KR20210106421A

KR20210106421A - 헤테로아릴디히드로피리미딘 유도체 및 b형 간염 감염의 치료 방법

Info

Publication number: KR20210106421A
Application number: KR1020217016323A
Authority: KR
Inventors: 옌핑 슈; 이민 지앙; 왕양 투; 강 덴; 잔링 쳉; 차오 리앙
Original assignee: 얀센 파마슈티카 엔.브이.
Priority date: 2018-12-20
Filing date: 2019-12-19
Publication date: 2021-08-30
Also published as: CA3124317A1; JP2022511819A; AU2019409191A1; CN113227090A; WO2020125729A1; US20220048919A1; EP3898628A4; EP3898628A1; MA54560A

Abstract

HBV 감염의 치료를 필요로 하는 대상체에서의 HBV 감염의 치료에 유용한 화합물, 이의 제약 조성물, 및 대상체에서의 HBV 감염의 저해, 억제 또는 예방 방법이 본원에 제공된다.

Description

헤테로아릴디히드로피리미딘 유도체 및 B형 간염 감염의 치료 방법

만성 B형 간염 바이러스(HBV) 감염은 전 세계 인구 중 5%를 넘는 인구(전 세계적으로 3억 5천만명이 넘는 사람, 및 미국에서 125만명이 넘는 개인)에서 발생하는 중대한 세계적 건강 문제이다.

예방용 HBV 백신의 이용가능성에도 불구하고, 만성 HBV 감염의 부담은 개발 도상국의 대부분의 지역에서 차선의 치료 옵션과 새로운 감염의 지속적인 감염률로 인해 계속해서 중대한, 충족되지 않은 전 세계적 의료 문제가 되고 있다. 현행 치료제는 치유를 제공하지 않으며, 단지 두 부류의 에이전트(인터페론 알파 및 뉴클레오시드 유사체/바이러스 폴리머라아제의 억제제)에 한정되고; 약물 내성, 낮은 효능, 및 내용성 문제가 이들의 영향을 제한한다. 낮은 HBV 치유율은 적어도 부분적으로는, 바이러스 생성을 완전히 억제하는 것이 단일 항바이러스제에 의해서는 달성하기 어렵다는 사실에 기인한다. 그러나, HBV DNA의 지속적 억제는 간질환의 진행을 늦추고 간세포 암종의 예방을 돕는다. HBV-감염 환자에 대한 현행 치료법의 목표는 혈청중 HBV DNA를 낮은 수준 또는 검출불가능한 수준까지 감소시키고 궁극적으로는 간경변 및 간세포 암종의 발생을 감소시키거나 예방하는 것에 관한 것이다.

HBV 캡시드 단백질은 바이러스 생명 주기 동안 필수적인 기능을 한다. HBV 캡시드/코어 단백질은 세포간 통과 동안 바이러스 게놈을 보호하는 준안정성 바이러스 입자 또는 단백질 쉘을 형성하고, 또한 게놈 캡시드화, 게놈 복제, 및 비리온의 형태 형성 및 탈출을 포함하는 바이러스 복제 과정에서 중추적인 역할을 한다. 캡시드 구조는 또한 바이러스 진입 후 탈코팅을 허용하도록 환경 신호(environmental cue)에 반응한다. 이와 일관되게, 캡시드 조립 및 분해의 적절한 타이밍, 적절한 캡시드 안정성 및 코어 단백질 기능은 바이러스 감염성에 결정적인 것으로 밝혀졌다.

바이러스 생성의 억제를 증가시킬 수 있고 HBV 감염을 치료, 개선 또는 예방할 수 있는 치료제가 당업계에 필요하다. 이러한 치료제를 단독요법으로 또는 다른 HBV 치료 또는 보조 치료와 병용하여 HBV 감염 환자에게 투여하면, 바이러스 부담이 현저히 감소하고, 예후가 개선되고, 질환의 진행이 감소하고, 혈청전환율이 향상될 것이다.

HBV의 치료에 사용하기 위한 헤테로아릴디히드로피리미딘에 대한 배경 기술은 WO 2015/132276, WO2013/102655 및 WO99/54326을 포함한다.

HBV 감염의 치료를 필요로 하는 대상체에서의 HBV 감염의 치료에 유용한 화합물이 본원에 제공된다. 따라서, 일 양태에서, 하기 화학식 I의 화합물(이의 중수소화 이성질체, 입체이성질체 또는 호변이성질체 형태를 포함함), 또는 이의 제약상 허용가능한 염이 본원에 제공된다:

[화학식 I]

여기서,

R¹, R² 및 R³은 독립적으로 H, 할로겐 및 C_1- ₄알킬로 이루어진 군으로부터 선택되며;

R⁴는 C_1-4알킬이며;

R⁵는 불소 및 C_1- ₃알킬로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환체로 선택적으로 치환된 티아졸릴 또는 피리딜이며;

R⁶은 OH 및 CN으로 이루어진 군으로부터 선택되는 치환체로 선택적으로 치환된 C_1-4알킬이며;

m은 1이며;

r은 1이며;

n은 0 또는 1의 정수이며;

X는 C(=O), C(=S), 또는 SO₂이며;

Y는 NR⁷이며;

R⁷은 H, -C_1- ₆알킬, -C_1- ₆알킬-R⁸, -C_1- ₆알콕시-C_1- ₆알킬-R⁸ , -(CH₂)_p-C(R¹¹R¹²)-R⁸ 및 -(CH₂)_p-Q-R⁸로 이루어진 군으로부터 선택되며;

R⁸은 -C_1- ₆알킬, -COOH, -C(=O)NHS(=O)₂-C_1- ₆알킬, 테트라졸릴 및 카르복실산 생체 등배전자체(bioisostere)로 이루어진 군으로부터 선택되며;

R¹¹및 R¹²는 이들이 부착된 탄소 원자와 함께, 선택적으로 헤테로원자(헤테로원자는 R⁹로 치환된 산소 또는 질소임)를 함유하는 3 내지 7원 포화 고리를 형성하며;

Q는 아릴, 헤테로아릴, 및 선택적으로 헤테로원자(헤테로원자는 R⁹로 치환된 산소 또는 질소임)를 함유하는 3 내지 7원 포화 고리로 이루어진 군으로부터 선택되며;

R⁹는 H, C_1-6알킬, 또는 C_1-6알콕시-C_1-6알킬이며;

p는 0, 1, 2, 또는 3의 정수이며;

Z는 CH₂ 또는 C(=O)이다.

또 다른 양태에서, 화학식 I의 적어도 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염을 제약상 허용가능한 담체와 함께 포함하는 제약 조성물이 본원에 제공된다.

다른 양태에서, 적어도 하나의 개시된 화합물을 제약상 허용되는 담체와 함께 포함하는 제약 조성물이 본원에 제공된다.

또 다른 양태에서, HBV 감염 또는 HBV-유도성 질환의 치료를 필요로 하는 개체에서 HBV 감염 또는 HBV-유도성 질환을 치료하는 방법이 본원에 제공되며, 본 방법은 치료적 유효량의 화학식 I의 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염을 개체에게 투여하는 단계를 포함한다.

또 다른 양태에서, HBV DNA-함유 입자 또는 HBV RNA-함유 입자의 형성 또는 존재의 억제 또는 감소를 필요로 하는 개체에서 HBV DNA-함유 입자 또는 HBV RNA-함유 입자의 형성 또는 존재를 억제하거나 감소시키는 방법이 본원에 제공되며, 본 방법은 치료적 유효량의 화학식 I의 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염을 개체에게 투여하는 단계를 포함한다.

일 실시 형태에서, 본원에 제공된 방법 중 임의의 방법은 본원에 추가로 정의된 바와 같은 HBV 억제제로 이루어진 군으로부터 선택되는 적어도 하나의 추가 치료제를 개체에게 투여하는 단계를 추가로 포함할 수 있다.

대상체에서의 HBV 감염의 치료 및 예방에 유용한 화합물, 예를 들어 화학식 I의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염이 본원에 제공된다.

특정한 작용 기작에 구애됨이 없이, 이들 화합물은 HBV 복제 또는 감염성 입자의 생성에 필요한 HBV 조립 및 다른 HBV 코어 단백질의 기능을 조절 또는 방해하는 것으로 여겨지고/지거나 HBV 캡시드 조립을 방해하여 감염성 또는 복제 능력이 크게 감소된 빈 캡시드를 초래할 수 있다. 환언하면, 본원에 제공된 화합물은 캡시드 조립 조절제로서 작용할 수 있다.

본원에 제공된 화합물은 강력한 항바이러스 활성을 가지며, 유리한 대사 특성, 조직 분포, 안전성 및 제약 프로파일을 나타내며, 인간에서 사용하기에 적합하다. 본 개시 화합물은 정상적인 바이러스 캡시드 조립 또는 분해를 조절하거나(예를 들어, 가속화하거나, 지연시키거나, 억제하거나, 방해하거나 또는 감소시키거나), 캡시드에 결합하거나 또는 세포 폴리단백질 및 전구체의 대사를 변경시킬 수 있다. 캡시드 단백질이 성숙할 때 또는 바이러스 감염 동안 상기 조절이 일어날 수 있다. 본 개시 화합물은 감염된 세포 내에서의 HBV RNA 입자의 생성 또는 방출, 또는 HBV cccDNA의 활성 또는 특성의 조절 방법에 사용될 수 있다.

일 실시 형태에서, 본원에 기술된 화합물은 단독요법에 적합하고, 천연 또는 자연 HBV 주에 대해 그리고 현재 알려진 약물에 내성이 있는 HBV 주에 대해 효과적이다. 또 다른 실시 형태에서, 본원에 기술된 화합물은 병용 요법에 사용하기에 적합하다.

정의

본 발명을 설명하기 위해 사용된 다양한 용어의 정의가 아래에 열거되어 있다. 이들 정의는 특정한 경우에 달리 제한되지 않는 한, 개별적으로 또는 더 큰 그룹의 일부로서 본 명세서 및 청구범위 전체에 걸쳐 사용되는 용어에 적용된다.

달리 정의되지 않는 한, 본원에 사용된 모든 기술 용어 및 과학 용어는 일반적으로, 본 발명이 속하는 기술 분야의 당업자가 통상적으로 이해하는 것과 동일한 의미를 갖는다. 일반적으로, 본원에 사용된 명명법 및 세포 배양, 분자 유전학, 유기 화학, 및 펩티드 화학에서의 실험실 절차는 당업계에서 잘 알려져 있고 통상적으로 사용되는 것들이다.

본원에 사용된 단수형은 하나 이상(즉, 적어도 하나)을 의미한다. 예로서, "요소"는 하나의 요소 또는 하나보다 더 많은 요소를 의미한다. 더욱이, "포함하는"이라는 용어와, 다른 형태, 예컨대 "포함하고 있다", "포함하다", 및 "포함된"의 사용은 한정적인 것이 아니다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "약"은 당업자에 의해 이해될 것이며, 그것이 사용되는 맥락에 따라 어느 정도 변할 것이다. 본원에서 사용되는 바와 같이, 양, 시간적 기간 등과 같은 측정가능한 값을 언급할 때, 용어 "약"은 명시된 값으로부터 ±20% 또는 ±10%(±5%, ±1% 및 ±0.1% 포함)의 변동을 포함함을 의미하며, 그 이유는 상기 변동이 본 개시 방법을 수행하기에 적절하기 때문이다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "캡시드 조립 조절제"는 정상적인 캡시드 조립(예를 들어, 성숙 동안) 또는 정상적인 캡시드 분해(예를 들어, 감염 동안)를 방해하거나 가속화하거나 억제하거나 저해하거나 지연시키거나 감소시키거나 변경시키거나, 또는 캡시드 안정성을 교란하고 이에 의해 비정상적인 캡시드의 형태 및 기능을 유도하는 화합물을 지칭한다. 일 실시 형태에서, 캡시드 조립 조절제는 캡시드 조립 또는 분해를 가속화함으로써 비정상적인 캡시드 형태를 유도한다. 또 다른 실시 형태에서, 캡시드 조립 조절제는 주요 캡시드 조립 단백질(CA)과 상호작용(예를 들어, 활성 부위에서의 결합, 알로스테릭 부위에서의 결합, 폴딩의 변경 또는 저해 등)함으로써 캡시드의 조립 또는 분해를 방해한다. 또 다른 실시 형태에서, 캡시드 조립 조절제는 CA의 구조 또는 기능(예를 들어, CA의 조립 능력, 분해 능력, 기질에의 결합 능력, 적합한 형태로의 폴딩 등)의 교란을 야기하며, 이는 바이러스 감염성을 약화시키거나 바이러스에 치명적이다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "치료" 또는 "치료하는"은, HBV 감염, HBV 감염의 증상 또는 HBV 감염이 발생할 가능성을 치유하거나, 고치거나, 경감시키거나, 완화하거나, 변경하거나, 해결하거나, 개선시키거나, 호전시키거나 영향을 줄 목적으로, 치료제, 즉 본 개시 화합물(단독으로 또는 또 다른 약제와 조합하여)을, 이러한 HBV 감염, HBV 감염의 증상 또는 HBV 감염이 발생할 가능성이 있는 환자에게 적용하거나 투여하는 것으로 정의되거나, 환자로부터의 단리된 조직 또는 세포주에 (예를 들어, 진단 또는 생체 외 적용을 위하여) 치료제를 적용하거나 투여하는 것으로 정의된다. 이러한 치료는 약물유전체학 분야에서 얻은 지식에 기초하여 구체적으로 조정되거나 변형될 수 있다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "예방하다" 또는 "예방"은 아무것도 발생하지 않은 경우 장애 또는 질환 발생이 없음, 또는 이미 장애 또는 질환의 발생이 있었던 경우 추가의 장애 또는 질환 발생이 없음을 의미한다. 또한 장애 또는 질환과 관련된 증상의 일부 또는 전부를 예방하는 능력이 고려된다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "환자", "개체" 또는 "대상체"는 인간 또는 비-인간 포유동물을 지칭한다. 비-인간 포유동물은 예를 들어 가축 및 애완 동물, 예컨대 양, 소, 돼지, 개, 고양이 및 쥣과 포유동물을 포함한다. 바람직하게는, 환자, 대상체 또는 개체는 인간이다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "유효량", "제약적 유효량" 및 "치료적 유효량"은 원하는 생물학적 결과를 제공하는 데 충분하면서도 비독성인 약제의 양을 지칭한다. 그 결과는 질환의 징후, 증상 또는 원인의 감소 또는 경감, 또는 생물학적 시스템의 임의의 다른 원하는 변경일 수 있다. 임의의 개별적인 경우에 적절한 치료량은 일상적인 실험을 사용하여 당업자에 의해 결정될 수 있다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "제약상 허용가능한"은 화합물의 생물학적 활성 또는 특성을 손상시키지 않고 상대적으로 비독성인 담체 또는 희석제와 같은 물질을 지칭하며, 즉 이 물질은 바람직하지 않은 생물학적 효과를 유발하지 않거나 이 물질을 함유하는 조성물의 임의의 성분과 유해한 방식으로 상호작용하지 않고서 개체에게 투여될 수 있다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "제약상 허용가능한 염"은 본 개시 화합물의 유도체(여기서, 모 화합물은 기존의 산 또는 염기 모이어티를 그의 염 형태로 전환시킴으로써 변형됨)를 지칭한다. 제약상 허용가능한 염의 예는 아민과 같은 염기성 잔기의 광산 또는 유기 산 염; 카르복실산과 같은 산성 잔기의 알칼리 또는 유기 염 등을 포함하지만, 이에 한정되지 않는다. 본 발명의 제약상 허용가능한 염은 예를 들어 비독성 무기 또는 유기 산으로부터 형성된 모 화합물의 통상적인 비독성 염을 포함한다. 본 발명의 제약상 허용가능한 염은 통상적인 화학적 방법에 의해 염기성 또는 산성 모이어티를 함유하는 모 화합물로부터 합성될 수 있다. 일반적으로, 이러한 염은 이들 화합물의 유리 산 또는 염기 형태를 물 또는 유기 용매, 또는 이 둘의 혼합물에서 화학량론적 양의 적절한 염기 또는 산과 반응시킴으로써 제조될 수 있으며; 일반적으로 에테르, 에틸 아세테이트, 에탄올, 이소프로판올, 또는 아세토니트릴과 같은 비수성 매질이 바람직하다. 적합한 염의 목록은 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences, 17th ed., Mack Publishing Company, Easton, PA., 1985, p. 1418] 및 문헌[Journal of Pharmaceutical Science, 66, 2 (1977)]에서 발견되는데, 이들 각각은 본원에 그 전체가 참고로 포함된다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "조성물" 또는 "제약 조성물"은 본 발명 내에서 유용한 하나 이상의 화합물과 제약상 허용가능한 담체의 혼합물을 지칭한다. 제약 조성물은 본 화합물을 환자 또는 대상체에게 투여하는 것을 용이하게 한다. 정맥내, 경구, 에어로졸, 비경구, 안과, 폐 및 국소 투여를 포함하지만 이에 한정되지 않는, 화합물을 투여하는 다수의 기술이 당업계에 존재한다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "제약상 허용가능한 담체"는 본 발명 내에서 유용한 화합물을 환자 내로 또는 환자에게 운반하거나 수송하여 상기 화합물이 그의 의도된 기능을 수행할 수 있게 하는 데 관여하는, 제약상 허용가능한 물질, 조성물 또는 담체, 예컨대 액체 또는 고체 충전제, 안정제, 분산제, 현탁제, 희석제, 부형제, 증점제, 용매 또는 캡슐화 물질을 의미한다. 전형적으로, 이러한 구축물은 하나의 기관, 또는 신체의 일부로부터 또 다른 기관, 또는 신체의 일부로 운반 또는 수송된다. 각각의 담체는 본 발명 내에서 유용한 화합물을 비롯한 제형의 다른 성분과 상용성이고 환자에게 해롭지 않다는 의미에서 "허용가능"해야 한다. 제약상 허용가능한 담체로서의 역할을 할 수 있는 물질의 일부 예는 다음을 포함한다: 당류, 예컨대 락토스, 글루코스 및 수크로스; 전분, 예컨대 옥수수 전분 및 감자 전분; 셀룰로오스 및 그의 유도체, 예컨대 소듐 카르복시메틸 셀룰로오스, 에틸 셀룰로오스 및 셀룰로오스 아세테이트; 분말형 트래거캔스; 맥아; 젤라틴; 활석; 부형제, 예컨대 코코아 버터 및 좌제 왁스; 오일, 예컨대 땅콩유, 면실유, 홍화유, 참기름, 올리브유, 옥수수유 및 대두유; 글리콜, 예컨대 프로필렌 글리콜; 폴리올, 예컨대 글리세린, 소르비톨, 만니톨 및 폴리에틸렌 글리콜; 에스테르, 예컨대 에틸 올레에이트 및 에틸 라우레이트; 한천; 완충제, 예컨대 수산화마그네슘 및 수산화알루미늄; 표면 활성제; 알긴산; 발열원이 없는 물; 등장 식염수; 링거액(Ringer's solution); 에틸 알코올; 인산염 완충액; 및 제약 제형에 사용되는 다른 비독성 상용성 물질.

