CN109563539A - 使用dna纳米技术的单分子检测或定量 - Google Patents

使用dna纳米技术的单分子检测或定量 Download PDF

Info

Publication number
CN109563539A
CN109563539A CN201780049976.XA CN201780049976A CN109563539A CN 109563539 A CN109563539 A CN 109563539A CN 201780049976 A CN201780049976 A CN 201780049976A CN 109563539 A CN109563539 A CN 109563539A
Authority
CN
China
Prior art keywords
dna
target
carrier
dna nanostructure
nanostructure
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201780049976.XA
Other languages
English (en)
Inventor
海因里希·格拉布迈尔
约翰内斯·贝内迪克特·韦尔施泰因
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Ludwig Maximilians Universitaet Muenchen LMU
Original Assignee
Ludwig Maximilians Universitaet Muenchen LMU
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Ludwig Maximilians Universitaet Muenchen LMU filed Critical Ludwig Maximilians Universitaet Muenchen LMU
Publication of CN109563539A publication Critical patent/CN109563539A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • GPHYSICS
    • G01MEASURING; TESTING
    • G01NINVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N21/00Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
    • G01N21/62Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light
    • G01N21/63Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light optically excited
    • G01N21/64Fluorescence; Phosphorescence
    • G01N21/6428Measuring fluorescence of fluorescent products of reactions or of fluorochrome labelled reactive substances, e.g. measuring quenching effects, using measuring "optrodes"
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12QMEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6813Hybridisation assays
    • C12Q1/6816Hybridisation assays characterised by the detection means
    • C12Q1/682Signal amplification
    • GPHYSICS
    • G01MEASURING; TESTING
    • G01NINVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/58Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances
    • G01N33/585Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances with a particulate label, e.g. coloured latex
    • G01N33/587Nanoparticles
    • BPERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B82NANOTECHNOLOGY
    • B82YSPECIFIC USES OR APPLICATIONS OF NANOSTRUCTURES; MEASUREMENT OR ANALYSIS OF NANOSTRUCTURES; MANUFACTURE OR TREATMENT OF NANOSTRUCTURES
    • B82Y15/00Nanotechnology for interacting, sensing or actuating, e.g. quantum dots as markers in protein assays or molecular motors
    • BPERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B82NANOTECHNOLOGY
    • B82YSPECIFIC USES OR APPLICATIONS OF NANOSTRUCTURES; MEASUREMENT OR ANALYSIS OF NANOSTRUCTURES; MANUFACTURE OR TREATMENT OF NANOSTRUCTURES
    • B82Y35/00Methods or apparatus for measurement or analysis of nanostructures
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07HSUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H21/00Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids
    • C07H21/04Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids with deoxyribosyl as saccharide radical

Abstract

本发明涉及用于检测靶结构的方法和DNA纳米结构。特别地,本发明涉及DNA纳米结构,其通过巧妙地选择DNA纳米结构的形状和与该DNA纳米结构附连的标记物分子的位置,确保对标记物分子数量和测量信号的优选线性依赖,而不管多个这种DNA纳米结构的物理布置。本发明还涉及在优选以同时的方式使用多重方法的定量多种靶分子的方法中,所述DNA纳米结构和其他纳米报告子优选与特异性结合靶分子的接头组合的用途。

Description

使用DNA纳米技术的单分子检测或定量
本发明涉及用于检测靶结构的方法和DNA纳米结构。特别地,本发明涉及DNA纳米结构,其通过巧妙地选择DNA纳米结构的形状和与其附连标记物分子的位置,确保对标记物数量和测量信号的线性依赖,而不管多种这种DNA纳米结构的物理布置。本发明还涉及其他纳米报告子和所述DNA纳米结构,优选与特异性结合靶分子的接头组合,在优选以同时的方式使用多种方法定量多个靶分子的方法中的用途。
研究以及应用医学和生物技术中经常出现的问题是特定靶结构的分析,即检测。例如,在败血症患者的情况下,对相关毒素的检测可能是必要的,或者,在需要改变细胞构成的疾病(例如,患有癌症)的情况下,对遗传信息的转换进行定量分析可能是必要的。
对遗传信息转换的定量分析,所谓的基因表达谱(GEP)需要检测并识别许多不同的靶mRNA分子(Stadler,Z.K.等人Critical Reviews in Oncology Hematology 69,1-11(2009))。mRNA是英语术语信使RNA(德语“Boten-RNA”)的既定缩写,也用于德语。由于mRNA序列是在相应基因的表达过程中特异性产生的,因此可以以该方式定量分析材料的基因表达。
GEP能够提供关于个体细胞或者组织样品(多个细胞)的状态和类型的信息,并且,因此能够例如对肿瘤组织进行分子诊断。GEP包括分析至少一种基因的表达,优选,分析多种基因的表达。为了实现这个最终目标,需要下述技术:该技术同时允许具有最高可能特异性和灵敏度的定量分析,优选用于尽可能高数量的基因。为了临床实践中的全面应用,该技术必需另外地具有分析时间快、成本低和使用简单的特点。
存在多种GEP技术,取决于所讨论的问题,这些技术具有不同的优点和缺点。
微阵列.使用微阵列的GEP分析基于荧光DNA分子与芯片上特定的物理分离靶序列的杂交(Trevino,V.等人.Mol Med 13,527-541(2007))。这些分子在前述步骤中通过RNA分子的逆转录和聚合酶链反应(PCR)扩增产生。因此,微阵列允许并行检测最多达数千个序列。然而,精确定量是不可能的,因为酶反应诸如逆转录和PCR扩增会带来系统误差。此外,基于微阵列的方法需要相对长的约一天的处理时间,并且,因此不适合大多数临床应用。
qPCR/dPCR.使用PCR,特定DNA分子可以在酶促过程中指数复制(VanGuilder,H.D.等人.Biotechniques44,619-626(2008))。对于PCR反应,mRNA靶标通常必须使用RNA的逆转录酶促转化成DNA。通过添加荧光的、DNA结合分子能够测量扩增,并且,可以初略地确定原始浓度(qPCR)。由于扩增速率显著取决于各种参数(尤其是靶序列、靶长度、引物、仪器、试剂、反应体积),因此必须精确校准所述定量。为了补偿这些缺点,开发了数字PCR(dPCR)。其允许通过各个靶分子的区分以进行更精确的定量(Baker,M.Nature Methods9,541-544(2012))。然而,所述dPCR的高精确度通常由于限制于两个目标而抵消。因此,dPCR不适用于GEP分析。
RNA-Seq/NGS.关于所谓的下一代测序(NGS),RNA测序也可以基于此,在数个步骤中按碱基读出序列并鉴定(Wang,等人.Nat Rev Genet 10,57-63(2009))。对于RNA测序,RNA也必须首先酶促转化为DNA。在转录分析中NGS的优势和独特特征是识别新的或改变的序列的可能性。由于大量复杂的处理步骤,分析装置复杂且昂贵且处理持续时间长。这排除了其在保健领域的用途。正如在上述方法中,酶促过程阻止了精确的可量化性。
nCounter.NanoString Technologies的nCounter系统基于,一方面,通过使用荧光报告子(条形码)杂交的RNA分子的检测,以及,另一方面,用于附连到显微芯片的第二DNA分子(捕获链)((Geiss,G.K.等人.Nat Biotechnol 26,317-325(2008))。荧光报道分子是线性几何条形码,其长度为微米,并且由荧光染料标记的不同区域的布置组成。nCounter系统的优点是最多达800个不同的RNA靶分子的无酶且定量检测。该方法的缺点是必须在靶杂交和表面固定后拉伸几何条形码分子,以便能够读取相应的条形码。这具有两种重要的含义:(1)报告子的电泳拉伸是一个复杂的处理步骤,(2)由于该步骤的低效率,因为不可识别的条形码,大约80%的靶分子被排除。此外,需要复杂且耗时的纯化步骤,例如使用磁性粒子。总之,这些处理步骤导致昂贵的分析装置(>200,000欧元)和长测量时间(24-48小时)。
因此,这些传统方法不能满足上述对GEP的所有优选要求,并且牺牲了例如部分可量化性以获得必要的灵敏度。
用于GEP的另一种有希望的分析方法是基于通过使用荧光报告子的所谓杂交直接标记各个靶mRNA序列。荧光方法允许灵敏地检测单个分子(Joo,C.等人.Annu RevBiochem77,51-76(2008))。然而,已建立的方法无法确定大量不同的报告子。
在单细胞基础上应用可用方法的定量GEP仅可以有限的方式进行,但对于科学研究和工业研究和开发以及临床应用都是非常有利的。
GEP的基本理想特征是精确定量和分析的有效实施。这产生了用于改进的GEP的以下优选标准:
·直接检测mRNA,特别是不转化(例如,通过逆转录)成DNA,
·不扩增靶分子,因为不精确的扩增会损害定量
·因此,检测各个靶分子
·尽可能的快速分析(数分钟)
·尽可能简单的分析,特别是:很少的工作步骤。
除了核酸和蛋白质之外,还存在无数其他问题,必须检测几纳米到几十纳米的单位,并且优选计数和/或确定其浓度;诸如无机复合物和纳米颗粒。
所有这些问题的共同之处在于,应该以快速、简单和精确的方式检测分子或其他结构,并且优选地对其进行计数。特别地,精确的计数要求假阳性和/或假阴性计数事件的概率必须保持尽可能低。本发明旨在改进一个或多个所述特性,特别是降低假阳性和/或假阴性计数事件的概率。
根据独立权利要求,本发明解决了该问题。
因此,本发明涉及一种用于检测(优选定量)靶结构的方法,包括:
a)形成识别结构,包括:
(i)靶结构,以及
(ii)至少两种3D DNA纳米结构,其中,每种3D DNA纳米结构包括一个或多个向内设置的荧光染料分子,其中,每种3D DNA纳米结构特异性结合靶结构;
b)通过测量至少一个荧光信号检测(优选定量)靶结构,
其中,选择3D DNA纳米结构和荧光测量参数,使得在a)中形成的识别结构的至少一个测量的荧光信号与至少两种分离的3D DNA纳米结构在它们未结合在识别结构中时的每一种的荧光信号可区分。
此外,本发明尤其涉及3D DNA纳米结构,其上附连有至少一个荧光染料分子,其中3D DNA纳米结构的形状防止当接近其上附连有至少一个荧光染料分子的第二3D DNA纳米结构时,两3D DNA纳米结构的荧光染料分子显著相互作用。
优选地,本发明的3D DNA纳米结构是具有空腔和至少一个向内设置的荧光染料分子的3D DNA纳米结构,其中,至少一个向内设置的荧光染料分子与3D DNA纳米结构的边缘的距离为至少2nm,优选至少3nm,并且,特别优选至少5nm。
