CN109689059A - Hbv衣壳组装抑制剂和核苷或核苷酸类似物的组合疗法 - Google Patents

Hbv衣壳组装抑制剂和核苷或核苷酸类似物的组合疗法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及组合物和其用于治疗乙型肝炎病毒感染的用途。特别地，本发明涉及组合疗法，其包括施用HBV衣壳组装抑制剂和核苷或核苷酸类似物，用于治疗或预防慢性乙型肝炎患者。

Description

HBV衣壳组装抑制剂和核苷或核苷酸类似物的组合疗法
本发明涉及用于治疗乙型肝炎病毒感染的组合物和方法。特别地，本发明涉及组合疗法，其包括施用HBV衣壳组装抑制剂和核苷或核苷酸类似物，用于治疗或预防乙型肝炎病毒感染。
发明领域
乙型肝炎病毒(HBV)的慢性感染是世界范围内严重的公共健康问题，全球有超过2.4亿人长期感染。HBV属于嗜肝DNA病毒科(Hepadnaviridae)。进入肝细胞后，其病毒基因组被递送到细胞核，在此通过部分双链病毒基因组的DNA修复，形成共价闭合的环状DNA(cccDNA)，cccDNA用作病毒RNA转录的模板。病毒前基因组RNA与其它两种病毒组分衣壳蛋白和聚合酶相互作用，形成衣壳颗粒，在此发生病毒DNA复制。HBV具有二十面体核心，其包含240个衣壳(或核心)蛋白质的拷贝。衣壳蛋白的主要生物学功能是用作结构蛋白质来使前基因组RNA壳体化，并且在细胞质中形成未成熟的衣壳颗粒。此步骤是病毒DNA复制的先决条件。当通过病毒前基因组RNA的逆转录形成近全长的松环DNA时，未成熟的衣壳变成成熟的衣壳。壳体化的基因组的大多数拷贝与细胞脂质和病毒包膜蛋白(S、M和L)有效结合，用于病毒装配和分泌。然而，也产生非感染性颗粒，其数量大大超过感染性病毒体。这些空的包膜颗粒被称为亚病毒颗粒(SVP)。S、M和L包膜蛋白由含有三个不同起始密码子的单个ORF(开放阅读框)表达。所有三种蛋白质在其C-末端共享226aa序列，S-结构域。S-结构域含有HBsAg表位(Lambert,C.&R.Prange.Virol J,2007,4,45)。
许多观察结果表明，几种HBV病毒蛋白可以通过干扰病毒识别信号系统来抵消初始宿主细胞反应。其中，HBV空的亚病毒颗粒的过量分泌可能参与维持在慢性感染患者(CHB)中观察到的免疫耐受状态。HBsAg和其它病毒抗原的持续暴露可导致HBV特异性T细胞缺失或进行性功能损伤(Kondo等人，Journal of Immunology 1993,150,4659-4671；Kondo等人，Journal of Medical Virology 2004,74,425-433；Fisicaro等人，Gastroenterology,2010,138,682-93)。此外据报道，HBsAg通过直接相互作用抑制免疫细胞例如单核细胞、树突状细胞(DC)和自然杀伤(NK)细胞的功能(Op den Brouw等人，Immunology,2009b,126,280-9；Woltman等人，PLoS One,2011,6,e15324；Shi等人，J ViralHepat.2012,19,e26-33；Kondo等人，ISRN Gasteroenterology,2013,Article ID935295)。
已经充分研究了HBV衣壳蛋白在HBV复制中起重要作用。在基于组织培养的筛选中发现杂芳基二氢嘧啶或HAP，包括命名为Bay 41-4109、Bay 38-7690和Bay 39-5493的化合物(Deres K.等人，Science 2003,893)。这些HAP类似物用作合成变构激活剂，并且能够诱导导致核心蛋白质降解的异常衣壳形成。HAP类似物还将核心蛋白从预装配的衣壳重新装配成非衣壳聚合物，推测是通过HAP与衣壳“呼吸”(单个亚基间键的瞬时断裂)期间释放的二聚体的相互作用。将Bay 41-4109施用于HBV感染的转基因小鼠模型或人源化小鼠模型，并且证明了其具有减少HBV DNA的体内功效(Deres K.等人，Science 2003,893；BrezillonN.等人，PLoS ONE 2011,e25096)。此外，在Roche专利WO 2013/144129、WO 2014/037480、WO2014/184328和WO 2015/132276中公开了更多具有潜在不同机理的HAP类似物。
目前的HBV疗法包括核苷或核苷酸类似物(例如拉米夫定(Lamivudine)、阿德福韦(Adefovir)、替诺福韦(Tenofovir)、替比夫定(Telbivudine)和恩替卡韦(Entecavir))，其通过抑制HBV聚合酶逆转录活性靶向病毒聚合酶。这导致病毒载量降低和HBV后代产生的消除，但cccDNA保持完整，并且所有病毒蛋白和RNA的合成以及HBsAg水平在感染的肝细胞中不受影响。即使长期治疗，核苷或核苷酸类似物已证明HBsAg清除率非常低，与天然观察到的相当(Janssen等人，Lancet,2005,365,123-9；Marcellin等人，N.Engl.J.Med.,2004,351,1206-17；Buster等人，Hepatology,2007,46,388-94)。
HBsAg是CHB预后和治疗响应的生物标志物。目前，HBV感染临床治愈的标准是HBsAg的消失和/或血清转换。尽管核苷或核苷酸类似物可用于HBV患者，但大多数(约90％或更多)治疗的患者未能实现这一目标。乙型肝炎病毒(HBV)感染仍然是全世界的一个主要健康问题，估计有2.4亿慢性携带者具有肝硬化和肝细胞癌的风险较高。因此，具有改善的成功率的诱导HBsAg消失，和/或HBeAg消失，和/或HBV-DNA减少，和/或HBV清除，和/或血清转化，和/或ALT正常化，和/或促进抗HB的产生以解决乙型肝炎病毒(HBV)感染的治疗肯定存在未满足的医疗需求。
发明概述
本发明涉及包含在药学上可接受的载体中的HBV衣壳组装抑制剂和核苷或核苷酸类似物的药物组合物，其用于治疗或预防HBV感染。
本文的“HBV衣壳组装抑制剂”是式(I)或(II)的化合物，或专利WO2013/144129、WO2014/037480、WO 2014/184328和WO 2015/132276中公开的任何一种化合物；特别地，本文的“HBV衣壳组装抑制剂”是(S)-4-[(R)-6-(2-氯-4-氟-苯基)-5-甲氧基羰基-2-噻唑-2-基-3,6-二氢-嘧啶-4-基甲基]-吗啉-3-甲酸；3-[(8aS)-7-[[(4S)-5-乙氧基羰基-4-(3-氟-2-甲基-苯基)-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-2,2-二甲基-丙酸；3-[(8aS)-7-[[(4R)-4-(2-氯-3-氟-苯基)-5-乙氧基羰基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-2,2-二甲基-丙酸；4-[(8aS)-7-[[(4R)-4-(2-氯-4-氟-苯基)-5-甲氧基羰基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-3,3-二甲基-丁酸；或3-[(8aS)-7-[[(4R)-4-(2-氯-4-氟-苯基)-5-甲氧基羰基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-2,2-二甲基-丙酸；或其药学上可接受的盐或对映异构体或非对映异构体。
在一个实施方案中，“核苷或核苷酸类似物”是本领域技术人员已知的任何核苷或核苷酸类似物。在进一步的实施方案中，“核苷或核苷酸类似物”是恩替卡韦、拉米夫定、阿德福韦二匹伏酯(Adefovir dipivoxil)、替比夫定、克来夫定(Clevudine)、替诺福韦二吡呋酯(Tenofovir disoproxil)或富马酸替诺福韦二吡呋酯(Tenofovir disoproxilfumarate)。特别地，“核苷或核苷酸类似物”是恩替卡韦。
附图简述
图1：化合物1和化合物6的成对棋盘组合的FIC的等效线图(在50％效果水平下)。对角线通道连接点(0，1)和(1，0)表示相加性(CI＝1)。该通道下方的数据点显示协同作用，上方数据点显示拮抗作用。显示来自3个独立试验的平均值。
图2：化合物2和化合物6的成对棋盘组合的FIC的等效线图(在50％效果水平下)。对角线通道连接点(0，1)和(1，0)表示相加性(CI＝1)。该通道下方的数据点显示协同作用，上方数据点显示拮抗作用。显示来自3个独立试验的平均值。
图3：化合物3和化合物6的成对棋盘组合的FIC的等效线图(在50％效果水平下)。对角线通道连接点(0，1)和(1，0)表示相加性(CI＝1)。该通道下方的数据点显示协同作用，上方数据点显示拮抗作用。显示来自3个独立试验的平均值。
图4：化合物4和化合物6的成对棋盘组合的FIC的等效线图(在50％效果水平下)。对角线通道连接点(0，1)和(1，0)表示相加性(CI＝1)。该通道下方的数据点显示协同作用，上方数据点显示拮抗作用。显示来自3个独立试验的平均值。
图5：化合物5和化合物6的成对棋盘组合的FIC的等效线图(在50％效果水平下)。对角线通道连接点(0，1)和(1，0)表示相加性(CI＝1)。该通道下方的数据点显示协同作用，上方数据点显示拮抗作用。显示来自3个独立试验的平均值。
发明详述
定义
除非另有定义，本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域的普通技术人员通常理解的相同的含义。
如本文所用，术语“C1-6烷基”是指1至6个碳原子的一价直链或支链饱和烃基。在特别的实施方案中，C1-6烷基具有1至6个碳原子，在更特别的实施方案中，具有1至4个碳原子。C1-6烷基的实例包括甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基或叔丁基。
