CN109646454A - 异麦芽糖酐铁1000的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种异麦芽糖酐铁1000的制备方法，该方法包括(1)右旋糖酐1用硼氢化钠还原；(2)步骤(1)得到的还原低聚糖与三价铁盐，氢氧化钠络合反应；(3)步骤(2)得到的反应液超滤纯化；(4)步骤(3)得到的反应液用柠檬酸活化；(5)干燥得到异麦芽糖酐铁1000。通过本发明方法，在整个操作过程中右旋糖酐1只经过简单还原处理，避免了多聚糖水解，纯化的复杂工序，使得整个生产周期大幅缩短，生产成本降低。

Description

异麦芽糖酐铁1000的制备方法

技术领域

本发明属于药物化学领域，涉及静脉铁制剂原料药的制备，具体涉及异麦芽糖酐铁1000的制备。

背景技术

异麦芽糖酐铁1000是三价氢氧化铁(III)和异麦芽糖酐1000组成的复合物。化学名为低聚糖氢氧化铁复合物。微粒与内核结构：异麦芽糖酐铁是由FeOOH晶体内核和包裹内核的无定形的异麦芽糖酐壳组成的胶体颗粒。在溶液中，结合在胶体颗粒上的异麦芽糖酐与环境溶液中的异麦芽糖酐维持一种动态平衡状态。

Pharmacosmos公司原创研发的异麦芽糖酐铁1000注射液于2009年12月21日在丹麦批准上市，后陆续共在欧盟22个国家上市销售。目前可销售的剂型为注射液，西林瓶包装。商品名为

本品为抗贫血药。铁为血红蛋白及肌红蛋白的主要组成成份。血红蛋白为红细胞中主要携氧者。肌红蛋白系肌肉细胞贮存氧的部位，以助肌肉运动时供氧需要。与三羧酸循环有关的大多数酶均含铁，或仅在铁存在时才能发挥作用。所以对缺铁患者积极补充铁剂后，除血红蛋白合成加速外，与组织缺铁和含铁酶活性降低的有关症状如生长迟缓、行动异常、体力不足、粘膜组织变化以及皮肤指甲病变也均能逐渐得以纠正。

对口服补铁不适用或无效，并由于各种紊乱(如血液透析患者)导致持续大量失血的缺铁/失血患者，应当采用肠道外方式补铁。在大多数情况下肠道外补铁可用于围手术期失血、自体输血、恶性肿瘤、系统性感染、炎症性肠炎和吸收障碍导致的铁缺乏/失血。目前，肠道外铁剂最常用于接受血液透析和促红细胞生成药物(ESA's，如泊汀或达贝泊汀)的慢性肾病患者。部分研究表明，对这些患者来说，肠道外铁剂的作用优于口服铁剂。对肾炎贫血患者来说，可能是因为胃肠道对铁吸收不良导致铁缺乏，故应采用肠道外补铁而非口服补铁。此外，采用ESA治疗时，尤其是在初始阶段，需要大量铁，可能会出现功能性铁缺乏。功能性铁缺乏的特征是尽管铁储备量正常甚至略高，但是仍然不能满足造血的需要。

具有如下特点：(1)复合物中糖的分子量为1kD，与分子量达5-7.5kD的右旋糖酐铁(英国药典或美国药典)相比，使用这种分子量的低聚糖可以降低过敏反应的可能性；(2)低聚糖铁的泌尿排泄受限；(3)中的游离铁含量远低于其他静脉铁剂如增加了产品的安全性；(4)中的低聚糖铁复合物与中右旋糖酐铁复合物具有相同的疗效，并远好于葡萄糖酸铁或蔗糖铁。

现有技术制备异麦芽糖酐铁1000以分子量小于5kD的葡聚糖为起始原料，经过水解、膜分离纯化后，还原得到低聚氢化糖，低聚氢化糖与三氯化铁反应后，柠檬酸活化、干燥后得到异麦芽糖酐铁1000原料药。

发明内容

本发明以右旋糖酐1为起始物料制备异麦芽糖酐铁1000，可以避免复杂的多糖水解，提纯等繁杂过程。本发明以右旋糖酐1为起始物料是基于以下原因：

(1)右旋糖酐1为市场上易得的化工原料，来源稳定；

(2)右旋糖酐1外观为白色固体粉末，较易存储和运输；

(3)右旋糖酐1质量控制合理且完善，能用常规的检测手段监测质量；对符合质量标准的右旋糖酐1进行后续的氢化低聚糖制备，能够在现有的工艺基础上制备得到符合质量标准的API；

