0003673001920000741
步骤1：4-硝基-1-(四氢呋喃-3-基)-1H-吡唑的合成。向四氢呋喃-3-醇(2.00g，22.72mmol，1.0当量)和4-硝基-1H-吡唑(2.568g，22.72mmol，1.0当量)和TPP(8.931g，34.090mmol，1.5当量)在THF(10mL)中的搅拌溶液中在0℃下逐滴添加DIAD(6.88ml，34.090mmol，1.5当量)，所有添加后允许将反应混合物在RT下搅拌6h。通过TLC和LCMS监测反应进程。反应完成后，将反应混合物用乙酸乙酯(100ml X 2)和水(100mL)萃取。将有机层分离并且在减压下蒸发以得到粗产物，将其通过combiflash色谱法进一步纯化以获得4-硝基-1-(四氢呋喃-3-基)-1H-吡唑(900mg)，LCMS：184.06[M+1]。
步骤2：1-(四氢呋喃-3-基)-1H-吡唑-4-胺的合成。在RT下向4-硝基-1-(四氢呋喃-3-基)-1H-吡唑(1.00g，5.464mmol，1.0当量)在EtOH/水(1:1，10ml)中的搅拌溶液中添加氯化铵(1.475g，27.322mmol，5.0当量)和Fe(1.5300g，27.322mmol，5.0当量)并且允许在80℃下加热2h。通过TLC和LCMS监测反应进程。反应完成后，将反应混合物通过硅藻土垫过滤并且将滤液蒸发并且用DCM/水萃取2次。将有机层收集并且在减压下蒸发以得到1-(四氢呋喃-3-基)-1H-吡唑-4-胺(1.1g)。LCMS：154.09[M+1]。
步骤3：N-(1-(四氢呋喃-3-基)-1H-吡唑-4-基)-5-(噻吩-2-基)异噁唑-3-甲酰胺的合成。向5-(噻吩-2-基)异噁唑-3-甲酸(764mg，3.921mmol，1.0当量)在DMF(5mL)中的搅拌溶液中添加HATU(1.490g，3.921mmol，1.0当量)。在RT下搅拌15分钟后，将混合物用DIPEA(2.045ml，11.764mmol，3.0当量)逐滴处理。在RT下搅拌15分钟后，将反应混合物用1-(四氢呋喃-3-基)-1H-吡唑-4-胺(600mg，3.921mmol，1.0当量)在DMF(1mL)中的溶液处理。将反应混合物在搅拌下保持24h。将反应混合物用水(50mL)稀释。将所得的沉淀物滤除，得到N-(1-(四氢呋喃-3-基)-1H-吡唑-4-基)-5-(噻吩-2-基)异噁唑-3-甲酰胺(250mg)分析数据：LCMS:331.08[M+H],1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 8.73(d,J＝4.82Hz,1H)8.61(s,1H)8.31(d,J＝7.89Hz,1H)8.01-8.12(m,3H)7.8(d,J＝7.89Hz,1H)7.57-7.67(m,1H))5.9(br.s.,1H)2.27(s,3H)1.82-1.94(m,3H),
步骤4：N-(1-(四氢呋喃-3-基)-1H-吡唑-4-基)-5-(噻吩-2-基)异噁唑-3-甲酰胺的异构体的分离。将N-(1-(四氢呋喃-3-基)-1H-吡唑-4-基)-5-(噻吩-2-基)异噁唑-3-甲酰胺的外消旋混合物通过手性HPLC纯化以获得第一洗脱异构体(化合物3-22)和第二洗脱异构体(化合物3-23)。将对映异构体通过手性SFC(Daicel
Figure BDA0003673001920000751
250×21mm，5μm)分离。使用分析级液体二氧化碳和HPLC级甲醇的等度程序，总流速：56g/min，助溶剂百分比：33％。
化合物3-22：产量＝29mg；洗脱时间＝3.0min。化合物3-23：洗脱时间＝4.2min。
实施例S3-20. 5-(呋喃-2-基)-N-(1-(1-(四氢呋喃-3-基)乙基)-1H-吡唑-4-基)异噁唑-3-甲酰胺(化合物3-24、化合物3-25、化合物3-26、和化合物3-27)的合成。
Figure BDA0003673001920000761
步骤1：1-(四氢呋喃-3-基)乙醇的合成。向四氢呋喃-3-甲醛(2.0g，20.0mmol，1.0当量)在THF(10ml)中的搅拌溶液中在0℃下逐滴添加甲基溴化镁(10.0ml，30.0mmol，1.5当量)，所有添加后，将反应混合物在rt下搅拌4h并且通过TLC和LCMS监测反应进程。反应完成后，将反应混合物用乙酸乙酯和水(2X20ml)萃取。将有机层分离并且在减压下蒸发以得到产物1-(四氢呋喃-3-基)乙醇(1.00g)，所述产物不经纯化即用于下一步骤，LCMS：117.08(M+1)。