如本文所用，术语“卤代”或“卤素”在本文中可互换使用，指氟、氯、溴或碘。卤素特别是氟、氯或溴。
如本文所用，术语“C1-6烷氧基”是指C1-6烷基-O-的基团，其中“C1-6烷基”如上所定义；例如甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、2-丁氧基、叔丁氧基等。特别的“C1-6烷氧基”是甲氧基和乙氧基，并且更特别是甲氧基。
如本文所用，术语“C3-7环烷基”是指含有3至7个碳原子、特别是3至6个碳原子的饱和碳环，例如环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基等。特别的“C3-7环烷基”基团是环丙基、环戊基和环己基。
如本文所用，术语“CxH2x”单独或组合表示含有1至6个、特别是1至4个碳原子的饱和直链或支链烷基。
如本文所用，术语“非对映异构体”是指具有两个或更多个手性中心并且其分子不是彼此的镜像的立体异构体。非对映异构体具有不同的物理性质，例如熔点、沸点、光谱性质、活性和反应性。
如本文所用，术语“对映异构体”是指化合物的两种立体异构体，它们是彼此不可重叠的镜像。
如本文所用，术语“药学上可接受的盐”是指不是生物学或其它方面不希望的盐。药学上可接受的盐包括酸和碱加成盐。
如本文所用，术语“前药”是指化合物的形式或衍生物，其在个体施用后在体内例如通过体液或酶被代谢成为化合物的药理学活性形式，以产生期望的药理作用。前药在例如Organic Chemistry of Drug Design and Drug Action，Richard B.Silverman,Academic Press,San Diego,2004，第8章Prodrugs and Drug Delivery Systems,第497-558页中描述。
术语“药学上可接受的酸加成盐”是指与无机酸例如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、碳酸、磷酸和选自脂肪族、脂环族、芳族、芳脂族、杂环、碳环和磺酸类有机酸的有机酸例如甲酸、乙酸、丙酸、乙醇酸、葡糖酸、乳酸、丙酮酸、草酸、苹果酸、马来酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、门冬氨酸、抗坏血酸、谷氨酸、邻氨基苯甲酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、扑酸、苯乙酸、甲磺酸、乙磺酸、对甲苯磺酸和水杨酸形成的那些药学上可接受的盐。
术语“药学上可接受的碱加成盐”是指与有机或无机碱形成的那些药学上可接受的盐。可接受的无机碱的实例包括钠、钾、铵、钙、镁、铁、锌、铜、锰和铝盐。衍生自药学上可接受的有机无毒碱的盐包括伯胺、仲胺和叔胺、取代的胺包括天然存在的取代的胺、环胺和碱性离子交换树脂、例如异丙胺、三甲胺、二乙胺、三乙胺、三丙胺、乙醇胺、2-二乙基氨基乙醇、trimethamine、二环己胺、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、咖啡因、普鲁卡因、海巴明、胆碱、甜菜碱、乙二胺、葡糖胺、甲基葡糖胺、可可碱、嘌呤、哌嗪、哌啶、N-乙基哌啶和聚胺树脂的盐。
如本文所用，“乙型肝炎病毒”或“HBV”是指具有大约3,200个碱基对的小双链DNA基因组和肝细胞趋向性的嗜肝DNA病毒科的成员。“HBV”包括感染多种哺乳动物(例如人，非人灵长类动物等)和禽类(鸭等)宿主中的任何一种的乙型肝炎病毒。“HBV”包括任何已知的HBV基因型，例如血清型A、B、C、D、E、F和G；任何HBV血清型或HBV亚型；任何HBV分离株；HBV变体，例如HBeAg阴性变体、耐药性HBV变体(例如拉米夫定耐药性变体；阿德福韦耐药性突变型；替诺福韦耐药性突变型；恩替卡韦耐药性突变型等)；等等。
如本文所用，“HBV DNA”是指HBV的DNA材料。
如本文所用，“HBsAg”是指乙型肝炎表面抗原。
如本文所用，“HBeAg”是指乙型肝炎e抗原。
如本文所用，“核苷类似物”是指含有核碱基类似物和糖的核苷以及含有核碱基类似物、糖和一至三个磷酸基团的核苷酸。核苷类似物药物包括但不限于脱氧腺苷类似物(去羟肌苷(Didanosine)和阿糖腺苷(Vidarabine))，腺苷类似物(BCX4430)，脱氧胞苷类似物(阿糖胞苷(Cytarabine)、恩曲他滨(Emtricitabine)、拉米夫定和扎西他滨(Zalcitabine))，鸟苷和脱氧鸟苷类似物(阿巴卡韦(Abacavir)、阿昔洛韦(Aciclovir)和恩替卡韦)，胸苷和脱氧胸苷类似物(司他夫定(Stavudine)、替比夫定和齐多夫定(Zidovudine))和脱氧尿苷类似物(碘苷(Idoxuridine)和曲氟尿苷(Trifluridine))。“核苷酸类似物”药物包括阿德福韦二匹伏酯(ADV)和富马酸替诺福韦二吡呋酯(TDF)。
术语“核碱基”是指当核碱基掺入聚合物结构中时能够与互补核碱基或核碱基类似物(即核碱基的衍生物)配对形成Watson-Crick型氢键和堆积相互作用的任何含氮杂环部分。“杂环”是指具有环系的分子，其中一个或多个环原子是杂原子，例如氮、氧或硫(即不是碳)。
术语“治疗有效量”是指本发明化合物或分子的量，当施用于个体时，(i)治疗或预防特定疾病、病症或障碍，(ii)减弱、改善或消除特定疾病、病症或障碍的一种或多种症状，或(iii)预防或延迟本文所述的特定疾病、病症或障碍的一种或多种症状的发作。治疗有效量将取决于化合物、所治疗的疾病状态、所治疗疾病的严重程度、个体的年龄和相对健康状况、施用途径和形式、主治医学或兽医从业者的判断以及其它因素而不同。本发明涉及包含在药学上可接受的载体中的HBV衣壳组装抑制剂和核苷或核苷酸类似物的药物组合物。
含有一个或几个手性中心的通式(I)和(II)化合物可以作为外消旋体、非对映异构体混合物或旋光活性单一异构体存在。特别地，可以通过结晶分离的非对映异构体盐是通过与旋光活性酸例如D-或L-酒石酸、扁桃酸、苹果酸、乳酸或樟脑磺酸反应而由外消旋混合物形成。
本发明涉及包含在药学上可接受的载体中的HBV衣壳组装抑制剂和核苷或核苷酸类似物的药物组合物。
在本发明的一个实施方案中，HBV衣壳组装抑制剂是式(I)化合物：
其中
R1是C1-6烷基或三氟甲基-CxH2x-，其中x是1、2、3、4、5或6；
R2和R3之一是苯基，其被C1-6烷基、氰基或卤素取代一次或两次或三次；并且另一个是氢或氘；
R4是苯基、噻唑基、唑基、咪唑基、噻吩基或吡啶基，其是未取代的或者被C1-6烷基、C1-6烷基硫烷基、卤素或环烷基取代，其中C1-6烷基可以进一步任选被卤素取代；
A是 其是未取代的或者被选自C1-6烷基、氘和卤素的基团取代；
或其药学上可接受的盐或对映异构体或非对映异构体。
更特别地，本发明的HBV衣壳组装抑制剂涉及(S)-4-[(R)-6-(2-氯-4-氟-苯基)-5-甲氧基羰基-2-噻唑-2-基-3,6-二氢-嘧啶-4-基甲基]-吗啉-3-甲酸；或在专利WO2014/037480中公开的任何其它化合物；或其药学上可接受的盐或对映异构体或非对映异构体。式(I)化合物和化合物1可以通过WO2014/037480中描述的合成方法获得。
在本发明的另一个实施方案中，HBV衣壳组装抑制剂是式(II)化合物：
其中
R5是氢、卤素或C1-6烷基；
R6是氢或卤素；
R7是氢或卤素；
R8是C1-6烷基；
R9是氢、羟基C1-6烷基、氨基羰基、C1-6烷氧基羰基或羧基；
R10是氢、C1-6烷氧基羰基或羧基-CmH2m-；
X是羰基或磺酰基；
Y是-CH2-、-O-或-N(R11)-，
其中R11是氢、C1-6烷基、卤代C1-6烷基、C3-7环烷基-CmH2m-、C1-6烷氧基羰基-CmH2m-、-CtH2t-COOH、-卤代C1-6烷基-COOH、-(C1-6烷氧基)C1-6烷基-COOH、-C1-6烷基-O-C1-6烷基-COOH、-C3-7环烷基-CmH2m-COOH、-CmH2m-C3-7环烷基-COOH、羟基-CtH2t-、羧基螺[3.3]庚基或羧基苯基-CmH2m-、羧基吡啶基-CmH2m-；
W是-CH2-、-C(C1-6烷基)2-、-O-或羰基；
n是0或1；
m是0-7；
t是1-7；
或其药学上可接受的盐或对映异构体或非对映异构体。
更特别地，本发明的HBV衣壳组装抑制剂涉及3-[(8aS)-7-[[(4S)-5-乙氧基羰基-4-(3-氟-2-甲基-苯基)-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-2,2-二甲基-丙酸；3-[(8aS)-7-[[(4R)-4-(2-氯-3-氟-苯基)-5-乙氧基羰基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-2,2-二甲基-丙酸；4-[(8aS)-7-[[(4R)-4-(2-氯-4-氟-苯基)-5-甲氧基羰基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-3,3-二甲基-丁酸；或3-[(8aS)-7-[[(4R)-4-(2-氯-4-氟-苯基)-5-甲氧基羰基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-2,2-二甲基-丙酸；或在专利WO 2015/132276中公开的任何其它化合物；或其药学上可接受的盐或对映异构体或非对映异构体。式(II)化合物和化合物2、3、4和5可以通过WO 2015/132276中描述的合成方法获得。
在本发明的另一个实施方案中，与核苷或核苷酸组合使用的HBV衣壳组装抑制剂是选自专利WO 2008154817、WO 2008154819、WO 2014029193、WO 2015074546、CN103664897和CN 103664925的任何化合物。
