CN109593781A - 陆地棉基因组的精准高效编辑方法 - Google Patents

陆地棉基因组的精准高效编辑方法 Download PDF

Info

Publication number
CN109593781A
CN109593781A CN201811577717.7A CN201811577717A CN109593781A CN 109593781 A CN109593781 A CN 109593781A CN 201811577717 A CN201811577717 A CN 201811577717A CN 109593781 A CN109593781 A CN 109593781A
Authority
CN
China
Prior art keywords
sequence
cotton
carrier
ghbe3
ncas9
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201811577717.7A
Other languages
English (en)
Other versions
CN109593781B (zh
Inventor
金双侠
秦雷
李建英
孙琳
张献龙
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Huazhong Agricultural University
Original Assignee
Huazhong Agricultural University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Huazhong Agricultural University filed Critical Huazhong Agricultural University
Priority to CN201811577717.7A priority Critical patent/CN109593781B/zh
Publication of CN109593781A publication Critical patent/CN109593781A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN109593781B publication Critical patent/CN109593781B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
    • C12N15/8216—Methods for controlling, regulating or enhancing expression of transgenes in plant cells

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明属于植物基因工程技术领域，具体涉及陆地棉基因组的精准高效编辑方法。本发明对含有棉花内源启动子pGhU6‑7的pRGEB32‑GhU6.7‑NPTⅡ载体进行改造，以APOBEC1‑XTEN‑nCas9‑UGI融合蛋白取代原有的Cas9蛋白，构建在棉花中具有单个碱基编辑能力的载体GhBE3。选取GhCLA和GhPEBP为目标基因验证GhBE3在棉花中的应用。设计3个靶标，利用农杆菌介导的遗传转化将单碱基编辑系统导入棉花基因组，对转基因植株进行Sanger测序和高通量测序，检测本发明在异源四倍体棉花基因组中的编辑效率及全基因组检测脱靶效应。本发明具有良好的编辑效率和特异性。