본원에서 사용되는 바와 같이, "제약상 허용가능한 담체"는 또한 본 발명 내에서 유용한 화합물의 활성과 양립가능하고 환자에게 생리학적으로 허용가능한 모든 코팅, 항균 및 항진균제 및 흡수 지연제 등을 포함한다. 보충적 활성 화합물이 또한 조성물 내에 혼입될 수 있다. "제약상 허용가능한 담체"는 본 발명 내에서 유용한 화합물의 제약상 허용가능한 염을 추가로 포함할 수 있다. 본 발명의 실시에 사용되는 제약 조성물에 포함될 수 있는 다른 추가 성분은 당업계에 공지되어 있고, 예를 들어 본원에 참고로 포함된 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences (Genaro, Ed., Mack Publishing Co., 1985, Easton, PA)]에 기술되어 있다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "알킬"은 그 자체로 또는 또 다른 치환체의 일부로서, 달리 언급되지 않는 한 지정된 탄소 원자수를 갖는 직쇄 또는 분지쇄 탄화수소를 의미하며(즉, C₁-C₃알킬은 1 내지 3개의 탄소 원자를 갖는 알킬을 의미하며, C₁-C₄알킬은 1 내지 4개의 탄소를 갖는 알킬을 의미함), 직쇄 및 분지쇄를 포함한다. 예는 메틸, 에틸, 프로필, 이소프로필, 부틸, 이소부틸, tert-부틸을 포함한다. 알킬의 실시 형태는 일반적으로 C₁-C₁₀ 알킬, 예컨대 C₁-C₆ 알킬, 예컨대 C₁-C₄ 알킬을 포함하지만, 이에 한정되지 않는다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "알케닐"은 그 자체로 또는 또 다른 치환체의 일부로서, 달리 언급되지 않는 한 지정된 탄소 원자수를 갖는, 적어도 하나의 탄소-탄소 이중 결합을 포함하는 직쇄 또는 분지쇄 탄화수소를 의미한다(즉, C₂-C₄ 알케닐 또는 C_2- ₄알케닐은 2 내지 4개 내지 8개의 탄소 원자를 갖는 알케닐을 의미하며, C₄-C₈알케닐 또는 C_4- ₈알케닐은 4개의 탄소 원자를 갖는 알케닐을 의미한다). 알케닐의 실시 형태는 일반적으로 C₂-C₆ 알케닐, 예컨대 C₂-C₄ 알케닐, 예컨대 C₂-C₃ 알케닐을 포함하지만, 이에 한정되지 않는다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "할로" 또는 "할로겐"은 단독으로 또는 또 다른 치환체의 일부로서, 달리 언급되지 않는 한 불소, 염소, 브롬, 또는 요오드 원자, 바람직하게는, 불소, 염소, 또는 브롬, 더 바람직하게는, 불소 또는 염소를 의미한다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "3~7원 포화 고리"는 단환식 비-방향족 포화 라디칼을 지칭하며, 여기서 고리를 형성하는 각각의 원자(즉, 골격 원자)는, 그러한 고리가 하나 이상의 헤테로원자를 포함하는 것으로 추가로 정의되는 경우가 아닌 한, 탄소 원자이다. 3~7원 포화 고리는 3 내지 7개의 고리 원자를 갖는 군을 포함한다. 단환식 3~7원 포화 고리는 시클로프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸, 시클로헥실, 시클로헵틸을 포함하지만, 이에 한정되지 않는다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 3~7원 포화 고리는 선택적으로 헤테로원자를 함유할 수 있으며, 상기 헤테로원자는 H, C_1- ₆알킬, 또는 C_1- ₆알콕시-C_1- ₆알킬로 치환된 질소, 또는 산소이다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "방향족"은 하나 이상의 다중불포화 고리를 갖고 방향족 특성을 갖는, 즉 (4n + 2)개의 비편재화 π(파이) 전자(n은 정수임)를 갖는 탄소환 또는 복소환을 지칭한다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 단독으로 또는 다른 용어와 조합되어 사용되는 용어 "아릴"은, 달리 언급되지 않는 한, 하나 이상의 고리(전형적으로 1, 2 또는 3개의 고리)를 함유하는 탄소환식 방향족 시스템을 의미하며, 여기서, 이러한 고리들은 바이페닐과 같이 펜던트 방식으로 함께 부착될 수 있거나 나프탈렌과 같이 융합될 수 있다. 아릴 기의 예는 페닐, 안트라실, 및 나프틸을 포함한다. 바람직한 예는 페닐(예를 들어, C₆-아릴) 및 바이페닐(예를 들어, C₁₂-아릴)이다. 일부 실시 형태에서, 아릴 기는 6 내지 16개의 탄소 원자를 갖는다. 일부 실시 형태에서, 아릴 기는 6 내지 12개의 탄소 원자를 갖는다(예를 들어, C₆-C₁₂-아릴). 일부 실시 형태에서, 아릴 기는 6개의 탄소 원자를 갖는다(예를 들어, C₆-아릴).

본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "헤테로아릴" 또는 "헤테로방향족"은 방향족 특성을 갖는 복소환을 지칭한다. 헤테로아릴 치환체는 탄소 원자의 수에 의해 정의될 수 있으며, 예를 들어 C₁-C₉-헤테로아릴은 헤테로원자의 수를 포함하지 않고서 헤테로아릴 기 내에 포함된 탄소 원자의 수를 나타낸다. 예를 들어, C₁-C₉-헤테로아릴은 추가의 1 내지 4개의 헤테로원자를 포함할 것이다. 다환식 헤테로아릴은 부분 포화된 하나 이상의 고리를 포함할 수 있다. 헤테로아릴의 비제한적 예는 피리딜, 피라지닐, 피리미디닐 (예를 들어, 2- 및 4-피리미디닐을 포함함), 피리다지닐, 티에닐, 푸릴, 피롤릴 (예를 들어, 2-피롤릴을 포함함), 이미다졸릴, 티아졸릴, 옥사졸릴, 피라졸릴(예를 들어, 3- 및 5-피라졸릴을 포함함), 이소티아졸릴, 1,2,3-트리아졸릴, 1,2,4-트리아졸릴, 1,3,4-트리아졸릴, 테트라졸릴, 1,2,3-티아디아졸릴, 1,2,3-옥사디아졸릴, 1,3,4-티아디아졸릴 및 1,3,4-옥사디아졸릴을 포함한다.

다환식 복소환 및 헤테로아릴의 비제한적 예는 인돌릴(예를 들어, 3-, 4-, 5-, 6- 및 7-인돌릴을 포함함), 인돌리닐, 퀴놀릴, 테트라히드로퀴놀릴, 이소퀴놀릴(예를 들어, 1- 및 5-이소퀴놀릴), 1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀릴, 신놀리닐, 퀴녹살리닐(예를 들어, 2- 및 5-퀴녹살리닐을 포함함), 퀴나졸리닐, 프탈라지닐, 1,8-나프티리디닐, 1,4-벤조디옥사닐, 쿠마린, 디히드로쿠마린, 1,5-나프티리디닐, 벤조푸릴(예를 들어, 3-, 4-, 5-, 6- 및 7-벤조푸릴을 포함함), 2,3-디히드로벤조푸릴, 1,2-벤즈이속사졸릴, 벤조티에닐(예를 들어, 3-, 4-, 5-, 6-, 및 7-벤조티에닐을 포함함), 벤즈옥사졸릴, 벤조티아졸릴 (예를 들어, 2-벤조티아졸릴 및 5-벤조티아졸릴을 포함함), 퓨리닐, 벤즈이미다졸릴 (예를 들어, 2-벤즈이미다졸릴을 포함함), 벤조트리아졸릴, 티오잔티닐, 카르바졸릴, 카르볼리닐, 아크리디닐, 피롤리지디닐, 및 퀴놀리지디닐을 포함한다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "치환된"은 원자 또는 원자 그룹이 또 다른 그룹에 부착된 치환체로서 수소를 대체한 것을 의미한다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "...로부터 선택되다"(예를 들어, "R⁴는 A, B 및 C로부터 선택된다")는 용어 "...으로 이루어진 군으로부터 선택되다"(예를 들어, "R⁴는 A, B 및 C로 이루어진 군으로부터 선택된다")와 동등한 것으로 이해된다.

일 실시 형태는 카르복실산 생체 등배전자체가 -S(=O)₂(OH), -P(=O)(OH)₂, -C(=O)NHOH, C(=O)NHCN, 1,2,4-옥사디아졸-5(4H)-온, 또는 3-히드록시-4-메틸시클로부트-3-엔-1,2-디온인, 본원에 정의된 바와 같은 화학식 I의 화합물에 관한 것이다. 이것은 하기 구조를 나타낸다:

.

일 실시 형태는 R⁴가 메틸, 또는 에틸인, 본원에 정의된 바와 같은 화학식 I의 화합물에 관한 것이다.

일 실시 형태는 R⁵가 티아졸릴인, 본원에 정의된 바와 같은 화학식 I의 화합물에 관한 것이다.

일 실시 형태는 X가 C(=O)인, 본원에 정의된 바와 같은 화학식 I의 화합물에 관한 것이다.

일 실시 형태는 R⁶이 C_1- ₆알킬인, 본원에 정의된 바와 같은 화학식 I의 화합물에 관한 것이다.

일 실시 형태는 m이 1이고, n이 0이고 r이 1인, 본원에 정의된 바와 같은 화학식 I의 화합물에 관한 것이다.

일 실시 형태는 Z가 CH₂인, 본원에 정의된 바와 같은 화학식 I의 화합물에 관한 것이다.

일 실시 형태는 R⁷이 -COOH로 치환된 C_1- ₆알킬이거나, R⁷이 (CH₂)_p-Q-CO₂H인, 본원에 정의된 바와 같은 화학식 I의 화합물에 관한 것이다.

일 실시 형태는 Q가 페닐이거나, Q가 C_3- ₆시클로알킬이거나, Q가 산소 함유 3~6원 포화 고리인, 본원에 정의된 바와 같은 화학식 I의 화합물에 관한 것이다.

일 실시 형태는 하기 화학식을 충족시키는 화합물로 이루어진 군으로부터 선택되는 화합물에 관한 것이다:

본 개시 화합물은 하나 이상의 입체중심을 보유할 수 있으며, 각각의 입체중심은 독립적으로 R 또는 S 배열 중 어느 하나로 존재할 수 있다. 일부 화합물에 있어서, 표시된 중심에서의 입체화학적 배열은, 화합물 그 자체가 단일 입체이성질체로서 단리되었고 거울상 이성질체로서/부분입체 이성질체로서 순수하다 할지라도 절대 입체화학 특성이 미정인 경우 "R*", "S*", "*R" 또는 (*S)로 정하였다. 일 실시 형태에서, 본원에 개시된 화합물은 광학 활성 또는 라세미 형태로 존재한다. 본원에 개시된 화합물은 본원에 기술된 치료적으로 유용한 특성을 보유하는 라세미, 광학 활성, 위치이성질체 및 입체이성질체 형태 또는 이들의 조합을 포함하는 것으로 이해되어야 한다.

광학 활성 형태의 제조는 비제한적인 예로서 재결정화 기술을 이용한 라세미 형태의 분할, 광학 활성 출발 물질로부터의 합성, 키랄 합성, 또는 키랄 고정상을 이용한 크로마토그래피 분리에 의한 것을 포함하여 임의의 적합한 방식으로 달성된다. 일 실시 형태에서, 하나 이상의 이성질체의 혼합물이 본원에 기술된 개시된 화합물로서 사용된다. 또 다른 실시 형태에서, 본원에 개시된 화합물은 하나 이상의 키랄 중심을 함유한다. 이들 화합물은 입체 선택적 합성, 거울상 선택적 합성 또는 거울상 이성질체 또는 부분입체 이성질체의 혼합물의 분리를 포함하는 임의의 수단에 의해 제조된다. 화합물 및 이의 이성질체의 분할은 비제한적인 예로서 화학 공정, 효소 공정, 분별 결정화, 증류 및 크로마토그래피를 포함하는 임의의 수단에 의해 달성된다.

화합물의 절대 R 또는 S 입체화학이 결정될 수 없는 경우, 이것은 크로마토그래피 컬럼, 용출제 등에 의해 결정되는 바와 같은 특정 크로마토그래피 조건 하에서의 크로마토그래피 후 체류 시간에 의해 확인될 수 있다.

일 실시 형태에서, 본 개시 화합물은 호변이성질체로서 존재할 수 있다. 모든 호변이성질체가 본원에 제시된 화합물의 범주 내에 포함된다.

본원에 개시된 화합물은 또한, 하나 이상의 원자가 동일한 원자 번호를 갖지만 일반적으로 자연에서 발견되는 원자 질량 또는 질량수와는 다른 원자 질량 또는 질량수를 갖는 원자로 대체된 동위원소-표지 화합물을 포함한다. 본원에 개시된 화합물 내로의 포함에 적합한 동위원소의 예는 ²H, ³H, ¹¹C, ¹³C, ¹⁴C, ³⁶Cl, ¹⁸F, ¹²³I, ¹²⁵I, ¹³N, ¹⁵N, ¹⁵O, ¹⁷O, ¹⁸O, ³²P, 및 ³⁵S를 포함하며 이에 한정되지 않는다. 일 실시 형태에서, 동위원소-표지 화합물은 약물 또는 기질 조직 분포 연구에 유용하다. 또 다른 실시 형태에서, 중수소와 같은 더 무거운 동위원소에 의한 치환은 더 큰 대사 안정성(예를 들어, 증가된 생체 내 반감기 또는 감소된 투여량의 요건)을 제공한다.

또 다른 실시 형태에서, 양전자 방출 동위원소, 예컨대 ¹¹C, ¹⁸F, ¹⁵O 및 ¹³N에 의한 치환은 기질 수용체 점유율을 검사하기 위한 PET(Positron Emission Topography) 연구에서 유용하다. 동위원소-표지 화합물은, 임의의 적합한 방법에 의해 또는 달리 사용되는 비-표지 시약 대신에 적절한 동위원소-표지 시약을 사용하는 공정에 의해 제조된다.

일 실시 형태에서, 본원에 개시된 화합물은 발색단 또는 형광성 모이어티, 생물발광 표지체, 또는 화학발광 표지체의 사용을 포함하지만 이에 한정되지 않는 다른 수단에 의해 표지된다.

본원에 개시된 화합물, 및 상이한 치환체를 갖는 다른 관련 화합물은 본원에 개시된 기술 및 재료와, 당업자에게 공지된 기술을 이용하여 합성된다. 본원에 개시된 바와 같은 화합물의 제조를 위한 일반적인 방법은 본원에 제공된 바와 같은 화학식에서 발견되는 다양한 모이어티의 도입을 위해 적절한 시약 및 조건의 사용에 의해 변경된다.

본원에 개시된 화합물은 상업적 공급처로부터 입수가능한 화합물로부터 출발하여 임의의 적합한 절차를 사용하여 합성되거나, 본원에 기술된 절차를 사용하여 제조된다.

본 출원의 화합물은 또한 중간체 화합물을 포함하며, 이것은 다음과 같은 이의 임의의 염을 포함한다:

방법

HBV 감염의 치료를 필요로 하는 개체에서 HBV 감염을 치료하는 방법이 본원에 제공되며, 본 방법은 치료적 유효량의 본 개시 화합물을 개체에게 투여하는 단계를 포함한다.

또한, HBV 감염의 퇴치를 필요로 하는 개체에서 HBV 감염을 퇴치하는 방법이 본원에 제공되며, 본 방법은 치료적 유효량의 본 개시 화합물을 개체에게 투여하는 단계를 포함한다.

HBV 감염과 관련된 바이러스 로드의 감소를 필요로 하는 개체에서 HBV 감염과 관련된 바이러스 로드를 감소시키는 방법이 본원에 제공되며, 본 방법은 치료적 유효량의 본 개시 화합물을 개체에게 투여하는 단계를 포함한다.

또한, HBV 감염의 재발의 감소를 필요로 하는 개체에서 HBV 감염의 재발을 감소시키는 방법이 본원에 제공되며, 본 방법은 치료적 유효량의 본 개시 화합물을 개체에게 투여하는 단계를 포함한다.

HBV DNA-함유 입자 또는 HBV RNA-함유 입자의 형성 또는 존재의 억제 또는 감소를 필요로 하는 개체에서 HBV DNA-함유 입자 또는 HBV RNA-함유 입자의 형성 또는 존재를 억제하거나 감소시키는 방법이 본원에 제공되며, 본 방법은 치료적 유효량의 본 개시 화합물을 개체에게 투여하는 단계를 포함한다.

특정 양태에서, 본원에 개시된 방법 및/또는 조성물은 시험관 내 또는 생체 내에서(예를 들어, 세포 내에서, 조직 내에서, 기관 내에서(예를 들어, 간 내에서), 유기체 내에서 등) HBV-관련 입자의 형성 또는 존재를 억제하거나 감소시키기에 효과적이다. HBV-관련 입자는 HBV DNA(즉, 선형 및/또는 공유적 폐쇄 원형 DNA(covalently closed circular DNA; cccDNA)) 및/또는 HBV RNA(즉, 프리-게놈(pre-genomic) RNA 및/또는 서브-게놈(sub-genomic) RNA)를 포함할 수 있다. 따라서, HBV-관련 입자는 HBV DNA-함유 입자 또는 HBV RNA-함유 입자를 포함한다.

본원에서 사용되는 바와 같이, "HPV-관련 입자"는 감염성 HBV 비리온(즉, 데인(Dane) 입자) 및 비-감염성 HBV 서브바이러스 입자(subviral particle)(즉, HBV 필라멘트 및/또는 HBV 구체) 둘 다를 지칭한다. HBV 비리온은 표면 단백질을 포함하는 외피(outer envelope), 코어 단백질을 포함하는 뉴클레오캡시드, 적어도 하나의 폴리머라아제 단백질 및 HBV 게놈을 포함한다. HBV 필라멘트 및 HBV 구체는 HBV 표면 단백질을 포함하지만, 코어 단백질, 폴리머라아제 및 HBV 게놈이 결여되어 있다. HBV 필라멘트 및 HBV 구체는 집합적으로 표면 항원(HBsAg) 입자로도 공지되어 있다. HBV 구체는 중간 HBV 표면 단백질 및 작은 HBV 표면 단백질을 포함한다. HBV 필라멘트는 또한 중간 HBV 표면 단백질, 작은 HBV 표면 단백질 및 큰 HBV 표면 단백질을 포함한다.

HBV 서브바이러스 입자는 비미립자형 또는 분비형 HBeAg를 포함할 수 있는데, 이는 HBV의 활발한 복제에 대한 마커로서의 역할을 한다.

HBV 감염의 불리한 생리학적 영향의 감소를 필요로 하는 개체에서 HBV 감염의 불리한 생리학적 영향을 감소시키는 방법이 본원에 제공되며, 본 방법은 치료적 유효량의 본 개시 화합물을 개체에게 투여하는 단계를 포함한다.

또한, HBV 감염의 감소, 늦춤, 또는 억제를 필요로 하는 개체에서 HBV 감염을 감소시키거나, 늦추거나 억제하는 방법이 본원에 제공되며, 본 방법은 치료적 유효량의 본 개시 화합물을 개체에게 투여하는 단계를 포함한다.

HBV 감염에 의한 간 손상의 역전의 유도를 필요로 하는 개체에서 HBV 감염에 의한 간 손상의 역전을 유도하는 방법이 본원에 제공되며, 본 방법은 치료적 유효량의 본 개시 화합물을 개체에게 투여하는 단계를 포함한다.

HBV 감염에 대한 장기간 항바이러스 치료법의 생리학적 영향의 감소를 필요로 하는 개체에서 HBV 감염에 대한 장기 항바이러스 치료법의 생리학적 영향을 감소시키는 방법이 본원에 제공되며, 본 방법은 치료적 유효량의 본 개시 화합물을 개체에게 투여하는 단계를 포함한다.

HBV 감염의 예방적 치료를 필요로 하는 개체에서 HBV 감염을 예방적으로 치료하는 방법이 본원에 제공되며, 여기서, 개체는 잠복성 HBV 감염을 앓고 있고, 본 방법은 치료적 유효량의 본 개시 화합물을 개체에게 투여하는 단계를 포함한다.

일 실시 형태에서, 개체는 다른 치료용 HBV 약물 부류(예를 들어, HBV 폴리머라아제 억제제, 인터페론, 바이러스 침입 억제제, 바이러스 성숙 억제제, 문헌에 기술된 캡시드 조립 조절제, 확실하거나 비공지된 기작의 항바이러스 화합물 등, 또는 이들의 조합물)에 대하여 불응성이다. 또 다른 실시 형태에서, 본 개시 방법은 HBV 감염을 앓고 있는 개체에서 바이러스 로드를, 다른 치료용 HBV 약물 부류가 상기 개체에서 바이러스 로드를 감소시키는 정도와 비교하여 더 큰 정도로 또는 더 빠른 속도로 감소시킨다.

일 실시 형태에서, 본 개시 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염의 투여는, HBV 감염의 예방적 치료를 필요로 하는 개체에서 HBV 감염을 예방적으로 치료하는 데 있어서 유사한 결과를 달성하는 데 필요한 단독의 상기 하나 이상의 추가 치료제의 투여와 비교하여 더 낮은 용량 또는 빈도로 상기 하나 이상의 추가 치료제를 투여하는 것을 허용한다.

