CN109580890A - 一种猪肉中硝基呋喃类药物的测定方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种猪肉中硝基呋喃类药物的测定方法,包括以下步骤:(1)将均质猪肉样品加入离心管中,加入甲醇与水的混合溶剂涡旋混合,离心,得固体沉淀;(2)将步骤(1)的固体沉淀中加入内标液,混匀后加入酸性试剂和衍生剂进行衍生化处理;(3)对步骤(2)衍生化后的溶液调节pH值至中性,加入正己烷摇匀、离心,将清液加入盐包管中,依次用乙腈、甲酸水溶液离心,得提取液;(4)提取液过滤,将滤液上机测试。本发明的测定方法不需要将样品过固相萃取柱,也不需要使用乙酸乙酯萃取吹干等步骤,前处理简单方便,缩短了前处理时间,提高检测效率,而且该方法得到的检测数据稳定、可靠。
Description
技术领域
本发明涉及食品中有机化合物的检测方法,更具体地说,涉及一种猪肉中硝基呋喃类药物的测定方法。
背景技术
猪肉又名豚肉,是主要家畜之一、猪科动物家猪的肉。其性味甘咸平,含有丰富的蛋白质及脂肪、碳水化合物、钙、铁、磷等营养成分。猪肉是日常生活的主要副食品,具有补虚强身,滋阴润燥、丰肌泽肤的作用。凡病后体弱、产后血虚、面黄赢瘦者,皆可用之作营养滋补之品。
因此,为了保证猪肉安全以及满足检测的要求,建立能够准确、高效测定猪肉中硝基呋喃类药物的检测方法十分重要。现有技术中,大多按照国标GB/T 21331-2007对猪肉进行处理并检测其硝基呋喃类药物的含量,在处理时需要将样品过固相萃取柱、使用乙酸乙酯萃取吹干等步骤,前处理时间长、检测效率低。
发明内容
本发明的目的是提供一种猪肉中硝基呋喃类药物的测定方法,以解决现有的国标GB/T 21331-2007对食品进行处理并检测其硝基呋喃类药物的含量时前处理时间长、检测效率低的技术问题,大大缩短了前处理的时间,且检测结果稳定、可靠。
本发明的目的通过以下技术方案来实现:一种猪肉中硝基呋喃类药物的测定方法,包括以下步骤:
(1)将均质猪肉样品加入离心管中,加入甲醇与水的混合溶剂涡旋混合,离心,得固体沉淀;
(2)将步骤(1)的固体沉淀中加入内标液,混匀后加入酸性试剂和衍生剂进行衍生化处理;
(3)对步骤(2)衍生化后的溶液调节pH值至中性,加入正己烷摇匀、离心,将清液加入盐包管中,依次用乙腈、甲酸水溶液离心,得提取液;
(4)对步骤(3)得到的提取液过滤,将滤液上机测试。
进一步地,步骤(1)中所述甲醇与水的体积比为1:1。
进一步地,所述步骤(2)中酸性试剂为盐酸溶液,衍生剂为邻硝基苯甲醛。
进一步地,所述步骤(3)中调节pH值的方法为:预先加入盐酸溶液,然后加入衍生化后的溶液,再加入磷酸盐缓冲液,再逐次加入氢氧化钠溶液,测定每次加入氢氧化钠溶液后的pH值,调节到pH为7.4为止。
进一步地,所述步骤(3)中,盐包管内的物质为氯化钠。
进一步地,所述均质猪肉样品与所述氯化钠的质量比为2:4~6。
进一步地,所述均质猪肉样品与所述氯化钠的质量比为2:5。
进一步地,所述步骤(1)中离心的转速为4500~5000r/min。
进一步地,所述步骤(3)中,调节pH值后加入正己烷,摇均,在4500~5000r/min的转速下离心8~10min,取下清液至盐包管中,再加入乙腈,在4500~5000r/min的转速下离心8~10min,取上清液加入甲酸水溶液,在14000~15000r/min的转速下离心3~5min。
更进一步地,所述步骤(3)中,调节pH值后加入正己烷,摇均,在,4750r/min的转速下离心10min,取下清液至盐包管中,再加入乙腈,在4750r/min的转速下离心10min,取上清液加入甲酸水溶液,在15000r/min的转速下离心3min。
