CN109718378B - Kpnb1抑制剂和蛋白降解途径抑制剂在制备抗肿瘤药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及KPNB1抑制剂和蛋白降解途径抑制剂在制备抗肿瘤药物中的应用。本发明将KPNB1抑制剂和蛋白降解途径抑制剂联合应用，对于治疗肿瘤、特别是胶质瘤具有极其优异的抑制效果。通过联合用药，可以达到杀伤更多肿瘤细胞的目的。

Description

KPNB1抑制剂和蛋白降解途径抑制剂在制备抗肿瘤药物中的 应用

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体地，涉及KPNB1抑制剂和蛋白降解途径抑制剂在制备抗肿瘤药物中的应用。

背景技术

肿瘤是威胁人类健康的疾病之一，至今缺少理想的治疗手段和药物，开发新的药物迫在眉睫。基因治疗作为一种新兴的方法，在不久的将来或许会成为肿瘤治疗的一个有效手段。

胶质瘤是一种发生于脑或脊髓的肿瘤，最常发生部位为脑，因其来源神经胶质细胞而被称为胶质瘤。胶质瘤占脑和中枢神经系统肿瘤的30％、占脑恶性脑肿瘤的80％，是人类健康的严重威胁。脑胶质瘤的治疗通常采用手术，放疗和化疗相结合。胶质瘤常发生于脑，手术需要开颅，手术时间长。胶质瘤和正常神经组织交错生长，边界不清，瘤组织不易清理干净，胶质瘤易复发。对于化疗，由于血脑屏障的存在，使普通的抗肿瘤药物疗效不佳。对于放疗，也存在定位困难和对神经损伤的担心。目前胶质瘤仍是医学界的一个难题。因此寻求新的治疗方法和药物迫在眉睫。

KPNB1的英文全称为karyopherinβ1(亲核素β1)，又称为importin β1(核质转运受体蛋白)，属于亲核素β1家族(Harel，A.，et al.，Importin beta:conducting a muchlarger cellular symphony.Mol Cell 2004Nov 5，16(3)，319-330)。KPNB1是一个核输入受体，可以帮助货物蛋白运(cargo proteins)送到细胞核中。KPNB1蛋白C端可以与亲核素α蛋白(Karyopherin-alpha proteins，KPNAs)的IBB结合域(importin beta bindingdomain)相互作用，中间区域可以与核孔蛋白FxFG重复序列相互作用，N端可以与RanGTP相互作用。KPNB1可以在接头蛋白KPNAs的帮助下与货物蛋白接触并将后者通过核孔复合体转运到细胞核中，也可以独自完成对货物蛋白的转运。随后，RanGTP与KPNB1结合，使得货物蛋白被释放。RanGTP在细胞核和胞浆中的浓度梯度确保了货物蛋白在胞浆中被KPNB1捕获，在细胞核中被KPNB1释放。除此以外，KPNB1还调节有丝分裂过程中纺锤体组装、染色体着丝粒与微管的连接以及核膜组装等过程。

高浓度的KPNB1会导致核输入效率和速率的提高。已知的许多KPNB1的货物蛋白在肿瘤发生过程中均起到重要作用，包括核心信号通路转导蛋白(如STAT3、NF-κB和Gli)、生长因子受体(如ErbB-2、EGFR和c-Met)、死亡受体(DR5)、肌动蛋白调节蛋白(CapG)以及转录因子(Snail)等。因为在癌症的进程中依赖如上蛋白的核转运，因此在一些癌症中KPNB1的表达常会上调。KPNB1的表达受EZH2-miR-30d轴和转录因子E2F的调控，而其介导的蛋白核转运会被p53诱导因子Ei24抑制。KPNB1敲低会通过有丝分裂期阻滞和诱导凋亡的作用导致癌细胞生长受抑制，而对非癌的正常细胞无明显毒性。

