CN113252593B - 一种宠物食品中非法添加中枢神经兴奋类药物烟酸二乙胺的检测方法 - Google Patents
一种宠物食品中非法添加中枢神经兴奋类药物烟酸二乙胺的检测方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种宠物食品中非法添加中枢神经兴奋类药物烟酸二乙胺的检测方法，包括以下：步骤a，制备第一样液；步骤b，旋转蒸发处理；步骤c，制备第三样液；步骤d，制备待测样液；步骤e，建立标准曲线，计算得到待测样液中二乙基羟胺的浓度；步骤f，定性判定：待测样液中二乙基羟胺的浓度大于0.5mg/L时，判定为阳性，即待测样品中非法添加有烟酸二乙胺。本发明的检测方法专属性强，将目标物烟酸二乙胺通过化学反应转化为二乙基羟胺，针对性强，抗干扰能力强，检测结果灵敏度高，极大得降低了假阳性，检测用时短，检测过程不涉及剧毒或致癌类物质，不使用有害试剂，更加环保安全，对实验环境及人员危害低，适用于终端检测。
Description
技术领域
本发明涉及宠物食品检测领域，特别是涉及一种宠物食品中非法添加中枢神经兴奋类药物烟酸二乙胺的检测方法。
背景技术
宠物食品是专门为宠物、小动物提供的食品，介于人类食品与传统畜禽饲料之间的高档动物食品。其作用主要是为各种宠物提供最基础的生命保证、生长发育和健康所需的营养物质，具有营养全面、消化吸收率高、配方科学、质量标准、饲喂使用方便以及可预防某些疾病等优点。
然而以目前的市场情况来说，市售的宠物饲料产品的质量参差不齐，现在有不法份子为了让待售中的宠物表现出活泼、好动等品质，喂食参有中枢神经兴奋类药物如烟酸二乙胺等的食品，同时也有部分饲主，听信片面的广告宣传信息，购买参有药物成分的宠物食品，以期望宠物可以表现的更“健康”、更“活跃”。当向食品中加入的添加物不在国家规定范围内，就形成了非法添加物。非法添加物的危害有很多，非法使用会对宠物产生较大的健康风险。
烟酸二乙胺，又名尼可刹米，是一种中枢神经兴奋类药物，其能直接兴奋延髓呼吸中枢，使呼吸加深加快，也可通过刺激颈动脉窦和主动脉体的化学感受器，反射性地兴奋呼吸中枢，并提高呼吸中枢对二氧化化碳的敏感性。对大脑皮质、血管运动中枢及脊髓也有较弱的兴奋作用，剂量过大可引起惊厥。烟酸二乙胺作为人用药具有作用温和、安全范围大、毒性较小的特点，但是非法使用于会对宠物产生较大的健康风险。
目前检测烟酸二乙胺的方法主要为以下三种：
（1）取10滴，加氢氧化钠试液3ml，加热，即发生二乙胺的臭气（刺激性气味），能使湿润的红色石蕊试纸变蓝色；（2）取1滴，加水50ml，摇匀，分取2ml，加溴化氰（剧毒）试液2ml与2.5%苯胺（致癌）溶液3ml，摇匀，溶液渐显黄色；（3）取2滴，加水1ml，摇匀，加硫酸铜试液2滴与硫氰酸铵（剧毒）试液3滴，即生成草绿色沉淀。
以上方法中，二乙胺为有刺激性气味气体，溴化氢、硫氰酸铵均为剧毒物质，苯胺为致癌物质，以上均不利于日常的检测，对环境及人员有害。
发明内容
本发明的目的在于提供一种宠物食品中非法添加中枢神经兴奋类药物烟酸二乙胺的检测方法。
根据本发明的一个方面，提供了一种宠物食品中非法添加中枢神经兴奋类药物烟酸二乙胺的检测方法，包括以下：