步骤2：4-硝基-1-(1-(四氢呋喃-3-基)乙基)-1H-吡唑的合成。向1-(四氢呋喃-3-基)乙醇(900mg，7.758mmol，1.0当量)和4-硝基-1H-吡唑(876mg，7.758mmol，1.0当量)和TPP(2.032g，7.758mmol，1.0当量)在THF(10mL)中的搅拌溶液中在0℃下逐滴添加DIAD(2.350ml，11.637mmol，1.5当量)，所有添加后允许反应混合物在RT下搅拌6h。通过TLC和LCMS监测反应进程。反应完成后，将反应混合物用乙酸乙酯和水(2X10mL)萃取。将有机层分离并且在减压下蒸发以得到粗产物，将其通过combiflash色谱法进一步纯化以获得4-硝基-1-(1-(四氢呋喃-3-基)乙基)-1H-吡唑(900mg)，LCMS：212.0[M+H]。
步骤3：1-(1-(四氢呋喃-3-基)乙基)-1H-吡唑-4-胺的合成。在rt下向4-硝基-1-(1-(四氢呋喃-3-基)乙基)-1H-吡唑(900mg，4.918mmol，1.0当量)在EtOH/水(1:1，10ml)中的搅拌溶液中添加氯化铵(1.32g，24.59mmol，5.0当量)和Fe(1.377gm，24.59mmol，5.0当量)并且允许在80℃下加热2h。通过TLC和LCMS监测反应进程。反应完成后，将反应混合物通过硅藻土垫过滤并且将滤液蒸发并且用DCM/水萃取2次。将有机层收集并且在减压下蒸发以得到1-(1-(四氢呋喃-3-基)乙基)-1H-吡唑-4-胺(1.0g)，LCMS：181.9[M+H]。
步骤4：5-(呋喃-2-基)-N-(1-(1-(四氢呋喃-3-基)乙基)-1H-吡唑-4-基)异噁唑-3-甲酰胺的合成。向5-(呋喃-2-基)异噁唑-3-甲酸(1.087gm，6.0773mmol，1.0当量)在DMF(5mL)中的搅拌溶液中添加HATU(2.309g，6.0773mmol，1.0当量)。在RT下搅拌15分钟后，将混合物用DIPEA(3.169ml，18.232mmol，3.0当量)逐滴处理。在RT下搅拌15分钟后，将混合物用1-(1-(四氢呋喃-3-基)乙基)-1H-吡唑-4-胺(1.1g，6.0773mmol，1.0当量)在DMF(1mL)中的溶液逐滴处理。将反应混合物搅拌24h。将反应混合物用水(50mL)稀释，将所得的沉淀物滤除，得到5-(呋喃-2-基)-N-(1-(1-(四氢呋喃-3-基)乙基)-1H-吡唑-4-基)异噁唑-3-甲酰胺。(250mg)，LCMS:343.3[M+H],1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 1.23-1.36(s,3H)1.51(m,2H)2.65-2.75(m,1H)3.41-3.81(4H),4.3(1H)6.77(dd,J＝3.29,1.97Hz,1H)7.15(s,1H)7.29(d,J＝3.51Hz,1H)7.65(d,J＝3.95Hz,1H)8.01(s,1H)8.09(d,J＝13.59Hz,1H)10.99(s,1H)。
步骤5：将5-(呋喃-2-基)-N-(1-(1-(四氢呋喃-3-基)乙基)-1H-吡唑-4-基)异噁唑-3-甲酰胺的四种异构体通过手性HPLC纯化分离以获得化合物3-24、化合物3-25、化合物3-26、和化合物3-27。
生物学实施例
实施例B1.ERSE ATF6-萤光素酶测定
为了理解在不存在或存在内质网(ER)应激的情况下本发明的示例性化合物如何调节ATF6的活性，生成基于人骨骨肉瘤(U2-OS)的TRE-萤光素酶报告物稳定细胞系以确定对ATF6靶基因的转录的调节。
U2-OS细胞获自美国典型培养物保藏中心(ATCC HTB-96，ATCC，马纳萨斯，弗吉尼亚州)并且用生长培养基培养，所述生长培养基含有杜尔贝科改良伊格尔培养基(DMEM)(目录号：SH30023.02，HyClone)，补充有胎牛血清(FBS)10％(目录号：16000044，Gibco)和1％青霉素-链霉素抗生素混合物(目录号：SV30010，Hyclone)。
将Cignal Lenti ATF6 luc报告物(Qiagen#CLS-6031L)用于产生在U2-OS细胞中的稳定细胞系(U2-OS ATF6 TRE-萤光素酶报告物)。所述lenti ATF6报告物是在最小(m)CMV启动子的控制下表达萤火虫萤光素酶基因和ATF6转录反应元件(TRE)的串联重复序列的复制无能，VSV-g伪型慢病毒颗粒的制剂。已经通过实验优化了反应元件的数量以及反应元件之间的中间序列，以最大化信噪比。
本发明的示例性化合物和参考化合物是由粉末制备为在二甲基亚砜(DMSO；目录号#D2650，Sigma Aldrich)中的10mM储液并且在N2中性气氛的存在下在-80℃下储存。