3D纳米结构的形状的巧妙选择和荧光染料分子在3D纳米结构的内部/腔内的布置确保了染料分子不与其周围环境在空间上相互作用。如所附的实验实施例所示,本发明的3D纳米结构因此与例如表面(诸如玻璃表面)的相互作用程度显著低于包含相同染料的2D纳米结构。这对于在根据本发明的方法中使用这种3D DNA纳米结构是非常有利的。例如,以这种方式可以降低靶结构的假阳性检测率,特别是如果使用了载体结构。此外,屏蔽荧光染料分子的优点是两3D DNA纳米结构的荧光染料分子不会显著相互作用(光学和/或空间)。这允许本发明3D DNA纳米结构的荧光信号不受非常接近的相邻3D DNA纳米结构的显著影响。此外,防止了由荧光染料分子介导的3D DNA纳米结构的非特异性相互作用。整体来看,这对于使用所述3D纳米结构来检测靶结构方面是非常有利的。特别地,与本发明的方法一样,这允许至少两种3D DNA纳米结构与靶结构的结合,而不会由于它们的接近而影响(例如通过猝灭、荧光淬火或FRET)单个3D DNA纳米结构的荧光信号。
取决于测量方法,为了区分靶结构和结合的DNA纳米结构的识别结构与游离DNA纳米结构甚至可能需要使用至少两种DNA纳米结构。特别是对于在解决方案中实施的测量方法的情况。当识别结构在检测方法中结合载体和/或载体表面时(如在本发明方法的优选实施方式中),这允许使用一个或多个洗涤步骤去除游离的DNA纳米结构。在使用载体的方法中使用至少两种与靶结构结合的DNA纳米结构具有可以降低假阳性检测率的优点。首先,可以清楚地区分具有至少两种DNA纳米结构的识别结构与以非特异性方式与表面相互作用的DNA纳米结构。这在其中仅一种DNA纳米结构识别靶结构的类似方法中是不可能的。第二,使用至少两种都识别靶结构的不同区域的DNA纳米结构,可以显著减少并且在许多情况下排除其他类似靶结构被错误地检测为所谓靶结构的可能性。
此外,通过至少两种3D DNA纳米结构(例如,不同的正交可测量的纳米报告子)与靶分子的独立偶联,可以显著提高测量的灵敏度。它随着独立偶联反应的效力增加。这对于高度动态是非常有利的,即,例如,用于同时测量具有非常低表达和非常高表达的基因。
在优选的实施方式中,本发明还涉及检测和/或定量至少两种不同靶结构(例如衍生自不同基因,即包含不同核酸序列的两种mRNA)的方法,优选地,多种不同的靶结构。不同的靶结构是可成对区分的。
优选地,所述方法包括以下步骤:
a)针对至少两种不同的靶结构中的每一种,形成识别结构,包括:
(i)相应的靶结构,以及
(ii)至少两种3D DNA纳米结构,其中,至少两种3D DNA纳米结构中的每一种包含一个或多个向内设置的荧光染料分子,并且,其中至少两种3D DNA纳米结构中的每一种与相应的靶结构特异性地结合,并且,其中至少两种3D DNA纳米结构与成对不同的相应的靶区域的区域结合;
b)通过测量至少一个荧光信号检测靶结构,
其中,选择所有3D DNA纳米结构和荧光测量参数,使得a)中形成的识别结构的至少一个测量荧光信号与所有分离的3D DNA纳米结构在未与对应的一种识别结构结合时的荧光信号是可区分的,并且,针对各种不同靶结构形成的识别结构的测量荧光信号可以彼此成对区分。
优选地,对于不同的靶结构的每一种进行多次检测,即,形成分配于特定靶结构的每种识别结构若干次。
在这种情况下,根据本发明的方法的所有上述优点经必要的变更后比照适用。具有相关形式,DNA纳米结构提供了附连有多个相同和/或不同荧光染料分子的可能性。如从WO2016/1407727A2和WO2016/1407726A2中已知的,因此可以产生具有可区分的荧光信号的多种DNA纳米结构。然而,可区分组合的量严格取决于DNA纳米结构的大小,这限制了可附连在其上而不彼此相互作用的荧光染料分子的数量。然而,与小结构相比,大DNA纳米结构在生产方面需要更多的努力并且是昂贵的,并且大DNA纳米结构在检测靶结构的方法中的动力学方面比小结构更差。由于使用成为识别结构的一部分的至少两种DNA纳米结构,本发明的方法具有以下优点:在显著较小的DNA纳米结构的情况下,还可以生成类似的多个与靶结构结合的荧光分子组合。此外,在识别结构中使用至少两种DNA纳米结构以进一步增加具有与WO2016/1407727 A2和WO2016/1407726 A2中所述相同的最大尺寸的识别结构中和/或靶结构上的荧光染料分子的不同可区分组合的数量。因此,能够显著增加可以在方法中检测的不同靶结构的数量。除了使用至少两种DNA纳米结构外,特别是3D纳米结构的形式和荧光染料分子在结构内部的取向是决定性的。如上所述,只有这样才能防止两DNA纳米结构的染料的相互作用,并且两种或更多种3D DNA纳米结构的组合的信号是可靠地可预测和可测量的。
根据本发明,使用了核酸纳米结构,也称为DNA纳米结构或DNA折纸。核酸纳米结构,也称为DNA纳米结构或DNA折纸,是二维或三维结构,其尤其由核酸组成。术语“折纸”描述了核酸的一条或多条链或组分,优选DNA,可以折叠成几乎任何预限定的结构或形状。这种DNA链也称为脚手架链。一条或多条脚手架链通过较短的核酸链(相对于至少一条脚手架链)保持形状,较短的核酸链也称为订书钉链。在这里,重要的是将较短的链(订书钉链)非常精确地放置在DNA折纸上明确限定的位置上。对DNA折纸进行了更详细的描述,例如,在Rothemund的“Folding DNA to create nano-scale shapes and patterns”,Nature,March 2006,pp.297-302,vol.440;Douglas的人.,Nature,459,pp.414-418(2009);以及Seeman"Nanomaterials based on DNA",An.Rev.Biochem.79,pp.65-87(2010)。作为本申请的一部分,在本文中整体引用所有这些文件。
所述DNA折纸纳米结构可以用光活性分子官能化,特别是用一个或多个荧光染料分子。因此,DNA折纸整体上变成荧光粒子。基于DNA折纸的这种DNA纳米结构描述于WO2016/140727 A2和WO2016/1407726 A2中。作为本申请的一部分,在本文中整体引用所有这些文件。
优选地,本发明的DNA纳米结构是其上附连有至少一个荧光染料分子的3D DNA纳米结构,其中,3D DNA纳米结构的形状防止当接近其上附连有至少一个荧光染料分子的相似或相同3D DNA纳米结构时,两3D DNA纳米结构的荧光染料分子显著相互作用。因此,通过空间效应,DNA纳米结构的几何形状防止了不同DNA纳米结构的荧光染料分子彼此太靠近。
从其名称可以推断,DNA纳米结构优选由DNA组成。原则上,本发明的DNA纳米结构仍然还可以含有其他核酸,诸如,例如,RNA、RNA类似物(诸如LNA)或DNA类似物或由这些组成。因此,本发明还包括本文所述的所有实施方式,其中DNA纳米结构和/或3D DNA纳米结构是核酸纳米结构和/或3D核酸纳米结构。优选由DNA形成的纳米结构,例如,这是由于这种纳米结构的生产成本显著降低。
荧光染料分子可以是例如RFP、GFP、YFP或它们的任何衍生物(参考例如PJCranfill等人,“Quantitative assessment of fluorescent proteins”,NatureMethods,13,557-562(2016))、Atto染料(例如Atto647N、Atto565或Atto488)、Alexa染料、DAPI、罗丹明、罗丹明衍生物、花菁、花菁衍生物、香豆素、香豆素衍生物(对于不同的有机荧光染料,参考例如Q.Zheng和L Lavis,“Development of photostable fluorophores formolecular imaging”,Curr.Op.Chem.Biol.39p32-38(2017)。)或量子点(quantum dot)(参考E.Petryayeva等人,“Quantum dots in Bioanalysis:a review of applicationsacross various platforms for fluorescence spectroscopy and imaging”,Appl.spectroscopy 67(2013))。
3D DNA纳米结构优选是指基本上延伸到三维的结构,并且,因此不同于本质上二维的结构,诸如,例如,略微弯曲的粗糙或波纹状表面。换句话说,彼此垂直的三个空间方向上的最小尺寸为至少2nm,优选至少5nm,更优选至少10nm,并且,特别优选至少20nm。
两个荧光染料分子的相互作用可以特别包括荧光猝灭和/或FRET。
特别地,至少两个荧光染料分子可以附连在3D DNA纳米结构上,其中,至少两个荧光染料分子之间的距离成对地大于荧光染料分子显著地成对相互作用的距离。对于具有两个荧光染料分子的3D DNA纳米结构的示例性情况,这意味着两个荧光染料分子具有的距离大于相互作用的距离。对于具有三个荧光染料分子的3D DNA纳米结构的示例性情况,这意味着每个荧光染料分子具有的与其他两个染料分子的距离大于相互作用的距离。对于更多的荧光染料分子,相应地适用。这意味着,无论观察到3D DNA纳米结构的哪个荧光染料分子对,观察到的荧光染料分子对的距离总是大于观察到的分子对相互作用的半径。“相互作用半径”是指为了显示出可忽略的相互作用(诸如荧光猝灭或FRET)荧光染料分子必须具有的最小距离。哪种染料对具有哪种相互作用半径是本领域技术人员已知的。例如,相应的相互作用半径描述于Novotny,Lukas:Principles of nano-optics 2.ed,CambridgeUniv.Press,2013,Kapitel"Optical Interactions",pp 224 et seqq.;Peter Atkins:Physikalische Chemie,5th edition,2013,Wiley-VCH,Weinheim,Chapter 17"Wechselwirkungen zwischen Molekülen",pp 657et seqq.; T:Zwischenmolekulare Energiewanderung und Fluoreszenz.In:Ann.Physik.437,1948,S.55.Doi:10.1002/andp.19484370105。关于FRET,相互作用半径可以是例如,FRET率为50%的距离。
DNA纳米结构优选用于精确布置一个或多个明确限定的标记物分子(优选荧光染料分子)的目的。为了防止标记物分子(优选荧光染料分子)之间的相互作,用几何布置是至关重要的。标记物分子(优选荧光染料分子)的限定数量允许对强度值进行编程,并且因此编程随后的明确识别。不同组合的数量是N=k^m,其中,k是强度水平的数量,m是不同(在这种情况下是正交可测量的)标记物分子(优选荧光染料分子)的数量。通过这种复用,可以区分大量不同的DNA纳米结构,如果不复用,数量仅为m。在实施例中,存在5种强度水平和3种类型的标记物分子,并且,因此,可同时区分124种而不是3种的物类。因此,DNA纳米结构是纳米报告子。
因此,本文使用术语“纳米报告子”以限定附连有标记物分子的结构,其具有可测量和识别的特征,纳米范围内测量。特别地,本发明的DNA纳米结构可以是纳米报告子。其他DNA折纸,例如,根据Rothemund,还可以是纳米报告子,以及荧光蛋白质的级联。
术语“正交可测量的”描述了可以明确地从标记物分子(例如荧光染料分子)测量值的线性组合外推至内在的标记物分子的线性组合和/或纳米结构组合的特性。以荧光检测为例,其实现可以通过光谱远距离染料,以及,因此远距离激发和检测波长(例如蓝色和红色)或通过更近邻染料结合多光谱检测,使得正交分量可以通过“线性分解”来计算。
优选,本发明的DNA纳米结构的特征在于附连了一种或多种标记物分子的一个或多个标记物分子(例如荧光染料分子),使得两个标记物分子之间的距离大于它们显著相互作用的距离,并且它们的形式阻止了在向相似的DNA纳米结构的接近时,它们的标记物分子与其他DNA纳米结构的标记物分子的显著相互作用。本发明优选的DNA纳米结构是其上附连有一种或多种标记物分子的一个或多个标记物分子的DNA纳米结构,使得相同标记物分子之间的距离大于发生荧光猝灭的距离并且,不同标记物分子之间的距离大于共振能量转移(FRET)半径,并且它们的形状阻止了在向相似的DNA纳米结构的靠近时,其标记物分子通过荧光淬火或FRET与另一DNA纳米结构的一个或多个标记物分子的相互作用。
“标记物分子”是指发出可测量信号的粒子。特别地,荧光染料分子是标记物分子。荧光染料分子的信号可以是强度,但也可以是寿命、极化、闪烁动力学或类似量。金颗粒也是这个意义上的标记物分子。
由两种标记物分子中的至少一个标记物分子发射的信号会显著取决于另一个标记物分子的存在或不存在,这时两个标记物分子,特别是两个荧光染料分子显著相互作用。为了我们的目的,例如,由于另一种分子的存在,信号强度下降1%可以忽略不计,但是下降20%不可忽视。在第一种情况下,标记物分子(特别是荧光染料分子)不会显著相互作用,而它们在第二种情况下会显著相互作用。在类似的荧光染料分子的情况下,对我们而言普遍的相互作用机制是根据荧光染料分子而不同的荧光猝灭,但是在荧光染料分子之间的距从离约2-3纳米开始其变得可忽略不计。对于不同类型的荧光染料分子,普遍的相互作用机制是共振能量转移(FRET),并且,荧光染料分子对不再显著相互作用的距离(也称为FRET距离)在的2-20纳米范围内变化,取决于单个对。FRET距离对于多种荧光染料对是已知的,例如许多染料生产商公布了其染料的FRET距离列表(例如://www.atto-tec.com/fileadmin/user_upload/Katalog_Flyer_Support/R_0_-Tabell e_2016_web.pdf)。此外,可以使用荧光染料分子的光谱特性计算FRET距离(参考Atkins,Physikalische Chemie)。
优选地,两个荧光染料分子之间的显著相互作用是下述相互作用:与一个分子在另一个分子不存在时的测量荧光信号相比,在该相互作用中,一个分子的测量荧光信号(共同激发的情况下)由于另一个分子的存在而减少至80%或更低,优选为90%或更低,特别优选为95%或更低,非常特别优选为99%或更低。
本发明的3D DNA纳米结构优选包括腔,其中,腔的容积为至少0.1仄升(1e-22升),优选至少10仄升,并且,特别优选至少100仄升。
本发明的3D DNA纳米结构可基本上形成为中空圆柱形DNA纳米结构,即中空圆柱体,其中,至少一个荧光染料分子附连在中空圆柱形DNA纳米结构的内部。中空圆柱体的腔优选地具有如上所述的容积。
对应于中空圆柱体壳体的3D DNA纳米结构的部分可包括间隙(空隙gap)。对应于中空圆柱体顶部和底部表面的3D DNA纳米结构的那些部分优选是开放的,但也可以各自至少部分地闭合和/或完全闭合。中空圆柱体的筒体和任选的顶部和底部表面由3D DNA纳米结构形成,这意味着它不是数学上精确的圆柱体,因为,例如,纳米结构的各个螺旋形成具有凸起和凹陷的不平坦表面。然而,3D纳米结构的包封基本上是圆柱体的形式。