与现有技术相比,本发明具有的有益效果为:
本发明的方法不需要将样品过固相萃取柱,也不需要使用乙酸乙酯萃取吹干等步骤,前处理简单方便,大大缩短了前处理时间,提高检测效率,而且该方法得到的检测数据稳定、可靠。
具体实施方式
实施例1
称取2.00g均质猪肉样品于50mL离心管中,加入10mL甲醇和水的混合溶剂(甲醇与水的体积比为1:1),漩涡10min,在4750r/min的转速下离心5min,弃去上清液得固体沉淀,在固体沉淀中加入内标液100μL,再加入10mL盐酸溶液、100μL邻硝基苯甲醛衍生剂,再涡旋10min,置于37℃水浴震荡16h。
取出溶液,放至室温,预先在空白离心管加入10mL盐酸溶液,再加入溶液、2mL磷酸盐缓冲液,逐次加入氢氧化钠溶液,测定每次加入氢氧化钠溶液后的pH值,调节到pH为7.4,轻微摇均,加入15mL正己烷,摇均,在4750r/min的转速下离心10min。取下清液6.50mL,至装有5g氯化钠的盐包管中,再加入2.50mL乙腈,上下振摇,在4750r/min的转速下离心10min,取上清液0.70mL至2mL离心管,再加入0.70mL甲酸水溶液,摇均,15000r/min离心3min,取上清液过滤,将滤液上机测试。
实施例2
称取2.00g均质猪肉样品于50mL离心管中,加入10mL甲醇和水的混合溶剂(甲醇与水的体积比为1:1),漩涡10min,在4750r/min的转速下离心5min,弃去上清液得固体沉淀,在固体沉淀中加入内标液100μL,再加入10mL盐酸溶液、100μL邻硝基苯甲醛衍生剂,再涡旋10min,置于37℃水浴震荡16h。
取出溶液,放至室温,预先在空白离心管加入10mL盐酸溶液,再加入溶液、2mL磷酸盐缓冲液,逐次加入氢氧化钠溶液,测定每次加入氢氧化钠溶液后的pH值,调节到pH为7.4,轻微摇均,加入15mL正己烷,摇均,在5000r/min的转速下离心8min。取下清液6.50mL,至装有4g氯化钠的盐包管中,再加入2.50mL乙腈,上下振摇,在5000r/min的转速下离心8min,取上清液0.70mL至2mL离心管,再加入0.70mL甲酸水溶液,摇均,15000r/min离心3min,取上清液过滤,将滤液上机测试。
实施例3
称取2.00g均质猪肉样品于50mL离心管中,加入10mL甲醇和水的混合溶剂(甲醇与水的体积比为1:1),漩涡10min,在4750r/min的转速下离心5min,弃去上清液得固体沉淀,在固体沉淀中加入内标液100μL,再加入10mL盐酸溶液、100μL邻硝基苯甲醛衍生剂,再涡旋10min,置于37℃水浴震荡16h。
取出溶液,放至室温,预先在空白离心管加入10mL盐酸溶液,再加入溶液、2mL磷酸盐缓冲液,逐次加入氢氧化钠溶液,测定每次加入氢氧化钠溶液后的pH值,调节到pH为7.4,轻微摇均,加入15mL正己烷,摇均,在4500r/min的转速下离心10min。取下清液6.50mL,至装有6g氯化钠的盐包管中,再加入2.50mL乙腈,上下振摇,在4750r/min的转速下离心10min,取上清液0.70mL至2mL离心管,再加入0.70mL甲酸水溶液,摇均,14000r/min离心5min,取上清液过滤,将滤液上机测试。
实施例1~3所用的检测仪器为安捷伦1290-6490三重四极杆液相质谱联用仪,其具体检测条件如表1所示。
表1