对于初次筛选，将40,000个U2-OS ATF6TRE-萤光素酶报告物细胞铺板在具有100μL生长培养基的聚D赖氨酸(目录号：P2636，Sigma)预涂布的白色96孔板(ThermoScientific Nunc#136101)中。将细胞在加湿的室中孵育24h。
为了在存在ER应激的情况下测试示例性化合物，将细胞用含有媒介物(DMSO)、1μM或10μM测试化合物的50μL生长培养基预处理30min。在此预孵育之后，将50μL的含有0.2μM的ER应激诱导物毒胡萝卜素(Tg)的溶液添加到适当的孔中。Tg溶液还如所指示含有1μM或10μM的媒介物或测试化合物。在每个孔中DMSO的最终浓度保持在0.3％。将板在加湿的室中孵育8h。
8h孵育后，将板冷却降至室温持续10min，然后进行萤光素酶测定。使用萤光素酶测定系统(目录号：E4550，Promega)进行萤光素酶反应。简言之，将每个孔用100μl的PBS 1X洗涤，并且然后，向每个孔中添加20μl的裂解试剂。将板振摇10min，并且然后，向每个孔中添加50μl的萤光素酶测定试剂。在Synergy 4微板读取器中通过1s的积分和110的增益来确定发光。所有测量均一式三份地进行。
将从仅含有媒介物(DMSO，0％的ATF6活性)的孔中确定的平均活性用作空白，并且从其余测量中减去。将从仅含Tg的孔确定的平均活性用作100％的ATF6活性。通过将值相对于使用Tg的潜在最大激活归一化来计算示例性化合物的调节百分比。在此测定中，显示ATF6活性高于100％(正向调节)的示例性化合物表明对这些分子的激活剂活性，而显示ATF6活性小于100％(负向调节)的化合物表明抑制性调节。
确定在U2-OS ATF6TRE-萤光素酶报告物细胞中在存在测试的Tg诱导的ER应激的情况下1μM和10μM的示例性化合物的ATF6活性并且示于表2-2和表3-2中。
表2-2：在ATF6-luc细胞报告物中在存在ER应激的情况下的ATF6活性。
Figure BDA0003673001920000781
表2-3：在ATF6-luc细胞报告物中在存在ER应激的情况下的ATF6活性。
Figure BDA0003673001920000782
Figure BDA0003673001920000791
Ceapin-A4、Ceapin-A7和Ceapin-A8是指Gallagher等人eLife 2016；5:e11878中所述的化合物；对于ATF6活性％：---是指在1μM或10μM测试化合物下<50％；--是指在1μM或10μM测试化合物下50％<活性％<75％；-是指在1μM或10μM下75％<活性％<100％；+是指在1μM或10μM下100％<活性％<125％；++是指在1μM或10μM测试化合物下125％<活性％<150％；+++是指在1μM或10μM测试化合物下>150％；NT：未测试。
为了在不存在ER应激的情况下测试示例性化合物，将细胞用含有媒介物(DMSO)、1μM或10μM测试化合物或者0.1μM Tg的100μL生长培养基预处理8h。在每个孔中DMSO的最终浓度保持在0.3％。将板在加湿的室中孵育。
8h孵育后，将板冷却降至室温持续10min，然后进行萤光素酶测定。如上进行萤光素酶反应。在Synergy 4微板读取器中通过1s的积分和110的增益来读取发光。所有测量均一式三份地进行。
将从仅含有媒介物(DMSO，0％的ATF6活性)的孔中确定的平均活性用作空白，并且从其余测量中减去。通过将值相对于使用Tg的潜在最大激活归一化来计算示例性化合物的调节百分比。
确定在U2-OS ATF6TRE-萤光素酶报告物细胞中在不存在Tg诱导的ER应激的情况下1μM和10μM的示例性化合物的ATF6活性并且示于表3-2和表3-3中。
表3-2：在ATF6-luc细胞报告物中在不存在ER应激的情况下的ATF6活性
Figure BDA0003673001920000792
表3-3：在ATF6-luc细胞报告物中在不存在ER应激的情况下的ATF6活性。
Figure BDA0003673001920000793
Figure BDA0003673001920000801
对于ATF6活性％：+是指在1μM或10μM测试化合物下，0％<活性％<25％；++是指在1μM或10μM测试化合物下，25％<活性％<50％；+++是指在1μM或10μM测试化合物下，活性％>50％；NT：未测试。
将全文中的所有参考文献，如出版物、专利、专利申请和公开的专利申请，均通过引用以其整体并入本文。
