CN110423809A - 一种影响人马凡综合征诊治的fbn1 g2125a突变及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明属于分子生物技术和分子遗传领域，特别涉及一种影响人类马凡综合征辅助诊断及临床干预的错义突变及其应用。所述影响人类马凡综合征辅助诊断及预后的错义突变的突变位点对应于人类FBN1基因编码区第2125位核苷酸位点G>A，命名为c.G2125A。本发明还提供了一种用于鉴定上述错义突变的引物，公开了鉴定前述错义突变在人类马凡综合征辅助诊断及临床干预中的用途，以及鉴定该错义突变用于人类马凡综合征产前诊断的方法。本发明的优点在于为防治马凡综合征提供了新的治疗靶点，为马凡综合征的早期诊断及预后判断提供了强有力的分子生物学工具，具有深远的临床意义和重要的推广前景。

Description

一种影响人马凡综合征诊治的FBN1 G2125A突变及其应用

技术领域

本发明属于分子生物技术和分子标记技术领域，特别涉及一种影响人类马凡综合征辅助诊断及临床干预的错义突变及其应用。

背景技术

马凡综合征是一种遗传性结缔组织疾病，为常染色体显性遗传，患病特征为四肢、手指、脚趾细长不匀称，身高明显超出常人，伴有心血管系统异常，特别是合并的新脏瓣膜异常和主动脉瘤。随年龄增长呈进行性发展，在婴儿期已有明显表现。该病同时可能影响其他器官，包括肺、眼、硬脊膜、硬鄂等。约2/3患者有父母患病，另1/3患者为散发病例，常与父亲年龄相对较大有关。该综合征是由于纤维素原基因（FBN1）突变引起的。正常人群基因组中FBN1基因为野生型，无突变，少数个体存在多态性，这种多态性不影响FBN1蛋白的功能。

FBN1基因的致病性变异可导致Acromicric发育不良（ACMICD）、晶状体异位1型(ECTOL 1)、马凡综合征、Geleophysic发育不良2，马凡脂肪营养不良综合征，皮肤僵硬综合征、Weill-Marchesani综合征-2(WMS 2)，遗传方式为常染色体显性遗传（AD）（参考OMIM数据库）。

发明内容

为了解决上述问题，本发明的首要目的在于提供一种导致人类马凡综合征的错义突变。

本发明的另一目的在于提供上述导致人类马凡综合征的错义突变在人类马凡综合征辅助诊断及临床干预中的应用。

本发明的再一目的在于提供一种用于鉴定上述导致人类马凡综合征的错义突变的引物。

本发明的第四个目的在于提供一种评估人类马凡综合征发病风险的方法。

本发明的第五个目的在于提供一种人类马凡综合征产前诊断的方法。

本发明的目的通过下述技术方案实现：

一种导致人类马凡综合征的错义突变，其突变位点对应于人类FBN1基因编码区第2125位编码碱基由G突变为A，即FBN1 mutation：c.G2125A (p.Ala709Tha)( NM_000138)；所属的人类错义突变的突变位点为SEQ ID NO.1所示，其中序列中的M是突变碱基，导致马凡综合征的发生；

所述的导致人类马凡综合征的错义突变在人类马凡综合征辅助诊断及临床干预中的应用；

所述的人类马凡综合征辅助诊断为利用上述错义突变鉴定人类马凡综合征；

所述的人类马凡综合征辅助诊断还包括利用上述错义突变评估、干预人类马凡综合征发病风险；

所述的临床干预为利用上述错义突变实行临床干预；

所述的人类为亚洲人群；

一种用于鉴定上述影响人类马凡综合征发病风险的错义突变的引物，包含上游引物PCR-F和下游引物PCR-R；

上游引物PCR-F为：5′- CCTGGTGTAAAGGTGACTCCC-3′(SEQ ID NO.2)

下游引物PCR-R为：5′- CTAGCCCATCATCCCGAGTG-3′(SEQ ID NO.3)。

所述的用于鉴定上述导致人类马凡综合征的错义突变的引物在马凡综合征辅助诊断及临床干预中的应用；

所述的人类为亚洲人群；

一种评估人类马凡综合征发病风险的方法，包含如下步骤：

检测人类FBN1基因上述错义突变的单核苷酸是G还是A；

所述的人类为亚洲人群；

一种人类马凡综合征的产前诊断的方法，包含如下步骤：

确定受检者夫妻双方的上述错义突变，并根据错义突变做出相应的措施：

如受检者夫妻中一方上述错义突变为杂合突变，提示受检者子女出现马凡综合征风险高，应积极采取预防措施；如受检者夫妻双方上述错义突变为无突变，提示受检者子女出现马凡综合征风险降低，可仅进行常规检查；

