CN114836446B - 一种抗草甘膦的植物及其制法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种抗草甘膦的植物及其制法，具体地，本发明提供了一种改良植物的方法，所述的方法包括步骤：(a)提供一含有n个拷贝EPSPS基因的植物细胞，利用基因工程改造所述植物细胞，从而使所述植物细胞中的部分而非全部的EPSPS基因所对应的EPSPS酶保守区(SEQ ID NO.1)中的苏氨酸(T)和/或脯氨酸(P)发生突变，其中，n为≥4的偶数；和(b)将步骤(a)中的植物细胞再生成植株；(c)任选的，将步骤(b)获得的植株进行授精(自花授粉)，从而获得纯合型植株。本发明的方法所获得的植物既具有高抗除草剂(比如草甘膦)的特性，又具有可稳定遗传。

Description

一种抗草甘膦的植物及其制法
技术领域
本发明涉及生物技术领域，具体地，涉及一种抗草甘膦的植物及其制法。
背景技术
田间杂草生长过盛会影响作物的生长，导致作物减产，因此，除草是保证农作物产量的必要手段，开发抗除草剂作物对规模化集约化种植生产非常重要，已成为遗传育种的一个重要方向。草甘膦是一种低毒、高效、广谱、低残留的除草剂，在除草剂市场占有主导地位。其作用机理主要是竞争性抑制莽草酸途径中5-烯醇丙酮酰莽草酸-3磷酸合成酶(EPSPS)的活性，导致芳香族氨基酸合成受阻，最终造成植物的死亡。
EPSPS酶的基序在所有植物和大多数细菌中的酶都是保守的，这个基序对于结合磷酸烯醇丙酮酸(PEP)或其竞争性抑制剂草甘膦至关重要。
草甘膦已在全球范围内应用了近半个世纪，世界范围内的科学家在近20年对EPSPS蛋白进行了大量、广泛的研究和分子进化，也有一些报道显示EPSPS进化后对草甘膦产生了部分耐受效果，但到目前为止都未有任何商业化，说明这些位点的进化尚不能满足实际生产应用的要求。
有报道指出，目前有部分杂草已有明显的草甘膦抗性，尤其是其中的一个来着鹅草的天然突变，称之为TIPS突变(T102I/P106S)，使其对草甘膦产生了显著的抗性。然而在目前为止的报道中，还没有发现栽培作物中有自发诱导的TIPS双突变，这可能是因为自然发生两个核苷酸的概率很低。
目前报道了利用基因编辑对水稻的EPSPS基因进行了精准编辑，获得了含有TIPS突变的水稻，其编辑后的水稻具有显著抗草甘膦抗性，与上述天然突变体一致。但是进一步的研究发现，TIPS是一个致死突变，无法获得能稳定遗传的纯合子。这一致命缺陷使该TIPS位点仍旧无法应用于实际生产。
寻找优良的抗除草剂基因一种是农业育种界的重要目标，但仅靠植物自身的基因突变是及其漫长且随机的。
常规的育种手段几乎无法获得具有特异性突变的突变体，常规转基因技术导入外源基因，产生的生物安全隐患也令人困扰。
并且，目前EPSPS基因的TIPS突变虽然可以使作物获得高抗草甘膦的特性，但也会使植株纯合致死。
因此，本领域迫切需要开发一种可以导入自然界中产生的EPSPS酶TIPS突变，使植物获得抗草甘膦特性的同时，还可以获得稳定遗传的高抗草苷酸特性，并且极大地缩短了新品种的育种年限的方法。
发明内容
本发明的目的在于提供一种可以导入自然界中产生的EPSPS酶TIPS突变，使植物获得抗草甘膦特性的同时，还可以获得稳定遗传的高抗草苷酸特性，并且极大地缩短了新品种的育种年限的方法。
本发明第一方面提供了一种改良植物的方法，所述的方法包括步骤：
(a)提供一含有n个拷贝EPSPS基因的植物细胞，利用基因工程改造所述植物细胞，从而使所述植物细胞中的部分而非全部的EPSPS基因所对应的EPSPS酶保守区(SEQ IDNO.1)中的苏氨酸(T)和/或脯氨酸(P)发生突变，其中，n为≥4的偶数；和
(b)将步骤(a)中的植物细胞再生成植株；
(c)任选的，将步骤(b)获得的植株进行授精(自花授粉)，从而获得纯合型植株。
在另一优选例中，所述方法使部分突变EPSPS可以稳定遗传。
在另一优选例中，所述苏氨酸(T)突变为异亮氨酸(I)。
在另一优选例中，所述脯氨酸(P)突变为丝氨酸(S)。
在另一优选例中，所述EPSPS基因来源于源于单子叶植物或双子叶植物。
在另一优选例中，所述EPSPS基因来源于选自下组的一种或多种植物：禾本科、豆科。
在另一优选例中，所述EPSPS基因来源于选自下组的一种或多种植物：大豆、水稻、玉米、高粱、油菜、棉花、小麦、土豆。
在另一优选例中，所述的EPSPS基因来源于水稻和大豆。
在另一优选例中，所述的步骤(a)包括步骤：
(1)提供携带载体的农杆菌，所述的载体含有突变的EPSPS酶保守区的DNA编码序列的SG靶点信息，所述突变的EPSPS酶保守区在野生型EPSPS酶保守区的对应于SEQ IDNO.:1的苏氨酸(T)和/或脯氨酸(P)发生突变；
(2)将植物细胞与步骤(1)中的农杆菌接触，从而对所述植物细胞染色体上所述突变的EPSPS酶保守区的DNA编码序列进行编辑；和
(3)选择有突变的EPSPS酶保守区的DNA编码序列的植物细胞。
在另一优选例中，所所述步骤(a)包括用基因枪方法进行遗传转化的步骤。
在另一优选例中，在步骤(a)中，利用基因编辑技术改造所述植物细胞，从而使所述植物细胞中的EPSPS基因所对应的EPSPS酶保守区(SEQ ID NO.1，L F L G N A G T A MR P L)中的苏氨酸(T)和/或脯氨酸(P)发生突变。
在另一优选例中，所述的基因编辑技术选自下组：CRISPR基因编辑体系、易错PCR、基因重组、TALEN、ZFN、或其组合。
在另一优选例中，所述基因编辑技术包括：TR-HDR编辑技术、Prime editing。
在另一优选例中，所述的基因编辑技术包括可以产生所述突变的任何技术方法。
在另一优选例中，所述方法改良植物耐受除草剂的性能。
在另一优选例中，所述改良包括提高抗除草剂特性。
在另一优选例中，所述的除草剂包括草甘膦。
在另一优选例中，所述植物包括被子植物和裸子植物。
在另一优选例中，所述裸子植物选自下组：苏铁科(Cycadaceae)、罗汉松科(Podocarpaceae)、南洋杉科(Araucariaceae)、松科(Pinaceae)、杉科、柏科、三尖杉科、红豆杉科、麻黄科、买麻藤科、单型科、百岁兰科、或其组合。
在另一优选例中，所述植物包括单子叶植物和双子叶植物。
在另一优选例中，所述植物包括草本植物和木本植物。
在另一优选例中，所述草本植物选自下组：禾本科植物、豆科植物、或其组合。
在另一优选例中，所述木本植物选自下组：猕猴桃科、蔷薇科、桑科、或其组合。
在另一优选例中，所述植物选自下组：禾本科植物、豆科植物、或其组合。
在另一优选例中，所述的植物选自下组：水稻、大豆、或其组合。
在另一优选例中，所述方法还包括步骤：对所述植物细胞、植株或纯合型植株，测试其抗除草剂的性能。
本发明第二方面提供了一种基因编辑植物，所述的植物是用本发明第一方面所述的方法制备的。
在另一优选例中，所述植物具有抗除草剂特性。
在另一优选例中，所述的除草剂包括草甘膦。
应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。
附图说明
图1显示了TR-HDR编辑方法的示意图。
图2显示了化学修饰的dsODN。
图3显示了基因型检测分析的结果。
图4显示了wt/mt喷施草甘膦的结果。
图5显示了prime editing编辑系统的示意图。
图6显示了基因型鉴定结果。
图7显示了wt/mt喷施草甘膦的结果。
具体实施方式
本发明人经过广泛而深入地研究，首次意外地发现，对含有n个(n为≥4的偶数)拷贝EPSPS基因的植物进行基因编辑，将部分而非全部的EPSPS基因所对应的EPSPS酶保守区(SEQ ID NO.1，L F L G N A G T A M R P L)中的苏氨酸(T)突变为异亮氨酸(I)，和/或脯氨酸(P)突变为丝氨酸(S)，所获得的植物既具有高抗除草剂(比如草甘膦)的特性，又具有可稳定遗传的特性。在此基础上，本发明人完成了本发明。
术语
如本文所用，术语“AxxB”表示第xx位的氨基酸A变为氨基酸B，例如“L87I”表示第87位的氨基酸L突变为I，以此类推。
如本文所用，术语“EPSPS”是指5-烯醇丙酮酰莽草酸-3磷酸合成酶(EPSPS)。
如本文所用，术语“除草剂抗性”、“除草剂耐受性”“除草剂耐受活性”可互换使用，是指对草甘膦具有耐受性或抗性。
如本文所用，所述“氨基酸”是指含有氨基的羧酸。生物体内的各种蛋白质是由20种基本氨基酸构成的。除甘氨酸外均为L－α－氨基酸(其中脯氨酸是一种L－α－亚氨基酸)，其结构通式为(R基为可变基团)。
n个拷贝的EPSPS基因
在本发明中，所述n个拷贝的EPSPS基因指n为≥4的偶数个拷贝的EPSPS基因。
在有一些实施方式中，所述n个拷贝的EPSPS基因包括如下几种情况：
1)多倍体植物，如四倍体水稻、八倍体小麦、四倍体玉米；
2)本身含有多个拷贝的EPSPS，如大豆，虽然是二倍体，但其有2x2＝4个拷贝的EPSPS。
本发明首次发现，基因编辑含有n个拷贝(n为≥4的偶数)的EPSPS基因的植物(例如，多倍体植物或含有n个拷贝，n为≥4的偶数的二倍体植物)，使其中的一个或者多个EPSPS(非全部)产生TIPS修饰，从而实现抗草甘膦的同时，能够稳定遗传。
野生型EPSPS酶保守区
如本文所用，“野生型EPSPS酶保守区”、“EPSPS酶保守区”可互换使用，是指天然存在的、未经过人工改造的EPSPS酶保守区多肽，其核苷酸可以通过基因工程技术来获得，如基因组测序、聚合酶链式反应(PCR)等，其氨基酸序列可由核苷酸序列推导而得到。所述野生型EPSPS酶保守区的氨基酸序列如SEQ ID NO.:1所示。
重组技术和植物改良
本领域的技术人员熟知的方法能用于构建含突变的酶保守区的编码DNA序列和合适的转录/翻译控制信号的载体。这些方法包括体外重组DNA技术、DNA合成技术、体内重组技术等。所述的DNA序列可有效连接到载体中的适当启动子上，以指导mRNA合成。载体还包括翻译起始用的核糖体结合位点和转录终止子。
此外，载体优选地包含一个或多个选择性标记基因，以提供用于选择转化的宿主细胞的表型性状，如真核细胞培养用的二氢叶酸还原酶、新霉素抗性以及绿色荧光蛋白(GFP)，或用于大肠杆菌的四环素或氨苄青霉素抗性。
包含上述的适当DNA序列以及适当启动子或者控制序列的载体，可以用于转化适当的宿主细胞。
宿主细胞可以是原核细胞，如细菌细胞；或是低等真核细胞，如酵母细胞；或是高等真核细胞，如植物细胞(如农作物和林业植物的细胞)。代表性例子有：大肠杆菌，链霉菌属、农杆菌；真菌细胞如酵母；植物细胞、动物细胞等。
本发明的多核苷酸在高等真核细胞中表达时，如果在载体中插入增强子序列时将会使转录得到增强。增强子是DNA的顺式作用因子，通常大约有10到300个碱基对，作用于启动子以增强基因的转录。
本领域一般技术人员都清楚如何选择适当的载体、启动子、增强子和宿主细胞。
用重组DNA转化宿主细胞可用本领域技术人员熟知的常规技术进行。当宿主为原核生物如大肠杆菌时，能吸收DNA的感受态细胞可在指数生长期后收获，用CaCl2法处理，所用的步骤在本领域众所周知。另一种方法是使用MgCl2。如果需要，转化也可用电穿孔的方法进行。当宿主是真核生物，可选用如下的DNA转染方法：磷酸钙共沉淀法，常规机械方法如显微注射、电穿孔、脂质体包装等。
转化植物也可使用农杆菌转化或基因枪转化等方法，例如叶盘法。对于转化的植物细胞、组织或器官可以用常规方法再生成植株，从而获得除草剂耐受性或抗性改变的植物。
也可以利用基因编辑技术直接对含有n个拷贝(n为≥4的偶数)EPSPS基因的目标植物基因组中的EPSPS酶保守区进行编辑，从而使植物细胞中的部分而非全部的EPSPS基因所对应的EPSPS酶保守区(SEQ ID NO.1，L F L G N A G T AM R P L)中的苏氨酸(T)和/或脯氨酸(P)发生突变。代表性的基因编辑技术包括CRISPR基因编辑体系、易错PCR、基因重组、TALEN和ZFN。
CRISPR/Cas(clustered regularly interspaced short palindromic repeats/CRISPR-associated proteins)系统为细菌与古生菌中抵御外源病毒或质粒DNA入侵的获得性免疫系统。该系统的核酸酶在crRNA的指导下识别并降解外源DNA。其中，II型CRISPR/Cas系统组成简单，仅包括一个核酸酶Cas9与tracrRNA:crRNA二聚体便可完成识别和切割功能。CRISPR/Cas9系统以其设计操纵简便、编辑高效与通用性广等优势迅速成为新一代的基因组编辑技术，已被广泛应用于人、小鼠、大鼠、斑马鱼、秀丽隐杆线虫、植物、真菌与细菌等不同物种。
TR-HDR编辑技术是一种常规的基因编辑技术，具体详见文献(Yuming Lu et al.,2020)。
应用
本发明可以用于植物基因工程领域，用于植物研究和育种，尤其是具有经济价值的农作物、林业作物或园艺植物的遗传改良。
本发明的主要优点包括：
(1)本发明首次发现，对多倍体植物(比如2n倍体植物，n为≥2的正整数)进行基因编辑，将EPSPS基因所对应的EPSPS酶保守区(SEQ ID NO.1，L F L G N A G T A M R P L)中的苏氨酸(T)突变为异亮氨酸(I)，和/或脯氨酸(P)突变为丝氨酸(S)，所获得的植物既具有高抗除草剂(比如草甘膦)的特性，又具有可稳定遗传。
(2)本发明应用基因编辑技术，使用高效的可以实现特异性位点碱基替换的方法，实现植物基因组的碱基定点突变，即EPSPS酶保守基序上的TIPS双突变。该方法可以导入自然界中产生的EPSPS酶TIPS突变，使植物获得抗草甘膦特性的同时，极大地缩短了新品种的育种年限。
(3)本发明将把TIPS突变应用于多倍体中获得纯合植株，来使作物可以获得稳定遗传的高抗草苷酸特性。
(4)本发明的方法可以使植物具有天然的高抗草甘膦特性，并且可以进行稳定的遗传。
(5)本发明提供可以进行精确碱基序列替换的基因编辑方法，对EPSPS基因进行精确定点编辑，使其替换为具有天然突变的高抗甘膦酸特性的EPSPS(TIPS)基因。本发明还提供了一种对植物进行改造的方法：包括利用植物基因遗传转化技术将上述基因编辑系统导入植物细胞，随后经分化筛选培育成相应的基因编辑植株。所获得的植株经基因型检测分析后，我们将得到一些具有高抗草甘膦的能力的植株。
(6)本发明提供了上述高抗草甘膦基因的应用方法：在二倍体植物中，替换后的EPSPS(TIPS)基因具有纯合致死的特性，我们可以对四倍体作物进行基因编辑，从而使作物可以成活同时具有可以稳定遗传的抗草甘膦能力，并且这种能力来自于自然界的天然突变。作物可以是六倍体小麦、四倍体棉花、油菜、水稻、古多倍体的大豆等。
(7)本发明提供的抗草甘膦基因氨基酸序列可以有不同的核苷酸序列变异，包括但不限于用不同密码子编译同一个氨基酸获得的核苷酸序列，这些序列都编码相同活性的蛋白质多态。这种核苷酸序列的变异方法可以用不同的分子生物学及遗传转化技术实现，包括但不限于介绍的基因编辑方法，base editing或prime editing方法，遗传转化方法包括但不限于农杆菌侵染法、基因枪轰击法等。本发明理论上适用于所有植物，包括双子叶植物、单子叶植物。
(8)本发明可以对植物基因组进行精准的定点修饰，获得所需的基因型。同时，国家基因编辑农作物相关政策已于近期出台，明确指出相关基因编辑作物将有别于传统转基因，商业化更加明确和便捷。将基因编辑技术应用与EPSPS基因的精准修饰，有望获得抗草甘膦的植株，具有切实的应用前景。
(9)本发明要解决的问题就是TIPS的纯合致死问题，目标是通过精准编辑获得含有TIPS突变的抗草甘膦植物，使其能够稳定遗传，用于生产实践。本发明通过基因编辑含有多个拷贝的EPSPS基因的植物(例如，多倍体植物)，使其中的一个或者多个EPSPS(非全部)产生TIPS修饰，从而实现抗草甘膦的同时，能够稳定遗传。
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件如Sambrook等人，分子克隆：实验室手册(New York:Cold Spring Harbor LaboratoryPress,1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比和份数按重量计算。本发明中所涉及的实验材料和试剂如无特殊说明均可从市售渠道获得。