因KPNB1在肿瘤细胞中表达升高且参与肿瘤发生，KPNB1敲低会抑制肿瘤细胞生长，这使得KPNB1成为治疗癌症的候选靶点。然而抑制KPNB1对正常组织细胞的毒性仍需谨慎评估。目前，KPNB1抑制剂的缺乏是靶向KPNB1治疗癌症的主要限制因素。近来，一些小分子肽KPNA/KPNB抑制剂被用于研究核转运，然而这些抑制剂不具有细胞可透过性。伊维菌素(Ivermectin)是广谱的KPNA/KPNB抑制剂，但不能抑制KPNB1单独介导的核转运。Karyostatin 1A是最先发现的KPNB1抑制剂，然而其抗癌疗效与脱靶效应目前仍无定论。总的来说，抑制KPNB1介导的核转运的药物仍十分有限。

综上，本领域迫切需要寻求更为安全、有效的抗肿瘤治疗方案，以提升治疗效果。

发明内容

本发明的目的在于提供KPNB1抑制剂和蛋白降解途径抑制剂在制备抗肿瘤药物中的应用。

在本发明的第一方面，提供KPNB1抑制剂和蛋白降解途径抑制剂的用途，用于制备治疗胶质瘤的混合物、药物组合物或药盒。

在一个优选例中，所述的KPNB1抑制剂包括：特异性抑制KPNB1的小分子化合物；特异性干扰KPNB1基因表达的干扰分子；特异性敲除KPNB1基因的基因编辑试剂；或特异性与KPNB1基因编码的蛋白结合的抗体或配体。

在另一优选例中，所述的KPNB1抑制剂是特异性抑制KPNB1的小分子化合物，包括：Importazole(IPZ，PubChem CID:2949965，别名N-(1-phenylethyl)-2-pyrrolidin-1-ylquinazolin-4-amine)。

在另一优选例中，所述的蛋白降解途径抑制剂包括：特异性抑制蛋白降解途径的小分子化合物；特异性干扰蛋白降解途径基因表达的干扰分子；特异性敲除蛋白降解途径基因的基因编辑试剂；或特异性与蛋白降解途径基因编码的蛋白结合的抗体或配体。

在另一优选例中，所述的蛋白降解途径抑制剂是特异性抑制蛋白降解途径的小分子化合物，包括：溶酶体的抑制剂Bafilomycin A1、Chloroquine、蛋白酶体的抑制剂MG132。

在本发明的另一方面，提供一种药物组合物，所述的药物组合物中包括KPNB1抑制剂和蛋白降解途径抑制剂，以及药学上可接受的载体。

在一个优选例中，所述的KPNB1抑制剂是特异性抑制KPNB1的小分子化合物，其在组合物中的含量为0.5～100μM，较佳地为1～80μM；更佳地为2～50μM(如5，10，15，20，30，40，μM)。

在另一优选例中，所述的蛋白降解途径抑制剂是特异性抑制蛋白降解途径的小分子化合物，其在组合物中的含量为0.001～200μM，较佳地为0.002～100μM(如0.004，0.005，0.01，0.05，0.1，0.5，1，5，10，50，80μM)。

在另一优选例中，所述的特异性抑制蛋白降解途径的小分子化合物为Bafilomycin A1，所述的特异性抑制KPNB1的小分子化合物与特异性抑制蛋白降解途径的小分子化合物的按照摩尔比为：(400～8000):1；较佳地为(600～5000):1(如4000:1，3200:1，3000:1，2000:1，1000:1)；或

所述的特异性抑制蛋白降解途径的小分子化合物为Chloroquine，所述的特异性抑制KPNB1的小分子化合物与特异性抑制蛋白降解途径的小分子化合物的按照摩尔比为：(1～100):1；较佳地为(2～50):1(如3:1，5:1，8:1，10:1，15:1)。

在另一优选例中，所述的药物组合物的剂型是：注射剂，输液剂，片剂，胶囊剂，丸剂；较佳地为注射剂。

在本发明的另一方面，提供一种药盒，所述的药盒中，含有：

KPNB1抑制剂；以及

蛋白降解途径抑制剂；

所述的药盒用于治疗胶质瘤。

在一个优选例中，所述的药盒中，所述的KPNB1抑制剂包括：特异性抑制KPNB1的小分子化合物；特异性干扰KPNB1基因表达的干扰分子；特异性敲除KPNB1基因的基因编辑试剂；或特异性与KPNB1基因编码的蛋白结合的抗体或配体。

