CN109748948A - 一种棕榈酰四肽-7的纯化方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种棕榈酰四肽‑7的纯化方法，纯化步骤包括样品处理，反相纯化，转盐，冻干。聚苯乙烯二乙烯基苯基质的填料价格低廉，可以耐受强酸强碱，方便使用后的彻底在线清洗，延长了填料的使用寿命；使用聚苯乙烯二乙烯基苯基质的填料可同时作为棕榈酰四肽‑7纯化和转盐步骤的固定相，减少了设备投入，可明显降低生产成本，纯度高且收率好，可以实现工业化生产的需求。
Description
技术领域
本发明涉及药物合成技术领域，特别涉及一种棕榈酰四肽-7的纯化方法。
背景技术
棕榈酰四肽-7又名基肽3000，是一种含有四个氨基酸的活性多肽，氨基酸序列为Pal-Gly-Gln-Pro-Arg-OH，分子式为C34H62N8O7，分子量694.9，其具有如下所示结构：
棕榈酰四肽-7是免疫球蛋白IgG中的活性片段，能显著降低细胞炎症过程中的炎症因子 IL-6的水平，尤其是在UV受损细胞中这种降低作用更为明显。得益于其显著的炎症相关因子抑制作用，棕榈酰四肽-7还能显著消除皮肤炎症，减轻炎症对皮肤皱纹的加深，恢复肌肤活力状态，因此被广泛应用于化妆品中。
目前有关棕榈酰四肽-7的制备方案较少，在相关的文献中给出了一种多肽固相合成棕榈酰四肽-7的方法，但是该方法中棕榈酰四肽-7粗品纯化用到的C18填料不仅价格昂贵，而且使用寿命较短，造成棕榈酰四肽-7原料成本的增高，不利于扩大生产以及市场需求，并且在相关的棕榈酰四肽-7粗品纯化的方法中，得到的棕榈酰四肽-7的纯度及其纯化总收率较低。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种棕榈酰四肽-7的纯化方法，可以实现工业化生产的需求，克服了现有技术的缺陷，能有效降低棕榈酰四肽-7的生产成本。
为了解决上述技术问题，本发明的技术方案为：
(1)将固相合成的棕榈酰四肽-7粗肽溶解于TFA/水溶液中，用滤膜过滤得粗液；
(2)取粗液，以聚苯乙烯二乙烯基苯基质的填料为固定相，配置TFA/水溶液为A相，TFA/乙腈溶液为B相，检测波长214nm进行线性梯度洗脱B％，收集目的峰馏份；
(3)取上述目的峰馏份减压浓缩至原体积的60％-70％，去除过多的乙腈溶液，为第二步转盐做准备；
(4)将浓缩后的样品进行第二步转盐，以聚苯乙烯二乙烯基苯基质的填料为固定相，配置20mM乙酸铵-水溶液为A相，色谱纯乙腈为B相，检测波长214nm进行线性梯度洗脱B％，收集目的峰馏份；
(5)将转盐收集的馏份进行旋蒸浓缩，冻干得到高纯度的棕榈酰四肽-7。
作为进一步实施方式，所述聚苯乙烯二乙烯基苯基质的填料为PS10-300反相聚合物。
作为进一步实施方式，所述固相合成的棕榈酰四肽-7粗肽纯度为86.3％，滤膜为0.45μ m规格。
作为进一步实施方式，所述纯化条件为A相为0.05-0.5％TFA/水溶液，B相为0.05-0.5％TFA/乙腈溶液；洗脱梯度为10％B-80％B。
作为进一步实施方式，所述转盐条件为A相20mM醋酸铵-水溶液，B相纯色谱乙腈；洗脱梯度为20％B-70％B。
采用上述技术方案，聚苯乙烯二乙烯基苯基质的填料价格低廉，可以耐受强酸强碱，方便使用后的彻底在线清洗，延长了填料的使用寿命，聚苯乙烯二乙烯基苯基质的反相聚合物可同时作为棕榈酰四肽-7纯化和转盐步骤的固定相，纯化、转盐两大步骤最终可获得高纯度的棕榈酰四肽-7成品，减少了设备投入，可明显降低生产成本。
附图说明
图1为棕榈酰四肽-7粗品HPLC图
图2为实施例一制得的棕榈酰四肽-7醋酸盐成品HPLC图；
图3为实施例二制得的棕榈酰四肽-7醋酸盐成品HPLC图；
图4为实施例三制得的棕榈酰四肽-7醋酸盐成品HPLC图；
图5为实施例四制得的棕榈酰四肽-7醋酸盐成品HPLC图。
具体实施方式
下面结合附图对本发明的具体实施方式作进一步说明。在此需要说明的是，对于这些实施方式的说明用于帮助理解本发明，但并不构成对本发明的限定。此外，下面所描述的本发明各个实施方式中所涉及的技术特征只要彼此之间未构成冲突就可以相互组合。
实施例一
固相合成棕榈酰四肽-7，粗肽纯度为86.3％
1.样品处理：
将0.1g粗肽用0.1％TFA/水溶液超声溶解，用0.45μm滤膜过滤，收集滤液备用。
2.反相纯化：
纯化条件：PS10-300色谱柱，柱子直径和长度：4.6mm×250mm。流动相：0.05％TFA/ 水溶液为A相，0.05％TFA/乙腈溶液为B相。流速：0.7ml/min，检测波长：214nm，梯度：10％B -80％B(60min)，进样量为0.1g。
纯化过程：将色谱柱用80％以上乙腈冲洗干净后平衡上样，上样量为0.1g。线性梯度洗脱60min，收集目标峰，将收集的目标肽溶液于水温不超过35℃下降压旋蒸浓缩至15-20mg/ml 作为转盐样品。
3.转盐