Description

陆地棉基因组的精准高效编辑方法
技术领域
本发明属于组基因工程技术领域，具体涉及陆地棉基因组的精准高效编辑方法。本发明涉及构建陆地棉的高效转化载体，并利用本发明的载体在陆地棉功能基因组中进行精准编辑。
背景技术
目前，锌指核酸酶(ZFN)，类转录激活因子核酸酶(TALEN)，规律成簇间隔短回文重复(CRISPR)/Cas9三大基因编辑技术被用于研究基因的功能和调控机制，其中CRISPR/Cas9技术已成为生命科学研究的热点和最流行的基因组编辑技术。CRISPR/Cas9能够产生DNA双链断裂(DSBs)，在细胞中产生两种修复DSB的途径：非同源末端修复(NHEJ)和同源重组介导的修复(HDR)。目前的研究结果表明，CRISPR/Cas9系统切割靶标位点后启动的HR介导的DNA修复在植物基因组编辑中非常低效(Li et al 2013；Mao et al 2013)，主要以非同源充足修复为主，而且DNA修复模板如何高效地在编辑细胞中的的递送也是一个挑战，这些在很大程度上限制了CRISPR/Cas9系统对作物基因实施的精确编辑，难以实现单个碱基的编辑。
CRISPR/nCas9/dCas9融合胞嘧啶脱氨酶的碱基编辑系统不需要产生DSB和提供DNA模板就能有效地替代基因组中的特定碱基。sgRNA通过与靶位点互补配对，引导融合蛋白中dCas9或nCas9结合到靶位点,dCas9或nCas9没有切割DNA双链的核酸内切酶活性，但保留了DNA结合活性。胞嘧啶脱氨基酶能使靶位点中的胞嘧啶(C)在水解脱氨基作用下转变成尿嘧啶(U)，而尿嘧啶在基因组中是不能稳定存在的，在DNA复制过程中，会被胸腺嘧啶(T)代替，互补链上相对应位点的鸟嘌呤(G)转变成腺嘌呤(A)。高彩霞(Zong et al 2017)等在水稻，小麦，玉米种已经验证胞嘧啶脱氨酶与Cas9缺口酶(nCas9)融合可以使特定的碱基发生替换，并且在靶标序列上的编辑窗口比动物中更广泛。这些研究结果表明该系统在植物中同样可以进行高效，精准的单个碱基的替换。
目前，单碱基编辑系统在很多物种中被报道，但是在异源四倍体棉花中尚无报道。陆地棉是一种广泛种植的异源四倍体(AtDt)，其基因组中的许多等位基因在DNA测序中具有高度同源性，因此传统的CRISPR-Cas9系统在需要对同源等位基因进行功能分析时无能为力。而且CRISPR-Cas9系统不能预测在靶标位点上产生什么样的突变(例如碱基的插入、删除或替换等)。该碱基编辑系统作为可行而又有效的定点编辑工具，为棉花基因组功能分析，作物遗传改良和新品种选育提供重要技术支持。
发明内容
本发明的目的在于陆地棉基因组的精准高效编辑方法，特别是构建一种适用于陆地棉的单碱基编辑系统。本发明基于pRGEB32-GhU6.7-NPTⅡ(Wang et al 2018)和pH-nCas9-PBE(Zong et al 2017)载体，构建了融合Cas9缺口酶(nCas9)，胞嘧啶脱氨酶(APOBEC1)，尿嘧啶糖基化酶抑制剂(UGI)的适用于棉花遗传转化系统的单碱基编辑系统(即载体GhBE3)。本发明技术方案如下所述：
一种能够精准编辑单个碱基的陆地棉基因组高效转化载体GhBE3，该载体的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示。
一种能够精准编辑单个碱基的陆地棉基因组高效转化载体GhBE3，该载体通过下列步骤制备获得：
(1)获得目的序列APOBEC1-XTEN-nCas9-UGI，其核苷酸序列如序列表SEQ ID NO：4所示，具体地，该目的序列通过以下步骤制备获得：
1)利用Primer5软件在pH-nCas9-PBE载体(其核苷酸序列如序列表SEQ ID NO：2所示)序列上设计引物，正向引物为：AAAAAGCAGGCTTCGATGCCAAAGAAGAAGAGGAAG；反向引物为：GAAAGCTGGGTCTAGACCGATGATACGAACGAAAG；
2)以pH-nCas9-PBE载体为模板，进行PCR扩增，获得APOBEC1-XTEN-nCas9-UGI目的序列，其核苷酸序列如序列表SEQ ID NO：4所示；
(2)利用BstbⅠ、XbaⅠ对pRGEB32-GhU6.7-NPTⅡ载体(其核苷酸序列序列表SEQ IDNO：1所示)进行酶切，与步骤(1)中获得的APOBEC1-XTEN-nCas9-UGI目的序列进行连接，通过测序验证，得到如序列表SEQ ID NO：3所示的适用于陆地棉的单碱基编辑的高效转化载体GhBE3。
本发明的转化载体GhBE3可在陆地棉基因组编辑中应用。
本发明的效果为：
1、本发明在棉花中的编辑效率达57.78％。
2、本发明在靶标序列上的编辑窗口为6个核苷酸(C3-C8,PAM远端开始)。
3、本发明在棉花中有较高的特异性。
附图说明
图1：是对载体pH-nCas9-PBE和载体pRGEB32-GhU6.7改造的路线图。
图2：是本发明的表达载体GhBE3的构建图。
图3：是本发明的扩增后rAPOBEC1-XTEN-nCas9-UGI片段的电泳图。附图标记说明：泳道1,2,3是rAPOBEC1-XTEN-nCas9-UGI片段,泳道M是5K的marker。
图4：是拼接后GhBE3的电泳图。附图标记说明：泳道1，2是GhBE3构建完成检测，泳道CK是阴性对照，泳道M是5K的marker。
图5：是本发明的目的片段的扩增产物的电泳图。附图标记说明：其中：第一次PCR电泳图，两个片段的分别扩增。泳道M是5K的marker，泳道pcr1-1是第一个片段，泳道pcr2是第二个片段,第二次PCR电泳图，利用重叠延伸PCR将第一次PCR的两个片段拼接。泳道2，3都是将第一次PCR的两个片段拼接，泳道M是5K的marker。
图6：是本发明sgRNA连接到GhBE3的电泳图。附图标记说明：泳道1,2是目的片段连接到GhBE3载体,泳道M是5K的marker。
图7：本发明GhCLA的遗传转化图。附图标记说明：图7中的罗马字编号分别是：Ⅰ.共培养阶段。Ⅱ.选择培养阶段。Ⅲ.愈伤阶段。Ⅳ.分化培养阶段。Ⅴ.生根培养阶段。Ⅵ.营养液培养。Ⅶ-Ⅸ.转基因植株在温室生长。
图8：是本发明的GhCLA和GhPEBP基因sgRNA1、sgRNA2、sgRNA3编辑检测图。附图标记说明：图8中的a图是GhCLA基因sgRNA1的编辑序列图；图8中的b图是GhCLA基因sgRNA2的编辑序列图；图8中的c图是GhPEBP基因sgRNA3的编辑序列图；图8中的d图是GhCLA和GhPEBP基因sgRNA1、sgRNA2、sgRNA3序列内碱基突变的色谱图。
图9：是本发明的GhCLA和GhPEBP基因sgRNA1、sgRNA2、sgRNA3深测序检测图。
附图标记说明：图9中a图是GhCLA基因sgRNA1序列内所有C-T的频率；图9中的b图是GhCLA基因sgRNA2序列内所有C-T的频率；图9中的c图是GhPEBP基因sgRNA3序列内所有C-T的频率。
图10：是本发明的GhCLA和GhPEBP基因sgRNA1、sgRNA2、sgRNA3脱靶位点深测序检测图。附图标记说明：图10中a图是GhCLA基因sgRNA1脱靶位点中C-T频率；图10中的b图是GhCLA基因sgRNA2脱靶位点中C-T频率；图10中的c图是GhPEBP基因sgRNA3脱靶位点中C-T频率。
图11：是本发明的GhCLA基因和野生型植株的全基因组脱靶检测图。附图标记说明：图11中a图是全基因组圆环图代表sgRNA1和sgRNA2的脱靶位点得分。脱靶序列的标志在圆环中心；图11中的b图是在N17和N64植株中有独特的变异，在WT和阴性对照植株中没有。个体变异代表除N17和N64植株重叠变异外的突变；图11中的c图是在GhBE3编辑植株N17和N64的downstream(转录起始位点2k),exonic,intronic,upstream(转录终止位点2k)和intergenic regions区域内SNPs和Indel的注释。
具体实施方式
对序列表的说明：
序列表SEQ ID NO：1是本发明的pRGEB32-GhU6.7载体的核苷酸序列。序列长度为16241bp。
序列表SEQ ID NO：2是本发明的pH-nCas9-PBE载体的核苷酸序列。序列长度为18805bp。
序列表SEQ ID NO：3是陆地棉基因组高效转化载体GhBE3的核苷酸序列。序列长度为17150bp。
序列表SEQ ID NO：4是rAPOBEC1-XTEN-nCas9-UGI融合蛋白的核苷酸序列。序列长度为5214bp。
实施例1：APOBEC1-XTEN-nCas9-UGI目的序列的扩增
以pH-nCas9-PBE载体(序列表如SEQ ID NO：2)为模板(Zong et al 2017)进行PCR扩增得到目的序列APOBEC1-XTEN-nCas9-UGI(序列表如SEQ ID NO：4)。扩增引物为：
BE/F:AAAAAGCAGGCTTCGATGCCAAAGAAGAAGAGGAAG，和
BE/R:GAAAGCTGGGTCTAGACCGATGATA CGAACGAAAG，APOBEC1-XTEN-nCas9-UGI PCR反应体系见表1
表1 APOBEC1-XTEN-nCas9-UGI序列的PCR反应体系
实施例2：转化载体GhBE3的构建
1.pRGEB32-GhU6.7-NPTⅡ与APOBEC1-XTEN-nCas9-UGI的连接
将pRGEB32-GhU6.7-NPTⅡ(序列表见SEQ ID NO：1)进行双酶切，酶切体系见表2。37℃酶切5小时，酶切产物凝胶电泳观察单酶切完全后再加4μL的BstbI，65℃酶切20min，凝胶电泳观察酶切条带是否正确，然后利用凝胶回收试剂盒(武汉华信阳光生物科技有限公司)将酶切产物纯化。酶切体系见表2。
表2 pRGEB32-GhU6.7-NPTⅡ酶切体系
将酶切后的pRGEB32-GhU6.7-NPTⅡ载体与APOBEC1-XTEN-nCas9-UGI融合蛋白片段通过ClonExpress II One Step Cloning Kit(Vazyme C112-02)进行连接，转化到大肠杆菌感受态，挑取阳性克隆进行测序，将序列正确的质粒命名为GhBE3质粒(序列表SEQ IDNO：3)。其中In-fusion连接反应体系见表3。
表3 In-fusion连接反应体系
37℃水浴30min，冰上放置5min，可-20℃下保存。
实施例3：GhBE3-sgRNA载体的构建
1.GhCLA和GhPEBP基因的sgRNA设计
选择陆地棉1-脱氧木酮糖-5-磷酸合成酶(Cloroplasto alterados,CLA)Gh_A10G2292基因和磷脂酰乙醇胺结合蛋白(phosphatidylethanolamine binding protein,PEBP)Gh_D07G1075为验证基因。利用在线软件CRISPR-P(http://cbi.hzau.edu.cn/cgi- bin/CRISPR)(Lei et al 2014)在基因外显子区域设计sgRNA靶标序列。并且在编辑窗口内C-T突变改变氨基酸功能的靶点，最终选择3个sgRNA(编号分别为sgRNA1、sgRNA2、sgRNA3)用来构建单碱基系统植物表达载体。sgRNA的序列见表4。
表4sgRNA的序列
2.sgRNA与GhBE3载体的连接
靶标插入GhBE3载体序列为tRNA-sgRNA-gRNA的重复序列，需要中间载体转换。现以sgRNA1和sgRNA2为例进行说明，第一次PCR的引物如下：pRGEB32-7/S:AAGCATCAGATGGGCAAACAAAGCACCAGTGGTCTAG，将sgRNA1加到反向引物的接头上，CLA1/AS:AGCCTGCAGCAAAGGT GACATGCACCAGCCGGGAAT，下划线的碱基是sgRNA1序列。以PGTR载体(Xie et al.2015)为模板进行PCR扩增tRNA序列，获得tRNA+sgRNA1片段。CLA2/S:TGTCACCTTTGCTGCAGGCTGTTTTAGAGCTAGAAATA下划线碱基是sgRNA1序列，将sgRNA2加到反向引物的接头上，CLA2/AS:CATAG CCGCAACGGTGTTCATGCACCAGCCGGGAAT带下划线的碱基是sgRNA2序列，同样以PGTR载体为模板进行PCR扩增，获得gRNA+tRNA+sgRNA2片段。第二次PCR利用重叠PCR将两个片段拼成tRNA+sgRNA1+gRNA+tRNA+sgRNA2片段。引物序列如下：Inf CLA2/AS:TTCTAGCTCTAAAACCATAGCC GCAACGGTGTTCA带下划线的碱基是sgRNA2序列，Inf pRGEB32-7/S:AAGCATCAGATGGGCAAACAAA，同理sgRNA3加到反向引物的接头，以PGTR载体为模板进行PCR扩增tRNA,获得tRNA+sgRNA3片段。利用一步克隆试剂盒(Vazyme，C112-01/02)将tRNA+sgRNA1+gRNA+tRNA+sgRNA2片段和tRNA+sgRNA3片段分别连接到pGREB32-GhU6-7载体的BsaI酶切位点处。利用HpaI和SbfI双酶切pGREB32-GhU6-7，将目的片段连接到GhBE3载体的HpaI和SbfI双酶切位点处。
表5PCR体系
表6第一次PCR条件
表7第二次PCR条件
实施例3：农杆菌介导的遗传转化
具体步骤如下：
A.将剥好的棉花种子(品种为Jin668，专利申请号201510833618.0)用0.1％升汞杀菌，无菌水清洗数次后放入无菌苗培养基中，28℃暗培养1天，挑去种皮，将苗扶正，在28℃，暗培养4-5d；
B.将下胚轴切成小茎段，用活化后的农杆菌侵染，弃菌液，并吹干；
C.将下胚轴平铺在放有滤纸的共培养培养基中，于20℃，暗培养1-2d；
D.将下胚轴转入到附加2,4-D的愈伤组织诱导培养基中，放入光照培养室，20-30d左右用新鲜愈伤组织诱导培养基继代培养一次；
E.当愈伤组织长成米粒状颗粒，转入分化培养基中，进一步分化成胚状体；
F.将分化出的小苗继代到生根培养基中，直至长成生根良好健康的小苗；
G.将小苗转到清水中，进行炼苗，一周左右后，转移到到温室。
转化所用的培养基组分及配比：
无菌苗萌发培养基：1/2MS大量元素，15g/L葡萄糖，2.5g/L的Phytagel；pH:6.1-6.2。
愈伤组织诱导培养基：MSB+24-D 0.1mg/L+KT 0.1mg/L+3％Glucose+0.3％Phytagel；pH:5.85-5.95。
农杆菌活化培养基：胰化蛋白胨5g/L+NaCl 5g/L+MgSO4.7H2O 0.1g/L+KH2PO4+0.25g/L+甘露醇5g/L+甘氨酸1.0g/L；pH:5.85-5.95。
共培养培养基：MSB+2，4-D 0.1mg/l+KT 0.1mg/l+50mg/l AS+3％Glucose+0.25％Phytagel，pH5.8。
选择培养基：MSB+2，4-D 0.1mg/L+KT 0.1mg/L+3％Glucose+0.3％Phytagel，卡那霉素50mg/L和头孢霉素400mg/L；pH:5.85-5.95。
分化培养基：分化培养基：MSB培养基中去掉NH4NO3,将KNO3用量加倍+Gln 1.0g/L+Asn 0.5g/L+IBA 0.5mg/L+KT 0.15mg/L+3％Glucose+0.25％Phytagel，pH:6.1-6.2。
生根培养基：1/2MS无机盐+B5有机物，15g/L葡萄糖，2.5g/L的Phytagel；pH:5.90-5.95；MSB的成分如下：MS培养基+B5维生素。
实施例5：GhBE3对在转基因棉花植株中基因编辑检测中的应用
(1)Sanger测序检测编辑效率
提取的棉花嫩叶阳性基因组DNA【天根生化(北京)科技有限公司】，以阳性DNA为模板，扩增GhCLA(Gh_A10G2292)和GhPEBP基因(Gh_D07G1075)靶标序列(sgRNA1:TGTCACCTTTGGCTGCAGGCT,sgRNA2:TGAACACCGTTGCGGCTATG,sgRNA3:GGCCAAACATAGGGATCCAC)，然后将PCR片段连入pGEM-T easy载体(购自北京普洛麦格生物技术有限公司)，将连接产物热激转化大肠杆菌感受态TOP10，挑取的单克隆进行阳性检测并进行Sanger测序。将测序结果与靶标序列比对。每个样品送至少15个单克隆测序，统计每个靶点被编辑的效率。测序结果见图8。
(2)高通量深测序检测编辑效率
设计一对含有6个碱基的组合作为每个单株的Barcode标记。每对标记分别加到扩增靶点正反引物的5’端。分别以独立的单株DNA为模板进行PCR扩增(按常规方法)，将获得的PCR产物进行等量混合，然后用纯化试剂盒(OMEGA公司,货号D2500-02)纯化混合产物，最后进行双端150bp测序。深独测序的结果见图9。
实施例6：GhBE3系统在转基因棉花植株中脱靶情况的检测中的应用
(1)脱靶位点
申请人利用CRISPR-P和OFFinder工具分别鉴定到与sgRNA1，sgRNA2，sgRNA3靶点存在5个错配碱基以内的1001,499,1180个潜在脱靶位点，从中分别选择9个最可能的脱靶位点进行深度测序。
(2)深度测序检测脱靶效应
利用如实施例5中步骤(2)的方法设计脱靶位点Barcode标记，通过对sgRNA1的12个植株，sgRNA2的26个植株，sgRNA3的10个植株进行深度测序检测，数据结果表明,在这27个最可能脱靶的靶标“编辑窗口”内发生C-T替换的效率低于0.1％。根据以往的脱靶分析结果，可以认为这些变异是来自于测序错误，而不认为是脱靶突变(见图10)。
(3)全基因组分析GhBE3系统在棉花中的脱靶影响
为了评估BE3在棉花全基因组范围内的脱靶效应，本发明使用GhCLA的2个转基因T0代棉花植株(植株编号为N17和N64)与1个野生型棉花植株进行100×深度的全基因组测序(WGS)。通过计算确定了所有潜在脱靶位点，以Cas-OFFinder为基础，在全基因组上共找到不同分值的sgRNA1和sgRNA2的499和1001个脱靶位点。申请人使用华中农业大学作物遗传改良国家重点实验室发表两个阴性植株和两个野生型植株重测序数据作为对照(Li etal，2018)，以减少背景或种系突变或者组织培养的变异。分析发现本发明制备的GhBE3载体编辑的植株中存在核酸酶产生的变异，而在三个野生型(WT)和三个阴性对照植株中并不存在。最后，在N17和N64编辑的棉花植株中总共存在16 770，20 193SNPs和9471、8756Indels，其中N17和N64共有5689个SNPs和3189个Indels被分享，这些变异可能是由于体细胞无性系变异引起的。对体细胞无性系变异进行过滤后，并对其余的变异进行过滤，进一步检测本发明的GhBE3诱导突变。申请人将这些变异与1500个潜在脱靶进行重叠，结果显示在1500个潜在的脱靶位点(≤5mismatches)中没有检测到任何真正的脱靶突变。
本发明在棉花中首次成功建立了适应于棉花基因组特性的单碱基编辑系统，该系统显示出较高的编辑效率和很高的特异性，它将成为棉花功能基因组研究新的重要的技术手段。
参考文献
1.Li JF,Norville JE,Aach J,McCormack M,Zhang D,Bush J,Church GM,SheenJ.Multiplex and homologous recombination-mediated genome editing inArabidopsis and Nicotiana benthamiana using guide RNA and Cas9.NatureBiotechnol,2013,31:688-691；
2.Mao Y,Zhang H,Xu N,Zhang B,Gou F,Zhu JK.Application of the CRISPR-Cas system for efficient genome engineering in plants.Molecular Plant,2013,6:2008-2011；
3.Zong Y,Wang Y,Li C,Zhang R,Chen K,Ran Y,Qiu JL,Wang D,Gao C.Precisebase editing in rice,wheat and maize with a Cas9-cytidine deaminasefusion.Nat Biotechnol,2017,35:438-440；
4.Wang P,Zhang J,Sun L,Ma Y,Xu J,Liang S,Deng J,Tan J,Zhang Q,Tu L,Daniell H,Jin S,Zhang X.High efficient multisites genome editing inallotetraploid cotton(Gossypium hirsutum)using CRISPR/Cas9system.PlantBiotechnol Jouranl,2018,16:137-150。
5.Xie,K.,B.Minkenberg&Y.Yang.Boosting CRISPR/Cas9multiplex editingcapability with the endogenous tRNA-processing system.Proceedings of theNational Academy of Sciences of the United States of America,2015,112,3570-3575。
序列表
<110> 华中农业大学
<120> 陆地棉基因组的精准高效编辑方法
<141> 2018-12-20
<160> 4
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 16241
<212> DNA
<213> 棉花(Gossypium hirsutum)
<220>
<221> gene
<222> (1)..(16241)
<400> 1
cttgtacaaa gtggttgata acagcgacta caaggatgac gatgacaagg cttagagctc 60
gaatttcccc gatcgttcaa acatttggca ataaagtttc ttaagattga atcctgttgc 120
cggtcttgcg atgattatca tataatttct gttgaattac gttaagcatg taataattaa 180
catgtaatgc atgacgttat ttatgagatg ggtttttatg attagagtcc cgcaattata 240
catttaatac gcgatagaaa acaaaatata gcgcgcaaac taggataaat tatcgcgcgc 300
ggtgtcatct atgttactag atcgggaatt cactggccgt cgttttacac tggccgtcgt 360
tttacaacgt cgtgactggg aaaaccctgg cgttacccaa cttaatcgcc ttgcagcaca 420
tccccctttc gccagctggc gtaatagcga agaggcccgc accgatcgcc cttcccaaca 480
gttgcgcagc ctgaatggcg aatgctagag cagcttgagc ttggatcaga ttgtcgtttc 540
ccgccttcag tttaaactat cagtgtttga caggatatat tggcgggtaa acctaagaga 600
aaagagcgtt tattagaata acggatattt aaaagggcgt gaaaaggttt atccgttcgt 660
ccatttgtat gtgcatgcca accacagggt tcccctcggg atcaaagtac tttgatccaa 720
cccctccgct gctatagtgc agtcggcttc tgacgttcag tgcagccgtc ttctgaaaac 780
gacatgtcgc acaagtccta agttacgcga caggctgccg ccctgccctt ttcctggcgt 840
tttcttgtcg cgtgttttag tcgcataaag tagaatactt gcgactagaa ccggagacat 900
tacgccatga acaagagcgc cgccgctggc ctgctgggct atgcccgcgt cagcaccgac 960
gaccaggact tgaccaacca acgggccgaa ctgcacgcgg ccggctgcac caagctgttt 1020
tccgagaaga tcaccggcac caggcgcgac cgcccggagc tggccaggat gcttgaccac 1080
ctacgccctg gcgacgttgt gacagtgacc aggctagacc gcctggcccg cagcacccgc 1140
gacctactgg acattgccga gcgcatccag gaggccggcg cgggcctgcg tagcctggca 1200
gagccgtggg ccgacaccac cacgccggcc ggccgcatgg tgttgaccgt gttcgccggc 1260
attgccgagt tcgagcgttc cctaatcatc gaccgcaccc ggagcgggcg cgaggccgcc 1320
aaggcccgag gcgtgaagtt tggcccccgc cctaccctca ccccggcaca gatcgcgcac 1380
gcccgcgagc tgatcgacca ggaaggccgc accgtgaaag aggcggctgc actgcttggc 1440
gtgcatcgct cgaccctgta ccgcgcactt gagcgcagcg aggaagtgac gcccaccgag 1500
gccaggcggc gcggtgcctt ccgtgaggac gcattgaccg aggccgacgc cctggcggcc 1560
gccgagaatg aacgccaaga ggaacaagca tgaaaccgca ccaggacggc caggacgaac 1620
cgtttttcat taccgaagag atcgaggcgg agatgatcgc ggccgggtac gtgttcgagc 1680
cgcccgcgca cgtctcaacc gtgcggctgc atgaaatcct ggccggtttg tctgatgcca 1740
agctggcggc ctggccggcc agcttggccg ctgaagaaac cgagcgccgc cgtctaaaaa 1800
ggtgatgtgt atttgagtaa aacagcttgc gtcatgcggt cgctgcgtat atgatgcgat 1860
gagtaaataa acaaatacgc aaggggaacg catgaaggtt atcgctgtac ttaaccagaa 1920
aggcgggtca ggcaagacga ccatcgcaac ccatctagcc cgcgccctgc aactcgccgg 1980
ggccgatgtt ctgttagtcg attccgatcc ccagggcagt gcccgcgatt gggcggccgt 2040
gcgggaagat caaccgctaa ccgttgtcgg catcgaccgc ccgacgattg accgcgacgt 2100
gaaggccatc ggccggcgcg acttcgtagt gatcgacgga gcgccccagg cggcggactt 2160
ggctgtgtcc gcgatcaagg cagccgactt cgtgctgatt ccggtgcagc caagccctta 2220
cgacatatgg gccaccgccg acctggtgga gctggttaag cagcgcattg aggtcacgga 2280
tggaaggcta caagcggcct ttgtcgtgtc gcgggcgatc aaaggcacgc gcatcggcgg 2340
tgaggttgcc gaggcgctgg ccgggtacga gctgcccatt cttgagtccc gtatcacgca 2400
gcgcgtgagc tacccaggca ctgccgccgc cggcacaacc gttcttgaat cagaacccga 2460
gggcgacgct gcccgcgagg tccaggcgct ggccgctgaa attaaatcaa aactcatttg 2520
agttaatgag gtaaagagaa aatgagcaaa agcacaaaca cgctaagtgc cggccgtccg 2580
agcgcacgca gcagcaaggc tgcaacgttg gccagcctgg cagacacgcc agccatgaag 2640
cgggtcaact ttcagttgcc ggcggaggat cacaccaagc tgaagatgta cgcggtacgc 2700
caaggcaaga ccattaccga gctgctatct gaatacatcg cgcagctacc agagtaaatg 2760
agcaaatgaa taaatgagta gatgaatttt agcggctaaa ggaggcggca tggaaaatca 2820
agaacaacca ggcaccgacg ccgtggaatg ccccatgtgt ggaggaacgg gcggttggcc 2880
aggcgtaagc ggctgggttg tctgccggcc ctgcaatggc actggaaccc ccaagcccga 2940
ggaatcggcg tgacggtcgc aaaccatccg gcccggtaca aatcggcgcg gcgctgggtg 3000
atgacctggt ggagaagttg aaggccgcgc aggccgccca gcggcaacgc atcgaggcag 3060
aagcacgccc cggtgaatcg tggcaagcgg ccgctgatcg aatccgcaaa gaatcccggc 3120
aaccgccggc agccggtgcg ccgtcgatta ggaagccgcc caagggcgac gagcaaccag 3180
attttttcgt tccgatgctc tatgacgtgg gcacccgcga tagtcgcagc atcatggacg 3240
tggccgtttt ccgtctgtcg aagcgtgacc gacgagctgg cgaggtgatc cgctacgagc 3300
ttccagacgg gcacgtagag gtttccgcag ggccggccgg catggccagt gtgtgggatt 3360
acgacctggt actgatggcg gtttcccatc taaccgaatc catgaaccga taccgggaag 3420
ggaagggaga caagcccggc cgcgtgttcc gtccacacgt tgcggacgta ctcaagttct 3480
gccggcgagc cgatggcgga aagcagaaag acgacctggt agaaacctgc attcggttaa 3540
acaccacgca cgttgccatg cagcgtacga agaaggccaa gaacggccgc ctggtgacgg 3600
tatccgaggg tgaagccttg attagccgct acaagatcgt aaagagcgaa accgggcggc 3660
cggagtacat cgagatcgag ctagctgatt ggatgtaccg cgagatcaca gaaggcaaga 3720
acccggacgt gctgacggtt caccccgatt actttttgat cgatcccggc atcggccgtt 3780
ttctctaccg cctggcacgc cgcgccgcag gcaaggcaga agccagatgg ttgttcaaga 3840
cgatctacga acgcagtggc agcgccggag agttcaagaa gttctgtttc accgtgcgca 3900
agctgatcgg gtcaaatgac ctgccggagt acgatttgaa ggaggaggcg gggcaggctg 3960
gcccgatcct agtcatgcgc taccgcaacc tgatcgaggg cgaagcatcc gccggttcct 4020
aatgtacgga gcagatgcta gggcaaattg ccctagcagg ggaaaaaggt cgaaaagcac 4080
tctttcctgt ggatagcacg tacattggga acccaaagcc gtacattggg aaccggaacc 4140
cgtacattgg gaacccaaag ccgtacattg ggaaccggtc acacatgtaa gtgactgata 4200
taaaagagaa aaaaggcgat ttttccgcct aaaactcttt aaaacttatt aaaactctta 4260
aaacccgcct ggcctgtgca taactgtctg gccagcgcac agccgaagag ctgcaaaaag 4320
cgcctaccct tcggtcgctg cgctccctac gccccgccgc ttcgcgtcgg cctatcgcgg 4380
ccgctggccg ctcaaaaatg gctggcctac ggccaggcaa tctaccaggg cgcggacaag 4440
ccgcgccgtc gccactcgac cgccggcgcc cacatcaagg caccctgcct cgcgcgtttc 4500
ggtgatgacg gtgaaaacct ctgacacatg cagctcccgg agacggtcac agcttgtctg 4560
taagcggatg ccgggagcag acaagcccgt cagggcgcgt cagcgggtgt tggcgggtgt 4620
cggggcgcag ccatgaccca gtcacgtagc gatagcggag tgtatactgg cttaactatg 4680
cggcatcaga gcagattgta ctgagagtgc accatatgcg gtgtgaaata ccgcacagat 4740
gcgtaaggag aaaataccgc atcaggcgct cttccgcttc ctcgctcact gactcgctgc 4800
gctcggtcgt tcggctgcgg cgagcggtat cagctcactc aaaggcggta atacggttat 4860
ccacagaatc aggggataac gcaggaaaga acatgtgagc aaaaggccag caaaaggcca 4920
ggaaccgtaa aaaggccgcg ttgctggcgt ttttccatag gctccgcccc cctgacgagc 4980
atcacaaaaa tcgacgctca agtcagaggt ggcgaaaccc gacaggacta taaagatacc 5040
aggcgtttcc ccctggaagc tccctcgtgc gctctcctgt tccgaccctg ccgcttaccg 5100
gatacctgtc cgcctttctc ccttcgggaa gcgtggcgct ttctcatagc tcacgctgta 5160
ggtatctcag ttcggtgtag gtcgttcgct ccaagctggg ctgtgtgcac gaaccccccg 5220