在本发明的一个实施方案中，合适的核苷或核苷酸类似物是恩替卡韦、拉米夫定、阿德福韦二匹伏酯、替比夫定、克来夫定、替诺福韦二吡呋酯或富马酸替诺福韦二吡呋酯。特别的核苷类似物是恩替卡韦。
在本发明的一个实施方案中，药物组合物包含HBV衣壳组装抑制剂和核苷或核苷酸类似物，其中HBV衣壳组装抑制剂和核苷或核苷酸类似物独立地选自表1。
表1.HBV衣壳组装抑制剂和核苷或核苷酸类似物的列表
本文的核苷/核苷酸类似物还选自拉米夫定、阿德福韦二匹伏酯、替比夫定、克来夫定、替诺福韦二吡呋酯和富马酸替诺福韦二吡呋酯。
更特别地，本发明涉及包含在药学上可接受的载体中的HBV衣壳组装抑制剂和核苷或核苷酸类似物的药物组合物，选自以下组合中的任何一种：
化合物1和恩替卡韦；化合物2和恩替卡韦；
化合物3和恩替卡韦；化合物4和恩替卡韦；
化合物5和恩替卡韦；化合物1和拉米夫定；
化合物2和拉米夫定；化合物3和拉米夫定；
化合物4和拉米夫定；化合物5和拉米夫定；
化合物1和阿德福韦二匹伏酯；化合物2和阿德福韦二匹伏酯；
化合物3和阿德福韦二匹伏酯；化合物4和阿德福韦二匹伏酯；
化合物5和阿德福韦二匹伏酯；化合物1和替比夫定；
化合物2和替比夫定；化合物3和替比夫定；
化合物4和替比夫定；化合物5和替比夫定；
化合物1和克来夫定；化合物2和克来夫定；
化合物3和克来夫定；化合物4和克来夫定；
化合物5和克来夫定；化合物1和替诺福韦二吡呋酯；
化合物2和替诺福韦二吡呋酯；化合物3和替诺福韦二吡呋酯；
化合物4和替诺福韦二吡呋酯；化合物5和替诺福韦二吡呋酯；
化合物1和富马酸替诺福韦二吡呋酯；
化合物2和富马酸替诺福韦二吡呋酯；
化合物3和富马酸替诺福韦二吡呋酯；
化合物4和富马酸替诺福韦二吡呋酯；和
化合物5和富马酸替诺福韦二吡呋酯。
上述组合的化合物1至5中的任何一种可以用其相应的药学上可接受的盐、对映异构体或非对映异构体代替，这是本发明的另一方面。
更特别地，本发明涉及由以下组成的药物组合物：
(S)-4-[(R)-6-(2-氯-4-氟-苯基)-5-甲氧基羰基-2-噻唑-2-基-3,6-二氢-嘧啶-4-基甲基]-吗啉-3-甲酸和恩替卡韦；
3-[(8aS)-7-[[(4S)-5-乙氧基羰基-4-(3-氟-2-甲基-苯基)-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-2,2-二甲基-丙酸和恩替卡韦；
3-[(8aS)-7-[[(4R)-4-(2-氯-3-氟-苯基)-5-乙氧基羰基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-2,2-二甲基-丙酸和恩替卡韦；
4-[(8aS)-7-[[(4R)-4-(2-氯-4-氟-苯基)-5-甲氧基羰基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-3,3-二甲基-丁酸和恩替卡韦；
3-[(8aS)-7-[[(4R)-4-(2-氯-4-氟-苯基)-5-甲氧基羰基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-2,2-二甲基-丙酸和恩替卡韦；
(S)-4-[(R)-6-(2-氯-4-氟-苯基)-5-甲氧基羰基-2-噻唑-2-基-3,6-二氢-嘧啶-4-基甲基]-吗啉-3-甲酸和拉米夫定；
3-[(8aS)-7-[[(4S)-5-乙氧基羰基-4-(3-氟-2-甲基-苯基)-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-2,2-二甲基-丙酸和拉米夫定；
3-[(8aS)-7-[[(4R)-4-(2-氯-3-氟-苯基)-5-乙氧基羰基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-2,2-二甲基-丙酸和拉米夫定；
4-[(8aS)-7-[[(4R)-4-(2-氯-4-氟-苯基)-5-甲氧基羰基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-3,3-二甲基-丁酸和拉米夫定；
3-[(8aS)-7-[[(4R)-4-(2-氯-4-氟-苯基)-5-甲氧基羰基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-2,2-二甲基-丙酸和拉米夫定；
(S)-4-[(R)-6-(2-氯-4-氟-苯基)-5-甲氧基羰基-2-噻唑-2-基-3,6-二氢-嘧啶-4-基甲基]-吗啉-3-甲酸和阿德福韦二匹伏酯；
3-[(8aS)-7-[[(4S)-5-乙氧基羰基-4-(3-氟-2-甲基-苯基)-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-2,2-二甲基-丙酸和阿德福韦二匹伏酯；
3-[(8aS)-7-[[(4R)-4-(2-氯-3-氟-苯基)-5-乙氧基羰基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-2,2-二甲基-丙酸和阿德福韦二匹伏酯；
4-[(8aS)-7-[[(4R)-4-(2-氯-4-氟-苯基)-5-甲氧基羰基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-3,3-二甲基-丁酸和阿德福韦二匹伏酯；
3-[(8aS)-7-[[(4R)-4-(2-氯-4-氟-苯基)-5-甲氧基羰基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-2,2-二甲基-丙酸和阿德福韦二匹伏酯；
(S)-4-[(R)-6-(2-氯-4-氟-苯基)-5-甲氧基羰基-2-噻唑-2-基-3,6-二氢-嘧啶-4-基甲基]-吗啉-3-甲酸和替比夫定；
3-[(8aS)-7-[[(4S)-5-乙氧基羰基-4-(3-氟-2-甲基-苯基)-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-2,2-二甲基-丙酸和替比夫定；
3-[(8aS)-7-[[(4R)-4-(2-氯-3-氟-苯基)-5-乙氧基羰基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-2,2-二甲基-丙酸和替比夫定；
4-[(8aS)-7-[[(4R)-4-(2-氯-4-氟-苯基)-5-甲氧基羰基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-3,3-二甲基-丁酸和替比夫定；
3-[(8aS)-7-[[(4R)-4-(2-氯-4-氟-苯基)-5-甲氧基羰基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-2,2-二甲基-丙酸和替比夫定；
(S)-4-[(R)-6-(2-氯-4-氟-苯基)-5-甲氧基羰基-2-噻唑-2-基-3,6-二氢-嘧啶-4-基甲基]-吗啉-3-甲酸和克来夫定；
3-[(8aS)-7-[[(4S)-5-乙氧基羰基-4-(3-氟-2-甲基-苯基)-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-2,2-二甲基-丙酸和克来夫定；
3-[(8aS)-7-[[(4R)-4-(2-氯-3-氟-苯基)-5-乙氧基羰基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-2,2-二甲基-丙酸和克来夫定；
4-[(8aS)-7-[[(4R)-4-(2-氯-4-氟-苯基)-5-甲氧基羰基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-3,3-二甲基-丁酸和克来夫定；
3-[(8aS)-7-[[(4R)-4-(2-氯-4-氟-苯基)-5-甲氧基羰基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-2,2-二甲基-丙酸和克来夫定；
(S)-4-[(R)-6-(2-氯-4-氟-苯基)-5-甲氧基羰基-2-噻唑-2-基-3,6-二氢-嘧啶-4-基甲基]-吗啉-3-甲酸和替诺福韦二吡呋酯；
3-[(8aS)-7-[[(4S)-5-乙氧基羰基-4-(3-氟-2-甲基-苯基)-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-2,2-二甲基-丙酸和替诺福韦二吡呋酯；
3-[(8aS)-7-[[(4R)-4-(2-氯-3-氟-苯基)-5-乙氧基羰基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-2,2-二甲基-丙酸和替诺福韦二吡呋酯；
4-[(8aS)-7-[[(4R)-4-(2-氯-4-氟-苯基)-5-甲氧基羰基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-3,3-二甲基-丁酸和替诺福韦二吡呋酯；
3-[(8aS)-7-[[(4R)-4-(2-氯-4-氟-苯基)-5-甲氧基羰基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-2,2-二甲基-丙酸和替诺福韦二吡呋酯；
(S)-4-[(R)-6-(2-氯-4-氟-苯基)-5-甲氧基羰基-2-噻唑-2-基-3,6-二氢-嘧啶-4-基甲基]-吗啉-3-甲酸和富马酸替诺福韦二吡呋酯；
3-[(8aS)-7-[[(4S)-5-乙氧基羰基-4-(3-氟-2-甲基-苯基)-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-2,2-二甲基-丙酸和富马酸替诺福韦二吡呋酯；