(4)使用右旋糖酐1可以避免复杂的多糖水解，提纯等繁杂过程，降低生产成本，提高生产效率。

本发明制备异麦芽糖酐铁1000的步骤包括：

(1)右旋糖酐1用硼氢化钠还原；

(2)步骤(1)得到的还原低聚糖与三价铁盐，氢氧化钠络合反应；

(3)步骤(2)得到的反应液超滤纯化；

(4)步骤(3)得到的反应液用柠檬酸活化；

(5)干燥得到异麦芽糖酐铁1000。

其中，步骤(1)的反应温度为15～30℃，优选25℃。

步骤(2)使用的三价铁盐为三氯化铁，反应温度为80～100℃，优选85℃。

本发明方法具体可为：

(1)右旋糖酐溶于纯化水中；分别加入氢氧化钠溶液，硼氢化钠，加毕，室温搅拌反应；用酸溶液调节体系pH至6-7备用。其中，氢氧化钠溶液的浓度可为30％～60％，优选50％。

(2)将上述还原低聚糖与三氯化铁溶液混合，用氢氧化钠溶液调节体系pH至10-11.5，加热至85℃反应，用0.45um滤芯过滤。酸溶液调节体系pH至5-7，超滤膜超滤纯化。其中，超滤膜为10kD超滤膜，氢氧化钠溶液的浓度为20％～30％。

(3)将超滤浓缩液加入柠檬酸，并用氢氧化钠调节pH至7.5-8.0，加热回流，自然降至室温，补加氯化钠至铁：氯＝10：1，补加氢化低聚糖至铁：氢化低聚糖＝1：2，调节pH至5-7。

(4)喷雾干燥得到异麦芽糖酐铁1000原料药。

其中，三氯化铁溶液来源于六水三氯化铁。原料右旋糖酐1与硼氢化钠的质量比为1:0.01～0.10，优选1:0.05。右旋糖酐1与六水三氯化铁的质量比为1:0.5～1.0，优选1:0.61。右旋糖酐1与柠檬酸的质量比为1:0.005～0.10，优选1:0.013。

本发明方法得到的异麦芽糖酐铁1000原料药的分子量和粒径与现有技术制备得到的原料药一致

在整个操作过程中右旋糖酐1只经过简单还原处理，避免了多聚糖水解，纯化的复杂工序，使得整个生产周期大幅缩短，生产成本降低。

具体实施例

在下面将对本发明进行详细描述。然而，本发明可能具体体现为许多不同的形式，而且它不应该被局限于此处所描述的实施例中，提供这些实施例中的目的是使所披露内容更完整与全面。所用试剂和原料，除了提供制备方法的除外，其余均为市售。除非另有定义，否则本文中所有科技术语具有的含义与权利要求主题所属技术领域人员通常理解的含义相同。

实施例1对比例

低聚氢化糖的制备：

将15kg分子量＜5000da葡聚糖在pH＝1.5，95℃条件下水解；用GPC监控水解液分子量主要分布在1000da附件停止水解；浓缩液用500da膜分离纯化，除去低聚糖，测试溶液中糖含量；取相当于9kg固含量的溶液分别加入50％氢氧化钠溶液200g，硼氢化钠454g，加毕，室温搅拌反应4小时；用6N盐酸调节体系pH至6.2备用。

铁-糖络合物反应液制备及纯化：

将上述还原低聚糖与15kg三氯化铁溶液(含六水三氯化铁5.5kg)混合，用氢氧化钠溶液(27％)调节体系pH至11，加热至85℃反应1小时，用0.45um滤芯过滤。盐酸调节体系pH至5.8，超滤纯化。

活化处理：

将超滤浓缩液加入柠檬酸120g，并用氢氧化钠调节pH至8.0，加热回流活化1小时，自然降至室温，补加氯化钠至铁：氯＝10：1，补加氢化低聚糖至铁：氢化低聚糖＝1：2，调节PH至5.6.

干燥

喷雾干燥得到异麦芽糖酐铁1000原料药。测得分子量为150kD，粒径为13.5nm。

实施例2

低聚氢化糖的制备：

将9kg右旋糖酐1搅拌溶于18L纯化水中；分别加入50％氢氧化钠溶液200g，硼氢化钠454g，加毕，室温搅拌反应4小时；用6N盐酸调节体系PH至6.2备用。

铁-糖络合物反应液制备及纯化：

将上述还原低聚糖与15kg三氯化铁溶液(含六水三氯化铁5.5kg)混合，用氢氧化钠溶液(27％)调节体系PH至11，加热至85℃反应1小时，用0.45um滤芯过滤。盐酸调节体系PH至5.8，超滤纯化。

活化处理：

将超滤浓缩液加入柠檬酸120g，并用氢氧化钠调节pH至8.0，加热回流活化1小时，自然降至室温，补加氯化钠至铁：氯＝10：1，补加氢化低聚糖至铁：氢化低聚糖＝1：2，调节PH至5.6.