实施例1设计EPSPS酶保守区的氨基酸替换
本发明的EPSPS突变基因EPSPS(TIPS)来自于自然界中的自发突变，它是EPSPS基因在植物EPSPS酶保守区(L F L G N A G T A M R P L(SEQ ID NO.1))发生定向双氨基酸置换后获得的基因。
EPSPS基因在EPSPS酶保守区发生TIPS双氨基酸置换后的EPSPS(TIPS)基因EPSPS酶保守区序列为L F L G N A G I A M R S L(SEQ ID NO.2)。
实施例2EPSPS酶保守区氨基酸替换的实现
蛋白质由DNA转录的RNA翻译而来，三个碱基能决定的那个一个氨基酸而作为一个密码子，密码子具有简并性，同一个氨基酸具有两个或更多的密码子。
为解决上述氨基酸替换的问题，我们需要将上述EPSPS基因的EPSPS酶保守区一个T氨基酸替换为I,一个P氨基酸替换为S。那么，这个苏氨酸的密码子可以替换为异亮氨酸的任一密码子：AUU，AUC，AUA；脯氨酸的密码子可以替换为丝氨酸的任一密码子：UCU，UCC，UCA，UCG，AGU，AGC。在基因组中，上述苏氨酸的位点碱基可以替换为ATT，ATC，ATA,脯氨酸的位点可以替换为TCT，TCC，TCA，TCG，AGT，AGC。
实施例3使用基因编辑方法，实现EPSPS(TIPS)基因在植物中的表达
使用常规的基因编辑方法(比如TR-HDR策略或prime editing)，结合常规的遗传转化技术(比如基因枪法或农杆菌侵染法)，对植物基因组中EPSPS基因的EPSPS酶保守区进行精确的基因组特异性碱基编辑，使被编辑的T0代植物获得突变后的EPSPS(TIPS)基因。通过常规的遗传转化技术(比如基因枪法或农杆菌侵染法)导入的载体含有筛选标记，我们利用筛选标记可以从分化幼苗中筛选出T0代的转基因幼苗。
T0代植株拥有突变后的EPSPS(TIPS)基因，具有了一定的对草甘膦的抗性，一般通过基因编辑获得的转基因T0代植株通常为嵌合/杂合型。我们需要将T0代转基因幼苗进行繁育，获得的T1代植株，一部分T1代植株会拥有纯合的EPSPS(TIPS)基因，纯合突变体的遗传率为100％，因此，转化后的一部分T1代植株将会具有可以稳定遗传的高抗草甘膦特性。
实施例4应用TR-HDR策略，实现EPSPS基因的TIPS精确序列替换在大豆中的应用
大豆(学名：Glycine max(Linn.)Merr.)，虽然是一种二倍体作物，但是是由古四倍体演变而来，有丰富的重复序列。大豆的基因组中，有两个EPSPS基因，分别为GmEPSPS01和GmEPSPS02，这两个EPSPS基因都有EPSPS酶保守区。大豆是我国重要的粮食和油料作物，由于草甘膦除草剂的广泛应用，抗草甘膦大豆在我国粮食产业中占据这非常重要的地位，但是很多转基因作物的专利大多掌握在欧美等发达国家手中，因此，如何在保证我国粮食安全和农业可持续发展的的前提下，找到一条仅靠农作物自身基因突变，获取作物抗除草剂等优良性状基因的路径是目前的焦点。
本发明以大豆基因GmEPSPS02为例，应用TR-HDR策略对其进行精准碱基替换，获得具有可稳定遗传的高抗草甘膦除草剂特性的大豆。具体包括一下步骤：
步骤一、对大豆GmEPSPS02基因进行分析
大豆GmEPSPS02基因序列如SEQ ID NO.3所示，
大豆GmEPSPS02基因在植物EPSPS酶保守区氨基酸序列第177到第189位(L F L GN A G T A M R P L，SEQ ID NO.1)发生定向双氨基酸置换后的基因为mGmEPSPS1(TIPS)基因(第184位氨基酸由T变为I，同时第188位氨基酸由P变为S突变后的编码基因序列，氨基酸序列替换为L F L G N A G I A M R S L(SEQ ID NO.2)。
步骤二、大豆GmEPSPS02基因双氨基酸替换的基因编辑方案设计
为了实现大豆GmEPSPS02基因的碱基替换，我们设计一种串联重复-同源性定向修复方法，TR-HDR策略，如图1所示，设计一个sgRNA靶向切割位点，构建于相应的CRISPR/Cas9载体上；合成一个与目标序列和期望的碱基替代具有同源性5-磷酸化双链寡核苷酸(dsODN)。
在dsODN这个双链DNA的5’端和3’端带有两个硫代磷酸链，使寡核苷酸可以强有力的靶向整合，磷酸化修饰旨在稳定细胞中的寡核苷酸，5’磷酸化可以促进非同源端连接(NHEJ)，这是修复双链断裂(DSBs)的主要途径。
在这种策略中，带有sgRNA特异性切割靶点的CRISPR/Cas9载体会在基因组上的EPSPS基因保守区相应位点进行切割，我们设计的供体寡核苷酸dsODN被插入到目标位点，可能会通过NHEJ，于侧翼基因组序列形成串联重复结构。该寡核苷酸还被设计成在插入时为相同的sgRNA形成一个靶位点，在新形成的sgRNA靶位点上的DSB有望触发串联重复序列之间的同源性定向修复HDR，从而使目标序列被插入的同源序列取代。
根据TR-HDR策列及大豆GmEPSPS02基因分析，GmEPSPS02基因待编辑的氨基酸为184Thr、188Pro，我们为此在基因组上设计sgRNA1，序列为TTGCAGTACCAGCATTTCCAAGG。将上述设计的sgRNA1进行合成，两头设计保护碱基及酶切位点，构建至相应的CRISPR/Cas9载体中(CRISPR/Cas9(sgRNA)041，SEQ ID NO.4)，导入植物细胞后会在基因组上的特异性靶位点进行切割。该载体上含有basta筛选标记，可用于转化后的筛选。
设计寡核苷酸序列：GAACGCTGGTATTGCAATGCGTAGTTTGACAGCAGCTGTGGTTGCTGCAGGTGGAAATGCAAGGTCTGTTTTTTTTTTTTTTGTTCAGCATAATCTTTGCCTTGG，合成化学修饰双链寡核苷酸的dsODN，如图2。用于插入目标位点进行碱基替换，碱基替换后的GmEPSPS02序列为SEQID NO.5。
步骤三、遗传转化
我们使用常规的基因枪法对大豆进行遗传转化。用粒子轰击将上述dsODN与插入sgRNA的CRISPR/Cas9质粒混合物导入大豆的胚尖细胞中，利用CRISPR上的basta标记对转化后的子叶节进行筛选。经过两轮的basta筛选，获得了上百株大豆转基因幼苗。
步骤四、基因型检测
我们将筛选出来的大豆幼苗提取DNA，用特异性引物扩增鉴定，引物如表1所示。
表1
通过供体特异性扩增引物F1+R2，我们鉴定出了11株含有正向dsDON插入的突变体，通过插入位点两侧引物(F1+R1)目标区域，我们从其中鉴定出11株中有2株含有无缝连接，如图3，a、b。
步骤五、获得具有高抗草甘膦特性并能稳定遗传的大豆
在T0代中，大多数的TR-HDR编辑植株都是嵌合/杂合型，我们将T0代植株自花授粉获得T1代，T1代获得的纯合GmEPSPS02(TIPS)基因遗传率为100％。
我们将筛选出来的大豆幼苗提取DNA进行测序，测序结果显示有一些突变体T1代植株含有所设计的纯合碱基替换，如图3c。
我们用草甘膦喷施T1，如图4，T1代植株相对野生型具有明显的抗草甘膦特性，并且植株通过TR-HDR编辑获得的草甘膦抗性可以稳定的遗传给下一代。
实施例3、实现EPSPS基因的TIPS精确序列替换在水稻中的应用
水稻是世界最主要的粮食作物之一，为全世界一半以上的人口提供主粮。除了二倍体栽培稻，还有多倍体的水稻品种。我们对四倍体水稻的EPSPS基因进行编辑。
步骤一、对水稻OsEPSPS基因进行分析
水稻OsEPSPS基因为SEQ ID NO.6，其保守序列为氨基酸序列第95到第107位(L FL G N A G T A M R P L，SEQ ID NO.1)，其中引入两个氨基酸位点的置换：第102号氨基酸从苏氨酸替换为异亮氨酸，第106号氨基酸从脯氨酸替换为丝氨酸。替换后的基因为OsEPSPS(TIPS)基因，其氨基酸序列为L F L G N A G I A M R S L(SEQ ID NO.2)。
步骤二、对水稻OsEPSPS基因双氨基酸替换的基因编辑方案设计
对水稻的OsEPSPS基因的编辑，我们选择了prime editing的方法，该方法不需要供体DNA，就可以对基因组目标位点进行特异性的序列更改。针对水稻OsEPSPS基因，我们设计了一个编辑系统如图5,由三部分组成：nCas9-MMLV融合蛋白、一个prime editingguiding RNA(peg RNA)和一个small guide RNA(sgRNA)。peg RNA含有SG，可以使融合人蛋白靶向目标DNA同时与目标DNA杂交，还包含我们设想的可以取代目标DNA的遗传信息，sgRNA切割未编辑的DNA，有利于DNA的修复。通过编辑器的切割和修复功能，目标DNA序列将会被替换为我们所设想的序列。我们将这个编辑系统整合为植物二元载体pCXPE01-OsEPSPS(pCXPE01二元载体获自百格基因科技(江苏)有限公司，使用常规分子构建方法将靶点克隆到pCXPE01上，获得了pCXPE01-OsEPSPS质粒载体)，该载体含有潮霉素抗性基因，载体pCXPE01-OsEPSPS的序列为SEQ ID NO.7。编辑后的水稻OsEPSPS(TIPS)序列为SEQ IDNO.8。
步骤三、遗传转化
我们用常规的农杆菌侵染法对水稻愈伤组织进行遗传转化。将设计好的上述质粒(pCXPE01-OsEPSPS，SEQ ID NO.7)转化进入农杆菌，经培养后的农杆菌对水稻愈伤细胞进行侵染，愈伤组织共培养后筛选分化成幼苗，经过两轮的潮霉素筛选，获得了上百株水稻转基因幼苗。
步骤四、基因型检测
我们将筛选出来的水稻转基因幼苗取样提取DNA，用特异性引物进行扩增，引物如表2所示。
表2
通过表2中的供体特异性扩增引物OsEPSPS-F+OsEPSPS-R，我们鉴定出了3株被编辑的突变体，如图6a所示。
步骤五、获得具有高抗草甘膦特性并能稳定遗传的水稻
在T0代中，大多数的基因编辑植株都是嵌合/杂合型，我们将T0代植株自花授粉获得T1代，T1代获得的纯合OsEPSPS(TIPS)基因遗传率为100％。
我们将筛选出来的水稻幼苗提取DNA进行测序，测序结果显示有一些突变体T1代植株含有所设计的纯合碱基替换，如图6b。
我们用草甘膦喷施T1代水稻TIPS突变体植株，如图7，T1代植株相对野生型具有明显的抗草甘膦特性，并且植株通过基因编辑获得的草甘膦抗性可以稳定的遗传给下一代。
并且对大豆的GmEPSPS01和GmEPSPS02均进行上述突变，大豆会纯合致死。
在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
序列表
<110> 上海交通大学
百格基因科技（江苏）有限公司
<120> 一种抗草甘膦的植物及其制法
<130> P220310
<160> 8
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列(artificial sequence)
<400> 1
Leu Phe Leu Gly Asn Ala Gly Thr Ala Met Arg Pro Leu
1 5 10
<210> 2
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列(artificial sequence)
<400> 2
Leu Phe Leu Gly Asn Ala Gly Ile Ala Met Arg Ser Leu
1 5 10
<210> 3
<211> 8677
<212> DNA
<213> 人工序列(artificial sequence)
<400> 3
cttcaccaac tttttcactc aattgttttg gtgtaagcaa ttcgacatgt gttagtgtta 60
gttggcaacc aaaaatccct ttatgtgact caatccaaca accactcaca ccaccaaccc 120
ccataaccat ttctcacaat acccttcatt tacacattat catcaccaaa aataaataaa 180
aaaaacctct catttcagag agagagagag agacttcaca gaccaaagtg cagagaacaa 240
caaagttcac aactttaagg aaaattgaaa tggcccaagt gagcagagtg cacaatcttg 300
ctcaaagcac tcaaattttt ggccattctt ccaactccaa caaactcaaa tcggtgaatt 360
cggtttcatt gaggccacgc ctttgggggg cctcaaaatc tcgcatcccg atgcataaaa 420
atggaagctt tatgggaaat tttaatgtgg ggaagggaaa ttccggcgtg tttaaggttt 480
ctgcatcggt cgccgccgca gagaagccgt caacgtcgcc ggagatcgtg ttggaaccca 540
tcaaagactt ctcgggtacc atcacattgc cagggtccaa gtctctgtcc aatcgaattt 600
tgcttcttgc tgctctctct gaggtgaagt ttatttattt atttatttgt ttgtttgttg 660
ttgggtgtgg gaataggagt ttgatgtgta gagtggattt tgaatatttg attttttttt 720
gtattattct gtgaaaatga agcatcatgt cccatgaaag aaatggacac gaaattaagt 780
ggcttatgat gtgaaatgag gatagaaatg tgtgtagggt tttttaatgg gtagcaataa 840
gcatattcaa tatctggatt gatttggacg tttctgtata aaggagtatg ctagcaatgt 900
gttaatgtat ggcttgctaa aatactccta aaaatcaagt gggagtagta tacatatcta 960
cagcaaatgt attaggtgag gcatttggct tctctattgt aaggaacaaa taatatcagt 1020
taatgtgaaa atcaatggtt gatattccaa tacattcatg atgtgttatt tatatgtacc 1080
taatattgac tgttgttttt ctccgcaatg accaagatta tttattttat cctctaaagt 1140
gactaattga gttgcttact ttagagaagt tggacccatt aggtgagagc gtggggggaa 1200
ctaatcttga atatacaatc tgagtcttga ttatccaagt atggttgtat gaacaatgtt 1260
agctctagaa gataaaccct cccccaaaac acaaattaga atgacatttc aagttccatg 1320
tatgtcactt tcattctatt atttttacaa cttttagtta cttaacagat gtcttgttca 1380
gcataaatta taatttattc tgtttttttt tagggaacaa ctgttgtaga caacttgttg 1440
tatagtgagg atattcatta catgcttggt gcattaagga cccttggact gcgtgtggaa 1500
gatgacaaaa caaccaaaca agcaattgtt gaaggctgtg ggggattgtt tcccactagt 1560