3-[(8aS)-7-[[(4R)-4-(2-氯-3-氟-苯基)-5-乙氧基羰基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-2,2-二甲基-丙酸和富马酸替诺福韦二吡呋酯；
4-[(8aS)-7-[[(4R)-4-(2-氯-4-氟-苯基)-5-甲氧基羰基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-3,3-二甲基-丁酸和富马酸替诺福韦二吡呋酯；或
3-[(8aS)-7-[[(4R)-4-(2-氯-4-氟-苯基)-5-甲氧基羰基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-2,2-二甲基-丙酸和富马酸替诺福韦二吡呋酯；
在药学上可接受的载体中。
在本发明的一个实施方案中，由以下组成的药物组合物：
(S)-4-[(R)-6-(2-氯-4-氟-苯基)-5-甲氧基羰基-2-噻唑-2-基-3,6-二氢-嘧啶-4-基甲基]-吗啉-3-甲酸和恩替卡韦；
3-[(8aS)-7-[[(4S)-5-乙氧基羰基-4-(3-氟-2-甲基-苯基)-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-2,2-二甲基-丙酸和恩替卡韦；
3-[(8aS)-7-[[(4R)-4-(2-氯-3-氟-苯基)-5-乙氧基羰基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-2,2-二甲基-丙酸和恩替卡韦；
4-[(8aS)-7-[[(4R)-4-(2-氯-4-氟-苯基)-5-甲氧基羰基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-3,3-二甲基-丁酸和恩替卡韦；或
3-[(8aS)-7-[[(4R)-4-(2-氯-4-氟-苯基)-5-甲氧基羰基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-2,2-二甲基-丙酸和恩替卡韦；
在药学上可接受的载体中。
HBV衣壳组装抑制剂和/或核苷或核苷酸类似物的通常剂量可以在多种范围内，并且当在动物模型中由体外响应指示时，可以减少高达约一个数量级的浓度或量。因此，实际剂量将取决于医师的判断、患者的状况以及基于适当动物模型的体外响应的治疗方法的有效性。
本发明的另一个实施方案涉及用于制备用于治疗或预防乙型肝炎病毒感染的药物的方法，其特征在于在所述药物中使用HBV衣壳组装抑制剂和核苷或核苷酸类似物。
本发明的进一步的实施方案涉及用于制备用于治疗或预防乙型肝炎病毒感染的药物的方法，其特征在于将HBV衣壳组装抑制剂和核苷或核苷酸类似物在相同的制剂中或不同的制剂中共施用。
用于本发明的目的，“共施用”是指HBV衣壳组装抑制剂和核苷或核苷酸类似物作为两种活性剂分开或一起的任何施用，其中将两种活性剂，作为旨在获得组合疗法的益处的、适合的给药方案的一部分，来施用。因此，这两种活性剂可以作为相同药物组合物的一部分或者在分开的各药物组合物中施用。此外，这两种活性剂可以同时或依次施用。
HBV衣壳组装抑制剂和核苷或核苷酸类似物可以与多种药学上可接受的惰性载体一起以片剂、胶囊、锭剂、口含片、硬糖、散剂、喷雾剂、乳膏剂、油膏剂、栓剂、胶冻剂、凝胶剂、糊剂、洗剂、软膏剂、酏剂、糖浆剂等形式施用。所述剂型的施用可以以单次或多次剂量进行。载体包括填充剂的固体稀释剂、无菌水性介质和多种无毒有机溶剂。所述剂型的施用可以通过但不限于口服施用、非肠道施用、兽医施用来进行。
本发明的进一步的实施方案涉及用于制备用于治疗或预防乙型肝炎病毒感染的药物的方法，其特征在于HBV衣壳组装抑制剂和核苷或核苷酸类似物旨在通过相同途径或不同途径施用于个体。
本发明的进一步的实施方案涉及用于制备用于治疗或预防乙型肝炎病毒感染的药物的方法，其特征在于HBV衣壳组装抑制剂和核苷或核苷酸类似物旨在通过非肠道或口服施用施用于个体。
本发明的进一步的实施方案涉及用于制备用于治疗或预防乙型肝炎病毒感染的药物的方法，其特征在于HBV衣壳组装抑制剂和核苷或核苷酸类似物给个体的施用是同时或依次的。在本发明的任何方法中，活性剂的同时施用可以通过同时分开或依次施用活性剂，或一起作为固定组合施用活性剂来进行。此外，在本发明的任何方法中，分别或依次施用活性剂可以是任何顺序。
本发明的另一个实施方案涉及用于制备用于治疗或预防乙型肝炎病毒感染的药物的方法，其特征在于药物中应用的HBV衣壳组装抑制剂是式(I)或式(II)化合物或其药学上可接受的盐、对映异构体或非对映异构体。特别地，HBV衣壳组装抑制剂是
(S)-4-[(R)-6-(2-氯-4-氟-苯基)-5-甲氧基羰基-2-噻唑-2-基-3,6-二氢-嘧啶-4-基甲基]-吗啉-3-甲酸；
3-[(8aS)-7-[[(4S)-5-乙氧基羰基-4-(3-氟-2-甲基-苯基)-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-2,2-二甲基-丙酸；
3-[(8aS)-7-[[(4R)-4-(2-氯-3-氟-苯基)-5-乙氧基羰基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-2,2-二甲基-丙酸；
4-[(8aS)-7-[[(4R)-4-(2-氯-4-氟-苯基)-5-甲氧基羰基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-3,3-二甲基-丁酸；或
3-[(8aS)-7-[[(4R)-4-(2-氯-4-氟-苯基)-5-甲氧基羰基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-2,2-二甲基-丙酸；
或其药学上可接受的盐、对映异构体或非对映异构体。
本发明的另一个实施方案涉及用于制备用于治疗或预防乙型肝炎病毒感染的药物的方法，其特征在于药物中应用的核苷或核苷酸类似物是恩替卡韦、拉米夫定、阿德福韦二匹伏酯、替比夫定、克来夫定、替诺福韦二吡呋酯或富马酸替诺福韦二吡呋酯。特别的核苷类似物是恩替卡韦。
本发明的另一个实施方案涉及用于制备用于治疗或预防乙型肝炎病毒感染的药物的方法，其特征在于药物中应用的HBV衣壳组装抑制剂和核苷或核苷酸类似物是
(S)-4-[(R)-6-(2-氯-4-氟-苯基)-5-甲氧基羰基-2-噻唑-2-基-3,6-二氢-嘧啶-4-基甲基]-吗啉-3-甲酸和恩替卡韦；
3-[(8aS)-7-[[(4S)-5-乙氧基羰基-4-(3-氟-2-甲基-苯基)-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-2,2-二甲基-丙酸和恩替卡韦；
3-[(8aS)-7-[[(4R)-4-(2-氯-3-氟-苯基)-5-乙氧基羰基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-2,2-二甲基-丙酸和恩替卡韦；
4-[(8aS)-7-[[(4R)-4-(2-氯-4-氟-苯基)-5-甲氧基羰基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-3,3-二甲基-丁酸和恩替卡韦；或
3-[(8aS)-7-[[(4R)-4-(2-氯-4-氟-苯基)-5-甲氧基羰基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-2,2-二甲基-丙酸和恩替卡韦。
本发明的另一个实施方案涉及药盒，其包含含有HBV衣壳组装抑制剂和核苷或核苷酸类似物的容器，所述药盒还可以包含无菌稀释剂。
本发明的进一步的实施方案涉及所述药盒，其中药盒还可以包含包装插入物，所述包装插入物包含指导使用HBV衣壳组装抑制剂和核苷或核苷酸类似物的组合治疗的印刷说明书，作为用于治疗或预防乙型肝炎病毒感染的方法。
本发明的另一个实施方案涉及所述药盒，其中容器中应用的HBV衣壳组装抑制剂是
(S)-4-[(R)-6-(2-氯-4-氟-苯基)-5-甲氧基羰基-2-噻唑-2-基-3,6-二氢-嘧啶-4-基甲基]-吗啉-3-甲酸；
3-[(8aS)-7-[[(4S)-5-乙氧基羰基-4-(3-氟-2-甲基-苯基)-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-2,2-二甲基-丙酸；
3-[(8aS)-7-[[(4R)-4-(2-氯-3-氟-苯基)-5-乙氧基羰基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-2,2-二甲基-丙酸；
4-[(8aS)-7-[[(4R)-4-(2-氯-4-氟-苯基)-5-甲氧基羰基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-3,3-二甲基-丁酸；或
3-[(8aS)-7-[[(4R)-4-(2-氯-4-氟-苯基)-5-甲氧基羰基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-2,2-二甲基-丙酸；
或其药学上可接受的盐、对映异构体或非对映异构体。
本发明的另一个实施方案涉及所述药盒，其中所述药盒中应用的核苷或核苷酸类似物是恩替卡韦、拉米夫定、阿德福韦二匹伏酯、替比夫定、克来夫定、替诺福韦二吡呋酯或富马酸替诺福韦二吡呋酯。特别的核苷类似物是恩替卡韦。
本发明的另一个实施方案涉及所述药盒，其特征在于容器中应用的HBV衣壳组装抑制剂和核苷或核苷酸类似物是
(S)-4-[(R)-6-(2-氯-4-氟-苯基)-5-甲氧基羰基-2-噻唑-2-基-3,6-二氢-嘧啶-4-基甲基]-吗啉-3-甲酸和恩替卡韦；
3-[(8aS)-7-[[(4S)-5-乙氧基羰基-4-(3-氟-2-甲基-苯基)-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-2,2-二甲基-丙酸和恩替卡韦；