ttcagcccga ccgctgcgcc ttatccggta actatcgtct tgagtccaac ccggtaagac 5280
acgacttatc gccactggca gcagccactg gtaacaggat tagcagagcg aggtatgtag 5340
gcggtgctac agagttcttg aagtggtggc ctaactacgg ctacactaga aggacagtat 5400
ttggtatctg cgctctgctg aagccagtta ccttcggaaa aagagttggt agctcttgat 5460
ccggcaaaca aaccaccgct ggtagcggtg gtttttttgt ttgcaagcag cagattacgc 5520
gcagaaaaaa aggatctcaa gaagatcctt tgatcttttc tacggggtct gacgctcagt 5580
ggaacgaaaa ctcacgttaa gggattttgg tcatgcattc taggtactaa aacaattcat 5640
ccagtaaaat ataatatttt attttctccc aatcaggctt gatccccagt aagtcaaaaa 5700
atagctcgac atactgttct tccccgatat cctccctgat cgaccggacg cagaaggcaa 5760
tgtcatacca cttgtccgcc ctgccgcttc tcccaagatc aataaagcca cttactttgc 5820
catctttcac aaagatgttg ctgtctccca ggtcgccgtg ggaaaagaca agttcctctt 5880
cgggcttttc cgtctttaaa aaatcataca gctcgcgcgg atctttaaat ggagtgtctt 5940
cttcccagtt ttcgcaatcc acatcggcca gatcgttatt cagtaagtaa tccaattcgg 6000
ctaagcggct gtctaagcta ttcgtatagg gacaatccga tatgtcgatg gagtgaaaga 6060
gcctgatgca ctccgcatac agctcgataa tcttttcagg gctttgttca tcttcatact 6120
cttccgagca aaggacgcca tcggcctcac tcatgagcag attgctccag ccatcatgcc 6180
gttcaaagtg caggaccttt ggaacaggca gctttccttc cagccatagc atcatgtcct 6240
tttcccgttc cacatcatag gtggtccctt tataccggct gtccgtcatt tttaaatata 6300
ggttttcatt ttctcccacc agcttatata ccttagcagg agacattcct tccgtatctt 6360
ttacgcagcg gtatttttcg atcagttttt tcaattccgg tgatattctc attttagcca 6420
tttattattt ccttcctctt ttctacagta tttaaagata ccccaagaag ctaattataa 6480
caagacgaac tccaattcac tgttccttgc attctaaaac cttaaatacc agaaaacagc 6540
tttttcaaag ttgttttcaa agttggcgta taacatagta tcgacggagc cgattttgaa 6600
accgcggtga tcacaggcag caacgctctg tcatcgttac aatcaacatg ctaccctccg 6660
cgagatcatc cgtgtttcaa acccggcagc ttagttgccg ttcttccgaa tagcatcggt 6720
aacatgagca aagtctgccg ccttacaacg gctctcccgc tgacgccgtc ccggactgat 6780
gggctgcctg tatcgagtgg tgattttgtg ccgagctgcc ggtcggggag ctgttggctg 6840
gctggtggca ggatatattg tggtgtaaac aaattgacgc ttagacaact taataacaca 6900
ttgcggacgt ttttaatgta ctgaattaac gccgaattaa ttcgggggat ctggatttta 6960
gtactggatt ttggttttag gaattagaaa ttttattgat agaagtattt tacaaataca 7020
aatacatact aagggtttct tatatgctca acacatgagc gaaaccctat aggaacccta 7080
attcccttat ctgggaacta ctcacacatt attatggaga aactcgagct cagaagaact 7140
cgtcaagaag gcgatagaag gcgatgcgct gcgaatcggg agcggcgata ccgtaaagca 7200
cgaggaagcg gtcagcccat tcgccgccaa gctcttcagc aatatcacgg gtagccaacg 7260
ctatgtcctg atagcggtcc gccacaccca gccggccaca gtcgatgaat ccagaaaagc 7320
ggccattttc caccatgata ttcggcaagc aggcatcgcc atgggtcacg acgagatcat 7380
cgccgtcggg catgcgcgcc ttgagcctgg cgaacagttc ggctggcgcg agcccctgat 7440
gctcttcgtc cagatcatcc tgatcgacaa gaccggcttc catccgagta cgtgctcgct 7500
cgatgcgatg tttcgcttgg tggtcgaatg ggcaggtagc cggatcaagc gtatgcagcc 7560
gccgcattgc atcagccatg atggatactt tctcggcagg agcaaggtga gatgacagga 7620
gatcctgccc cggcacttcg cccaatagca gccagtccct tcccgcttca gtgacaacgt 7680
cgagcacagc tgcgcaagga acgcccgtcg tggccagcca cgatagccgc gctgcctcgt 7740
cctgcagttc attcagggca ccggacaggt cggtcttgac aaaaagaacc gggcgcccct 7800
gcgctgacag ccggaacacg gcggcatcag agcagccgat tgtctgttgt gcccagtcat 7860
agccgaatag cctctccacc caagcggccg gagaacctgc gtgcaatcca tcttgttcaa 7920
tcatcccggg atctgcgaaa gctcgagaga gatagatttg tagagagaga ctggtgattt 7980
cagcgtgtcc tctccaaatg aaatgaactt ccttatatag aggaaggtct tgcgaaggat 8040
agtgggattg tgcgtcatcc cttacgtcag tggagatatc acatcaatcc acttgctttg 8100
aagacgtggt tggaacgtct tctttttcca cgatgctcct cgtgggtggg ggtccatctt 8160
tgggaccact gtcggcagag gcatcttgaa cgatagcctt tcctttatcg caatgatggc 8220
atttgtaggt gccaccttcc ttttctactg tccttttgat gaagtgacag atagctgggc 8280
aatggaatcc gaggaggttt cccgatatta ccctttgttg aaaagtctca atagcccttt 8340
ggtcttctga gactgtatct ttgatattct tggagtagac gagagtgtcg tgctccacca 8400
tgttatcaca tcaatccact tgctttgaag acgtggttgg aacgtcttct ttttccacga 8460
tgctcctcgt gggtgggggt ccatctttgg gaccactgtc ggcagaggca tcttgaacga 8520
tagcctttcc tttatcgcaa tgatggcatt tgtaggtgcc accttccttt tctactgtcc 8580
ttttgatgaa gtgacagata gctgggcaat ggaatccgag gaggtttccc gatattaccc 8640
tttgttgaaa agtctcaata gccctttggt cttctgagac tgtatctttg atattcttgg 8700
agtagacgag agtgtcgtgc tccaccatgt tggcaagctg ctctagccaa tacgcaaacc 8760
gcctctcccc gcgcgttggc cgattcatta atgcagctgg cacgacaggt ttcccgactg 8820
gaaagcgggc agtgagcgca acgcaattaa tgtgagttag ctcactcatt aggcacccca 8880
ggctttacac tttatgcttc cggctcgtat gttgtgtgga attgtgagcg gataacaatt 8940
tcacacagga aacagctatg accatgatta cgccaagctt ttaatctgat gctccacctg 9000
cttttgattt tctttattgg aagagtcttt aagagatatg ttaagtagca taacagtttc 9060
atcaaaaaca acatttctgt taatcacaac ttttctattt tcaggatacc ataacttata 9120
cacttttaca ctagctttat aaccaagaaa aacacattta atggtacaca attttaattt 9180
tccattatca gcatgagtat acgcaaaaca cccaaaaatc tttaaatcag aatcgtcagc 9240
aggattacta aaccatactt cttatggagt ctttttctca atagcaacga atagagacgg 9300
attgatcaaa aacatatagt tgacattgct ttggcccaaa ataactttga taagttgcca 9360
tttgacaaca tacatcgaac attctccatg atcgttctat tcattcgttc tacaatacct 9420
tttttaaaat gttcaggttc taaaatgaaa aacaatatga attgcatgaa ttgcttatat 9480
gtcctatgaa ttataaagga atgcggttga aatattccca tcgatacata catacatatt 9540
cgtgaagtat gttccaatat aatatcaata ttgggattta cgttttataa agcaacatta 9600
ttgattggta atatacatta attccaaggc aaacccaaat attttaaaat ttaacctaca 9660
actgtggtaa atcaaactta atagtaaccc gattgtaatg tgaagtcaaa tatgaaagta 9720
acattggttt atatatatat ttttctctaa attctaataa tcaagttggg ataagtgata 9780
aacactgagc ttgccacgtg tgttaacctc gttttcatca tgtgccactc caaagacatc 9840
aggcctctat tcaagctggc atggtcagga cgtggtagca tacttcaggg atctggttag 9900
aaaatatccc atatcgctaa agaactataa cacaggagcg tttatataag cgaaagaagc 9960
atcagatggg caggagaccg aggtctcggt tttagagcta gaaatagcaa gttaaaataa 10020
ggctagtccg ttatcaactt gaaaaagtgg caccgagtcg gtgctttttt gttttagagc 10080
tagaaatagc aagttaaaat aaggctagtc cgtttttagc gcgtgcatgc ctgcaggtcc 10140
acaaattcgg gtcaaggcgg aagccagcgc gccaccccac gtcagcaaat acggaggcgc 10200
ggggttgacg gcgtcacccg gtcctaacgg cgaccaacaa accagccaga agaaattaca 10260
gtaaaaaaaa agtaaattgc actttgatcc accttttatt acctaagtct caatttggat 10320
cacccttaaa cctatctttt caatttgggc cgggttgtgg tttggactac catgaacaac 10380
ttttcgtcat gtctaacttc cctttcagca aacatatgaa ccatatatag aggagatcgg 10440
ccgtatacta gagctgatgt gtttaaggtc gttgattgca cgagaaaaaa aaatccaaat 10500
cgcaacaata gcaaatttat ctggttcaaa gtgaaaagat atgtttaaag gtagtccaaa 10560
gtaaaactta tagataataa aatgtggtcc aaagcgtaat tcactcaaaa aaaatcaacg 10620
agacgtgtac caaacggaga caaacggcat cttctcgaaa tttcccaacc gctcgctcgc 10680
ccgcctcgtc ttcccggaaa ccgcggtggt ttcagcgtgg cggattctcc aagcagacgg 10740
agacgtcacg gcacgggact cctcccacca cccaaccgcc ataaatacca gccccctcat 10800
ctcctctcct cgcatcagct ccacccccga aaaatttctc cccaatctcg cgaggctctc 10860
gtcgtcgaat cgaatcctct cgcgtcctca aggtacgctg cttctcctct cctcgcttcg 10920
tttcgattcg atttcggacg ggtgaggttg ttttgttgct agatccgatt ggtggttagg 10980
gttgtcgatg tgattatcgt gagatgttta ggggttgtag atctgatggt tgtgatttgg 11040
gcacggttgg ttcgataggt ggaatcgtgg ttaggttttg ggattggatg ttggttctga 11100
tgattggggg gaatttttac ggttagatga attgttggat gattcgattg gggaaatcgg 11160
tgtagatctg ttggggaatt gtggaactag tcatgcctga gtgattggtg cgatttgtag 11220
cgtgttccat cttgtaggcc ttgttgcgag catgttcaga tctactgttc cgctcttgat 11280
tgagttattg gtgccatggg ttggtgcaaa cacaggcttt aatatgttat atctgttttg 11340
tgtttgatgt agatctgtag ggtagttctt cttagacatg gttcaattat gtagcttgtg 11400
cgtttcgatt tgatttcata tgttcacaga ttagataatg atgaactctt ttaattaatt 11460
gtcaatggta aataggaagt cttgtcgcta tatctgtcat aatgatctca tgttactatc 11520
tgccagtaat ttatgctaag aactatatta gaatatcatg ttacaatctg tagtaatatc 11580
atgttacaat ctgtagttca tctatataat ctattgtggt aatttctttt tactatctgt 11640
gtgaagatta ttgccactag ttcattctac ttatttctga agttcaggat acgtgtgctg 11700
ttactaccta tctgaataca tgtgtgatgt gcctgttact atctttttga atacatgtat 11760
gttctgttgg aatatgtttg ctgtttgatc cgttgttgtg tccttaatct tgtgctagtt 11820
cttaccctat ctgtttggtg attatttctt gcagatagtt atcaacaagt ttgtacaaaa 11880
aagcaggctt cgaaggagat agaaccaatt ctctaaggaa atacttaacc atggactata 11940
aggaccacga cggagactac aaggatcatg atattgatta caaagacgat gacgataaga 12000
tggccccaaa gaagaagcgg aaggtcggta tccacggagt cccagcagcc gacaagaagt 12060
acagcatcgg cctggacatc ggcaccaact ctgtgggctg ggccgtgatc accgacgagt 12120
acaaggtgcc cagcaagaaa ttcaaggtgc tgggcaacac cgaccggcac agcatcaaga 12180
agaacctgat cggagccctg ctgttcgaca gcggcgaaac agccgaggcc acccggctga 12240
agagaaccgc cagaagaaga tacaccagac ggaagaaccg gatctgctat ctgcaagaga 12300
tcttcagcaa cgagatggcc aaggtggacg acagcttctt ccacagactg gaagagtcct 12360
tcctggtgga agaggataag aagcacgagc ggcaccccat cttcggcaac atcgtggacg 12420
aggtggccta ccacgagaag taccccacca tctaccacct gagaaagaaa ctggtggaca 12480
gcaccgacaa ggccgacctg cggctgatct atctggccct ggcccacatg atcaagttcc 12540
ggggccactt cctgatcgag ggcgacctga accccgacaa cagcgacgtg gacaagctgt 12600
tcatccagct ggtgcagacc tacaaccagc tgttcgagga aaaccccatc aacgccagcg 12660
gcgtggacgc caaggccatc ctgtctgcca gactgagcaa gagcagacgg ctggaaaatc 12720
tgatcgccca gctgcccggc gagaagaaga atggcctgtt cggaaacctg attgccctga 12780
gcctgggcct gacccccaac ttcaagagca acttcgacct ggccgaggat gccaaactgc 12840
agctgagcaa ggacacctac gacgacgacc tggacaacct gctggcccag atcggcgacc 12900
agtacgccga cctgtttctg gccgccaaga acctgtccga cgccatcctg ctgagcgaca 12960
tcctgagagt gaacaccgag atcaccaagg cccccctgag cgcctctatg atcaagagat 13020
acgacgagca ccaccaggac ctgaccctgc tgaaagctct cgtgcggcag cagctgcctg 13080
agaagtacaa agagattttc ttcgaccaga gcaagaacgg ctacgccggc tacattgacg 13140
gcggagccag ccaggaagag ttctacaagt tcatcaagcc catcctggaa aagatggacg 13200
gcaccgagga actgctcgtg aagctgaaca gagaggacct gctgcggaag cagcggacct 13260
tcgacaacgg cagcatcccc caccagatcc acctgggaga gctgcacgcc attctgcggc 13320
ggcaggaaga tttttaccca ttcctgaagg acaaccggga aaagatcgag aagatcctga 13380
ccttccgcat cccctactac gtgggccctc tggccagggg aaacagcaga ttcgcctgga 13440
tgaccagaaa gagcgaggaa accatcaccc cctggaactt cgaggaagtg gtggacaagg 13500
gcgcttccgc ccagagcttc atcgagcgga tgaccaactt cgataagaac ctgcccaacg 13560
agaaggtgct gcccaagcac agcctgctgt acgagtactt caccgtgtat aacgagctga 13620
ccaaagtgaa atacgtgacc gagggaatga gaaagcccgc cttcctgagc ggcgagcaga 13680
aaaaggccat cgtggacctg ctgttcaaga ccaaccggaa agtgaccgtg aagcagctga 13740
aagaggacta cttcaagaaa atcgagtgct tcgactccgt ggaaatctcc ggcgtggaag 13800
atcggttcaa cgcctccctg ggcacatacc acgatctgct gaaaattatc aaggacaagg 13860
acttcctgga caatgaggaa aacgaggaca ttctggaaga tatcgtgctg accctgacac 13920
tgtttgagga cagagagatg atcgaggaac ggctgaaaac ctatgcccac ctgttcgacg 13980
acaaagtgat gaagcagctg aagcggcgga gatacaccgg ctggggcagg ctgagccgga 14040
agctgatcaa cggcatccgg gacaagcagt ccggcaagac aatcctggat ttcctgaagt 14100
ccgacggctt cgccaacaga aacttcatgc agctgatcca cgacgacagc ctgaccttta 14160
aagaggacat ccagaaagcc caggtgtccg gccagggcga tagcctgcac gagcacattg 14220
ccaatctggc cggcagcccc gccattaaga agggcatcct gcagacagtg aaggtggtgg 14280
acgagctcgt gaaagtgatg ggccggcaca agcccgagaa catcgtgatc gaaatggcca 14340
gagagaacca gaccacccag aagggacaga agaacagccg cgagagaatg aagcggatcg 14400
aagagggcat caaagagctg ggcagccaga tcctgaaaga acaccccgtg gaaaacaccc 14460
agctgcagaa cgagaagctg tacctgtact acctgcagaa tgggcgggat atgtacgtgg 14520
accaggaact ggacatcaac cggctgtccg actacgatgt ggaccatatc gtgcctcaga 14580
gctttctgaa ggacgactcc atcgacaaca aggtgctgac cagaagcgac aagaaccggg 14640
gcaagagcga caacgtgccc tccgaagagg tcgtgaagaa gatgaagaac tactggcggc 14700
agctgctgaa cgccaagctg attacccaga gaaagttcga caatctgacc aaggccgaga 14760
gaggcggcct gagcgaactg gataaggccg gcttcatcaa gagacagctg gtggaaaccc 14820
ggcagatcac aaagcacgtg gcacagatcc tggactcccg gatgaacact aagtacgacg 14880
agaatgacaa gctgatccgg gaagtgaaag tgatcaccct gaagtccaag ctggtgtccg 14940
atttccggaa ggatttccag ttttacaaag tgcgcgagat caacaactac caccacgccc 15000
acgacgccta cctgaacgcc gtcgtgggaa ccgccctgat caaaaagtac cctaagctgg 15060
aaagcgagtt cgtgtacggc gactacaagg tgtacgacgt gcggaagatg atcgccaaga 15120
gcgagcagga aatcggcaag gctaccgcca agtacttctt ctacagcaac atcatgaact 15180
ttttcaagac cgagattacc ctggccaacg gcgagatccg gaagcggcct ctgatcgaga 15240
caaacggcga aaccggggag atcgtgtggg ataagggccg ggattttgcc accgtgcgga 15300
aagtgctgag catgccccaa gtgaatatcg tgaaaaagac cgaggtgcag acaggcggct 15360
tcagcaaaga gtctatcctg cccaagagga acagcgataa gctgatcgcc agaaagaagg 15420
actgggaccc taagaagtac ggcggcttcg acagccccac cgtggcctat tctgtgctgg 15480
tggtggccaa agtggaaaag ggcaagtcca agaaactgaa gagtgtgaaa gagctgctgg 15540
ggatcaccat catggaaaga agcagcttcg agaagaatcc catcgacttt ctggaagcca 15600
agggctacaa agaagtgaaa aaggacctga tcatcaagct gcctaagtac tccctgttcg 15660
agctggaaaa cggccggaag agaatgctgg cctctgccgg cgaactgcag aagggaaacg 15720
aactggccct gccctccaaa tatgtgaact tcctgtacct ggccagccac tatgagaagc 15780
tgaagggctc ccccgaggat aatgagcaga aacagctgtt tgtggaacag cacaagcact 15840
acctggacga gatcatcgag cagatcagcg agttctccaa gagagtgatc ctggccgacg 15900
ctaatctgga caaagtgctg tccgcctaca acaagcaccg ggataagccc atcagagagc 15960
aggccgagaa tatcatccac ctgtttaccc tgaccaatct gggagcccct gccgccttca 16020
agtactttga caccaccatc gaccggaaga ggtacaccag caccaaagag gtgctggacg 16080
ccaccctgat ccaccagagc atcaccggcc tgtacgagac acggatcgac ctgtctcagc 16140
tgggaggcga caaaaggccg gcggccacga aaaaggccgg ccaggcaaaa aagaaaaagt 16200
aagaattcgc ggccgcactc gagatatcta gacccagctt t 16241
<210> 2
<211> 18805
<212> DNA
<213> 棉花(Gossypium hirsutum)
<220>
<221> gene
<222> (1)..(18805)
<400> 2
taaacgctct tttctcttag gtttacccgc caatatatcc tgtcaaacac tgatagttta 60
aactgaaggc gggaaacgac aatctgatcc aagctcaagc tgctctagca ttcgccattc 120
aggctgcgca actgttggga agggcgatcg gtgcgggcct cttcgctatt acgccagctg 180
gcgaaagggg gatgtgctgc aaggcgatta agttgggtaa cgccagggtt ttcccagtca 240
cgacgttgta aaacgacggc cagtgccaag cttagtaatt catccaggtc accaagttct 300
aggattttca gaactgcaac ttattttatc aaggaatctt taaacatacg aacagatcac 360
ttaaagttct tctgaagcaa cttaaagtta tcaggcatgc atggatcttg gaggaatcag 420
atgtgcagtc agggaccata gcacaagaca ggcgtcttct actggtgcta ccagcaaatg 480
ctggaagccg ggaacactgg gtacgttgga aaccacgtga tgtgaagaag taagataaac 540
tgtaggagaa aagcatttcg tagtgggcca tgaagccttt caggacatgt attgcagtat 600
gggccggccc attacgcaat tggacgacaa caaagactag tattagtacc acctcggcta 660
tccacataga tcaaagctga tttaaaagag ttgtgcagat gatccgtggc gtgagaccaa 720
cccagtggac ataagcctgt tcggttcgta agctgtaatg caagtagcgt atgcgctcac 780
gcaactggtc cagaaccttg accgaacgca gcggtggtaa cggcgcagtg gcggttttca 840
tggcttgtta tgactgtttt tttggggtac agtctatgcc tcgggcatcc aagcagcaag 900
cgcgttacgc cgtgggtcga tgtttgatgt tatggagcag caacgatgtt acgcagcagg 960
gcagtcgccc taaaacaaag ttaaacatca tgggggaagc ggtgatcgcc gaagtatcga 1020
ctcaactatc agaggtagtt ggcgtcatcg agcgccatct cgaaccgacg ttgctggccg 1080
tacatttgta cggctccgca gtggatggcg gcctgaagcc acacagtgat attgatttgc 1140
tggttacggt gaccgtaagg cttgatgaaa caacgcggcg agctttgatc aacgaccttt 1200
tggaaacttc ggcttcccct ggagagagcg agattctccg cgctgtagaa gtcaccattg 1260
ttgtgcacga cgacatcatt ccgtggcgtt atccagctaa gcgcgaactg caatttggag 1320
aatggcagcg caatgacatt cttgcaggta tcttcgagcc agccacgatc gacattgatc 1380
tggctatctt gctgacaaaa gcaagagaac atagcgttgc cttggtaggt ccagcggcgg 1440
aggaactctt tgatccggtt cctgaacagg atctatttga ggcgctaaat gaaaccttaa 1500
cgctatggaa ctcgccgccc gactgggctg gcgatgagcg aaatgtagtg cttacgttgt 1560
cccgcatttg gtacagcgca gtaaccggca aaatcgcgcc gaaggatgtc gctgccgact 1620
gggcaatgga gcgcctgccg gcccagtatc agcccgtcat acttgaagct agacaggctt 1680
atcttggaca agaagaagat cgcttggcct cgcgcgcaga tcagttggaa gaatttgtcc 1740
actacgtgaa aggcgagatc accaaggtag tcggcaaata atgtctagct agaaattcgt 1800
tcaagccgac gccgcttcgc ggcgcggctt aactcaagcg ttagatgcac taagcacata 1860
attgctcaca gccaaactat caggtcaagt ctgcttttat tatttttaag cgtgcataat 1920
aagccggtct cggttttaga gctagaaata gcaagttaaa ataaggctag tccgttatca 1980
acttgaaaaa gtggcaccga gtcggtgctt ttttttttcg ttttgcattg agttttctcc 2040