在另一优选例中，所述的KPNB1抑制剂是特异性抑制KPNB1的小分子化合物，包括：Importazole(IPZ，PubChem CID:2949965，别名N-(1-phenylethyl)-2-pyrrolidin-1-ylquinazolin-4-amine)。

在另一优选例中，所述的蛋白降解途径抑制剂包括：特异性抑制蛋白降解途径的小分子化合物；特异性干扰蛋白降解途径基因表达的干扰分子；特异性敲除蛋白降解途径基因的基因编辑试剂；或特异性与蛋白降解途径基因编码的蛋白结合的抗体或配体。

在另一优选例中，所述的蛋白降解途径抑制剂是特异性抑制蛋白降解途径的小分子化合物，包括：Bafilomycin A1、Chloroquine、蛋白酶体的抑制剂MG132。

在另一优选例中，所述的药盒中还含有：使用说明书，说明治疗胶质瘤的方法。

本发明的其它方面由于本文的公开内容，对本领域的技术人员而言是显而易见的。

附图说明

图1显示了联合KPNB1的抑制剂IPZ和Baf-A1用药降低U87细胞的存活。

图2显示了联合KPNB1的抑制剂IPZ和CQ用药降低U87细胞的存活。

图3显示了联合KPNB1的抑制剂IPZ和MG132用药降低U87细胞的存活。

图4显示了联合KPNB1的抑制剂IPZ和Baf-A1用药降低U251细胞的存活。

图5显示了联合KPNB1的抑制剂IPZ和CQ用药降低U251细胞的存活。

图6显示了联合KPNB1的抑制剂IPZ和MG132用药降低U251细胞的存活。

具体实施方式

本发明人经过长期而广泛的研究，将KPNB1抑制剂和蛋白降解途径抑制剂联合应用，对于治疗肿瘤、特别是胶质瘤具有极其优异的抑制效果。通过联合用药，可以达到杀伤更多肿瘤细胞的目的。

在把KPNB1的抑制剂IPZ用于抑制胶质瘤细胞系的实验中，本发明人发现IPZ的抗肿瘤效果有限。经过反复研究分析，本发明人发现IPZ的作用后果是导致一些核定位蛋白异常聚集在细胞质中，这些异常积累的蛋白可能被蛋白降解途径清除，从而无法导致肿瘤细胞逃避凋亡或坏死。因此本发明人联合使用kPNB1的抑制剂和蛋白降解途径的抑制剂(溶酶体的抑制剂Bafilomycin A1(Baf-A1)和chloroquine(CQ)；蛋白酶体的抑制剂MG132)进行实验，发现可显著增强抗肿瘤效果。

KPNB1抑制剂

所述的“KPNB1抑制剂”包括了KPNB1的活性或功能抑制剂，也包括了KPNB1的核酸抑制物、拮抗剂、抑制剂、阻滞剂、阻断剂等，只要它们能够下调KPNB1的表达水平、抑制KPNB1的活性或功能。它们可以是化合物、化学小分子、生物分子。所述的生物分子可以是核酸水平(包括DNA、RNA)的，也可以是蛋白水平的。

所述的KPNB1抑制剂可以是多种可降低KPNB1的活性、降低KPNB1的稳定性、下调KPNB1的表达、减少KPNB1有效作用时间的物质，这些物质均可用于本发明，作为对于下调KPNB1有用的物质，从而可用于缓解或治疗肿瘤。例如，所述的KPNB1抑制剂可以是：核酸抑制物、蛋白抑制剂、抗体、配体、化合物、核酸酶、核酸结合分子等，前提是其能够下调KPNB1的表达、抑制其活性或功能。所述的核酸抑制物包括：以KPNB1的编码基因或其转录本为抑制或沉默靶标的shRNA，反义核酸、小干扰RNA、微小RNA，或能表达或形成所述shRNA，反义核酸、小干扰RNA、微小RNA的构建物。

作为本发明的优选方式，所述的KPNB1抑制剂是特异性抑制KPNB1的小分子化合物，包括：IPZ(Importazole，PubChem CID:2949965，别名N-(1-phenylethyl)-2-pyrrolidin-1-ylquinazolin-4-amine)。经过大量的筛选比较，本发明人发现，该小分子化合物当与蛋白降解途径抑制剂联合应用时，效果特别理想。