优选地,在本发明的3D DNA纳米结构中附连有,至少2个,更优选至少3个,更优选至少4个,更优选至少5个,更优选至少6个,更优选至少15个,特别优选至少30个,特别优选至少60个荧光染料分子。优选地,3D DNA纳米结构上的荧光染料分子是统一的,即相同类型的荧光染料分子。
优选地,本发明的3D DNA纳米结构包括腔和至少一个向内设置的荧光染料分子,其中,至少一个向内设置的荧光染料分子与3D DNA纳米结构包封的边缘和/外表面的距离为至少2nm,优选至少3nm,并且,特别优选至少5nm。这具有以下优点:由于3D DNA纳米结构内部的布置和到3D DNA纳米结构边缘的最小距离,3D DNA纳米结构的染料还包含3D DNA纳米结构与其他结构在方法过程中可能相互作用的至该其他结构的最小距离。例如,当3DDNA纳米结构接触所述表面时,染料至载体表面(例如基底)的距离大于或等于最小距离。
优选地,本发明的3D DNA纳米结构包括至少两个向内设置的荧光染料分子,其中,至少两个向内设置的荧光染料分子的成对距离为至少2nm,优选至少5nm,并且,特别优选至少9nm。对于具有两个染料分子的3D DNA纳米结构的示例情况,这意味着两个染料分子的距离为至少2nm,优选至少5nm,并且特别优选至少9nm。对于具有三个染料分子的3D DNA纳米结构的示例情况,这意味着每个染料分子与另外两个染料的距离为至少2nm,优选至少5nm,并且特别优选至少9nm。对于更多的染料,同样经必要的变更后比照适用。这意味着,无论观察到3D DNA纳米结构的哪对染料,观察到的染料对的距离总是至少2nm,优选至少5nm,并且特别优选至少9nm。
染料分子的距离可以例如通过识别3D DNA纳米结构的结构来确定,从中可以推断出染料分子位于哪个位置。为此,例如可能需要进行序列分析。为了这个目的,例如通过降低盐浓度,将具有DNA纳米结构的溶液转移至具有单个核酸的溶液中。随着盐浓度的降低,与形成碱基对的氢键的永久恒定结合能相比,由于屏蔽降低,DNA骨架的负电荷变得更加普遍。因此,随着盐浓度的降低,DNA纳米结构开始不稳定,并且随着进一步降低,单个DNA双螺旋断裂并进行测序,例如,使用MySeq或Illumina,Inc.提供的其他方法,并且如由制造商指出的方案。因此,可以知道样品中存在的所有核酸链的序列。使用该序列信息可以重建DNA纳米结构的形式。为此,可以使用任何序列编辑器(例如ApE2.0(http://biologylabs.utah.edu/jorgensen/wayned/ape/)。分析中最长的DNA链是脚手架链。将其加载到编辑器中并计算与脚手架链互补的序列区域并记录各个单一订书钉链序列。对于每个订书钉链,在脚手架链上有两个不同的区域。如本说明书中的不同点所述,利用该信息,可以在CaDNAno中依次限定拓扑结构,并且,因此可以重建DNA纳米结构设计。在下一步骤中,必须确定哪个订书钉链提供有染料。这通过使用染料接头是简单的,因为特定数量的订书钉链进一步具有同一的序列,其在上述DNA纳米结构的重建后保持单链。如果直接修饰订书钉链,则必须分离各个订书钉链并分析其荧光特性。每个单个订书钉链可以通过与具有额外分子量的互补链杂交负载,并在琼脂糖凝胶电泳中从上述含有单个核酸链的溶液中分离。最后,相应的荧光测量显示哪个订书钉链标记有荧光团。这些可以在caDNAno中识别,并且可以计算荧光分子之间的距离。
作为该方法的替代,使用质谱法(Sauer S,Lechner D,Berlin K et al.(2000)Full flexibility genotyping of single nucleotide polymorphisms by the GOODassay.Nucleic Acids Res 28:E100;Haff LA,Smirnov IP(1997)Single-nucleotidepolymorphism identification assays using a thermostable DNA polymerase anddelayed extraction MALDI-TOF mass spectrometry.Genome Res 7:378–388;Wenzel T,Elssner T,Fahr K et al.(2003)Genosnip:SNP genotyping by MALDI-TOF MS usingphotocleavable oligonucleotides.Nucleosides Nucleotides Nucleic Acids 22:1579–1581;Braun A,Little DP,Koster H(1997)Detecting CFTR gene mutations byusing primer oligo base extension and mass spectrometry.Clin Chem 43:1151–1158;Sun X,Ding H,Hung K et al.(2000)A new MALDI-TOF based mini-sequencingassay for genotyping of SNPS.Nucleic Acids Res 28:E68),具有DNA纳米结构的溶液可以直接测序,并且可以同时确定哪些订书钉链附连有荧光分子。与上述类似,随后可以使用订书钉链和脚手架链(其也是最长链)的互补序列分析在CaDNAno中重建DNA结构的拓扑结构。附连有荧光分子的链上的共测量信息可以直接用于使用CaDNAno计算荧光分子的距离。
在优选的实施方式中,3D DNA纳米结构基本上形成为椭圆柱体,优选基本上形成为圆柱体。
如上所述,根据本发明的结构不是数学上精确的圆柱体,因为该结构的表面在单原子水平上极不均匀,并且,例如,在纳米结构的各个螺旋的水平上,可能包括螺旋半径或螺旋直径的量级的不均匀性。然而,即便如此,这些结构对于技术人员来说是圆柱形的,这是因为例如3D纳米结构的包封可以基本上具有圆柱体的形式。
在优选的实施方式中,3D DNA纳米结构的中空圆柱体是圆形圆柱体并且包括的外半径为至少5nm,至少10nm,优选至少20nm,优选至少20nm的外半径,优选30nm至80nm,优选为50nm至70nm,并且特别优选外半径为60nm的外半径。外半径是指包封外半径的结构。
在优选的实施方式中,3D DNA纳米结构的中空圆柱体,优选圆形圆柱体,具有至多200nm的高度,优选60nm-30nm的高度,特别优选30nm的高度。结构的高度指的是包封的高度。
优选的实施方式确保3D DNA纳米结构的足够尺寸,以便以染料分子彼此之间足够的距离附连足够数量的染料分子,并且优选附连在3D DNA纳米结构的内部。
在优选的实施方式中,3D DNA纳米结构的中空圆柱体包括的壁厚度为至多2nm,优选2nm至7nm的高度,特别优选5nm。结构的壁厚度指的是外半径和内半径之间的差。换句话说,壁厚度对应于圆柱体的外包封与圆柱体腔的内包封之间的距离。
优选地,本发明的3D DNA纳米结构的壁厚度至少对应于DNA双螺旋的直径。优选地,壁厚度具有用于2-4个,特别优选3个DNA双链的空间,其中,DNA链优选地在其长度上垂直于壁厚度布置并且另外布置在蜂巢晶格的相邻晶格位置上。
中空圆柱体的内直径限定为中空圆柱体的外直径与壁厚度的差。因此,优选的内直径由如本文所示的外直径和壁厚度的具体情况决定。
所描述的最小壁厚度结合3D DNA纳米结构的形状,其将染料与其周围环境屏蔽,还促成了通过空间位阻防止3D DNA纳米结构的染料与载体表面和/或可以附连在另一个3DDNA纳米结构的另一染料相互作用的事实。因此,特别地,防止了与另一染料的猝灭和/或FRET,和/或与载体非特异性结合,特别是基底表面。
如对于DNA折纸常见的,本发明的3D纳米结构优选包括DNA单链作为“脚手架链”。脚手架链优选包含至少3000个碱基,优选5000-50000个碱基,特别优选10000-11000个碱基。但是,可以是不同数量的碱基。优选,脚手架链是圆形(环状的,circular)的。这里,圆形意味着DNA链包含未开放的5'-末端和未开放的3'-末端。脚手架链的非限制性实例在所附实施例中提及,并在SEQ ID NO:1258中示出。
此外,如对于DNA折纸是常见的,3D纳米结构优选包含多个较短的单链DNA分子。这些优选称为“订书钉链”。根据本发明,优选选择3D DNA纳米结构的订书钉链的数量,其根据3D DNA纳米结构的至少一个脚手架链的长度调整。优选地,3D DNA纳米结构包含100-500个订书钉链。订书钉链优选包含30-100个碱基。订书钉链的非限制性实例在所附实施例中提及,并/或在SEQ ID NO:1至504中示出。
3D DNA纳米结构可以是圆柱形的,在其中标记物分子是向内设置的,与边缘的距离至少为相互作用半径的一半。这确保了不同DNA结构的标记物分子彼此接近不超过相互作用半径,而与DNA结构相对于彼此的位置无关。为此,具有近似方形的侧视图的圆柱体提供了良好的空间位阻(并且因此屏蔽)比率,小的流体动力学半径(并且因此扩散速率)和标记物分子之间足够距离的向内设置的标记物分子位置。特别地,设想了具有直径为约30-90纳米且高度为约30-90纳米的DNA纳米结构中空圆柱体。
或者,DNA结构可以是篮状的,染料位于篮子的“底部”,并且,篮子边缘至少与标记物分子类型所有组合的最大相互作用半径一样大。篮子边缘与篮筐底部可以具有任何角度,然而,优选地,该角度在-45°至+45°的范围内。优选,篮子边缘具有至多200nm的高度,优选60nm-30nm的高度,特别优选30nm的高度。结构的高度再次指的是包封的高度。
篮子的开口侧优选包括至少5nm的外直径,优选30nm至60nm的内半径,特别优选60nm的内半径。具有开放和封闭顶部表面的中空圆柱体是篮子的特定情况。
本发明的3D DNA纳米结构可以包括基本上方形的投影,即高度与宽度或直径的比率在0.8至1.2的范围内。特别地,设计成中空圆柱体和/或篮子的3D DNA纳米结构可以包括基本上方形的投影。
本发明的3D DNA纳米结构可以包括中空球的形式,并且优选地提供有向内设置的标记物分子。
本发明的3D DNA纳米结构还是线框几何形状,诸如四面体、八面体、立方体、六面体、金字塔等。
产生DNA折纸以及因此不同形状的DNA纳米结构的一般原则是公认的,例如,根据Rothemund,"Folding DNA to create nano-scale shapes and patterns”,Nature,March2006,pp.297-302,vol.440;Douglas et al.,Nature,459,pp.414-418(2009);以及Seeman,"Nanomaterials based on DNA",An.Rev.Biochem.79,pp.65-87(2010)。如已经提到的,DNA折纸的产生原理基于至少一个优选为单链的脚手架链和多个订书钉链的联合孵育。订书钉链包含至少两个结合区段,其目的是使每个结合区段与脚手架链的互补区段结合。在孵育期间,其优选在50-70℃的温度下开始,温度随后降低,订书钉链和脚手架链通过它们各自的互补结合区段结合。因此,产生的DNA纳米结构折叠成构象。通过脚手架链和订书钉链以及它们的互补结合区段的定向设计,可以根据用户的需要设计和产生DNA折纸。为了设计DNA折纸,可以使用免费访问的软件。例如,可以使用程序CaDNAno 2.5(源代码可在:https://github.com/cadnano获得;用户手册可在:http://cadnano.org/docs.html orhttp://cando-dna-origami.org/tutorial/获得;(还参考S.M.Douglas等人,"Rapidprototyping of 3D DNA-origami shapes with caDNAno,Nucleic Acids Res.,37(15),2009))。
在该程序中,优选可用于产生DNA纳米结构的任何脚手架链序列是预先确定的;特别优选的是脚手架链p7308(SEQ ID NO:1258)或p7249(SEQ ID NO:1257)。此外,所需的DNA纳米结构的拓扑结构是指定的。特别地,CaDNAno计算具有(1)长度和(2)脚手架链序列,(3)脚手架链的空间形状和(4)脚手架链的起始位置的规格的所需脚手架链和订书钉链的数量和序列。脚手架链的空间形状限定了所设想的结构的形状,并且包含螺旋的数量和布置以及通过这些螺旋的脚手架链的路线。在按下按钮时,程序能够以自主方式将确定的脚手架链与订书钉链相连。随后,能够以表格形式输出订书钉链。特别地,该表格包含订书钉链的起始和终止位置(由螺旋和来自螺旋边缘的碱基数限定,例如7[128]指来自任意但均匀限定的左边缘的第7螺旋上128个碱基的位置)用于明确识别,碱基数(即订书钉链的长度)和订书钉链的序列。值得注意的是,使用相同的结构设计(点(1)-(3))但圆形脚手架链的起始位置不同,产生了其他订书钉链序列。这些同样不受限地用于如具有不同起始位置但与这些不相容的那些。
对于在3D结构中偶尔有用的DNA螺旋的弯曲,可以限定沿着脚手架链的位置,在该位置上对应的订书钉链或多或少包含一碱基。还可以限定另外的订书钉链-订书钉链配对,这将超过脚手架链的规定长度的DNA螺旋轮廓长度进一步添加至结构。请注意,CaDNAno仅在一个平面上示出了表示,而3D表示必须通过用户的空间想象或用于设计程序的CaDNAno插件,Autodesk Maya(D Selnihin und ES Andersen,"Computer-aided design of DNAorigami structures",Comp.Meth.Synth.Biol.1244,pp 23-44(2014))来进行。CaDNAno最终提供了订书钉链的列表,通过它能够产生所需的结构。
这些订书钉链中的每一个原则上提供有荧光团/荧光染料分子。然而,该程序未设想用于限定荧光染料分子位置的功能,以在输出的订书钉链列表中进行直接标记。然而,该程序有助于该过程的可视化,因为,它示出了链的起始和终止位置以及脚手架链的形状,和螺旋的布置。使用这种工具,用户可以容易地计算3D DNA纳米结构内订书钉链上可能位置的相对距离。具体且优选地,用户选择订书钉链上待修饰的位置。这些是例如,5’末端和3’末端。随后,用户选择满足荧光染料分子定位要求的订书钉链,例如,他们定位于腔结构内部并且具有所需的与结构边缘的足够距离。如上所述,这可以由CaDNAno推断。最终,用户计算仍然能够选择的订书钉链上待修饰的位置的最小距离,其限于2-3次计算,并且可以容易地实现,这是由于CaDNAno中的可视化和该设计的晶格结构。最终,取决于待实现的荧光染料分子的数量,用户选择可选择的订书钉链的任意子集,记录订书钉链ID并且将输出的具有荧光染料分子修饰的对应序列在选择的位置处排序。对于基于荧光染料分子接头将荧光染料分子附连在DNA纳米结构上,策略是类似的,唯一的区别是输出的订书钉链序列未与荧光染料分子修饰一起使用,而是与通过与荧光染料分子接头互补的接头序列延伸的序列一起使用。此外,沿着订书钉链选择的位置优选是订书钉链的末端,其特别优选地从结构突出到内侧(和/或进入腔)。在基于接头的荧光染色分子附连至DNA结构上的情况下,相似种类的许多接头链将荧光染料分子(以及,例如,不同的荧光染料分子颜色的SEQ ID NO 1259-1261)提供至许多不同的订书钉链,在DNA纳米结构上,其各自用接头的相同的互补序列延伸。当使用荧光染料分子接头时,荧光染料分子优选结合到指向边缘或壁的荧光染料分子接头的结构的一侧。这使得移动性降低。例如,当由CaDNAno限定的订书钉链的5’末端被互补接头序列延伸时,这是荧光染料分子接头的3’末端。然而,也可以想到相反的情况。