尽管出于理解清楚的目的通过说明和实施例详细地描述了前述发明，但是对于本领域技术人员明显的是，将实践某些微小的改变和修改。因此，描述和实施例不应解释为限制本发明的范围。
序列表
<110> 普拉西斯生物技术有限责任公司
<120> ATF6调节剂及其用途
<130> 007742489
<150> US 62/913,122
<151> 2019-10-09
<150> US 62/913,125
<151> 2019-10-09
<160> 1
<170> 用于Windows的FastSEQ 4.0版
<210> 1
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 1
ccaatcggcg gcggccacg 19

Claims (67)

1.一种式(I-2)的化合物：
Figure FDA0003673001910000011
或其药学上可接受的盐，其中：
R1是H、C1-C6烷基、C3-C8环烷基、或C1-C6卤代烷基；
n是0或1；
L是-CH2-或不存在；
B是C3-C6环烷基、3-6元杂环基、或5-6元杂芳基，其中所述C3-C6环烷基和5-6元杂芳基各自独立任选地被一个或多个选自以下的基团取代：卤基、CN、-OH、-NH2、C1-6烷基、C1-6烷氧基和C1-C6卤代烷基；
A是
Figure FDA0003673001910000012
Ra是任选地被一至四个卤基取代的5或6元杂芳基；
条件是，当A是
Figure FDA0003673001910000013
时，(i.)-(vii.)中的一个适用：
(i)B是C3-C6环烷基，任选地被一个或多个选自以下的基团取代：卤基、CN、-OH、-NH2、C1-6烷基、C1-6烷氧基和C1-C6卤代烷基；
(ii)B是具有一个或多个环杂原子的3-6元杂环基，其中所述3-6元杂环基任选地被一个或多个选自以下的基团取代：卤基、CN、-OH、-NH2、C1-6烷氧基和C1-C6卤代烷基，并且其中所述一个或多个环杂原子是氮；
(iii)B是
Figure FDA0003673001910000014
其中的每一个任选地被一个或多个选自以下的基团取代：卤基、CN、-OH、-NH2、C1-6烷基、C1-6烷氧基和C1-C6卤代烷基，n是1，R是CH3，并且L不存在；
(iv)B是
Figure FDA0003673001910000015
其中的每一个被一个或多个选自以下的基团取代：卤基、CN、-OH、-NH2、C1-6烷基、C1-6烷氧基和C1-C6卤代烷基；
(v)B是
Figure FDA0003673001910000016
其中的每一个任选地被一个或多个选自以下的基团取代：卤基、CN、-OH、-NH2、C1-6烷基、C1-6烷氧基和C1-C6卤代烷基，并且Ra是
Figure FDA0003673001910000017
其中的每一个任选地被一至四个卤基取代；
(vi)B是4-6元桥接杂环基，任选地被一个或多个选自以下的基团取代：卤基、CN、
-OH、-NH2、C1-6烷基、C1-6烷氧基和C1-C6卤代烷基；
或
(vii)B是5元杂芳基或
Figure FDA0003673001910000021
其中的每一个任选地被一个或多个选自以下的基团取代：卤基、CN、-OH、-NH2、C1-6烷基、C1-6烷氧基和C1-C6卤代烷基；
R7是H、C1-C6烷基或或C1-C6卤代烷基；并且
R8是H或C1-C6烷基。
2.根据权利要求1所述的化合物，其中Ra的5或6元杂芳基选自2-呋喃基、2-吡啶基、2-嘧啶基、4-嘧啶基和2-吡嗪基。
3.根据权利要求1或2所述的化合物，其中A是
Figure FDA0003673001910000022
并且Ra是2-呋喃基。
4.根据权利要求1或2所述的化合物，其中A是
Figure FDA0003673001910000023
并且Ra是2-吡啶基。
5.根据权利要求1或2所述的化合物，其中A是
Figure FDA0003673001910000024
并且Ra是2-嘧啶基。
6.根据权利要求1或2所述的化合物，其中A是
Figure FDA0003673001910000025
并且Ra是4-嘧啶基。
7.根据权利要求1或2所述的化合物，其中A是
Figure FDA0003673001910000026
并且Ra是2-吡嗪基。
8.根据权利要求1或2所述的化合物，其中A是
Figure FDA0003673001910000027
并且Ra是2-呋喃基。
9.根据权利要求1或2所述的化合物，其中A是
Figure FDA0003673001910000028