일 실시 형태에서, 본 개시 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염의 투여는, HBV 폴리머라아제 억제제, 인터페론, 바이러스 침입 억제제, 바이러스 성숙 억제제, 특유한 캡시드 조립 조절제, 확실하거나 비공지된 기작의 항바이러스 화합물 및 이들의 임의의 조합물로 이루어진 군으로부터 선택되는 화합물의 투여와 비교하여 개체에서 바이러스 로드를 더 큰 정도로 또는 더 빠른 속도로 감소시킨다.

일 실시 형태에서, 본 개시 방법은 HBV 감염을 앓고 있는 개체에서 바이러스 로드를 감소킴으로써 더 낮은 용량 또는 다양한 병용 치료 요법이 사용될 수 있게 한다.

일 실시 형태에서, 본 개시 방법은 다른 HBV 약물 부류와 비교하여 더 낮은 발생률의 바이러스 돌연변이 또는 바이러스 저항성을 야기하며, 이에 의해 장기간 치료법을 가능하게 하고 치료 요법의 변화에 대한 필요성을 최소화한다.

일 실시 형태에서, 본 발명의 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염의 투여는, HBV 폴리머라아제 억제제, 인터페론, 바이러스 침입 억제제, 바이러스 성숙 억제제, 특유한 캡시드 조립 조절제, 확실하거나 비공지된 기작의 항바이러스 화합물 및 이들의 조합물로 이루어진 군으로부터 선택되는 화합물의 투여보다 더 낮은 발생률의 바이러스 돌연변이 또는 바이러스 저항성을 야기한다.

일 실시 형태에서, 본 개시 방법은 HBV 감염으로부터 HBV 비-감염으로의 또는 검출가능한 HBV 바이러스 로드로부터 검출불가능한 HBV 바이러스 로드로의 혈청 전환 속도를 현행 치료 요법의 혈청 전환 속도보다 더 크게 증가시킨다. 본원에서 사용되는 바와 같이, "혈청 전환 속도"는 HBV 항체가 발생하여 검출가능하게 되는 기간을 지칭한다.

일 실시 형태에서, 본 개시 방법은 이를 필요로 하는 개체에서 정상적인 건강을 증가시키거나 정상화시키거나 회복시키거나, 정상적인 건강의 완전한 회복을 초래하거나, 기대 수명을 회복시키거나, 바이러스 감염을 해결한다.

일 실시 형태에서, 본 개시 방법은 HBV 감염된 세포로부터 방출되는 HBV RNA 입자를 제거하거나 상기 HBV RNA 입자의 수를 감소시킴으로써 본 개시 화합물의 치료적 유익성(therapeutic benefit)을 향상, 연장 또는 증가시킨다.

일 실시 형태에서, 본 개시 방법은 HBV에 감염된 개체로부터 HBV를 퇴치함으로써, 장기간 치료 또는 평생 치료의 필요성을 제거하거나, 치료 기간을 단축시키거나, 다른 항바이러스제의 투여량을 감소시킨다.

또 다른 실시 형태에서, 본 개시 방법은 대상체의 HBV 바이러스 로드를 모니터링하거나 검출하는 단계를 추가로 포함하며, 본 방법은 HBV 바이러스가 검출될 수 없을 때까지의 시간을 포함하는 기간 동안 실시된다.

따라서, 일 실시 형태에서, HBV 감염의 치료를 필요로 하는 개체에서 HBV 감염을 치료하는 방법이 본원에 제공되며, 본 방법은 치료적 유효량의 화학식 I의 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염을 개체에게 투여하는 단계를 포함한다.

또 다른 실시 형태에서, HBV 감염의 치료를 필요로 하는 개체에서 HBV 감염을 치료하는 방법이 본원에 제공되며, 본 방법은 치료적 유효량의 표 1의 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염을 개체에게 투여하는 단계를 포함한다.

본원에 제공된 방법들 중 임의의 방법의 일 실시 형태에서, 본 방법은 대상체의 HBV 바이러스 로드를 모니터링하는 단계를 추가로 포함할 수 있으며, 여기서, 본 방법은 HBV 바이러스가 검출불가능하게 되는 기간 동안 실시된다.

병용 요법

본 개시 화합물은 HBV 감염, HBV-관련된 또는 HBV-유도성 질환, 또는 간 질환의 치료에 유용한 하나 이상의 추가 화합물과 조합되어 유용할 수 있다. 이들 추가 화합물은 다른 개시된 화합물 및/또는 HBV 감염, 또는 HBV-관련된 또는 HBV-유도성 질환, 또는 간 질환의 증상 또는 영향을 치료하거나, 예방하거나 감소시키는 것으로 공지된 화합물을 포함할 수 있다.

특히, 일 양태에서, HBV 감염 또는 HBV-유도성 질환의 치료 또는 예방을 필요로 하는 포유동물에서 HBV 감염 또는 HBV-유도성 질환의 치료 또는 예방에서 동시에, 개별적으로 또는 순차적으로 사용하기 위한 병용 제제로서 제1 화합물 및 제2 화합물을 포함하는 생성물이 제공되며, 여기서, 상기 제1 화합물은 상기 제2 화합물과는 상이하고, 상기 제1 화합물은 본 출원의 화합물 또는 제약상 허용가능한 염 또는 본 출원의 제약 조성물이고, 상기 제2 화합물은 다음으로 이루어진 군으로부터 선택되는 또 다른 HBV 억제제이다: HBV 병용 약물, HBV DNA 폴리머라아제 억제제, 면역조절제 toll-유사 수용체(TLR) 조절제, 인터페론 알파 수용체 리간드, 히알루로니다아제 억제제, b형 간염 표면 항원(HbsAg) 억제제, 세포독성 T-림프구 관련 단백질 4(ipi4) 억제제, 시클로힐린 억제제, HBV 바이러스 진입 억제제, 바이러스 mRNA를 표적화하는 안티센스 올리고뉴클레오티드, 짧은 간섭 RNA(siRNA) 및 ddRNAi 엔도뉴클레아제 조절제, 리보뉴클레오티드 리덕타아제 억제제, HBV E 항원 억제제, 공유적 폐쇄 원형 DNA(covalently closed circular DNA; cccDNA) 억제제, 파느소이드 X 수용체 작용제, HBV 항체, CCR2 케모카인 길항제, 티모신 작용제, 사이토카인, 핵단백질 조절제, 레틴산-유도성 유전자 1 자극제, NOD2 자극제, 포스파티딜이노시톨 3-키나아제(PI3K) 억제제, 인돌아민 2,3-디옥시게나아제(IDO) 경로 억제제, PD-1 억제제, PD-L1 억제제, 재조합 티모신 알파-1, 브루톤 티로신 키나아제(BTK) 억제제, KDM 억제제, HBV 복제 억제제, 아르기나아제 억제제 및 (기타) 항-HBV 약물.

상기 하나 이상의 추가 화합물은 예를 들어 인터페론(예를 들어, 인터페론-알파-2a는 페길화된 인터페론-알파-2a(PEGASYS)임), 뉴클레오시드 또는 뉴클레오티드 또는 비-뉴클레오시(티)드 폴리머라아제 억제제, 면역 조절제(예를 들어, 특히 IL-12, IL-18, IFN-알파, -베타, 및 -감마 및 TNF-알파), TLR 작용제, siRNA 및 안티센스 올리고뉴클레오티드로부터 선택될 수 있다.

또 다른 실시 형태에서, 본 개시 화합물 및 상기 하나 이상의 추가 치료제는 공동-제형화된다. 또 다른 실시 형태에서, 본 개시 화합물 및 상기 하나 이상의 추가 치료제는 공동-투여된다.

본원에 기술된 임의의 병용 요법에 있어서, 상승 효과는 예를 들어 Sigmoid-E_max 방정식(문헌[Holford & Scheiner, 19981, Clin. Pharmacokinet. 6: 429-453]), 뢰베(Loewe) 가법성의 방정식(문헌[Loewe & Muischnek, 1926, Arch. Exp. Pathol Pharmacol. 114: 313-326]) 및 중간값-효과 방정식(문헌[Chou & Talalay, 1984, Adv. Enzyme Regul. 22: 27-55])과 같은 적합한 방법을 사용하여 계산될 수 있다. 상기 언급된 각각의 방정식을 실험 데이터에 적용하여 상응하는 그래프를 생성하여 약물 조합의 효과의 평가에 도움을 줄 수 있다. 상기 언급된 방정식과 관련된 상응하는 그래프는 각각 농도-효과 곡선, 이소볼로그램 곡선 및 조합 지수 곡선이다.

본원에 제공된 병용 요법제 투여 방법들 중 임의의 방법의 일 실시 형태에서, 본 방법은 대상체의 HBV 바이러스 로드를 모니터링하거나 탐지하는 단계를 추가로 포함할 수 있으며, 여기서, 본 방법은 HBV 바이러스가 검출불가능하게 되는 시간까지를 포함하는 기간 동안 실시된다.

투여/투여량/제형

또 다른 양태에서, 하나 이상의 본 개시 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염을 제약상 허용가능한 담체와 함께 포함하는 제약 조성물이 본원에 제공된다.

본 발명의 제약 조성물 중 활성 성분의 실제 투여량 수준은 환자에 대한 독성 없이 특정 환자, 조성물 및 투여 방식에 대해 원하는 치료 반응을 달성하는 데 효과적인 활성 성분의 양이 얻어지도록 변화될 수 있다.

구체적으로, 선택된 투여량 수준은 사용된 특정 화합물의 활성, 투여 시간, 화합물의 배출 속도, 치료 지속 기간, 본 화합물과 병용되는 기타 약물, 화합물 또는 물질, 치료받는 환자의 연령, 성별, 체중, 상태, 종합 건강 및 이전의 병력, 및 의학 분야에 잘 알려진 유사 요인을 비롯한 다양한 요인에 따라 달라질 것이다.

특정 실시 형태에서, 화합물은 투여의 용이성 및 투여량의 균일성을 위해 단위 투여 형태로 제형화된다. 본원에서 사용되는 바와 같이, 단위 투여 형태는 치료받는 환자를 위하여 일원화 투여형으로 적합한 물리적으로 분리된 단위를 지칭하며; 각각의 단위는 필요한 제약적 비히클과 결부되어 원하는 치료 효과를 생성하도록 계산된 소정량의 본 개시 화합물을 포함한다. 본 발명의 단위 투여 형태는 (a) 본 개시 화합물의 독특한 특성 및 달성될 특정 치료 효과, 및 (b) 환자에서 HBV 감염의 치료를 위한 이러한 개시 화합물의 배합/제형화 분야에 내재된 제한에 의해 좌우되고 이에 직접적으로 의존한다.

일 실시 형태에서, 본 발명의 조성물은 하나 이상의 제약상 허용가능한 부형제 또는 담체를 사용하여 제형화된다. 일 실시 형태에서, 본 발명의 제약 조성물은 치료적 유효량의 본 개시 화합물 및 제약상 허용가능한 담체를 포함한다.

일부 실시 형태에서, 본 개시 화합물의 용량은 약 1 mg 내지 약 2,500 mg이다. 일부 실시 형태에서, 본원에 개시된 조성물에서 사용되는 개시 화합물의 용량은 약 10,000 mg 미만, 또는 약 8,000　mg 미만, 또는 약 6,000 mg 미만, 또는 약 5,000 mg 미만, 또는 약 3,000 mg 미만, 또는 약 2,000 mg 미만, 또는 약 1,000 mg 미만, 또는 약 500 mg 미만, 또는 약 200 mg 미만, 또는 약 50 mg 미만이다. 이와 유사하게, 일부 실시 형태에서, 본원에 기술된 바와 같은 제2 화합물(즉, HBV 치료를 위한 또 다른 약물)의 용량은 약 1,000 mg 미만, 또는 약 800 mg 미만, 또는 약 600 mg 미만, 또는 약 500 mg 미만, 또는 약 400 mg 미만, 또는 약 300 mg 미만, 또는 약 200 mg 미만, 또는 약 100 mg 미만, 또는 약 50 mg 미만, 또는 약 40 mg 미만, 또는 약 30 mg 미만, 또는 약 25 mg 미만, 또는 약 20 mg 미만, 또는 약 15 mg 미만, 또는 약 10 mg 미만, 또는 약 5 mg 미만, 또는 약 2 mg 미만, 또는 약 1 mg 미만, 또는 약 0.5 mg 미만, 및 이의 모든 전체적이거나 부분적인 증분이다.

일 실시 형태에서, 본 발명은 단독의 또는 제2 약제와 조합된 치료적 유효량의 개시 화합물을 보유하는 용기; 및 환자에서 HBV 감염의 하나 이상의 증상을 치료, 예방 또는 감소시키기 위해 화합물을 사용하는 것에 대한 설명서를 포함하는 패키징된 제약 조성물에 관한 것이다.

본 발명의 임의의 조성물의 투여 경로는 경구, 코, 직장, 질내, 비경구, 협측, 설하 또는 국소 투여를 포함한다. 본 발명에 사용하기 위한 화합물은 임의의 적합한 경로, 예컨대 경구 또는 비경구, 예를 들어 경피, 경점막(예를 들어, 설하, 혀, (경)협측, (경)요도, 질(예를 들어, 경질 및 질주위), 비강(내) 및 (경)직장), 방광내, 폐내, 십이지장내, 위내, 경막내, 피하, 근육내, 피내, 동맥내, 정맥내, 기관지내, 흡입 및 국소 투여에 의해 투여하기 위한 것으로 제형화될 수 있다.

적합한 조성물 및 투여 형태는 예를 들어 정제, 캡슐, 캐플릿, 환제, 겔 캡, 트로키, 분산액, 현탁액, 용액, 시럽, 과립, 비드, 경피 패치, 겔, 산제, 펠렛, 마그마, 로젠지, 크림, 페이스트, 플라스터, 로션, 디스크, 좌제, 비강 또는 경구 투여용 액체 스프레이, 흡입용 건조 분말 또는 에어로졸형 제형, 방광내 투여용 조성물 및 제형 등을 포함한다. 본 발명에 유용한 제형 및 조성물은 본원에 기술된 특정 제형 및 조성물에 한정되지 않음을 이해해야 한다.

경구 적용을 위해, 정제, 당의정, 리퀴드, 드롭, 좌제 또는 캡슐, 캐플릿 및 겔캡이 특히 적합하다. 경구 사용을 위한 조성물은 당업계에 공지된 임의의 방법에 따라 제조될 수 있으며, 이러한 조성물은 정제의 제조에 적합한 불활성, 비독성의 제약적 부형제로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 약제를 함유할 수 있다. 이러한 부형제는 예를 들어 불활성 희석제, 예컨대 락토스; 과립화제 및 붕해제, 예컨대 옥수수 전분; 결합제, 예컨대 전분; 및 활택제, 예컨대 스테아르산마그네슘을 포함한다. 정제는 비코팅될 수 있거나 또는 우아함을 위하여 또는 활성 성분의 방출의 지연을 위하여 공지된 기술에 의해 코팅될 수 있다. 경구용 제형은 또한 활성 성분이 불활성 희석제와 혼합된 경질 젤라틴 캡슐로서 제공될 수 있다.

비경구 투여를 위해, 본 개시 화합물은 주사 또는 주입용으로, 예를 들어 정맥내, 근육내 또는 피하 주사 또는 주입용으로, 또는 볼루스 용량 또는 연속 주입으로 투여하기 위한 것으로 제형화될 수 있다. 현탁제, 안정화제 또는 분산제와 같은 다른 제형화제를 선택적으로 함유하는, 유성 또는 수성 비히클 중의 현탁액, 용액 또는 에멀젼이 사용될 수 있다.

당업자는 본원에 기술된 특정 절차, 실시 형태, 청구범위 및 실시예에 대한 수많은 등가물을 단지 일상적인 실험을 사용하여 인식하거나 확인할 수 있을 것이다. 이러한 등가물은 본원에 첨부된 청구범위에 의해 커버되고 본 발명의 범주 내에 있는 것으로 간주된다. 예를 들어, 당업계에서 인식되는 대안을 가지고서, 그리고 단지 일상적인 실험을 사용하여, 반응 시간, 반응물 크기/부피 및 실험 시약, 예컨대 용매, 촉매, 압력, 대기 조건, 예를 들어 질소 분위기 및 환원제/산화제를 포함하지만 이에 한정되지 않는 반응 조건의 변경이 본 출원의 범주 내에 있음이 이해되어야 한다.

본원에서 값 및 범위가 제공되는 모든 경우에, 이들 값 및 범위에 포함되는 모든 값 및 범위는 본 발명의 범주 내에 포함됨을 의미하는 것으로 이해되어야 한다. 게다가, 이들 범위에 속하는 모든 값과, 값의 범위의 상한치 또는 하한치가 또한 본 출원에 의해 고려된다.

"포함하는" 또는 "함유하는"과 동의어 "포함하고 있는"이라는 용어는 개방형이며 추가의 언급되지 않은 요소(들), 성분(들) 또는 방법 단계(들)를 배제하지 않는 반면, "~으로 이루어진"이라는 용어는 명시적으로 언급된 것이 아닌 임의의 추가적인 요소, 단계 또는 성분을 제외하는 폐쇄형 용어이다.

용어 "~으로 본질적으로 이루어진"은 부분 개방형 용어이며, 이는 추가의 언급되지 않은 요소(들), 단계(들) 또는 성분(들)이 본 발명의 기본적인 그리고 신규한 특성에 실질적으로 영향을 주지 않는 한 이러한 추가의 언급되지 않은 요소(들), 단계(들) 또는 성분(들)을 배제하지 않는다.

따라서 용어 "포함하는"(또는 "포함하다")은 용어 "~으로 이루어진"("~으로 이루어지다")과, 용어 "~으로 본질적으로 이루어진"("~으로 본질적으로 이루어지다")을 포함한다. 따라서, 본 출원에서 용어 "포함하는"(또는 "포함하다")은, 더 구체적으로 용어 "~으로 이루어진"("~으로 이루어지다") 및 용어 "~으로 본질적으로 이루어진"("~으로 본질적으로 이루어지다")을 포함함을 의미한다.

본 출원의 독자를 돕기 위해 설명은 다양한 단락 또는 섹션으로 분리되었다. 이러한 분리는 소정의 단락 또는 섹션의 요지를 또 다른 단락 또는 섹션의 요지에서 분리하는 것으로 간주되어서는 안 된다. 반대로, 본 설명은 고려될 수 있는 다양한 섹션, 단락 및 문장의 모든 조합을 포함한다.

본원에 인용된 모든 참고 문헌의 각각의 관련 개시 내용이 구체적으로 참고로 포함된다. 하기 실시예는 예시로 제공되는 것으로서, 제한으로 제공되는 것이 아니다.

실시예

이제 본 발명의 방법에 유용한 예시적인 화합물을 아래의 그의 일반적인 제조를 위한 예시적인 합성 스킴 및 하기의 구체적인 실시예를 참조하여 설명할 것이다. 당업자는 본원의 다양한 화합물을 얻기 위해, 원하는 생성물을 생성하기 위하여 적절한 경우 보호를 이용하거나 이용하지 않고서 궁극적으로 원하는 치환체가 반응 스킴을 통하여 운반되도록 출발 물질을 적합하게 선택할 수 있음을 인식할 것이다. 대안적으로, 궁극적으로 원하는 치환체 대신에 반응 스킴을 통해 운반될 수 있고 적절한 경우 원하는 치환체로 대체될 수 있는 적합한 기를 사용하는 것이 필요하거나 바람직할 수 있다. 달리 명시되지 않는 한, 변수는 화학식 I을 참조하여 상기 정의된 바와 같다. 반응은 용매의 융점과 환류 온도 사이, 바람직하게는 0℃와 용매의 환류 온도 사이에서 수행될 수 있다. 반응물을 통상적인 가열 또는 마이크로웨이브 가열을 사용하여 가열할 수 있다. 반응은 또한 용매의 정상 환류 온도보다 높은 온도에서 밀봉 가압 용기에서 수행될 수 있다.

제조 실시예

달리 지시되지 않는 한, LCMS 및 NMR은 하기 일반적 방법 중 하나를 사용하여 수행하였다.