aaggaatcta aagatgaaat caatttattc cttggaaatg ctggtactgc aatgcgtcct 1620
ttgacagcag ctgtggttgc tgcaggtgga aatgcaaggt ctgttttttt tttttttgtt 1680
cagcataatc tttgaattgt tcctcgtata actaatcaca acagagtacg tgttcttctt 1740
cctgttataa tctaaaaatc tcatccagat tagtcatcct ttcttcttaa aaggaacctt 1800
taattatcaa tgtatttatt taatatttaa attagcttgt caaagtctag catatacata 1860
ttttgattat attctgagaa atgcacctga gggtgttcct catgatctac ttcaacctct 1920
gttattatta gattttctat catgattact ggtttgagtc tctaagtaga ccatcttgat 1980
gttcaaaata tttcagctac gtacttgatg gggtgccccg aatgagagag aggccaattg 2040
gggatttggt tgctggtctt aagcaacttg gtgcagatgt tgattgcttt cttggcacaa 2100
actgtccacc tgttcgtgta aatgggaagg gaggacttcc tggcggaaag gtatggtttg 2160
gatttcattt agaataaggt ggagtaactt tcctggatca aaattctaat ttaagaagcc 2220
tccctgtttt cctctcttta gaataagact aagggtaggt ttaggagttg ggttttggag 2280
agaaatggaa gggagagcaa tttttttctt cttctaataa atattcttta atttgataca 2340
ttttttaagt aaaagaatat aaagatagat tagcataact taatgtttta atcttttatt 2400
tatttttata aatattatat acctgtctat ttaaaaatca aatatttgtc ctccattccc 2460
tttcccttca aaacctcagt tccaaatata ccgtagttga attatatttt ggaaggccta 2520
ttggttggag acttttcctt ttcagagatt atccctcacc tttattatag cctttctatt 2580
tttaaacttc atatagacgc cattcttgtt ttaaaaaaca ctaagttttc ttttagttat 2640
accttcccct ccttattctc tccaaagtaa atattgtagc aagtgttggt tgatccattg 2700
tgaatcttat tatcctattt aacatgcagg tgaaactgtc tggatcagtt agcagtcaat 2760
acttgactgc tttgcttatg gcagctcctt tagctcttgg tgatgtggaa attgagattg 2820
ttgataaact gatttctgtt ccatatgttg aaatgactct gaagttgatg gagcgttttg 2880
gagtttctgt ggaacacagt ggtaattggg ataggttctt ggtccatgga ggtcaaaagt 2940
acaagtaggt ttctatgttt tagtgttaca tcacttttag tatccaaaat gcaatgaaat 3000
taaaactcat gtttcctatt aggtctcctg gcaatgcttt tgttgaaggt gatgcttcaa 3060
gtgccagtta tttactagct ggtgcagcaa ttactggtgg gactatcact gttaatggct 3120
gtggcacaag cagtttacag gtattcatga atgacactat cttctattat cttttatttt 3180
atagcttaca ctatcattcc taattcaacc cccttctttt ctctttcccc tcactcccaa 3240
aatagagctt atcattgtat ccttaatagc tcttttatgt gctgtttcat ctcttgagca 3300
gattctacat gattatcctt tttagtgaac ttttttgtct tttaaataat tgatatcatc 3360
atttgaactt gcacatcatc tctatccttc ctcattttat tatatttcat taagagtgat 3420
aaaattacat tgtcaagtaa agcaagttag cgtatcagat aatgatgctt cgattgcaga 3480
attggtgaaa gcttgcacaa ttcattagct tagtgacaat tgtgatgtag atagccataa 3540
tcttccatgc aacttattat gctttttgtc taaaacttct tttgcactta aacatgaatt 3600
agagagttag gatgaacaat agtaacagac acaaagctta tttctagacc acccagtggt 3660
gaagacgaag cagcatgagt gagattaatg gcagcatctg attgaagctt cttttggtat 3720
tattggagat gaaatcttga gccaaattag ggcttttgcc tcctcaatag ccattggttc 3780
aaaattgctt tcaataaaat gattacagaa tcaaattctt aagaaagacc ttcaagaaca 3840
acatcaagat gtttcctgtg caaaacaggc tcacctacaa aagagtgtct acaagcacct 3900
ttacacttgc aaaaaattcc ttaactgaac aattgccaag agtcatgttg caaacttgag 3960
attggagttg attagatttg gtgtgtgtga gattctggaa atgagcatga agttttttgc 4020
aaagctcata aaatgaatgc agccaagaat cctagatagg attgaatttg agagagaggc 4080
ttgaagtcaa gataaccgca actgatcttg ctgttcccat gctgcatagg actcgttgat 4140
tctaccaaga taacaatctt ctgtggtgag aatatgagtg ggaattgtca ggcaacaaag 4200
aaaatgaagg ctatgagcct ttgttaaggt gcagagagaa aacagaaaat gaagaacttg 4260
tgtattgaag gaattgaaaa gccaattaca attgtgttgc agagagatat ttatagttct 4320
gaagtgtata actaactaaa cagaatgcta ccaacctaga ggcagttgag aattgctccc 4380
ttattacaat actctcacag ccttgatgat aggcttgatt tgctgccacc gaagaagaac 4440
attattgttg gagagttttt cagtgattgc atcagagaaa gttacaagtg tgattggaga 4500
tgaaggactt gcggtcgtcg aaggttaagt gttaagtggt ggaatgtgta tcggaggtgg 4560
ttgcctagcc caagaagctg gttgcagtgg aagcggatgc ggcagaagcc atgggttcag 4620
atcagaacta tgttctagat accatattag ggttagcttt caagagaaaa cttatgaaac 4680
tgaactgtaa actgttgtat tattgattag ctgatctagt agtgatggaa gcttgcttgc 4740
gaagcttcta tggaggctgg atcattgagc ttcaatgagg tccttcaatg gtgatttttc 4800
accatggaga tgcagcggaa gataaatgaa gaggtgagag gaggcgtcat ccactaggaa 4860
ataaactatg gaagaaggag cttcaccacc aagagagtgt cttggataag aagcttagag 4920
aggaagcttc aatggaggaa tagaaagaga gagggggaac aaaaaattga aggaggaaaa 4980
gagggagaga agttgaactt tgaagtgtgt ctcacaagac tcattcatta aagttacaac 5040
aagtgttaca catgcttcta tttatagtct aggtaacttc cttgagaagc tagaacttaa 5100
ctacacacac ctctctaata actaagataa cctccttgag aaatttcctt gagaagcttc 5160
cttaagaaga ttcctagaga agctaaagct tagttacaca cacctctcta ataactaagt 5220
tcacctcctt gagatgagaa gctagagcct tagctacaca cacccttata atagctaaac 5280
tcactctatt ccaaaataca tgaaaataca aaaaagttcc tactacaaag attactcaaa 5340
atgtcctgaa atacaagact aaaactctat actactagaa tggtcaaaat acaaggtcca 5400
aaagaaggaa aaacctattc taatatttac aaagagagtg gacccaacct tagtccatgg 5460
gctcagaaat ctaccctgag gttcatggga atcctagggt cttctttagt agctctagtc 5520
caattttctt ggagtcttct atccaatatc cttgggggta ggattgcatc atgtagtaca 5580
agagagggga atatatatac agttgtaagt tgtaactacc taatcaaacc caactgactc 5640
accatacaca gaaaaacaat gtacaaagga taatagaaaa actgaaactg agatatactc 5700
attacataga agaattacat gatgaatctg aaaattttaa ttgggaaact gaggacaata 5760
acaaggcttt cagagttcat tttgacaata ggtaaattat ggacttcaac ttagacctca 5820
agggtatgct tgggagtggg gttttagagg aaaaggggaa ggagggaaat tttttaattc 5880
tagtaaatat tctctatttt gattaatttt taaaataaaa caaataaact tatagattag 5940
cattcactta atgtcctgat cttttatttg tttcatgaag ttttttatag cctttctgtt 6000
tctgttaaaa gaaattggag ggtgttcata atctatatgc ccatatatat gtattgtcct 6060
gttgtctgtg tttctgtttt ctttctttag tgtctcgcct ttccttaatt ccttatcaac 6120
accttgttta tttttgaaaa cttaaatgtc ctcatttttt ttacctgtac tataactttc 6180
caaacaaata gtagaaaatg tttcaaatat tccccagaac tgtttcagtg aacaaagttc 6240
aagccagaaa aaaagcaagc agaggctaaa gaagtatatc ttattgtgaa gagtaatctc 6300
aattggttaa ttatcgaatt gtatcatttt acaatagaaa attagaagtg ggttgattag 6360
tttatacgaa caattattta aatagggttg atggtgtggt taattactga tcatatgtta 6420
agactatgag tcgatgacca gcctcagtgc agtcatttta agttccatta ttttttaatt 6480
gtgcttatgt ttaactttgt ccttctttta aagggagatg taaaatttgc tgaagttctt 6540
gaaaagatgg gagctaaggt tacatggtca gagaacagtg tcactgtttc tggaccacca 6600
cgagattttt ctggtcgaaa agtcttgcga ggcattgatg tcaatatgaa caagatgcca 6660
gatgttgcca tgacacttgc tgttgttgca ctatttgcta atggtcccac tgctataaga 6720
gatggtatgg tttagctgtt tgtttttgct caagagcttg ttttcacata tttgtggtca 6780
agagcggttt agctgttttt ttttttaaat tgtggttaat gaaattatta taattatact 6840
aatattgaaa ttggatcact aaccatgtga aatgcttgaa tttttagctt gaaaacttct 6900
tttgtggatg atttttcttt tatctatgta gtgtggggca tctatgttgt tcctttaagc 6960
tttgtgtcat agttgtacaa cctggtctgt gggctggtcc agttcttact catgactgtc 7020
ttttgcagca aactggttaa acttgggtga cctgttgacc cacccagatt ggcctgttct 7080
tttttaaata aaactccaaa aggctactta taagatttca acatgatact tgaatgacca 7140
cccttacttt aaaggtcatt atgccatcag accccttgat tctctgttca gttatgttct 7200
tattcttatt attttttaat ttatattatt atccaacgat ctgatctttg tacatgatgc 7260
tggacaatca tcaaagctag tttggttaca tcatataata cctttttttt cataaattat 7320
tttttcccat aatatattta tatgtatttt tttaatacaa tattctgggg aaattttttt 7380