3-[(8aS)-7-[[(4R)-4-(2-氯-3-氟-苯基)-5-乙氧基羰基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-2,2-二甲基-丙酸和恩替卡韦；
4-[(8aS)-7-[[(4R)-4-(2-氯-4-氟-苯基)-5-甲氧基羰基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-3,3-二甲基-丁酸和恩替卡韦；或
3-[(8aS)-7-[[(4R)-4-(2-氯-4-氟-苯基)-5-甲氧基羰基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-2,2-二甲基-丙酸和恩替卡韦。
本发明的另一个实施方案涉及用于治疗或预防乙型肝炎病毒感染的方法，该方法包括给个体施用有效第一量的HBV衣壳组装抑制剂或其药学上可接受的盐、对映异构体或非对映异构体；和第二量的核苷或核苷酸类似物；或反之亦然；其中HBV衣壳组装抑制剂是
(S)-4-[(R)-6-(2-氯-4-氟-苯基)-5-甲氧基羰基-2-噻唑-2-基-3,6-二氢-嘧啶-4-基甲基]-吗啉-3-甲酸；
3-[(8aS)-7-[[(4S)-5-乙氧基羰基-4-(3-氟-2-甲基-苯基)-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-2,2-二甲基-丙酸；
3-[(8aS)-7-[[(4R)-4-(2-氯-3-氟-苯基)-5-乙氧基羰基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-2,2-二甲基-丙酸；
4-[(8aS)-7-[[(4R)-4-(2-氯-4-氟-苯基)-5-甲氧基羰基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-3,3-二甲基-丁酸；或
3-[(8aS)-7-[[(4R)-4-(2-氯-4-氟-苯基)-5-甲氧基羰基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-2,2-二甲基-丙酸；
或其药学上可接受的盐、对映异构体或非对映异构体。
本发明的另一个实施方案涉及用于治疗或预防乙型肝炎病毒感染的方法，该方法包括给个体施用有效第一量的HBV衣壳组装抑制剂或其药学上可接受的盐、对映异构体或非对映异构体；和第二量的核苷或核苷酸类似物；或反之亦然；其中核苷或核苷酸类似物是恩替卡韦、拉米夫定、阿德福韦二匹伏酯、替比夫定、克来夫定、替诺福韦二吡呋酯或富马酸替诺福韦二吡呋酯。特别的核苷类似物是恩替卡韦。
本发明的另一个实施方案涉及用于治疗或预防乙型肝炎病毒感染的方法，其特征在于该方法中应用的HBV衣壳组装抑制剂和核苷或核苷酸类似物是
(S)-4-[(R)-6-(2-氯-4-氟-苯基)-5-甲氧基羰基-2-噻唑-2-基-3,6-二氢-嘧啶-4-基甲基]-吗啉-3-甲酸和恩替卡韦；
3-[(8aS)-7-[[(4S)-5-乙氧基羰基-4-(3-氟-2-甲基-苯基)-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-2,2-二甲基-丙酸和恩替卡韦；
3-[(8aS)-7-[[(4R)-4-(2-氯-3-氟-苯基)-5-乙氧基羰基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-2,2-二甲基-丙酸和恩替卡韦；
4-[(8aS)-7-[[(4R)-4-(2-氯-4-氟-苯基)-5-甲氧基羰基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-3,3-二甲基-丁酸和恩替卡韦；或
3-[(8aS)-7-[[(4R)-4-(2-氯-4-氟-苯基)-5-甲氧基羰基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-2,2-二甲基-丙酸和恩替卡韦。
本发明的另一个实施方案涉及上述药物组合物作为抗病毒药物的用途，特别是作为治疗或预防乙型肝炎病毒感染的药物的用途。
本发明的另一个实施方案涉及HBV衣壳组装抑制剂和核苷或核苷酸类似物在制备上述作为抗病毒药物，特别是用于治疗或预防乙型肝炎病毒感染的药物的药物组合物中的用途。
实施例
通过参考以下实施例将更全面地理解本发明。然而，它们不应被解释为限制本发明的范围。
缩略语
CI 组合指数
CTG CellTiter-
DMSO 二甲亚砜
FBS 胎牛血清
FIC 部分抑制浓度
GE 基因组当量
HBsAg 乙型肝炎表面抗原
μM 微摩尔
Min 分钟
Nucleos(t)ide 核酸或核苷酸
PBS 磷酸盐缓冲盐水
PEG 聚乙二醇
Pen/Strep 青霉素/链霉素
qPCR 实时定量聚合酶链反应
SD 标准差
Sec 秒
UDG 尿嘧啶DNA糖基化酶
实施例1
在HBV感染的HepaRG细胞中HBV衣壳组装抑制剂和核苷或核苷酸类似物的组合
材料和方法
病毒和细胞
HepG2.2.15细胞在补充有10％FBS、1％Pen/Strep(Gibco，#15140)和G-418(250μg/mL)的DMEM+Glutamax I(Gibco，#21885)中培养，并且用于产生感染性HBV(基因型D)。将来自三个T175烧瓶的90％汇合细胞进行胰蛋白酶处理并且转移到一个胶原包被的超烧瓶(550mL)中。一旦细胞汇合，将培养基更换为含有1％DMSO和2.5％FBS的DMEM+Glutamax I。一旦细胞稍微过度汇合，将培养基更换为补充有MEM非必需氨基酸(6mL，Gibco，#11140)、Pen/Strep(6mL)、丙酮酸钠(6mL)、DMSO(9mL)和FBS(10mL)(均为每500mL培养基)的DMEM/F12+Glutamax I(Gibco，#31331)。每3天更换培养基并且收获上清液2周。通过PEG沉淀从上清液中浓缩病毒，并且通过qPCR测定滴度(基因组当量(GE)/mL)。简言之，将上清液与40％PEG溶液以4:1的比例混合，在振荡器上于4℃温育过夜，然后使用50mL falcon管在4℃以3724g(RCF)离心1小时。弃去上清液，并且重复离心步骤，重新使用新的上清液于管，直至处理完所有PEG沉淀的上清液。将沉淀重悬于William’s E培养基(Gibco，#22551)中，浓度为107-109基因组当量(GE)/mL，并且在-80℃冷冻。DNA拷贝数计算基于由已知浓度的HBV质粒稀释液产生的标准曲线。
将HepaRG细胞(Biopredic International，Saint-Gregoire，France)在工作生长培养基(500mL Willams E培养基，含有50mL来自Biopredic的HepaRG生长补充剂，5mLGlutamax-I(Gibco，#35050)和5mL Pen/Strep)中培养2周。2周后，将培养基更换为含有1.8％DMSO的分化培养基(500mL Willams E培养基，含有50mL来自Biopredic的HepaRG生长补充物，5mL Pen/Strep，5mL Glutamax-1和9mL DMSO)。培养基每周更换两次，直至2周。一旦完全分化，将细胞进行胰蛋白酶处理并且接种到胶原化96孔板的分化培养基(50，000个细胞/孔，100μL)中。将细胞在96孔板中培养至少5天，然后用HBV感染。
hepaRG细胞的感染和化合物处理
对于分化的HepaRG细胞的HBV感染，除去分化培养基并且加入含有4％PEG-8000和病毒储备液(20-30Ge/细胞)的新分化培养基(120μL/孔)。将细胞在37℃培养16至20小时，然后除去培养基，用PBS洗涤细胞4次，并且加入新的分化培养基(120μL/孔)。在感染后第4天，除去培养基并且向每个孔中加入100μL新的分化培养基。药物A和药物B的3倍系列稀释液(5μL化合物至10μL DMSO)在100％DMSO中制备，从15μL未稀释的化合物溶液(最高试验浓度的400倍浓度)开始。然后，将5μL药物A和B稀释液加入至96孔深孔板中的990μL培养基(含有0.8％DMSO)中，其方式如表3所示。将其中的100μL加入到HepaRG细胞中，最终DMSO浓度为1.8％。试验的药物A是化合物6；试验的药物B是化合物1、化合物2、化合物3、化合物4或化合物5。化合物6的试验浓度范围为1nM至0.01nM，并且化合物1至5的试验浓度范围为300nM至0.412nM。感染后第7天用含有化合物的新培养基替换培养基，并且感染后第11天收获细胞上清液，并且直接用于HBV DNA提取或在-20℃储存。使用下述细胞活力测定法测定细胞的细胞活力。
表3.药物A和药物B的组合的平板布局
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
a X X X X X X X X X X X X
b X A1 A1+B7 A1+B6 A1+B5 A1+B4 A1+B3 A1+B2 A1+B1 VC ETV CC
c X A2 A2+B7 A2+B6 A2+B5 A2+B4 A2+B3 A2+B2 A2+B1 VC ETV CC
d X A3 A3+B7 A3+B6 A3+B5 A3+B4 A3+B3 A3+B2 A3+B1 VC ETV CC
e X A4 A4+B7 A4+B6 A4+B5 A4+B4 A4+B3 A4+B2 A4+B1 VC ETV CC
f X A5 A5+B7 A5+B6 A5+B5 A5+B4 A5+B3 A5+B2 A5+B1 VC ETV CC
g X VC B7 B6 B5 B4 B3 B2 B1 VC ETV CC
h X X X X X X X X X X X X
X：PBS
CC：细胞对照(未感染的)
VC：病毒对照
ETV：参考对照(200nM恩替卡韦)