LCMS 및 NMR의 일반적 방법

일반 절차 A:

탈기 장치를 갖춘 2원 펌프(binary pump), 오토샘플러(autosampler), 컬럼 오븐(달리 지시되지 않는 한, 40℃로 설정됨), 및 하기의 각각의 방법에 명시된 바와 같은 컬럼을 포함하는 Agilent 시스템을 사용하여 LCMS 측정을 수행하였다. 상기 컬럼으로부터의 유동물을 나누어 MS 및 UV 분광계에 넣었다. MS 검출기는 전기 분무 이온화 소스와 함께 구성되었다. 질량 스펙트럼을 1.06초/사이클로 100으로부터 1000까지 스캐닝함으로써 획득하였다. 모세관 전압은 포지티브 이온화 모드의 경우 3 kV이고 네가티브 이온화 모드의 경우 2.5 kV였으며, 소스 온도는 100℃에서 유지하였다. 질소를 네뷸라이저 가스로 사용하였다. Agilent ChemStation 데이터 시스템을 사용하여 데이터 획득을 수행하였다.

방법 1

일반 절차 A에 더하여, 품질 제어를 위한 역상 LCMS를 다이오드-어레이 검출기(DAD)가 갖추어진 Agilent 1200에 의해 수행하였으며, Sunfire C18 컬럼 (5 μm, 4.6 x 50 mm)에서 실시하였고, 이때 유량은 1.5 ml/분이었다. 두 이동상(이동상 A1: 물 중 0.02% 암모늄아세테이트; 이동상 A2: 물 중 0.1% TFA; 이동상 B1: 아세토니트릴)을 이용하여 4.0분 내에 95% A1 또는 A2 및 5% B로부터 5% A1 또는 A2 및 95% B까지의 구배 조건을 실행하였다. 1~10 μl의 주입 부피를 사용하였다.

방법 2

일반 절차 A에 더하여, 반응을 모니터링하기 위한 역상 LCMS를 가변 파장 검출기(VWD)가 갖추어진 Agilent 1260에 의해 수행하였으며, Dikma Diamonsil plus C18 컬럼 (5 μm, 4.6 x 30 mm)에서 실시하였고, 이때 유량은 2.0 ml/분이었다. 두 이동상 (이동상 A1: H₂O+0.02% 암모늄아세테이트+5%ACN; 이동상 A2: H₂O+0.1% TFA+5%ACN; 이동상 B: 아세토니트릴)을 이용하여 1.4분 내에 95% A1 또는 A2 및 5% B로부터 5% A1 또는 A2 및 95% B까지의 구배 조건을 실행하였다. 1~5 μl의 주입 부피를 사용하였다.

방법 3

일반 절차 A에 더하여, 반응을 모니터링하기 위한 역상 LCMS를 Agilent 6120에 의해 수행하였다(고정상: Sunfire C18 2.5 μm, 3.0×30 mm. 이동상: 물 중 0.01% FA 용액, 및 ACN, 구배: 5% ACN으로부터 2.5분 내에 95%까지 및 95%에서 1분 동안 유지).

일반 절차 B

탈기 장치를 갖춘 4원 펌프, 오토샘플러, 포토-다이오드 어레이 검출기(PDA) 및 하기의 각각의 방법에 명시된 바와 같은 컬럼을 포함하는 UPLC(Ultra Performance Liquid Chromatography) Acquity (Waters) 시스템을 사용하여 LCMS 측정을 수행하였으며, 컬럼은 40℃의 온도에서 유지된다. 컬럼으로부터의 유동물은 MS 검출기로 가도록 하였다. MS 검출기는 전기 분무 이온화 소스와 함께 구성되었다. 질량 스펙트럼을 0.25초/사이클로 100으로부터 1000까지 스캐닝함으로써 획득하였다. 모세관 니들 전압은 3 kV였으며, 소스 온도를 120℃에서 유지하였다. 콘 전압은 포지티브 이온화 모드의 경우 30 V이고 네가티브 이온화 모드의 경우 30 V였다. 질소를 네뷸라이저 가스로 사용하였다. Waters-Micromass MassLynx-OpenLynx 데이터 시스템을 사용하여 데이터 획득을 수행하였다.

유량을 0.5 ml/분으로 하여 Waters Acquity BEH(가교된 에틸실록산/실리카 하이브리드) C18 컬럼 (1.7 μm, 2.1×50 mm)에서 역상 UPLC를 실시하였다. 두 이동상 (이동상 A: 95% (H₂O+0.02% 암모늄아세테이트+5%ACN) ; 이동상 B: 아세토니트릴; 이동상 C: 95% (H₂O+0.1% TFA+5%ACN)을 이용하여 1분 내에 95% A 또는 C 및 5% B로부터 5% A 또는 C 및 95% B까지의 구배 조건을 실행하였다. 0.5 ml의 주입 부피를 사용하였다.

일반 절차 C

역상 분취는 탈기 장치가 없는 2개의 유닛 펌프, UV/Vis 검출기 및 하기의 각각의 방법에 명시된 바와 같은 컬럼을 포함하는 시스템을 사용하여 수행하였다. 상기 컬럼으로부터의 유동물을 나누어 UV 분광계에 넣었다.

방법 1

일반 절차 C에 더하여, 유량을 15~20 ml/분으로 하여 오토샘플러, Xbridge 분취용 C18 OBD 컬럼 (5 μm, 19 x 150 mm)을 갖춘 Gilson에서 분취용 역상 LC를 실시하였다. 두 이동상 (이동상 A1: H₂O (0.1% 중탄산암모늄); 이동상 A2: H₂O (수산화암모늄); 이동상 A3: H₂O (0.1% TFA); 이동상 B: 아세토니트릴)을 이용하여 95% A1 또는 A2 또는 A3 및 5% B로부터 20% A1 또는 A2 또는 A3 및 80% B까지의 구배 조건을 실행하였다. 데이터 획득을 Trilution LC 데이터 시스템으로 수행하였다.

방법 2

일반 절차 C에 더하여, 유량을 30~100 ml/분으로 하여 역상 SW-5231 C18 컬럼 (40~60 μm, 120 Å, 18 g, 40 g, 130 g)을 이용하여 자동 중압 플래시 분리- Compact Purifier(Lisure Science Ltd.)에서 역상 분취를 실시하였다. 두 이동상 (이동상 A1: H₂O (0.1% 중탄산암모늄); 이동상 A2: H₂O (수산화암모늄); 이동상 A3: H₂O (0.1% 염산); 이동상 A4: H₂O; 이동상 B: 아세토니트릴)을 이용하여 95% A1 또는 A2 또는 A3 또는 A4 및 5% B로부터 5% A1 또는 A2 또는 A3 또는 A4 및 95% B까지의 구배 조건을 실행하였다. 데이터 획득을 Compact 데이터 시스템으로 수행하였다.

방법 3

일반 절차 C에 더하여, 유량을 20 ml/분으로 하여 오토샘플러, Xbridge 분취용 C18 OBD 컬럼 (5 um, 19*150 mm)을 갖춘 Waters에서 분취용 역상 LC를 실시하였다. 두 이동상 (이동상 A: H₂O (0.1% 중탄산암모늄); 이동상 B: 아세토니트릴)을 이용하여 95% A 및 5% B로부터 50% A 및 50% B까지의 구배 조건을 실행하였다. 데이터 획득을 Waters MassLynx 데이터 시스템으로 수행하였다.

일반 절차 D

오토샘플러, 컬럼 오븐(달리 지시되지 않는 한, 주위 온도로 설정됨), 다이오드-어레이 검출기(DAD) 및 하기의 각각의 방법에 명시된 바와 같은 컬럼을 포함하는 시스템을 사용하여 키랄 측정을 수행하였다. 상기 컬럼으로부터의 유동물을 나누어 UV 분광계에 넣었다. LC 스펙트럼은 중수소 램프를 이용하여 190 nm로부터 400 nm까지, 텅스텐 램프를 이용하여 401 nm로부터 800 nm까지(1.2 nm의 슬릿 폭 사용) 스캐닝함으로써 획득하였다. Daicel Chiral technologies (China) Ltd.의 키랄 chiralpak 또는 chiralcel 컬럼은 상이한 스터핑(stuffing)들에 따라 다음의 2가지 타입으로 나뉜다: 타입 1: IA, IB, IC, ID, IE, IF, IG, IH; 타입 2: AD-H, AS-H, OD-H, OJ-H.

방법 1:

일반 절차 D에 더하여, 키랄 분석을 위하여 유량을 1.0 ml/분으로 하여 키랄 컬럼 (5 um, 4.6*250 mm)에서, 또는 키랄 분취를 위하여 유량을 10~20 ml/분으로 하여 키랄 컬럼 (5 um, 20*250 mm)에서 탈기 장치를 갖춘 4원 펌프를 갖춘 Agilent 1200 또는 Shimadzu LC-20A에서 키랄 HPLC를 실시하였다. 이동상들은 MeOH, EtOH, Hex, IPA 등의 사이에서 상이한 비이다. 데이터 획득을 Agilent ChemStation 또는 Shimadzu LabSolutions 데이터 시스템으로 수행하였다.

방법 2:

일반 절차 D에 더하여, 유량을 2~3 ml/분으로 하여 컬럼 오븐(40℃)을 갖춘 Waters-TharSFC에서 키랄 분석을 실시하고, 데이터 획득을 TharSFC Chrom Scope 데이터 시스템으로 수행하였다. 유량을 45~60 ml/분으로 하여 Waters-SFC-80에서 키랄 분취를 실시하고, 데이터 획득을 Waters-TharSFC SuperChrom 데이터 시스템으로 수행하였다. 이동상은 CO₂이고, MeOH, EtOH를 공용매로서 사용할 수 있다.

일반 절차 E

하기 NMR 실험은 주위 온도에서, 내부 중수소 락(lock)을 사용하고 BBO 400 MHz S1 5 mm(Z-구배); PLUS(²H, ¹H, BBF) 프로브 헤드(400 MHz의 경우) 및 DUL 300 MHz S1 5 mm Z-구배(²H, ¹H, ¹³C) 프로브 헤드(300 MHz의 경우)를 갖춘 NMR 분광계를 사용하여 실시하였다. 화학적 이동(δ)은 백만분율(ppm) 단위로 기록된다.

방법 1:

일반 절차 E에 더하여, Bruker Avance Ⅲ 400 MHz 분광계를 사용하여 NMR 실험을 측정하였다.

방법 2:

일반 절차 E에 더하여, Bruker Avance Neo 400 MHz 분광계를 사용하여 NMR 실험을 측정하였다.

방법 3:

일반 절차 E에 더하여, ZKNJ BIXI-1 300 MHz 분광계를 사용하여 NMR 실험을 측정하였다.

방법 4:

일반 절차 E에 더하여, Bruker Ascend 400 MHz 분광계를 사용하여 NMR 실험을 측정하였다.

이제 본 발명의 방법에 유용한 예시적인 화합물을 아래의 그의 일반적인 제조를 위한 예시적인 합성 스킴 및 하기의 구체적인 실시예를 참조하여 설명할 것이다.

일반 스킴

일반 화학식 I의 화합물의 일반적인 합성이 일반 스킴에 설명되어 있다. 중간체 I-1을 NaOAc와 같은 염기의 존재하에 알데히드 II, 아세토아세테이트 III 및 아미딘 IV의 축합에 의해 제조할 수 있다. 라세미 화합물 I을 SFC에 의해 분리하여 2가지의 거울상 이성질체를 제공할 수 있다. 화합물 I-1은 N-브로모숙신이미드와 같은 브롬화 시약을 사용하여 화합물 I-2로 전환시켰다. 트리에탄올아민과 같은 염기의 존재 하에 화합물 I-2와 화합물 V를 커플링시켜 화합물 I을 생성한다.

중간체 H1: 에틸 4-(2- 클로로 -3- 플루오로페닐 )-6- 메틸 -2-(티아졸-2-일)-1,4-디히드로피리미딘-5-카르복실레이트

이소프로판올 (40 mL) 중 2-클로로-3-플루오로벤즈알데히드 (8.8 g, 55.7 mmol), 에틸 3-옥소부타노에이트 (7.24 g, 55.7 mmol)의 용액에 피페리딘 (473 mg, 5.57 mmol) 및 AcOH (334 mg, 5.57 mmol)를 첨가하였다. 실온에서 4시간 동안 교반시킨 후, 상기 혼합물에 티아졸-2-카르복스이미드아미드 (6.4 g, 39 mmol) 및 트리에틸아민 (5.62 g, 55.7 mmol)을 실온에서 15분에 걸쳐 첨가하였다. 반응 혼합물을 75℃에서 12시간 동안 교반시켰다. 이것을 실온까지 냉각시키고, 에틸 아세테이트로 추출하고, 염수로 세척하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피 (석유 에테르:에틸 아세테이트 = 20:1)로 정제하여 표제 화합물 (5.45 g, ¹H NMR에 의하면 95%의 순도, 26%의 수율)을 황색 고형물로서 제공하였다. LC-MS (ESI): RT = 1.74분, 질량: C₁₇H₁₅ClFN₃O₂S에 대한 이론치: 379.1, m/z 실측치: 380.1 [M+H]⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.84 - 7.80 (m, 1.7H), 7.50 (d, J = 3.6 Hz, 0.3H), 7.47 (s, 0.3H), 7.44 (d, J = 3.2 Hz, 0.7H), 7.23 - 7.14 (m, 2H), 7.09 - 7.01 (m, 1H), 6.27 (s, 0.7H), 6.14 (d, J = 2.4 Hz, 0.3H), 4.13 - 3.98 (m, 2H), 2.57 (s, 0.7H), 2.52 (s, 2.3H), 1.13 - 1.10 (m, 3H).

라세미 혼합물 에틸 4-(2-클로로-3-플루오로페닐)-6-메틸-2-(티아졸-2-일)-1,4-디히드로피리미딘-5-카르복실레이트 H1 (5.45 g, 95%의 순도, 13.7 mmol)을 키랄 분리 (분리 조건: 컬럼: Chiralpak IC 5 μm 20 * 250 mm; 이동상: Hex:EtOH:DEA = 95:5:0.3 (28 mL/분), 온도: 30℃, 파장: 254 nm)로 분리하여 표제 화합물 H1-A (2.5 g, ¹HNMR에 의하면 90%의 순도, 46%의 수율, 100% ee) 및 H1-B (2.48 g, ¹HNMR에 의하면 90%의 순도, 46%의 수율, 92.1% ee)를 황색 고형물로서 제공하였다.

H1-A: LC-MS (ESI): R_T= 3.886분, 질량: C₁₇H₁₅ClFN₃O₂S에 대한 이론치: 379.06, m/z 실측치: 380.1 [M+H]⁺. 키랄 분석(컬럼: Chiralpak IA 5 μm 4.6 * 250 mm; 이동상: Hex:EtOH:DEA = 90:10:0.2 (1.0 mL/분); 온도: 30℃; 파장: 254 nm, R_T = 7.438분). ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.84 - 7.80 (m, 1.7H), 7.51 - 7.44 (m, 1.3H), 7.22 - 7.14 (m, 2H), 7.09 - 7.01 (m, 1H), 6.27 (s, 0.7H), 6.14 (s, 0.3H), 4.05 - 4.00 (m, 2H), 2.57 (s, 0.7H), 2.52 (s, 2.3H), 1.13 - 1.10 (m, 3H).

H1-B: LC-MS (ESI): R_T= 3.887분, 질량: C₁₇H₁₅ClFN₃O₂S에 대한 이론치: 379.06, m/z 실측치: 380.1 [M+H]⁺. 키랄 분석(컬럼: Chiralpak IA 5 μm 4.6 * 250 mm; 이동상: Hex:EtOH:DEA = 90:10:0.2 (1.0 mL/분); 온도: 30℃; 파장: 254 nm, R_T = 6.903분). ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.84 - 7.80 (m, 1.7H), 7.51 - 7.43 (m, 1.3H), 7.22 - 7.14 (m, 2H), 7.09 - 7.01 (m, 1H), 6.27 (s, 0.7H), 6.14 (s, 0.3H), 4.10 - 3.98 (m, 2H), 2.57 (s, 0.7H), 2.51 (s, 2.3H), 1.13 - 1.10 (m, 3H).

중간체 H1-1A: ( R* )-에틸 6-( 브로모메틸 )-4-(2- 클로로 -3- 플루오로페닐 )-2-(티아졸-2-일)-1,4-디히드로피리미딘-5-카르복실레이트

사염화탄소 (5 mL) 중 (R*)-에틸 4-(2-클로로-3-플루오로페닐)-6-메틸-2-(티아졸-2-일)-1,4-디히드로피리미딘-5-카르복실레이트 H1-A (300 mg, 90%의 순도, 0.711 mmol)의 용액에 N-브로모숙신이미드 (120 mg, 0.674 mmol)를 첨가하였다. 60℃에서 1시간 동안 교반시킨 후, 반응 혼합물을 농축시켜 잔사를 제공하고, 이를 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피 (석유 에테르:에틸 아세테이트 = 20:1에서 10:1까지)로 정제하여 표제 화합물 (240 mg, HNMR에 의하면 90%의 순도, 66%의 수율)을 황색 고형물로 제공하였다. LC-MS (ESI): R_T = 1.852분, 질량: C₁₇H₁₄BrClFN₃O₂S에 대한 이론치: 456.9, m/z 실측치: 457.9 [M+H]⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 8.26 (s, 0.3H), 7.84 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 7.53 - 7.46 (m, 1.7H), 7.24 - 7.14 (m, 2H), 7.09 - 7.01 (m, 1H), 6.26 (s, 0.3H), 6.17 (s, 0.7H), 4.92 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.76 (d, J = 11.2 Hz, 0.3H), 4.60 (d, J = 8.0 Hz, 0.7H), 4.12 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 1.14 (t, J = 11.2 Hz, 3H).

중간체 H2: 에틸 4-(3- 플루오로 -2- 메틸페닐 )-6- 메틸 -2-(티아졸-2-일)-1,4-디히드로피리미딘-5-카르복실레이트

메탄올 (50 mL) 중 3-플루오로-2-메틸벤즈알데히드 (4.00 g, 28.9 mmol), 에틸 아세토아세테이트 (3.77 g, 28.9 mmol) 및 티아졸-2-카르복스이미드아미드 히드로클로라이드 (4.74 g, 28.9 mmol)의 혼합물에 아세트산나트륨 (2.37 g, 28.9 mmol)을 실온에서 첨가하였다. 80℃에서 하룻밤 교반시킨 후, 반응 혼합물을 실온까지 냉각시키고, 농축시켜 잔사를 제공하고, 이를 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피 (석유 에테르:에틸 아세테이트 = 10:1에서 1:1까지)로 정제하여 표제 화합물 (6.00 g, 58%의 수율)을 황색 고형물로 제공하였다. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ 9.86 (s, 0.8H), 9.52 (d, J = 2.8 Hz, 0.2H), 8.00 - 7.98 (m, 0.4H), 7.96 (d, J = 3.2 Hz, 0.8H), 7.88 (d, J = 2.8 Hz, 0.8H), 7.20 - 7.15 (m, 1.2H), 7.06 - 6.99 (m, 1.8H), 5.83 (s, 0.8H), 5.73 (d, J = 3.2 Hz, 0.2H), 3.99 - 3.93 (m, 2H), 2.48 (s, 2.4H), 2.45 (s, 1.2H), 2.44 (s, 1.2H), 2.41 (s, 0.3H), 2.40 (s, 0.3H), 2.37 (s. 0.6H), 1.08 - 1.02 (m, 3H).

중간체 H2를 키랄 분취용 HPLC (분리 조건: 컬럼: Chiralpak OJ-H 5 μm 20 * 250 mm; 이동상: Hex: EtOH:DEA = 90:10: 0.3 (15 mL/분); 온도: 30℃; 파장: 214 nm)로 분리하여 중간체 H2-A 및 중간체 H2-B를 황색 고형물로 수득하였다.

중간체 H2-A: 키랄 분석 (컬럼: Chiralpak OJ-H 5 μm 4.6 * 250 mm; 이동상: Hex:EtOH:DEA = 85:15: 0.2 (1.0 mL/분); 온도: 30℃; 파장: 230 nm, R_T = 7.251분). H2-A는 하기 화학적 분해에 의해 절대 S 입체화학 인증을 받았으며, 이는 보고된 데이터와 일치한다 (문헌[J. Med . Chem .,　2017,　60　(8), pp 3352-3371]). 선광도: [a]_D ²⁰ = 24^o (c 0.10, MeOH).

중간체 H2- B: 키랄 분석 (컬럼: Chiralpak OJ-H 5 μm 4.6 * 250 mm; 이동상: Hex:EtOH:DEA = 85:15:0.2 (1.0 mL/분); 온도: 30℃; 파장: 230 nm, R_T = 9.072분). 선광도: [a]_D ²⁰ = 35^o (c 0.10, MeOH).