转盐条件：PS10-300色谱柱，柱子直径和长度：4.6mm×250mm。流动相：20mM醋酸铵-水溶液为A相，纯色谱乙腈为B相。流速：0.7ml/min，检测波长：214nm，梯度：20％B-70％B(30min)。
纯化过程：将色谱柱用80％以上乙腈冲洗干净后平衡上样。线性梯度洗脱30min，收集目标峰，得到目标肽纯度为97.9％，纯化总收率64.2％。
实施例二
固相合成棕榈酰四肽-7，粗肽纯度为86.3％
1.样品处理：
将0.1g粗肽用0.1％TFA/水溶液超声溶解，用0.45μm滤膜过滤，收集滤液备用。
2.反相纯化：
纯化条件：PS10-300色谱柱，柱子直径和长度：4.6mm×250mm。流动相：0.1％TFA/ 水溶液为A相，0.1％TFA/乙腈溶液为B相。流速：0.7ml/min，检测波长：214nm，梯度：20％B -70％B(60min)，进样量为0.1g。
纯化过程：将色谱柱用80％以上乙腈冲洗干净后平衡上样，上样量为0.1g。线性梯度洗脱60min，收集目标峰，将收集的目标肽溶液于水温不超过35℃下降压旋蒸浓缩至15-20mg/ml 作为转盐样品。
3.转盐
转盐条件：PS10-300色谱柱，柱子直径和长度：4.6mm×250mm。流动相：20mM醋酸铵-水溶液为A相，纯色谱乙腈为B相，流速：0.7ml/min，检测波长：214nm，梯度：20％B-70％B(30min)。
纯化过程：将色谱柱用80％以上乙腈冲洗干净后平衡上样。线性梯度洗脱30min，收集目标峰，得到目标肽纯度为98.6％，纯化总收率68.7％。
实施例三
固相合成棕榈酰四肽-7，粗肽纯度为86.3％
1.样品处理：
将0.1g粗肽用0.1％TFA/水溶液超声溶解，用0.45μm滤膜过滤，收集滤液备用。
2.反相纯化：
纯化条件：PS10-300色谱柱，柱子直径和长度：4.6mm×250mm。流动相：0.1％TFA/ 水溶液为A相，0.1％TFA/乙腈溶液为B相。流速：0.7ml/min，检测波长：214nm。梯度：20％B -60％B(60min)。进样量为0.1g。
纯化过程：将色谱柱用80％以上乙腈冲洗干净后平衡上样，上样量为0.1g。线性梯度洗脱60min，收集目标峰，将收集的目标肽溶液于水温不超过35℃下降压旋蒸浓缩至15-20mg/ml 作为转盐样品。
3.转盐
转盐条件：PS10-300色谱柱，柱子直径和长度：4.6mm×250mm。流动相：20mM醋酸铵-水溶液为A相，纯色谱乙腈为B相。流速：0.7ml/min，检测波长：214nm，梯度：20％B-60％B(30min)。
纯化过程：将色谱柱用80％以上乙腈冲洗干净后平衡上样。线性梯度洗脱30min，收集目标峰，得到目标肽纯度为99.1％，纯化总收率72.4％。
实施例四
固相合成棕榈酰四肽-7，粗肽纯度为86.3％
1.样品处理：
将10g粗肽用0.1％TFA/水溶液超声溶解，用0.45μm滤膜过滤，收集滤液备用。
2.反相纯化：
纯化条件：PS10-300色谱柱，柱子直径和长度：50mm×250mm。流动相：0.1％TFA/ 水溶液为A相，0.1％TFA/乙腈溶液为B相。流速：60ml/min，检测波长：214nm。梯度：20％B -60％B(60min)。进样量为10g。
纯化过程：将色谱柱用80％以上乙腈冲洗干净后平衡上样，上样量为10g。线性梯度洗脱 60min，收集目标峰，将收集的目标肽溶液于水温不超过35℃下降压旋蒸浓缩至15-20mg/ml 作为转盐样品。
3.转盐
转盐条件：PS10-300色谱柱，柱子直径和长度：50mm×250mm。流动相：20mM醋酸铵-水溶液为A相，纯色谱乙腈为B相。流速：60ml/min，检测波长：214nm，梯度：20％B-60％B (30min)。
纯化过程：将色谱柱用80％以上乙腈冲洗干净后平衡上样。线性梯度洗脱30min，收集目标峰，纯化总收率72.1％。
将收集的目标肽溶液于水温不超过35℃下降压旋蒸浓缩至20-30mg/ml后进行冷冻干燥，得到棕榈酰四肽-7精肽6.08g，纯度为98.9％。
根据图1与图2-5的对比，使用聚苯乙烯二乙烯基苯基质的填料同时作为棕榈酰四肽-7 纯化和转盐步骤的固定相，纯化、转盐两大步骤最终可获得高纯度的棕榈酰四肽-7成品，纯度大于98％，且收率高达70％。
以上结合附图对本发明的实施方式作了详细说明，但本发明不限于所描述的实施方式。对于本领域的技术人员而言，在不脱离本发明原理和精神的情况下，对这些实施方式进行多种变化、修改、替换和变型，仍落入本发明的保护范围内。
Claims (5)
1.一种纯化棕榈酰四肽-7的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将固相合成的棕榈酰四肽-7粗肽溶解于TFA/水溶液中，用滤膜过滤得粗液；
(2)取粗液，以聚苯乙烯二乙烯基苯基质的填料为固定相，配置TFA/水溶液为A相，TFA/乙腈溶液为B相，检测波长214nm进行线性梯度洗脱B％，收集目的峰馏份；