A1-5：药物A的系列稀释液
B1-7：药物B的系列稀释液
A1+B7：药物A和B的不同比例的组合的实施例
DNA提取
使用MagNA Pure 96(Roche)机器人提取来自HepaRG细胞上清液的HBV DNA。将100μL上清液在处理盒中与200μL MagNA Pure 96外部裂解缓冲液(Roche，目录号06374913001)混合并且温育10分钟。然后使用“MagNA Pure 96DNA和病毒核酸小体积试剂盒”(Roche，Cat.No.06543588001)和“Viral NA Plasma SV外部裂解2.0”方案提取DNA。DNA洗脱体积为50μL。
qPCR
使用Taqman qPCR机器(ViiA7，life technologies)进行提取的HBV DNA的定量。在PCR中一式两份试验每种DNA样品。将5μL DNA样品加入到在384孔板中的15μL含有10μLTaqMan基因表达标准混合物(Applied Biosystems，目录号4369016)，0.5μL PrimeTime XLqPCR Primer/Probe(IDT，Leuven，Belgium)和4.5μL蒸馏水的PCR标准混合物中，并且使用以下设置进行PCR：UDG温育(2分钟，50℃)，酶活化(10分钟，95℃)和PCR(40个循环，15秒95°用于变性，以及1分钟60℃用于退火和延伸)。通过ViiA7软件基于HBV质粒DNA标准曲线从Ct值计算DNA拷贝数。
TaqMan引物和探针(IDT)的序列：
正向核心引物(F3_核心)：CTG TGC CTT GGG TGG CTT T
反向引物(R3_核心)：AAG GAA AGA AGT CAG AAG GCA AAA
Taqman探针(P3_核心)：56-FAM/AGC TCC AAA/ZEN/TTC TTT ATA AGG GTC GATGTC CAT G/3IABkFQ
细胞活力测定
使用CellTiter-(CTG)发光细胞活力测定(Promega，目录号G7572)在感染后第11天测定HBV感染和处理的HepaRG细胞的细胞活力。向每个孔的细胞中加入100μL CTG试剂，温育10分钟，并且将每孔80μL转移到新的白色96孔板中。使用Envision读数器(PerkinElmer)测量发光(0.2秒)。
数据分析
等效线图模型
使用Craig等人(Craig J,Duncan I,Whittaker L and Roberts N.(1990).Antiviral synergy between inhibitors of HIV proteinase and reverse transcriptase.Antiviral.Chem.Chemother.4:161-166)描述的模型分析组合试验结果。获得单独使用和与其它化合物组合使用的化合物的EC50值。为了将这两个值联系起来并且描述它们之间的协同/相加/拮抗程度，首先计算部分抑制浓度(FIC)并且用于产生等效线图。简言之，FIC是组合药物的EC50与药物本身EC50的比：
FIC＝比[EC50组合:EC50单独]
组合指数(CI)，通过将两种化合物的FIC相加获得，然后用于描述组合中应用的化合物之间的效果。CI<1表示协同作用，CI＝1表示相加作用，CI>1表示拮抗作用。如果仅一种药物单独已经显示出高效水平，则药物组合的EC50计算不准确，从而导致无效的高CI值。这些CI值被认为是非显著的。
结果
化合物1与化合物6的组合，化合物2与化合物6的组合，化合物3与化合物6的组合，化合物4与化合物6的组合，以及化合物5与化合物6的组合在HBV感染的分化的HepaRG细胞中试验抗HBV活性。测定组合研究中获得的单一化合物抑制活性(EC50)(表4)。
表4.组合研究中应用的各个化合物的平均EC50±SD值
a)独立试验的编号
上述组合的FIC和CI的计算列于下表5至9中。
表5.化合物1和化合物6的组合的平均EC50值和得到的FIC和CI值
表6.化合物2和化合物6的组合的平均EC50值和得到的FIC和CI值
表7.化合物3和化合物6的组合的平均EC50值和得到的FIC和CI值
表8.化合物4和化合物6的组合的平均EC50值和得到的FIC和CI值
表9.化合物5和化合物6的组合的平均EC50值和得到的FIC和CI值
使用Isobologram模型分析化合物1和化合物6之间的相互作用(图1)。对于每个试验，化合物1和化合物6的组合的FIC值一个相对于另一个绘图。分析显示大多数CI值<1。因此，化合物1和化合物6的组合是协同的。
使用Isobologram模型分析化合物2和化合物6之间的相互作用(图2)。对于每个试验，化合物2和化合物6的组合的FIC值一个相对于另一个绘图。分析显示大多数CI值<1。因此，化合物2和化合物6的组合是协同的。
使用Isobologram模型分析化合物3和化合物6之间的相互作用(图3)。对于每个试验，化合物3和化合物6的组合的FIC值一个相对于另一个绘图。分析显示大多数CI值<1。因此，化合物3和化合物6的组合是协同的。
使用Isobologram模型分析化合物4和化合物6之间的相互作用(图4)。对于每个试验，化合物4和化合物6的组合的FIC值一个相对于另一个绘图。分析显示大多数CI值<1。因此，化合物4和化合物6的组合是协同的。
使用Isobologram模型分析化合物5和化合物6之间的相互作用(图5)。对于每个试验，化合物5和化合物6的组合的FIC值一个相对于另一个绘图。分析显示大多数CI值<1。因此，化合物5和化合物6的组合是协同的。
上述组合中没有一种对细胞活力具有显著影响。

Claims (31)

1.药物组合物，其包含在药学上可接受的载体中的HBV衣壳组装抑制剂和核苷或核苷酸类似物。
2.根据权利要求1的药物组合物，其中HBV衣壳组装抑制剂是式(I)化合物：
其中
R1是C1-6烷基或三氟甲基-CxH2x-，其中x是1、2、3、4、5或6；
R2和R3之一是苯基，其被C1-6烷基、氰基或卤素取代一次或两次或三次；并且另一个是氢或氘；
R4是苯基、噻唑基、唑基、咪唑基、噻吩基或吡啶基，其是未取代的或者被C1-6烷基、C1-6烷基硫烷基、卤素或环烷基取代，其中C1-6烷基可以进一步任选被卤素取代；
A是 其是未取代的或者被选自C1-6烷基、氘和卤素的基团取代；
或其药学上可接受的盐或对映异构体或非对映异构体。
3.根据权利要求2的药物组合物，其中HBV衣壳组装抑制剂是(S)-4-[(R)-6-(2-氯-4-氟-苯基)-5-甲氧基羰基-2-噻唑-2-基-3,6-二氢-嘧啶-4-基甲基]-吗啉-3-甲酸。
4.根据权利要求1的药物组合物，其中HBV衣壳组装抑制剂是式(II)化合物：
其中
R5是氢、卤素或C1-6烷基；
R6是氢或卤素；
R7是氢或卤素；
R8是C1-6烷基；
R9是氢、羟基C1-6烷基、氨基羰基、C1-6烷氧基羰基或羧基；
R10是氢、C1-6烷氧基羰基或羧基-CmH2m-；
X是羰基或磺酰基；
Y是-CH2-、-O-或-N(R11)-，
其中R11是氢、C1-6烷基、卤代C1-6烷基、C3-7环烷基-CmH2m-、C1-6烷氧基羰基-CmH2m-、-CtH2t-COOH、-卤代C1-6烷基-COOH、-(C1-6烷氧基)C1-6烷基-COOH、-C1-6烷基-O-C1-6烷基-COOH、-C3-7环烷基-CmH2m-COOH、-CmH2m-C3-7环烷基-COOH、羟基-CtH2t-、羧基螺[3.3]庚基或羧基苯基-CmH2m-、羧基吡啶基-CmH2m-；
W是-CH2-、-C(C1-6烷基)2-、-O-或羰基；
n是0或1；
m是0-7；
t是1-7；
或其药学上可接受的盐或对映异构体或非对映异构体。
5.根据权利要求1或4的药物组合物，其中HBV衣壳组装抑制剂是：
3-[(8aS)-7-[[(4S)-5-乙氧基羰基-4-(3-氟-2-甲基-苯基)-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-2,2-二甲基-丙酸；
3-[(8aS)-7-[[(4R)-4-(2-氯-3-氟-苯基)-5-乙氧基羰基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-2,2-二甲基-丙酸；
4-[(8aS)-7-[[(4R)-4-(2-氯-4-氟-苯基)-5-甲氧基羰基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-3,3-二甲基-丁酸；或
3-[(8aS)-7-[[(4R)-4-(2-氯-4-氟-苯基)-5-甲氧基羰基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-2,2-二甲基-丙酸；
或其药学上可接受的盐、对映异构体或非对映异构体。
6.根据权利要求1-5任一项的药物组合物，其中核苷或核苷酸类似物是恩替卡韦、拉米夫定、阿德福韦二匹伏酯、替比夫定、克来夫定、替诺福韦二吡呋酯或富马酸替诺福韦二吡呋酯。
7.根据权利要求6的药物组合物，其中核苷或核苷酸类似物是恩替卡韦。
8.根据权利要求1的药物组合物，其中组合物由在药学上可接受的载体中的HBV衣壳组装抑制剂和核苷或核苷酸类似物组成。
9.药物组合物，其由以下组成：
(S)-4-[(R)-6-(2-氯-4-氟-苯基)-5-甲氧基羰基-2-噻唑-2-基-3,6-二氢-嘧啶-4-基甲基]-吗啉-3-甲酸和恩替卡韦；
3-[(8aS)-7-[[(4S)-5-乙氧基羰基-4-(3-氟-2-甲基-苯基)-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-2,2-二甲基-丙酸和恩替卡韦；
3-[(8aS)-7-[[(4R)-4-(2-氯-3-氟-苯基)-5-乙氧基羰基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-2,2-二甲基-丙酸和恩替卡韦；