根据与用于荧光接头的订书钉链相同模型,针对每种3D DNA纳米结构,设计了用于靶标接头的一种订书钉链,其中,对于订书钉链位置的选择标准可以不同,例如,为了与靶结构结合效率良好的暴露性。
根据Knudsen J.等人.(Nature Nanotechnology 10,892–898(2015)doi:10.1038/nnano.2015.190)产生不同3D形状(例如,以中空圆柱体结构)的3D纳米结构是已知的。为了产生基于其中设计的本发明的3D DNA纳米结构,优选所有的寡聚体或寡聚体的子集提供有位于一末端的染料或通过接头序列延伸(包含荧光染料分子的荧光接头能够与其结合),寡聚体专门结合指向中空圆柱体内侧并且不位于中空圆柱体边缘(边缘rim)之一的螺旋。对于靶标接头或载体接头,可以选择结合在位于中空圆柱体边缘的螺旋中的寡聚体。
此外,在所附的实施例中(特别是实施例1中),解释了用于产生本发明3D DNA纳米结构的示例性示例。基于用于本方法的序列,并且基于为生产提供的方法,技术人员还可以产生相似的3D DNA纳米结构(例如,具有完全不同的序列(然而,其例如在相似/相同的位置具有互补DNA序列))。
在另一方面,本发明涉及多种3D DNA纳米结构的组(组合物)(其中,这些优选本申请中描述的3D DNA纳米结构),其中,该组包括N个成对不同3D DNA纳米结构,并且,其中,该组的N个成对不同3D DNA纳米结构在荧光染料分子中彼此成对不同。优选地,N种成对不同的3D DNA纳米结构包含不同数量的荧光染料分子和/或不同的荧光染料分子,因此对于该组的N种成对不同的3D DNA纳米结构,可以生成可彼此区分的k个强度水平和/或可彼此区分的m个颜色水平。优选地,N种成对不同的3D DNA纳米结构的至少部分多次包含在该组中,使得k个强度水平中的每一个由强度分布形成,并且,其中,k个强度分布优选地在统计上是可彼此区分的。优选地,N种成对不同的3D DNA纳米结构的至少部分多次包含在该组中,使得m个颜色水平中的每一个通过由颜色分布形成,并且,其中,m个颜色水平优选地在统计上是可彼此区分的。相邻分布的重叠低于30%,优选低于20%,优选低于10%,更优选低于5%,甚至更优选低于2%,并且特别优选低于1%。
在本文中,优选应用:k>2,优选k>3,更优选k>4,甚至更优选k>5,特别优选k>6;和/或m>2,优选m>3,更优选m>4,甚至更优选m>5,特别优选m>6。
在另一方面,本发明还涉及用于检测靶结构的方法。该方法包括:
a)形成识别结构,包括:
(i)靶结构,以及
(ii)至少两种3D DNA纳米结构,其中,每种3D DNA纳米结构包括一个或多个向内设置的荧光染料分子,并且,其中,每种3D DNA纳米结构(特异性)结合靶结构,
b)通过测量至少一个荧光信号检测靶结构,
其中,选择3D DNA纳米结构和荧光测量参数,使得在a)中形成的识别结构的至少一个测量的荧光信号可与至少两种分离的3D DNA纳米结构在它们未结合在识别结构中时的每一种的荧光信号区分。
优选地,至少两种3D DNA纳米结构与成对不同的靶分子的区域和/或区段结合。因此,实现了对靶结构检测的更高特异性。
使用本发明方法检测的靶结构可以是分子、几个分子的复合体或粒子。特别地,靶结构可以是DNA(优选至少部分单链的DNA)、RNA(优选至少部分单链的RNA,例如mRNA)、LNA(优选至少部分单链的LNA)或蛋白质。然而,为复合体的靶结构也是适用的,其包括或由以下组成:一种或多种DNA(优选优选至少部分单链的DNA)、一种或多种RNA(优选至少部分单链的RNA)、一种或多种LNA(优选至少部分单链的LNA)和/或一种或多种蛋白质。原则上,靶结构还可以是无机粒子。优选,靶结构包括或是多核苷酸(即,例如,DNA、RNA或LNA),特别优选至少部分单链的多核苷酸,并且,特别优选单链多核苷酸。特别优选地,靶结构包括或是单链DNA、单链RNA或单链LNA。在优选的方面,本发明的方法用于基因表达分析。现在这种情况下,靶结构优选是mRNA或蛋白质,特别优选mRNA。因此,靶结构可以是蛋白质或mRNA。“部分(Partially)”单链意味着多核酸(即,例如,DNA、RNA或LNA)包括至少10个碱基、优选至少15个碱基,并且特别优选至少21个碱基的单链区。
因此,在优选实施方式中,本发明的方法可以是用于基因表达分析的方法,其中,检测了mRNA,并且该方法包括:
a)形成识别结构,包括:
(i)mRNA,以及
(ii)至少两种3D DNA纳米结构,其中,每种3D DNA纳米结构包括一个或多个向内设置的荧光染料分子,并且,其中,每种3D DNA纳米结构(特异性)结合成对不同的mRNA的序列区段,
b)通过测量至少一个荧光信号检测靶结构,
其中,选择3D DNA纳米结构和荧光测量参数,使得在a)中形成的识别结构的至少一个测量的荧光信号可与至少两种分离的3D DNA纳米结构中在结合在识别结构中时的每一种的荧光信号区分。
关于本发明的方法,“3D DNA纳米结构”指的是结合本发明的3D DNA纳米结构与上文所限定的相同。换言之,3D DNA纳米结构可以优选涉及如DNA折纸。
优选,包括识别结构的两种3D DNA纳米结构中的至少一种或者优选全部是本文所述的3D DNA纳米结构。
技术人员知道如何选择3D DNA纳米结构以及测量参数,以及使用哪种测量方法和哪些测量参数来区分哪些荧光信号。彼此不同的3D DNA纳米结构可以在它们的荧光反应方面彼此不同,例如,颜色和/或强度。技术人员清楚的是,当使用不同的颜色时,相应地必须使用适当的激发波长和根据颜色调整的滤波器。可获得的颜色水平m的最大数量尤其取决于如何在技术上精确地分分解两种相邻颜色分布。这同样适用于可实现的强度水平的最大数量,因为该方法基于两个相邻强度分布(强度水平k1和k1+1)仍然可以分开(至少在统计上)的事实。例如,各个强度分布可以建模,并且可以通过解卷积或统计干扰来计算多个部分重叠的强度分布的混合分布,优选地,贝叶斯推断各个分布的相对群体大小。
除了颜色和/或强度之外,还可以采用适合于区分不同识别结构的荧光信号的其他变量,诸如,例如,颜色分子的漂白率或荧光寿命。
靶结构的检测可以包括靶结构存在的检测。然而,在原则上,检测还可以包括靶结构不存在的排除。特别地,本发明的方法还适用于靶结构的定量。换言之,靶结构的检测优选包括靶结构的定量(例如在样品溶液中)。定量可以是相对的,即,相对于另一种组分(例如,样品溶液中第二结构/靶结构)或者绝对的(即,以浓度或绝对数量的形式)。例如,当识别结构的检测在溶液中时,诸如在流式细胞术中、FCS或基于光片显微镜的测量几何法中,可以以绝对项定量。然后,可以在给定的样品体积中测量所有识别结构,并且可以指示绝对数量和/或浓度。对于更精确的陈述,可以在不同的稀释步骤中多次测量样品和/或可以通过统计方法估计未考虑的靶结构的数量,优选分类的测量事件(例如由于测量事件中存在小于预期数量的DNA纳米结构)可以通过贝叶斯推断来估计。为了测量与载体或载体表面结合的识别结构,可以想到类似的方法。为此,可以选择参数,使得识别结构未与载体和/或(第一)载体表面结合的概率较低。这可以实现,例如,通过较高的载体表面和/或第一载体表面与样品体积的比率(例如,0.01/μm,优选0.1/μm,更优选0.5/μm,非常优选1/μm)和/或通过较长的孵育期(例如30分钟,优选2小时,更优选10小时,非常优选24小时)。然后,可以再次测量所有识别结构并且可以任选地将它们的数量除以样品体积。正如在上述情况中,分析中的其他步骤可以改进该估计。优选地,测量可以在样品室中进行,其中,只有一个表面包含载体接头(优选最容易测量的表面)并且所有其它表面被钝化(例如,如本文中其他地方所述),使得所有识别结构的测量更简单。
定量还可以在内部标准或经验数据的基础上进行。优选地,内部标准优选地限定具有已知浓度的比较值。
用于检测靶结构的本发明的方法还可以包括a)中形成与载体结合或与载体即时结合的识别结构。因此,形成的识别结构能够结合至载体,优选结合至载体的第一表面。因此,该方法可以包括将形成的识别结构结合至载体,优选结合至载体的第一表面的步骤。
如果识别结构结合(is bound)至载体,则优选意味着识别结构在载体上形成。识别结构与载体的结合可以通过以下方式介导:靶结构和/或至少两种3D DNA纳米结构中的一种(优选靶结构)预先结合至载体或在形成之前已经与载体结合。换言之,靶结构和/或至少两种3D DNA纳米结构中的一种(优选靶结构)可以结合至载体(在形成识别结构之前)。因此,该方法还可以包括将靶结构和/或至少两种3D DNA纳米结构(优选靶结构)中的至少一种结合至载体的步骤。例如,该步骤可包括将载体和/或第一载体表面与含有靶结构的样品溶液(以及任选的其他组分,诸如,例如其他多核苷酸,优选mRNA)一起孵育。此外,该步骤可以包括一个或多个洗涤步骤(使用缓冲溶液)。靶结构与载体和/或第一载体表面的预结合与至少一个洗涤步骤相结合具有以下优点:在识别结构形成之前,靶结构已经可以从样品溶液的背景中除去。这对于具有许多和任选类似组分的复合体样品是特别有利的。
缓冲溶液可含有1×至8×SSC,优选3×至5×SSC,并且特别优选4×SSC。其中,SSC是所谓的盐水柠檬酸钠缓冲液,由150mM氯化钠和15mM柠檬酸三钠的水溶液组成,用HCl调节至pH 7.0。作为缓冲液基础,Tris或PBS也可用作柠檬酸盐缓冲液的替代。缓冲液还可以包括NaCl和/或MgCl2(优选作为SSC的替代)。NaCl的浓度优选为50mM至1200mM,特别优选200mM至800mM。例如,NaCl的浓度可以是600mM,优选500mM,并且,特别优选300mM。MgCl2的浓度可以是2mM至20mM,优选5mM至15mM,优选8mM至12mM,并且,特别优选10mM。此外,缓冲溶液可以包含4%至6%,2%至10%,15%或20%的葡聚糖硫酸盐。优选地,缓冲液包含例如5%葡聚糖硫酸盐。缓冲溶液还可以包含聚乙二醇(PEG),例如PEG8000、PEG2000、PEG4000、PEG1000。缓冲液还可以包含0.01至5%吐温20。任选地,缓冲液可以包含EDTA,浓度优选为0.1mM至5mM,特别优选1mM。缓冲液的其他任选组分是“剪切的鲑鱼精子”(可商购),浓度优选为0.1mg/mL。“剪切的鲑鱼精子”可能能够增加特异性。缓冲液还可以包含Denhardts介质(由0.02%(w/v)BSA(组分V),0.02%Ficoll400(可商购)以及0.02%聚乙烯吡咯烷酮(PVP)的水溶液组成,也参考Cold Spring Harb Protoc 2008,doi:10.1101/pdb.rec11538),优选以1倍、2倍、3倍、4倍或5倍的浓度。特别优选的缓冲液包含或具有4×SSC、5%葡聚糖硫酸盐以及0.1%吐温20。当待检测的靶结构的至少一种,优选所有靶结构是多核苷酸,例如,mRNA时,特别优选使用该缓冲液。
如果识别结构与载体即时结合(is being bound),则这优选地意味着识别结构不仅形成,而且还结合在载体上,优选地在载体的第一表面上。换言之,识别结构的任何组分都没有预先结合。因此,该方法可以包括将识别结构结合至载体,优选结合至载体的第一表面的步骤。在a)中结合可以与识别结构形成一步进行,(即,载体和形成识别结构所需的所有组分(以及任选的结合至载体所必需的组分,例如,下述的载体接头)在一步中混合并孵育)。或者,与载体的结合可以随后发生(优选在b)中测量之前)。在两种情况下,在识别结构与载体和/或第一载体表面结合后,该方法还可以包括至少一个洗涤步骤(例如,使用上述缓冲溶液中的一种)以从载体中去除未结合的组分(例如,样品溶液中含有的3D DNA纳米结构和/或其他组分)。当识别结构是即时结合的时,该结合可以通过靶结构和/或至少两种3DDNA纳米结构的至少一种(优选靶结构)以类似于“结合”的方式来介导。
识别结构的连接(bond)(如果识别结构是与载体结合)或即时结合(binding)(如果识别结构是与载体即时结合)可以通过靶结构和/或至少两种3D DNA纳米结构中的之一(优选靶结构)来介导。特别优选的是,连接(bond)或即时结合(binding)通过靶结构介导。
识别结构与载体和/或载体第一表面的连接(bond)或即时结合(binding)可以直接介导或通过载体接头介导。因此,结合在识别结构中的靶结构和/或至少一种3D DNA纳米结构(优选靶结构)与载体或第一载体表面(例如,通过共价或非共价键)的连接或即时结合可以是直接的或由载体接头介导(即,间接)。为此,载体接头本身(特定地)结合靶结构并且与载体和/或第一载体表面结合或即时结合。载体接头可以再次直接与载体和/或第一载体表面结合,或者通过中间载体接头介导,中间载体接头特异性结合载体接头,并且,其与载体接头和/或其自身的第一表面特异性结合或即时结合。原则上,根据相同概念的可以想到其他的中间载体接头。优选的是载体接头本身结合或即时结合至载体和/或第一载体表面。载体和/或第一载体表面可以例如涂覆有载体接头。
“载体接头”优选指可以特异性结合靶结构(例如靶分子)子区域或纳米载体(即至少两个3D DNA纳米结构中的一个)的颗粒以及可以(直接或间接)偶联至载体的颗粒。可以实现与靶结构的特异性结合,例如,通过Watson-Crick碱基配对,通过Van Der Waals相互作用或氢桥实现,并且尤其可以实现使用核酸、抗体、适体、亲和子(adhiron)或纳米抗体(取决于靶结构)。
识别结构结合或即时结合在其上的载体可以具有不同的形状,并且,由不同材料形成。优选地,载体具有第一载体表面,并且,识别结构结合在第一载体表面上。因此,在用于检测靶结构的方法中,优选识别结构与载体表面结合或即时结合。载体的第一载体表面可以包括载体结构的完整的侧表面。或者,仅载体结构侧表面的一部分可以是该第一表面。第一载体表面可以是至少0.01mm2,优选至少1mm2或特别优选至少10mm2的表面。第一载体表面可以包含的面积至多为1000mm2,优选至多为400mm2或特别优选至多为100mm2。载体表面和/或载体的第一表面优选包括玻璃表面(例如,硼硅酸盐玻璃表面或石英玻璃表面)或聚合物表面(诸如,例如,ibidi GmbH的μ-Slide VI0.1,或基于其他适用于荧光显微法的聚合物的表面)。此外,载体表面和/或载体的第一表面优选可以是玻璃表面(例如,硼硅酸盐玻璃表面或石英玻璃表面)或聚合物表面(诸如,例如,ibidi GmbH的μ-Slide VI0.1,或基于其他适用于荧光显微法的聚合物的表面)。换言之,载体的第一表面优选是玻璃表面(例如,硼硅酸盐玻璃表面或石英玻璃表面)或聚合物表面(诸如,例如,ibidi GmbH的μ-Slide VI0.1,或基于其他适用于荧光显微法的聚合物的表面)。因此,载体可以包含第一表面,该第一表面包括或由以下组成:玻璃表面(例如,硼硅酸盐玻璃表面或石英玻璃表面)或聚合物表面(诸如,例如,ibidi GmbH的μ-Slide VI0.1,或基于其他适用于荧光显微法的聚合物的表面)。载体还可以包括聚合物网络,其优选包括下述材料中的一种或其组合:生物聚合物、琼脂糖、胶原。本发明上下文中优选的载体是显微镜芯片,孔或板(优选适用于高分辨率荧光显微镜;例如,Ibidi的μ板)或盖玻片。