步骤a，称取一定量的待测样品，置于第一玻璃容器中，加入蒸馏水和乙酸乙酯，震荡后，进行超声提取，超声提取结束后，取下层水相部分，得到第一样液；该步骤中使用水作为提取剂，便于非法添加的烟酸二乙胺进行萃取、提取，采用超声提取的方式，加快烟酸二乙胺的释放，提高提取效率，使样品中的烟酸二乙胺被水相提取完全，保证提取效果，提高检测结果的准确度。宠物食品中含有动物组织，加入乙酸乙酯的作用主要是除脂，提高提取效率，也可以同时萃取样品中的脂溶性成分，比如一些脂溶性的维生素、蛋白质等。
步骤b，取一定量的第一样液，置于第二玻璃容器中，加入氢氧化钠溶液和石油醚，进行第一次旋转蒸发处理，第一次旋转蒸发处理过程中，随着第二玻璃容器中的溶液减少，适当补充石油醚，浓缩至一定体积时，得到第二样液，向第二样液中加入pH调节剂，将第二样液的pH值调整为7.0±0.1，再加入石油醚，进行第二次旋转蒸发处理，直至第二样液蒸干；加入氢氧化钠溶液，在第一次旋转蒸发处理过程中发生以下反应：
第一样液中的烟酸二乙胺反应生成烟酸和二乙胺，第二样液中含有烟酸和二乙胺。第一样液为水相溶液，加入石油醚，可以加快蒸发速度，石油醚挥发的快，蒸发过程中会先消耗完全，此时第一样液中还剩余很多水，需要在蒸发过程中补充石油醚，以减少后面蒸干所需要的时间，缩短反应时间，避免反应中产生副产物；
加入pH调节剂，将第二样液的pH值调整为7.0±0.1，上一反应过程需要强碱环境，但是强碱环境对后续的反应起到一定的抑制作用，不利于后续反应向正反应反向进行，所以在第二样液比较少时，先调节pH至中性，以避免后续反应。第二次旋转蒸发将第二样液中的水、石油醚去除，得到该反应产物烟酸和二乙胺。
步骤c，向步骤b中蒸干后的第二玻璃容器内，加入乙醚润洗2~3次，收集润洗液，并将润洗液吹干，得到中间产物，向中间产物加入水溶解，再加入过氧化氢溶液和催化剂，在一定温度条件下，进行反应，反应完毕后，取一定量溶液作为第三样液；步骤b中反应产物为烟酸和二乙胺，二乙胺易容于乙醚，而烟酸不溶于乙醚，用乙醚润洗后，二乙胺溶于润洗液中，将润洗液中乙醚吹干，得到中间产物二乙胺。在催化剂催化下，二乙胺与氢氧化钠发生反应，生成二乙基羟胺，反应式如下：
步骤d，将第三样液吹干，加入溴酚蓝缓冲溶液，在一定恒温条件下，等待一定时间后，加入三氯甲烷，震荡，静置后，得到三氯甲烷相，向三氯甲烷相中加入脱水剂脱水，得到待测样液；第三样液中含有二乙基羟胺，加入溴酚蓝缓冲溶液与二乙基羟胺进行显色，加入三氯甲烷进行萃取，然后对三氯甲烷相脱水，得到待测样液；
步骤e，配制二乙基羟胺的系列标准溶液，重复步骤a~d，制备得到空白对照溶液，取待测样液、空白对照溶液和系列标准溶液，在一定波长条件下，测定吸光度，建立标准曲线，计算得到待测样液中二乙基羟胺的浓度；随着待测样液中二乙基羟胺的浓度升高，待测样液中碱性越高，pH值越高，溶液颜色向蓝绿色的方向转变，吸光度值降低，根据系列标准溶液的吸光度值，建立标准曲线，将待测样液的吸光度值，带入标准曲线计算，得到待测样液中二乙基羟胺的浓度；
步骤f，待测样液中二乙基羟胺的浓度大于0.5mg/L时，可以判定为阳性，即待测样品中非法添加有中枢神经兴奋类药物烟酸二乙胺；待测样液中二乙基羟胺的浓度小于等于0.5mg/L时，可以判定为阴性，即待测样品中没有非法添加中枢神经兴奋类药物烟酸二乙胺。当溶液中二乙基羟胺的浓度小于等于0.5mg/L时，待测样液颜色为黄色，颜色不变，在413nm波长下，测定有一定的吸光度值，吸光度值为2.77。本检测方法无法对0.5 mg/L以下的二乙基羟胺的浓度进行测定，本检测方法对待测样液中二乙基羟胺的最低检出限为0.5mg/L。所以，选择0.5mg/L作为定性判定标准。