gtcgcatgtt tgcagtttta ttttccgttt tgcattgaaa tttctccgtc tcatgtttgc 2100
agcgtgttca aaaagtacgc agctgtattt cacttattta cggcgccaca ttttcatgcc 2160
gtttgtgcca actatcccga gctagtgaat acagcttggc ttcacacaac actggtgacc 2220
cgctgacctg ctcgtacctc gtaccgtcgt acggcacagc atttggaatt aaagggtgtg 2280
atcgatactg cttgctgcta agcttgcatg cctgcagtgc agcgtgaccc ggtcgtgccc 2340
ctctctagag ataatgagca ttgcatgtct aagttataaa aaattaccac atattttttt 2400
tgtcacactt gtttgaagtg cagtttatct atctttatac atatatttaa actttactct 2460
acgaataata taatctatag tactacaata atatcagtgt tttagagaat catataaatg 2520
aacagttaga catggtctaa aggacaattg agtattttga caacaggact ctacagtttt 2580
atctttttag tgtgcatgtg ttctcctttt tttttgcaaa tagcttcacc tatataatac 2640
ttcatccatt ttattagtac atccatttag ggtttagggt taatggtttt tatagactaa 2700
tttttttagt acatctattt tattctattt tagcctctaa attaagaaaa ctaaaactct 2760
attttagttt ttttatttaa taatttagat ataaaataga ataaaataaa gtgactaaaa 2820
attaaacaaa taccctttaa gaaattaaaa aaactaagga aacatttttc ttgtttcgag 2880
tagataatgc cagcctgtta aacgccgtcg acgagtctaa cggacaccaa ccagcgaacc 2940
agcagcgtcg cgtcgggcca agcgaagcag acggcacggc atctctgtcg ctgcctctgg 3000
acccctctcg agagttccgc tccaccgttg gacttgctcc gctgtcggca tccagaaatt 3060
gcgtggcgga gcggcagacg tgagccggca cggcaggcgg cctcctcctc ctctcacggc 3120
acggcagcta cgggggattc ctttcccacc gctccttcgc tttcccttcc tcgcccgccg 3180
taataaatag acaccccctc cacaccctct ttccccaacc tcgtgttgtt cggagcgcac 3240
acacacacaa ccagatctcc cccaaatcca cccgtcggca cctccgcttc aaggtacgcc 3300
gctcgtcctc cccccccccc cctctctacc ttctctagat cggcgttccg gtccatggtt 3360
agggcccggt agttctactt ctgttcatgt ttgtgttaga tccgtgtttg tgttagatcc 3420
gtgctgctag cgttcgtaca cggatgcgac ctgtacgtca gacacgttct gattgctaac 3480
ttgccagtgt ttctctttgg ggaatcctgg gatggctcta gccgttccgc agacgggatc 3540
gatttcatga ttttttttgt ttcgttgcat agggtttggt ttgccctttt cctttatttc 3600
aatatatgcc gtgcacttgt ttgtcgggtc atcttttcat gctttttttt gtcttggttg 3660
tgatgatgtg gtctggttgg gcggtcgttc tagatcggag tagaattctg tttcaaacta 3720
cctggtggat ttattaattt tggatctgta tgtgtgtgcc atacatattc atagttacga 3780
attgaagatg atggatggaa atatcgatct aggataggta tacatgttga tgcgggtttt 3840
actgatgcat atacagagat gctttttgtt cgcttggttg tgatgatgtg gtgtggttgg 3900
gcggtcgttc attcgttcta gatcggagta gaatactgtt tcaaactacc tggtgtattt 3960
attaattttg gaactgtatg tgtgtgtcat acatcttcat agttacgagt ttaagatgga 4020
tggaaatatc gatctaggat aggtatacat gttgatgtgg gttttactga tgcatataca 4080
tgatggcata tgcagcatct attcatatgc tctaaccttg agtacctatc tattataata 4140
aacaagtatg ttttataatt attttgatct tgatatactt ggatgatggc atatgcagca 4200
gctatatgtg gattttttta gccctgcctt catacgctat ttatttgctt ggtactgttt 4260
cttttgtcga tgctcaccct gttgtttggt gttacttctg cagccctagg atgccaaaga 4320
agaagaggaa ggtttcatcg gagaccggcc ctgttgctgt tgaccccacc ctgcggcgga 4380
gaatcgagcc acacgagttc gaggtgttct tcgacccaag ggagctccgc aaggagacgt 4440
gcctcctgta cgagatcaac tggggcggca ggcactccat ctggaggcac accagccaaa 4500
acaccaacaa gcacgtggag gtcaacttca tcgagaagtt caccaccgag aggtacttct 4560
gcccaaacac ccgctgctcc atcacctggt tcctgtcctg gagcccatgc ggcgagtgct 4620
ccagggccat caccgagttc ctcagccgct acccacacgt caccctgttc atctacatcg 4680
ccaggctcta ccaccacgcc gacccaagga acaggcaggg cctccgcgac ctgatctcca 4740
gcggcgtgac catccaaatc atgaccgagc aggagtccgg ctactgctgg aggaacttcg 4800
tcaactactc cccaagcaac gaggcccact ggccaaggta cccacacctc tgggtgcgcc 4860
tctacgtgct cgagctgtac tgcatcatcc tcggcctgcc accatgcctc aacatcctga 4920
ggcgcaagca accacagctg accttcttca ccatcgccct ccaaagctgc cactaccaga 4980
ggctcccacc acacatcctg tgggctaccg gcctcaagtc cggcagcgag acgccaggca 5040
cctccgagag cgctacgcct gaacttaagg acaagaagta ctcgatcggc ctcgccatcg 5100
ggacgaactc agttggctgg gccgtgatca ccgacgagta caaggtgccc tctaagaagt 5160
tcaaggtcct ggggaacacc gaccgccatt ccatcaagaa gaacctcatc ggcgctctcc 5220
tgttcgacag cggggagacc gctgaggcta cgaggctcaa gagaaccgct aggcgccggt 5280
acacgagaag gaagaacagg atctgctacc tccaagagat tttctccaac gagatggcca 5340
aggttgacga ttcattcttc caccgcctgg aggagtcttt cctcgtggag gaggataaga 5400
agcacgagcg gcatcccatc ttcggcaaca tcgtggacga ggttgcctac cacgagaagt 5460
accctacgat ctaccatctg cggaagaagc tcgtggactc caccgataag gcggacctca 5520
gactgatcta cctcgctctg gcccacatga tcaagttccg cggccatttc ctgatcgagg 5580
gggatctcaa cccagacaac agcgatgttg acaagctgtt catccaactc gtgcagacct 5640
acaaccaact cttcgaggag aacccgatca acgcctctgg cgtggacgcg aaggctatcc 5700
tgtccgcgag gctctcgaag tccaggaggc tggagaacct gatcgctcag ctcccaggcg 5760
agaagaagaa cggcctgttc gggaacctca tcgctctcag cctggggctc accccgaact 5820
tcaagtcgaa cttcgatctc gctgaggacg ccaagctgca actctccaag gacacctacg 5880
acgatgacct cgataacctc ctggcccaga tcggcgatca atacgcggac ctgttcctcg 5940
ctgccaagaa cctgtcggac gccatcctcc tgtcagatat cctccgcgtg aacaccgaga 6000
tcacgaaggc tccactctct gcctccatga tcaagcgcta cgacgagcac catcaggatc 6060
tgaccctcct gaaggcgctg gtccgccaac agctcccgga gaagtacaag gagattttct 6120
tcgatcagtc gaagaacggc tacgctgggt acatcgacgg cggggcctca caagaggagt 6180
tctacaagtt catcaagcca atcctggaga agatggacgg cacggaggag ctcctggtga 6240
agctcaacag ggaggacctc ctgcggaagc agagaacctt cgataacggc agcatccccc 6300
accaaatcca tctcggggag ctgcacgcca tcctgagaag gcaagaggac ttctaccctt 6360
tcctcaagga taaccgggag aagatcgaga agatcctgac cttcagaatc ccatactacg 6420
tcggccctct cgcgcggggg aactcaagat tcgcttggat gacccgcaag tctgaggaga 6480
ccatcacgcc gtggaacttc gaggaggtgg tggacaaggg cgctagcgct cagtcgttca 6540
tcgagaggat gaccaacttc gacaagaacc tgcccaacga gaaggtgctc cctaagcact 6600
cgctcctgta cgagtacttc accgtctaca acgagctcac gaaggtgaag tacgtcaccg 6660
agggcatgcg caagccagcg ttcctgtccg gggagcagaa gaaggctatc gtggacctcc 6720
tgttcaagac caaccggaag gtcacggtta agcaactcaa ggaggactac ttcaagaaga 6780
tcgagtgctt cgattcggtc gagatcagcg gcgttgagga ccgcttcaac gccagcctcg 6840
ggacctacca cgatctcctg aagatcatca aggataagga cttcctggac aacgaggaga 6900
acgaggatat cctggaggac atcgtgctga ccctcacgct gttcgaggac agggagatga 6960
tcgaggagcg cctgaagacg tacgcccatc tcttcgatga caaggtcatg aagcaactca 7020
agcgccggag atacaccggc tgggggaggc tgtcccgcaa gctcatcaac ggcatccggg 7080
acaagcagtc cgggaagacc atcctcgact tcctcaagag cgatggcttc gccaacagga 7140
acttcatgca actgatccac gatgacagcc tcaccttcaa ggaggatatc caaaaggctc 7200
aagtgagcgg ccagggggac tcgctgcacg agcatatcgc gaacctcgct ggctcccccg 7260
cgatcaagaa gggcatcctc cagaccgtga aggttgtgga cgagctcgtg aaggtcatgg 7320
gccggcacaa gcctgagaac atcgtcatcg agatggccag agagaaccaa accacgcaga 7380
aggggcaaaa gaactctagg gagcgcatga agcgcatcga ggagggcatc aaggagctgg 7440
ggtcccaaat cctcaaggag cacccagtgg agaacaccca actgcagaac gagaagctct 7500
acctgtacta cctccagaac ggcagggata tgtacgtgga ccaagagctg gatatcaacc 7560
gcctcagcga ttacgacgtc gatcatatcg ttccccagtc tttcctgaag gatgactcca 7620
tcgacaacaa ggtcctcacc aggtcggaca agaaccgcgg caagtcagat aacgttccat 7680
ctgaggaggt cgttaagaag atgaagaact actggaggca gctcctgaac gccaagctga 7740
tcacgcaaag gaagttcgac aacctcacca aggctgagag aggcgggctc tcagagctgg 7800
acaaggccgg cttcatcaag cggcagctgg tcgagaccag acaaatcacg aagcacgttg 7860
cgcaaatcct cgactctcgg atgaacacga agtacgatga gaacgacaag ctgatcaggg 7920
aggttaaggt gatcaccctg aagtctaagc tcgtctccga cttcaggaag gatttccagt 7980
tctacaaggt tcgcgagatc aacaactacc accatgccca tgacgcttac ctcaacgctg 8040
tggtcggcac cgctctgatc aagaagtacc caaagctgga gtccgagttc gtgtacgggg 8100
actacaaggt ttacgatgtg cgcaagatga tcgccaagtc ggagcaagag atcggcaagg 8160
ctaccgccaa gtacttcttc tactcaaaca tcatgaactt cttcaagacc gagatcacgc 8220
tggccaacgg cgagatccgg aagagaccgc tcatcgagac caacggcgag acgggggaga 8280
tcgtgtggga caagggcagg gatttcgcga ccgtccgcaa ggttctctcc atgccccagg 8340
tgaacatcgt caagaagacc gaggtccaaa cgggcgggtt ctcaaaggag tctatcctgc 8400
ctaagcggaa cagcgacaag ctcatcgcca gaaagaagga ctgggaccca aagaagtacg 8460
gcgggttcga cagccctacc gtggcctact cggtcctggt tgtggcgaag gttgagaagg 8520
gcaagtccaa gaagctcaag agcgtgaagg agctcctggg gatcaccatc atggagaggt 8580
ccagcttcga gaagaaccca atcgacttcc tggaggccaa gggctacaag gaggtgaaga 8640
aggacctgat catcaagctc ccgaagtact ctctcttcga gctggagaac ggcaggaaga 8700
gaatgctggc ttccgctggc gagctccaga aggggaacga gctcgcgctg ccaagcaagt 8760
acgtgaactt cctctacctg gcttcccact acgagaagct caagggcagc ccggaggaca 8820
acgagcaaaa gcagctgttc gtcgagcagc acaagcatta cctcgacgag atcatcgagc 8880
aaatctccga gttcagcaag cgcgtgatcc tcgccgacgc gaacctggat aaggtcctct 8940
ccgcctacaa caagcaccgg gacaagccca tcagagagca agcggagaac atcatccatc 9000
tcttcaccct gacgaacctc ggcgctcctg ctgctttcaa gtacttcgac accacgatcg 9060
atcggaagag atacacctcc acgaaggagg tcctggacgc gaccctcatc caccagtcga 9120
tcaccggcct gtacgagacg aggatcgacc tctcacaact cggcggggat aagagacccg 9180
cagcaaccaa gaaggcaggg caagcaaaga agaagaagac gcgtgactcc ggcggcagca 9240
ccaacctgtc cgacatcatc gagaaggaga cgggcaagca actcgtgatc caggagagca 9300
tcctcatgct gccagaggag gtggaggagg tcatcggcaa caagccagag tccgacatcc 9360
tggtgcacac cgcctacgac gagtccaccg acgagaacgt catgctcctg accagcgacg 9420
ccccagagta caagccatgg gccctcgtca tccaggacag caacggggag aacaagatca 9480
agatgctgtc gggggggagc ccaaagaaga agcggaaggt gtagtggctc agagctttcg 9540
ttcgtatcat cggtttcgac aacgttcgtc aagttcaatg catcagtttc attgcgcaca 9600
caccagaatc ctactgagtt tgagtattat ggcattggga aaactgtttt tcttgtacca 9660
tttgttgtgc ttgtaattta ctgtgttttt tattcggttt tcgctatcga actgtgaaat 9720
ggaaatggat ggagaagagt taatgaatga tatggtcctt ttgttcattc tcaaattaat 9780
attatttgtt ttttctctta tttgttgtgt gttgaatttg aaattataag agatatgcaa 9840
acattttgtt ttgagtaaaa atgtgtcaaa tcgtggcctc taatgaccga agttaatatg 9900
aggagtaaaa cacttgtagt tgtaccatta tgcttattca ctaggcaaca aatatatttt 9960
cagacctaga aaagctgcaa atgttactga atacaagtat gtcctcttgt gttttagaca 10020
tttatgaact ttcctttatg taattttcca gaatccttgt cagattctaa tcattgcttt 10080
ataattatag ttatactcat ggatttgtag ttgagtatga aaatattttt taatgcattt 10140
tatgacttgc caattgattg acaacgaatt cgtaatcatg tcatagctgt ttcctgtgtg 10200
aaattgttat ccgctcacaa ttccacacaa catacgagcc ggaagcataa agtgtaaagc 10260
ctggggtgcc taatgagtga gctaactcac attaattgcg ttgcgctcac tgcccgcttt 10320
ccagtcggga aacctgtcgt gccagctgca ttaatgaatc ggccaacgcg cggggagagg 10380
cggtttgcgt attggctaga gcagcttgcc aacatggtgg agcacgacac tctcgtctac 10440
tccaagaata tcaaagatac agtctcagaa gaccaaaggg ctattgagac ttttcaacaa 10500
agggtaatat cgggaaacct cctcggattc cattgcccag ctatctgtca cttcatcaaa 10560
aggacagtag aaaaggaagg tggcacctac aaatgccatc attgcgataa aggaaaggct 10620
atcgttcaag atgcctctgc cgacagtggt cccaaagatg gacccccacc cacgaggagc 10680
atcgtggaaa aagaagacgt tccaaccacg tcttcaaagc aagtggattg atgtgataac 10740
atggtggagc acgacactct cgtctactcc aagaatatca aagatacagt ctcagaagac 10800
caaagggcta ttgagacttt tcaacaaagg gtaatatcgg gaaacctcct cggattccat 10860
tgcccagcta tctgtcactt catcaaaagg acagtagaaa aggaaggtgg cacctacaaa 10920
tgccatcatt gcgataaagg aaaggctatc gttcaagatg cctctgccga cagtggtccc 10980
aaagatggac ccccacccac gaggagcatc gtggaaaaag aagacgttcc aaccacgtct 11040
tcaaagcaag tggattgatg tgatatctcc actgacgtaa gggatgacgc acaatcccac 11100
tatccttcgc aagaccttcc tctatataag gaagttcatt tcatttggag aggacacgct 11160
gaaatcacca gtctctctct acaaatctat ctctctcgag ctttcgcaga tcccgggggg 11220
caatgagata tgaaaaagcc tgaactcacc gcgacgtctg tcgagaagtt tctgatcgaa 11280
aagttcgaca gcgtctccga cctgatgcag ctctcggagg gcgaagaatc tcgtgctttc 11340
agcttcgatg taggagggcg tggatatgtc ctgcgggtaa atagctgcgc cgatggtttc 11400
tacaaagatc gttatgttta tcggcacttt gcatcggccg cgctcccgat tccggaagtg 11460
cttgacattg gggagtttag cgagagcctg acctattgca tctcccgccg tgcacagggt 11520
gtcacgttgc aagacctgcc tgaaaccgaa ctgcccgctg ttctacaacc ggtcgcggag 11580
gctatggatg cgatcgctgc ggccgatctt agccagacga gcgggttcgg cccattcgga 11640
ccgcaaggaa tcggtcaata cactacatgg cgtgatttca tatgcgcgat tgctgatccc 11700
catgtgtatc actggcaaac tgtgatggac gacaccgtca gtgcgtccgt cgcgcaggct 11760
ctcgatgagc tgatgctttg ggccgaggac tgccccgaag tccggcacct cgtgcacgcg 11820
gatttcggct ccaacaatgt cctgacggac aatggccgca taacagcggt cattgactgg 11880
agcgaggcga tgttcgggga ttcccaatac gaggtcgcca acatcttctt ctggaggccg 11940
tggttggctt gtatggagca gcagacgcgc tacttcgagc ggaggcatcc ggagcttgca 12000
ggatcgccac gactccgggc gtatatgctc cgcattggtc ttgaccaact ctatcagagc 12060
ttggttgacg gcaatttcga tgatgcagct tgggcgcagg gtcgatgcga cgcaatcgtc 12120
cgatccggag ccgggactgt cgggcgtaca caaatcgccc gcagaagcgc ggccgtctgg 12180
accgatggct gtgtagaagt actcgccgat agtggaaacc gacgccccag cactcgtccg 12240
agggcaaaga aatagagtag atgccgaccg gatctgtcga tcgacaagct cgagtttctc 12300
cataataatg tgtgagtagt tcccagataa gggaattagg gttcctatag ggtttcgctc 12360
atgtgttgag catataagaa acccttagta tgtatttgta tttgtaaaat acttctatca 12420
ataaaatttc taattcctaa aaccaaaatc cagtactaaa atccagatcc cccgaattaa 12480
ttcggcgtta attcagtaca ttaaaaacgt ccgcaatgtg ttattaagtt gtctaagcgt 12540
caatttgttt acaccacaat atatcctgcc accagccagc caacagctcc ccgaccggca 12600
gctcggcaca aaatcaccac tcgatacagg cagcccatca gtccgggacg gcgtcagcgg 12660
gagagccgtt gtaaggcggc agactttgct catgttaccg atgctattcg gaagaacggc 12720
aactaagctg ccgggtttga aacacggatg atctcgcgga gggtagcatg ttgattgtaa 12780
cgatgacaga gcgttgctgc ctgtgatcac cgcggtttca aaatcggctc cgtcgatact 12840
atgttatacg ccaactttga aaacaacttt gaaaaagctg ttttctggta tttaaggttt 12900
tagaatgcaa ggaacagtga attggagttc gtcttgttat aattagcttc ttggggtatc 12960
tttaaatact gtagaaaaga ggaaggaaat aataaatggc taaaatgaga atatcaccgg 13020
aattgaaaaa actgatcgaa aaataccgct gcgtaaaaga tacggaagga atgtctcctg 13080
ctaaggtata taagctggtg ggagaaaatg aaaacctata tttaaaaatg acggacagcc 13140
ggtataaagg gaccacctat gatgtggaac gggaaaagga catgatgcta tggctggaag 13200
gaaagctgcc tgttccaaag gtcctgcact ttgaacggca tgatggctgg agcaatctgc 13260
tcatgagtga ggccgatggc gtcctttgct cggaagagta tgaagatgaa caaagccctg 13320
aaaagattat cgagctgtat gcggagtgca tcaggctctt tcactccatc gacatatcgg 13380
attgtcccta tacgaatagc ttagacagcc gcttagccga attggattac ttactgaata 13440
acgatctggc cgatgtggat tgcgaaaact gggaagaaga cactccattt aaagatccgc 13500
gcgagctgta tgatttttta aagacggaaa agcccgaaga ggaacttgtc ttttcccacg 13560
gcgacctggg agacagcaac atctttgtga aagatggcaa agtaagtggc tttattgatc 13620
ttgggagaag cggcagggcg gacaagtggt atgacattgc cttctgcgtc cggtcgatca 13680
gggaggatat cggggaagaa cagtatgtcg agctattttt tgacttactg gggatcaagc 13740
ctgattggga gaaaataaaa tattatattt tactggatga attgttttag tacctagaat 13800
gcatgaccaa aatcccttaa cgtgagtttt cgttccactg agcgtcagac cccgtagaaa 13860
agatcaaagg atcttcttga gatccttttt ttctgcgcgt aatctgctgc ttgcaaacaa 13920
aaaaaccacc gctaccagcg gtggtttgtt tgccggatca agagctacca actctttttc 13980
cgaaggtaac tggcttcagc agagcgcaga taccaaatac tgtccttcta gtgtagccgt 14040
agttaggcca ccacttcaag aactctgtag caccgcctac atacctcgct ctgctaatcc 14100
tgttaccagt ggctgctgcc agtggcgata agtcgtgtct taccgggttg gactcaagac 14160
gatagttacc ggataaggcg cagcggtcgg gctgaacggg gggttcgtgc acacagccca 14220
gcttggagcg aacgacctac accgaactga gatacctaca gcgtgagcta tgagaaagcg 14280
ccacgcttcc cgaagggaga aaggcggaca ggtatccggt aagcggcagg gtcggaacag 14340
gagagcgcac gagggagctt ccagggggaa acgcctggta tctttatagt cctgtcgggt 14400
ttcgccacct ctgacttgag cgtcgatttt tgtgatgctc gtcagggggg cggagcctat 14460
ggaaaaacgc cagcaacgcg gcctttttac ggttcctggc cttttgctgg ccttttgctc 14520
acatgttctt tcctgcgtta tcccctgatt ctgtggataa ccgtattacc gcctttgagt 14580
gagctgatac cgctcgccgc agccgaacga ccgagcgcag cgagtcagtg agcgaggaag 14640
cggaagagcg cctgatgcgg tattttctcc ttacgcatct gtgcggtatt tcacaccgca 14700
tatggtgcac tctcagtaca atctgctctg atgccgcata gttaagccag tatacactcc 14760
gctatcgcta cgtgactggg tcatggctgc gccccgacac ccgccaacac ccgctgacgc 14820
gccctgacgg gcttgtctgc tcccggcatc cgcttacaga caagctgtga ccgtctccgg 14880
gagctgcatg tgtcagaggt tttcaccgtc atcaccgaaa cgcgcgaggc agggtgcctt 14940
gatgtgggcg ccggcggtcg agtggcgacg gcgcggcttg tccgcgccct ggtagattgc 15000
ctggccgtag gccagccatt tttgagcggc cagcggccgc gataggccga cgcgaagcgg 15060
cggggcgtag ggagcgcagc gaccgaaggg taggcgcttt ttgcagctct tcggctgtgc 15120