4-[(8aS)-7-[[(4R)-4-(2-氯-4-氟-苯基)-5-甲氧基羰基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-3,3-二甲基-丁酸和恩替卡韦；
3-[(8aS)-7-[[(4R)-4-(2-氯-4-氟-苯基)-5-甲氧基羰基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-2,2-二甲基-丙酸和恩替卡韦；
(S)-4-[(R)-6-(2-氯-4-氟-苯基)-5-甲氧基羰基-2-噻唑-2-基-3,6-二氢-嘧啶-4-基甲基]-吗啉-3-甲酸和拉米夫定；
3-[(8aS)-7-[[(4S)-5-乙氧基羰基-4-(3-氟-2-甲基-苯基)-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-2,2-二甲基-丙酸和拉米夫定；
3-[(8aS)-7-[[(4R)-4-(2-氯-3-氟-苯基)-5-乙氧基羰基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-2,2-二甲基-丙酸和拉米夫定；
4-[(8aS)-7-[[(4R)-4-(2-氯-4-氟-苯基)-5-甲氧基羰基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-3,3-二甲基-丁酸和拉米夫定；
3-[(8aS)-7-[[(4R)-4-(2-氯-4-氟-苯基)-5-甲氧基羰基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-2,2-二甲基-丙酸和拉米夫定；
(S)-4-[(R)-6-(2-氯-4-氟-苯基)-5-甲氧基羰基-2-噻唑-2-基-3,6-二氢-嘧啶-4-基甲基]-吗啉-3-甲酸和阿德福韦二匹伏酯；
3-[(8aS)-7-[[(4S)-5-乙氧基羰基-4-(3-氟-2-甲基-苯基)-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-2,2-二甲基-丙酸和阿德福韦二匹伏酯；
3-[(8aS)-7-[[(4R)-4-(2-氯-3-氟-苯基)-5-乙氧基羰基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-2,2-二甲基-丙酸和阿德福韦二匹伏酯；
4-[(8aS)-7-[[(4R)-4-(2-氯-4-氟-苯基)-5-甲氧基羰基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-3,3-二甲基-丁酸和阿德福韦二匹伏酯；
3-[(8aS)-7-[[(4R)-4-(2-氯-4-氟-苯基)-5-甲氧基羰基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-2,2-二甲基-丙酸和阿德福韦二匹伏酯；
(S)-4-[(R)-6-(2-氯-4-氟-苯基)-5-甲氧基羰基-2-噻唑-2-基-3,6-二氢-嘧啶-4-基甲基]-吗啉-3-甲酸和替比夫定；
3-[(8aS)-7-[[(4S)-5-乙氧基羰基-4-(3-氟-2-甲基-苯基)-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-2,2-二甲基-丙酸和替比夫定；
3-[(8aS)-7-[[(4R)-4-(2-氯-3-氟-苯基)-5-乙氧基羰基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-2,2-二甲基-丙酸和替比夫定；
4-[(8aS)-7-[[(4R)-4-(2-氯-4-氟-苯基)-5-甲氧基羰基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-3,3-二甲基-丁酸和替比夫定；
3-[(8aS)-7-[[(4R)-4-(2-氯-4-氟-苯基)-5-甲氧基羰基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-2,2-二甲基-丙酸和替比夫定；
(S)-4-[(R)-6-(2-氯-4-氟-苯基)-5-甲氧基羰基-2-噻唑-2-基-3,6-二氢-嘧啶-4-基甲基]-吗啉-3-甲酸和克来夫定；
3-[(8aS)-7-[[(4S)-5-乙氧基羰基-4-(3-氟-2-甲基-苯基)-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-2,2-二甲基-丙酸和克来夫定；
3-[(8aS)-7-[[(4R)-4-(2-氯-3-氟-苯基)-5-乙氧基羰基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-2,2-二甲基-丙酸和克来夫定；
4-[(8aS)-7-[[(4R)-4-(2-氯-4-氟-苯基)-5-甲氧基羰基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-3,3-二甲基-丁酸和克来夫定；
3-[(8aS)-7-[[(4R)-4-(2-氯-4-氟-苯基)-5-甲氧基羰基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-2,2-二甲基-丙酸和克来夫定；
(S)-4-[(R)-6-(2-氯-4-氟-苯基)-5-甲氧基羰基-2-噻唑-2-基-3,6-二氢-嘧啶-4-基甲基]-吗啉-3-甲酸和替诺福韦二吡呋酯；
3-[(8aS)-7-[[(4S)-5-乙氧基羰基-4-(3-氟-2-甲基-苯基)-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-2,2-二甲基-丙酸和替诺福韦二吡呋酯；
3-[(8aS)-7-[[(4R)-4-(2-氯-3-氟-苯基)-5-乙氧基羰基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-2,2-二甲基-丙酸和替诺福韦二吡呋酯；
4-[(8aS)-7-[[(4R)-4-(2-氯-4-氟-苯基)-5-甲氧基羰基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-3,3-二甲基-丁酸和替诺福韦二吡呋酯；
3-[(8aS)-7-[[(4R)-4-(2-氯-4-氟-苯基)-5-甲氧基羰基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-2,2-二甲基-丙酸和替诺福韦二吡呋酯；
(S)-4-[(R)-6-(2-氯-4-氟-苯基)-5-甲氧基羰基-2-噻唑-2-基-3,6-二氢-嘧啶-4-基甲基]-吗啉-3-甲酸和富马酸替诺福韦二吡呋酯；
3-[(8aS)-7-[[(4S)-5-乙氧基羰基-4-(3-氟-2-甲基-苯基)-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-2,2-二甲基-丙酸和富马酸替诺福韦二吡呋酯；
3-[(8aS)-7-[[(4R)-4-(2-氯-3-氟-苯基)-5-乙氧基羰基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-2,2-二甲基-丙酸和富马酸替诺福韦二吡呋酯；
4-[(8aS)-7-[[(4R)-4-(2-氯-4-氟-苯基)-5-甲氧基羰基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-3,3-二甲基-丁酸和富马酸替诺福韦二吡呋酯；或
3-[(8aS)-7-[[(4R)-4-(2-氯-4-氟-苯基)-5-甲氧基羰基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-2,2-二甲基-丙酸和富马酸替诺福韦二吡呋酯；
在药学上可接受的载体中。
10.根据权利要求9的药物组合物，其由以下组成：
(S)-4-[(R)-6-(2-氯-4-氟-苯基)-5-甲氧基羰基-2-噻唑-2-基-3,6-二氢-嘧啶-4-基甲基]-吗啉-3-甲酸和恩替卡韦；
3-[(8aS)-7-[[(4S)-5-乙氧基羰基-4-(3-氟-2-甲基-苯基)-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-2,2-二甲基-丙酸和恩替卡韦；
3-[(8aS)-7-[[(4R)-4-(2-氯-3-氟-苯基)-5-乙氧基羰基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-2,2-二甲基-丙酸和恩替卡韦；
4-[(8aS)-7-[[(4R)-4-(2-氯-4-氟-苯基)-5-甲氧基羰基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-3,3-二甲基-丁酸和恩替卡韦；或
3-[(8aS)-7-[[(4R)-4-(2-氯-4-氟-苯基)-5-甲氧基羰基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-2,2-二甲基-丙酸和恩替卡韦；
在药学上可接受的载体中。
11.用于制备用于治疗或预防乙型肝炎病毒感染的药物的方法，其特征在于在该药物中应用HBV衣壳组装抑制剂和核苷或核苷酸类似物。
12.根据权利要求11的方法，其中HBV衣壳组装抑制剂和核苷或核苷酸类似物在相同制剂或不同制剂中共施用。
13.根据权利要求11或12的方法，其中HBV衣壳组装抑制剂和核苷或核苷酸类似物旨在通过相同途径或不同途径施用于个体。
14.根据权利要求11-13中任一项的方法，其中HBV衣壳组装抑制剂和核苷或核苷酸类似物旨在通过非肠道或口服施用施用于个体。