在本发明中，所述的小分子化合物可以是纯净形式存在的化合物，或纯度大于85％(较佳地大于90％，例如大于95％，98％，99％)的化合物。

在得知其化学结构的情况下，所述的小分子化合物可通过化学合成的方式获得。本发明还包括化合物的前体，所述的“前体”指当用适当的方法服用后，该化合物的前体在病人体内进行代谢或化学反应而转变成具有活性的该化合物。

蛋白降解途径抑制剂

所述的“蛋白降解途径抑制剂”包括了蛋白降解途径相关基因或蛋白的活性或功能抑制剂，也包括了蛋白降解途径相关基因或蛋白的核酸抑制物、拮抗剂、抑制剂、阻滞剂、阻断剂等，只要它们能够下调蛋白降解途径的表达水平、抑制蛋白降解途径的活性或功能。它们可以是化合物、化学小分子、生物分子。所述的生物分子可以是核酸水平(包括DNA、RNA)的，也可以是蛋白水平的。

所述的蛋白降解途径抑制剂可以是多种可降低蛋白降解途径相关基因或蛋白的活性、降低蛋白降解途径的稳定性、下调蛋白降解途径相关基因或蛋白的表达、减少蛋白降解途径相关基因或蛋白有效作用时间的物质，这些物质均可用于本发明，作为对于下调蛋白降解途径有用的物质，从而可用于缓解或治疗肿瘤。例如，所述的蛋白降解途径抑制剂可以是：核酸抑制物、蛋白抑制剂、抗体、配体、化合物、核酸酶、核酸结合分子等，前提是其能够下调蛋白降解途径的表达、抑制其活性或功能。所述的核酸抑制物包括：以蛋白降解途径的编码基因或其转录本为抑制或沉默靶标的shRNA，反义核酸、小干扰RNA、微小RNA，或能表达或形成所述shRNA，反义核酸、小干扰RNA、微小RNA的构建物。

作为本发明的优选方式，所述的蛋白降解途径抑制剂是特异性抑制蛋白降解途径的小分子化合物，包括：Baf-A1、Chloroquine、MG132。经过大量的筛选比较，本发明人发现，该小分子化合物当与KPNB1抑制剂联合应用时，效果特别理想。

在本发明中，所述的小分子化合物可以是纯净形式存在的化合物，或纯度大于85％(较佳地大于90％，例如大于95％，98％，99％)的化合物。

在得知其化学结构的情况下，所述的小分子化合物可通过化学合成的方式获得。本发明还包括化合物的前体，所述的“前体”指当用适当的方法服用后，该化合物的前体在病人体内进行代谢或化学反应而转变成具有活性的该化合物。

KPNB1抑制剂和蛋白降解途径抑制剂的联合应用

本发明提供了一种联合用药的方法，包括利用靶向KPNB1的抑制剂联合靶向蛋白降解途径的抑制剂的用药方法。

本领域中，已经将KPNB1与肿瘤相关联，发现KPNB1敲低会通过有丝分裂期阻滞和诱导凋亡的作用导致癌细胞生长受抑制。然而抑制KPNB1介导的核转运的药物仍十分有限。蛋白降解途径的特异性抑制剂对于抑制部分肿瘤效果也已被本领域了解。但是，单一地抑制KPNB1或蛋白降解途径的实际效果仍然不够理想。而本发明人经过大量的研究筛选后发现，将KPNB1抑制剂和蛋白降解途径抑制剂联合应用，对于治疗肿瘤、特别是胶质瘤具有极其优异的抑制效果。

因此，本发明提供了KPNB1抑制剂和蛋白降解途径抑制剂的用途，用于制备治疗胶质瘤的混合物、药物组合物或药盒。

在给药时，可以先利用KPNB1抑制剂下调KPNB1的表达或活性，再以蛋白降解途径抑制剂加以抑制；或者也可同时进行。应理解，多种给药方式均被包含在本发明中。

组合物或混合物

本发明提供了一种小分子化合物的混合物，含有：特异性抑制KPNB1的小分子化合物和特异性抑制蛋白降解途径的小分子化合物作为活性组分。较佳地，所述的混合物中，所述的特异性抑制KPNB1的小分子化合物的浓度是0.5～100μM，较佳地为1～80μM；更佳地为2～50μM；所述的特异性抑制蛋白降解途径的小分子化合物的浓度是0.001～200μM，较佳地为0.002～100μM。