tttctgtttt cttttttctg gtttgaatac tatttcaatg actgggcctt attattttct 7440
ggtttgggtt atacaactgt cctttgatgt acttttgaat gcttcaatag tatttttcat 7500
aatcatggaa ggcactagag tgcagtgcat attgcacaag gttctttaat ggcatcttga 7560
atttgttaga acatggagtt atgatataca accattccta tgtcttcatc taatagctaa 7620
agcttttggc gtagttggtt aacatggtat tggaatctta ttttaaaggt ccatcttatt 7680
cgcaagtaca aggcaggtgg acctgcgcat tattcacgtg ccaggctcaa agggattttg 7740
tatgaggggg aatttttgga atataatata tagaatcatt catgtggttc acctatcatg 7800
tgtcaactca agtttttgtc ctagttgtat tattgcagtg tctaaactag gcatgatctt 7860
ctgtggaagg aaatttaacc taaggaactt gaatgcttct tgttctgaga tctttatttt 7920
ttttctccaa tctttttaat acttgaaagg ttttagttgt atctataaag ggtgcagaat 7980
tagggggtca gcttttctgt tgtaagcgtg aattaagtgc attttatgtt gttccctatt 8040
ttatacattt gaactatcaa ccatatcatt tagcaaactt ctttgttgct cagattccca 8100
tttattcttg tttcctctat tttttagtgg caagttggag agttaaagag actgagagga 8160
tgatagcaat ctgcacagaa ctcagaaagg tcttgctaat tcctttatgg tttctatatt 8220
actggacttt ttacatctca ctgacctact actgtcttgg tatttcagct aggagcaaca 8280
gttgaagaag gtcctgatta ctgtgtgatt actccacctg agaaattgaa tgtcacagct 8340
atagacacat atgatgacca cagaatggcc atggcattct ctcttgctgc ttgtggggat 8400
gttccagtaa ccatcaagga tcctggttgc accaggaaga catttcctga ctactttgaa 8460
gtccttgaga ggttaacaaa gcactaagca ttttgtacat tgagtaggga agagagagag 8520
atatatataa atactcacaa agcagtgagt atatggcttg cttttgtttc taaacattcc 8580
tttataagga cttgagataa tttgtattgt ttaaaagagc cattggttct gttgtatcaa 8640
agtaatttaa ttttcagtac cgacttggct ctactca 8677
<210> 4
<211> 14516
<212> DNA
<213> 人工序列(artificial sequence)
<400> 4
taaacgctct tttctcttag gtttacccgc caatatatcc tgtcaaacac tgatagttta 60
aactgaaggc gggaaacgac aatctgatcc aagctcaagc tgctctagca ttcgccattc 120
aggctgcgca actgttggga agggcgatcg gtgcgggcct cttcgctatt acgccagctg 180
gcgaaagggg gatgtgctgc aaggcgatta agttgggtaa cgccagggtt ttcccagtca 240
cgacgttgta aaacgacggc cagtgccaag cttatcacat attgataaag ttttagtgtt 300
tgaaaaaaaa agtatagata aatataaaat gttttataaa atataaaacg ataaaaatgt 360
tttaaacgat atatattata aaaaaaaacg tttcaaaaat aaatacaaaa atgtttttaa 420
atatatataa tttaactcat taaagaaaat aaaaatgcaa gtgcggtgac aagacaagct 480
aaaagttgca aaagaaatgg cagggctata aggctcacct actcctggat ttaccaaatt 540
ttggttcgtc cctatactcg aaaaataaaa caaaataaat ttcagtatct tcgtttttgt 600
atgctttgac tgtgaggcga ggccaacttt cttcttctgt ctgagatgaa ttttgtttgc 660
ctcctgtgaa ggatgtatca ttcaaagtga atgttttgca actgccagta gtcccacatc 720
gaccaaatat tcttattaca gtgtgtttat atagcacctg gagaaggaat gggttgtgca 780
gtaccagcat ttccagtttt agagctagaa atagcaagtt aaaataaggc tagtccgtta 840
tcaacttgaa aaagtggcac cgagtcggtg cttttttgtt ttagagctag aaatagcaag 900
ttaaaataag gctagtccgt agcgcgtgcg ccaattctgc agacaaatgg ccccgggcct 960
gcaggtcaac atggtggagc acgacacact tgtctactcc aaaaatatca aagatacagt 1020
ctcagaagac caaagggcaa ttgagacttt tcaacaaagg gtaatatccg gaaacctcct 1080
cggattccat tgcccagcta tctgtcactt tattgtgaag atagtggaaa aggaaggtgg 1140
ctcctacaaa tgccatcatt gcgataaagg aaaggccatc gttgaagatg cctctgccga 1200
cagtggtccc aaagatggac ccccacccac gaggagcatc gtggaaaaag aagacgttcc 1260
aaccacgtct tcaaagcaag tggattgatg tgataacatg gtggagcacg acacacttgt 1320
ctactccaaa aatatcaaag atacagtctc agaagaccaa agggcaattg agacttttca 1380
acaaagggtg atatccggaa acctcctcgg attccattgc ccagctatct gtcactttat 1440
tgtgaagata gtggaaaagg aaggtggctc ctacaaatgc catcattgcg ataaaggaaa 1500
ggccatcgtt gaagatgcct ctgccgacag tggtcccaaa gatggacccc cacccacgag 1560
gagcatcgtg gaaaaagaag acgttccaac cacgtcttca aagcaagtgg attgatgtga 1620
tatctccact gacgtaaggg atgacgcaca atcccactat ccttcgcaag acccttcctc 1680
tatataagga agttcatttc atttggagag gacctcgacc tcaacacaac atatacaaaa 1740
caaacgaatc tcaagcaatc aagcattcta cttctattgc agcaatttaa atcatttctt 1800
ttaaagcaaa agcaattttc tgaaaatttt caccatttac gaacgatacc atggactata 1860
aggaccacga cggagactac aaggatcatg atattgatta caaagacgat gacgataaga 1920
tggccccaaa gaagaagcgg aaggtcggta tccacggagt cccagcagcc gacaagaagt 1980
acagcatcgg cctggacatc ggcaccaact ctgtgggctg ggccgtgatc accgacgagt 2040
acaaggtgcc cagcaagaaa ttcaaggtgc tgggcaacac cgaccggcac agcatcaaga 2100
agaacctgat cggagccctg ctgttcgaca gcggcgaaac agccgaggcc acccggctga 2160
agagaaccgc cagaagaaga tacaccagac ggaagaaccg gatctgctat ctgcaagaga 2220
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tcctggtgga agaggataag aagcacgagc ggcaccccat cttcggcaac atcgtggacg 2340
aggtggccta ccacgagaag taccccacca tctaccacct gagaaagaaa ctggtggaca 2400
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ggggccactt cctgatcgag ggcgacctga accccgacaa cagcgacgtg gacaagctgt 2520
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agaagtacaa agagattttc ttcgaccaga gcaagaacgg ctacgccggc tacattgacg 3060
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gcaccgagga actgctcgtg aagctgaaca gagaggacct gctgcggaag cagcggacct 3180
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ggcaggaaga tttttaccca ttcctgaagg acaaccggga aaagatcgag aagatcctga 3300
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ccaaagtgaa atacgtgacc gagggaatga gaaagcccgc cttcctgagc ggcgagcaga 3600
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tgtttgagga cagagagatg atcgaggaac ggctgaaaac ctatgcccac ctgttcgacg 3900
acaaagtgat gaagcagctg aagcggcgga gatacaccgg ctggggcagg ctgagccgga 3960
agctgatcaa cggcatccgg gacaagcagt ccggcaagac aatcctggat ttcctgaagt 4020
ccgacggctt cgccaacaga aacttcatgc agctgatcca cgacgacagc ctgaccttta 4080
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ccaatctggc cggcagcccc gccattaaga agggcatcct gcagacagtg aaggtggtgg 4200
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gagagaacca gaccacccag aagggacaga agaacagccg cgagagaatg aagcggatcg 4320
aagagggcat caaagagctg ggcagccaga tcctgaaaga acaccccgtg gaaaacaccc 4380
agctgcagaa cgagaagctg tacctgtact acctgcagaa tgggcgggat atgtacgtgg 4440
accaggaact ggacatcaac cggctgtccg actacgatgt ggaccatatc gtgcctcaga 4500
gctttctgaa ggacgactcc atcgacaaca aggtgctgac cagaagcgac aagaaccggg 4560
gcaagagcga caacgtgccc tccgaagagg tcgtgaagaa gatgaagaac tactggcggc 4620
agctgctgaa cgccaagctg attacccaga gaaagttcga caatctgacc aaggccgaga 4680
gaggcggcct gagcgaactg gataaggccg gcttcatcaa gagacagctg gtggaaaccc 4740
ggcagatcac aaagcacgtg gcacagatcc tggactcccg gatgaacact aagtacgacg 4800
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atttccggaa ggatttccag ttttacaaag tgcgcgagat caacaactac caccacgccc 4920
acgacgccta cctgaacgcc gtcgtgggaa ccgccctgat caaaaagtac cctaagctgg 4980
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gcgagcagga aatcggcaag gctaccgcca agtacttctt ctacagcaac atcatgaact 5100
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acctggacga gatcatcgag cagatcagcg agttctccaa gagagtgatc ctggccgacg 5820
ctaatctgga caaagtgctg tccgcctaca acaagcaccg ggataagccc atcagagagc 5880
aggccgagaa tatcatccac ctgtttaccc tgaccaatct gggagcccct gccgccttca 5940
agtactttga caccaccatc gaccggaaga ggtacaccag caccaaagag gtgctggacg 6000
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gaattacgtt aagcatgtaa taattaacat gtaatgcatg acgttattta tgagatgggt 6300