本发明的有益效果：本发明的检测方法专属性强，将待测样品中的目标物烟酸二乙胺通过化学反应转化为可检出的二乙基羟胺，针对性强，抗干扰能力强，检测结果灵敏度高，极大得降低了假阳性，检测用时短，检测过程不涉及剧毒或致癌类物质，不使用有害试剂，更加环保安全，对实验环境及人员危害低，适用于终端检测。
在一些实施方式中，待测样品为半固体宠物食品、乳状宠物食品、固体宠物食品或液体宠物食品中的一种。本发明的检测方法适用于对各种状态的宠物食品中的烟酸二乙胺进行测定，检测结果的准确度不受宠物食品的状态影响。
在一些实施方式中，步骤a中第一玻璃容器为锥形瓶，步骤b中第二玻璃容器为圆底烧瓶。
在一些实施方式中，氢氧化钠溶液是质量分数为3.25%-3.5%的氢氧化钠水溶液，石油醚是沸程30℃-60℃的石油醚，第一次旋转蒸发的水浴温度为70℃-80℃。3.25%-3.5%的氢氧化钠溶液为反应提供氢氧根离子，便于烟酸二乙胺反应生成烟酸和二乙胺。选择沸程30℃-60℃的石油醚，旋转蒸发速度较快，可以提高旋蒸效率，节省旋蒸时间。
在一些实施方式中，步骤b中pH调节剂为1mol/L的盐酸溶液，第二次旋转蒸发的水浴温度为60℃-65℃。使用1mol/L的盐酸溶液作为pH调节剂，将未反应完的氢氧化钠中和掉，使第二样液为中性环境。
在一些实施方式中，步骤c中过氧化氢溶液是质量分数为30%的过氧化氢溶液，催化剂包括二氧化锰和二氧化硅，二氧化锰与二氧化硅的质量比为1:2，步骤c的反应温度为80℃。
在一些实施方式中，步骤d中恒温条件的范围为30℃-35℃，脱水剂为无水硫酸钠，溴酚蓝缓冲溶液为0.0015mol/L的溴酚蓝缓冲溶液，0.0015mol/L的溴酚蓝缓冲溶液是称取一定量的溴酚蓝溶于柠檬酸-磷酸盐缓冲溶液中，配制得到0.0015mol/L溴酚蓝缓冲溶液，柠檬酸-磷酸盐缓冲溶液的配制：取0.1 mol /L磷酸二氢钠溶液与0.1 mol /L柠檬酸溶液等体积混合，并调节pH值至3。
在一些实施方式中，步骤e中系列标准溶液分别为浓度0.5g/L、1.0g/L、1.5g/L、2.0g/L、2.5g/L、3.0g/L、3.5g/L的二乙基羟胺溶液。当溶液中二乙基羟胺的浓度小于等于0.5mg/L，溶液颜色为黄色，颜色不变，在413nm波长下，测定有一定的吸光度值，吸光度值为2.77，所以，选择系列标准溶液的浓度从0.5g/L作为浓度梯度起点。
在一些实施方式中，步骤e中波长为413nm。该波长条件下，对待测样液中二乙基羟胺的浓度能进行较准确的测定。
在一些实施方式中，标准曲线为Y=-0.989X+3.229，R2=0.999，检测方法对二乙基羟胺的检出限为0.5mg/L。当溶液中二乙基羟胺的浓度小于等于0.5mg/L，溶液颜色为黄色，颜色不变，在413nm波长下，测定有一定的吸光度值，吸光度值为2.77，本检测方法无法对0.5 mg/L以下的二乙基羟胺的浓度进行测定，所以，本检测方法对待测样液中二乙基羟胺的最低检出限为0.5mg/L。
附图说明