本发明提供了一种药物组合物，含有：(a)有效量的特异性抑制KPNB1的小分子化合物；(b)有效量的特异性抑制蛋白降解途径的小分子化合物；以及(c)药学上可接受的载体或赋形剂。

本发明中，术语“含有”表示各种成分可一起应用于本发明的混合物或组合物中。因此，术语“主要由...组成”和“由...组成”包含在术语“含有”中。

本发明中，“药学上可接受的”成分是适用于人和/或动物而无过度不良副反应(如毒性、刺激和变态反应)即有合理的效益/风险比的物质。

本发明中，“药学上可接受的载体”是用于将本发明的活性组分传送给动物或人的药学上可接受的溶剂、悬浮剂或赋形剂。“药学上可接受的载体”可以是液体或固体。

本发明的药物组合物或混合物可以通过常规方法制成任何常规的制剂形式。剂型可以是多种多样的，只要是能够使活性成分有效地到达哺乳动物体内的剂型都是可以的。比如可选自：注射剂，输液剂，片剂，胶囊剂，丸剂。其中活性组分可以存在于适宜的固体或液体的载体或稀释液中。

本发明的特异性抑制KPNB1的小分子化合物和特异性抑制蛋白降解途径的小分子化合物的混合物或药物组合物也可储存在适宜于注射或滴注的消毒器具中。通常，在本发明的药物组合物中，特异性抑制KPNB1的小分子化合物和特异性抑制蛋白降解途径的小分子化合物作为活性成分可以占药物组合物总重量的0.01-20％，其余可以为药学上可接受的载体。

所用的特异性抑制KPNB1的小分子化合物和特异性抑制蛋白降解途径的小分子化合物的有效剂量可随给药的模式和待治疗的疾病的严重程度而变化。必要的时候，特异性抑制KPNB1的小分子化合物和特异性抑制蛋白降解途径的小分子化合物还可与其它活性成分或药物联合给药。

药盒

本发明还提供了一种用于治疗肿瘤的药盒，所述的药盒中，含有：容器1，以及置于容器1中的KPNB1抑制剂；以及容器2以及置于容器2中的蛋白降解途径抑制剂。

当所述的KPNB1抑制剂和蛋白降解途径抑制剂均为小分子化合物时，所述的药盒中，也可含有所述的KPNB1抑制剂和蛋白降解途径抑制剂的混合物，其中KPNB1抑制剂和蛋白降解途径抑制剂的含量如前述。

此外，所述的药盒中还可以含有一些辅助用药的材料，例如注射用针管等。

此外，所述的药盒中还可含有使用说明书，说明治疗肿瘤的耐药性的方法。

应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。

候选药物或治疗剂

在本发明中，还提供了一种联合用药的方法，该方法利用靶向KPNB1的抑制剂，联合靶向蛋白降解途径的抑制剂的用药方法。

在本发明中，候选药物或治疗剂是指已知具有某种药理学活性或正在被检测的可能具有某种药理学活性的物质，包括但不限于核酸、蛋白、糖类、化学合成的小分子或大分子化合物、细胞等。候选药物或治疗剂的给药方式可以是口服、静脉注射、腹腔注射、皮下注射、椎管给药或直接脑内注射。

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件如J.萨姆布鲁克等编著，分子克隆实验指南，第三版，科学出版社，2002中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。