ttttatgatt agagtcccgc aattatacat ttaatacgcg atagaaaaca aaatatagcg 6360
cgcaaactag gataaattat cgcgcgcggt gtcatctatg ttactagatc gggaattcgt 6420
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aatgaatcgg ccaacgcgcg gggagaggcg gtttgcgtat tggctagagc agcttgccaa 6660
catggtggag cacgacactc tcgtctactc caagaatatc aaagatacag tctcagaaga 6720
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tgacgtaagg gatgacgcac aatcccacta tccttcgcaa gaccttcctc tatataagga 7380
agttcatttc atttggagag gacacgctga aatcaccagt ctctctctac aaatctatct 7440
ctctcgagat gagcccagaa cgacgcccgg ccgacatccg ccgtgccacc gaggcggaca 7500
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aggcacgcaa cgcctacgac tggacggccg agtcgaccgt gtacgtctcc ccccgccacc 7740
agcggacggg actgggctcc acgctctaca cccacctgct gaagtccctg gaggcacagg 7800
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aggcgctcgg atatgccccc cgcggcatgc tgcgggcggc cggcttcaag cacgggaact 7920
ggcatgacgt gggtttctgg cagctggact tcagcctgcc ggtaccgccc cgtccggtcc 7980
tgcccgtcac cgagatctga ctcgagtttc tccataataa tgtgtgagta gttcccagat 8040
aagggaatta gggttcctat agggtttcgc tcatgtgttg agcatataag aaacccttag 8100
tatgtatttg tatttgtaaa atacttctat caataaaatt tctaattcct aaaaccaaaa 8160
tccagtacta aaatccagat cccccgaatt aattcggcgt taattcagta cattaaaaac 8220
gtccgcaatg tgttattaag ttgtctaagc gtcaatttgt ttacaccaca atatatcctg 8280
ccaccagcca gccaacagct ccccgaccgg cagctcggca caaaatcacc actcgataca 8340
ggcagcccat cagtccggga cggcgtcagc gggagagccg ttgtaaggcg gcagactttg 8400
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ttgaaaaagc tgttttctgg tatttaaggt tttagaatgc aaggaacagt gaattggagt 8640
tcgtcttgtt ataattagct tcttggggta tctttaaata ctgtagaaaa gaggaaggaa 8700
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<212> DNA
<213> 人工序列(artificial sequence)
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gttaatgtat ggcttgctaa aatactccta aaaatcaagt gggagtagta tacatatcta 960
cagcaaatgt attaggtgag gcatttggct tctctattgt aaggaacaaa taatatcagt 1020
taatgtgaaa atcaatggtt gatattccaa tacattcatg atgtgttatt tatatgtacc 1080
taatattgac tgttgttttt ctccgcaatg accaagatta tttattttat cctctaaagt 1140
gactaattga gttgcttact ttagagaagt tggacccatt aggtgagagc gtggggggaa 1200
ctaatcttga atatacaatc tgagtcttga ttatccaagt atggttgtat gaacaatgtt 1260
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gcataaatta taatttattc tgtttttttt tagggaacaa ctgttgtaga caacttgttg 1440
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cagcataatc tttgaattgt tcctcgtata actaatcaca acagagtacg tgttcttctt 1740
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taattatcaa tgtatttatt taatatttaa attagcttgt caaagtctag catatacata 1860
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<210> 6
<211> 3523
<212> DNA
<213> 人工序列(artificial sequence)
<400> 6
atggcggcga ccatggcgtc caacgccgcg gctgcggcgg cggtgtccct ggaccaggcc 60
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<211> 18554
<212> DNA
<213> 人工序列(artificial sequence)
<400> 7
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cgacgttgta aaacgacggc cagtgccaag cttggatcat gaaccaacgg cctggctgta 300
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gaagaagtaa gataaactgt aggagaaaag catttcgtag tgggccatga agcctttcag 960
gacatgtatt gcagtatggg ccggcccatt acgcaattgg acgacaacaa agactagtat 1020
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tgtgtgtcat acatcttcat agttacgagt ttaagatgga tggaaatatc gatctaggat 3000
aggtatacat gttgatgtgg gttttactga tgcatataca tgatggcata tgcagcatct 3060
attcatatgc tctaaccttg agtacctatc tattataata aacaagtatg ttttataatt 3120
attttgatct tgatatactt ggatgatggc atatgcagca gctatatgtg gattttttta 3180
gccctgcctt catacgctat ttatttgctt ggtactgttt cttttgtcga tgctcaccct 3240
gttgtttggt gttacttctg cagggtacca tgaaacggac agccgacgga agcgagttcg 3300
agtcaccaaa gaagaagcgg aaagtcgaca agaagtacag catcggcctg gacatcggca 3360
ccaactctgt gggctgggcc gtgatcaccg acgagtacaa ggtgcccagc aagaaattca 3420
aggtgctggg caacaccgac cggcacagca tcaagaagaa cctgatcgga gccctgctgt 3480
tcgacagcgg cgaaacagcc gaggccaccc ggctgaagag aaccgccaga agaagataca 3540
ccagacggaa gaaccggatc tgctatctgc aagagatctt cagcaacgag atggccaagg 3600
tggacgacag cttcttccac agactggaag agtccttcct ggtggaagag gataagaagc 3660
acgagcggca ccccatcttc ggcaacatcg tggacgaggt ggcctaccac gagaagtacc 3720
ccaccatcta ccacctgaga aagaaactgg tggacagcac cgacaaggcc gacctgcggc 3780
tgatctatct ggccctggcc cacatgatca agttccgggg ccacttcctg atcgagggcg 3840
acctgaaccc cgacaacagc gacgtggaca agctgttcat ccagctggtg cagacctaca 3900
accagctgtt cgaggaaaac cccatcaacg ccagcggcgt ggacgccaag gccatcctgt 3960
ctgccagact gagcaagagc agacggctgg aaaatctgat cgcccagctg cccggcgaga 4020
agaagaatgg cctgttcgga aacctgattg ccctgagcct gggcctgacc cccaacttca 4080
agagcaactt cgacctggcc gaggatgcca aactgcagct gagcaaggac acctacgacg 4140
acgacctgga caacctgctg gcccagatcg gcgaccagta cgccgacctg tttctggccg 4200
ccaagaacct gtccgacgcc atcctgctga gcgacatcct gagagtgaac accgagatca 4260
ccaaggcccc cctgagcgcc tctatgatca agagatacga cgagcaccac caggacctga 4320
ccctgctgaa agctctcgtg cggcagcagc tgcctgagaa gtacaaagag attttcttcg 4380
accagagcaa gaacggctac gccggctaca ttgacggcgg agccagccag gaagagttct 4440
acaagttcat caagcccatc ctggaaaaga tggacggcac cgaggaactg ctcgtgaagc 4500
tgaacagaga ggacctgctg cggaagcagc ggaccttcga caacggcagc atcccccacc 4560
agatccacct gggagagctg cacgccattc tgcggcggca ggaagatttt tacccattcc 4620
tgaaggacaa ccgggaaaag atcgagaaga tcctgacctt ccgcatcccc tactacgtgg 4680
gccctctggc caggggaaac agcagattcg cctggatgac cagaaagagc gaggaaacca 4740
tcaccccctg gaacttcgag gaagtggtgg acaagggcgc ttccgcccag agcttcatcg 4800
agcggatgac caacttcgat aagaacctgc ccaacgagaa ggtgctgccc aagcacagcc 4860
tgctgtacga gtacttcacc gtgtataacg agctgaccaa agtgaaatac gtgaccgagg 4920
gaatgagaaa gcccgccttc ctgagcggcg agcagaaaaa ggccatcgtg gacctgctgt 4980
tcaagaccaa ccggaaagtg accgtgaagc agctgaaaga ggactacttc aagaaaatcg 5040
agtgcttcga ctccgtggaa atctccggcg tggaagatcg gttcaacgcc tccctgggca 5100
cataccacga tctgctgaaa attatcaagg acaaggactt cctggacaat gaggaaaacg 5160
aggacattct ggaagatatc gtgctgaccc tgacactgtt tgaggacaga gagatgatcg 5220
aggaacggct gaaaacctat gcccacctgt tcgacgacaa agtgatgaag cagctgaagc 5280
ggcggagata caccggctgg ggcaggctga gccggaagct gatcaacggc atccgggaca 5340
agcagtccgg caagacaatc ctggatttcc tgaagtccga cggcttcgcc aacagaaact 5400
tcatgcagct gatccacgac gacagcctga cctttaaaga ggacatccag aaagcccagg 5460
tgtccggcca gggcgatagc ctgcacgagc acattgccaa tctggccggc agccccgcca 5520
ttaagaaggg catcctgcag acagtgaagg tggtggacga gctcgtgaaa gtgatgggcc 5580
ggcacaagcc cgagaacatc gtgatcgaaa tggccagaga gaaccagacc acccagaagg 5640
gacagaagaa cagccgcgag agaatgaagc ggatcgaaga gggcatcaaa gagctgggca 5700
gccagatcct gaaagaacac cccgtggaaa acacccagct gcagaacgag aagctgtacc 5760
tgtactacct gcagaatggg cgggatatgt acgtggacca ggaactggac atcaaccggc 5820
tgtccgacta cgatgtggac gccatcgtgc ctcagagctt tctgaaggac gactccatcg 5880
acaacaaggt gctgaccaga agcgacaaga accggggcaa gagcgacaac gtgccctccg 5940