gctggccaga cagttatgca caggccaggc gggttttaag agttttaata agttttaaag 15180
agttttaggc ggaaaaatcg ccttttttct cttttatatc agtcacttac atgtgtgacc 15240
ggttcccaat gtacggcttt gggttcccaa tgtacgggtt ccggttccca atgtacggct 15300
ttgggttccc aatgtacgtg ctatccacag gaaacagacc ttttcgacct ttttcccctg 15360
ctagggcaat ttgccctagc atctgctccg tacattagga accggcggat gcttcgccct 15420
cgatcaggtt gcggtagcgc atgactagga tcgggccagc ctgccccgcc tcctccttca 15480
aatcgtactc cggcaggtca tttgacccga tcagcttgcg cacggtgaaa cagaacttct 15540
tgaactctcc ggcgctgcca ctgcgttcgt agatcgtctt gaacaaccat ctggcttctg 15600
ccttgcctgc ggcgcggcgt gccaggcggt agagaaaacg gccgatgccg ggatcgatca 15660
aaaagtaatc ggggtgaacc gtcagcacgt ccgggttctt gccttctgtg atctcgcggt 15720
acatccaatc agctagctcg atctcgatgt actccggccg cccggtttcg ctctttacga 15780
tcttgtagcg gctaatcaag gcttcaccct cggataccgt caccaggcgg ccgttcttgg 15840
ccttcttcgt acgctgcatg gcaacgtgcg tggtgtttaa ccgaatgcag gtttctacca 15900
ggtcgtcttt ctgctttccg ccatcggctc gccggcagaa cttgagtacg tccgcaacgt 15960
gtggacggaa cacgcggccg ggcttgtctc ccttcccttc ccggtatcgg ttcatggatt 16020
cggttagatg ggaaaccgcc atcagtacca ggtcgtaatc ccacacactg gccatgccgg 16080
ccggccctgc ggaaacctct acgtgcccgt ctggaagctc gtagcggatc acctcgccag 16140
ctcgtcggtc acgcttcgac agacggaaaa cggccacgtc catgatgctg cgactatcgc 16200
gggtgcccac gtcatagagc atcggaacga aaaaatctgg ttgctcgtcg cccttgggcg 16260
gcttcctaat cgacggcgca ccggctgccg gcggttgccg ggattctttg cggattcgat 16320
cagcggccgc ttgccacgat tcaccggggc gtgcttctgc ctcgatgcgt tgccgctggg 16380
cggcctgcgc ggccttcaac ttctccacca ggtcatcacc cagcgccgcg ccgatttgta 16440
ccgggccgga tggtttgcga ccgctcacgc cgattcctcg ggcttggggg ttccagtgcc 16500
attgcagggc cggcagacaa cccagccgct tacgcctggc caaccgcccg ttcctccaca 16560
catggggcat tccacggcgt cggtgcctgg ttgttcttga ttttccatgc cgcctccttt 16620
agccgctaaa attcatctac tcatttattc atttgctcat ttactctggt agctgcgcga 16680
tgtattcaga tagcagctcg gtaatggtct tgccttggcg taccgcgtac atcttcagct 16740
tggtgtgatc ctccgccggc aactgaaagt tgacccgctt catggctggc gtgtctgcca 16800
ggctggccaa cgttgcagcc ttgctgctgc gtgcgctcgg acggccggca cttagcgtgt 16860
ttgtgctttt gctcattttc tctttacctc attaactcaa atgagttttg atttaatttc 16920
agcggccagc gcctggacct cgcgggcagc gtcgccctcg ggttctgatt caagaacggt 16980
tgtgccggcg gcggcagtgc ctgggtagct cacgcgctgc gtgatacggg actcaagaat 17040
gggcagctcg tacccggcca gcgcctcggc aacctcaccg ccgatgcgcg tgcctttgat 17100
cgcccgcgac acgacaaagg ccgcttgtag ccttccatcc gtgacctcaa tgcgctgctt 17160
aaccagctcc accaggtcgg cggtggccca tatgtcgtaa gggcttggct gcaccggaat 17220
cagcacgaag tcggctgcct tgatcgcgga cacagccaag tccgccgcct ggggcgctcc 17280
gtcgatcact acgaagtcgc gccggccgat ggccttcacg tcgcggtcaa tcgtcgggcg 17340
gtcgatgccg acaacggtta gcggttgatc ttcccgcacg gccgcccaat cgcgggcact 17400
gccctgggga tcggaatcga ctaacagaac atcggccccg gcgagttgca gggcgcgggc 17460
tagatgggtt gcgatggtcg tcttgcctga cccgcctttc tggttaagta cagcgataac 17520
cttcatgcgt tccccttgcg tatttgttta tttactcatc gcatcatata cgcagcgacc 17580
gcatgacgca agctgtttta ctcaaataca catcaccttt ttagacggcg gcgctcggtt 17640
tcttcagcgg ccaagctggc cggccaggcc gccagcttgg catcagacaa accggccagg 17700
atttcatgca gccgcacggt tgagacgtgc gcgggcggct cgaacacgta cccggccgcg 17760
atcatctccg cctcgatctc ttcggtaatg aaaaacggtt cgtcctggcc gtcctggtgc 17820
ggtttcatgc ttgttcctct tggcgttcat tctcggcggc cgccagggcg tcggcctcgg 17880
tcaatgcgtc ctcacggaag gcaccgcgcc gcctggcctc ggtgggcgtc acttcctcgc 17940
tgcgctcaag tgcgcggtac agggtcgagc gatgcacgcc aagcagtgca gccgcctctt 18000
tcacggtgcg gccttcctgg tcgatcagct cgcgggcgtg cgcgatctgt gccggggtga 18060
gggtagggcg ggggccaaac ttcacgcctc gggccttggc ggcctcgcgc ccgctccggg 18120
tgcggtcgat gattagggaa cgctcgaact cggcaatgcc ggcgaacacg gtcaacacca 18180
tgcggccggc cggcgtggtg gtgtcggccc acggctctgc caggctacgc aggcccgcgc 18240
cggcctcctg gatgcgctcg gcaatgtcca gtaggtcgcg ggtgctgcgg gccaggcggt 18300
ctagcctggt cactgtcaca acgtcgccag ggcgtaggtg gtcaagcatc ctggccagct 18360
ccgggcggtc gcgcctggtg ccggtgatct tctcggaaaa cagcttggtg cagccggccg 18420
cgtgcagttc ggcccgttgg ttggtcaagt cctggtcgtc ggtgctgacg cgggcatagc 18480
ccagcaggcc agcggcggcg ctcttgttca tggcgtaatg tctccggttc tagtcgcaag 18540
tattctactt tatgcgacta aaacacgcga caagaaaacg ccaggaaaag ggcagggcgg 18600
cagcctgtcg cgtaacttag gacttgtgcg acatgtcgtt ttcagaagac ggctgcactg 18660
aacgtcagaa gccgactgca ctatagcagc ggaggggttg gatcaaagta ctttgatccc 18720
gaggggaacc ctgtggttgg catgcacata caaatggacg aacggataaa ccttttcacg 18780
cccttttaaa tatccgttat tctaa 18805
<210> 3
<211> 17150
<212> DNA
<213> 棉花(Gossypium hirsutum)
<220>
<221> gene
<222> (1)..(17150)
<400> 3
cttgtacaaa gtggttgata acagcgacta caaggatgac gatgacaagg cttagagctc 60
gaatttcccc gatcgttcaa acatttggca ataaagtttc ttaagattga atcctgttgc 120
cggtcttgcg atgattatca tataatttct gttgaattac gttaagcatg taataattaa 180
catgtaatgc atgacgttat ttatgagatg ggtttttatg attagagtcc cgcaattata 240
catttaatac gcgatagaaa acaaaatata gcgcgcaaac taggataaat tatcgcgcgc 300
ggtgtcatct atgttactag atcgggaatt cactggccgt cgttttacac tggccgtcgt 360
tttacaacgt cgtgactggg aaaaccctgg cgttacccaa cttaatcgcc ttgcagcaca 420
tccccctttc gccagctggc gtaatagcga agaggcccgc accgatcgcc cttcccaaca 480
gttgcgcagc ctgaatggcg aatgctagag cagcttgagc ttggatcaga ttgtcgtttc 540
ccgccttcag tttaaactat cagtgtttga caggatatat tggcgggtaa acctaagaga 600
aaagagcgtt tattagaata acggatattt aaaagggcgt gaaaaggttt atccgttcgt 660
ccatttgtat gtgcatgcca accacagggt tcccctcggg atcaaagtac tttgatccaa 720
cccctccgct gctatagtgc agtcggcttc tgacgttcag tgcagccgtc ttctgaaaac 780
gacatgtcgc acaagtccta agttacgcga caggctgccg ccctgccctt ttcctggcgt 840
tttcttgtcg cgtgttttag tcgcataaag tagaatactt gcgactagaa ccggagacat 900
tacgccatga acaagagcgc cgccgctggc ctgctgggct atgcccgcgt cagcaccgac 960
gaccaggact tgaccaacca acgggccgaa ctgcacgcgg ccggctgcac caagctgttt 1020
tccgagaaga tcaccggcac caggcgcgac cgcccggagc tggccaggat gcttgaccac 1080
ctacgccctg gcgacgttgt gacagtgacc aggctagacc gcctggcccg cagcacccgc 1140
gacctactgg acattgccga gcgcatccag gaggccggcg cgggcctgcg tagcctggca 1200
gagccgtggg ccgacaccac cacgccggcc ggccgcatgg tgttgaccgt gttcgccggc 1260
attgccgagt tcgagcgttc cctaatcatc gaccgcaccc ggagcgggcg cgaggccgcc 1320
aaggcccgag gcgtgaagtt tggcccccgc cctaccctca ccccggcaca gatcgcgcac 1380
gcccgcgagc tgatcgacca ggaaggccgc accgtgaaag aggcggctgc actgcttggc 1440
gtgcatcgct cgaccctgta ccgcgcactt gagcgcagcg aggaagtgac gcccaccgag 1500
gccaggcggc gcggtgcctt ccgtgaggac gcattgaccg aggccgacgc cctggcggcc 1560
gccgagaatg aacgccaaga ggaacaagca tgaaaccgca ccaggacggc caggacgaac 1620
cgtttttcat taccgaagag atcgaggcgg agatgatcgc ggccgggtac gtgttcgagc 1680
cgcccgcgca cgtctcaacc gtgcggctgc atgaaatcct ggccggtttg tctgatgcca 1740
agctggcggc ctggccggcc agcttggccg ctgaagaaac cgagcgccgc cgtctaaaaa 1800
ggtgatgtgt atttgagtaa aacagcttgc gtcatgcggt cgctgcgtat atgatgcgat 1860
gagtaaataa acaaatacgc aaggggaacg catgaaggtt atcgctgtac ttaaccagaa 1920
aggcgggtca ggcaagacga ccatcgcaac ccatctagcc cgcgccctgc aactcgccgg 1980
ggccgatgtt ctgttagtcg attccgatcc ccagggcagt gcccgcgatt gggcggccgt 2040
gcgggaagat caaccgctaa ccgttgtcgg catcgaccgc ccgacgattg accgcgacgt 2100
gaaggccatc ggccggcgcg acttcgtagt gatcgacgga gcgccccagg cggcggactt 2160
ggctgtgtcc gcgatcaagg cagccgactt cgtgctgatt ccggtgcagc caagccctta 2220
cgacatatgg gccaccgccg acctggtgga gctggttaag cagcgcattg aggtcacgga 2280
tggaaggcta caagcggcct ttgtcgtgtc gcgggcgatc aaaggcacgc gcatcggcgg 2340
tgaggttgcc gaggcgctgg ccgggtacga gctgcccatt cttgagtccc gtatcacgca 2400
gcgcgtgagc tacccaggca ctgccgccgc cggcacaacc gttcttgaat cagaacccga 2460
gggcgacgct gcccgcgagg tccaggcgct ggccgctgaa attaaatcaa aactcatttg 2520
agttaatgag gtaaagagaa aatgagcaaa agcacaaaca cgctaagtgc cggccgtccg 2580
agcgcacgca gcagcaaggc tgcaacgttg gccagcctgg cagacacgcc agccatgaag 2640
cgggtcaact ttcagttgcc ggcggaggat cacaccaagc tgaagatgta cgcggtacgc 2700
caaggcaaga ccattaccga gctgctatct gaatacatcg cgcagctacc agagtaaatg 2760
agcaaatgaa taaatgagta gatgaatttt agcggctaaa ggaggcggca tggaaaatca 2820
agaacaacca ggcaccgacg ccgtggaatg ccccatgtgt ggaggaacgg gcggttggcc 2880
aggcgtaagc ggctgggttg tctgccggcc ctgcaatggc actggaaccc ccaagcccga 2940
ggaatcggcg tgacggtcgc aaaccatccg gcccggtaca aatcggcgcg gcgctgggtg 3000
atgacctggt ggagaagttg aaggccgcgc aggccgccca gcggcaacgc atcgaggcag 3060
aagcacgccc cggtgaatcg tggcaagcgg ccgctgatcg aatccgcaaa gaatcccggc 3120
aaccgccggc agccggtgcg ccgtcgatta ggaagccgcc caagggcgac gagcaaccag 3180
attttttcgt tccgatgctc tatgacgtgg gcacccgcga tagtcgcagc atcatggacg 3240
tggccgtttt ccgtctgtcg aagcgtgacc gacgagctgg cgaggtgatc cgctacgagc 3300
ttccagacgg gcacgtagag gtttccgcag ggccggccgg catggccagt gtgtgggatt 3360
acgacctggt actgatggcg gtttcccatc taaccgaatc catgaaccga taccgggaag 3420
ggaagggaga caagcccggc cgcgtgttcc gtccacacgt tgcggacgta ctcaagttct 3480
gccggcgagc cgatggcgga aagcagaaag acgacctggt agaaacctgc attcggttaa 3540
acaccacgca cgttgccatg cagcgtacga agaaggccaa gaacggccgc ctggtgacgg 3600
tatccgaggg tgaagccttg attagccgct acaagatcgt aaagagcgaa accgggcggc 3660
cggagtacat cgagatcgag ctagctgatt ggatgtaccg cgagatcaca gaaggcaaga 3720
acccggacgt gctgacggtt caccccgatt actttttgat cgatcccggc atcggccgtt 3780
ttctctaccg cctggcacgc cgcgccgcag gcaaggcaga agccagatgg ttgttcaaga 3840
cgatctacga acgcagtggc agcgccggag agttcaagaa gttctgtttc accgtgcgca 3900
agctgatcgg gtcaaatgac ctgccggagt acgatttgaa ggaggaggcg gggcaggctg 3960
gcccgatcct agtcatgcgc taccgcaacc tgatcgaggg cgaagcatcc gccggttcct 4020
aatgtacgga gcagatgcta gggcaaattg ccctagcagg ggaaaaaggt cgaaaagcac 4080
tctttcctgt ggatagcacg tacattggga acccaaagcc gtacattggg aaccggaacc 4140
cgtacattgg gaacccaaag ccgtacattg ggaaccggtc acacatgtaa gtgactgata 4200
taaaagagaa aaaaggcgat ttttccgcct aaaactcttt aaaacttatt aaaactctta 4260
aaacccgcct ggcctgtgca taactgtctg gccagcgcac agccgaagag ctgcaaaaag 4320
cgcctaccct tcggtcgctg cgctccctac gccccgccgc ttcgcgtcgg cctatcgcgg 4380
ccgctggccg ctcaaaaatg gctggcctac ggccaggcaa tctaccaggg cgcggacaag 4440
ccgcgccgtc gccactcgac cgccggcgcc cacatcaagg caccctgcct cgcgcgtttc 4500
ggtgatgacg gtgaaaacct ctgacacatg cagctcccgg agacggtcac agcttgtctg 4560
taagcggatg ccgggagcag acaagcccgt cagggcgcgt cagcgggtgt tggcgggtgt 4620
cggggcgcag ccatgaccca gtcacgtagc gatagcggag tgtatactgg cttaactatg 4680
cggcatcaga gcagattgta ctgagagtgc accatatgcg gtgtgaaata ccgcacagat 4740
gcgtaaggag aaaataccgc atcaggcgct cttccgcttc ctcgctcact gactcgctgc 4800
gctcggtcgt tcggctgcgg cgagcggtat cagctcactc aaaggcggta atacggttat 4860
ccacagaatc aggggataac gcaggaaaga acatgtgagc aaaaggccag caaaaggcca 4920
ggaaccgtaa aaaggccgcg ttgctggcgt ttttccatag gctccgcccc cctgacgagc 4980
atcacaaaaa tcgacgctca agtcagaggt ggcgaaaccc gacaggacta taaagatacc 5040
aggcgtttcc ccctggaagc tccctcgtgc gctctcctgt tccgaccctg ccgcttaccg 5100
gatacctgtc cgcctttctc ccttcgggaa gcgtggcgct ttctcatagc tcacgctgta 5160
ggtatctcag ttcggtgtag gtcgttcgct ccaagctggg ctgtgtgcac gaaccccccg 5220
ttcagcccga ccgctgcgcc ttatccggta actatcgtct tgagtccaac ccggtaagac 5280
acgacttatc gccactggca gcagccactg gtaacaggat tagcagagcg aggtatgtag 5340
gcggtgctac agagttcttg aagtggtggc ctaactacgg ctacactaga aggacagtat 5400
ttggtatctg cgctctgctg aagccagtta ccttcggaaa aagagttggt agctcttgat 5460
ccggcaaaca aaccaccgct ggtagcggtg gtttttttgt ttgcaagcag cagattacgc 5520
gcagaaaaaa aggatctcaa gaagatcctt tgatcttttc tacggggtct gacgctcagt 5580
ggaacgaaaa ctcacgttaa gggattttgg tcatgcattc taggtactaa aacaattcat 5640
ccagtaaaat ataatatttt attttctccc aatcaggctt gatccccagt aagtcaaaaa 5700
atagctcgac atactgttct tccccgatat cctccctgat cgaccggacg cagaaggcaa 5760
tgtcatacca cttgtccgcc ctgccgcttc tcccaagatc aataaagcca cttactttgc 5820
catctttcac aaagatgttg ctgtctccca ggtcgccgtg ggaaaagaca agttcctctt 5880
cgggcttttc cgtctttaaa aaatcataca gctcgcgcgg atctttaaat ggagtgtctt 5940
cttcccagtt ttcgcaatcc acatcggcca gatcgttatt cagtaagtaa tccaattcgg 6000
ctaagcggct gtctaagcta ttcgtatagg gacaatccga tatgtcgatg gagtgaaaga 6060
gcctgatgca ctccgcatac agctcgataa tcttttcagg gctttgttca tcttcatact 6120
cttccgagca aaggacgcca tcggcctcac tcatgagcag attgctccag ccatcatgcc 6180
gttcaaagtg caggaccttt ggaacaggca gctttccttc cagccatagc atcatgtcct 6240
tttcccgttc cacatcatag gtggtccctt tataccggct gtccgtcatt tttaaatata 6300
ggttttcatt ttctcccacc agcttatata ccttagcagg agacattcct tccgtatctt 6360
ttacgcagcg gtatttttcg atcagttttt tcaattccgg tgatattctc attttagcca 6420
tttattattt ccttcctctt ttctacagta tttaaagata ccccaagaag ctaattataa 6480
caagacgaac tccaattcac tgttccttgc attctaaaac cttaaatacc agaaaacagc 6540
tttttcaaag ttgttttcaa agttggcgta taacatagta tcgacggagc cgattttgaa 6600
accgcggtga tcacaggcag caacgctctg tcatcgttac aatcaacatg ctaccctccg 6660
cgagatcatc cgtgtttcaa acccggcagc ttagttgccg ttcttccgaa tagcatcggt 6720
aacatgagca aagtctgccg ccttacaacg gctctcccgc tgacgccgtc ccggactgat 6780
gggctgcctg tatcgagtgg tgattttgtg ccgagctgcc ggtcggggag ctgttggctg 6840
gctggtggca ggatatattg tggtgtaaac aaattgacgc ttagacaact taataacaca 6900
ttgcggacgt ttttaatgta ctgaattaac gccgaattaa ttcgggggat ctggatttta 6960
gtactggatt ttggttttag gaattagaaa ttttattgat agaagtattt tacaaataca 7020
aatacatact aagggtttct tatatgctca acacatgagc gaaaccctat aggaacccta 7080
attcccttat ctgggaacta ctcacacatt attatggaga aactcgagct cagaagaact 7140
cgtcaagaag gcgatagaag gcgatgcgct gcgaatcggg agcggcgata ccgtaaagca 7200
cgaggaagcg gtcagcccat tcgccgccaa gctcttcagc aatatcacgg gtagccaacg 7260
ctatgtcctg atagcggtcc gccacaccca gccggccaca gtcgatgaat ccagaaaagc 7320
ggccattttc caccatgata ttcggcaagc aggcatcgcc atgggtcacg acgagatcat 7380
cgccgtcggg catgcgcgcc ttgagcctgg cgaacagttc ggctggcgcg agcccctgat 7440
gctcttcgtc cagatcatcc tgatcgacaa gaccggcttc catccgagta cgtgctcgct 7500
cgatgcgatg tttcgcttgg tggtcgaatg ggcaggtagc cggatcaagc gtatgcagcc 7560
gccgcattgc atcagccatg atggatactt tctcggcagg agcaaggtga gatgacagga 7620
gatcctgccc cggcacttcg cccaatagca gccagtccct tcccgcttca gtgacaacgt 7680
cgagcacagc tgcgcaagga acgcccgtcg tggccagcca cgatagccgc gctgcctcgt 7740
cctgcagttc attcagggca ccggacaggt cggtcttgac aaaaagaacc gggcgcccct 7800
gcgctgacag ccggaacacg gcggcatcag agcagccgat tgtctgttgt gcccagtcat 7860
agccgaatag cctctccacc caagcggccg gagaacctgc gtgcaatcca tcttgttcaa 7920
tcatcccggg atctgcgaaa gctcgagaga gatagatttg tagagagaga ctggtgattt 7980
cagcgtgtcc tctccaaatg aaatgaactt ccttatatag aggaaggtct tgcgaaggat 8040
agtgggattg tgcgtcatcc cttacgtcag tggagatatc acatcaatcc acttgctttg 8100
aagacgtggt tggaacgtct tctttttcca cgatgctcct cgtgggtggg ggtccatctt 8160
tgggaccact gtcggcagag gcatcttgaa cgatagcctt tcctttatcg caatgatggc 8220
atttgtaggt gccaccttcc ttttctactg tccttttgat gaagtgacag atagctgggc 8280
aatggaatcc gaggaggttt cccgatatta ccctttgttg aaaagtctca atagcccttt 8340
ggtcttctga gactgtatct ttgatattct tggagtagac gagagtgtcg tgctccacca 8400
tgttatcaca tcaatccact tgctttgaag acgtggttgg aacgtcttct ttttccacga 8460
tgctcctcgt gggtgggggt ccatctttgg gaccactgtc ggcagaggca tcttgaacga 8520
tagcctttcc tttatcgcaa tgatggcatt tgtaggtgcc accttccttt tctactgtcc 8580
ttttgatgaa gtgacagata gctgggcaat ggaatccgag gaggtttccc gatattaccc 8640
tttgttgaaa agtctcaata gccctttggt cttctgagac tgtatctttg atattcttgg 8700
agtagacgag agtgtcgtgc tccaccatgt tggcaagctg ctctagccaa tacgcaaacc 8760
gcctctcccc gcgcgttggc cgattcatta atgcagctgg cacgacaggt ttcccgactg 8820
gaaagcgggc agtgagcgca acgcaattaa tgtgagttag ctcactcatt aggcacccca 8880
ggctttacac tttatgcttc cggctcgtat gttgtgtgga attgtgagcg gataacaatt 8940
tcacacagga aacagctatg accatgatta cgccaagctt ttaatctgat gctccacctg 9000
cttttgattt tctttattgg aagagtcttt aagagatatg ttaagtagca taacagtttc 9060
atcaaaaaca acatttctgt taatcacaac ttttctattt tcaggatacc ataacttata 9120
cacttttaca ctagctttat aaccaagaaa aacacattta atggtacaca attttaattt 9180
tccattatca gcatgagtat acgcaaaaca cccaaaaatc tttaaatcag aatcgtcagc 9240
aggattacta aaccatactt cttatggagt ctttttctca atagcaacga atagagacgg 9300
attgatcaaa aacatatagt tgacattgct ttggcccaaa ataactttga taagttgcca 9360