중간체 H2-1A: (S)-에틸 6-( 브로모메틸 )-4-(3- 플루오로 -2- 메틸페닐 )-2-(티아졸-2-일)-1,4-디히드로피리미딘-5-카르복실레이트

사염화탄소 (300 mL) 중 (S)-에틸 4-(3-플루오로-2-메틸페닐)-6-메틸-2-(티아졸-2-일)-1,4-디히드로피리미딘-5-카르복실레이트 H2-A (10 g, 99%의 순도, 27.6 mmol)의 용액에 N-브로모 숙신이미드 (4.9 g, 27.5 mmol)를 질소 분위기 하에 실온에서 첨가하였다. 상기 분위기 하에 실온에서 하룻밤 환류시킨 후, 혼합물을 감압 하에 농축시켜 잔사를 제공하고, 이를 에틸 아세테이트 (100 mL)에서 희석시키고, 물 (50 mL)로 2회 세척하고, 그 후, 합한 수성 층을 에틸 아세테이트 (50 mL)로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 물 (20 mL) (2회) 및 염수 (20 mL)로 세척하고, Na₂SO_4(s)로 건조시키고, 여과시켰다. 여과액을 감압 하에 농축시켜 잔사를 생성하고, 이를 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피 (석유 에테르:에틸 아세테이트 = 10:1에서 5:1까지)로 정제하여 표제 화합물 (6.5 g, NMR에 의하면 95%의 순도, 51%의 수율)을 황색 고형물로 제공하였다. LC-MS (ESI): R_T = 1.84분, 질량: C₁₈H₁₇BrFN₃O₂S에 대한 이론치: 437.0, m/z 실측치: 440.0 [M+H]⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 8.22 (s, 0.5H), 7.82 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 7.53 (s, 0.4H), 7.44 (s, 0.6H), 7.25 - 7.08 (m, 2.5H), 6.96 - 6.92 (s, 1H), 5.99 (s, 0.6H), 5.93 (s, 0.4H), 4.92 - 4.77 (m, 1.6H), 4.67 - 4.65 (m, 0.4H), 4.13 - 4.07 (m, 2H), 2.53 (s, 1.7H), 2.41 (s, 1.3H), 1.14 (t, J = 7.2 Hz, 3H). 선광도: [a]_D ²⁰ + 0.093^o (c 0.10, MeOH).

중간체 H3: 메틸 4-(2- 브로모 -4- 플루오로페닐 )-6- 메틸 -2-(티아졸-2-일)-1,4-디히드로피리미딘-5-카르복실레이트

메탄올 (10 mL) 중 메틸 3-옥소부타노에이트 (1.0 g, 8.61 mmol), 2-브로모-4-플루오로벤즈알데히드 (1.75 g, 8.62 mmol) 및 티아졸-2-카르복스이미드아미드 히드로클로라이드 (1.41 g, 8.62 mmol)의 용액에 아세트산나트륨 (706 mg, 8.61 mmol)을 질소 분위기 하에 실온에서 첨가하였다. 80℃에서 하룻밤 교반시킨 후, 혼합물을 실온까지 냉각시키고, 여과시켰다. 여과액을 감압 하에 농축시켜 잔사를 제공하고, 이를 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피 (석유 에테르:에틸 아세테이트:테트라히드로푸란 = 10:1:1)로 정제하고, 그 후 추가로 C18 컬럼 (아세토니트릴:물 = 20%에서 95%까지)으로 정제하여 표제 화합물 (1.80 g, ¹H NMR에 의하면 90%의 순도, 46%의 수율)을 황색 고형물로 제공하였다. ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.89 - 7.75 (m, 1.7H), 7.62 - 7.55 (m, 0.3H), 7.49 - 7.40 (m, 1H), 7.33 - 7.29 (m, 2H), 7.00 - 6.94 (m, 1H), 6.15 (s, 0.7H), 6.03 (s, 0.3H), 3.61 (s, 3H), 2.52 (s, 3H).

메틸 4-(2-브로모-4-플루오로페닐)-6-메틸-2-(티아졸-2-일)-1,4-디히드로피리미딘-5-카르복실레이트 H3의 라세미 혼합물 (1.80 g, 90%의 순도, 3.95 mmol)을 키랄 분취용 HPLC (컬럼: Chiralpak IG 5 μm 20 mm * 250 mm; 이동상: CO₂: MeOH = 75:25 (50 g/분); 컬럼 온도: 40℃; 파장: 230 nm, 배압: 100 bar)로 분리하여 표제 화합물 H3-A (850 mg, ¹H NMR에 의하면 90%의 순도, 47%의 수율, 99.6% ee) 및 H3-B (850 mg, ¹H NMR에 의하면 90%의 순도, 47%의 수율, 99.4% ee)를 황색 고형물로 수득하였다.

H3-A: LC-MS (ESI): R_T = 1.717분, 질량: C₁₆H₁₃BrFN₃O₂S에 대한 이론치: 409.0, m/z 실측치: 410.0 [M+H]⁺. 키랄 분석(컬럼: Chiralpak IG 5 μm 4.6 * 250 mm; 이동상: CO₂:MeOH = 75:25 (3 g/분); 온도: 40℃; 파장: 230 nm; 배압: 100 bar; R_T= 3.92분). ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.87 - 7.84 (m, 1H), 7.80 (d, J = 3.2 Hz, 0.7H), 7.57 (br s, 0.3H), 7.51 (d, J = 3.2 Hz, 0.3H), 7.44 (d, J = 3.2 Hz, 0.7H), 7.34 - 7.29 (m, 2H), 7.01 - 6.93 (m, 1H), 6.16 (s, 0.7H), 6.02 (d, J = 2.4 Hz, 0.3H), 3.62 (s, 1H), 3.60 (s, 2H), 2.57 (s, 1H), 2.51 (s, 2H).

H3-B: LC-MS (ESI): R_T = 1.713분, 질량: C₁₆H₁₃BrFN₃O₂S에 대한 이론치: 409.0, m/z 실측치: 410.0 [M+H]⁺. 키랄 분석(컬럼: Chiralpak IG 5 μm 4.6 * 250 mm; 이동상: CO₂:MeOH = 75:25 (3 g/분); 온도: 40℃; 파장: 230 nm; 배압: 100 bar, R_T = 4.92분). ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.88 - 7.83 (m, 1H), 7.80 (d, J = 3.2 Hz, 0.7H), 7.58 (br s, 0.3H), 7.50 (d, J = 3.2 Hz, 0.3H), 7.44 (d, J = 3.2 Hz, 0.7H), 7.34 - 7.29 (m, 2H), 7.01 - 6.93 (m, 1H), 6.16 (s, 0.7H), 6.02 (d, J = 2.0 Hz, 0.3H), 3.62 (s, 1H), 3.60 (s, 2H), 2.57 (s, 1H), 2.51 (s, 2H).

중간체 H3-1A: ( R* )- 메틸 4-(2- 브로모 -4- 플루오로페닐 )-6-( 브로모메틸 )-2-(티아졸-2-일)-1,4-디히드로피리미딘-5-카르복실레이트

퍼클로로메탄 (10 mL) 중 (R*)-메틸 4-(2-브로모-4-플루오로페닐)-6-메틸-2-(티아졸-2-일)-1,4-디히드로피리미딘-5-카르복실레이트 H3-A (300 mg, 90%의 순도, 0.658 mmol)의 용액에 1-브로모피롤리딘-2,5-디온 (129 mg, 0.725 mmol)을 질소 분위기 하에 실온에서 첨가하였다. 실온에서 하룻밤 교반시킨 후, 상기 혼합물을 실온까지 냉각시키고, 물 (20 mL)로 희석시키고, 디클로로메탄 (20 mL)으로 추출하였다 (3회). 합한 유기 층을 염수 (20 mL)로 세척하고, Na₂SO_4(s)로 건조시키고, 여과시켰다. 여과액을 농축시키고, 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피 (석유 에테르:에틸 아세테이트 = 20:1에서 10:1까지)로 정제하여 표제 화합물 (210 mg, ¹H NMR에 의하면 90%의 순도, 59%의 수율)을 황색 고형물로 제공하였다. ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.85 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 7.52 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 7.40 - 7.36 (m, 1H), 7.34 - 7.32 (m, 1H), 7.04 - 6.99 (m, 1H), 6.09 (s, 1H), 4.95 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 4.63 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 3.67 (s, 3H).

중간체 S1의 제조

중간체 S1-2: tert -부틸 2-(3- 에톡시 -2,2-디메틸-3- 옥소프로필 )-8a- 메틸 -1,3-디옥소헥사히드로이미다조[1,5-a]피라진-7(1H)-카르복실레이트

테트라히드로푸란 (30 mL) 중 (S)-tert-부틸 2-(3-에톡시-2,2-디메틸-3-옥소프로필)-1,3-디옥소헥사히드로이미다조[1,5-a]피라진-7(1H)-카르복실레이트 S1-1 (3.00 g, 7.04 mmol, Cas# 2126690-40-0)의 용액에 THF (10.8 mL, 10.8 mmol) 중 1 M 리튬 비스(트리메틸실릴)아미드를 질소 분위기 하에 -78℃에서 첨가하고, 이 온도에서 1시간 동안 교반시켰다. 요오도메탄 (4.00 g, 28.2 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 25℃에서 추가 16시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 포화 염화암모늄 (50 mL) 적가에 의해 켄칭하였다. 유기 상을 분리하고, 수성 층을 에틸 아세테이트 (20 mL)로 3회 추출하였다. 합한 유기 상을 Na₂SO_4(s)로 건조시키고, 여과시켰다. 여과액을 농축시켜 잔사를 제공하고, 이를 컬럼 크로마토그래피 (석유 에테르:에틸 아세테이트 = 10:1에서 4:1까지)로 정제하여 표제 화합물 (2.61 g, 84%의 수율)을 황색 오일로 제공하였다. LC-MS (ESI): R_T = 1.653분, 질량: C₁₉H₃₁N₃O₆에 대한 이론치: 397.2, m/z 실측치: 398.2 [M+H]⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 4.29 - 4.07 (m, 4H), 4.01 (dd, J = 14.0, 3.6 Hz, 1H), 3.69 (d, J = 14.0 Hz, 1H), 3.65 (d, J = 14.0 Hz, 1H), 3.11 - 2.99 (m, 1H), 2.85 - 2.62 (m, 2H), 1.48 (s, 9H), 1.45 (s, 3H), 1.28 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 1.21 (s, 6H).

중간체 S1-3: tert -부틸 2-(3- 에톡시 -2,2-디메틸-3- 옥소프로필 )-8a- 메틸 -3-옥소헥사히드로이미다조[1,5-a]피라진-7(1H)-카르복실레이트

테트라히드로푸란 (6 mL) 중 tert-부틸 2-(3-에톡시-2,2-디메틸-3-옥소프로필)-8a-메틸-1,3-디옥소헥사히드로이미다조[1,5-a]피라진-7(1H)-카르복실레이트 S1-2 (2.61 g, 5.91 mmol)의 용액에 보론 트리플루오라이드 에테레이트 (168 mg, 1.18 mmol)를 0℃ ~ 5℃에서 첨가하고, 이어서 1 M 보란-테트라히드로푸란 복합체 (12 mL, 12 mmol)를 5℃ ~ 10℃에서 10분에 걸쳐 서서히 첨가하였다. 반응 혼합물을 질소 분위기 하에 20℃에서 추가 16시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 (50 mL) 및 3 중량% 수성 탄산나트륨 (30 mL)으로 켄칭하고, 30분 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 분리하고, 수성 층을 에틸 아세테이트 (30 mL)로 3회 추출하였다. 합한 유기 상을 Na₂SO_4(s)로 건조시키고, 여과시켰다. 여과액을 농축시켜 잔사를 제공하고, 이를 컬럼 크로마토그래피 (석유 에테르:에틸 아세테이트 = 10:1에서 7:3까지)로 정제하여 표제 화합물 (660 mg, 26%의 수율)을 무색 오일로 제공하였다. LC-MS (ESI): R_T = 1.630분, 질량: C₁₉H₃₃N₃O₅에 대한 이론치: 383.2, m/z 실측치: 384.2 [M+H]⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 4.15 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 4.07 - 3.88 (m, 2H), 3.72 (dd, J = 13.6, 3.2 Hz, 1H), 3.45 (d, J = 14.4 Hz, 1H), 3.27 (d, J = 14.0 Hz, 1H), 3.10 - 2.98 (m, 3H), 2.90 - 2.62 (m, 2H), 1.46 (s, 9H), 1.29 - 1.26 (m, 6H), 1.21 (s, 3H), 1.20 (s, 3H).

라세미 S1-3 (500 mg, 1.17 mmol)를 키랄 분취용 HPLC (컬럼: Chiralpak IG 5 μm 20 * 250 mm; 이동상: MeOH: EtOH = 60:40 (18 mL/분); 온도: 30℃; 파장: 214 nm)로 분리하여 표제 화합물 S1-3A (210 mg, 100% ee)를 백색 고형물로 제공하고 표제 화합물 S1-3B (220 mg, 100% ee)를 백색 고형물로 제공하였다.

중간체 S1-3A: LC-MS (ESI): R_T = 1.634분, 질량: C₁₉H₃₃N₃O₅에 대한 이론치: 383.2, m/z 실측치: 384.2[M+H]⁺. 키랄 분석(컬럼: Chiralpak IG 5 μm 4.6 * 250 mm; 이동상: MeOH: EtOH = 50:50 (1.0 mL/분); 온도: 30℃; 파장: 230 nm, R_T = 5.721분). ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 4.14 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 4.09 - 3.81 (m, 2H), 3.71 (d, J = 13.2 Hz, 1H), 3.45 (d, J = 14.0 Hz, 1H), 3.26 (d, J = 14.0 Hz, 1H), 3.10 - 2.97 (m, 3H), 2.90 - 2.61 (m, 2H), 1.46 (s, 9H), 1.29 - 1.26 (m, 6H), 1.21 (s, 3H), 1.20 (s, 3H).

중간체 S1-3B: 키랄 분석 (컬럼: Chiralpak IG 5 μm 4.6 * 250 mm; 이동상: MeOH: EtOH = 50:50 (1.0 mL/분); 온도: 30℃; 파장: 230 nm, R_T = 12.205분). LC-MS (ESI): R_T = 1.660분, 질량: C₁₉H₃₃N₃O₅에 대한 이론치: 383.2, m/z 실측치: 384.3[M+H]⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 4.15 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 4.08 - 3.78 (m, 2H), 3.71 (d, J = 13.6 Hz, 1H), 3.45 (d, J = 14.4 Hz, 1H), 3.26 (d, J = 14.0 Hz, 1H), 3.10 - 2.98 (m, 3H), 2.90 - 2.60 (m, 2H), 1.46 (s, 9H), 1.29 - 1.26 (m, 6H), 1.21 (s, 3H), 1.20 (s, 3H).

중간체 S1- 4: 3 -(7-( tert - 부톡시카르보닐 )-8a- 메틸 -3- 옥소헥사히드로이미다조[1,5-a]피라진 -2(3H)-일)-2,2-디메틸프로판산

메탄올 (4 mL) 중 tert-부틸 2-(3-에톡시-2,2-디메틸-3-옥소프로필)-8a-메틸-3-옥소헥사히드로이미다조[1,5-a]피라진-7(1H)-카르복실레이트 S1-3 (240 mg, 0.563 mmol)의 용액에 물 (1 mL) 중 수산화나트륨 (68 mg, 1.7 mmol)을 첨가하였다. 25℃에서 16시간 동안 교반시킨 후, 반응 혼합물을 물 (10 mL)로 희석시키고, 에틸 아세테이트 (5 mL)로 추출하였다. 수성 층을 3 M 히드로클로라이드 수용액으로 pH 3 ~ 4까지 산성화하고, 에틸 아세테이트 (10 mL)로 3회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (5 mL)로 세척하고, Na₂SO_4(S)로 건조시키고, 여과시켰다. 여과액을 농축시켜 표제 화합물 (180 mg, 81%의 수율)을 백색 고형물로 제공하였다. LC-MS (ESI): R_T = 1.161분, 질량: C₁₇H₂₉N₃O₅에 대한 이론치: 355.2, m/z 실측치: 356.2 [M+H]⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 4.18 - 3.81 (m, 2H), 3.72(d, J = 12.8 Hz, 1H), 3.49 (d, J = 14.0 Hz, 1H), 3.28 (d, J = 14.0 Hz, 1H), 3.17 (s, 2H), 3.02 (t, J = 11.6 Hz, 1H), 2.88 - 2.65 (m, 2H), 1.46 (s, 9H), 1.31 (s, 3H), 1.24 (s, 6H).

중간체 S1-4A: 3-(7-( tert - 부톡시카르보닐 )-8a- 메틸 -3- 옥소헥사히드로이미다조[1,5-a]피라진 -2(3H)-일)-2,2-디메틸프로판산

S1-4과 동일한 조건을 사용하여 S1-3A로부터 S1-4A를 제조하였다. LC-MS (ESI): R_T = 1.175분, 질량: C₁₇H₂₉N₃O₅에 대한 이론치: 355.2, m/z 실측치: 356.2 [M+H]⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 4.15 - 3.79 (m, 2H), 3.72 (dd, J = 13.6, 3.2 Hz, 1H), 3.49 (d, J = 14.4 Hz, 1H), 3.27 (d, J = 14.4 Hz, 1H), 3.17 (s, 2H), 3.02 (t, J = 11.2 Hz, 1H), 2.90 - 2.62 (m, 2H), 1.46 (s, 9H), 1.31 (s, 3H), 1.25 (s, 3H), 1.24 (s, 3H).

중간체 S1: 2,2-디메틸-3-(8a- 메틸 -3- 옥소헥사히드로이미다조[1,5-a]피라진 -2(3H)-일)프로판산 히드로클로라이드

에틸 아세테이트 중 2 M 히드로클로라이드 (4 mL) 중 3-(7-(tert-부톡시카르보닐)-8a-메틸-3-옥소헥사히드로이미다조[1,5-a]피라진-2(3H)-일)-2,2-디메틸프로판산 S1-4 (180 mg, 0.456 mmol)의 용액을 25℃에서 1시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 농축시켜 표제 화합물 (120 mg, 81%의 수율)을 백색 고형물로 제공하였다. LC-MS (ESI): R_T = 0.238분, 질량: 화학식 C₁₂H₂₂ClN₃O₃에 대한 이론치: 291.1, m/z 실측치: 256.2 [M-HCl+H]⁺. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ 9.93 - 9.90 (m, 1H), 9.60 - 9.44 (m, 1H), 3.67 (dd, J = 14.8, 2.8 Hz, 1H), 3.30 (d, J = 14.0 Hz, 1H), 3.23 - 3.15 (m, 4H), 3.11 - 3.06 (m, 2H), 2.78 (t, J = 11.6 Hz, 1H), 2.67 - 2.55 (m, 1H), 1.49 (s, 3H), 1.09 (s, 3H), 1.08 (s, 3H).

중간체 S1-A: 2,2-디메틸-3-(8a- 메틸 -3- 옥소헥사히드로이미다조[1,5-a]피라진 -2(3H)-일)프로판산 히드로클로라이드

S1과 동일한 조건을 사용하여 S1-4A로부터 S1-A를 제조하였다. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ 10.1 (br s, 1H), 3.66 (dd, J = 14.4, 3.2 Hz, 1H), 3.30 (d, J = 14.4 Hz, 1H), 3.23 - 3.14 (m, 4H), 3.10 - 3.06 (m, 2H), 2.77 (d, J = 12.4 Hz, 1H), 2.64 - 2.56 (m, 1H), 1.49 (s, 3H), 1.09 (s, 3H), 1.07 (s, 3H).