所述的人类为亚洲人群；

本发明的测定方法测定来源于人的基因组DNA，样品没有限制，如体液(如血液)、组织细胞(如皮肤组织)等，通过提取和纯化这些样品均可制备基因组DNA。本发明公开了FBN1基因编码区第2125位碱基由G到A的变异，且FBN1基因的序列已知，用现有检测核苷酸变异的方法均可以检测上述位点的多态性。

本发明通过检测FBN1基因编码区第2125位G→A变异来辅助马凡综合征的筛查，具有可靠的特异性。本发明在正常人中未能检测到所述突变，而在所检测的马凡综合征家系的确诊患病成员中，都检测出所述突变，检测结果具有可重复性。应用前景良好。

本发明通过检测夫妻双方上述错义突变，能够预测子代获得马凡综合征的风险，有助于产前诊断，及早作出确诊，防止马凡综合征蔓延。

本说明书中未作详细描述的内容属于本领域专业技术人员公知的现有技术。以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明，并不用于限制本申请。对于本领域技术人员来说，本申请可以有各种更改和变化。凡在本申请的精神和原理之内所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本申请的权利要求范围之内。

附图说明

图1 是本发明所述突变位点家系图：箭头所示为先证者。

图2 是本发明所述突变位点测序图，箭头所示为突变位点。

具体实施方式

下面结合实施例及附图对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。

实施例1 突变位点的疾病相关性

1.DNA提取及全外显子测序

取全血样本200微升，采用萃取方法提取全基因组DNA，使用Nanodrop2000对DNA行质量检测和浓度测定。A260/280比值在1.8～2.0，A260/230壁纸在1.7～1.9判定为合格。最后将合格的DNA样品统一稀释至100纳克/微升。对合格的DNA样品进行高通量测序获取相关基因突变信息。

2. ACMG遗传变异分类分析：

受检者样品中检测到FBN1基因的杂合变异c.G2125A（编码区第2125位核苷酸G变成A），导致第709位编码的丙氨酸Ala变成苏氨酸Thr。该变异位于蛋白质关键结构域TB区域（PM1），该变异在已知参考数据库中未被收录，不属于多态性变化（PM2），多种统计方法预测出该变异会对基因或基因产物造成有害影响（PP3）。

3.结果判定：

根据ACMG指南判定该变异为意义不明的。

实施例2 突变位点的检测方法

1.含有与人马凡综合征发病显著相关基因错义突变位点的目的片段的扩增。

目的片段为FBN1基因第18外显子上一段579bp的核苷酸序列，序列扩增的上下游引物为：

上游引物PCR-F为：5′- CCTGGTGTAAAGGTGACTCCC-3′(SEQ ID NO.2)

下游引物PCR-R为：5′- CTAGCCCATCATCCCGAGTG-3′(SEQ ID NO.3)

浓度：100μmol/L

2)体系配制：

3)反应程序：

3.DNA序列测序鉴定：序列测序在3730xlDNAAnalyzer（ABI公司）上进行。将所测得的序列与NCBI基因组序列对比，得出对应单核苷酸位点的基因型。测序结果如下所示：

CCTGGTGTAAAGGTGACTCCCtggggagatacctccttttccgttaccacttaagtttggttctactcactttggaggaaatgatgtgtgcaaaaccaagggcaggatctacctgttctgcaaacaagggaatcatttactatctgttaatttattgcagcggaatatcagM(g\a)cactctgcagcagtgggccaggaatgacgtcagcaggcagtggtaaggattcctttcaaaatttactaccttcagtatgtgcagaggcagcatcaggctttcttgtgggtttccagttgatccctttacactagtctggcctgactccctctctggccatcactgtgccatgtatctgggatgctcagaagccttcagtggcagagcagccggggcactgtgggctctaggatttctgggtgtggctgtgggacttggccactgagggggtcaggtgctctctcagtgtggttgatgggtgctcgcagatgatgtgtaatgacttttgttgctcatgcttgagaaggggcagcctgactctcttgtggatcttccactatcaagtacCACTCGGGATGATGGGCTAG