并且Ra是2-吡啶基。
10.根据权利要求1或2所述的化合物，其中A是
Figure FDA0003673001910000029
并且Ra是2-嘧啶基。
11.根据权利要求1或2所述的化合物，其中A是
Figure FDA00036730019100000210
并且Ra是4-嘧啶基。
12.根据权利要求1或2所述的化合物，其中A是
Figure FDA00036730019100000211
并且Ra是2-吡嗪基。
13.根据权利要求1-12中任一项所述的化合物，其中B是C3-C6环烷基，任选地被一个或多个选自以下的基团取代：卤基、CN、-OH、-NH2、C1-6烷基、C1-6烷氧基和C1-C6卤代烷基。
14.根据权利要求1-12中任一项所述的化合物，其中B是具有一个或多个环杂原子的3-6元杂环基，其中所述3-6元杂环基任选地被一个或多个选自以下的基团取代：卤基、CN、-OH、-NH2、C1-6烷氧基和C1-C6卤代烷基，并且其中所述一个或多个环杂原子是氮。
15.根据权利要求1-12中任一项所述的化合物，其中B是
Figure FDA00036730019100000212
Figure FDA0003673001910000031
其中的每一个任选地被一个或多个选自以下的基团取代：卤基、CN、-OH、-NH2、C1-6烷基、C1-6烷氧基和C1-C6卤代烷基，n是1，R1是CH3，并且L不存在。
16.根据权利要求1-12中任一项所述的化合物，其中B是
Figure FDA0003673001910000032
Figure FDA0003673001910000033
其中的每一个被一个或多个选自以下的基团取代：卤基、CN、-OH、-NH2、C1-6烷基、C1-6烷氧基和C1-C6卤代烷基。
17.根据权利要求1-12中任一项所述的化合物，其中B是
Figure FDA0003673001910000034
Figure FDA0003673001910000035
其中的每一个任选地被一个或多个选自以下的基团取代：卤基、CN、-OH、-NH2、C1-6烷基、C1-6烷氧基和C1-C6卤代烷基，并且Ra是
Figure FDA0003673001910000036
其中的每一个任选地被一至四个卤基取代。
18.根据权利要求1-12中任一项所述的化合物，其中B是4-6元桥接杂环基，任选地被一个或多个选自以下的基团取代：卤基、CN、-OH、-NH2、C1-6烷基、C1-6烷氧基和C1-C6卤代烷基。
19.根据权利要求1-12中任一项所述的化合物，其中B是5元杂芳基或
Figure FDA0003673001910000037
其中的每一个任选地被一个或多个选自以下的基团取代：卤基、CN、-OH、-NH2、C1-6烷基、C1-6烷氧基和C1-C6卤代烷基。
20.根据权利要求1-19中任一项所述的化合物，其中n是0并且L不存在。
21.根据权利要求1-19中任一项所述的化合物，其中n是1，R1是CH3，并且L不存在。
22.一种化合物，所述化合物选自：
Figure FDA0003673001910000038
Figure FDA0003673001910000041
Figure FDA0003673001910000051
Figure FDA0003673001910000061
Figure FDA0003673001910000071
或其药学上可接受的盐。
23.一种式(I-1)的化合物：
Figure FDA0003673001910000072
或其药学上可接受的盐，其中：
R1是H、C1-C6烷基、C3-C8环烷基、或C1-C6卤代烷基；
n是0或1；
L是-CH2-或不存在；
B是-CH2CH2-、-CH＝CH-、或-C≡C-；
R2、R3、R4、R5和R6各自独立地是H、卤基、CN、-OH、-NH2、C1-6烷氧基、C1-C6烷基、或C1-C6卤代烷基；
或者R2、R4、R5和R6各自独立地是H、卤基、CN、-OH、-NH2、C1-6烷氧基、C1-C6烷基、或C1-C6卤代烷基并且R3与R1和它们附接的原子一起形成5或6元碳环，其中所述5或6元碳环是未经取代的或被一至三个选自以下的基团取代：卤基、CN、-OH、C1-C6烷基、和C1-C6卤代烷基；
A是
Figure FDA0003673001910000081
Ra是5或6元杂芳基，其中所述5或6元杂芳基是未经取代的或被一个至四个选自以下的基团取代：OH、卤基、C1-C6烷基和C1-C6烷氧基，
R7是H、C1-C6烷基或或C1-C6卤代烷基；并且
R8是H或C1-C6烷基。