载体或第一载体表面优选是钝化的。“钝化的”意味着载体或载体表面被涂覆或被处理,使得接触载体和/或第一载体表面的靶结构和/或3D DNA纳米结构和/或任选的其他组分(例如,含有靶结构的样品的其他组分)的非特异性结合最小化。优选地,钝化意味着表面与浓度为0.1mg/mL至10mg/mL,优选0.5mg/mL至1mg/mL的BSA溶液接触和/或用其洗涤。钝化还可以通过聚乙二醇化进行(例如在以下出版物中描述的:S Chandradoss等人,Jove2014,"Surface Passivation for Single-molecule Protein Studies”、J Piehler等人,Biosensors&Bioelectronics 2000,"A high-density poly(ethylene glycol)polymerbrush for immobilization on glass-type surfaces"、R Schlapak等人,Langmuir2006,"Glass Surfaces Grafted with High-Density Poly(ethylene glycol)asSubstrates for DNA Oligonucleotide Microarrays”)或硅烷化(例如以下出版物中描述的:B Hua等人.und Tj Ha,Nature Methods 2014,"An improved surface passivationmethod for single-molecule studies"、A.Kumar等人,Nuc Ac Research 2000,"Silanized nucleic acids:a general platform for DNA immobilization、H Labit etal,BioTechniques 2008,"A simple and optimized method of producing silanizedsurfaces for FISH and replication mapping on combed DNA fibers”)。此外,钝化还可以包括用溶液洗涤载体或载体表面,该溶液包含与靶结构(即,单链多核苷酸)相同类型但与靶结构不同的结构。当第一载体表面是或者包括玻璃表面时,载体和/或载体的第一表面特别优选是钝化的。对于玻璃表面,优选用BSA溶液,聚乙二醇化或硅烷化来钝化。
载体还可以是基质,例如,聚合物基质。这用于在单细胞水平的分析是特别有利。在这种情况下,优选的是,识别结构包埋或即时包埋聚合物基质中。替代地或另外地,识别结构可以与聚合物基质结合或即时结合。作为用于基质和/或聚合物基质的起始基底,特别是琼脂糖、胶原、DNA或其组合是合适的。特别优选琼脂糖。用于产生和包埋识别结构或识别结构的组分的方法(在靶结构和/或至少两种3D DNA纳米结构中的一种预结合的情况下)是本领域技术人员熟知的。为此,琼脂糖基质可以由琼脂糖和生物素化琼脂糖(可商购)或链霉亲和素琼脂糖(可商购)的混合物生产,并且靶标接头或载体接头可以与这些功能化结合(在生物素化琼脂糖,预先链霉亲和素冲洗的情况下)。或者,对于其他任选的基质材料,接头可以被(直接或经由生物素-链霉亲和素)偶联至特异性结合基质材料(即,抗琼脂糖、抗胶原等)的抗体。还可能的是接头以马来酰亚胺或NHS酯修饰的形式购买,并且,将接头直接共价结合到基质材料的相应化学基团上。在DNA聚合物基质作为载体的情况下,它本身可含有具有载体序列的单链区段。
上述聚合物基质能够限制通过裂解从细胞释放的靶结构的扩散,使得,即使聚合物基质中含有几个细胞,仍然可以确定从细胞中释放的靶结构位于聚合物的哪个区域。优选地,将单个细胞包埋至聚合物基质中,使得他们基本上具有50μm,优选200μm,更优选500μm的最小距离。在这种背景下,基本上是指至少80%,优选至少90%,并且特别优选至少99%的细胞至少具有上述相邻细胞的距离。聚合物网络优选包含的平均网孔尺寸为1μm至50μm,优选2μm至10μm。这用于限制扩散以及用于为载体接头或载体接头结合位点提供足够数量的结合位点。载体接头或载体接头结合位点的成对最小距离可以基本上为200nm至10μm,优选500nm至5μm,特别优选2μm至3μm。在这种背景下,基本上是指至少80%,优选至少90%,并且特别优选至少99%的载体接头或载体接头结合位点至少具有上述相邻载体接头或相邻载体接头结合位点的距离。
识别结构与载体或载体表面的连接或即时结合(例如,经由靶结构或识别结构的至少两种DNA纳米结构中的至少一种)可以经由本领域技术人员已知的不同共价键和非共价键进行,无论是直接还是经由载体接头或中间载体接头结合到载体接头。
例如,结合可以经由生物素-链霉亲和素偶联来实现。因此,与载体直接相互作用的组分(例如,载体接头、靶结构、DNA纳米结构之一或中间载体接头)可以包含生物素或链霉亲和素。因此,载体和/或载体表面可包含链霉亲和素或生物素作为对应物,使得链霉亲和素-生物素相互作用是可能的。除链霉亲和素-生物素相互作用外,还可以使用其他相互作用,诸如,例如抗体结合。还可以想到的是,与载体直接相互作用的组分(例如,载体接头、靶结构、DNA纳米结构之一或中间载体接头)经由载体接头通过NHS反应(将)附连至胺修饰的载体上和/或胺修饰的载体表面。还可以想象的是点击化学方法(例如,在H.C.Kolb;M.G.Finn;K.B.Sharpless(2001)."Click Chemistry:Diverse Chemical Function froma Few Good Reactions".Angewandte Chemie International Edition.40(11):2004–2021所述)的应用。
通过本发明的方法,能够检测。如果检测到了靶结构的若干拷贝(即,如果识别结构形成多次),则优选地,为所述靶结构形成的识别结构的大多数,优选所有识别结构与载体结合,优选结合到载体的第一表面。优选地,大多数或者所有的识别结构附连至载体,使得他们仍然可以通过b)中用于测量至少一个荧光信号的测量方法来解析。这可能意味着所有或基本上所有的识别结构或它们的测量事件在空间上不重叠(例如,当使用荧光显微法时识别结构的衍射限制图像)。优选地,所有或基本上所有的识别结构具有至少250nm,优选至少500nm,并且特别优选至少1μm的距离。这可能意味着多个载体接头或中间载体接头以所述最小距离附连在载体和/或第一载体表面上。基本上所有是指形成的识别结构的至少80%,优选至少90%,并且特别优选至少95%满足这些要求。
优选地,多种识别结构结合或即时结合至载体和/或载体表面,使得各个识别结构的荧光信号可以单独测量。经由表面上结合位点的密度和/或距离,即,例如,经由附连至载体和/或其表面,或者附连至载体和/或表面中的中间载体接头或载体接头或链霉亲和素或生物素的密度,可以调整识别结构与载体和/或载体表面结合的空间距离。
优选地,结合位点,例如,链霉亲和素、生物素、载体接头或中间载体接头以下述距离/模式/密度布置在载体和/或载体表面上。
优选地,所有或基本上所有结合位点具有至少250nm,优选至少500nm,并且特别优选至少1μm的距离。优选地,结合位点布置在具有上述边长的六边形网格中。结合位点还可以优选以任意方式布置在载体或其表面上,具有的表面密度为1e-5/μm2-1e3/μm2,优选1e-3/μm2-4/μm2,并且特别优选0.1/μm2-1/μm2。所述表面密度确保结合位点的足够距离。
另外地或替代地,载体或其表面上的识别结构的空间距离的调整,可以经由识别结构的浓度来进行。如果选择的浓度使得载体上的结合位点不发生饱和,则浓度的每一次进一步降低(即,稀释)会使得载体上附连密度降低。任选地,为了确定必要的稀释度,该方法在稀释系列中进行一次或几次,直到已经确立了合适的稀释度/浓度。因此,在形成识别结构之后,本发明的方法还可以包括在将识别结构与载体结合之前稀释形成的识别结构的溶液。
如上所述,本方法中的靶结构可以是或者包含部分单链的多核苷酸,可以是或者包含单链多核苷酸。在这种情况下,特别优选的是,载体接头包括或者是寡核苷酸,其核酸序列被设计成使得它特异性结合权利要求2靶结构的核酸序列的第一单链区段。特别优选的是,靶结构是具有多(A)尾的mRNA,其中,载体接头包括或者是寡核苷酸,其核酸序列被设计成使得它特异性结合mRNA靶结构的多(A)尾。为了结合到多(A)尾而设计的,可以包括包含多(T)序列区段。
如上所述,本发明方法中的靶结构还可以是蛋白质或包括蛋白质。在这种情况下,特别优选的是,载体接头包括或者是抗体或抗体的抗原结合结构域,其(特异性)结合靶结构。
在a)之后b)之前,用于检测靶结构的方法还可以包括使用缓冲溶液洗涤载体或第一载体表面。这种洗涤步骤具有能够去除未与表面结合的组分的目的。特别地,这种洗涤步骤可以确保未结合在识别结构上的游离3D DNA纳米结构从载体和/或第一载体表面洗掉。这尤其具有以下优点:减少或防止了游离3D纳米结构可能引起的荧光信号的干扰背景。
洗涤步骤优选使用缓冲溶液进行。优选缓冲液的组成如上述结合其他洗涤步骤已经限定的。
在识别结构中,3D DNA纳米结构可以直接或经由靶标接头结合至靶结构。
因此,至少一种,优选所有的至少两种3D DNA纳米结构可以设计成用于直接结合靶结构并且直接结合靶分子。优选地,至少一种,优选所有的至少两种3D DNA纳米结构设计成使得它/它们被直接设计到靶结构的对应区域并且直接结合靶分子。直接结合可以例如通过碱基配对(例如,使用部分单链的多核苷酸或单链多核苷酸作为靶结构)发生。因此,至少一种,优选所有的至少两种3D DNA纳米结构可以含有能够特异性结合靶结构(例如,部分单链的多核酸或单链的多核酸)的单链序列区段,优选地,所述序列区段在3D DNA纳米结构的外表面上向外设置或布置。因此,确保可以以最可能方式接近序列区段。
或者,至少一种,优选所有3D DNA纳米结构的特异性结合可以由分别设计的靶标接头介导。靶标接头或各个靶标接头被设计成结合各自的DNA纳米结,并且结合对应靶结构区域。因此,靶标接头可以包括设计成(特异性)结合对应3D DNA纳米结构的第一区段。此外,靶标接头可以包括设计成(特异性)结合靶结构的第二区段(也称为靶结合区段)。优选地,通过靶标接头介导的与靶结构结合的3D DNA纳米结构包括至少一种设计成特异性结合靶标接头的单链DNA区段。这种单链DNA区段优选是向外设置的,即,可以从外部接近。上述靶结构的第一区段优选是多核酸序列(例如,DNA、LNA或RNA序列),其设计成使得它通过杂交特异性结合3D DNA纳米结构的单链DNA区段(即,与3D DNA纳米结构的单链DNA区段互补)。该结合经由碱基配对发生。优选地,两个单链区段的至少15个,优选至少18个,并且特别优选21个碱基杂交。
靶结合接头优选包括一个(或至少一个)靶结合区段。靶结合区段优选设计成使得它介导与靶结构或靶结构相应区域的特异性结合,对应的识别结构与其结合。
如果靶结构是或者包括部分单链的多核苷酸,或者,优选单链的多核苷酸(例如,mRNA),靶结合区段优选包括设计成使得其特异性结合靶结构单链区段的核酸序列。优选地,靶结合区段与靶结构的单链区段互补。与靶结构的结合优选经由碱基配对发生。优选地,两个单链区段的至少14个,优选至少18个,并且特别优选21个碱基杂交。
如果靶结构是或者包含蛋白质,靶标接头的靶结合区段可以包含或者是肽/蛋白质或特异性结合蛋白质的抗体(或抗体的抗原结合片段)。
用于检测靶结构的方法还可以包括优选包括提供靶结构的水性样品溶液,以及提供至少两种3D DNA纳米结构。样品溶液可以,例如,包括细胞裂解物、从细胞悬浮液或组织中提取的核酸和/或mRNA。任选地,该方法还可以包括提供载体、载体接头和/或靶标接头。所述提供步骤的一个或两个由识别结构的形成步骤构成。
该方法还可以包括优选地混合含有靶结构的水性样品溶液与至少两种3D DNA纳米结构以及任选地载体接头和/或靶标接头。样品溶液可以,例如,包括细胞裂解物、从细胞悬浮液或组织中提取的核酸和/或mRNA。此外,该方法可以包括将所述混合物与载体和/或第一载体表面接触。组分的混合还可以是逐步的。
含有靶结构的样品溶液可以是细胞裂解物,优选单独细胞的裂解物。样品溶液还可以是核酸,例如,纯化的核酸的混合物。特别地,样品溶液还可以是纯化的细胞全RNA。所述全RNA可以通过可商购的试剂盒从细胞中获得(例如,Reagent、LS、PureLinkTM Total RNA Blood Kit、RecoverAllTM Total Nucleic Acid Isolation Kitfor FFPE by Thermo Scientific、或RNeasy Kits、AXgene Blood RNA Kit、或RNAlaterreagent by Qiagen GmbH)。
优选地,用于检测靶结构的本发明方法还配置成用于检测不同于第一种靶结构的其他靶结构(其中,不同的靶结构成对不同)。因此,该方法还可以称为用于检测至少两种不同靶结构的方法,其中,至少两种不同的靶结构可彼此成对区分。
用于检测靶结构的本发明的方法还是用于检测可彼此成对区分的几种不同靶结构的方法,该方法优选地还包括:
c)针对各个其他不同的靶结构形成相应分配的识别结构,其中,每种识别结构包括:
(i)相应的靶结构,以及
(ii)至少两种3D DNA纳米结构,其中,每种3D DNA纳米结构包括一个或多个向内设置的荧光染料分子,并且,其中,每种3D DNA纳米结构(特异性)结合靶结构,并且,其中,步骤b)还包括:
d)通过测量至少一个荧光信号检测一种或多种其他靶结构,
其中,选择所有3D DNA纳米结构和荧光测量参数,使得a)和c)中形成的识别结构的至少一个测量荧光信号可以与所有分离的3D DNA纳米结构在未与识别结构中的一种结合时的荧光信号区分开,并且,针对对应的不同靶结构形成的识别结构的测量荧光信号可彼此成对区分。
优选地,不同靶结构的每一种进行了多次检测,即,各种识别结构优选形成若干次。换言之,例如,可以检测N个不同的靶结构,每个不同靶结构各自可成对区分,其中N个不同靶结构中的一或多个的每一个被多次检测。这说明分配给多次检测的靶结构的这些识别结构相应地形成了多次。当然,针对相同靶结构形成的识别结构的荧光信号不必彼此不同。相反,相同荧光信号的重复测量用于定量对应的靶结构。
