JP2010230447A - 家畜の血中ビタミンa及びベータカロテン濃度測定方法並びに家畜の血中ビタミンa及びベータカロテン濃度測定装置 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】蛋白変性液と脂溶成分抽出液と抗酸化剤とを混合して混合液を得る工程(V)と、混合液と家畜の全血とを攪拌混合して攪拌混合液を得る工程(W)と、攪拌混合液を遠心分離することにより脂溶成分抽出液層に、家畜の全血中に含まれるビタミンA及びベータカロテンを抽出する工程(X)と、脂溶成分抽出液層に2種類の特定波長の光を照射して、各々の照射波長における吸光度を測定する工程(Y)と、吸光度から、家畜の全血中に含まれるビタミンA及びベータカロテンの濃度を演算する工程(Z)とを行う。
【選択図】 図1
Description
即ち,家畜のビタミンA欠乏は、肉用牛の飼養現場で多発し、健康被害(死亡事故、失明、浮腫、尿石)や、生産性の低下〔体重の増加不良、飼料要求率の増大、牛肉生産量の低下、異常肉(水腫)発生〕の原因となっている。
一方、ビタミンAの過剰給与は、上質肉の最重要形質である脂肪交雑(所謂,霜降り)の形成を妨げることが明らかにされている。
それに対して、従来、肉用牛のビタミンAの栄養状態は、飼育者が家畜の外貌や行動の観察により推測される場合が多いが、観察不測や個体ごとの症状の違いに対応できない等の理由から、誤った推測による事故が後を絶たない。
[1]蛋白変性液と脂溶成分抽出液と抗酸化剤とを混合して混合液を得る工程と、前記混合液と家畜の全血とを攪拌混合して攪拌混合液を得る工程と、前記攪拌混合液を遠心分離することにより脂溶成分抽出液層に、前記家畜の全血中に含まれるビタミンA及びベータカロテンを抽出する工程と、前記脂溶成分抽出液層に2種類の特定波長の光を照射して、各々の照射波長における吸光度を測定する工程と、前記吸光度から、前記家畜の全血中に含まれるビタミンA及びベータカロテンの濃度を演算する工程とからなることを特徴とする家畜の血中ビタミンA及びベータカロテンの濃度測定方法。
[2]前記2種類の特定波長は、325nm及び450nmであり、325nmの照射波長における吸光度からビタミンAの濃度を演算し、450nmの照射波長における吸光度からベータカロテンの濃度を演算することを特徴とする[1]に記載の家畜の血中ビタミンA及びベータカロテンの濃度測定方法。
[3]2種類の特定波長の光を測定対象液に照射する光源部と、前記光源部から照射され、前記測定対象液を透過した光を受光する受光部と、を備え、蛋白変性液、脂溶成分抽出液及び抗酸化剤を混合した混合液並びに家畜の全血を攪拌混合した後、該攪拌混合液を遠心分離することにより、前記家畜の全血中に含まれるビタミンA及びベータカロテンを脂溶成分抽出液層に抽出し、該脂溶成分抽出液層に前記2種類の特定波長の光を照射して、各々の照射波長における吸光度を測定し、該測定値の演算により前記家畜の全血中に含まれるビタミンA及びベータカロテンの濃度を測定することを特徴とする家畜の血中ビタミンA及びベータカロテンの濃度測定装置。
[4]前記2種類の特定波長は、325nm及び450nmであり、325nmの照射波長における吸光度からビタミンAの濃度を測定し、450nmの照射波長における吸光度からベータカロテンの濃度を測定することを特徴とする[3]に記載の家畜の血中ビタミンA及びベータカロテンの濃度測定装置。
1) 従来分析法で必要な血清分離工程、蛋白変性工程(除蛋白)、抽出工程のうち、血清分離工程を省略しており、全血からビタミンAの抽出を可能とした。
2) さらに、従来、蛋白変性工程における溶血により測定値が20〜30%低下(一部ビタミンAの破壊)する問題を、蛋白変性工程と脂溶成分抽出工程を同時並行して行うことにより解決し、測定時間を大幅に短縮できる。
3) また、全血中のビタミンA濃度は血清中濃度よりも30〜35%程度低いため、ビタミンA濃度が低い肥育牛血の測定精度維持が懸念されることに対し、脂溶成分抽出液に対する検体の比率を高め、該抽出液のビタミンA濃度を高くすることにより対応する等極めて有益なる効果を奏する。
また、この発明の測定装置によると、
4) 既存の装置に比べ、ハンディであり、農家現場で手軽に血液分析でき、即時に測定結果が判明し、また、分析作業の簡素化が図れ、迅速にビタミンA濃度測定が可能である。
5) さらに、この装置によると、吸光度は、特定波長が325nmおよび450nmの二波長測定とすることにより、抽出液の測定に対して、波長の切替えが不要であり、325nmをピーク発光波長としてビタミンA測定ができ、かつ、450nmをピーク発光波長としてビタミンA前駆物質であるベータカロテンとを同時に測定できる等の極めて有益なる効果を奏する。