24.根据权利要求23所述的化合物，其中Ra的5或6元杂芳基选自2-呋喃基、2-吡啶基、2-嘧啶基、4-嘧啶基和2-吡嗪基。
25.根据权利要求23或24所述的化合物，其中A是
Figure FDA0003673001910000082
并且Ra是2-呋喃基。
26.根据权利要求23或24所述的化合物，其中A是
Figure FDA0003673001910000083
并且Ra是2-吡啶基。
27.根据权利要求23或24所述的化合物，其中A是
Figure FDA0003673001910000084
并且Ra是2-嘧啶基。
28.根据权利要求23或24所述的化合物，其中A是
Figure FDA0003673001910000085
并且Ra是4-嘧啶基。
29.根据权利要求23或24所述的化合物，其中A是
Figure FDA0003673001910000086
并且Ra是2-吡嗪基。
30.根据权利要求23或24所述的化合物，其中A是
Figure FDA0003673001910000087
并且Ra是2-呋喃基。
31.根据权利要求23或24所述的化合物，其中A是
Figure FDA0003673001910000088
并且Ra是2-吡啶基。
32.根据权利要求23或24所述的化合物，其中A是
Figure FDA0003673001910000089
并且Ra是2-嘧啶基。
33.根据权利要求23或24所述的化合物，其中A是
Figure FDA00036730019100000810
并且Ra是4-嘧啶基。
34.根据权利要求23或24所述的化合物，其中A是
Figure FDA00036730019100000811
并且Ra是2-吡嗪基。
35.根据权利要求23或24所述的化合物，其中A是
Figure FDA00036730019100000812
并且Ra是2-呋喃基。
36.根据权利要求23或24所述的化合物，其中A是
Figure FDA00036730019100000813
并且Ra是2-吡啶基。
37.根据权利要求23或24所述的化合物，其中A是
Figure FDA0003673001910000091
并且Ra是2-嘧啶基。
38.根据权利要求23或24所述的化合物，其中A是
Figure FDA0003673001910000092
并且Ra是4-嘧啶基。
39.根据权利要求23或24所述的化合物，其中A是
Figure FDA0003673001910000093
并且Ra是2-吡嗪基。
40.根据权利要求23-39中任一项所述的化合物，其中n是1，R1是H并且L不存在。
41.根据权利要求23-40中任一项所述的化合物，其中R7和R8是H。
42.根据权利要求23-41中任一项所述的化合物，其中B是-CH＝CH-、或-C≡C-。
43.一种化合物，所述化合物选自：
Figure FDA0003673001910000094
Figure FDA0003673001910000101
Figure FDA0003673001910000111
Figure FDA0003673001910000121
或其药学上可接受的盐。
44.一种药物组合物，所述药物组合物包含根据权利要求1-43中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的载体。
45.一种治疗有需要的个体的通过激活转录因子6(ATF6)介导的疾病或障碍的方法，所述方法包括向所述个体施用治疗有效量的根据权利要求1-43中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、或者根据权利要求44所述的药物组合物。
46.一种治疗有需要的个体的特征在于ATF6的激活的疾病或障碍的方法，所述方法包括向所述个体施用治疗有效量的根据权利要求1-43中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、或者根据权利要求44所述的药物组合物。
47.根据权利要求45或46所述的方法，其中ATF6是ATF6α。
48.根据权利要求45-47中任一项所述的方法，其中所述疾病或障碍是癌症、神经变性疾病、或血管疾病。
49.根据权利要求45-47中任一项所述的方法，其中所述疾病或障碍是病毒感染、遗传性小脑萎缩和共济失调、或阿尔茨海默病、2型糖尿病、糖尿病性肾病、心肌萎缩、心力衰竭、动脉粥样硬化、缺血、缺血性心脏病、或脑缺血。
50.一种治疗有需要的个体的癌症的方法，所述方法包括向所述个体施用治疗有效量的根据权利要求1-43中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、或者根据权利要求44所述的药物组合物。