材料和方法

Chloroquine(CQ)购自Medchem Express，Monmouth Junction，USA。

Bafilomycin A1(Baf-A1)和MG132购自Selleck(中国，上海蓝木化工有限公司)。

Importazole(IPZ)购买自默克密理博(Merck Millipore)公司。

实施例1、MTT法检测KPNB1抑制剂IPZ与蛋白降解途径的抑制剂联合用药对胶质瘤细胞存活的影响

1、KPNB1抑制剂IPZ与蛋白降解途径的抑制剂Baf-A1联合应用

本实施例中，KPNB1抑制剂采用不同浓度(4uM、8uM、16uM)的IPZ，蛋白降解途径的抑制剂采用不同浓度的Baf-A1，浓度如图中所示。

胶质瘤细胞系U87和U251，在直径6cm培养皿中培养细胞至大约30％汇合度，加入不同浓度IPZ或不加(空白对照)，继续培养细胞4天。之后，用96孔板(美国Corning公司生产)培养，每孔约1500个细胞，每孔培养基150μl。

再按不同浓度的Baf-A1单独或组合处理细胞48小时后，每孔加入15μl浓度为5mg/ml的MTT(上海生工生物工程公司生产)继续孵育4小时。然后吸掉培养物，每孔加入150μlDMSO，在酶标仪(美国Bio-Rad公司生产，iMark168-1130型)的490nm波长下测定吸光度。

结果如图1(胶质瘤细胞U87)、图4(胶质瘤细胞U251)所示，表明给予IPZ的同时给予Baf-A1，可以在较低浓度下显著降低两种胶质瘤细胞U87和U251的存活率。

2、KPNB1抑制剂IPZ与蛋白降解途径的抑制剂CQ联合应用

本实施例中，KPNB1抑制剂采用不同浓度(4uM、8uM、16uM)的IPZ，蛋白降解途径的抑制剂采用不同浓度的CQ，浓度如图中所示。

胶质瘤细胞系U87和U251，在直径6cm培养皿中培养细胞至大约30％汇合度，加入不同浓度IPZ或不加(空白对照)，继续培养细胞4天。之后，用96孔板(美国Corning公司生产)培养，每孔约1500个细胞，每孔培养基150μl。

再按不同浓度的药物单独或组合处理细胞48小时后，每孔加入15μl浓度为5mg/ml的MTT(上海生工生物工程公司生产)继续孵育4小时。然后吸掉培养物，每孔加入150μlDMSO，在酶标仪(美国Bio-Rad公司生产，iMark168-1130型)的490nm波长下测定吸光度。

结果如图2(胶质瘤细胞U87)、图5(胶质瘤细胞U251)所示，表明给予IPZ的同时给予CQ，可以在较低浓度下显著降低两种胶质瘤细胞U87和U251的存活率。

3、KPNB1抑制剂IPZ与蛋白降解途径的抑制剂MG132联合应用

本实施例中，KPNB1抑制剂采用不同浓度(4uM、8uM、16uM)的IPZ，蛋白降解途径的抑制剂采用不同浓度的MG132，浓度如图中所示。

胶质瘤细胞系U87和U251，在直径6cm培养皿中培养细胞至大约30％汇合度，加入不同浓度IPZ或不加(空白对照)，继续培养细胞4天。之后，用96孔板(美国Corning公司生产)培养，每孔约1500个细胞，每孔培养基150μl。

再按不同浓度的药物单独或组合处理细胞48小时后，每孔加入15μl浓度为5mg/ml的MTT(上海生工生物工程公司生产)继续孵育4小时。然后吸掉培养物，每孔加入150μlDMSO，在酶标仪(美国Bio-Rad公司生产，iMark168-1130型)的490nm波长下测定吸光度。

结果如图3(胶质瘤细胞U87)、图6(胶质瘤细胞U251)所示，表明给予IPZ的同时给予MG132可以在较低浓度下显著降低两种胶质瘤细胞U87和U251的存活率。

上述结果说明，抑制KPNB1的同时抑制蛋白降解途径可达到较好的增强抑制肿瘤细胞增殖的效果。

以上实施方式只是较佳的实施方式中的一种，并非对本发明的限制。其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。未作特殊说明的实验试剂和方法，均指常规试剂和方法。

在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

Claims (21)

1.KPNB1抑制剂和蛋白降解途径抑制剂的用途，用于制备治疗胶质瘤的混合物、药物组合物或药盒；所述的KPNB1抑制剂是特异性抑制KPNB1的小分子化合物Importazole；所述的蛋白降解途径抑制剂选自：溶酶体的抑制剂Bafilomycin A1、Chloroquine，蛋白酶体的抑制剂MG132。