图1为本发明的一种实施方式的一种宠物食品中非法添加中枢神经兴奋类药物烟酸二乙胺的检测方法的标准曲线。
具体实施方式
下面结合实施例，对本发明作进一步详细的说明。
实施例1
本实施例中乙酸乙酯选择国药集团化学试剂有限公司供应的分析纯乙酸乙酯，氢氧化钠选择国药集团化学试剂有限公司供应的分析纯氢氧化钠，石油醚选择国药集团化学试剂有限公司供应的分析纯石油醚，乙醚选择国药集团化学试剂有限公司供应的分析纯乙醚，30%的过氧化氢溶液选择国药集团化学试剂有限公司供应的分析纯30%的过氧化氢溶液，溴酚蓝选择国药集团化学试剂有限公司供应的溴酚蓝，三氯甲烷选择国药集团化学试剂有限公司供应的分析纯三氯甲烷，盐酸选择国药集团化学试剂有限公司供应的分析纯盐酸，二氧化锰选择国药集团化学试剂有限公司供应的分析纯二氧化锰、二氧化硅选择国药集团化学试剂有限公司供应的分析纯二氧化硅，磷酸二氢钠选择国药集团化学试剂有限公司供应的分析纯磷酸二氢钠，柠檬酸选择国药集团化学试剂有限公司供应的分析纯柠檬酸；
3.25%-3.5%的氢氧化钠水溶液的配制：称取16.25g-17.5g氢氧化钠放入烧杯中，用蒸馏水溶解后，用玻璃棒引流注入500mL容量瓶，然后定容至刻度线；
1mol/L的盐酸溶液的配制：量取43ml 36%盐酸倒入烧杯，用蒸馏水溶解后，用玻璃棒引流注入500mL容量瓶，然后定容至刻度线；
0.0015mol/L的溴酚蓝缓冲溶液的配制：称取100mg的溴酚蓝溶于100ml柠檬酸-磷酸盐缓冲溶液中，配制得到0.0015mol/L溴酚蓝缓冲溶液；
柠檬酸-磷酸盐缓冲溶液的配制：取0.1 mol /L磷酸二氢钠溶液与0.1 mol /L柠檬酸溶液等体积混合，并调节pH值至3；
以下实施例2-4均采用本实施例1中的试剂。
实施例2
本发明的一种宠物食品中非法添加中枢神经兴奋类药物烟酸二乙胺的检测方法，包括以下：
步骤a，称取5g固体宠物食品，置于锥形瓶中，加入50ml蒸馏水和50ml乙酸乙酯，震荡10min后，超声提取5min，超声提取结束后，取下层水相部分，得到第一样液；
步骤b，取25ml的第一样液，置于圆底烧瓶中，加入2ml 3.25%的氢氧化钠溶液和25ml石油醚，石油醚的沸程为30℃-60℃，在70℃的水浴条件下，进行第一次旋转蒸发处理，第一次旋转蒸发处理过程中，随着第二玻璃容器中的溶液减少，适当补充石油醚，浓缩至5ml时，得到第二样液，向第二样液中加入1mol/L盐酸溶液，将第二样液的pH值调整为7.0，再加入10ml石油醚，在60℃的水浴条件下，进行第二次旋转蒸发处理，直至第二样液蒸干；
步骤c，向步骤b中蒸干后的圆底烧瓶内，加入乙醚润洗2~3次，收集润洗液，并将润洗液氮气吹干，得到中间产物，向中间产物加入2ml水溶解，再加入2ml 质量分数为30%的过氧化氢溶液和0.15g催化剂，催化剂包括0.05g二氧化锰和0.10g二氧化硅，在80℃条件下，进行加热反应15min，反应完毕后，取2ml溶液作为第三样液置于离心管中；
步骤d，将第三样液氮气吹干，加入2ml 0.0015mol/L溴酚蓝缓冲溶液，在30℃恒温条件下，等待2min后，加入3ml三氯甲烷，震荡3min，静置5min后，得到三氯甲烷相，向三氯甲烷相中加入0.05g无水硫酸钠脱水，得到待测样液；