51.一种治疗有需要的个体的与血管生成相关的疾病或障碍的方法，所述方法包括向所述个体施用治疗有效量的根据权利要求1-43中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、或者根据权利要求44所述的药物组合物。
52.一种治疗有需要的个体的代谢障碍的方法，所述方法包括向所述个体施用治疗有效量的根据权利要求1-43中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、或者根据权利要求44所述的药物组合物。
53.一种调节个体体内的ATF6的方法，所述方法包括向所述个体施用根据权利要求1-43中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、或者根据权利要求44所述的药物组合物。
54.一种调节细胞中的ATF6的方法，所述方法包括向所述细胞施用或递送根据权利要求1-43中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、或者根据权利要求44所述的药物组合物、或前述的代谢物。
55.一种激活个体体内的ATF6的方法，所述方法包括向所述个体施用根据权利要求1-43中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、或者根据权利要求44所述的药物组合物。
56.一种激活细胞中的ATF6的方法，所述方法包括向所述细胞施用或递送根据权利要求1-43中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、或者根据权利要求44所述的药物组合物、或前述的代谢物。
57.一种抑制个体体内的ATF6的方法，所述方法包括向所述个体施用根据权利要求1-43中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、或者根据权利要求44所述的药物组合物。
58.一种抑制细胞中的ATF6的方法，所述方法包括向所述细胞施用或递送根据权利要求1-43中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、或者根据权利要求44所述的药物组合物、或前述的代谢物。
59.根据权利要求1-43中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、或者根据权利要求44所述的药物组合物在制造用于预防和/或治疗通过ATF6介导的障碍或疾病的药剂中的用途。
60.根据权利要求1至43中任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其用于疗法。
61.根据权利要求1至43中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗有需要的个体的通过激活转录因子6(ATF6)介导的疾病或障碍的方法中。
62.根据权利要求1至43中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗有需要的个体的特征在于激活ATF6的疾病或障碍的方法中。
63.根据权利要求61或62所述的用于所述用途的化合物或其药学上可接受的盐，其中ATF6是ATF6α。
64.根据权利要求61至63中任一项所述的用于所述用途的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述疾病或障碍是癌症、神经变性疾病、或血管疾病。
65.根据权利要求61至63中任一项所述的用于所述用途的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述疾病或障碍是病毒感染、遗传性小脑萎缩和共济失调、或阿尔茨海默病、2型糖尿病、糖尿病性肾病、心肌萎缩、心力衰竭、动脉粥样硬化、缺血、缺血性心脏病、或脑缺血。
66.根据权利要求1至43中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗有需要的个体的与血管生成相关的疾病或障碍的方法中。
67.根据权利要求1至43中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗有需要的个体的代谢障碍的方法中。
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