2.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的KPNB1抑制剂在组合物中的含量为0.5～100 μM。

3.如权利要求2所述的用途，其特征在于，所述的KPNB1抑制剂在组合物中的含量为1～80μM。

4.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的蛋白降解途径抑制剂在组合物中的含量为0.001～200 μM。

5.如权利要求4所述的用途，其特征在于，所述的蛋白降解途径抑制剂在组合物中的含量为0.002～100μM。

6.一种药物组合物，其特征在于，所述的药物组合物中包括KPNB1抑制剂和蛋白降解途径抑制剂，以及药学上可接受的载体；所述的KPNB1抑制剂是特异性抑制KPNB1的小分子化合物Importazole；所述的蛋白降解途径抑制剂选自：溶酶体的抑制剂Bafilomycin A1、Chloroquine，蛋白酶体的抑制剂MG132。

7.如权利要求6所述的药物组合物，其特征在于，所述的KPNB1抑制剂在组合物中的含量为0.5～100 μM。

8.如权利要求7所述的药物组合物，其特征在于，所述的KPNB1抑制剂在组合物中的含量为1～80μM。

9.如权利要求8所述的药物组合物，其特征在于，所述的KPNB1抑制剂在组合物中的含量为2～50μM。

10.如权利要求6所述的药物组合物，其特征在于，所述的蛋白降解途径抑制剂在组合物中的含量为0.001～200 μM。

11.如权利要求10所述的药物组合物，其特征在于，所述的蛋白降解途径抑制剂在组合物中的含量为0.002～100μM。

12.如权利要求10所述的药物组合物，其特征在于，所述的蛋白降解途径抑制剂为Bafilomycin A1，所述的特异性抑制KPNB1的小分子化合物与蛋白降解途径抑制剂的摩尔比为(400～8000):1；或

所述的蛋白降解途径抑制剂为Chloroquine，所述的特异性抑制KPNB1的小分子化合物与蛋白降解途径抑制剂的摩尔比为(1~100):1。

13.如权利要求12所述的药物组合物，其特征在于，所述的蛋白降解途径抑制剂为Bafilomycin A1，所述的特异性抑制KPNB1的小分子化合物与蛋白降解途径抑制剂的摩尔比为：(600～5000):1；或

所述的蛋白降解途径抑制剂为Chloroquine，所述的特异性抑制KPNB1的小分子化合物与蛋白降解途径抑制剂的摩尔比为(2~50):1。

14.如权利要求6所述的药物组合物，其特征在于，所述的药物组合物的剂型是：注射剂，片剂，胶囊剂，丸剂。

15.如权利要求14所述的药物组合物，其特征在于，所述的药物组合物的剂型为注射剂。

16.如权利要求15所述的药物组合物，其特征在于，所述的注射剂为输液剂。

17.一种药盒，其特征在于，所述的药盒中，含有：

特异性抑制 KPNB1的小分子化合物 Importazole；以及

蛋白降解途径抑制剂，选自：溶酶体的抑制剂Bafilomycin A1、Chloroquine，蛋白酶体的抑制剂MG132；

所述的药盒用于治疗胶质瘤。

18.如权利要求17所述的药盒，其特征在于，所述的药盒中，所述的蛋白降解途径抑制剂为Bafilomycin A1，所述的特异性抑制KPNB1的小分子化合物与蛋白降解途径抑制剂的摩尔比为(400～8000):1。

19.如权利要求18所述的药盒，其特征在于，所述的蛋白降解途径抑制剂为Bafilomycin A1，所述的特异性抑制KPNB1的小分子化合物与蛋白降解途径抑制剂的摩尔比为：(600～5000):1。

20.如权利要求17所述的药盒，其特征在于，所述的蛋白降解途径抑制剂为Chloroquine，所述的特异性抑制KPNB1的小分子化合物与蛋白降解途径抑制剂的摩尔比为(1~100):1。

21.如权利要求20所述的药盒，其特征在于，所述的蛋白降解途径抑制剂为Chloroquine，所述的特异性抑制KPNB1的小分子化合物与蛋白降解途径抑制剂的摩尔比为(2~50):1。

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