步骤e，配制浓度为0.5g/L、1.0g/L、1.5g/L、2.0g/L、2.5g/L、3.0g/L、3.5g/L的二乙基羟胺系列标准溶液，重复步骤a~d，制备得到空白对照溶液，待测样液、空白对照溶液和系列标准溶液各取1ml，在413nm波长下，测定吸光度，建立标准曲线，标准曲线为：Y=-0.989X+3.229，R2=0.999，将待测样液的吸光度值带入标准曲线，计算得到待测样液中二乙基羟胺的质量浓度为X=1.14mg/L；
步骤f，待测样液中的二乙基羟胺的浓度大于0.5mg/L，说明待测样液中含有二乙基羟胺，待测样液中的二乙基羟胺是由待测样品中的烟酸二乙胺通过反应转化而来，所以，判定为阳性，即待测样品固体宠物食品中有非法添加中枢神经兴奋类药物烟酸二乙胺。
实施例3
本发明的一种宠物食品中非法添加中枢神经兴奋类药物烟酸二乙胺的检测方法，包括以下：
步骤a，称取5g半固体宠物食品，置于锥形瓶中，加入75ml蒸馏水和75ml乙酸乙酯，震荡10min后，超声提取5min，超声提取结束后，取下层水相部分，得到第一样液；
步骤b，取30ml的第一样液，置于圆底烧瓶中，加入2ml 3.5%的氢氧化钠溶液和25ml石油醚，石油醚的沸程为30℃-60℃，在80℃的水浴条件下，进行第一次旋转蒸发处理，第一次旋转蒸发处理过程中，随着第二玻璃容器中的溶液减少，适当补充石油醚，浓缩至5ml时，得到第二样液，向第二样液中加入1mol/L盐酸溶液，将第二样液的pH值调整为7.1，再加入10ml石油醚，在65℃的水浴条件下，进行第二次旋转蒸发处理，直至第二样液蒸干；
步骤c，向步骤b中蒸干后的圆底烧瓶内，加入乙醚润洗2~3次，收集润洗液，并将润洗液氮气吹干，得到中间产物，向中间产物加入2ml水溶解，再加入2ml 质量分数为30%的过氧化氢溶液和0.15g催化剂，催化剂包括0.05g二氧化锰和0.10g二氧化硅，在80℃条件下，进行加热反应15min，反应完毕后，取2ml溶液作为第三样液置于离心管中；
步骤d，将第三样液氮气吹干，加入2ml 0.0015mol/L溴酚蓝缓冲溶液，在35℃恒温条件下，等待2min后，加入3ml三氯甲烷，震荡3min，静置5min后，得到三氯甲烷相，向三氯甲烷相中加入0.10g无水硫酸钠脱水，得到待测样液；
步骤e，配制浓度为0.5g/L、1.0g/L、1.5g/L、2.0g/L、2.5g/L、3.0g/L、3.5g/L的二乙基羟胺系列标准溶液，重复步骤a~d，制备得到空白对照溶液，待测样液、空白对照溶液和系列标准溶液各取1ml，在413nm波长下，测定吸光度，建立标准曲线，标准曲线为：Y=-0.989X+3.229，R2=0.999，将待测样液的吸光度值带入标准曲线，计算得到待测样液中二乙基羟胺的质量浓度为X=0.28mg/L；
步骤f，待测样液中的二乙基羟胺的浓度小于0.5mg/L，待测样液中不含有二乙基羟胺，待测样液中的二乙基羟胺是由待测样品中的烟酸二乙胺通过反应转化而来，所以，判定为阴性，即待测样品固体宠物食品中没有非法添加中枢神经兴奋类药物烟酸二乙胺。
实施例4
本发明的一种宠物食品中非法添加中枢神经兴奋类药物烟酸二乙胺的检测方法，包括以下：
步骤a，称取5g固体宠物食品，置于锥形瓶中，加入62.5ml蒸馏水和62.5ml乙酸乙酯，震荡10min后，超声提取5min，超声提取结束后，取下层水相部分，得到第一样液；