例如,本发明的方法具有能够检测水溶液中彼此不同的靶结构A、B和C的目的。为此,提供了分配给它们的3D DNA纳米结构a1、a2、b1、b2、c1和c2,其与靶结构A、B和C一起形成识别结构Aa1a2、Bb1b2和Cc1c2。这里,识别结构Aa1a2、Bb1b2和Cc1c2的荧光信号彼此成对不同,并且与分离的3D DNA纳米结构a1、a2、b1、b2、c1和c2不同。如果靶结构A、B和C各自被提供多次,则例如相同的识别结构Aa1a2的荧光信号不必彼此不同。然后,识别结构Aa1a2的荧光信号的每次测量对应于靶结构A的检测,使得可以从测量点的数量导出浓度。
上述用于检测靶结构的内容经必要的变更后比照适用于检测不同靶结构的其他靶结构和/或每个其他靶结构。特别地,关于靶结构、识别结构、识别结构与载体的连接或即时结合、载体接头、3D DNA纳米结构、靶标接头和其他任选的方法步骤的上述所有内容经必要的变更后比照可用于至少一种,优选所有其他识别结构。
关于多种不同靶结构的优选检测,本发明一方面还涉及检测至少两种不同靶结构的方法,其中,至少两种不同靶结构全部可彼此成对区分,并且该方法包括:
a)针对至少两种不同靶结构中的每一种,形成识别结构,包括:
(i)相应的靶结构,以及
(ii)至少两种3D DNA纳米结构,其中,每种3D DNA纳米结构包括一个或多个向内设置的荧光染料分子,并且,其中,每种3D DNA纳米结构(特异性)结合靶结构,
b)通过测量至少一个荧光信号检测(优选定量)靶结构,
其中,选择所有3D DNA纳米结构和荧光测量参数,使得a)中形成的识别结构的至少一个测量荧光信号可以与所有分离的3D DNA纳米结构在未与对应识别结构的一种结合时的荧光信号区分开,并且,针对对应的不同靶结构形成的识别结构的测量荧光信号可彼此成对区分。
同样在这种情况下,用于检测靶结构的方法的上述优选特征经必要的变更后可比照应用。特别地,关于靶结构、识别结构、识别结构与载体的连接或即时结合、载体接头、3DDNA纳米结构、靶标接头和其他任选的方法步骤的上述所有内容经必要的变更后比照可用于至少两种识别结构的至少一种,优选每一种。
如果将用于检测靶结构的方法设计成用于检测不同于第一种靶结构的其他靶结构,或者,如果该方法用于检测至少两种不同靶结构,靶结构可以是相同类型(例如,几个mRNA)的具有成对不同结构/序列的靶结构,或者靶结构包括相同类型的几个不同靶结构。或者,还可以想象不同类型的靶结构(例如,的至少一种部分单链的DNA或单链的DNA以及至少部分单链的RNA或单链的RNA;或至少部分单链的RNA或单链的RNA)。优选地,然而,相同类型的靶结构在结构上和序列上可彼此成对区分。特别地,意图是本发明的方法是用于基因表达分析的方法。对于基因表达分析,优选所有的靶结构是RNA,特别优选mRNA,或蛋白质。在基因表达分析的情况下,特别优选所有的靶结构是RNA,特别优选mRNA。
如果该方法用于检测超过一种靶结构,特别优选包含一种其他靶结构的至少一种其他识别结构,则优选所有其他识别结构与载体结合或即时结合。特别优选,所有的识别结构结合至相同的载体。上述关于识别结构提及的“即时结合(is being bound)”和“结合(isbound)”经必要的变更后可比照应用于在更多/其他识别结构的情况下的“结合(arebound)”和“即时结合(are being bound)”。
在一种、多种或所有识别结构与载体和/或第一载体表面结合/即时结合的实施方式中,优选所有或基本所有的识别结构与载体结合/即时结合,使得它们仍然可以通过在b)中用于测量至少一个荧光信号的测量方法来解析。这可能意味着所有或基本上所有的识别结构和/或它们的测量事件(例如,在荧光显微法情况下的(衍射限制)图像)在空间上不重叠。优选地,(相同靶结构或几种靶结构的)所有识别结构包括至少250nm,优选至少500nm,并且特别优选至少1μm的距离。在本上下文中基本上所有意味着形成的识别结构的至少80%,优选至少90%,并且特别优选95%满足该要求。
基于用于检测靶结构的方法的示例,关于如何实现这种识别结构的密度,上述方法相应地应用。特别地,载体和/第一载体表面可以包括结合一种或多种靶结构的(预)结合的载体接头。这些一种或多种靶结构可以以上述距离与载体和/或第一载体表面结合。
在用于检测一种或多种靶结构的本发明方法中如何理解“特异性结合(specifically bind)”或“特异性结合(specifically bound)”是本领域技术人员已知的。特别地,在多核苷酸单链杂交的背景下,“特异性结合(specifically bind)”可意指至少14个,优选至少18个,特别优选至少21个互补碱基对。特别地,“特异性结合(specificallybind)”还可以指至少90%,优选95%,特别优选99%的两个互补多核苷酸单链的碱基配对(优选具有前一句中提及的最小碱基对数量)。在蛋白质-蛋白质互相作用的环境中(例如,抗体抗原结合),“特异性结合(specifically bind)”可以优选指结合亲和力(-ΔΔG)为至少5kcal/mol,优选至少8kcal/mol,并且特别优选至少至少11kcal/mol。结合亲和力可以测量,例如,通过热泳测量(M.Jerabek-Willemsen等人.,"Molecular Interaction StudiesUsing Microscale Thermophoresis",Assay Drug Dev Technol,9(4):342-353(2011))。另一种可能性是电动力学测量,例如,由Dynamic Biosensors GmbH提供的(A.Langer等人,"Protein analysis by time-resolved measurements with an electro-switchableDNA chip",Nat.Comm.4:2099(2013))。
在本发明方法中,一种或多种靶结构可以存在于粗裂解物中(对于无后续纯化步骤的裂解的一般名称)或细胞裂解物中(其中过滤掉许多细胞组分,但是RNA以不纯的形式存在),福尔马林固定石蜡包埋的组织(“FFPE”组织)中。优选地,几种或所有靶结构存在于相同的细胞裂解物中或相同的福尔马林固定石蜡包埋的(“FFPE”)组织中。特别优选地,靶结构(target structure)或靶结构(target structures)在溶液中,优选所有靶结构在相同的溶液中。优选地,各种靶结构以至少1fM,优选至少100fM,并且特别优选至少1pM的浓度存在。优选地,靶结构以至多10pM,并且特别优选至多1nM的浓度存在。因此,每种靶结构的优选浓度范围可以是,例如,1fM至1nM或者100fM至1nM。如果预期溶液中的一种或多种靶结构的浓度较高,则该方法可以包括在形成识别结构之前对样品溶液进行稀释。
在本发明的方法中,3D DNA纳米结构优选每种以10pM至10μM的浓度使用。
在本发明的方法中,一种或多种识别结构的形成优选在缓冲溶液中进行,缓冲溶液优选称为杂交缓冲液。缓冲溶液可以含有1×至8×SSC,优选3×至5×SSC,并且特别优选4×SSC。“SSC”是所谓的盐水柠檬酸钠缓冲液,由150mM氯化钠和15mM柠檬酸三钠的水溶液组成,用HCl调节至pH 7.0。作为柠檬酸盐缓冲液诸如SCC的替代,Tris或PBS也可用作缓冲碱。缓冲液(优选作为SSC的替代)还可以包含NaCl和/或MgCl2。NaCl的浓度优选为50mM至1200mM,特别优选200mM至800mM。例如,NaCl的浓度可以是600mM,优选500mM,并且,特别优选300mM。MgCl2的浓度可以是2mM至20mM,优选5mM至15mM,优选8mM至12mM,并且,特别优选10mM。此外,缓冲溶液可以包含4%至6%,2%至10%,15%或20%的葡聚糖硫酸盐。优选地,缓冲液包含例如5%葡聚糖硫酸盐。缓冲溶液还可以包含聚乙二醇(PEG),例如PEG8000、PEG2000、PEG4000、PEG1000。缓冲液还可以包含0.01至5%吐温20。任选地,缓冲液还可以包含EDTA,浓度优选为0.1mM至5mM,特别优选1mM。缓冲液的其他任选组分是“剪切的鲑鱼精子”(可商购),浓度优选为0.1mg/mL。剪切的鲑鱼精子能够增加特异性。缓冲液还可以包含Denhardt介质(由0.02%(w/v)BSA(组分V),0.02%Ficoll 400(可商购)以及0.02%聚乙烯吡咯烷酮(PVP)的水溶液组成,同样参考Cold Spring Harb Protoc 2008,doi:10.1101/pdb.rec11538),优选以1倍、2倍、3倍、4倍或5倍的浓度。特别优选的缓冲液包含或具有4×SSC、5%葡聚糖硫酸盐以及0.1%吐温20。当待检测的靶结构的至少一种,优选所有靶结构是多核苷酸,例如,mRNA,特别优选使用该缓冲液。
在本发明的方法中,本发明方法中识别结构的形成优选在4℃至50℃,优选18℃至40℃的温度下进行。例如,温度可以是40℃,特别优选使用30℃。如果要检测部分单链的多核苷酸或单链多核苷酸中的一种或多种,则所述温度是特别优选的。
识别结构的形成可包括结合在其中的组分的混合物的孵育期。优选地,孵育期可以是5min至20h,优选1h至20h(例如1h、2h、4h、8h),特别并且优选10h至20h。
在本发明的方法中,一种或几种识别结构可以在溶液中形成(优选在上述缓冲溶液中),然后与载体结合。
为了在溶液中形成识别结构,优选将包含待检测的靶结构的样品与DNA纳米结构混合(每个靶结构至少2个;优选以上述浓度)。任选地,还可以将一种或多种载体接头添加到溶液中。但是,载体接头已经预结合至载体。将反应配偶体在溶液中而不是例如在基底上与小尺寸的纳米报告子以及高浓度(可达到的范围10pM-10μM)一起孵育,增加了反应动力学。因此,可以大大减少从准备开始到分析结果的时间段。这可能是重要的,特别是,对于时间敏感的临床样品的基因表达分析,诸如,例如,对于败血症病原体的确定。而且,总体上,它是经济上有利的。
例如,可以以与载体接头结合的每个靶结构1nM的浓度添加载体接头。优选地,载体接头以每个靶结构的3D DNA纳米结构的总浓度添加(例如,3nM,针对靶标的3D DNA纳米结构,每个1nM)。用于形成识别结构的总体积可以是,例如1×μl至500μl。对于形成的识别结构的形成,优选地,将上述混合物添加到载体和/或第一载体表面。载体接头可以在孵育期间预结合(如果它不是用于形成识别结构的溶液的一部分)或结合至载体表面。结合/连接是共价的或者非共价的(例如,生物素-链霉亲和素相互作用)。与载体的结合可包括1min至2h、5in至1h、8min至25min,并且特别优选10min的孵育期。孵育期的其他实例是2min、5min、20min。孵育可以在4℃至30℃,优选室温(例如20℃至25℃)下进行。在施加于载体表面之前,可以再次稀释溶液(例如,用PBS或用于形成识别结构的上述缓冲液),以例如减少葡聚糖的量,覆盖更大的面积或调整浓度。在测量之前,使用缓冲液洗涤表面。优选地,上文限定的缓冲液可以用于洗涤步骤。
优选地,在本发明方法中对至少一个荧光信号的测量包括:
e)通过荧光显微法,优选以落射荧光、TIRF、光片和/或共聚焦显微法创建包含关于从样品部分/截面(部分,Ausschnitte)发射的荧光信号的数据的数据集。换言之,至少一个荧光信号的测量可以包括测量几个荧光信号或者测量其中多个荧光信号,例如,测量由二维或三维样本部分发射的强度并将其存储在像素或体素中。在这种背景下,测量可以包括具有若干激发波长和/或若干检测波长(区域)的同时或顺序测量。
优选地,靶结构和/一种或多种其他靶结构的检测包括:
f)识别包含在数据集中的一个或多个数据,表示识别结构的一种的荧光信号。
该识别可以包括,例如,将像素或体素的测量强度与特定激发波长和/或若干检测波长与一组这样的预定组合进行比较,使得该比较指示分配给该组的识别结构。
因此,步骤e)可以包括:记录包含样品部分/截面的荧光数据的至少一个图像文件。此外,步骤f)中的识别可以包括以下步骤:
F1)读出数据和/或图像元素的颜色和/或强度信息(并且优选地);以及
f2)将数据和/或图像元素的颜色和/或强度信息(并且优选地)与代表识别结构的颜色和/或强度信息进行比较。
优选地,通过荧光显微技术将样品可视化。为了进一步处理信息,可以直接分析所提供的图像。然而,优选地,它是保存的。图像优选以数字方式保存;但是,也可以类似地记录图像。图像信息可包括一种或多种图像元素的图示。图像元素是图像的一部分。图像元素可以是,例如,在第二强度的背景上的第一强度的延伸点或另一结构。
取决于DNA纳米结构上荧光染料的选择,靶结构可通过其颜色和/或强度区分。优选地,样品部分分别用每种颜色记录并保存在单独的图像中。然而,样品部分还可以使用多种颜色同时记录,其中,对不同颜色的记录保存在共同图像中或单独图像中。
这些步骤可以手动进行,由软件手动支持或由分析软件自动完成。
在手动分析中,知道待检测靶结构的颜色和/或强度信息的用户可以搜索和识别图像中对应的颜色和/或强度信息。任选地,用户可以分析这样识别的靶结构的数量和/或对应的位置信息。如果多色识别结构中的颜色和/或强度信息存在于不同图像中,则可以分别针对每种颜色分析图像元素,即,每个图像,分别包括位置信息。随后,通过识别具有足够相似位置信息的不同颜色的图像元素,可以识别彩色的元素。或者,首先,可以通过叠加各个单色图像来创建彩色图像。然后可以将彩色识别结构识别为具有对应混合颜色的图像元素。必须注意图像不必以真色彩存储。当然,颜色可以在稍后的时间点添加到图像中,无论是真色彩还是假色彩。
手动分析可以通过图像分析软件(例如,Fiji等)或通过软件支持来进行。存在向全自动分析的平稳过渡。总体上,可以手动或使用软件执行任何单个步骤。
本发明的一个方面涉及利用软件进行的分析,其中,该分析以有噪声应用的基于密度的空间聚类(简称DBSCAN)方法为基础。该描述基于待分析图像具有多种荧光元素的情况下的应用。如果在图像中仅存在一种或无荧光元素,则该分析,当然以相同的方式工作。