实施例1~3中内标液的配置方法为:取AOZ-D4、AMOZ-D5、AHD-13C、SCA-HCl-13C,15N2各2.00mg,用乙腈分别溶解至2.0mL(放置-18℃冰箱内有限期为3个月),得到浓度为1mg/mL的内标储备液。取上述内标储备液各0.10mL,至10mL量瓶,用乙腈稀释至刻度,浓度均为10μg/mL。再取稀释液0.50mL至10mL量瓶,用乙腈稀释至刻度(现用现配)。浓度均为:500ng/mL。内标液中AOZ-D4、AMOZ-D5、AHD-13C、SCA-HCl-13C,15N2的体积为1:1:1:1。
取6个猪肉样品使用本发明的检测方法进行检测,各样品中呋喃类药物的回收率以及精密度如表2所示。
表2
表2中的实验相关数据说明,样品的重现性好,精密度在标准要求的10%以下,该方法得到的检测数据稳定、可靠。
以上实施例为本发明的部分实施方式,并不限制于本发明。对本领域技术人员来说,在不脱离本发明原理的前提下做出的若干改进和变型,也应视为本发明的保护范围。
Claims (10)
1.一种猪肉中硝基呋喃类药物的测定方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)将均质猪肉样品加入离心管中,加入甲醇与水的混合溶剂涡旋混合,离心,得固体沉淀;
(2)将步骤(1)的固体沉淀中加入内标液,混匀后加入酸性试剂和衍生剂进行衍生化处理;
(3)对步骤(2)衍生化后的溶液调节pH值至中性,加入正己烷摇匀、离心,将清液加入盐包管中,依次用乙腈、甲酸水溶液离心,得提取液;
(4)对步骤(3)得到的提取液过滤,将滤液上机测试。
2.根据权利要求1所述的猪肉中硝基呋喃类药物的测定方法,其特征在于:步骤(1)中所述甲醇与水的体积比为1:1。
3.根据权利要求1或2所述的猪肉中硝基呋喃类药物的测定方法,其特征在于:所述步骤(2)中酸性试剂为0.2mol/L的盐酸溶液,衍生剂为15μg/mL的邻硝基苯甲醛。
4.根据权利要求3所述的猪肉中硝基呋喃类药物的测定方法,其特征在于:所述步骤(3)中调节pH值的方法为:预先加入盐酸溶液,然后加入衍生化后的溶液,再加入磷酸盐缓冲液,再逐次加入氢氧化钠溶液,测定每次加入氢氧化钠溶液后的pH值,调节到pH为7.4为止。
5.根据权利要求1所述的猪肉中硝基呋喃类药物的测定方法,其特征在于:所述步骤(3)中,盐包管内的物质为氯化钠。
6.根据权利要求5所述的猪肉中硝基呋喃类药物的测定方法,其特征在于:所述均质猪肉样品与所述氯化钠的质量比为2:4~6。
7.根据权利要求5或6所述的猪肉中硝基呋喃类药物的测定方法,其特征在于:所述均质猪肉样品与所述氯化钠的质量比为2:5。
8.根据权利要求1所述的猪肉中硝基呋喃类药物的测定方法,其特征在于:所述步骤(1)中离心的转速为4500~5000r/min。
9.根据权利要求1所述的猪肉中硝基呋喃类药物的测定方法,其特征在于:所述步骤(3)中,调节pH值后加入正己烷,摇匀,在4500~5000r/min的转速下离心8~10min,取下清液至盐包管中,再加入乙腈,在4500~5000r/min的转速下离心8~10min,取上清液加入甲酸水溶液,在14000~15000r/min的转速下离心3~5min。
10.根据权利要求1或9所述的猪肉中硝基呋喃类药物的测定方法,其特征在于:所述步骤(3)中,调节pH值后加入正己烷,摇均,在4750r/min的转速下离心10min,取下清液至盐包管中,再加入乙腈,在4750r/min的转速下离心10min,取上清液加入甲酸水溶液,在15000r/min的转速下离心3min。
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