tttgacaaca tacatcgaac attctccatg atcgttctat tcattcgttc tacaatacct 9420
tttttaaaat gttcaggttc taaaatgaaa aacaatatga attgcatgaa ttgcttatat 9480
gtcctatgaa ttataaagga atgcggttga aatattccca tcgatacata catacatatt 9540
cgtgaagtat gttccaatat aatatcaata ttgggattta cgttttataa agcaacatta 9600
ttgattggta atatacatta attccaaggc aaacccaaat attttaaaat ttaacctaca 9660
actgtggtaa atcaaactta atagtaaccc gattgtaatg tgaagtcaaa tatgaaagta 9720
acattggttt atatatatat ttttctctaa attctaataa tcaagttggg ataagtgata 9780
aacactgagc ttgccacgtg tgttaacctc gttttcatca tgtgccactc caaagacatc 9840
aggcctctat tcaagctggc atggtcagga cgtggtagca tacttcaggg atctggttag 9900
aaaatatccc atatcgctaa agaactataa cacaggagcg tttatataag cgaaagaagc 9960
atcagatggg caggagaccg aggtctcggt tttagagcta gaaatagcaa gttaaaataa 10020
ggctagtccg ttatcaactt gaaaaagtgg caccgagtcg gtgctttttt gttttagagc 10080
tagaaatagc aagttaaaat aaggctagtc cgtttttagc gcgtgcatgc ctgcaggtcc 10140
acaaattcgg gtcaaggcgg aagccagcgc gccaccccac gtcagcaaat acggaggcgc 10200
ggggttgacg gcgtcacccg gtcctaacgg cgaccaacaa accagccaga agaaattaca 10260
gtaaaaaaaa agtaaattgc actttgatcc accttttatt acctaagtct caatttggat 10320
cacccttaaa cctatctttt caatttgggc cgggttgtgg tttggactac catgaacaac 10380
ttttcgtcat gtctaacttc cctttcagca aacatatgaa ccatatatag aggagatcgg 10440
ccgtatacta gagctgatgt gtttaaggtc gttgattgca cgagaaaaaa aaatccaaat 10500
cgcaacaata gcaaatttat ctggttcaaa gtgaaaagat atgtttaaag gtagtccaaa 10560
gtaaaactta tagataataa aatgtggtcc aaagcgtaat tcactcaaaa aaaatcaacg 10620
agacgtgtac caaacggaga caaacggcat cttctcgaaa tttcccaacc gctcgctcgc 10680
ccgcctcgtc ttcccggaaa ccgcggtggt ttcagcgtgg cggattctcc aagcagacgg 10740
agacgtcacg gcacgggact cctcccacca cccaaccgcc ataaatacca gccccctcat 10800
ctcctctcct cgcatcagct ccacccccga aaaatttctc cccaatctcg cgaggctctc 10860
gtcgtcgaat cgaatcctct cgcgtcctca aggtacgctg cttctcctct cctcgcttcg 10920
tttcgattcg atttcggacg ggtgaggttg ttttgttgct agatccgatt ggtggttagg 10980
gttgtcgatg tgattatcgt gagatgttta ggggttgtag atctgatggt tgtgatttgg 11040
gcacggttgg ttcgataggt ggaatcgtgg ttaggttttg ggattggatg ttggttctga 11100
tgattggggg gaatttttac ggttagatga attgttggat gattcgattg gggaaatcgg 11160
tgtagatctg ttggggaatt gtggaactag tcatgcctga gtgattggtg cgatttgtag 11220
cgtgttccat cttgtaggcc ttgttgcgag catgttcaga tctactgttc cgctcttgat 11280
tgagttattg gtgccatggg ttggtgcaaa cacaggcttt aatatgttat atctgttttg 11340
tgtttgatgt agatctgtag ggtagttctt cttagacatg gttcaattat gtagcttgtg 11400
cgtttcgatt tgatttcata tgttcacaga ttagataatg atgaactctt ttaattaatt 11460
gtcaatggta aataggaagt cttgtcgcta tatctgtcat aatgatctca tgttactatc 11520
tgccagtaat ttatgctaag aactatatta gaatatcatg ttacaatctg tagtaatatc 11580
atgttacaat ctgtagttca tctatataat ctattgtggt aatttctttt tactatctgt 11640
gtgaagatta ttgccactag ttcattctac ttatttctga agttcaggat acgtgtgctg 11700
ttactaccta tctgaataca tgtgtgatgt gcctgttact atctttttga atacatgtat 11760
gttctgttgg aatatgtttg ctgtttgatc cgttgttgtg tccttaatct tgtgctagtt 11820
cttaccctat ctgtttggtg attatttctt gcagatagtt atcaacaagt ttgtacaaaa 11880
aagcaggctt cgatgccaaa gaagaagagg aaggtttcat cggagaccgg ccctgttgct 11940
gttgacccca ccctgcggcg gagaatcgag ccacacgagt tcgaggtgtt cttcgaccca 12000
agggagctcc gcaaggagac gtgcctcctg tacgagatca actggggcgg caggcactcc 12060
atctggaggc acaccagcca aaacaccaac aagcacgtgg aggtcaactt catcgagaag 12120
ttcaccaccg agaggtactt ctgcccaaac acccgctgct ccatcacctg gttcctgtcc 12180
tggagcccat gcggcgagtg ctccagggcc atcaccgagt tcctcagccg ctacccacac 12240
gtcaccctgt tcatctacat cgccaggctc taccaccacg ccgacccaag gaacaggcag 12300
ggcctccgcg acctgatctc cagcggcgtg accatccaaa tcatgaccga gcaggagtcc 12360
ggctactgct ggaggaactt cgtcaactac tccccaagca acgaggccca ctggccaagg 12420
tacccacacc tctgggtgcg cctctacgtg ctcgagctgt actgcatcat cctcggcctg 12480
ccaccatgcc tcaacatcct gaggcgcaag caaccacagc tgaccttctt caccatcgcc 12540
ctccaaagct gccactacca gaggctccca ccacacatcc tgtgggctac cggcctcaag 12600
tccggcagcg agacgccagg cacctccgag agcgctacgc ctgaacttaa ggacaagaag 12660
tactcgatcg gcctcgccat cgggacgaac tcagttggct gggccgtgat caccgacgag 12720
tacaaggtgc cctctaagaa gttcaaggtc ctggggaaca ccgaccgcca ttccatcaag 12780
aagaacctca tcggcgctct cctgttcgac agcggggaga ccgctgaggc tacgaggctc 12840
aagagaaccg ctaggcgccg gtacacgaga aggaagaaca ggatctgcta cctccaagag 12900
attttctcca acgagatggc caaggttgac gattcattct tccaccgcct ggaggagtct 12960
ttcctcgtgg aggaggataa gaagcacgag cggcatccca tcttcggcaa catcgtggac 13020
gaggttgcct accacgagaa gtaccctacg atctaccatc tgcggaagaa gctcgtggac 13080
tccaccgata aggcggacct cagactgatc tacctcgctc tggcccacat gatcaagttc 13140
cgcggccatt tcctgatcga gggggatctc aacccagaca acagcgatgt tgacaagctg 13200
ttcatccaac tcgtgcagac ctacaaccaa ctcttcgagg agaacccgat caacgcctct 13260
ggcgtggacg cgaaggctat cctgtccgcg aggctctcga agtccaggag gctggagaac 13320
ctgatcgctc agctcccagg cgagaagaag aacggcctgt tcgggaacct catcgctctc 13380
agcctggggc tcaccccgaa cttcaagtcg aacttcgatc tcgctgagga cgccaagctg 13440
caactctcca aggacaccta cgacgatgac ctcgataacc tcctggccca gatcggcgat 13500
caatacgcgg acctgttcct cgctgccaag aacctgtcgg acgccatcct cctgtcagat 13560
atcctccgcg tgaacaccga gatcacgaag gctccactct ctgcctccat gatcaagcgc 13620
tacgacgagc accatcagga tctgaccctc ctgaaggcgc tggtccgcca acagctcccg 13680
gagaagtaca aggagatttt cttcgatcag tcgaagaacg gctacgctgg gtacatcgac 13740
ggcggggcct cacaagagga gttctacaag ttcatcaagc caatcctgga gaagatggac 13800
ggcacggagg agctcctggt gaagctcaac agggaggacc tcctgcggaa gcagagaacc 13860
ttcgataacg gcagcatccc ccaccaaatc catctcgggg agctgcacgc catcctgaga 13920
aggcaagagg acttctaccc tttcctcaag gataaccggg agaagatcga gaagatcctg 13980
accttcagaa tcccatacta cgtcggccct ctcgcgcggg ggaactcaag attcgcttgg 14040
atgacccgca agtctgagga gaccatcacg ccgtggaact tcgaggaggt ggtggacaag 14100
ggcgctagcg ctcagtcgtt catcgagagg atgaccaact tcgacaagaa cctgcccaac 14160
gagaaggtgc tccctaagca ctcgctcctg tacgagtact tcaccgtcta caacgagctc 14220
acgaaggtga agtacgtcac cgagggcatg cgcaagccag cgttcctgtc cggggagcag 14280
aagaaggcta tcgtggacct cctgttcaag accaaccgga aggtcacggt taagcaactc 14340
aaggaggact acttcaagaa gatcgagtgc ttcgattcgg tcgagatcag cggcgttgag 14400
gaccgcttca acgccagcct cgggacctac cacgatctcc tgaagatcat caaggataag 14460
gacttcctgg acaacgagga gaacgaggat atcctggagg acatcgtgct gaccctcacg 14520
ctgttcgagg acagggagat gatcgaggag cgcctgaaga cgtacgccca tctcttcgat 14580
gacaaggtca tgaagcaact caagcgccgg agatacaccg gctgggggag gctgtcccgc 14640
aagctcatca acggcatccg ggacaagcag tccgggaaga ccatcctcga cttcctcaag 14700
agcgatggct tcgccaacag gaacttcatg caactgatcc acgatgacag cctcaccttc 14760
aaggaggata tccaaaaggc tcaagtgagc ggccaggggg actcgctgca cgagcatatc 14820
gcgaacctcg ctggctcccc cgcgatcaag aagggcatcc tccagaccgt gaaggttgtg 14880
gacgagctcg tgaaggtcat gggccggcac aagcctgaga acatcgtcat cgagatggcc 14940
agagagaacc aaaccacgca gaaggggcaa aagaactcta gggagcgcat gaagcgcatc 15000
gaggagggca tcaaggagct ggggtcccaa atcctcaagg agcacccagt ggagaacacc 15060
caactgcaga acgagaagct ctacctgtac tacctccaga acggcaggga tatgtacgtg 15120
gaccaagagc tggatatcaa ccgcctcagc gattacgacg tcgatcatat cgttccccag 15180
tctttcctga aggatgactc catcgacaac aaggtcctca ccaggtcgga caagaaccgc 15240
ggcaagtcag ataacgttcc atctgaggag gtcgttaaga agatgaagaa ctactggagg 15300
cagctcctga acgccaagct gatcacgcaa aggaagttcg acaacctcac caaggctgag 15360
agaggcgggc tctcagagct ggacaaggcc ggcttcatca agcggcagct ggtcgagacc 15420
agacaaatca cgaagcacgt tgcgcaaatc ctcgactctc ggatgaacac gaagtacgat 15480
gagaacgaca agctgatcag ggaggttaag gtgatcaccc tgaagtctaa gctcgtctcc 15540
gacttcagga aggatttcca gttctacaag gttcgcgaga tcaacaacta ccaccatgcc 15600
catgacgctt acctcaacgc tgtggtcggc accgctctga tcaagaagta cccaaagctg 15660
gagtccgagt tcgtgtacgg ggactacaag gtttacgatg tgcgcaagat gatcgccaag 15720
tcggagcaag agatcggcaa ggctaccgcc aagtacttct tctactcaaa catcatgaac 15780
ttcttcaaga ccgagatcac gctggccaac ggcgagatcc ggaagagacc gctcatcgag 15840
accaacggcg agacggggga gatcgtgtgg gacaagggca gggatttcgc gaccgtccgc 15900
aaggttctct ccatgcccca ggtgaacatc gtcaagaaga ccgaggtcca aacgggcggg 15960
ttctcaaagg agtctatcct gcctaagcgg aacagcgaca agctcatcgc cagaaagaag 16020
gactgggacc caaagaagta cggcgggttc gacagcccta ccgtggccta ctcggtcctg 16080
gttgtggcga aggttgagaa gggcaagtcc aagaagctca agagcgtgaa ggagctcctg 16140
gggatcacca tcatggagag gtccagcttc gagaagaacc caatcgactt cctggaggcc 16200
aagggctaca aggaggtgaa gaaggacctg atcatcaagc tcccgaagta ctctctcttc 16260
gagctggaga acggcaggaa gagaatgctg gcttccgctg gcgagctcca gaaggggaac 16320
gagctcgcgc tgccaagcaa gtacgtgaac ttcctctacc tggcttccca ctacgagaag 16380
ctcaagggca gcccggagga caacgagcaa aagcagctgt tcgtcgagca gcacaagcat 16440
tacctcgacg agatcatcga gcaaatctcc gagttcagca agcgcgtgat cctcgccgac 16500
gcgaacctgg ataaggtcct ctccgcctac aacaagcacc gggacaagcc catcagagag 16560
caagcggaga acatcatcca tctcttcacc ctgacgaacc tcggcgctcc tgctgctttc 16620
aagtacttcg acaccacgat cgatcggaag agatacacct ccacgaagga ggtcctggac 16680
gcgaccctca tccaccagtc gatcaccggc ctgtacgaga cgaggatcga cctctcacaa 16740
ctcggcgggg ataagagacc cgcagcaacc aagaaggcag ggcaagcaaa gaagaagaag 16800
acgcgtgact ccggcggcag caccaacctg tccgacatca tcgagaagga gacgggcaag 16860
caactcgtga tccaggagag catcctcatg ctgccagagg aggtggagga ggtcatcggc 16920
aacaagccag agtccgacat cctggtgcac accgcctacg acgagtccac cgacgagaac 16980
gtcatgctcc tgaccagcga cgccccagag tacaagccat gggccctcgt catccaggac 17040
agcaacgggg agaacaagat caagatgctg tcggggggga gcccaaagaa gaagcggaag 17100
gtgtagtggc tcagagcttt cgttcgtatc atcggtctag acccagcttt 17150
<210> 4
<211> 5214
<212> DNA
<213> 棉花(Gossypium hirsutum)
<220>
<221> gene
<222> (1)..(5214)
<400> 4
atgccaaaga agaagaggaa ggtttcatcg gagaccggcc ctgttgctgt tgaccccacc 60
ctgcggcgga gaatcgagcc acacgagttc gaggtgttct tcgacccaag ggagctccgc 120
aaggagacgt gcctcctgta cgagatcaac tggggcggca ggcactccat ctggaggcac 180
accagccaaa acaccaacaa gcacgtggag gtcaacttca tcgagaagtt caccaccgag 240
aggtacttct gcccaaacac ccgctgctcc atcacctggt tcctgtcctg gagcccatgc 300
ggcgagtgct ccagggccat caccgagttc ctcagccgct acccacacgt caccctgttc 360
atctacatcg ccaggctcta ccaccacgcc gacccaagga acaggcaggg cctccgcgac 420
ctgatctcca gcggcgtgac catccaaatc atgaccgagc aggagtccgg ctactgctgg 480
aggaacttcg tcaactactc cccaagcaac gaggcccact ggccaaggta cccacacctc 540
tgggtgcgcc tctacgtgct cgagctgtac tgcatcatcc tcggcctgcc accatgcctc 600
aacatcctga ggcgcaagca accacagctg accttcttca ccatcgccct ccaaagctgc 660
cactaccaga ggctcccacc acacatcctg tgggctaccg gcctcaagtc cggcagcgag 720
acgccaggca cctccgagag cgctacgcct gaacttaagg acaagaagta ctcgatcggc 780
ctcgccatcg ggacgaactc agttggctgg gccgtgatca ccgacgagta caaggtgccc 840
tctaagaagt tcaaggtcct ggggaacacc gaccgccatt ccatcaagaa gaacctcatc 900
ggcgctctcc tgttcgacag cggggagacc gctgaggcta cgaggctcaa gagaaccgct 960
aggcgccggt acacgagaag gaagaacagg atctgctacc tccaagagat tttctccaac 1020
gagatggcca aggttgacga ttcattcttc caccgcctgg aggagtcttt cctcgtggag 1080
gaggataaga agcacgagcg gcatcccatc ttcggcaaca tcgtggacga ggttgcctac 1140
cacgagaagt accctacgat ctaccatctg cggaagaagc tcgtggactc caccgataag 1200
gcggacctca gactgatcta cctcgctctg gcccacatga tcaagttccg cggccatttc 1260
ctgatcgagg gggatctcaa cccagacaac agcgatgttg acaagctgtt catccaactc 1320
gtgcagacct acaaccaact cttcgaggag aacccgatca acgcctctgg cgtggacgcg 1380
aaggctatcc tgtccgcgag gctctcgaag tccaggaggc tggagaacct gatcgctcag 1440
ctcccaggcg agaagaagaa cggcctgttc gggaacctca tcgctctcag cctggggctc 1500
accccgaact tcaagtcgaa cttcgatctc gctgaggacg ccaagctgca actctccaag 1560
gacacctacg acgatgacct cgataacctc ctggcccaga tcggcgatca atacgcggac 1620
ctgttcctcg ctgccaagaa cctgtcggac gccatcctcc tgtcagatat cctccgcgtg 1680
aacaccgaga tcacgaaggc tccactctct gcctccatga tcaagcgcta cgacgagcac 1740
catcaggatc tgaccctcct gaaggcgctg gtccgccaac agctcccgga gaagtacaag 1800
gagattttct tcgatcagtc gaagaacggc tacgctgggt acatcgacgg cggggcctca 1860
caagaggagt tctacaagtt catcaagcca atcctggaga agatggacgg cacggaggag 1920
ctcctggtga agctcaacag ggaggacctc ctgcggaagc agagaacctt cgataacggc 1980
agcatccccc accaaatcca tctcggggag ctgcacgcca tcctgagaag gcaagaggac 2040
ttctaccctt tcctcaagga taaccgggag aagatcgaga agatcctgac cttcagaatc 2100
ccatactacg tcggccctct cgcgcggggg aactcaagat tcgcttggat gacccgcaag 2160
tctgaggaga ccatcacgcc gtggaacttc gaggaggtgg tggacaaggg cgctagcgct 2220
cagtcgttca tcgagaggat gaccaacttc gacaagaacc tgcccaacga gaaggtgctc 2280
cctaagcact cgctcctgta cgagtacttc accgtctaca acgagctcac gaaggtgaag 2340
tacgtcaccg agggcatgcg caagccagcg ttcctgtccg gggagcagaa gaaggctatc 2400
gtggacctcc tgttcaagac caaccggaag gtcacggtta agcaactcaa ggaggactac 2460
ttcaagaaga tcgagtgctt cgattcggtc gagatcagcg gcgttgagga ccgcttcaac 2520
gccagcctcg ggacctacca cgatctcctg aagatcatca aggataagga cttcctggac 2580
aacgaggaga acgaggatat cctggaggac atcgtgctga ccctcacgct gttcgaggac 2640
agggagatga tcgaggagcg cctgaagacg tacgcccatc tcttcgatga caaggtcatg 2700
aagcaactca agcgccggag atacaccggc tgggggaggc tgtcccgcaa gctcatcaac 2760
ggcatccggg acaagcagtc cgggaagacc atcctcgact tcctcaagag cgatggcttc 2820
gccaacagga acttcatgca actgatccac gatgacagcc tcaccttcaa ggaggatatc 2880
caaaaggctc aagtgagcgg ccagggggac tcgctgcacg agcatatcgc gaacctcgct 2940
ggctcccccg cgatcaagaa gggcatcctc cagaccgtga aggttgtgga cgagctcgtg 3000
aaggtcatgg gccggcacaa gcctgagaac atcgtcatcg agatggccag agagaaccaa 3060
accacgcaga aggggcaaaa gaactctagg gagcgcatga agcgcatcga ggagggcatc 3120
aaggagctgg ggtcccaaat cctcaaggag cacccagtgg agaacaccca actgcagaac 3180
gagaagctct acctgtacta cctccagaac ggcagggata tgtacgtgga ccaagagctg 3240
gatatcaacc gcctcagcga ttacgacgtc gatcatatcg ttccccagtc tttcctgaag 3300
gatgactcca tcgacaacaa ggtcctcacc aggtcggaca agaaccgcgg caagtcagat 3360
aacgttccat ctgaggaggt cgttaagaag atgaagaact actggaggca gctcctgaac 3420
gccaagctga tcacgcaaag gaagttcgac aacctcacca aggctgagag aggcgggctc 3480
tcagagctgg acaaggccgg cttcatcaag cggcagctgg tcgagaccag acaaatcacg 3540
aagcacgttg cgcaaatcct cgactctcgg atgaacacga agtacgatga gaacgacaag 3600
ctgatcaggg aggttaaggt gatcaccctg aagtctaagc tcgtctccga cttcaggaag 3660
gatttccagt tctacaaggt tcgcgagatc aacaactacc accatgccca tgacgcttac 3720
ctcaacgctg tggtcggcac cgctctgatc aagaagtacc caaagctgga gtccgagttc 3780
gtgtacgggg actacaaggt ttacgatgtg cgcaagatga tcgccaagtc ggagcaagag 3840
atcggcaagg ctaccgccaa gtacttcttc tactcaaaca tcatgaactt cttcaagacc 3900
gagatcacgc tggccaacgg cgagatccgg aagagaccgc tcatcgagac caacggcgag 3960
acgggggaga tcgtgtggga caagggcagg gatttcgcga ccgtccgcaa ggttctctcc 4020
atgccccagg tgaacatcgt caagaagacc gaggtccaaa cgggcgggtt ctcaaaggag 4080
tctatcctgc ctaagcggaa cagcgacaag ctcatcgcca gaaagaagga ctgggaccca 4140
aagaagtacg gcgggttcga cagccctacc gtggcctact cggtcctggt tgtggcgaag 4200
gttgagaagg gcaagtccaa gaagctcaag agcgtgaagg agctcctggg gatcaccatc 4260
atggagaggt ccagcttcga gaagaaccca atcgacttcc tggaggccaa gggctacaag 4320
gaggtgaaga aggacctgat catcaagctc ccgaagtact ctctcttcga gctggagaac 4380
ggcaggaaga gaatgctggc ttccgctggc gagctccaga aggggaacga gctcgcgctg 4440
ccaagcaagt acgtgaactt cctctacctg gcttcccact acgagaagct caagggcagc 4500
ccggaggaca acgagcaaaa gcagctgttc gtcgagcagc acaagcatta cctcgacgag 4560
atcatcgagc aaatctccga gttcagcaag cgcgtgatcc tcgccgacgc gaacctggat 4620
aaggtcctct ccgcctacaa caagcaccgg gacaagccca tcagagagca agcggagaac 4680
atcatccatc tcttcaccct gacgaacctc ggcgctcctg ctgctttcaa gtacttcgac 4740
accacgatcg atcggaagag atacacctcc acgaaggagg tcctggacgc gaccctcatc 4800
caccagtcga tcaccggcct gtacgagacg aggatcgacc tctcacaact cggcggggat 4860
aagagacccg cagcaaccaa gaaggcaggg caagcaaaga agaagaagac gcgtgactcc 4920
ggcggcagca ccaacctgtc cgacatcatc gagaaggaga cgggcaagca actcgtgatc 4980
caggagagca tcctcatgct gccagaggag gtggaggagg tcatcggcaa caagccagag 5040
tccgacatcc tggtgcacac cgcctacgac gagtccaccg acgagaacgt catgctcctg 5100
accagcgacg ccccagagta caagccatgg gccctcgtca tccaggacag caacggggag 5160
aacaagatca agatgctgtc gggggggagc ccaaagaaga agcggaaggt gtag 5214