步骤b，取27.5ml的第一样液，置于圆底烧瓶中，加入2ml 3.375 %的氢氧化钠溶液和25ml石油醚，石油醚的沸程为30℃-60℃，在75℃的水浴条件下，进行第一次旋转蒸发处理，第一次旋转蒸发处理过程中，随着第二玻璃容器中的溶液减少，适当补充石油醚，浓缩至5ml时，得到第二样液，向第二样液中加入1mol/L盐酸溶液，将第二样液的pH值调整为6.9，再加入10ml石油醚，在62.5℃的水浴条件下，进行第二次旋转蒸发处理，直至第二样液蒸干；
步骤c，向步骤b中蒸干后的圆底烧瓶内，加入乙醚润洗2~3次，收集润洗液，并将润洗液氮气吹干，得到中间产物，向中间产物加入2ml水溶解，再加入2ml 质量分数为30%的过氧化氢溶液和0.15g催化剂，催化剂包括0.05g二氧化锰和0.10g二氧化硅，在80℃条件下，进行加热反应15min，反应完毕后，取2ml溶液作为第三样液置于离心管中；
步骤d，将第三样液氮气吹干，加入2ml 0.0015mol/L溴酚蓝缓冲溶液，在32.5℃恒温条件下，等待2min后，加入3ml三氯甲烷，震荡3min，静置5min后，得到三氯甲烷相，向三氯甲烷相中加入0.075g无水硫酸钠脱水，得到待测样液；
步骤e，配制浓度为0.5g/L、1.0g/L、1.5g/L、2.0g/L、2.5g/L、3.0g/L、3.5g/L的二乙基羟胺系列标准溶液，重复步骤a~d，制备得到空白对照溶液，待测样液、空白对照溶液和系列标准溶液各取1ml，在413nm波长下，测定吸光度，建立标准曲线，标准曲线为：Y=-0.989X+3.229，R2=0.999，将待测样液的吸光度值带入标准曲线，计算得到待测样液中二乙基羟胺的质量浓度为X=2.73mg/L；
步骤f，待测样液中的二乙基羟胺的浓度大于0.5mg/L，说明待测样液中含有二乙基羟胺，待测样液中的二乙基羟胺是由待测样品中的烟酸二乙胺通过反应转化而来，所以，判定为阳性，即待测样品固体宠物食品中有非法添加中枢神经兴奋类药物烟酸二乙胺。
本发明的检测方法相比于药典检测方法，检测操作简便、快速，灵敏度高，不需要大型分析仪器，不需要使用剧毒或致癌等危险试剂，对实验环境及人员的危害性低，将目标物烟酸二乙胺转化为二乙基羟胺进行检测，针对性强，抗干扰能力强，极大的降低了假阳性情况发生，提高了定性检测准确度，适用于终端快速筛查。
以上所述的仅是本发明的一些实施方式，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明创造构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。
Claims (7)
1.一种宠物食品中非法添加中枢神经兴奋类药物烟酸二乙胺的检测方法，包括以下：
步骤a，称取一定量的待测样品，置于第一玻璃容器中，加入蒸馏水和乙酸乙酯，震荡后，进行超声提取，超声提取结束后，取下层水相部分，得到第一样液；
步骤b，取一定量的所述第一样液，置于第二玻璃容器中，加入氢氧化钠溶液和石油醚，进行第一次旋转蒸发处理，所述第一次旋转蒸发处理过程中，随着第二玻璃容器中的溶液减少，适当补充所述石油醚，浓缩至一定体积时，得到第二样液，向所述第二样液中加入pH调节剂，将所述第二样液的pH值调整为7.0±0.1，再加入石油醚，进行第二次旋转蒸发处理，直至所述第二样液蒸干，所述氢氧化钠溶液是质量分数为3.25%-3.5%的氢氧化钠水溶液，所述石油醚是沸程30℃-60℃的石油醚，所述第一次旋转蒸发的水浴温度为70℃-80℃；