15.根据权利要求11-14中任一项的方法，其中施用是同时的或依次的。
16.根据权利要求11-15中任一项的方法，其中HBV衣壳组装抑制剂是式(I)或式(II)化合物，或其药学上可接受的盐、对映异构体或非对映异构体。
17.根据权利要求11-16中任一项的方法，其中HBV衣壳组装抑制剂是
(S)-4-[(R)-6-(2-氯-4-氟-苯基)-5-甲氧基羰基-2-噻唑-2-基-3,6-二氢-嘧啶-4-基甲基]-吗啉-3-甲酸；
3-[(8aS)-7-[[(4S)-5-乙氧基羰基-4-(3-氟-2-甲基-苯基)-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-2,2-二甲基-丙酸；
3-[(8aS)-7-[[(4R)-4-(2-氯-3-氟-苯基)-5-乙氧基羰基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-2,2-二甲基-丙酸；
4-[(8aS)-7-[[(4R)-4-(2-氯-4-氟-苯基)-5-甲氧基羰基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-3,3-二甲基-丁酸；或
3-[(8aS)-7-[[(4R)-4-(2-氯-4-氟-苯基)-5-甲氧基羰基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-2,2-二甲基-丙酸；
或其药学上可接受的盐、对映异构体或非对映异构体。
18.根据权利要求11-17中任一项的方法，其中核苷或核苷酸类似物是恩替卡韦、拉米夫定、阿德福韦二匹伏酯、替比夫定、克来夫定、替诺福韦二吡呋酯或富马酸替诺福韦二吡呋酯。特别的核苷类似物是恩替卡韦。
19.根据权利要求11-18中任一项的方法，其中药物中使用的HBV衣壳组装抑制剂和核苷或核苷酸类似物是：
(S)-4-[(R)-6-(2-氯-4-氟-苯基)-5-甲氧基羰基-2-噻唑-2-基-3,6-二氢-嘧啶-4-基甲基]-吗啉-3-甲酸和恩替卡韦；
3-[(8aS)-7-[[(4S)-5-乙氧基羰基-4-(3-氟-2-甲基-苯基)-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-2,2-二甲基-丙酸和恩替卡韦；
3-[(8aS)-7-[[(4R)-4-(2-氯-3-氟-苯基)-5-乙氧基羰基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-2,2-二甲基-丙酸和恩替卡韦；
4-[(8aS)-7-[[(4R)-4-(2-氯-4-氟-苯基)-5-甲氧基羰基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-3,3-二甲基-丁酸和恩替卡韦；或
3-[(8aS)-7-[[(4R)-4-(2-氯-4-氟-苯基)-5-甲氧基羰基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-2,2-二甲基-丙酸和恩替卡韦。
20.药盒，其包含容器，所述容器包含HBV衣壳组装抑制剂和核苷或核苷酸类似物。
21.根据权利要求20的药盒，其还包含无菌稀释剂。
22.根据权利要求20或21的药盒，其还包含包装插入物，所述包装插入物包含指导使用HBV衣壳组装抑制剂和核苷或核苷酸类似物的组合治疗的印刷说明书，作为用于治疗或预防乙型肝炎病毒感染的方法。
23.根据权利要求20-22中任一项的药盒，其中HBV衣壳组装抑制剂是
(S)-4-[(R)-6-(2-氯-4-氟-苯基)-5-甲氧基羰基-2-噻唑-2-基-3,6-二氢-嘧啶-4-基甲基]-吗啉-3-甲酸；
3-[(8aS)-7-[[(4S)-5-乙氧基羰基-4-(3-氟-2-甲基-苯基)-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-2,2-二甲基-丙酸；
3-[(8aS)-7-[[(4R)-4-(2-氯-3-氟-苯基)-5-乙氧基羰基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-2,2-二甲基-丙酸；
4-[(8aS)-7-[[(4R)-4-(2-氯-4-氟-苯基)-5-甲氧基羰基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-3,3-二甲基-丁酸；或
3-[(8aS)-7-[[(4R)-4-(2-氯-4-氟-苯基)-5-甲氧基羰基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-2,2-二甲基-丙酸；
或其药学上可接受的盐、对映异构体或非对映异构体。
24.根据权利要求20-23中任一项的药盒，其中核苷或核苷酸类似物是恩替卡韦、拉米夫定、阿德福韦二匹伏酯、替比夫定、克来夫定、替诺福韦二吡呋酯或富马酸替诺福韦二吡呋酯。特别的核苷类似物是恩替卡韦。
25.根据权利要求20-24中任一项的药盒，其中容器中应用的HBV衣壳组装抑制剂和核苷或核苷酸类似物是
(S)-4-[(R)-6-(2-氯-4-氟-苯基)-5-甲氧基羰基-2-噻唑-2-基-3,6-二氢-嘧啶-4-基甲基]-吗啉-3-甲酸和恩替卡韦；
3-[(8aS)-7-[[(4S)-5-乙氧基羰基-4-(3-氟-2-甲基-苯基)-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-2,2-二甲基-丙酸和恩替卡韦；
3-[(8aS)-7-[[(4R)-4-(2-氯-3-氟-苯基)-5-乙氧基羰基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-2,2-二甲基-丙酸和恩替卡韦；
4-[(8aS)-7-[[(4R)-4-(2-氯-4-氟-苯基)-5-甲氧基羰基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-3,3-二甲基-丁酸和恩替卡韦；或
3-[(8aS)-7-[[(4R)-4-(2-氯-4-氟-苯基)-5-甲氧基羰基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-2,2-二甲基-丙酸和恩替卡韦。
26.用于治疗或预防乙型肝炎病毒感染的方法，该方法包括给个体施用有效第一量的HBV衣壳组装抑制剂或其药学上可接受的盐、对映异构体或非对映异构体；和第二量的核苷或核苷酸类似物；反之亦然。
27.根据权利要求26的方法，其中HBV衣壳组装抑制剂是
3-[(8aS)-7-[[(4S)-5-乙氧基羰基-4-(3-氟-2-甲基-苯基)-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-2,2-二甲基-丙酸；
3-[(8aS)-7-[[(4R)-4-(2-氯-3-氟-苯基)-5-乙氧基羰基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-2,2-二甲基-丙酸；
4-[(8aS)-7-[[(4R)-4-(2-氯-4-氟-苯基)-5-甲氧基羰基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-3,3-二甲基-丁酸；或
3-[(8aS)-7-[[(4R)-4-(2-氯-4-氟-苯基)-5-甲氧基羰基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-2,2-二甲基-丙酸；
或其药学上可接受的盐、对映异构体或非对映异构体。
28.根据权利要求26和27的方法，其中核苷或核苷酸类似物是恩替卡韦、拉米夫定、阿德福韦二匹伏酯、替比夫定、克来夫定、替诺福韦二吡呋酯或富马酸替诺福韦二吡呋酯。特别的核苷类似物是恩替卡韦。
29.根据权利要求26-28中任一项的方法，其中所用的HBV衣壳组装抑制剂和核苷或核苷酸类似物是：
(S)-4-[(R)-6-(2-氯-4-氟-苯基)-5-甲氧基羰基-2-噻唑-2-基-3,6-二氢-嘧啶-4-基甲基]-吗啉-3-甲酸和恩替卡韦；
3-[(8aS)-7-[[(4S)-5-乙氧基羰基-4-(3-氟-2-甲基-苯基)-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-2,2-二甲基-丙酸和恩替卡韦；
3-[(8aS)-7-[[(4R)-4-(2-氯-3-氟-苯基)-5-乙氧基羰基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-2,2-二甲基-丙酸和恩替卡韦；
4-[(8aS)-7-[[(4R)-4-(2-氯-4-氟-苯基)-5-甲氧基羰基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-3,3-二甲基-丁酸和恩替卡韦；或
3-[(8aS)-7-[[(4R)-4-(2-氯-4-氟-苯基)-5-甲氧基羰基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]-3-氧代-5,6,8,8a-四氢-1H-咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-2,2-二甲基-丙酸和恩替卡韦。
30.根据权利要求1至10的药物组合物作为抗病毒药物的用途，特别是作为用于治疗或预防乙型肝炎病毒感染的药物的用途。
31.HBV衣壳组装抑制剂和核苷或核苷酸类似物在制备作为抗病毒药物，特别是用于治疗或预防乙型肝炎病毒感染的药物的根据权利要求1至10的药物组合物中的用途。
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