Claims (3)

1.一种能够精准编辑单个碱基的陆地棉基因组高效转化载体GhBE3，其特征在于，该载体的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示。
2.一种能够精准编辑单个碱基的陆地棉基因组高效转化载体GhBE3，其特征在于，该载体通过下列步骤制备获得：
(1)获得目的序列APOBEC1-XTEN-nCas9-UGI，其核苷酸序列如序列表SEQ ID NO：4所示，具体地，该目的序列通过以下步骤制备获得：
1)在如序列表SEQ ID NO：2所示的pH-nCas9-PBE载体上设计引物，正向引物为：
AAAAAGCAGGCTTCGATGCCAAAGAAGAAGAGGAAG；反向引物为：GAAAGCTGGGTCTAGACCGATGATACGAACGAAAG；
2)以pH-nCas9-PBE载体为模板，进行PCR扩增，获得APOBEC1-XTEN-nCas9-UGI目的序列，其核苷酸序列如SEQ ID NO：4所示；
(2)利用BstbⅠ、XbaⅠ对SEQ ID NO：1所示的pRGEB32-GhU6.7-NPTⅡ载体进行酶切，与APOBEC1-XTEN-nCas9-UGI目的序列进行连接，通过测序验证，得到如SEQ ID NO：3所示的适用于陆地棉的单碱基编辑的高效转化载体GhBE3。
3.权利要求1或2所述的载体GhBE3在陆地棉基因组编辑中的应用。
CN201811577717.7A 2018-12-20 2018-12-20 陆地棉基因组的精准高效编辑方法 Active CN109593781B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201811577717.7A CN109593781B (zh) 2018-12-20 2018-12-20 陆地棉基因组的精准高效编辑方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201811577717.7A CN109593781B (zh) 2018-12-20 2018-12-20 陆地棉基因组的精准高效编辑方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN109593781A true CN109593781A (zh) 2019-04-09
CN109593781B CN109593781B (zh) 2021-02-23