중간체 S2-A의 제조

(S*)-3-(8a-에틸-3- 옥소헥사히드로이미다조[1,5-a]피라진 -2(3H)-일)-2,2-디메틸프로판산 히드로클로라이드

중간체 S2-1: tert -부틸 2-(3- 에톡시 -2,2-디메틸-3- 옥소프로필 )-8a-에틸-1,3-디옥소헥사히드로이미다조[1,5-a]피라진-7(1H)-카르복실레이트

테트라히드로푸란 (20 mL) 중 (S)-tert-부틸 2-(3-에톡시-2,2-디메틸-3-옥소프로필)-1,3-디옥소헥사히드로이미다조[1,5-a]피라진-7(1H)-카르복실레이트 S1-1 (2 g, 90%의 순도, 4.69 mmol)의 용액에 테트라히드로푸란 중 1 M 리튬 비스(트리메틸실릴)아미드 (7.2 mL, 7.2 mmol)를 질소 분위기 하에 -78℃에서 첨가하고, 이 온도에서 1시간 동안 교반시켰다. 요오도에탄 (1.5 g, 9.62 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 25℃에서 추가 16시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 포화 염화암모늄 (50 mL) 적가에 의해 켄칭하였다. 유기 상을 분리하고, 수성 층을 에틸 아세테이트 (30 mL)로 3회 추출하였다. 합한 유기 상을 Na₂SO_4(s)로 건조시키고, 여과시켰다. 여과액을 농축시켜 잔사를 제공하고, 이를 겔 컬럼 크로마토그래피 (석유 에테르:에틸 아세테이트 = 10:1에서 4:1까지)로 정제하고, 추가로 C - 18 (아세토니트릴: 물 = 30%에서 60%까지)로 정제하여 표제 화합물 (920 mg, HNMR에 의하면 90%의 순도, 43%의 수율)을 황색 오일로 제공하였다. ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 4.30 - 4.16 (m, 2H), 4.13 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 4.04 (dd, J = 13.6, 3.6 Hz, 1H), 3.71 (d, J = 14.0 Hz, 1H), 3.65 (d, J = 13.6 Hz, 1H), 2.98 - 2.92 (m, 1H), 2.85 - 2.62 (m, 2H), 1.91 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 1.47 (s, 9H), 1.28 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 1.21 (s, 3H), 1.20 (s, 3H) 0.83 (t, J = 7.2 Hz, 3H).

중간체 S2-2: tert -부틸 2-(3- 에톡시 -2,2-디메틸-3- 옥소프로필 )-8a-에틸-3-옥소헥사히드로이미다조[1,5-a]피라진-7(1H)-카르복실레이트

테트라히드로푸란 (4 mL) 중 tert-부틸 2-(3-에톡시-2,2-디메틸-3-옥소프로필)-8a-에틸-1,3-디옥소헥사히드로이미다조[1,5-a]피라진-7(1H)-카르복실레이트 S2-1 (1.65 g, 90%의 순도, 3.61 mmol)의 용액에 보론 트리플루오라이드 에테레이트 (103 mg, 0.726 mmol)를 0℃ ~ 5℃에서 첨가하고, 이어서 1 M 보란-테트라히드로푸란 복합체 (7.4 mL, 7.4 mmol)를 5℃ ~ 10℃에서 10분에 걸쳐 서서히 첨가하였다. 반응 혼합물을 질소 분위기 하에 15℃에서 추가 20시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 (50 mL) 및 3 중량% 수성 탄산나트륨 (30 mL) (10℃ 미만)으로 켄칭하고, 30분 동안 교반시켰다. 상들을 분리하고, 수성 층을 에틸 아세테이트 (20 mL)로 3회 추출하였다. 합한 유기 상을 Na₂SO_4(s)로 건조시키고, 여과시켰다. 여과액을 농축시켜 잔사를 제공하고, 이를 겔 컬럼 크로마토그래피 (석유 에테르:에틸 아세테이트 = 8:1에서 4:1까지)로 정제하고, 추가로 C - 18 (아세토니트릴: 물 = 30%에서 55%까지)로 정제하여 화합물 (210 mg, HNMR에 의하면 90%의 순도, 13.2%의 수율)을 무색 오일로 제공하였다. LC-MS (ESI): R_T = 1.686분, 질량: C₂₀H₃₅N₃O₅에 대한 이론치: 397.5, m/z 실측치: 398.3 [M+H]⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 4.15 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 4.06 - 3.83 (m, 2H), 3.74 (dd, J = 13.2, 2.8 Hz, 1H), 3.45 (d, J = 14.0 Hz, 1H), 3.28 (d, J = 14.0 Hz, 1H), 3.13 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 2.98 - 2.85 (m, 2H), 2.81 - 2.62 (m, 2H), 1.75 - 1.65 (m, 2H), 1.46 (s, 9H), 1.28 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 1.21 (s, 3H), 1.20 (s, 3H), 0.86 (t, J = 7.2 Hz, 3H).

중간체 S2-2A 및 S2-2B:

(R*)- tert -부틸 2-(3- 에톡시 -2,2-디메틸-3- 옥소프로필 )-8a-에틸-3- 옥소헥사히드로이미다조[1,5-a]피라진 -7(1H)-카르복실레이트 및

(S*)- tert -부틸 2-(3- 에톡시 -2,2-디메틸-3- 옥소프로필 )-8a-에틸-3- 옥소헥사히드로이미다조[1,5-a]피라진 -7(1H)-카르복실레이트

tert-부틸 2-(3-에톡시-2,2-디메틸-3-옥소프로필)-8a-에틸-3-옥소헥사히드로이미다조[1,5-a]피라진-7(1H)-카르복실레이트 S2-2 (320 mg, 90%의 순도, 0.725 mmol)의 라세믹을 키랄 분취용 HPLC (분리 조건: 컬럼: Chiralpak IC 5 μm 20 * 250 mm; 이동상: Hex:IPA = 60:40 (15 mL/분); 온도: 30℃; 파장: 214 nm)로 분리하여 표제 화합물 S2-2A (150 mg, HNMR에 의하면 90%의 순도, 46.9%의 수율, 100% ee)를 백색 고형물로 제공하고 표제 화합물 S2-2B (130 mg, HNMR에 의하면 90%의 순도, 40.6%의 수율, 99.8% ee)를 백색 고형물로 제공하였다.

중간체 S2-2A:

LC-MS (ESI): R_T = 1.721분, 질량: C₂₀H₃₅N₃O₅에 대한 이론치: 397.3, m/z 실측치: 398.3[M+H]⁺. 키랄 분석(컬럼: Chiralpak IC 5 μm 4.6 * 250 mm; 이동상: Hex: IPA = 60:40 (1.0 mL/분); 온도: 30℃; 파장: 214 nm, R_T = 9.611분). ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 4.15 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 4.09 - 3.83 (m, 2H), 3.73 (dd, J = 13.2, 2.4 Hz, 1H), 3.45 (d, J = 14.0 Hz, 1H), 3.28 (d, J = 14.0 Hz, 1H), 3.13 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 2.92 - 2.90 (m, 2H), 2.84 - 2.62 (m, 2H), 1.63 - 1.52 (m, 2H), 1.46 (s, 9H), 1.28 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 1.21 (s, 3H), 1.20 (s, 3H), 0.86 (t, J = 7.2 Hz, 3H).

중간체 S2-2B:

LC-MS (ESI): R_T = 1.726분, 질량: C₂₀H₃₅N₃O₅에 대한 이론치: 397.3, m/z 실측치: 398.2[M+H]⁺. 키랄 분석(컬럼: Chiralpak IC 5 μm 4.6 * 250 mm; 이동상: Hex: IPA = 60:40 (1.0 mL/분); 온도: 30℃; 파장: 214 nm, R_T = 11.96분). ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 4.15 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 4.04 - 3.87 (m, 2H), 3.73 (dd, J = 13.2, 2.8 Hz, 1H), 3.45 (d, J = 14.0 Hz, 1H), 3.28 (d, J = 14.0 Hz, 1H), 3.13 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 2.92 - 2.90 (m, 2H), 2.85 - 2.64 (m, 2H), 1.64 - 1.53 (m, 2H), 1.46 (s, 9H), 1.28 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 1.21 (s, 3H), 1.20 (s, 3H), 0.86 (t, J = 7.2 Hz, 3H).

중간체 S2-3A: (R*)-3-(7-( tert - 부톡시카르보닐 )-8a-에틸-3- 옥소헥사히드로이미다조[1,5-a]피라진 -2(3H)-일)-2,2-디메틸프로판산

메탄올 (4 mL) 중 (R*)-tert-부틸 2-(3-에톡시-2,2-디메틸-3-옥소프로필)-8a-에틸-3-옥소헥사히드로이미다조[1,5-a]피라진-7(1H)-카르복실레이트 S2-2A (150 mg, 90%의 순도, 0.34 mmol)의 용액에 물 (1 mL) 중 수산화나트륨 (41 mg, 1.03 mmol)을 첨가하였다. 50℃에서 6시간 동안 교반시킨 후, 반응 혼합물을 진공 하에 물 (20 mL) 및 진한 메탄올로 희석시키고, 그 후 에틸 아세테이트 (5 mL)로 추출하였다. 수성 층을 3 M 히드로클로라이드 수용액으로 pH 3 ~ 4까지 산성화하고, 에틸 아세테이트 (10 mL)로 3회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (5 mL)로 세척하고, Na₂SO_4(s)로 건조시키고, 여과시켰다. 여과액을 농축시켜 표제 화합물 (130 mg, HNMR에 의하면 90%의 순도, 93.2%의 수율)을 백색 고형물로 제공하였다. LC-MS (ESI): R_T = 1.239분, 질량: C₁₈H₃₁N₃O₅에 대한 이론치: 369.2, m/z 실측치: 370.2 [M+H]⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 4.08 - 3.85 (m, 2H), 3.76 - 3.71 (m, 1H), 3.49 (d, J = 14.4 Hz, 1H), 3.28 (d, J = 14.0 Hz, 1H), 3.22 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 3.02 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 2.97 - 2.64 (m, 3H), 1.77 - 1.55 (m, 2H), 1.46 (s, 9H), 1.25 (s, 3H), 1.24 (s, 3H), 0.86 (t, J = 7.2 Hz, 3H).

중간체 S2-A: (S*)-3-(8a-에틸-3- 옥소헥사히드로이미다조[1,5-a]피라진 -2(3H)-일)-2,2-디메틸프로판산 히드로클로라이드

에틸 아세테이트 중 4 M 히드로클로라이드 (4 mL) 중 (R*)-3-(7-(tert-부톡시카르보닐)-8a-에틸-3-옥소헥사히드로이미다조[1,5-a]피라진-2(3H)-일)-2,2-디메틸프로판산 S2-3A (130 mg, 90%의 순도, 0.317 mmol)의 용액을 15℃에서 1시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 농축시켜 표제 화합물 (80 mg, HNMR에 의하면 90%의 순도, 74.3%의 수율)을 백색 고형물로 제공하였다. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ 3.71 - 3.64 (m, 1H), 3.29 - 3.23 (m, 2H), 3.20 - 3.12 (m, 2H), 3.05 - 2.97 (m, 3H), 2.79 (d, J= 12.4 Hz, 1H), 2.68 - 2.60 (m, 1H), 2.00 - 1.91 (m, 1H), 1.76 - 1.66 (m, 1H), 1.09 (s, 3H), 1.07 (s, 3H), 0.78 (t, J = 7.2 Hz, 3H).

중간체 S3-A의 제조

중간체 S3- 2: 1 - 벤질 4- tert -부틸 2- 포르밀 -2- 메틸피페라진 -1,4- 디카르복실레이트

무수 디클로로메탄 (50 mL) 중 무수 디메틸 술폭시드 (1.20 g, 15.4 mmol)의 용액에 옥살릴 디클로라이드 (1.1 mL, 13.0 mmol)를 -78℃에서 적가하였다. 질소 분위기 하에 -78℃에서 1.5시간 동안 교반시킨 후, 무수 디클로로메탄 (10 mL) 중 1-벤질 4-tert-부틸 2-(히드록시메틸)-2-메틸피페라진-1,4-디카르복실레이트 S3-1 (900 mg, 90%의 순도, 2.22 mmol)의 용액을 적가하였다. 상기 혼합물을 -78℃에서 1.5시간 동안 교반시키고, 그 후 트리에틸아민 (3.1 mL, 22.2 mmol)을 첨가하였다. 상기 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 얼음물 (50 mL)로 희석시키고, 1 M 히드로클로라이드 수용액으로 pH 6 ~ 7까지 중화시켰다. 그 후 상기 혼합물을 디클로로메탄 (50 mL)으로 3회 추출하고, 합한 유기 층을 포화 중탄산나트륨 수용액 (50 mL) 및 염수 (50 mL)로 3회 세척하고, Na₂SO₄₍ _s ₎로 건조시키고, 여과시키고, 증발시켜 표제 화합물 (694 mg, HNMR에 의하면 90%의 순도, 78%의 수율)을 연한 황색 오일로 제공하였다. LC-MS (ESI): R_T = 1.73분, 질량: C₁₉H₂₆N₂O₅에 대한 이론치: 362.2, m/z 실측치: 363.0 [M+H]⁺. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ 9.36 (s, 1H), 7.38 - 7.33 (m, 5H), 5.14 - 5.06 (m, 2H), 3.88 - 3.84 (m, 1H), 3.76 - 3.63 (m, 1H), 3.48 - 3.06 (m, 4H), 1.39 (s, 9H), 1.24 (s, 3H).

중간체 S3-4: ( 트랜스 )- tert -부틸 2-(4-( 메톡시카르보닐 ) 시클로헥실 )-8a-메틸-3-옥소헥사히드로이미다조[1,5-a]피라진-7(1 H )-카르복실레이트

1,2-디클로로에탄 (20 mL) 중 1-벤질 4-tert-부틸 2-포르밀-2-메틸피페라진-1,4-디카르복실레이트 S3-2 (637 mg, 90%의 순도, 1.58 mmol)의 용액에 (트랜스)-메틸 4-아미노시클로헥산카르복실레이트 히드로클로라이드 S3-3 (818 mg, 4.22 mmol) 및 트리에틸아민 (0.6 mL, 4.31 mmol)을 실온에서 첨가하였다. 질소 보호를 이용하여 20분 동안 교반시킨 후, 아세트산 (447 mg, 7.44 mmol) 및 황산마그네슘 (2.5 g, 20.8 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 70℃에서 하룻밤 교반시켰다. 그 후 소듐 시아노보로히드라이드 (637 mg, 10.1 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 70℃에서 하룻밤 계속 교반시켰다. 반응 혼합물을 디클로로메탄 (30 mL) 및 물 (80 mL)로 희석시키고, 중탄산나트륨 수용액 (약 10 mL)으로 pH가 8이 될 때까지 염기성화하였다. 수성 층을 디클로로메탄 (30 mL)으로 3회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (30 mL)로 세척하고, Na₂SO₄₍ _s ₎로 건조시키고, 여과시켰다. 여과액을 감압 하에 농축시켜 잔사를 제공하고, 이를 C18 컬럼 (아세토니트릴:물 물 (+ 0.02% 아세트산암모늄) = 20%로부터 95%까지)으로 정제하여 표제 화합물 (383 mg, 96%의 순도, 59%의 수율)을 백색 고형물로 제공하였다. LC-MS (ESI): R_T = 1.58분, 질량: C₂₀H₃₃N₃O₅에 대한 이론치: 395.2, m/z 실측치: 340.1 [M+H-56]⁺. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ 3.88 - 3.65 (m, 2H), 3.59 (s, 3H), 3.51 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 3.47 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 3.09 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 3.02 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 2.85 (td, J = 13.2, 3.6 Hz, 1H), 2.29 - 2.17 (m, 1H), 2.00 - 1.89 (m, 2H), 1.69 - 1.57 (m, 2H), 1.50 - 1.32 (m, 15H), 1.21 (s, 3H).

중간체 S3-4A 및 S3-4B: ( 트랜스 )-( R *)- tert -부틸 2-(4-(메톡시카르보닐)시클로헥실)-8a-메틸-3-옥소헥사히드로이미다조[1,5-a]피라진-7(1 H )-카르복실레이트 및 ( 트랜스 )-( S *)- tert -부틸 2-(4-( 메톡시카르보닐 ) 시클로헥실 )-8a- 메틸 -3- 옥소헥사히드로이미다조[1,5-a]피라진 -7(1 H )-카르복실레이트

(트랜스)-tert-부틸 2-(4-(메톡시카르보닐)시클로헥실)-8a-메틸-3-옥소헥사히드로이미다조[1,5-a]피라진-7(1H)-카르복실레이트 S3-4 (300 mg, 96%의 순도, 0.728 mmol)의 라세미 혼합물을 키랄 분취용 HPLC(컬럼: Chiralpak IF 5 μm 20 * 250 mm, 이동상: MeOH:EtOH = 50:50 (13 mL/분), 온도: 30℃, 파장: 214 nm)로 분리하여 표제 화합물 S3-4A (107 mg, NMR에 의하면 95%의 순도, 35%의 수율, 100%의 입체순도) 및 S3-4B (80 mg, NMR에 의하면 95%의 순도, 26%의 수율, 99.8%의 입체순도)를 황색 고형물로 수득하였다.

화합물 S3-4A: LC-MS (ESI): R_T = 1.58분, 질량: C₂₀H₃₃N₃O₅에 대한 이론치: 395.2, m/z 실측치: 396.2 [M+H]⁺. 키랄 분석(컬럼: Chiralpak IF 5 μm 4.6 * 250 mm; 이동상: MeOH:EtOH = 50:50 (1 mL/분); 온도: 30℃; 파장: 214 nm, R_T = 8.887분). ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ 3.87 - 3.64 (m, 2H), 3.59 (s, 3H), 3.51 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 3.48 - 3.47 (m, 1H), 3.08 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 3.02 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 2.85 (td, J = 12.8, 4.0 Hz, 1H), 2.27 - 2.18 (m, 1H), 2.01 - 1.88 (m, 2H), 1.69 - 1.56 (m, 2H), 1.47 - 1.43 (m, 3H), 1.40 - 1.33 (m, 12H), 1.21 (s, 3H).

화합물 S3-4B: LC-MS (ESI): R_T = 1.58분, 질량: C₂₀H₃₃N₃O₅에 대한 이론치: 395.2, m/z 실측치: 340.1 [M+H-56]⁺. 키랄 분석(컬럼: 키랄팩 IF 5 μm 4.6 * 250 mm; 이동상: MeOH:EtOH = 50:50 (1 mL/분); 온도: 30℃; 파장: 214 nm, R_T = 11.261분). ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ 3.87 - 3.64 (m, 2H), 3.59 (s, 3H), 3.51 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 3.48 - 3.47 (m, 1H), 3.08 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 3.02 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 2.85 (td, J = 12.4, 3.6 Hz, 1H), 2.28 - 2.19 (m, 1H), 2.01 - 1.90 (m, 2H), 1.68 - 1.57 (m, 2H), 1.49 - 1.44 (m, 3H), 1.40 - 1.34 (m, 12H), 1.21 (s, 3H).

중간체 S3-A: ( 트랜스 )- 메틸 4-(( S *)-8a- 메틸 -3- 옥소헥사히드로이미다조[1,5-a]피라진 -2(3 H )-일)시클로헥산카르복실레이트 히드로클로라이드

1,4-디옥산 중 6 M 히드로클로라이드(g) 용액 (10 mL) 중 (트랜스)-(R*)-tert-부틸 2-(4-(메톡시카르보닐)시클로헥실)-8a-메틸-3-옥소헥사히드로이미다조[1,5-a]피라진-7(1H)-카르복실레이트 S3-4A (107 mg, 95%의 순도, 0.257 mmol)의 용액을 실온에서 1시간 동안 교반시키고, 그 후 혼합물을 감압 하에 농축시켜 화합물 (86 mg, 94%의 순도, 95%의 수율)을 황색 고형물로 수득하였다. LC-MS (ESI): R_T = 0.219분, 질량: C₁₅H₂₆ClN₃O₃에 대한 이론치: 331.2, m/z 실측치: 296.2 [M+H-HCl]⁺.