（SEQ ID NO.1）

注：序列表中标注的M为突变位点，用标有下划线显示（括号中为突变碱基、为等位基因突变），在该序列的首尾加粗显示为引物序列。

综上，本发明将FBN1基因c.G2125A位点的变异，应用于马凡综合征辅助诊断及临床干预中，具有良好的应用前景。

序列表

<110> 郑州大学第一附属医院

<120> 一种影响人马凡综合征诊治的FBN1 G2125A突变及其应用

<160> 1

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 579

<212> DNA

<213> 人(2 Ambystoma laterale x Ambystoma jeffersonianum)

<400> 1

cctggtgtaa aggtgactcc ctggggagat acctcctttt ccgttaccac ttaagtttgg 60

ttctactcac tttggaggaa atgatgtgtg caaaaccaag ggcaggatct acctgttctg 120

caaacaaggg aatcatttac tatctgttaa tttattgcag cggaatatca ggcactctgc 180

agcagtgggc caggaatgac gtcagcaggc agtggtaagg attcctttca aaatttacta 240

ccttcagtat gtgcagaggc agcatcaggc tttcttgtgg gtttccagtt gatcccttta 300

cactagtctg gcctgactcc ctctctggcc atcactgtgc catgtatctg ggatgctcag 360

aagccttcag tggcagagca gccggggcac tgtgggctct aggatttctg ggtgtggctg 420

tgggacttgg ccactgaggg ggtcaggtgc tctctcagtg tggttgatgg gtgctcgcag 480

atgatgtgta atgacttttg ttgctcatgc ttgagaaggg gcagcctgac tctcttgtgg 540

atcttccact atcaagtacc actcgggatg atgggctag 579

Claims (10)

1.一种导致人类马凡综合征的错义突变，其特征在于其突变位点对应于人类FBN1基因区第2125位编码碱基由G突变为A，即FBN1 mutation：c.G2125A (p.Ala709Thr)( NM_000138)。

2.权利要求1所述的导致人类马凡综合征的错义突变在人类马凡综合征辅助诊断及临床干预中的应用。

3.根据权利要求2所述的导致人类马凡综合征的错义突变在人类马凡综合征辅助诊断及临床干预中的应用，其特征在于：所述的人类马凡综合征研究为利用权利要求1所述的错义突变鉴定人类马凡综合征。

4.根据权利要求3所示的导致人类马凡综合征的错义突变在人类马凡综合征辅助诊断及临床干预中的应用，其特征在于：所述的人类马凡综合征辅助诊断及临床干预还包括利用上述错义突变评估、干预人类马凡综合征。

5.根据权利要求2所述的导致人类马凡综合征的错义突变在人类马凡综合征辅助诊断及临床干预中的应用，其特征在于：所述的人类为亚洲人群。

6.一种用于鉴定权利要求1所述的导致人类马凡综合征的错义突变的引物，其特征在于包含上游引物PCR-F和下游引物PCR-R；

上游引物PCR-F为：5′- CCTGGTGTAAAGGTGACTCCC-3′(SEQ ID NO.2)；

下游引物PCR-R为：5′- CTAGCCCATCATCCCGAGTG-3′(SEQ ID NO.3)。

7.权利要求6所述的用于鉴定导致人类马凡综合征的错义突变的引物在马凡综合征辅助诊断及临床干预中的应用。

8.一种检测人类马凡综合征的方法，其特征在于包含如下步骤：检测权利要求1所述的人类FBN1基因错义突变的单核苷酸是G还是A。

9.一种人类马凡综合征的产前诊断的方法，其特征在于包含如下步骤：确定受检者夫妻双方的权利要求1所述的错义突变，并根据错义突变做出相应的措施：如受检者夫妻中一方上述错义突变为杂合突变，提示受检者子女出现马凡综合征风险高，应积极采取预防措施；如受检者夫妻双方上错义突变为无突变，即夫妻双方上述错义突变均为正常，提示受检者子女出现马凡综合征风险降低，可仅进行常规检查。

10.根据权利要求9中所述的人类马凡综合征的产前诊断的方法，其特征在于：所述的人类为亚洲人群。