Family

ID=65963258

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201811577717.7A Active CN109593781B (zh) 2018-12-20 2018-12-20 陆地棉基因组的精准高效编辑方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN109593781B (zh)

Cited By (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110283840A (zh) * 2019-04-11 2019-09-27 华中农业大学 陆地棉基因组的精确高效编辑方法
CN110423772A (zh) * 2019-07-17 2019-11-08 上海科技大学 一种用于鲍曼不动杆菌胞嘧啶碱基编辑质粒及其应用
CN110484561A (zh) * 2019-09-03 2019-11-22 山东棉花研究中心 一种应用基因编辑技术获得高油酸棉花的方法
CN111378684A (zh) * 2020-03-15 2020-07-07 华中农业大学 一种热诱导的基因编辑系统CRISPR-Cas12b在陆地棉中的应用
CN113215161A (zh) * 2021-06-01 2021-08-06 华中农业大学 利用单碱基编辑技术创造除草剂抗性植物的方法
CN113278647A (zh) * 2021-05-25 2021-08-20 华中农业大学 一种陆地棉基因组的高效定向基因调控的编辑方法
CN113337539A (zh) * 2021-05-27 2021-09-03 华中农业大学 一种适用于陆地棉的基因精准高效编辑的方法
CN113832180A (zh) * 2021-08-03 2021-12-24 华中农业大学 CRISPR/Cas13b介导的棉花RNA转录调控方法
CN113913440A (zh) * 2021-06-23 2022-01-11 甘肃农业大学 GhD1119基因调控陆地棉开花方面的应用

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107043779A (zh) * 2016-12-01 2017-08-15 中国农业科学院作物科学研究所 一种CRISPR/nCas9介导的定点碱基替换在植物中的应用
WO2017215619A1 (zh) * 2016-06-15 2017-12-21 中国科学院上海生命科学研究院 在细胞内产生点突变的融合蛋白、其制备及用途
CN107619833A (zh) * 2017-08-14 2018-01-23 华中农业大学 用于构建布鲁氏菌突变株的质粒pZF17‑30及其构建方法和应用
CN108203714A (zh) * 2016-12-20 2018-06-26 华中农业大学 一种棉花基因的编辑方法
CN108795972A (zh) * 2017-05-05 2018-11-13 中国科学院遗传与发育生物学研究所 不使用转基因标记序列分离细胞的方法

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2017215619A1 (zh) * 2016-06-15 2017-12-21 中国科学院上海生命科学研究院 在细胞内产生点突变的融合蛋白、其制备及用途
CN107043779A (zh) * 2016-12-01 2017-08-15 中国农业科学院作物科学研究所 一种CRISPR/nCas9介导的定点碱基替换在植物中的应用
CN108203714A (zh) * 2016-12-20 2018-06-26 华中农业大学 一种棉花基因的编辑方法
CN108795972A (zh) * 2017-05-05 2018-11-13 中国科学院遗传与发育生物学研究所 不使用转基因标记序列分离细胞的方法
CN107619833A (zh) * 2017-08-14 2018-01-23 华中农业大学 用于构建布鲁氏菌突变株的质粒pZF17‑30及其构建方法和应用

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
LEI QIN等: "High-efficient and precise base editing of C•G to T•A in the", 《PLANT BIOTECHNOLOGY JOURNAL》 *
YUAN ZONG等: "Precise base editing in rice, wheat and maize with a Cas9-cytidine deaminase fusion", 《NATURE BIOTECHNOLOGY》 *

Cited By (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110283840A (zh) * 2019-04-11 2019-09-27 华中农业大学 陆地棉基因组的精确高效编辑方法
CN110423772A (zh) * 2019-07-17 2019-11-08 上海科技大学 一种用于鲍曼不动杆菌胞嘧啶碱基编辑质粒及其应用
CN110423772B (zh) * 2019-07-17 2023-04-21 上海科技大学 一种用于鲍曼不动杆菌胞嘧啶碱基编辑质粒及其应用
CN110484561A (zh) * 2019-09-03 2019-11-22 山东棉花研究中心 一种应用基因编辑技术获得高油酸棉花的方法
CN110484561B (zh) * 2019-09-03 2022-08-09 山东棉花研究中心 一种应用基因编辑技术获得高油酸棉花的方法
CN111378684A (zh) * 2020-03-15 2020-07-07 华中农业大学 一种热诱导的基因编辑系统CRISPR-Cas12b在陆地棉中的应用
CN113278647A (zh) * 2021-05-25 2021-08-20 华中农业大学 一种陆地棉基因组的高效定向基因调控的编辑方法
CN113337539A (zh) * 2021-05-27 2021-09-03 华中农业大学 一种适用于陆地棉的基因精准高效编辑的方法
CN113215161A (zh) * 2021-06-01 2021-08-06 华中农业大学 利用单碱基编辑技术创造除草剂抗性植物的方法
CN113913440A (zh) * 2021-06-23 2022-01-11 甘肃农业大学 GhD1119基因调控陆地棉开花方面的应用
CN113913440B (zh) * 2021-06-23 2024-02-13 甘肃农业大学 GhD1119基因调控陆地棉开花方面的应用
CN113832180A (zh) * 2021-08-03 2021-12-24 华中农业大学 CRISPR/Cas13b介导的棉花RNA转录调控方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN109593781B (zh) 2021-02-23

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN109593781B (zh) 陆地棉基因组的精准高效编辑方法
CN108203714B (zh) 一种棉花基因的编辑方法
CN110283840B (zh) 陆地棉基因组的精确高效编辑方法
CN109468339B (zh) 用于增强植物中组成型基因表达的调节性核酸分子
CN110551752B (zh) xCas9n-epBE碱基编辑系统及其在基因组碱基替换中的应用
CN110656114B (zh) 一种烟草色素合成相关的基因及其应用
CN113801891B (zh) 甜菜BvCENH3基因单倍体诱导系的构建方法与应用
CN110760538B (zh) 一种创制枯萎病抗性西瓜种质材料的方法
CN114214336B (zh) 黑果枸杞LrNOR基因及其蛋白的应用
CN107828816A (zh) 一种酵母‑农杆菌穿梭载体及构建方法和应用
CN109321576A (zh) 一种无腺体低棉酚棉花种质的创制方法
Ng et al. Heterologous expression of the Streptococcus pneumoniae yoeB and pezT toxin genes is lethal in Chlorella vulgaris
KR102160203B1 (ko) 데이노잔틴 고생산능을 갖는 변이 균주의 제조방법 및 온도제어를 이용한 데이노잔틴 대량생산 방법
CN114836446B (zh) 一种抗草甘膦的植物及其制法
CN114107368B (zh) 表达反式菊酸的联合表达载体及其在调控番茄vi型腺体腺毛合成反式菊酸中的应用
KR20210137055A (ko) 네이티브 miRNA의 게놈 편집을 통한 표적 유전자 발현의 억제
CN111088267B (zh) 一种提高产溶剂梭菌液体发酵细胞密度的方法
CN109232726B (zh) 蛋白质OsVPE2在调控植物液泡无机磷输出能力中的应用
CN109485707B (zh) 蛋白质OsVPE1在调控植物液泡无机磷输出能力中的应用
CN111378684A (zh) 一种热诱导的基因编辑系统CRISPR-Cas12b在陆地棉中的应用
CN109337925B (zh) 一种以黄花蒿悬浮细胞系为受体的转AaADS基因提高黄花蒿中青蒿素含量的方法
CN114591996B (zh) 一种凝结芽孢杆菌h-1的表达载体及其构建方法与应用
CN114703187B (zh) 一种水曲柳U6基因启动子proFmU6.7及其克隆与应用
KR20220114958A (ko) 형질전환 식물체에서 차세대 염기서열 분석을 위한 프로브 세트의 제조 방법
CN114703189B (zh) 一种水曲柳U6基因启动子proFmU6.3及其克隆与应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant