CN109666676A - 筛查马凡综合征的试剂盒 - Google Patents

筛查马凡综合征的试剂盒 Download PDF

Info

Publication number
CN109666676A
CN109666676A CN201910084314.7A CN201910084314A CN109666676A CN 109666676 A CN109666676 A CN 109666676A CN 201910084314 A CN201910084314 A CN 201910084314A CN 109666676 A CN109666676 A CN 109666676A
Authority
CN
China
Prior art keywords
reagent
mankind
syndrome
site
fbn1
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201910084314.7A
Other languages
English (en)
Inventor
曲超
龚波
王庆伟
杨岚
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Sichuan Provincial Peoples Hospital
Original Assignee
Sichuan Provincial Peoples Hospital
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Sichuan Provincial Peoples Hospital filed Critical Sichuan Provincial Peoples Hospital
Priority to CN201910084314.7A priority Critical patent/CN109666676A/zh
Publication of CN109666676A publication Critical patent/CN109666676A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
    • C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6883—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/156—Polymorphic or mutational markers
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/172—Haplotypes

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明提供了一种突变基因，其特征在于：它是在人类FBN1基因的基础上出现c.4987T＞G突变。本发明还提供了检测人类FBN1基因突变位点c.4987T＞G的相关试剂在制备马凡综合征的筛查试剂中的用途。本发明将FBN1基因c.4987T＞G位点的变异，应用于马凡综合征辅助诊断试剂盒的制备中，能达到筛查的目的。

Description

筛查马凡综合征的试剂盒
技术领域
本发明涉及SNP领域，特别涉及与马凡综合征相关的SNP。
背景技术
马凡(Marfan)综合征，也有先天性中胚层发育不良、Marchesani综合征、蜘蛛指征、肢体细长症之称，其特征是周围结缔组织营养不良、骨骼异常、内眼疾病和心血管异常，是一种以结缔组织为基本缺陷的遗传性疾病。马凡综合征最早是由Marfan(1896)报道1例5岁女孩，生有特殊纤细且长的四肢。至1902年，Achard将这种体征称为蜘蛛指。Salle(1921)曾解剖1例患有本综合征的婴儿，发现有卵圆孔未闭。至1931年，Weve确认本综合征为显性遗传性疾病并认为系中胚层组织发育异常所致。
马凡综合征无法根治，只能通过手术或者药物对具体症状进行有限的缓解。经过治疗的患者多数可以存活到中年，通常死于主动脉瘤破裂和心力衰竭。
因此，通过正确的诊断，防止新生儿患此遗传病，十分重要。
FBN1基因的突变是导致马凡综合征的原因之一，基因诊断也成为目前确诊马凡综合征的重要手段。然而，并不是前述基因的任何位点的突变都与马凡综合征相关；通过检测现有的少数SNP位点来诊断马凡综合征亦难免造成假阴性的检测结果。
发明内容
本发明要解决的技术问题是：提供新的FBN1基因SNP位点，以及它们在制备马凡综合征筛查试剂盒中的用途。
首先，本发明提供了一种突变基因，其特征在于：它是在人类FBN1基因的基础上出现以下突变得到：
c.4987T＞G：编码区第4987位碱基T突变成G。
本发明还提供了检测人类FBN1基因突变位点c.4987T＞G的相关试剂在制备马凡综合征的筛查试剂中的用途。
如前述的用途，所述的试剂包括检测人类FBN1基因突变位点 c.4987T＞G的相关试剂；还包括任选的用于扩增包含人类FBN1基因编码区第4987位碱基的核酸片段的相关试剂。
如前述的用途，所述检测人类FBN1基因突变位点c.4987T＞G的相关试剂为测序试剂。
如前述的用途，所述检测人类FBN1基因突变位点c.4987T＞G的相关试剂为测序用试剂、荧光定量PCR试剂、限制性片段长度多态性方法用试剂或者单链构象多态性分析用试剂。
本发明还提供了一种马凡综合征的筛查试剂盒，它包括任选的用于检测人类FBN1基因突变位点c.4987T＞G的相关试剂。
如前述的试剂盒，所述的试剂包括检测人类FBN1基因突变位点 c.4987T＞G的相关试剂；还包括任选的用于扩增包含人类FBN1基因编码区第4987位碱基的核酸片段的相关试剂。
如前述的试剂盒，所述检测人类FBN1基因突变位点c.4987T＞G的相关试剂为测序试剂。
如前述的试剂盒，所述检测人类FBN1基因突变位点c.4987T＞G的相关试剂为测序用试剂或荧光定量PCR试剂。
如前述的试剂盒，所述检测人类FBN1基因突变位点c.4987T＞G的相关试剂为限制性片段长度多态性方法用试剂或者单链构象多态性分析用试剂。
本发明的试剂盒，通过检测FBN1基因的SNP位点c.4987T＞G来辅助马凡综合征的筛查，具有可靠的特异性。本发明的试剂盒在正常人中未能检测到所述突变，而在所检测的马凡综合征家系的确诊患病成员中，都检测出所述突变，检测结果具有可重复性。
本发明所提供的检测FBN1基因的SNP位点c.4987T＞G的试剂在制备马凡综合征筛查试剂盒的用途。且该检测试剂可以是包括测序用试剂、荧光定量PCR试剂、限制性片段长度多态性方法用试剂、单链构象多态性分析用试剂或者测序试剂等多种SNP检测试剂，转化生产的前景十分广阔。
显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
以下通过实施例、实验例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实施例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
附图说明
图1是马凡综合征家系图：实心方形或圆形表示马凡综合征患者；箭头表示先证者；斜杠表示已故。
图2是本发明所述SNP位点测序图。
具体实施方式
实施例本发明的试剂盒及使用方法
本发明试剂盒中的全部组分、含量和使用方法如下：
1.PCR扩增试剂(50人份)：
PCR扩增试剂用于扩增SNP位点所在的一段DNA序列，其组成见表1。
表1 PCR扩增试剂
组分 浓度 体积
PCR混合液 2× 600μl
引物对 10μM 100μl
纯水 2ml
表1中PCR混合液包括Taq酶、dNTP、镁离子等常规PCR所需成分；其中引物对信息如表2所示。
表2 FBN1基因扩增所用引物
2.FBN1基因变异分型检测试剂(50人份)：
该试剂包括如表3所示的组分。
表3 FBN1基因变异分型检测试剂
组分 体积
血清碱性磷酸酶 100μl
限制性外切酶 6μl
纯化缓冲液 6μl
Bigdye Mix 15μl
5×buffer 120μl
ddH<sub>2</sub>O 1ml
F引物 50μl
所述F引物为测序用引物，具体序列(SEQ ID NO.3)为： AGGCCATTCCAAAATGTGAA。
3.标准DNA样品：带有FBN1基因c.4987T＞G位点的野生纯合子/杂合子DNA，各50μl。
4.使用方法：
1)DNA提取
取患者全血(EDTA抗凝)2ml，提取其基因组DNA。
2)通过PCR扩增含有所检测的SNP位点的DNA片段，每个突变位点 PCR扩增体系如下：
组分 浓度 体积
样品DNA 50ng/μl及以上 1μl
PCR试剂混合液 2× 10μl
引物对 10μM 2μl
纯水 7μl
反应条件(具体退火温度见表2)：
PCR产物检测：
用2％的琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物，观察PCR反应的效果，并确定其作为模板在后续反应中加入的量。
3)Sanger测序检测
第一步：PCR产物纯化
体系：
组分 体积
PCR产物 4μl
血清碱性磷酸酶 2μl
限制性外切酶 0.1μl
纯化缓冲液 0.1μl
反应条件：
第二步：Sanger测序
将前述分型检测试剂作为测序扩增试剂，用于第一步纯化的PCR产物的 Sanger测序。
如果测序结果在编码区第4987位碱基T突变成G，且出现杂合双峰，则说明该检测样本患有马凡综合征。
为了进一步说明本发明所述突变位点与马凡综合征的关系，以及本发明试剂盒的效果，提供以下实验例。
实验例 突变位点的验证
1.方法
招募1个马凡综合征家系，对所有的家系成员都进行了完整的骨科、视力、心血管系统检查，检查到有4名马凡综合征病人(家系图谱如图1所示)。另外招募了1086名未患有马凡综合征的人作为对照。
扩增前述家系每个成员以及前述对照人群的FBN1基因，进行Sanger测序。
2.结果
测序结果显示，马凡综合征家系的患病成员依次携带c.4987T＞G杂合突变；而家系内非患病成员和对照人群均未见前述任一位点的突变。正常和突变位点测序图如图2所示。
综上，本发明将FBN1基因c.4987T＞G位点的变异，应用于马凡综合征辅助诊断试剂盒的制备中，能达到筛查的目的。
SEQUENCE LISTING
<110> 四川省人民医院
<120> 一种基于FBN1基因c.4987T>G位点的马凡综合征筛查试剂盒
<130> GYKH1122-2019P014910CC
<160> 3
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 1
aggccattcc aaaatgtgaa 20
<210> 2
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 2
ttgtgagctc tcttcctctt tgt 23
<210> 3
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 3
aggccattcc aaaatgtgaa 20