aagaggtcgt gaagaagatg aagaactact ggcggcagct gctgaacgcc aagctgatta 6000
cccagagaaa gttcgacaat ctgaccaagg ccgagagagg cggcctgagc gaactggata 6060
aggccggctt catcaagaga cagctggtgg aaacccggca gatcacaaag cacgtggcac 6120
agatcctgga ctcccggatg aacactaagt acgacgagaa tgacaagctg atccgggaag 6180
tgaaagtgat caccctgaag tccaagctgg tgtccgattt ccggaaggat ttccagtttt 6240
acaaagtgcg cgagatcaac aactaccacc acgcccacga cgcctacctg aacgccgtcg 6300
tgggaaccgc cctgatcaaa aagtacccta agctggaaag cgagttcgtg tacggcgact 6360
acaaggtgta cgacgtgcgg aagatgatcg ccaagagcga gcaggaaatc ggcaaggcta 6420
ccgccaagta cttcttctac agcaacatca tgaacttttt caagaccgag attaccctgg 6480
ccaacggcga gatccggaag cggcctctga tcgagacaaa cggcgaaacc ggggagatcg 6540
tgtgggataa gggccgggat tttgccaccg tgcggaaagt gctgagcatg ccccaagtga 6600
atatcgtgaa aaagaccgag gtgcagacag gcggcttcag caaagagtct atcctgccca 6660
agaggaacag cgataagctg atcgccagaa agaaggactg ggaccctaag aagtacggcg 6720
gcttcgacag ccccaccgtg gcctattctg tgctggtggt ggccaaagtg gaaaagggca 6780
agtccaagaa actgaagagt gtgaaagagc tgctggggat caccatcatg gaaagaagca 6840
gcttcgagaa gaatcccatc gactttctgg aagccaaggg ctacaaagaa gtgaaaaagg 6900
acctgatcat caagctgcct aagtactccc tgttcgagct ggaaaacggc cggaagagaa 6960
tgctggcctc tgccggcgaa ctgcagaagg gaaacgaact ggccctgccc tccaaatatg 7020
tgaacttcct gtacctggcc agccactatg agaagctgaa gggctccccc gaggataatg 7080
agcagaaaca gctgtttgtg gaacagcaca agcactacct ggacgagatc atcgagcaga 7140
tcagcgagtt ctccaagaga gtgatcctgg ccgacgctaa tctggacaaa gtgctgtccg 7200
cctacaacaa gcaccgggat aagcccatca gagagcaggc cgagaatatc atccacctgt 7260
ttaccctgac caatctggga gcccctgccg ccttcaagta ctttgacacc accatcgacc 7320
ggaagaggta caccagcacc aaagaggtgc tggacgccac cctgatccac cagagcatca 7380
ccggcctgta cgagacacgg atcgacctgt ctcagctggg aggcgactct ggaggatcta 7440
gcggaggctc ctctggcagc gagacaccag gaacaagcga gtcagcaaca ccagagagca 7500
gtggcggcag cagcggcgga tccagcaccc tcaatatcga ggacgagtac aggctgcatg 7560
agacatcaaa ggagccggac gtgtccctcg gcagcacatg gctgtctgat ttcccacagg 7620
cctgggcgga gacaggcggc atgggcctcg ccgtgcgcca ggcgccgctc atcattccac 7680
tgaaggcgac ctcaacaccg gtgtccatca agcagtaccc aatgtctcag gaggcaaggc 7740
tgggcatcaa gccacatatt cagaggctcc tggaccaggg cattctggtc ccttgccagt 7800
ctccgtggaa cacccctctc ctgccggtga agaagcctgg cacaaatgac tacaggccgg 7860
tccaggatct cagggaggtg aacaagcgcg tcgaggacat ccatccgacc gtgccgaacc 7920
catacaatct cctctcaggc ctgccgccaa gccaccagtg gtacaccgtc ctcgacctga 7980
aggatgcgtt cttctgcctc aggctgcacc caacatcaca gcctctcttc gccttcgagt 8040
ggcgcgatcc agagatgggc atttccggac agctcacctg gacaaggctg ccacagggct 8100
tcaagaacag ccctaccctc ttcaatgagg cgctccatcg ggacctggcc gatttccgca 8160
tccagcaccc tgacctcatt ctcctgcagt atgtggacga tctcctgctc gccgcgacat 8220
ccgagctgga ttgccagcag ggcacccgcg cgctgctcca gacactggga aatctgggct 8280
accgggcatc agcgaagaag gcacagatct gccagaagca ggtgaagtac ctcggctacc 8340
tgctcaagga gggacagagg tggctgaccg aggcaaggaa ggagacagtc atgggccagc 8400
ctaccccgaa gacacctcgg cagctcaggg agttcctggg caaggcgggc ttctgccgcc 8460
tcttcatccc aggcttcgcg gagatggcgg cgccactcta ccctctgacc aagccgggca 8520
cactgttcaa ctggggccca gaccagcaga aggcgtacca ggagattaag caggccctgc 8580
tcaccgcacc tgccctcggc ctgccggacc tcacaaagcc attcgagctg ttcgtggatg 8640
agaagcaggg ctacgcgaag ggagtcctca cccagaagct gggaccgtgg aggcgcccag 8700
tggcctacct ctccaagaag ctggacccgg tggcggccgg atggcctccg tgcctgagga 8760
tggtggcggc cattgccgtc ctcaccaagg atgccggcaa gctgacaatg ggccagcctc 8820
tcgtgattct ggcgccgcat gcggtggagg cgctcgtcaa gcagccacct gataggtggc 8880
tgagcaacgc gcgcatgacc cactaccagg ccctgctcct ggacacagat agggtccagt 8940
tcggaccagt ggtggcactc aatcctgcca cactgctgcc actccctgag gagggcctgc 9000
agcataactg cctcgacatc ctggcggagg cgcacggcac ccgcccagac ctcacagatc 9060
agccgctgcc agacgccgat catacctggt acacagatgg ctcctccctc ctccaggagg 9120
gccagaggaa ggccggagca gccgtgacca cagagacaga ggtcatctgg gccaaggcgc 9180
tcccggccgg cacctccgca cagcgggcgg agctgattgc cctgacacag gcgctcaaga 9240
tggccgaggg caagaagctg aatgtgtaca ccgactcacg ctacgccttc gcgacagccc 9300
acatccacgg cgagatctac aggaggaggg gatggctcac atctgagggc aaggagatca 9360
agaacaagga tgagattctc gcgctcctga aggccctctt cctgcctaag aggctgtcca 9420
tcattcactg cccaggccac cagaagggac actcagccga ggccaggggc aataggatgg 9480
cagaccaggc ggccaggaag gcagcgatta ccgagacacc agatacctca acactcctga 9540
tcgagaactc atctccttct ggaggttcaa aaagaaccgc cgacggcagc gagttcgagc 9600
ccaagaagaa gaggaaagtc taggttaacc tgattgatcg atagagctcg aatttccccg 9660
atcgttcaaa catttggcaa taaagtttct taagattgaa tcctgttgcc ggtcttgcga 9720
tgattatcat ataatttctg ttgaattacg ttaagcatgt aataattaac atgtaatgca 9780
tgacgttatt tatgagatgg gtttttatga ttagagtccc gcaattatac atttaatacg 9840
cgatagaaaa caaaatatag cgcgcaaact aggataaatt atcgcgcgcg gtgtcatcta 9900
tgttactaga tcgggaattc gtaatcatgg tcatagctgt ttcctgtgtg aaattgttat 9960
ccgctcacaa ttccacacaa catacgagcc ggaagcataa agtgtaaagc ctggggtgcc 10020
taatgagtga gctaactcac attaattgcg ttgcgctcac tgcccgcttt ccagtcggga 10080
aacctgtcgt gccagctgca ttaatgaatc ggccaacgcg cggggagagg cggtttgcgt 10140
attggctaga gcagcttgcc aacatggtgg agcacgacac tctcgtctac tccaagaata 10200
tcaaagatac agtctcagaa gaccaaaggg ctattgagac ttttcaacaa agggtaatat 10260
cgggaaacct cctcggattc cattgcccag ctatctgtca cttcatcaaa aggacagtag 10320
aaaaggaagg tggcacctac aaatgccatc attgcgataa aggaaaggct atcgttcaag 10380
atgcctctgc cgacagtggt cccaaagatg gacccccacc cacgaggagc atcgtggaaa 10440
aagaagacgt tccaaccacg tcttcaaagc aagtggattg atgtgataac atggtggagc 10500
acgacactct cgtctactcc aagaatatca aagatacagt ctcagaagac caaagggcta 10560
ttgagacttt tcaacaaagg gtaatatcgg gaaacctcct cggattccat tgcccagcta 10620
tctgtcactt catcaaaagg acagtagaaa aggaaggtgg cacctacaaa tgccatcatt 10680
gcgataaagg aaaggctatc gttcaagatg cctctgccga cagtggtccc aaagatggac 10740
ccccacccac gaggagcatc gtggaaaaag aagacgttcc aaccacgtct tcaaagcaag 10800
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aagaccttcc tctatataag gaagttcatt tcatttggag aggacacgct gaaatcacca 10920
gtctctctct acaaatctat ctctctcgag ctttcgcaga tcccgggggg caatgagata 10980
tgaaaaagcc tgaactcacc gcgacgtctg tcgagaagtt tctgatcgaa aagttcgaca 11040
gcgtctccga cctgatgcag ctctcggagg gcgaagaatc tcgtgctttc agcttcgatg 11100
taggagggcg tggatatgtc ctgcgggtaa atagctgcgc cgatggtttc tacaaagatc 11160
gttatgttta tcggcacttt gcatcggccg cgctcccgat tccggaagtg cttgacattg 11220
gggagtttag cgagagcctg acctattgca tctcccgccg tgcacagggt gtcacgttgc 11280
aagacctgcc tgaaaccgaa ctgcccgctg ttctacaacc ggtcgcggag gctatggatg 11340
cgatcgctgc ggccgatctt agccagacga gcgggttcgg cccattcgga ccgcaaggaa 11400
tcggtcaata cactacatgg cgtgatttca tatgcgcgat tgctgatccc catgtgtatc 11460
actggcaaac tgtgatggac gacaccgtca gtgcgtccgt cgcgcaggct ctcgatgagc 11520
tgatgctttg ggccgaggac tgccccgaag tccggcacct cgtgcacgcg gatttcggct 11580
ccaacaatgt cctgacggac aatggccgca taacagcggt cattgactgg agcgaggcga 11640
tgttcgggga ttcccaatac gaggtcgcca acatcttctt ctggaggccg tggttggctt 11700
gtatggagca gcagacgcgc tacttcgagc ggaggcatcc ggagcttgca ggatcgccac 11760
gactccgggc gtatatgctc cgcattggtc ttgaccaact ctatcagagc ttggttgacg 11820
gcaatttcga tgatgcagct tgggcgcagg gtcgatgcga cgcaatcgtc cgatccggag 11880
ccgggactgt cgggcgtaca caaatcgccc gcagaagcgc ggccgtctgg accgatggct 11940
gtgtagaagt actcgccgat agtggaaacc gacgccccag cactcgtccg agggcaaaga 12000
aatagagtag atgccgaccg gatctgtcga tcgacaagct cgagtttctc cataataatg 12060
tgtgagtagt tcccagataa gggaattagg gttcctatag ggtttcgctc atgtgttgag 12120
catataagaa acccttagta tgtatttgta tttgtaaaat acttctatca ataaaatttc 12180
taattcctaa aaccaaaatc cagtactaaa atccagatcc cccgaattaa ttcggcgtta 12240
attcagtaca ttaaaaacgt ccgcaatgtg ttattaagtt gtctaagcgt caatttgttt 12300
acaccacaat atatcctgcc accagccagc caacagctcc ccgaccggca gctcggcaca 12360
aaatcaccac tcgatacagg cagcccatca gtccgggacg gcgtcagcgg gagagccgtt 12420
gtaaggcggc agactttgct catgttaccg atgctattcg gaagaacggc aactaagctg 12480
ccgggtttga aacacggatg atctcgcgga gggtagcatg ttgattgtaa cgatgacaga 12540
gcgttgctgc ctgtgatcac cgcggtttca aaatcggctc cgtcgatact atgttatacg 12600
ccaactttga aaacaacttt gaaaaagctg ttttctggta tttaaggttt tagaatgcaa 12660
ggaacagtga attggagttc gtcttgttat aattagcttc ttggggtatc tttaaatact 12720
gtagaaaaga ggaaggaaat aataaatggc taaaatgaga atatcaccgg aattgaaaaa 12780
actgatcgaa aaataccgct gcgtaaaaga tacggaagga atgtctcctg ctaaggtata 12840
taagctggtg ggagaaaatg aaaacctata tttaaaaatg acggacagcc ggtataaagg 12900
gaccacctat gatgtggaac gggaaaagga catgatgcta tggctggaag gaaagctgcc 12960
tgttccaaag gtcctgcact ttgaacggca tgatggctgg agcaatctgc tcatgagtga 13020
ggccgatggc gtcctttgct cggaagagta tgaagatgaa caaagccctg aaaagattat 13080
cgagctgtat gcggagtgca tcaggctctt tcactccatc gacatatcgg attgtcccta 13140
tacgaatagc ttagacagcc gcttagccga attggattac ttactgaata acgatctggc 13200
cgatgtggat tgcgaaaact gggaagaaga cactccattt aaagatccgc gcgagctgta 13260
tgatttttta aagacggaaa agcccgaaga ggaacttgtc ttttcccacg gcgacctggg 13320
agacagcaac atctttgtga aagatggcaa agtaagtggc tttattgatc ttgggagaag 13380
cggcagggcg gacaagtggt atgacattgc cttctgcgtc cggtcgatca gggaggatat 13440
cggggaagaa cagtatgtcg agctattttt tgacttactg gggatcaagc ctgattggga 13500
gaaaataaaa tattatattt tactggatga attgttttag tacctagaat gcatgaccaa 13560
aatcccttaa cgtgagtttt cgttccactg agcgtcagac cccgtagaaa agatcaaagg 13620
atcttcttga gatccttttt ttctgcgcgt aatctgctgc ttgcaaacaa aaaaaccacc 13680
gctaccagcg gtggtttgtt tgccggatca agagctacca actctttttc cgaaggtaac 13740
tggcttcagc agagcgcaga taccaaatac tgtccttcta gtgtagccgt agttaggcca 13800
ccacttcaag aactctgtag caccgcctac atacctcgct ctgctaatcc tgttaccagt 13860
ggctgctgcc agtggcgata agtcgtgtct taccgggttg gactcaagac gatagttacc 13920
ggataaggcg cagcggtcgg gctgaacggg gggttcgtgc acacagccca gcttggagcg 13980
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cagcaacgcg gcctttttac ggttcctggc cttttgctgg ccttttgctc acatgttctt 14280
tcctgcgtta tcccctgatt ctgtggataa ccgtattacc gcctttgagt gagctgatac 14340
cgctcgccgc agccgaacga ccgagcgcag cgagtcagtg agcgaggaag cggaagagcg 14400
cctgatgcgg tattttctcc ttacgcatct gtgcggtatt tcacaccgca tatggtgcac 14460
tctcagtaca atctgctctg atgccgcata gttaagccag tatacactcc gctatcgcta 14520
cgtgactggg tcatggctgc gccccgacac ccgccaacac ccgctgacgc gccctgacgg 14580
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cagttatgca caggccaggc gggttttaag agttttaata agttttaaag agttttaggc 14940
ggaaaaatcg ccttttttct cttttatatc agtcacttac atgtgtgacc ggttcccaat 15000
gtacggcttt gggttcccaa tgtacgggtt ccggttccca atgtacggct ttgggttccc 15060
aatgtacgtg ctatccacag gaaagagtcc ttttcgacct ttttcccctg ctagggcaat 15120
ttgccctagc atctgctccg tacattagga accggcggat gcttcgccct cgatcaggtt 15180
gcggtagcgc atgactagga tcgggccagc ctgccccgcc tcctccttca aatcgtactc 15240
cggcaggtca tttgacccga tcagcttgcg cacggtgaaa cagaacttct tgaactctcc 15300
ggcgctgcca ctgcgttcgt agatcgtctt gaacaaccat ctggcttctg ccttgcctgc 15360
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agctagctcg atctcgatgt actccggccg cccggtttcg ctctttacga tcttgtagcg 15540
gctaatcaag gcttcaccct cggataccgt caccaggcgg ccgttcttgg ccttcttcgt 15600
acgctgcatg gcaacgtgcg tggtgtttaa ccgaatgcag gtttctacca ggtcgtcttt 15660
ctgctttccg ccatcggctc gccggcagaa cttgagtacg tccgcaacgt gtggacggaa 15720
cacgcggccg ggcttgtctc ccttcccttc ccggtatcgg ttcatggatt cggttagatg 15780
ggaaaccgcc atcagtacca ggtcgtaatc ccacacactg gccatgccgg ccggccctgc 15840
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gtcatagagc atcggaacga aaaaatctgg ttgctcgtcg cccttgggcg gcttcctaat 16020
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ttgccacgat tcaccggggc gtgcttctgc ctcgatgcgt tgccgctggg cggcctgcgc 16140
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ggcagacaac ccagccgctt acgcctggcc aaccgcccgt tcctccacac atggggcatt 16320
ccacggcgtc ggtgcctggt tgttcttgat tttccatgcc gcctccttta gccgctaaaa 16380
ttcatctact catttattca tttgctcatt tactctggta gctgcgcgat gtattcagat 16440
agcagctcgg taatggtctt gccttggcgt accgcgtaca tcttcagctt ggtgtgatcc 16500
tccgccggca actgaaagtt gacccgcttc atggctggcg tgtctgccag gctggccaac 16560
gttgcagcct tgctgctgcg tgcgctcgga cggccggcac ttagcgtgtt tgtgcttttg 16620
ctcattttct ctttacctca ttaactcaaa tgagttttga tttaatttca gcggccagcg 16680
cctggacctc gcgggcagcg tcgccctcgg gttctgattc aagaacggtt gtgccggcgg 16740
cggcagtgcc tgggtagctc acgcgctgcg tgatacggga ctcaagaatg ggcagctcgt 16800
acccggccag cgcctcggca acctcaccgc cgatgcgcgt gcctttgatc gcccgcgaca 16860
cgacaaaggc cgcttgtagc cttccatccg tgacctcaat gcgctgctta accagctcca 16920
ccaggtcggc ggtggcccat atgtcgtaag ggcttggctg caccggaatc agcacgaagt 16980
cggctgcctt gatcgcggac acagccaagt ccgccgcctg gggcgctccg tcgatcacta 17040
cgaagtcgcg ccggccgatg gccttcacgt cgcggtcaat cgtcgggcgg tcgatgccga 17100
caacggttag cggttgatct tcccgcacgg ccgcccaatc gcgggcactg ccctggggat 17160
cggaatcgac taacagaaca tcggccccgg cgagttgcag ggcgcgggct agatgggttg 17220
cgatggtcgt cttgcctgac ccgcctttct ggttaagtac agcgataacc ttcatgcgtt 17280
ccccttgcgt atttgtttat ttactcatcg catcatatac gcagcgaccg catgacgcaa 17340
gctgttttac tcaaatacac atcacctttt tagacggcgg cgctcggttt cttcagcggc 17400
caagctggcc ggccaggccg ccagcttggc atcagacaaa ccggccagga tttcatgcag 17460
ccgcacggtt gagacgtgcg cgggcggctc gaacacgtac ccggccgcga tcatctccgc 17520
ctcgatctct tcggtaatga aaaacggttc gtcctggccg tcctggtgcg gtttcatgct 17580
tgttcctctt ggcgttcatt ctcggcggcc gccagggcgt cggcctcggt caatgcgtcc 17640
tcacggaagg caccgcgccg cctggcctcg gtgggcgtca cttcctcgct gcgctcaagt 17700
gcgcggtaca gggtcgagcg atgcacgcca agcagtgcag ccgcctcttt cacggtgcgg 17760
ccttcctggt cgatcagctc gcgggcgtgc gcgatctgtg ccggggtgag ggtagggcgg 17820
gggccaaact tcacgcctcg ggccttggcg gcctcgcgcc cgctccgggt gcggtcgatg 17880
attagggaac gctcgaactc ggcaatgccg gcgaacacgg tcaacaccat gcggccggcc 17940
ggcgtggtgg tgtcggccca cggctctgcc aggctacgca ggcccgcgcc ggcctcctgg 18000
atgcgctcgg caatgtccag taggtcgcgg gtgctgcggg ccaggcggtc tagcctggtc 18060
actgtcacaa cgtcgccagg gcgtaggtgg tcaagcatcc tggccagctc cgggcggtcg 18120
cgcctggtgc cggtgatctt ctcggaaaac agcttggtgc agccggccgc gtgcagttcg 18180
gcccgttggt tggtcaagtc ctggtcgtcg gtgctgacgc gggcatagcc cagcaggcca 18240
gcggcggcgc tcttgttcat ggcgtaatgt ctccggttct agtcgcaagt attctacttt 18300
atgcgactaa aacacgcgac aagaaaacgc caggaaaagg gcagggcggc agcctgtcgc 18360
gtaacttagg acttgtgcga catgtcgttt tcagaagacg gctgcactga acgtcagaag 18420
ccgactgcac tatagcagcg gaggggttgg atcaaagtac tttgatcccg aggggaaccc 18480
tgtggttggc atgcacatac aaatggacga acggataaac cttttcacgc ccttttaaat 18540
atccgttatt ctaa 18554
<210> 8
<211> 3523
<212> DNA
<213> 人工序列(artificial sequence)
<400> 8
atggcggcga ccatggcgtc caacgccgcg gctgcggcgg cggtgtccct ggaccaggcc 60
gtggcggcgt cggcggcgtt ctcgtcgcgg aagcagctgc ggctgcccgc cgcggcgcgc 120
ggggggatgc gggtgcgggt gcgggcgcgg gggcggcggg aggcggtggt ggtggcgtcc 180
gcgtcgtcgt cgtcggtggc agcgccggcg gcgaaggcgg aggagatcgt gctccagccc 240
atcagggaga tctccggggc ggttcagctg ccagggtcca agtcgctctc caacaggatc 300
ctcctcctct ccgccctctc cgaggtgaga cgcggatccc ttcctcttgc gtgaattcca 360
tttctggaga tgagatttta gggggtttat taggtgaggt ggctgtgttt gtgaaatcct 420
aggaattatc tctcaagtca atctaacgat gagatataac tgaggttctg gttttaatca 480
cacactcata taaccaattt attgaaacat tttggtttgg cataagaaac tgcttacgaa 540
ggtatgatat cctcctacat gtcaggctac taaattttca cgacggtatg atccactcaa 600
aacaagtttc ttaacgagtc tggtgaggtc tgttatgaaa tttgtgtaaa ctaaggcaac 660
tttggaggtt tcgcactgta ccaatgttat gtttgaacat tttgcaagca gtgctttctc 720
ccaaaattat gcaattttga ggctcctcta catcattata attccccaat acattgctct 780
ttattcttaa tagctttgat cgcgaaattt aacattttaa ttcttgagct gttattttgt 840
agcatcagtt tatcatgagc catgtttggt actaaatata caatcccttg ggtttatttg 900
tttccaagca tgtcattaac ttatcttaat gtggacaaga aactgatgcc tgcttacatt 960
gctattattt caagcgggta ttgatccttt gacatgtgat tgatcatttt tttttctctg 1020
gttattaggg cacaacagtg gtggacaact tgctgaacag tgaggatgtt cactacatgc 1080
ttgaggccct gaaagccctc gggctctctg tggaagcaga taaagttgca aaaagagctg 1140
tagtcgttgg ctgtggtggc aagtttcctg ttgagaagga tgcgaaagag gaagtgcaac 1200
tcttcttggg gaacgctgga attgcaatgc gatcattgac agcagccgtg actgctgctg 1260
gtggaaatgc aacgtatgtt ttttttttta atgtttatga aaatatgtat ggaattcatg 1320
gggtatgttt tatgaccttt ttctttacca tcagttatgt gcttgatgga gtgccacgaa 1380
tgagggagag accgattggt gacttggttg tcgggttgaa acaacttggt gcggatgtcg 1440
actgtttcct tggcactgaa tgcccacctg ttcgtgtcaa gggaattgga ggacttcctg 1500
gtggcaaggt tagttactcc taaactgcat cctttgtact tctgtatgca cctcaattct 1560
ttgtcaacct tctgcattta taaggaacat tctatgatgc aattcgacct tacactgcac 1620
agtaacttga aatgtttcat gcttaatcaa tatgccatat tcctgccaag ctcaagcgag 1680
caatatttgt ttgaatttgg taccatattt ttgtatattt gggcattcct ttttggtctt 1740
gatgtcttct tttgaattag catttaactg aattacactc aacaggttaa gctctctggt 1800
tccatcagca gtcagtactt gagtgccttg ctgatggctg ctcctttggc ccttggggat 1860
gtggagatcg aaatcattga caaactaatc tccattcctt acgttgaaat gacattgaga 1920
ttgatggagc gttttggtgt gaaggcagag cattctgata gttgggacag attctatatt 1980
aagggagggc agaagtacaa gtaagcttct acctgcctta ctgagctgaa ttattcgggt 2040
gtttatgatt aactccctaa actaaccctt tttcttttct ttggcattga cagatctcct 2100
ggaaatgcct atgttgaagg tgatgcctca agcgcgagct atttcttggc tggtgctgca 2160
atcactggag gcactgtgac agttcaaggt tgtggtacga ccagtttgca ggtataactg 2220
tagtgcctgt tttgacattc taccgtttag tcaagtttag tcagtagtca catattcaga 2280
atatagcaca atctgtatta tgccactgtt aatcaaatac gcttgaccta gagagtgcta 2340
tataccctag cttaatcttc aaactaaaca gttctcttgt ggcttgctgt gctgttatgt 2400
tccctgacct acatgttaat attacagggt gatgtcaaat ttgctgaggt acttgagatg 2460
atgggagcaa aggttacatg gactgacacc agtgtaaccg taactggtcc accacgtgag 2520
ccttatggga agaaacacct gaaagctgtt gatgtcaaca tgaacaaaat gcctgatgtt 2580
gccatgaccc ttgccgttgt tgcactcttc gctgatggtc caactgctat cagagatggt 2640
aaacattaag gcctattata cctgttctat catactagca attactgctt agcattgtga 2700
caaaacaaat aaccaaactt tcttcaaaat aacttagaaa tataagaaag gttcgttttg 2760
tgtggtaaac agtactactg tagtttcagc tatgaagttt gctgctggca attttctgaa 2820
cggtttcagc taaattgcat gtttgttcat catacttatc cattgtcttc cacagtggct 2880
tcctggagag taaaggaaac cgaaaggatg gttgcaattc ggaccgagct aacaaaggta 2940
aattcattag gtcccgtgtc ctttcattct tcaagtagtt tgttcataag ttgaattctc 3000
cttcaatgat gtttaaattc atcatcttct tttttggtgt tgtgccagct gggagcatcg 3060
gttgaagaag gtcctgacta ctgcatcatc accccaccgg agaagctgaa catcacggca 3120
atcgacacct acgatgatca caggatggcc atggccttct ccctcgctgc ctgcgccgac 3180
gtgcccgtga cgatcaggga ccctggttgc acccgcaaga ccttccccaa ctacttcgac 3240
gttctaagca ctttcgtcag gaactgaact gagcttttaa aagagtgagg tctaggttct 3300
gttgtctgtc tgtccatcat ccatgtgttg actgttgagg gaactcgttt cttcttttct 3360
tcacgagatg agtttttgtg tgcctgtaat actagtttgt agcaaaggct gcgttacata 3420
aggtgatgag aattgaggta aaatgagatc tgtacactaa attcattcag actgttttgg 3480
cataaagaat aatttggcct tctgcgattt cagaagctat aaa 3523

Claims (5)

1.一种改良植物的方法，其特征在于，所述的方法包括步骤：
(a) 提供一含有n个拷贝EPSPS基因的植物细胞，利用基因工程改造所述植物细胞，从而使所述植物细胞中的部分而非全部的EPSPS基因所对应的EPSPS酶保守区SEQ ID NO.1中的苏氨酸（T）和脯氨酸（P）发生突变，并且所述突变指一个EPSPS产生TIPS修饰；
其中，n为4；和
(b) 将步骤(a)中的植物细胞再生成植株；
(c) 将步骤(b)获得的植株进行授精，即自花授粉，从而获得纯合型植株；
所述苏氨酸（T）突变为异亮氨酸（I），所述脯氨酸（P）突变为丝氨酸(S)，所述方法使部分突变EPSPS可以稳定遗传，所述的植物为水稻或大豆，所述方法改良植物耐受除草剂的性能。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤(a)中，利用基因编辑技术改造所述植物细胞，从而使所述植物细胞中的EPSPS基因所对应的EPSPS酶保守区（SEQ ID NO.1，L F LG N A G T A M R P L）中的苏氨酸（T）和脯氨酸（P）发生突变。
3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述的基因编辑技术选自下组：CRISPR基因编辑体系、易错PCR、基因重组、TALEN、ZFN、或其组合。
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述改良为提高抗除草剂特性。
5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的除草剂为草甘膦。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN117487847A (zh) * 2023-10-31 2024-02-02 中国热带农业科学院橡胶研究所 一种获得橡胶树纯合基因编辑植株的方法

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105829536A (zh) * 2013-08-22 2016-08-03 纳幕尔杜邦公司 用于在不掺入选择性转基因标记的情况下，在植物基因组中产生基因修饰的方法，以及用于这种方法的组合物
CN106467909A (zh) * 2015-08-14 2017-03-01 中国科学院遗传与发育生物学研究所 一种通过核苷酸定点替换获得抗草甘膦水稻的方法
CN111139254A (zh) * 2020-01-15 2020-05-12 吉林农业大学 大豆GmEPSPS1和GmEPSPS2定向突变修饰基因及其克隆方法和应用

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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU2015288157A1 (en) * 2014-07-11 2017-01-19 E. I. Du Pont De Nemours And Company Compositions and methods for producing plants resistant to glyphosate herbicide
CA3029271A1 (en) * 2016-06-28 2018-01-04 Cellectis Altering expression of gene products in plants through targeted insertion of nucleic acid sequences

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105829536A (zh) * 2013-08-22 2016-08-03 纳幕尔杜邦公司 用于在不掺入选择性转基因标记的情况下，在植物基因组中产生基因修饰的方法，以及用于这种方法的组合物
CN106467909A (zh) * 2015-08-14 2017-03-01 中国科学院遗传与发育生物学研究所 一种通过核苷酸定点替换获得抗草甘膦水稻的方法
CN111139254A (zh) * 2020-01-15 2020-05-12 吉林农业大学 大豆GmEPSPS1和GmEPSPS2定向突变修饰基因及其克隆方法和应用

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Development of non-transgenic glyphosate tolerant wheat by TILLING;Charles P. Moehs等;《PLOS ONE》;第16卷(第9期);摘要，第4页第2段到第5页第1段，第6页最后1段，第8页最后1段到第9页最后1段，第10页第2段，第11页第1段第8-14行；图2 *

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