(3)取上述目的峰馏份减压浓缩至原体积的60％-70％，去除过多的乙腈溶液，为第二步转盐做准备；
(4)将浓缩后的样品进行第二步转盐，以聚苯乙烯二乙烯基苯基质的填料为固定相，配置20mM乙酸铵-水溶液为A相，色谱纯乙腈为B相，检测波长214nm进行线性梯度洗脱B％，收集目的峰馏份；
(5)将转盐收集的馏份进行旋蒸浓缩，冻干得到高纯度的棕榈酰四肽-7。
2.根据权利要求1所述的纯化棕榈酰四肽-7的方法，其特征在于：所述聚苯乙烯二乙烯基苯基质的填料为PS10-300反相聚合物。
3.根据权利要求1所述的纯化棕榈酰四肽-7的方法，其特征在于：所述固相合成的棕榈酰四肽-7粗肽纯度为86.3％，滤膜为0.45μm规格。
4.根据权利要求1所述的纯化棕榈酰四肽-7的方法，其特征在于：所述纯化条件为A相为0.05-0.5％TFA/水溶液，B相为0.05-0.5％TFA/乙腈溶液；洗脱梯度为10％B-80％B。
5.根据权利要求1所述的纯化棕榈酰四肽-7的方法，其特征在于：所述转盐条件为A相20mM醋酸铵-水溶液，B相纯色谱乙腈；洗脱梯度为20％B-70％B。
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Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN112830956A (zh) * | 2020-11-21 | 2021-05-25 | 山东美欣生物科技有限公司 | 棕榈酰四肽-7的液相合成方法 |
| CN113896764A (zh) * | 2021-12-02 | 2022-01-07 | 浙江湃肽生物有限公司深圳分公司 | 一种棕榈酰四肽-7粗品的纯化方法 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103275210A (zh) * | 2013-06-25 | 2013-09-04 | 珠海联邦制药股份有限公司 | 脂肪酸单酰化胰岛素的色谱纯化方法 |
| CN105037488A (zh) * | 2015-08-25 | 2015-11-11 | 南京肽业生物科技有限公司 | 一种美拉诺坦ii的纯化方法 |
| CN106916203A (zh) * | 2017-03-29 | 2017-07-04 | 佛山科学技术学院 | 一种棕榈酰化七肽、及其纯化方法和应用 |
| CN107056889A (zh) * | 2017-03-29 | 2017-08-18 | 佛山科学技术学院 | 棕榈酰化六肽、及其纯化方法和应用 |
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Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103275210A (zh) * | 2013-06-25 | 2013-09-04 | 珠海联邦制药股份有限公司 | 脂肪酸单酰化胰岛素的色谱纯化方法 |
| CN105037488A (zh) * | 2015-08-25 | 2015-11-11 | 南京肽业生物科技有限公司 | 一种美拉诺坦ii的纯化方法 |
| CN106916203A (zh) * | 2017-03-29 | 2017-07-04 | 佛山科学技术学院 | 一种棕榈酰化七肽、及其纯化方法和应用 |
| CN107056889A (zh) * | 2017-03-29 | 2017-08-18 | 佛山科学技术学院 | 棕榈酰化六肽、及其纯化方法和应用 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 李乾 等: "棕榈酰四肽-7的固相合成", 《生物化工》 * |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN112830956A (zh) * | 2020-11-21 | 2021-05-25 | 山东美欣生物科技有限公司 | 棕榈酰四肽-7的液相合成方法 |
| CN112830956B (zh) * | 2020-11-21 | 2022-08-02 | 山东美欣生物科技有限公司 | 棕榈酰四肽-7的液相合成方法 |
| CN113896764A (zh) * | 2021-12-02 | 2022-01-07 | 浙江湃肽生物有限公司深圳分公司 | 一种棕榈酰四肽-7粗品的纯化方法 |
| CN113896764B (zh) * | 2021-12-02 | 2022-04-15 | 浙江湃肽生物有限公司深圳分公司 | 一种棕榈酰四肽-7粗品的纯化方法 |
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