중간체 S4-A의 제조

중간체 S4-2: 벤질 4- tert -부틸 2-(((3- 에톡시 -2,2-디메틸-3- 옥소프로필 )아미노)메틸)-2-메틸피페라진-1,4-디카르복실레이트

1,2-디클로로에탄 (5 mL) 중 에틸 3-아미노-2,2-디메틸프로파노에이트 히드로클로라이드 S4-1 (500 mg, 1.38 mmol)의 용액에 트리에틸아민 (209 mg, 2.07 mmol)을 첨가하였다. 20℃에서 10분 동안 교반시킨 후, 1-벤질 4-tert-부틸 2-포르밀-2-메틸피페라진-1,4-디카르복실레이트 S3-2 (375 mg, 2.07 mmol) 및 아세트산 (3 드롭)을 상기 혼합물에 첨가하고, 이것을 75℃에서 2시간 동안 교반시키고, 그 후 소듐 시아노보로히드라이드 (260 mg, 4.14 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 20℃에서 1.5시간 동안 교반시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켜 잔사를 얻고, 이를 C18 컬럼 (아세토니트릴:물 = 5%에서 100%까지)으로 정제하여 표제 화합물 (400 mg, ¹H NMR에 의하면 90%의 순도, 59%의 수율)을 황색 오일로 제공하였다.¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.38 - 7.32 (m, 5H), 5.11 (s, 2H), 4.09 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 3.84 (br s, 1H), 3.77 - 3.73 (m, 1H), 3.63 - 3.56 (m, 1H), 3.42 - 3.15 (m, 4H), 2.67 - 2.59 (m, 3H), 1.46 (s, 9H), 1.31 (s, 3H), 1.22 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 1.13 - 1.12 (m, 6H).

중간체 S4-3: tert -부틸 3-(((3- 에톡시 -2,2-디메틸-3- 옥소프로필 )아미노)메틸)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트

에탄올 (10 mL) 중 벤질 4-tert-부틸 2-(((3-에톡시-2,2-디메틸-3-옥소프로필)아미노)메틸)-2-메틸피페라진-1,4-디카르복실레이트 S4-2 (400 mg, 90%의 순도, 0.810 mmol)의 용액에 활성탄 상의 10 중량% 수산화팔라듐 (200 mg)을 첨가하였다. 수소 분위기 (15 psi) 하에 50℃에서 3시간 동안 교반시킨 후, 반응 혼합물을 여과시키고, 농축시켜 표제 화합물 (260 mg, ¹HNMR에 의하면 90%의 순도, 90%의 수율)을 황색 오일로 수득하였다. ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 4.10 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 3.36 - 3.30 (m, 2H), 3.22 - 3.11 (m, 2H), 2.79 - 2.74 (m, 3H), 2.64 - 2.59 (m, 2H), 2.47 - 2.44 (m, 1H), 1.44 (s, 9H), 1.23 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 1.13 - 1.16 (m, 6H), 1.00 (s, 3H).

중간체 S4-4: tert -부틸 2-(3- 에톡시 -2,2-디메틸-3- 옥소프로필 )-8a- 메틸 -3-티옥소헥사히드로이미다조[1,5-a]피라진-7(1 H )-카르복실레이트

디클로로메탄 (1 mL) 중 트리포스겐 (126 mg, 0.730 mmol)의 용액을 디클로로메탄 (5 mL) 중 tert-부틸 3-(((3-에톡시-2,2-디메틸-3-옥소프로필)아미노)메틸)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 S4-3 (260 mg, 90%의 순도, 0.730 mmol) 및 트리에틸아민 (221 mg, 2.19 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 상기 혼합물을 30℃에서 1시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 물 (30 mL)로 희석시키고, 디클로로메탄 (30 mL)으로 추출하고 (2회), 합한 유기 층을 물 (100 mL)로 세척하고, Na₂SO_4(s)로 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켜 잔사를 얻고, 이를 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피 (석유 에테르:에틸 아세테이트 = 8:1)로 정제하여 표제 화합물 (160 mg, ¹H NMR에 의하면 90%의 순도 from , 55%의 수율)을 갈색 오일로 제공하였다. ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 4.44 - 4.41 (m, 1H), 4.16 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 4.01 - 3.79 (m, 4H), 3.31 - 3.16 (m, 3H), 2.91 - 2.70 (m, 2H), 1.47 (s, 9H), 1.33 (s, 3H), 1.28 - 1.25 (m, 9H).

중간체 S4-4A 및 S4-4B:

( R* )- tert -부틸 2-(3- 에톡시 -2,2-디메틸-3- 옥소프로필 )-8a- 메틸 -3- 티옥소헥사히드로이미다조[1,5-a]피라진 -7(1 H )-카르복실레이트 및

( S *)- tert -부틸 2-(3- 에톡시 -2,2-디메틸-3- 옥소프로필 )-8a- 메틸 -3- 티옥소헥사히드로이미다조[1,5-a]피라진 -7(1 H )-카르복실레이트

(tert-부틸 2-(3-에톡시-2,2-디메틸-3-옥소프로필)-8a-메틸-3-티옥소헥사히드로이미다조[1,5-a]피라진-7(1H)-카르복실레이트 S4-4 (140 mg, 0.350 mmol)의 라세미 혼합물을 키랄 분취용 SFC(컬럼: Chiralpak IG 5 μm 20 * 250 mm; 이동상: CO_2:MeOH = 80:20 (50 g/분); 컬럼 온도: 30℃; 파장: 230 nm)로 분리하여 표제 화합물 S4-4A (60 mg, HNMR에 의하면 90%의 순도, 43%의 수율, 100% ee) 및 S4-4B (50 mg, HNMR에 의하면 90%의 순도, 36%의 수율, 99.2% ee)를 황색 오일로 수득하였다.

S4-4A: 키랄 분석(컬럼: Chiralpak IG 5 μm 4.6 * 250 mm; 이동상: CO₂:MeOH = 80:20 (3.0 g /분); 컬럼 온도: 40℃; 파장: 230 nm, 배압: 100 bar, R_T = 2.25분). ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 4.41 - 4.38 (m, 1H), 4.14 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 3.98 - 3.83 (m, 4H), 3.29 - 3.16 (m, 3H), 2.81 - 2.67 (m, 2H), 1.45 (s, 9H), 1.28 - 1.23 (m, 12H).

S4-4B: 키랄 분석(컬럼: Chiralpak IG 5 μm 4.6 * 250 mm; 이동상: CO₂:MeOH = 80:20 (3.0 g /분); 컬럼 온도: 40℃; 파장: 230 nm, 배압: 100 bar, R_T = 3.01분). ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 4.42 - 4.39 (m, 1H), 4.14 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 4.00 - 3.75 (m, 4H), 3.40 - 3.20 (m, 3H), 2.88 - 2.68 (m, 2H), 1.45 (s, 9H), 1.33 - 1.24 (m, 12H).

중간체 S4-A: ( R *)-3-(7-( tert - 부톡시카르보닐 )-8a- 메틸 -3- 티옥소헥사히드로이미다조[1,5-a]피라진 -2(3 H )-일)-2,2-디메틸프로판산

물 (1 mL) 중 수산화나트륨 (60 mg, 1.50 mmol)의 용액에 메탄올 (3 mL) 중 (R*)-tert-부틸 2-(3-에톡시-2,2-디메틸-3-옥소프로필)-8a-메틸-3-티옥소헥사히드로이미다조[1,5-a]피라진-7(1H)-카르복실레이트 S4-4A (60 mg, 90%의 순도, 0.150 mmol)의 혼합물을 첨가하였다. 50℃에서 14시간 동안 교반시킨 후, 반응 혼합물을 물 (10 mL)로 희석시키고, 진공 하에 메탄올을 제거하였다. 잔사를 1 M 히드로클로라이드 수용액으로 pH 5 ~ 6까지 산성화하고, 에틸 아세테이트 (10 mL)로 추출하였다 (3회). 합한 유기 층을 염수 (10 mL)로 세척하고, Na₂SO_4(s)로 건조시키고, 여과시켰다. 여과액을 농축시켜 표제 화합물 (45 mg, 97%의 순도, 97%의 수율)을 황색 오일로 제공하였다. LC-MS (ESI): R_T = 1.290분, 질량: C₁₇H₂₉N₃O₄S에 대한 이론치: 371.2, m/z 실측치: 372.2.

화합물 1: 3-(7-(((S)-5-(에톡시카르보닐)-6-(3-플루오로-2-메틸페닐)-2-(티아졸-2-일)-3,6-디히드로피리미딘-4-일)메틸)-8a-메틸-3-옥소헥사히드로이미다조[1,5-a]피라진-2(3H)-일)-2,2-디메틸프로판산

화합물 1:

3-(7-(((S)-5-( 에톡시카르보닐 )-6-(3- 플루오로 -2- 메틸페닐 )-2-(티아졸-2-일)-3,6-디히드로피리미딘-4-일)메틸)-8a-메틸-3-옥소헥사히드로이미다조[1,5-a]피라진-2(3H)-일)-2,2-디메틸프로판산 (2가지 부분입체 이성질체의 혼합물)

디클로로메탄 (3 mL) 중 2,2-디메틸-3-(8a-메틸-3-옥소헥사히드로이미다조[1,5-a]피라진-2(3H)-일)프로판산 히드로클로라이드 S1 (120 mg, 0.371 mmol)의 용액에 트리에탄올아민 (276 mg, 1.85 mmol)을 첨가하였다. 40℃에서 30분 동안 교반시킨 후, 디클로로메탄 (2 mL) 중 (S)-에틸 6-(브로모메틸)-4-(3-플루오로-2-메틸페닐)-2-(티아졸-2-일)-1,4-디히드로피리미딘-5-카르복실레이트 H2-1A (170 mg, 95%의 순도, 0.371 mmol)의 용액을 적가하였다. 40℃에서 16시간 동안 교반시킨 후, 반응 혼합물을 농축시켜 잔사를 제공하고, 이를 분취용 HPLC (컬럼: waters Xbridge C18 (5 μm 19 *150 mm), 이동상 A: 물 (0.1% 트리플루오로아세트산), 이동상 B: 아세토니트릴, UV: 214 nm, 유량: 15 mL/분, 구배: 15 ~ 60% (%B))로 정제하고, 추가로 C18 (아세토니트릴:물 (0.1% 중탄산암모늄) = 20%에서 50%까지)로 정제하여 표제 화합물 (59.8 mg, 26%의 수율)을 황색 고형물로 제공하였다. LC-MS (ESI): R_T = 3.208분, 질량: C₃₀H₃₇FN₆O₅S에 대한 이론치: 612.3, m/z 실측치: 613.2 [M+H]⁺. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ 8.00 (d, J = 3.2 Hz, 0.5H), 7.96 (d, J = 2.8 Hz, 0.5H), 7.93 (d, J = 3.2 Hz, 0.5H), 7.92 (d, J = 3.2 Hz, 0.5H), 7.21 - 7.15 (m, 1H), 7.05 - 7.01 (m, 2H), 5.89 (s, 0.5H), 5.88 (s, 0.5H), 4.00 - 3.88 (m, 3H), 3.80 (dd, J = 16.4, 4.0 Hz, 1H), 3.63 - 3.55 (m, 1H), 3.30 (dd, J = 14.0, 4.0 Hz, 1H), 3.18 - 3.00 (m, 4H), 2.80 - 2.56 (m, 2H), 2.45 (s, 3H), 2.29 (d, J = 10.8 Hz, 0.5H), 2.14 - 1.94 (m, 1.5H), 1.51 (s, 1.5H), 1.39 (s, 1.5H), 1.07 - 1.02 (m, 9H).

화합물 1B:

3-(7-(((S)-5-( 에톡시카르보닐 )-6-(3- 플루오로 -2- 메틸페닐 )-2-(티아졸-2-일)-3,6-디히드로피리미딘-4-일)메틸)-8a-메틸-3-옥소헥사히드로이미다조[1,5-a]피라진-2(3H)-일)-2,2-디메틸프로판산 (단일 거울상 이성질체)

화합물 1과 동일한 조건을 사용하여 S1-A 및 H2-1A로부터 이 화합물을 제조하였다. LC-MS (ESI): R_T = 3.556분, 질량: C₃₀H₃₇FN₆O₅S에 대한 이론치: 612.3, m/z 실측치: 613.3 [M+H]⁺. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ 9.55 (br s, 1H), 7.97 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 7.92 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 7.21 - 7.15 (m, 1H), 7.06 - 7.01 (m, 2H), 5.88 (s, 0.9H), 5.75 (s, 0.1H), 3.97 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 3.91 (d, J = 16.8 Hz, 1H), 3.81 (d, J = 16.8 Hz, 1H), 3.62 (d, J = 11.6 Hz, 1H), 3.31 (d, J = 13.6 Hz, 1H), 3.14 - 3.01 (m, 4H), 2.80 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 2.59 (d, J = 11.2 Hz, 1H), 2.45 (s, 1.5H), 2.44 (s, 1.5H), 2.14 - 2.04 (m, 2H), 1.40 (s, 3H), 1.08 - 1.02 (m, 9H).

화합물 2A:

( S *)-3-(-7-((( R* )-6-(2- 클로로 -3- 플루오로페닐 )-5-( 에톡시카르보닐 )-2-(티아졸-2-일)-3,6-디히드로피리미딘-4-일)메틸)-8a-메틸-3-옥소헥사히드로이미다조[1,5-a]피라진-2(3 H )-일)-2,2-디메틸프로판산 (단일 거울상 이성질체)

디클로로메탄 (3 mL) 중 S1-A (61 mg, 90%의 순도, 0.188 mmol)의 현탁액에 트리에탄올아민 (117 mg, 0.784 mmol)을 첨가하였다. 상기 혼합물을 35℃까지 가온한 후, 디클로로메탄 (2 mL) 중 H1-1A (80 mg, 90%의 순도, 0.157 mmol)를 35℃에서 첨가하였다. 그 후 상기 혼합물을 35℃에서 16시간 동안 교반시켰다. 상기 반응물을 물 (5 mL)로 켄칭하고, 0.5 M 히드로클로라이드 수용액으로 pH를 5로부터 6까지 산성화하였다. 수성 상을 디클로로메탄 (10 mL)으로 3회 추출하고, 그 후, 합한 유기 상을 Na₂SO_4(s)로 건조시키고, 여과시키고, 여과액을 농축시켜 조 생성물을 수득하고, 이를 C18 컬럼 (아세토니트릴:물 (0.1% 중탄산암모늄) = 35%에서 90%까지)으로 정제하여 표제 생성물 (92.0 mg, 99%의 순도, 92%의 수율)을 황색 고형물로 수득하였다. LC-MS (ESI): R_T = 3.572분, 질량: C₂₉H₃₄ClFN₆O₅S에 대한 이론치: 632.2, m/z 실측치: 633.2 [M+H]⁺.¹H NMR (400 MHz, CD₃OD) δ 7.90 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 7.72 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 7.31 - 7.22 (m, 2H), 7.13 (dt, J = 8.8, 1.6 Hz, 1H), 6.21 (s, 1H), 4.05 - 3.99 (m, 3H), 3.82 (d, J = 17.2 Hz, 1H), 3.76 - 3.72 (m, 1H), 3.42 (d, J = 14.0 Hz, 1H), 3.29 - 3.14 (m, 4H), 2.87 - 2.84 (m, 1H), 2.62 (d, J = 11.2 Hz, 1H), 2.30 - 2.21 (m, 2H), 1.53 (s, 3H), 1.19 (s, 3H), 1.17 (s, 3H), 1.09 (t, J = 7.2 Hz, 3H).

화합물 3A:

3-(( S* )-7-((( R *)-6-(2- 브로모 -4- 플루오로페닐 )-5-( 메톡시카르보닐 )-2-(티아졸-2-일)-3,6-디히드로피리미딘-4-일)메틸)-8a-메틸-3-옥소헥사히드로이미다조[1,5-a]피라진-2(3 H )-일)-2,2-디메틸프로판산

디클로로메탄 (20 mL) 중 S1-A (100 mg, 90%의 순도, 0.308 mmol)의 용액에 트리에탄올아민 (368 mg, 2.47 mmol)을 첨가하였다. 상기 혼합물을 실온에서 10분 동안 교반시킨 후 H3-1A (220 mg, 90%의 순도, 0.405 mmol)를 첨가하였다. 질소 분위기 하에 40℃에서 2.5시간 동안 교반시킨 후, 이어서 실온에서 하룻밤 교반시켰다. 상기 혼합물을 물 (50 mL)로 희석시키고, 이를 디클로로메탄 (50 mL)으로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 Na₂SO_4(s)로 건조시키고, 여과시키고, 농축시켰다. 잔사를 C18 컬럼 (아세토니트릴:물 (0.1 % 중탄산암모늄) = 05%에서 70%까지)으로 정제하여 표제 화합물 (90.2 mg, 99.7%의 순도, 44%의 수율)을 황색 고형물로 수득하였다. LC-MS (ESI): R_T = 3.285분, 질량: C₂₈H₃₂BrFN₆O₅S에 대한 이론치: 662.1, m/z 실측치: 663.2 [M+H]⁺. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ 9.82 - 9.29 (m, 1H), 7.98 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 7.93 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 7.56 (dd, J = 8.4 Hz, 2.4 Hz, 1H), 7.40 - 7.36 (m, 1H), 7.24 - 7.19 (m, 1H), 6.01 (s, 1H), 3.88 (d, J = 16.8 Hz, 1H), 3.80 (d, J = 17.2 Hz, 1H), 3.63 - 3.60 (m, 1H), 3.51 (s, 3H), 3.30 (d, J = 14 Hz, 1H), 3.13 - 3.07 (m, 3H), 3.05 - 3.01 (m, 1H), 2.81 - 2.79 (m, 1H), 2.59 (d, J = 10.8 Hz, 1H), 2.16 - 2.05 (m, 2H), 1.41 (s, 3H), 1.07 (s, 3H), 1.06 (s, 3H).

화합물 4B:

3-((S*)-7-(((S)-5-( 에톡시카르보닐 )-6-(3- 플루오로 -2- 메틸페닐 )-2-(티아졸-2-일)-3,6-디히드로피리미딘-4-일)메틸)-8a-에틸-3-옥소헥사히드로이미다조[1,5-a]피라진-2(3H)-일)-2,2-디메틸프로판산

디클로로메탄 (3 mL) 중 (S*)-3-(8a-에틸-3-옥소헥사히드로이미다조[1,5-a]피라진-2(3H)-일)-2,2-디메틸프로판산 히드로클로라이드 S2-A (80 mg, 90%의 순도, 0.235 mmol)의 용액에 트리에탄올아민 (176 mg, 1.18 mmol)을 첨가하였다. 40℃에서 30분 동안 교반시킨 후, 디클로로메탄 (2 mL) 중 (S)-에틸 6-(브로모메틸)-4-(3-플루오로-2-메틸페닐)-2-(티아졸-2-일)-1,4-디히드로피리미딘-5-카르복실레이트 H2-1A (116 mg, 90%의 순도, 0.238 mmol)의 용액을 적가하였다. 40℃에서 16시간 동안 교반시킨 후, 반응 혼합물을 농축시켜 잔사를 제공하고, 이를 분취용 HPLC (컬럼: Waters Xbridge C18 (5 μm 19 *150 mm), 이동상 A: 물 (0.1% 중탄산암모늄), 이동상 B: 아세토니트릴, UV: 214 nm, 유량: 15 mL/분, 구배: 05 ~ 70% (%B))로 정제하여 표제 화합물 (75.6 mg, 99.0%의 순도, 50.7%의 수율)을 황색 고형물로 제공하였다. LC-MS (ESI): R_T = 3.489분, 질량: C₃₁H₃₉FN₆O₅S에 대한 이론치: 626.3, m/z 실측치: 627.2 [M+H]⁺. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ 9.52 (br s, 1H), 7.98 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 7.93 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 7.24 - 7.15 (m, 1H), 7.06 - 7.01 (m, 2H), 5.88 (s, 0.9H), 5.75 (s, 0.1H), 4.00 - 3.95 (m, 3H), 3.77 (d, J = 16.4 Hz, 1H), 3.64 (d, J = 12.0 Hz, 1H), 3.29 (d, J = 13.6 Hz, 1H), 3.15 (d, J = 13.6 Hz, 1H), 3.08 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 3.03 - 2.91 (m, 2H), 2.80 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 2.61 (d, J = 11.6 Hz, 1H), 2.45 (s, 3H), 2.13 - 2.04 (m, 2H), 1.96 - 1.89 (m, 1H), 1.78 - 1.69 (m, 1H), 1.07 - 1.03 (m, 9H), 0.60 (t, J = 7.2 Hz, 3H).