干燥

喷雾干燥得到异麦芽糖酐铁1000原料药。测得分子量为150kD，粒径为13.9nm。

实施例3粒径检测方法

检查方法：粒度及粒度分布测定法(中国药典2015年版通则0982第三法)操作过程：

(1)仪器、试剂

仪器：马尔文激光散射粒径仪Nano ZS90

试剂：超纯水

(2)仪器参数

分散剂：水

分散剂折光系数：1.330

粘度(cP)：0.8872

Fe2O3折光系数：3.01

Fe2O3吸收：0.010

测量模式：自动

(3)标准溶液的制备

(3-1)60nm标准品溶液

试管中加入经0.22μm滤过的水，加入10～12滴60nm标准品和1～4滴4mM氯化钠，混匀，超声处理10～15秒使混悬。

(4)供试品溶液

取本品约40μl，置试管中，加入0.22μm滤过的水4ml，混合，超声10～15秒，作为供试品溶液。

(5)试验过程

(5-1)仪器校准

向样品池中注入60nm标准品溶液，并将样品池放入仪器检测窗口中，设置仪器参数，测试标准品的粒径，要求结果在标准粒径的±15％。

(5-2)供试品测定

向样品池中注入供试品溶液，并将样品池放入仪器检测窗口中，设置仪器参数，进行样品粒径的测试。

实施例4分子量检测方法

检查方法：分子排阻色谱法(中国药典2015年版通则0514)

操作过程：

(1)仪器

高效液相色谱仪、示差折光检测器、电子分析天平

(2)试剂及对照品

超纯水、叠氮化钠(分析纯或更高)、右旋糖酐标准品(DXT21K、DXT41K、DXT95K、DXT225K、DXT420K、DXT820K)

(3)色谱条件

色谱柱：UltrahydrogelTM 1000(7.8mm 30cm)

检测器：示差折光检测器

流动相：0.1％叠氮化钠

柱温：33℃

示差检测池温度：35℃

流速：0.5ml/min

进样量：20μl

稀释液：0.1％叠氮化钠

运行时间：60分钟

(4)溶液配制

(4-1)流动相配制

称取叠氮化钠1.0g，加水1000ml溶解，混匀，即得。

(4-2)空白溶液：即流动相。

(4-3)对照品溶液

分别取标样(DXT21K、DXT41K、DXT95K、DXT225K、DXT420K、DXT820K)适量，用流动相制成3mg/ml的溶液，4℃下放置过夜使溶解，缓慢摇匀，作为对照品溶液。

(4-4)供试品溶液

取本品20mg，置50ml量瓶中，加流动相40ml，4℃下放置过夜使溶解，用流动相定容至刻度，缓慢摇匀，作为供试品溶液。

(5)进样程序

在选定分析方法下运行仪器，色谱系统稳定后，取空白溶液、对照品溶液、供试品溶液依次进样，记录色谱图。

(6)计算

以标准物质分子量(Mp)的对数值对相应的保留时间(tR)制得三次方标准曲线的线性回归方程，相关系数应不低于0.98。用GPC软件计算出供试品的重均分子量及分子量分布。

标准规定：重均分子量(Mw)应为120kDa～210kDa，分布宽度(Mw/Mn)应不大于2.0。

Claims (9)

1.一种制备异麦芽糖酐铁1000的方法，该方法包括：

(1)右旋糖酐1用硼氢化钠还原；

(2)步骤(1)得到的还原低聚糖与三价铁盐，氢氧化钠络合反应；

(3)步骤(2)得到的反应液超滤纯化；

(4)步骤(3)得到的反应液用柠檬酸活化；

(5)干燥得到异麦芽糖酐铁1000。

2.如权利要求1所述的方法，步骤(1)的反应温度为15～30℃，优选25℃。

3.如权利要求1所述的方法，步骤(2)使用的三价铁盐为三氯化铁，反应温度为80～100℃，优选85℃。

4.如权利要求1所述的方法，该方法为：

(1)右旋糖酐溶于纯化水中，分别加入氢氧化钠溶液，硼氢化钠，加毕，室温搅拌反应；用酸溶液调节体系pH至6-7备用，其中，氢氧化钠溶液的浓度为30％～60％，优选50％；

(2)将上述还原低聚糖与三氯化铁溶液混合，用氢氧化钠溶液调节体系pH至10-11.5，加热至85℃反应，用0.45um滤芯过滤，酸溶液调节体系pH至5-7，超滤膜超滤纯化；

(3)将超滤浓缩液加入柠檬酸，并用氢氧化钠调节pH至7.5-8.0，加热回流，自然降至室温，补加氯化钠至铁：氯＝10：1，补加氢化低聚糖至铁：氢化低聚糖＝1：2，调节pH至5-7；

(4)喷雾干燥得到异麦芽糖酐铁1000原料药。

5.如权利要求4所述的方法，步骤(2)中，超滤膜为10kD超滤膜，氢氧化钠溶液的浓度为20％～30％。

6.如权利要求4-5任一所述的方法，其中三氯化铁溶液来源于六水三氯化铁。

7.如权利要求6所述的方法，右旋糖酐1与硼氢化钠的质量比为1:0.01～0.10，优选1:0.05。

8.如权利要求6所述的方法，右旋糖酐1与六水三氯化铁的质量比为1:0.5～1.0，优选1:0.61。

9.如权利要求6所述的方法，右旋糖酐1与柠檬酸的质量比为1:0.005～0.10，优选1:0.013。