Claims (10)

1.一种突变基因，其特征在于：它是在人类FBN1基因的基础上出现以下突变得到：
c.4987T＞G：编码区第4987位碱基T突变成G。
2.检测人类FBN1基因突变位点c.4987T＞G的相关试剂在制备马凡综合征的筛查试剂中的用途。
3.根据权利要求2所述的用途，其特征在于：所述的试剂包括检测人类FBN1基因突变位点c.4987T＞G的相关试剂；还包括任选的用于扩增包含人类FBN1基因编码区第4987位碱基的核酸片段的相关试剂。
4.根据权利要求3所述的用途，其特征在于：所述检测人类FBN1基因突变位点c.4987T＞G的相关试剂为测序试剂。
5.根据权利要求3所述的用途，其特征在于：所述检测人类FBN1基因突变位点c.4987T＞G的相关试剂为荧光定量PCR试剂、限制性片段长度多态性方法用试剂或者单链构象多态性分析用试剂。
6.一种马凡综合征的筛查试剂盒，其特征在于：它包括任选的用于检测人类FBN1基因突变位点c.4987T＞G的相关试剂。
7.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于：所述的试剂包括检测人类FBN1基因突变位点c.4987T＞G的相关试剂；还包括任选的用于扩增包含人类FBN1基因编码区第4987位碱基的核酸片段的相关试剂。
8.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于：所述检测人类FBN1基因突变位点c.4987T＞G的相关试剂为测序试剂。
9.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于：所述检测人类FBN1基因突变位点c.4987T＞G的相关试剂为荧光定量PCR试剂。
10.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于：所述检测人类FBN1基因突变位点c.4987T＞G的相关试剂为限制性片段长度多态性方法用试剂或者单链构象多态性分析用试剂。
CN201910084314.7A 2019-01-29 2019-01-29 筛查马凡综合征的试剂盒 Pending CN109666676A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201910084314.7A CN109666676A (zh) 2019-01-29 2019-01-29 筛查马凡综合征的试剂盒

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201910084314.7A CN109666676A (zh) 2019-01-29 2019-01-29 筛查马凡综合征的试剂盒

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN109666676A true CN109666676A (zh) 2019-04-23

Family

ID=66149912

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201910084314.7A Pending CN109666676A (zh) 2019-01-29 2019-01-29 筛查马凡综合征的试剂盒

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN109666676A (zh)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110423809A (zh) * 2019-09-03 2019-11-08 郑州大学第一附属医院 一种影响人马凡综合征诊治的fbn1 g2125a突变及其应用
CN110527686A (zh) * 2019-09-25 2019-12-03 百世诺（北京）医疗科技有限公司 一种马凡综合征基因检测试剂盒
CN113980971A (zh) * 2021-11-02 2022-01-28 百世诺（北京）医疗科技有限公司 突变的马凡综合征致病基因fbn1及其应用

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2005333896A (ja) * 2004-05-27 2005-12-08 Nagasaki Univ マルファン症候群診断用プローブ、及び当該プローブを用いたスクリーニング法
CN101481743A (zh) * 2009-01-22 2009-07-15 浙江大学医学院附属第二医院 一种检测马凡综合症的试剂盒及其制备方法
CN104120132A (zh) * 2013-04-28 2014-10-29 福建省立医院 Fbn1基因突变体及其应用
CN105442052A (zh) * 2016-01-05 2016-03-30 华中科技大学同济医学院附属同济医院 一种检测诊断主动脉夹层病致病基因的dna文库及其应用
CN108753778A (zh) * 2018-06-01 2018-11-06 上海科技大学 利用碱基编辑修复fbn1t7498c突变的试剂和方法