화합물 5A:

( 트랜스 )-4-(( S )-7-((( S *)-5-( 에톡시카르보닐 )-6-(3- 플루오로 -2-메틸페닐)-2-(티아졸-2-일)-3,6-디히드로피리미딘-4-일)메틸)-8a-메틸-3-옥소헥사히드로이미다조[1,5-a]피라진-2(3 H )-일)시클로헥산카르복실산

중간체 5A-1:

( 트랜스 )-( S )-에틸 4-(3-플루오로-2-메틸페닐)-6-((( S *)-2-(4-(메톡시카르보닐)시클로헥실)-8a-메틸-3-옥소헥사히드로이미다조[1,5-a]피라진-7(1 H )-일)메틸)-2-(티아졸-2-일)-1,4-디히드로피리미딘-5-카르복실레이트

디클로로메탄 (10 mL) 중 (트랜스)-메틸 4-((S*)-8a-메틸-3-옥소헥사히드로이미다조[1,5-a]피라진-2(3H)-일)시클로헥산카르복실레이트 히드로클로라이드 S3-A (75 mg, 94%의 순도, 0.21 mmol)의 용액에 트리에탄올아민 (153 mg, 1.03 mmol)을 실온에서 첨가하였다. 질소 분위기 하에 40℃에서 15분 동안 교반시킨 후, (S)-에틸 6-(브로모메틸)-4-(3-플루오로-2-메틸페닐)-2-(티아졸-2-일)-1,4-디히드로피리미딘-5-카르복실레이트 H2-1A (100 mg, 90%의 순도, 0.205 mmol)를 40℃에서 첨가하였다. 질소 분위기 하에 실온에서 12시간 동안 교반시킨 후, 혼합물을 디클로로메탄 (30 mL) 및 물 (30 mL)로 희석시켰다. 수성 층을 디클로로메탄 (30 mL)으로 3회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (30 mL)로 세척하고, Na₂SO₄₍ _s ₎로 건조시키고, 여과시켰다. 여과액을 감압 하에 농축시켜 잔사를 제공하고, 이를 C18 컬럼 (아세토니트릴:물 (0.1% 중탄산암모늄) = 20%에서 95%까지)으로 정제하여 표제 화합물 (122 mg, NMR에 의하면 95%의 순도, 86%의 수율)을 황색 고형물로 제공하였다. LC-MS (ESI): R_T = 1.826분, 질량: C₃₃H₄₁FN₆O₅S에 대한 이론치: 652.2, m/z 실측치: 653.3 [M+H]⁺. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ 9.54 (s, 1H), 7.98 - 7.93 (m, 2H), 7.21 - 7.15 (m, 1H), 7.05 - 7.03 (m, 2H), 5.87 (s, 1H), 4.11 - 3.95 (m, 3H), 3.94 - 3.77 (m, 1H), 3.66 - 3.57 (m, 4H), 3.54 - 3.46 (m, 1H), 3.07 - 2.95 (m, 3H), 2.79 - 2.64 (m, 2H), 2.44 (s, 3H), 2.24 - 2.11 (m, 2H), 2.08 - 1.95 (m, 3H), 1.66 - 1.56 (m, 2H), 1.51 - 1.31 (m, 7H), 1.06 - 1.02 (m, 3H).

화합물 5A:

( 트랜스 )-4-(( S )-7-((( S *)-5-( 에톡시카르보닐 )-6-(3- 플루오로 -2- 메틸페닐 )-2-(티아졸-2-일)-3,6-디히드로피리미딘-4-일)메틸)-8a-메틸-3-옥소헥사히드로이미다조[1,5-a]피라진-2(3 H )-일)시클로헥산카르복실산

테트라히드로푸란 (10 mL) 및 물 (10 mL) 중 (트랜스)-(S)-에틸 4-(3-플루오로-2-메틸페닐)-6-((S*)-2-(4-(메톡시카르보닐)시클로헥실)-8a-메틸-3-옥소헥사히드로이미다조[1,5-a]피라진-7(1H)-일)메틸)-2-(티아졸-2-일)-1,4-디히드로피리미딘-5-카르복실레이트 5A-1 (122 mg, 95%의 순도, 0.178 mmol)의 용액에 수산화리튬 일수화물 (80 mg, 1.9 mmol)을 실온에서 첨가하였다. 실온에서 2시간 동안 교반시킨 후, 혼합물을 1 M 히드로클로라이드 수용액 (약 3 mL)으로 pH가 1 ~ 2가 될 때까지 산성화하였다. 수성 층을 에틸 아세테이트 (30 mL)로 3회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (30 mL)로 세척하고, Na₂SO₄₍ _s ₎로 건조시키고, 여과시켰다. 여과액을 감압 하에 농축시켜 잔사를 제공하고, 이를 C18 컬럼 (아세토니트릴:물 (0.1% 중탄산암모늄) = 20%에서 95%까지)으로 정제하여 표제 화합물 (80 mg, 99.8%의 순도, 70%의 수율)을 황색 고형물로 제공하였다. LC-MS (ESI): R_T = 3.717분, 질량: C₃₂H₃₉FN₆O₅S에 대한 이론치: 638.2, m/z 실측치: 639.3 [M+H]⁺. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ 9.55 (br s, 1H), 7.98 (s, 0.1H), 7.96 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 7.91 (d, J = 3.2 Hz, 0.9H), 7.20 - 7.14 (m, 1H), 7.04 - 7.00 (m, 2H), 5.89 (s, 1H), 3.95 (q, J = 6.8 Hz, 2H), 3.90 (d, J = 16.4 Hz, 1H), 3.78 (d, J = 16.4 Hz, 1H), 3.62 - 3.59 (m, 1H), 3.53 - 3.46 (m, 1H), 3.06 - 2.99 (m, 2H), 2.95 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 2.76 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 2.54 (d, J = 11.2 Hz, 1H), 2.43 (d, J = 1.6 Hz, 3H), 2.11 - 2.03 (m, 3H), 1.91 - 1.85 (m, 2H), 1.67 - 1.52 (m, 2H), 1.42 - 1.30 (m, 7H), 1.03 (t, J = 6.8 Hz, 3H).

화합물 6A:

3-(( R *)-7-((( S )-5-( 에톡시카르보닐 )-6-(3- 플루오로 -2- 메틸페닐 )-2-(티아졸-2-일)-3,6-디히드로피리미딘-4-일)메틸)-8a-메틸-3-티옥소헥사히드로이미다조[1,5-a]피라진-2(3 H )-일)-2,2-디메틸프로판산

에틸 아세테이트 중 4 M 히드로클로라이드 (4 mL, 16 mmol) 중 (R*)-3-(7-(tert-부톡시카르보닐)-8a-메틸-3-티옥소헥사히드로이미다조[1,5-a]피라진-2(3H)-일)-2,2-디메틸프로판산 S4-A (45 mg, 97%의 순도, 0.12 mmol)를 20℃에서 1시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 농축시켜 잔사를 제공하고, 이를 테트라히드로푸란 (5 mL)에서 희석시키고, 그 후 트리에틸아민 (39 mg, 0.38 mmol)을 첨가하였다. 20℃에서 0.5시간 동안 교반시킨 후, (S)-에틸6-(브로모메틸)-4-(3-플루오로-2-메틸페닐)-2-(티아졸-2-일)-1,4-디히드로피리미딘-5-카르복실레이트 H2-1A (43 mg, 95%의 순도, 0.098 mmol)를 상기 혼합물에 첨가하였다. 40℃에서 3시간 동안 교반시킨 후, 혼합물을 20℃에서 14시간 동안 교반시키고, 그 후 0.01 M 히드로클로라이드 수용액 (20 mL)으로 희석시키고, 에틸 아세테이트 (20 mL)로 추출하였다 (2회). 합한 유기 층을 염수 (20 mL)로 세척하고, Na₂SO_4(s)로 건조시키고, 여과시키고, 농축시켰다. 잔사를 C18 컬럼 (아세토니트릴:물 (0.1% 중탄산암모늄) = 45%에서 50%까지)으로 정제하여 표제 화합물 (9.3 mg, 99.3%의 순도, 15%의 수율)을 황색 고형물로 제공하였다. LC-MS (ESI): R_T = 3.810분, 질량: C₃₀H₃₇FN₆O₄S₂에 대한 이론치: 628.2, m/z 실측치: 629.3. ¹H NMR (400 MHz, CD₃OD) δ 7.91 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 7.72 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 7.19 - 7.10 (m, 2H), 6.96 - 6.92 (m, 1H), 5.98 (s, 1H), 4.49 - 4.45 (m, 1H), 4.09 - 4.03 (m, 3H), 3.93 - 3.82 (m, 3H), 3.51 - 3.39 (m, 3H), 2.95 - 2.92 (m, 1H), 2.74 - 2.71 (m, 1H), 2.52 (s, 3H), 2.42 - 2.38 (m, 1H), 2.36 - 2.27 (m, 1H), 1.59 (s, 3H), 1.19 - 1.12 (m, 9H).

실시예 1: HepG2.2.15 세포에서의 항바이러스 분석

재료 및 장비

1) 세포주

HepG2.2.15(HepG2.2.15 세포주는 문헌[Sells, Chen, and Acs 1987 (Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84: 1005-1009)]에 설명된 바와 같이 HepG2 세포주의 형질감염에 의해 생성될 수 있으며, HepG2 세포주는 번호 HB-8065™로 ATCC®로부터 입수가능함).

2) 시약

DMEM/F12 (INVITROGEN-11330032)

FBS (GIBCO-10099-141)

디메틸 술폭시드(DMSO) (SIGMA-D2650)

페니실린-스트렙토마이신 용액 (HYCLONE-SV30010)

NEAA (INVITROGEN-1114050)

L-글루타민 (INVITROGEN-25030081)

제네티신 선발 항생제 (G418, 500 mg/ml) (INVITROGEN-10131027)

트립시나아제 절단 용액 (INVITROGEN-25300062)

CCK8 (BIOLOTE-35004)

QIAamp 96 DNA 블러드 키트(Blood Kit) (12) (QIAGEN-51162)

FastStart 범용 프로브 마스트 믹스(Universal Probe Mast Mix) (ROCHE-04914058001)

3) 소모품

96웰 세포 배양 플레이트 (COSTAR- 3599)

Micro Amp Optical 96웰 반응 플레이트 (APPLIED BIOSYSTEMS-4306737)

Micro Amp Optical 384웰 반응 플레이트 (APPLIED BIOSYSTEMS)

4) 장비

플레이트 판독기 (MOLECULAR DEVICES, SPECTRAMAX M2e)

원심분리기 (BECKMAN, ALLEGRA-X15R)

실시간 PCR 시스템 (APPLIED BIOSYSTEMS, QUANTSTUDIO 6)

실시간 PCR 시스템 (APPLIED BIOSYSTEMS, 7900HT)

방법

1) 항-HBV 활성 및 세포독성의 결정

HepG2.2.15 세포를 96웰 플레이트 내에 2% FBS 배양 배지 중에, 각각 HBV 억제 활성 및 세포독성의 결정을 위하여 40,000개의 세포/웰 및 5,000개의 세포/웰의 밀도로 플레이팅하였다. 37℃, 5% CO2에서 하룻밤 인큐베이션한 후, 세포를 화합물 함유 배지로 6일 동안 처리하였으며, 이때 배지 및 화합물은 3일의 처리 후 교체하였다. 각각의 화합물은 삼중으로 8개의 상이한 농도로 1:3으로 연속 희석시켜 테스트하였다. 화합물의 최고 농도는 항-HBV 활성 분석의 경우 10 uM 또는 1 uM이고 세포독성 결정의 경우 100 uM였다.

세포 생존성을 CCK-8 분석에 의해 결정하였다. 6일의 화합물 처리 후, 20 μl의 CCK-8 시약을 세포독성 분석 플레이트의 각각의 웰에 첨가하였다. 세포 플레이트를 37℃, 5% CO2에서 2.5시간 동안 인큐베이션하였다. 450 nm 파장에서의 흡광도 및 630 nm 파장에서의 흡광도 (기준으로서)를 측정하였다.

화합물에 의해 유도되는 HBV DNA 수준의 변화를 정량적 실시간 폴리머라아제 연쇄 반응(qPCR)에 의해 평가하였다. 간략하게는, 배양 배지 중 HBV DNA는 매뉴얼에 따라 QIAamp 96 DNA 블러드 키트를 사용하여 추출하고, 그 후 하기 표 1의 프라이머 및 프로브를 사용하여 실시간 PCR 분석에 의해 정량화하였다.

[표 1]

2) 데이터 분석

EC50 및 CC50 값을 GRAPHPAD PRISM 소프트웨어로 계산한다. DMSO 대조군의 CV%가 15% 미만이고 기준 화합물이 예상 활성 또는 세포독성을 나타내는 경우, 이 실험 배치의 데이터는 적격한 것으로 간주된다.

결과: 하기 표 2를 참조한다.

[표 2]

SEQUENCE LISTING <110> Janssen Pharmaceutica NV Johnson & Johnson (China) Investment Ltd. <120> HETEROARYLDIHYDROPYRIMIDINE DERIVATIVES AND METHODS OF TREATING HEPATITIS B INFECTIONS <130> P2019TC977 <150> PCT/CN2018/122257 <151> 2018-12-20 <150> US 62/791,524 <151> 2019-01-11 <160> 3 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> primer <400> 1 gtgtctgcgg cgttttatca 20 <210> 2 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> primer <400> 2 gacaaacggg caacatacct t 21 <210> 3 <211> 28 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> probe <400> 3 cctctkcatc ctgctgctat gcctcatc 28

Claims

하기 화학식 I의 화합물(이의 중수소화 이성질체, 입체이성질체 또는 호변이성질체 형태를 포함함), 또는 이의 제약상 허용가능한 염:
[화학식 I]

[여기서,
R¹, R² 및 R³은 독립적으로 H, 할로겐 및 C_1- ₄알킬로 이루어진 군으로부터 선택되며;
R⁴는 C_1- ₄알킬이며;
R⁵는 티아졸릴, 또는 피리딜(불소 및 C_1-3알킬로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환체로 선택적으로 치환됨)이며;
R⁶은 OH 및 CN으로 이루어진 군으로부터 선택되는 치환체로 선택적으로 치환된 C_1- ₄알킬이며;
m은 1이며;
r은 1이며;
n은 0 또는 1의 정수이며;
X는 C(=O), C(=S), 또는 SO₂이며;
Y는 NR⁷이며;
R⁷은 H, -C_1- ₆알킬, -C_1- ₆알킬-R⁸, -C_1- ₆알콕시-C_1- ₆알킬-R⁸, -(CH₂)_p-C(R¹¹R¹²)-R⁸ 및 -(CH₂)_p-Q-R⁸로 이루어진 군으로부터 선택되며;
R⁸은 -C_1- ₆알킬, -COOH, -C(=O)NHS(=O)₂-C_1- ₆알킬, 테트라졸릴, 및 카르복실산 생체 등배전자체로 이루어진 군으로부터 선택되며;
R¹¹및 R¹²는 이들이 부착된 탄소 원자와 함께, 선택적으로 헤테로원자(헤테로원자는 R⁹로 치환된 산소 또는 질소임)를 함유하는 3 내지 7원 포화 고리를 형성하며;
Q는 아릴, 헤테로아릴, 및 선택적으로 헤테로원자(헤테로원자는 R⁹로 치환된 산소 또는 질소임)를 함유하는 3 내지 7원 포화 고리로 이루어진 군으로부터 선택되며;
R⁹는 H, C_1- ₆알킬, 또는 C_1- ₆알콕시-C_1- ₆알킬이며;
p는 0, 1, 2, 또는 3의 정수이며;
Z는 CH₂ 또는 C(=O)임].
제1항에 있어서, 카르복실산 생체 등배전자체는 -P(=O)(OH)₂, -C(=O)NHOH, C(=O)NHCN, 1,2,4-옥사디아졸-5(4H)-온, 및 3-히드록시-4-메틸시클로부트-3-엔-1,2-디온으로 이루어진 군으로부터 선택되는 화합물.
제1항 또는 제2항에 있어서, R⁴는 메틸, 또는 에틸인 화합물.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, R⁵는 티아졸릴인 화합물.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, X는 C(=O)인 화합물.
제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, R⁶은 C_1- ₆알킬인 화합물.
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, m은 1이고, n은 0이고 r은 1인 화합물.
제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, Z는 CH₂인 화합물.
제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, R⁷은 -COOH로 치환된 C_1- ₆알킬인 화합물.
제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, R⁷은 (CH₂)_p-Q-CO₂H인 화합물.
제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, Q는 페닐인 화합물.
제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, Q는 C_3- ₆시클로알킬인 화합물.
제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, Q는 산소를 함유하는 3~6원 포화 고리인 화합물.
제1항에 있어서, 하기 화학식을 갖는 화합물로 이루어진 군으로부터 선택되는 화합물:

.
제1항 내지 제14항 중 어느 한 항의 화합물을 포함하고 하나 이상의 제약상 허용가능한 담체를 추가로 포함하는 제약 조성물.
의약으로 사용하기 위한 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항의 화합물 또는 제약상 허용가능한 염 또는 제15항의 제약 조성물.
HBV 감염 또는 HBV-유도성 질환의 예방 또는 치료를 필요로 하는 포유류에서의 HBV 감염 또는 HBV-유도성 질환의 예방 또는 치료에 사용하기 위한 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항의 화합물 또는 제약상 허용가능한 염 또는 제15항의 제약 조성물.
만성 B형 간염의 예방 또는 치료에 사용하기 위한 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항의 화합물 또는 제약상 허용가능한 염 또는 제15항의 제약 조성물.
HBV 감염 또는 HBV-유도성 질환의 치료 또는 예방을 필요로 하는 포유동물에서 HBV 감염 또는 HBV-유도성 질환의 치료 또는 예방에서 동시에, 개별적으로 또는 순차적으로 사용하기 위한 병용 제제로서 제1 화합물 및 제2 화합물을 포함하는 생성물로서, 상기 제1 화합물은 상기 제2 화합물과는 상이하고, 상기 제1 화합물은 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항의 화합물 또는 제약상 허용가능한 염 또는 제15항의 제약 조성물이고, 상기 제2 화합물은 다음으로 이루어진 군으로부터 선택되는 또 다른 HBV 억제제인, 생성물: HBV 병용 약물, HBV DNA 폴리머라아제 억제제, 면역조절제, toll-유사 수용체(TLR) 조절제, 인터페론 알파 수용체 리간드, 히알루로니다아제 억제제, b형 간염 표면 항원(HbsAg) 억제제, 세포독성 T-림프구 관련 단백질 4(ipi4) 억제제, 시클로힐린 억제제, HBV 바이러스 진입 억제제, 바이러스 mRNA를 표적화하는 안티센스 올리고뉴클레오티드, 짧은 간섭 RNA(siRNA) 및 ddRNAi 엔도뉴클레아제 조절제, 리보뉴클레오티드 리덕타아제 억제제, HBV E 항원 억제제, 공유적 폐쇄 원형 DNA(covalently closed circular DNA; cccDNA) 억제제, 파느소이드 X 수용체 작용제, HBV 항체, CCR2 케모카인 길항제, 티모신 작용제, 사이토카인, 핵단백질 조절제, 레틴산-유도성 유전자 1 자극제, NOD2 자극제, 포스파티딜이노시톨 3-키나아제(PI3K) 억제제, 인돌아민 2,3-디옥시게나아제(IDO) 경로 억제제, PD-1 억제제, PD-L1 억제제, 재조합 티모신 알파-1, 브루톤 티로신 키나아제(BTK) 억제제, KDM 억제제, HBV 복제 억제제, 아르기나아제 억제제 및 항-HBV 약물.
하기 단계를 포함하는, 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 따른 화합물의 제조 방법:
a. 하기 화학식 II:
[화학식 II]

의 알데히드, 하기 화학식 III:
[화학식 III]

의 아세토아세테이트, 및 하기 화학식 IV:
[화학식 IV]

의 아미딘을 염기(염기는 바람직하게는 NaOAc임)의 존재 하에 축합시켜 하기 화학식 I-1:
[화학식 I-1]

에 따른 화합물을 형성하는 단계;
b. 화학식 I-1의 화합물을 브롬화하여 하기 화학식 I-2:
[화학식 I-2]

에 따른 화합물을 형성하는 단계(브롬화제는 바람직하게는 N-브로모숙신이미드임);
c. 화학식 I-2의 화합물을 염기(염기는 바람직하게는 트리에탄올아민임)의 존재 하에 하기 화학식 V:
[화학식 V]

의 화합물과 커플링시켜 화학식 I에 따른 화합물을 형성하는 단계.
하기 구조를 갖는 화합물(이의 임의의 염을 포함함):

.
하기 구조를 갖는 화합물(이의 임의의 염을 포함함):

.