优选地,为此目的编程的分析软件是基于python的。基于python的分析软件加载图像数据。优选地,它确定图像框中的局部最大值。优选地,图像框的尺寸根据所使用的物镜的放大率或数值孔径来调整,并且,是例如是9到15个像素。优选地,软件将梯度的累积绝对值计算成信号的与背景无关的测量值。为了区分具有和不具有DNA纳米结构的图像框,优选使用DBSCAN(有噪声应用的基于密度的空间聚类)(公布于:Ester,Martin;Kriegel,Hans-Peter;Sander,Xu,Xiaowei"A density-based algorithm for discoveringclusters in large spatial databases with noise",Proceedings of the SecondInternational Conference on Knowledge Discovery and Data Mining(KDD-96).AAAIPress.pp.226–231(1996))。或者,还有其他聚类算法可以使用,诸如,HDBSCAN(RicardoJ.G.B.Campello,Davoud Moulavi,Joerg Sander;"Density-Based Clustering Based onHierarchical Density Estimates",Advances in Knowledge Discovery and DataMining 2013,pp.160-172)、k-means或层次聚类(Rokach,Lior,and Oded Maimon."Clustering methods."Data mining and knowledge discovery handbook.Springer US,2005.321-352)。任选地,图像框被划分为梯度的累积绝对值的不同值的组,其对应于根据不同数量的荧光团的划分。如果通过不同强度的识别结构识别出不同的靶结构,则这种情况尤其可以发生。由于它们的横向(x,y)位置,具有颜色通道的DNA纳米结构的图像框可以与所有具有其他颜色通道的DNA纳米结构的图像框进行比较,以便识别多色荧光元素,例如,图像中的斑点。当然,如果仅存在单色的识别结构,则这种情况完全不用发生。软件可以储存单色斑点数量的确定值以及任选地它们在图像中的位置,和多色斑点数量的测量值以及任选地它们在图像中的位置,以供进一步使用。软件还可以储存斑点的强度值。例如,软件可以用于在与多色荧光元素比较中确定单色荧光元素的数量。例如,软件可以用于比较在实验中检测到的荧光元素的数量与具有或者不具有靶结构的样品。这在所附的实施例1至3中详细解释。
由于在其制造期间每种3D纳米结构的彩色染料分子的数量的变化偶尔会发生以及由于测量误差,通常遇到例如强度分布。如果两个相邻的强度分布具有显著的重叠,则可能无法仅仅由于身份测量而得出结论:毫无疑问只有一种识别结构。为了解决这个问题,统计方法是优选的,通过该方法可以实现统计分配。可以沿着强度或颜色梯度并且通过一种或多种测量值(诸如所述累积梯度,框的平均值,框内的最大像素值或其他测量值)一维或多维地描述这些分布。任选地测量的多维分布是具有相同靶结构的识别结构的单个分布的混合分布。分析的目的是计算单个分布对混合物分布的贡献,从而了解不同靶结构的相对数量。这些单个的分布可以通过单独的测量或通过模型近似来确定(例如,高斯分布和/或泊松分布或其混合,可能在不同维度上不同)。因此,可以通过去卷积或通过统计方法计算不同的贡献,优选基于贝叶斯推断(参见D.S.Sivia"Data Analysis,a bayesiantutorial",Oxford science publications,second edition,ISBN:0198568320and/orA.B.Downey,"Think Bayes",O'Reilly,Sebastopol CA,fourth edition2013ISBN:9781449370787)。在这种背景下,有可能最初假设靶结构数量的均匀分布并从那里开始,针对每个测量事件计算源自每个分布的概率,从而更新关于靶结构数量的分布的假设。在足够多的识别结构测量事件(超过50,优选地超过100,特别优选地超过1000)的情况下,该方法独立于靶结构数量分布的初始假设。
我们考虑到以下情况:不同纳米报告子的强度分布重叠并且仅可以通过统计手段通过如方法步骤(h/ii)中所述的考虑分布直方图清楚地彼此区分。这增加了分析的复杂性,因为对于每个测量事件,计算了从各种纳米报告子得出的概率,并且在更大的重叠和相同量的测量事件的情况下,结果变得更不确定。然而,因为强度水平降低,不同纳米报告子的组合数量以及因此靶分子的数量可以增加。因此,在强度分布重叠的大小和同时可定量的靶分子数量之间存在权重。因此,可以为每个应用选择最佳配置。
优选地,针对各个不同的靶结构形成的识别结构的荧光信号不同于所有分离3DDNA纳米结构在未与识别结构中的一种结合时的荧光信号,并且针对各个不同靶结构形成的识别结构的荧光信号在以下方面成对不同,对应的荧光信号包括颜色和/或强度信息的可区分的不同组合。如上所述,“不同的可区分的组合”可以是可在统计上区分的组合,即,可区分性是通过统计方法保证的。
优选地,在3D DNA纳米结构中,使用了k个成对(统计上)可区分的强度水平和/或m个成对(统计上)可区分的颜色水平,其中,优选地,k个强度水平的每一个是由强度分布形成的,并且,其中,k个强度分布优选统计上是可彼此区分的,和/或,其中优选,m个颜色水平的每一个是由颜色分布形成的,并且,其中,m个颜色分布优选统计上是可彼此区分的。为此目的,优选地,相邻分布的重叠小于30%,优选小于10%,特别优选小于5%,特别优选小于2%,并且非常特别优选小于1%。
在本上下文中,以下优选应用:k>2,优选k>3,更优选k>4,甚至更优选k>5,特别优选k>6。在本上下文中,以下优选应用:m>2,优选m>3,更优选m>4,甚至更优选m>5,特别优选m>6。
进一步优选的是,步骤f1)包括以下步骤和/或技术中的一种或其组合:确定图像元素的平均值,确定图像元素的最大值,计算累积梯度,计算一种或多种统计矩,诸如,例如,图像元素中像素的方差、变化系数、fano因子。进一步优选的是,步骤f2)基于聚类方法,优选地DBSCAN(有噪声应用的基于密度的空间聚类)方法。进一步优选的是,步骤f1)和/或f2)基于概率考虑,优选考虑贝叶斯定理。
特别地,每个正交可测量类型的纳米报告子和/或3D DNA纳米结构的强度水平可以例如,通过数量、距离或取向的变化进行不同地选择。梯度可以如此之大以至于由于诸如光子的泊松统计或不完整的标记物分子附着等因素延伸的强度分布不重叠。因此,分析是简单的,并且可以通过纳米报告子直接识别测量值。在另一方面,梯度也可以更小,使得相邻强度水平的强度分布重叠最高达0.1至10%甚至5至80%。然后,在测量之后,可以将来自正交测量结果分布的矢量与预期的矢量进行比较,并且靶分子的相对频率可以通过基于最小二乘或最大似然的方法来确定。不论包括或不包括预期的分布,使用基于群集的机器学习方法可以实现相同的目的。
还优选的是,将正交可测量的纳米报告子的一种设计成固定的振幅值,其测量值可与双振幅值中的一个明显区分,并且针对每种靶分子设计。因此,测量事件中靶分子的数量可以直接测量,这有利于液体内的测量和分析(如在FCS样,流动和微流体检测的情况)。
对于上述方法,优选地,使用若干3D DNA纳米结构的组(组合物)(其中,3D DNA纳米结构优选地是本申请中描述的那些),其中,该组(组合物)包含彼此不同的N种3D DNA纳米结构,并且其中,由于荧光染料分子,彼此不同的该组的N种3D DNA纳米结构是成对不同的。优选地,彼此不同的N种3D DNA纳米结构包含不同数量的荧光染料分子和/或不同的荧光染料分子,使得通过该组的N种可成对区分的3D DNA纳米结构可以产生k个可区分的强度水平和/或m个可区分的颜色水平。优选地,N种可成对区分的3D DNA纳米结构的至少部分多次包含在该组中,使得k个强度水平中的每一个由强度分布形成,并且,其中,k个强度分布优选地在统计上是可彼此区分的。优选地,N种成对不同的3D DNA纳米结构的至少部分多次包含在该组中,使得m个颜色水平中的每一个由颜色分布形成,并且,其中,m个颜色水平优选地在统计上是可彼此区分的。相邻分布的重叠小于30%,优选小于10%,特别优选小于5%,甚至优选小于2%,并且特别优选小于1%。
同样在本文中,以下优选应用:k>2,优选k>3,更优选k>4,甚至更优选k>5,特别优选k>6;和/或m>2,优选m>3,更优选m>4,甚至更优选m>5,特别优选m>6。
优选地,本发明的方法可用于微流体系统,其中,该方法优选包括:
将含有靶结构的溶液引入微流体系统;以及
测量微流体系统中溶液的至少一个荧光信号。
替代地,该方法可以包括:
在微流体系统中形成靶结构;以及
测量存在于微流体系统中的靶结构的至少一个荧光信号。
在本发明的方法中,至少一个荧光信号的测量可以通过荧光显微法进行,优选通过以下技术中的一种或其组合进行:点扫描、宽视场显微法、(旋转盘)共聚焦显微法;其中,每次优选地发生交替激光激发(ALEX)或通过脉冲交错光源的激发。
在本发明的方法中,至少一个荧光信号的测量可以通过流式细胞术(例如,如果不使用载体)和/或荧光相关光谱法(FCS)进行,优选通过以下技术中的一种或其组合:共聚焦显微法、双光子光谱、落射荧光、光片显微法;TIRF;其中,每次优选地发生交替激光激发(ALEX)或通过脉冲交错光源的激发。
在优选的实施方式中,体积原位保持恒定,其用作测量装置的点检测器照射并观察,如用FCS(荧光相关光谱法)。样品流体可以是显微镜物镜上和/或光纤末端上的0.5-5μl小液滴,或者位于容积最高为50ml的样品室中。激发和/或检测可以由光学单模或多模光纤引起,然而,也可以由经典光学元件引起,诸如,例如显微镜物镜。对被照射的样品体积中扩散的复合物进行了检测和分析,作为测量结果。这种配置的一个优点是仅需要使用极低量的样品体积。因此,它有利地用于仅有少量可用的起始材料的临床应用中。
在其他优选的实施方式中,使用流式毛细管作为类似于“流式细胞术”的测量装置。然而,在这种情况下,必须注意所有检测到的靶分子、接头和纳米报告子的复合物应该具有相似的速度,否则,其将根据它们的速度产生测量信号。由于毛细管中存在的速度梯度,含有样品的流体长丝应该在毛细管的中间流动,并且应该被包封圆柱体并且随着流动移动的稠流体包围,其理想地具有较低的粘度并且不容易与样品流体混合。此外,在荧光检测的情况下,激发强度应该较高,以便能够检测到具有最低强度水平纳米结构的尽可能小的标记物的数量。因此,可以使用内直径大约为1毫米的毛细管,将样品流体限制为直径为5-100微米的长丝。这种限制可以通过首先在具有较大内直径的在第二步骤中变细的毛细管区域中产生较稠的样品流体长丝来完成。相反或另外,可以使用声波以将纳米报告子-接头-靶标-分子复合物移动到毛细管的中间。为了最大化检测效率,可以使用中空椭圆体作为镜,毛细管和照射区域位于其焦点,并且检测器位于其另一个焦点中,使得检测器独立于光的辐射的方向收集光。为了扩展具有相同激发波长的多色检测,可以将二向色镜集成到这样的中空椭圆体中并且增加用于反射部分的腔,使得在拓扑结构上存在椭圆体用于通过二向色镜和反射辐射的两种透射辐射。因此,毛细管可以位于共同焦点中,并且用于发射光的不同光谱分量的各个检测器可以位于与共同焦点不同的相关焦点。这可以扩展到更多的光谱分布。对于不同的光波长,这种检测设备可以存在于沿毛细管的不同位点,其中,由于流速和距离导致的时间延迟而存在将不同检测设备的测量事件关联的可能性。该变型的实施方式提供了特别高的测量速率,并且,因此对于时间敏感的应用,它是优选的。
在其他优选实施方式中,测量装置可以基于微流体。这里,微流体通道可以具有1-100μm的边长和高度。对于不同的光波长,可以使用沿通道的相同或不同的区域。通道的至少一侧在照射区域中应该是透明的。例如,其他侧可以由硅组成,并且,因此提供更高比例的发射光用于检测。照射可以由激光或LED经由基于透镜的光学器件,或经由直接安装在通道壁中或窗口后面的LED或二极管激光器,或经由可以按压或永久固定到通道的光学单模或多模光纤进行。检测还可以使用照相机或点检测器经由基于透镜的光学器件,或经由直接安装在通道壁中或窗口后面的检测器,或经由可以按压或永久固定到通道的光学单模或多模光纤进行。照射和检测的光路可以部分地使用相同的部件。
用所述DNA纳米结构或其他纳米报告子实现所需目的的示例性方法具有以下步骤或由以下步骤组成:
a.每种类型的靶分子分配给一种或多种正交可测量的纳米报告子(例如本发明的3D DNA纳米结构)的明确组合,使得每种类型的靶分子可以以明确的方式区分和识别,
b.对于每种类型的靶分子,识别了至少与纳米报告子一样多的结合区域,并且选择能够特异性且明确地与结合区域结合的接头,
c.分配给一种靶分子的纳米报告子和接头明确地配对和偶联,
d.任选地,未分配给纳米报告子的接头与基底或基质偶联,
e.由纳米报告子和接头组成的复合物与溶液中的靶标一起孵育,
f.用针对存在的标记物的测量设备对所产生的由靶分子、接头和纳米报告子组成的复合物进行测量,使得仅在可接受的低概率的情况下,多于一种复合物可对测量事件响应,
g.过滤掉不具有最小正交信号数的测量事件,
h.其他测量事件为
i.通过各个信号直接分配的纳米报告子的组合,或者
ii.统计上分配的从纳米报告子的组合得出的概率,这是通过比较测量信号的测量分布和每种纳米报告子预期的分布,或者
iii.通过基于聚类的算法分配的从纳米报告子组合中得出的概率;
i.靶分子的相对数量由计算的纳米报告子组合的总数或其概率确定;以及
j.任选地,利用已知的至少一种靶分子的绝对浓度或利用已知的测量体积,确定了靶分子的绝对数量;以及
k.任选地,相对于所有其他纳米报告子,可以正交测量的纳米报告子可以针对所有目标分子设计,使得其测量信号提供关于一个测量事件所基于的目标分子的数量的信息。
特别地,设想本发明的方法和/或3D DNA纳米结构用于基因表达分析,优选用于单细胞水平的基因表达分析。
为了分析单细胞水平的基因表达,优选使用聚合物基质作为载体,其优选部分或完全包封细胞。在这种情况下,识别结构的形成优选地包括:
1)提供被聚合物基质(即载体)部分或完全包封的细胞;
2)裂解细胞(例如,通过超声波处理,压力(例如使用French Press或氮气减压)或冷冻;或化学方法,例如通过改变pH值,引入EDTA,酶诸如溶菌酶、甲苯、曲拉通X或Trizol,它们都使细胞壁或膜不稳定或诱导自溶),从而使mRNA从细胞中释放出来。
在相应选择聚合物基质的细胞浓度和密度的情况下,聚合物基质限制了从细胞释放的靶结构的扩散,使得即使聚合物基质中含有几个细胞,仍然可以确定在聚合物的哪个区域中mRNA从细胞中释放出来。优选地,单个细胞包埋在聚合物基质中,使得它们基本上具有50μm,优选200μm,更优选500μm的最小距离。在本文中,“基本上”是指至少80%,优选至少90%,最优选至少99%的细胞与相邻细胞具有至少上述的距离。聚合物网络优选具有1μm至50μm,优选2μm至10μm的平均网孔尺寸。这是为了限制扩散以及分别为载体接头和载体接头结合位点提供足够数量的结合位点。载体接头对和/或载体接头结合位点对的最小距离可以是基本上200nm至10μm,优选500nm至5μm,最优选2μm至3μm。在本文中,“基本上”是指至少80%,优选至少90%,最优选至少99%的接头载体和/或载体接头结合位点与相邻接头载体和/或载体接头结合位点具有上述距离。
为了分析单细胞水平的基因表达或分析其他细胞成分,可以优选
(a)用聚合物基质部分或完全包封细胞;如果仅部分地进行,则未被聚合物基质覆盖的侧是不可向流体渗透的或仅在某种程度上可向流体渗透可能是有利的;
(b)用能够结合靶分子的元件,诸如互补的寡核苷酸,修饰聚合物基质;