步骤c，向所述步骤b中蒸干后的第二玻璃容器内，加入乙醚润洗2~3次，收集润洗液，并将所述润洗液吹干，得到中间产物，向所述中间产物加入水溶解，再加入过氧化氢溶液和催化剂，在一定温度条件下，进行反应，反应完毕后，取一定量溶液作为第三样液，所述过氧化氢溶液是质量分数为30%的过氧化氢溶液，所述催化剂包括二氧化锰和二氧化硅，所述二氧化锰与二氧化硅的质量比为1:2，所述反应温度为80℃；
步骤d，将所述第三样液吹干，加入溴酚蓝缓冲溶液，在一定恒温条件下，等待一定时间后，加入三氯甲烷，震荡，静置后，得到三氯甲烷相，向所述三氯甲烷相中加入脱水剂脱水，得到待测样液，所述恒温条件的范围为30℃-35℃，所述脱水剂为无水硫酸钠，所述溴酚蓝缓冲溶液为0.0015mol/L的溴酚蓝缓冲溶液，所述0.0015mol/L的溴酚蓝缓冲溶液是称取一定量的溴酚蓝溶于柠檬酸-磷酸盐缓冲溶液中，配制得到0.0015mol/L溴酚蓝缓冲溶液，所述柠檬酸-磷酸盐缓冲溶液的配制：取0.1 mol /L磷酸二氢钠溶液与0.1 mol /L柠檬酸溶液等体积混合，并调节pH值至3；
步骤e，配制二乙基羟胺的系列标准溶液，重复步骤a~d，制备得到空白对照溶液，取所述待测样液、空白对照溶液和系列标准溶液，在一定波长条件下，测定吸光度，建立标准曲线，计算得到待测样液中二乙基羟胺的浓度；
步骤f，待测样液中二乙基羟胺的浓度大于0.5mg/L时，可以判定为阳性，即待测样品中非法添加有中枢神经兴奋类药物烟酸二乙胺；待测样液中二乙基羟胺的浓度小于等于0.5mg/L时，可以判定为阴性，即待测样品中没有非法添加中枢神经兴奋类药物烟酸二乙胺。
2.根据权利要求1所述的一种宠物食品中非法添加中枢神经兴奋类药物烟酸二乙胺的检测方法，其特征在于，所述待测样品为半固体宠物食品、乳状宠物食品、固体宠物食品或液体宠物食品中的一种。
3.根据权利要求1所述的一种宠物食品中非法添加中枢神经兴奋类药物烟酸二乙胺的检测方法，其特征在于，所述步骤a中第一玻璃容器为锥形瓶，所述步骤b中第二玻璃容器为圆底烧瓶。
4.根据权利要求1所述的一种宠物食品中非法添加中枢神经兴奋类药物烟酸二乙胺的检测方法，其特征在于，所述步骤b中pH调节剂为1mol/L的盐酸溶液，所述第二次旋转蒸发的水浴温度为60℃-65℃。
5.根据权利要求1所述的一种宠物食品中非法添加中枢神经兴奋类药物烟酸二乙胺的检测方法，其特征在于，所述步骤e中系列标准溶液分别为浓度0.5g/L、1.0g/L、1.5g/L、2.0g/L、2.5g/L、3.0g/L、3.5g/L的二乙基羟胺溶液。
6.根据权利要求1所述的一种宠物食品中非法添加中枢神经兴奋类药物烟酸二乙胺的检测方法，其特征在于，所述步骤e中波长为413nm。
7.根据权利要求1-6中任一所述的一种宠物食品中非法添加中枢神经兴奋类药物烟酸二乙胺的检测方法，其特征在于，所述标准曲线为Y=-0.989X+3.229，R2=0.999，所述检测方法对二乙基羟胺的检出限为0.5mg/L。
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