本実施例に係る家畜の血中ビタミンA及びベータカロテンの濃度測定方法は、蛋白変性液と脂溶成分抽出液と抗酸化剤とを混合して混合液を得る工程(V)と、混合液と家畜の全血とを攪拌混合して攪拌混合液を得る工程(W)と、攪拌混合液を遠心分離することにより脂溶成分抽出液層に、家畜の全血中に含まれるビタミンA及びベータカロテンを抽出する工程(X)と、脂溶成分抽出液層に2種類の特定波長の光を照射して、各々の照射波長における吸光度を測定する工程(Y)と、吸光度から、家畜の全血中に含まれるビタミンA及びベータカロテンの濃度を演算する工程(Z)とからなる。
蛋白変性液と脂溶成分抽出液と抗酸化剤とを混合して混合液を得る工程(V)は、具体的には、エタノールとヘキサンを1:2の混合比としたものにBHT0.02%を添加し、混合して、混合液を得るものである。
次に、混合液と家畜の全血とを攪拌混合して攪拌混合液を得る工程(W)は、具体的には、工程(V)で得た混合液1.2mlに家畜(例えば、牛)の全血0.6mlを添加し(検体・エタノール比 3:2、検体・ヘキサン比3:4)、30秒間攪拌して攪拌混合液を得るものである。
さらに、攪拌混合液を遠心分離することにより脂溶成分抽出液層に、家畜の全血中に含まれるビタミンA及びベータカロテンを抽出する工程(X)は、具体的には、工程(W)で得た攪拌混合液を、2000rpmで1分間遠心分離を行い、ヘキサン層を分離するものである。
そして、脂溶成分抽出液層に2種類の特定波長の光を照射して、各々の照射波長における吸光度を測定する工程(Y)は、具体的には、325nm及び450nmの光を、工程(X)で分離したヘキサン層に照射し、各々の照射波長における吸光度を測定するものである。
吸光度から、家畜の全血中に含まれるビタミンA及びベータカロテンの濃度を演算する工程(Z)は、具体的には、325nmの照射波長における吸光度からビタミンAの濃度を演算し、450nmの照射波長における吸光度からベータカロテンの濃度を演算するもものである。
尚、この装置は、出願人の測定装置(特開2003−65951)の改良に基づくもので、該測定器の内部に、挿入管(1)を設けており、該挿入管(1)に、サンプルである抽出液(3)を入れた測定容器(2)を挿入するものであり、前記挿入管(1)を横方向に貫通して光路(1a)と光路(1b)が、挿入管(1)の長さ方向に近接して設けてある。
ビタミンAサンプルの透過率
=電圧値SSa/電圧値RSa×電圧値SRa/電圧値RRa
ビタミンAサンプルの吸光度
=−log(ビタミンAサンプルの透過率)
ベータカロテンサンプルの透過率
=電圧値SSb/電圧値RSb×電圧値SRb/電圧値RRb
ベータカロテンサンプルの吸光度
=−log(ベータカロテンサンプルの透過率)
2 測定容器
3 サンプル(抽出液)
1a,1b 光路
6a,6b LED
7a,7b フォトダイオード
12 CPU
13 制御部
14 アンプ部
15 A/D変換器
16 測定結果を表示するための表示部
17 設定などのための操作キー
18 データなどの記憶のためのメモリ
Claims (4)
- 蛋白変性液と脂溶成分抽出液と抗酸化剤とを混合して混合液を得る工程と、
前記混合液と家畜の全血とを攪拌混合して攪拌混合液を得る工程と、
前記攪拌混合液を遠心分離することにより脂溶成分抽出液層に、前記家畜の全血中に含まれるビタミンA及びベータカロテンを抽出する工程と、
前記脂溶成分抽出液層に2種類の特定波長の光を照射して、各々の照射波長における吸光度を測定する工程と、
前記吸光度から、前記家畜の全血中に含まれるビタミンA及びベータカロテンの濃度を演算する工程と
からなることを特徴とする家畜の血中ビタミンA及びベータカロテンの濃度測定方法。 - 前記2種類の特定波長は、325nm及び450nmであり、325nmの照射波長における吸光度からビタミンAの濃度を演算し、450nmの照射波長における吸光度からベータカロテンの濃度を演算することを特徴とする請求項1に記載の家畜の血中ビタミンA及びベータカロテンの濃度測定方法。
- 2種類の特定波長の光を測定対象液に照射する光源部と、
前記光源部から照射され、前記測定対象液を透過した光を受光する受光部と、を備え、
蛋白変性液、脂溶成分抽出液及び抗酸化剤を混合した混合液並びに家畜の全血を攪拌混合した後、該攪拌混合液を遠心分離することにより、前記家畜の全血中に含まれるビタミンA及びベータカロテンを脂溶成分抽出液層に抽出し、
該脂溶成分抽出液層に前記2種類の特定波長の光を照射して、各々の照射波長における吸光度を測定し、該測定値の演算により前記家畜の全血中に含まれるビタミンA及びベータカロテンの濃度を測定することを特徴とする家畜の血中ビタミンA及びベータカロテンの濃度測定装置。 - 前記2種類の特定波長は、325nm及び450nmであり、325nmの照射波長における吸光度からビタミンAの濃度を測定し、450nmの照射波長における吸光度からベータカロテンの濃度を測定することを特徴とする請求項3に記載の家畜の血中ビタミンA及びベータカロテンの濃度測定装置。
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