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2005333896A (ja) * 2004-05-27 2005-12-08 Nagasaki Univ マルファン症候群診断用プローブ、及び当該プローブを用いたスクリーニング法
CN101481743A (zh) * 2009-01-22 2009-07-15 浙江大学医学院附属第二医院 一种检测马凡综合症的试剂盒及其制备方法
CN104120132A (zh) * 2013-04-28 2014-10-29 福建省立医院 Fbn1基因突变体及其应用
CN105442052A (zh) * 2016-01-05 2016-03-30 华中科技大学同济医学院附属同济医院 一种检测诊断主动脉夹层病致病基因的dna文库及其应用
CN108753778A (zh) * 2018-06-01 2018-11-06 上海科技大学 利用碱基编辑修复fbn1t7498c突变的试剂和方法

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
LYNN Y SAKAI 等: "FBN1: The disease-causing gene for Marfan syndrome and other genetic disorders", 《GENE》 *
YING XIAO 等: "A novel FBN1 mutation causes autosomal dominant Marfan syndrome", 《MOLECULAR MEDICINE REPORTS》 *
李芳 等: "6例少数民族家系马凡综合征患者的FBN1基因突变分析", 《第四届西南眼科年会暨贵州省医学会第五届六次眼科年会论文汇编》 *
郭小新 等: "8例马凡综合征家系的FBN1基因突变分析", 《第一届中国临床分子诊断大会论文集》 *

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110423809A (zh) * 2019-09-03 2019-11-08 郑州大学第一附属医院 一种影响人马凡综合征诊治的fbn1 g2125a突变及其应用
CN110527686A (zh) * 2019-09-25 2019-12-03 百世诺（北京）医疗科技有限公司 一种马凡综合征基因检测试剂盒
CN113980971A (zh) * 2021-11-02 2022-01-28 百世诺（北京）医疗科技有限公司 突变的马凡综合征致病基因fbn1及其应用
CN113980971B (zh) * 2021-11-02 2022-05-06 百世诺（北京）医疗科技有限公司 突变的马凡综合征致病基因fbn1及其应用

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN109666678A (zh) 检测马凡综合征的试剂盒
Angioni et al. Genetic characterization of endometriosis patients: review of the literature and a prospective cohort study on a Mediterranean population
CN109666676A (zh) 筛查马凡综合征的试剂盒
CN109554467A (zh) 一种基于FBN1基因c.3617G&gt;A位点的马凡综合征筛查试剂盒
KR101992786B1 (ko) Cyp2e1 유전자의 메틸화 수준을 이용한 비만의 예측 또는 진단을 위한 정보제공방법 및 이를 위한 조성물
CN102985561B (zh) 用于确定并且验证常见的和罕见的染色体非整倍性的归一化染色体
US20130078633A1 (en) Detection of Isotype Profiles as Signatures for Disease
CN109666734A (zh) 一种马凡综合征多位点筛查试剂盒
CN109952381A (zh) 用于多重检测甲基化dna的方法
US20210024999A1 (en) Method of identifying risk for autism
WO2023142619A1 (zh) 一种扩张型心肌病基因检测标志物及其应用
KR101992785B1 (ko) Gnas 유전자의 메틸화 수준을 이용한 고혈압의 예측 또는 진단을 위한 정보제공방법 및 이를 위한 조성물
CN107142320A (zh) 用于检测肝癌的基因标志物及其用途
CN109666729A (zh) 一种马凡综合征筛查试剂盒
CN106987642A (zh) 检测mpl基因全外显子的试剂盒和方法
CN109055532A (zh) 胚胎植入前遗传性耳聋基因检测用引物组合物、试剂盒及应用
CN107164508A (zh) 用于检测肝癌的基因标志物及其用途
CN109735614A (zh) 一种先天性无虹膜筛查试剂盒
KR101992787B1 (ko) Bzrap1-as1 유전자의 메틸화 수준을 이용한 고혈압의 예측 또는 진단을 위한 정보제공방법 및 이를 위한 조성물
CN104232650B (zh) 特发性基底节钙化新的致病基因及其编码蛋白质和应用
CN109182490A (zh) Lrsam1基因snp突变位点分型引物及其在冠心病预测中的应用
CN109735611A (zh) 一种用于检测骨髓衰竭综合征的基因组合、引物库、构建高通量测序文库的方法及其应用
CN107385076B (zh) 一种甲状腺功能减退致病基因突变及基于此基因突变的诊断试剂
CN107400708A (zh) Xrcc1基因多态性在风湿性关节炎诊断有效性中的用途
WO2015124080A1 (zh) Zfp28的变异位点在制备诊断精神分裂症的试剂盒中的用途

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20190423

RJ01 Rejection of invention patent application after publication