(c)裂解细胞,使目标分子扩散并与修饰元件结合;
(d)添加纳米结构或其他元件,并在适当的孵化期后洗掉它们;
(e)例如,在落射荧光,光片或共聚焦显微镜上对样品成像,并如上所述进行分析。
在这种情况下,重要的是要注意,在聚合物基质上结合靶分子的元件的修饰密度应该足够低,使得大多数复合物在图像中不重叠。为了实现该目的,可选地“扩展显微术”(F.Chen,P.Tillberg,E.Boyden,“Expansion Microscopy”,Science Express 2015)可用于最后的制备步骤以增加复合物的距离。用于聚合物基质的合适起始材料特别是琼脂糖,但也可以是胶原,DNA或其他材料。
在用于分析单细胞水平的单细胞基因表达或其他分子细胞组分的进一步应用中,可能的是
(a)将细胞固定并穿孔;
(b)添加纳米结构或其他可正交测量的元件,其被最优化以与靶分子结合,并在适当的孵育期后将其洗掉;
(c)使用“扩展显微法”将样品溶胀到适当的程度;
(d)例如,使用落射荧光、光片或共聚焦显微镜对样品成像,并如上所述进行分析。靶分子纳米结构复合物的图像重叠的频率又显示出溶胀程度的适合性。
本文中,术语“细胞”包括所有生物有机体,特别是人细胞,来自组织样品的细胞、动物细胞、细菌、真菌、藻类。
术语“基质”包括来自琼脂糖凝胶或其他基底,其目的是:
将靶分子的扩散限制到这样的程度,使得它们可以被局部地分配给细胞和/或将扩散限制在表面附近2.5D,以最小化由于扩散引起的靶损失;
和/或为表面附近的靶分子提供锚点。
具有单细胞精确性的基因表达分析可以包括:
1.待分析细胞在表面(在一些情况下是显微镜载玻片)上的沉积,在一些情况下涂覆(包被),使细胞附着,和/或具有结合靶分子的基质和/或锚点。
2.在一些情况下,细胞被基质覆盖。
3.裂解细胞以使靶分子从细胞中释放。
4.释放的靶标结合在表面上和/或在一些情况下与基质结合。
5.纳米报告子结合靶标。
6.使用相应的仪器检测纳米报告子。
7.分析数据并使用聚类分析将检测到的纳米报告子和相应的靶标分配给它们的原始细胞。
单细胞的基因表达分析可以例如使用微流体进行。术语微流体涵盖通道和管、阀和玻璃表面、PDMS、聚合物、硅等。
微流体是显微镜玻璃表面上的微流体,显微镜由至少一个大于待分析细胞的腔室组成,并且具有适合接收适当数量的纳米报告子的表面积,使得它们在物理上是分开的(在一些情况下为100μm×100μm);腔室的入口和出口,细胞、溶液和纳米报告子等可以通过该入口和出口来引导;以及入口和出口处的阀门来打开和关闭它们。在一些情况下,腔室出口小于细胞或被阻塞,使得细胞在裂解之前甚至在洗涤步骤中仍然保留在腔室中。在一些情况下,腔室前面有可以在每个腔室中准确地放置一个细胞的装置。
在下文中,我们假设同时处理多个腔室,然而,该程序可以应用于单个腔室而没有限制。
使用微流体的方法可以例如包括:
1.通过引入相应的材料并在适合的反应时间后将它们洗掉,将锚固剂(例如,载体接头)附连到腔室的表面上;
2.引导细胞穿过入口,在一些情况下通过靶向分选和/或随机分选,其中,在大多数腔室中,恰好有一个细胞或没有细胞;
3.裂解缓冲液流入腔室并关闭腔室。在一些情况下,细胞通过光裂解。关闭腔室可防止当前释放的核酸靶标扩散出腔室。
4.核酸靶标与表面上的锚固剂(例如,载体接头)结合。
5.在适当的反应时间之后,打开入口和出口,并将未在表面结合的组分从腔室中洗掉。
6.引入纳米报告子(例如,3D DNA纳米结构)并使纳米报告子与附连在表面上的靶标反应。在一些情况下,纳米报告子可以已经在裂解步骤中引入。
7.洗掉未结合的纳米报告子。
8.检测和识别每个腔室中表面上通过靶标结合的纳米报告子。
本发明尤其涉及以下方面:
(1)DNA纳米结构,其特征在于,一种或多种类型的标记物分子的一个或多个标记物分子以这样的方式附着在其上,使得两个标记物分子之间的距离大于它们显著相互作用的距离,并且该形式阻止了当接近相似的DNA纳米结构时,其标记物分子与其他DNA纳米结构的标记物分子显著相互作用。
(2)方面(1)的多种DNA纳米结构,其特点在于由测量不同DNA纳米结构的组产生的强度分布在一组与另一组之间具有0.1-80%的重叠。
(3)多种DNA纳米结构,其特点在于,在这些的每一种上,一种或多种类型的标记物分子的一个或多个标记物分子以这样的方式附着,使得两个标记物分子之间的距离大于它们显著相互作用的距离,并且,由测量不同DNA纳米结构的组产生的强度分布在一组与另一组之间具有0.1-80%的重叠。
(4)一种量化多种靶分子的方法,其特征在于
a.向每种类型的靶分子分配一种或多种可正交测量的纳米报告子(方面1的或其他)的明确组合,以这样的方式使得每种类型的靶分子可以被明确的区分和识别,
b.对于每种类型的靶分子,至少识别了与前述纳米报告子一样多的结合区域,并且选择能够特异性且明确地与结合区域结合的接头,
c.分配给一种类型的靶分子的纳米报告子和接头明确地配对并偶联,
d.任选地,未分配给纳米报告子的接头与基底或基质偶联,
e.由纳米报告子和接头的复合物与溶液中的靶标一起孵育,
f.用针对存在的标记物的测量设备测量所产生的靶分子、接头和纳米报告子的复合物,使得只有在可接受的低概率的情况下,多于一种复合物可对测量事件响应,
g.过滤掉不具有最小正交信号数的测量事件,
h.其他测量事件为
i.基于各个信号直接分配纳米报告子的组合,或者
ii.统计上分配了从纳米报告子的组合得出的概率,这是基于比较测量信号的测量分布和每种纳米报告子预期的分布,或者
iii.通过基于聚类的算法分配了从纳米报告子组合中得出的概率;
i.基于纳米报告子组合的计算的总数或其概率确定了靶分子的相对数量;以及
J.任选地,利用已知的至少一种靶分子的绝对浓度或利用已知的测量体积,确定了靶分子的绝对数量;以及
k.任选地,对于所有靶分子,相对于所有其他分子,可以设计可正交测量的纳米报告子,使得其测量信号提供关于作为测量事件基础的靶分子数量的信息。
(5)根据方面(4)的方法,其特征在于,通过基底结合接头将靶分子固定在基底上,并且所得到的不同复合物的大多数图像在空间上不重叠。
(6)根据方面(4-5)的方面,其特点在于,靶分子、接头和纳米报告子在水溶液中扩散,并且在局部有限的体积中对后者进行检测,其中,若干纳米颗粒的同时检测是通过靶分子的纳米颗粒结合的指示并且测量结果的组合允许识别靶分子。
(7)根据方面(4-5)的方面,其特点在于,靶分子、接头和纳米报告子在水溶液中泵送穿过毛细管通过一个或多个检测体积,其中,若干纳米颗粒的同时检测是通过靶分子的纳米颗粒结合的指示并且测量结果的组合允许识别靶分子。
(8)根据方面(4-5)的方面,其特点在于,靶分子、接头和纳米载体在水溶液中泵送穿过微流体通道通过一个或多个检测体积,其中,若干纳米颗粒的同时检测是通过靶分子的纳米颗粒结合的指示并且测量结果的组合允许识别靶分子。
(9)一种用于单细胞分配的基因表达分析的方法,其特点在于:
a.将待分析的细胞沉积在基底上,将其选择性地或全体地用基质和/或用锚点进行细胞附着性涂覆(包被),用于靶分子结合;
b.细胞任选地用基质覆盖;
c.裂解细胞以使靶分子从细胞中释放;
d.释放的靶分子结合在基底和/或基质的表面上;
e.将接头引入权利要求(1-3)或其他来源的纳米报告子并且与靶标结合;
f.使用相应的仪器来检测纳米报告子;
g.分析数据并使用聚类分析将识别的靶分子分配至其来源细胞。
(10)一种微流体系统中单细胞的基因表达分析的方法,其特点在于:
a.通过引入相应的材料并在适当的反应时间后洗涤,将接头附连在基底的表面上;
b.将待分析的细胞引入可关闭的腔室中,在一些情况下通过靶向分选和/或随机分选,其中,调节参数使得在大多数腔室中恰好一个细胞或没有细胞位于其中;
c.关闭腔室;
d.在一些情况下,在引入权利要求(1-3)或其他来源的纳米报告子之后,使用缓冲液或光裂解细胞;
e.给予核酸靶分子时间与基底表面上的接头结合;
f.在适当的反应时间之后,打开入口和出口,并将未在表面结合的组分从腔室中洗掉;
e.如果之前没有引入,将适合偶联的接头引入权利要求(1-3)或其他来源的纳米报告子;
h.在适当的反应时间后,将未结合的纳米报告子洗掉;
i.检测并识别通过靶分子与腔室的基底表面结合的纳米报告子。
在下文中,参考附图更详细地解释本发明的优选实施方式。
附图说明
图1示意性地示出针对基因表达分析的示例性情况的本发明的内在基本原理;
图2示意性地示出根据本发明方法优选实施方式的单细胞基因表达分析的过程;
图3示意性地示出,根据优选实施方式的使用微流体系统的本发明方法的过程;
图4实验结果;以及
图5是根据优选实施方式的3D DNA纳米结构。
图1示意性地示出了针对基因表达分析的示例性情况的本发明的内在基本原理。如图示意性所示,通过弯曲或卷绕2D DNA纳米结构1a形成圆柱体的壁,形成了所示情况(见图1的顶部)的具有向内设置的荧光染料分子1b(具有距离1c)的圆柱体3D DNA纳米结构1d,并且圆柱体通过其形式的相应订书钉链来稳定。圆柱体包括与其偶联的接头1f,通过接头3D DNA纳米结构1d可以结合靶结构1g(见图1的底部),在这种情况下对mRNA杂交。作为实例,附图标记1h表示用于3D DNA纳米结构和靶结构的特异性结合的Watson Crick碱基配对。所示的序列仅以示例性方式说明机制,并不反映实际序列。靶结构经由报告子偶联至基底1j的任选情况在方括号1i中表示。
在图1的底部,三种3D DNA纳米结构1e以示例性方式结合到靶结构1g,其中,在荧光条件下测量的三种3D DNA纳米结构1e的强度彼此不同,其由“强”、“弱”和“中等”表示,并且由3D DNA纳米结构中存在的不同数量的荧光分子引起。
图2示意性地示出了根据本发明方法优选实施方式的单细胞基因表达分析的过程。单个细胞2c在聚合物基质2b上或其中。放大聚合物基质(见底部的图)示出了基质的聚合物长丝2g,载体接头2h位于聚合物长丝上。在步骤1至步骤2之间,裂解细胞使得靶结构,例如,mRNA(2d)以及其他细胞组分(2e)可以自由移动。靶结构在步骤3中与载体接头结合。步骤4示出了添加的3D DNA纳米结构,其具有与靶结构结合的靶标接头。由于载体接头的较高局部密度,各个细胞的靶结构可以特别好地被捕获,使得靶结构可以分配给各个细胞并且不与相邻细胞混合。然而,由于聚合物基质的三维性,可以例如通过使用共焦显微镜以令人满意的方式彼此分开地成像密集布置的识别结构。
图3示意性地示出了根据优选实施方式的使用微流体系统的本发明方法的过程。微流体系统由入口和出口通道、阀门和腔室组成。这些在步骤1中被冲洗。在步骤2中,将锚固剂或载体接头引入并固定在腔室3c的底部,例如,通过生物素链霉亲和素结合。在步骤3中,腔室入口阀是渐缩的,使得穿过入口通道引入的单个细胞3d卡在开口中。在步骤4中,将细胞从入口通道移除,并且在步骤5中,允许卡住的细胞3f流过开口。到目前为止出口阀是关闭的,使得细胞不会流出腔室。因此,确保每个腔室恰好包含一个细胞。步骤6显示了用于裂解细胞的裂解试剂的引入。在步骤7中,关闭阀门以防止靶结构(例如,mRNA)逸出并进行孵育,直到靶结构3h已经结合到腔室底部上的载体接头。步骤8示出了从腔室中洗掉未结合的细胞组分和与载体接头结合的靶结构。在步骤9中,将3D DNA纳米结构(也称为“纳米报告子”)3j引入腔室中并与靶结构结合,从而形成识别结构。这说明了用于单细胞基因表达分析的方法,不是基于随机因素,因此具有低错误率。
图5A示意性地示出了根据优选实施方案的3D DNA纳米结构,其为中空圆柱体,具有的直径d为60nm并且高度h为30nm。在所示的示例中,圆柱体由22个直径大约为2nm的DNA双螺旋形成,每个圆圈代表螺旋的横截面。正如可以很容易地看到的,中空圆柱体的壁的外表面不是光滑的(或者甚至在数学上也不完美)。相反,壁的外表面在圆周方向上包括凸起和凹陷。这同样适用于内壁。螺旋布置在网格状或蜂窝状结构上,以这样的方式使得壁厚度b对应于约2.5个螺旋直径(或大约5nm)。
以下非限制性实施例用于说明本发明。
实施例1:制备本发明的3D纳米结构
1.描述制备的3D DNA纳米结构
制备了具有中空圆柱体形式的3D DNA纳米结构,为基于三种不同染料的变体即变体3D_1、3D_2和3D_3,每个3D DNA纳米结构具有60个向内设置的染料分子,在相同的3D DNA纳米结构内其示出了与相邻染料分子的成对距离为至少9nm:
·3D DNA纳米结构变体3D_1:红色荧光:
3D_1DNA纳米结构包含60个向内设置的具有互补于用于红色染料的荧光团接头(称为序列S1)的附加的单链序列的DNA订书钉链,和60个相关的各自具有Atto647N染料分子(寡聚体SEQ_ID_NO 1259)的荧光团接头。根据它们位于中空圆柱体内的标准,在设计程序CaDNAno中选择待延伸以用于荧光团接头结合的订书钉链,它们位于距中空圆柱体边缘超过2nm的位置,在中空圆柱体的内表面上具有自由端并且彼此之间具有大于5nm的距离(由于设计和序列长度,后一条件适用于满足上述标准的所有订书钉链)。染料接头在3'末端进行了染料修饰。选择该末端以确保染料尽可能靠近中空圆柱体的内表面并且具有很小的余地,并且因此尽可能少地彼此接近。可以想到每个染料接头的若干修饰,然而,它们意味着更高的成本和对其定位的某种失控。此外,3D_1纳米结构具有T1靶标接头(寡聚体SEQ_ID_NO 1263)。用于3D_1纳米结构的所有订书钉链的SEQ ID NO总结在下面的限定寡核苷酸库(oligopool)3D_S1中。链p7308(SEQ ID NO 1258)用作脚手架链。
·3D DNA纳米结构变体3D_2:绿色荧光:
3D_2DNA纳米结构包含60个向内设置的具有互补于用于红色染料的荧光团接头(称未序列S2)的附加的单链序列的DNA订书钉链,和60个相关的各自具有Atto565染料分子(寡聚体SEQ_ID_NO 1260)的荧光团接头。根据它们位于中空圆柱体内的标准,在设计程序CaDNAno中选择待延伸以用于荧光团接头结合的订书钉链,它们位于距中空圆柱体边缘超过2nm的位置,在中空圆柱体的内表面上具有自由端并且彼此之间具有大于5nm的距离(由于设计和序列长度,后一条件适用于满足上述标准的所有订书钉链)。染料接头在3'末端进行了染料改性。选择该末端以确保染料尽可能靠近中空圆柱体的内表面并且具有很小的余地,并且因此尽可能少地彼此接近。可以想到每个染料接头的若干修饰,然而,它们意味着更高的成本和对其定位的某种失控。3D_2纳米结构具有T2靶标接头(寡聚体SEQ_ID_NO1264)。用于3D_2纳米结构的所有订书钉链的SEQ ID NO总结在下面的限定寡核苷酸库3D_S2中。链p7308(SEQ ID NO 1258)用作脚手架链。
·3D DNA纳米结构变体3D_3:蓝色荧光:
3D_3DNA纳米结构包含60个向内设置的具有互补于用于红色染料的荧光团接头(称为序列S3)的附加的单链序列的DNA订书钉链,和60个相关的各自具有Atto488染料分子(寡聚体SEQ_ID_NO 1261)的荧光团接头。根据它们位于中空圆柱体内的标准,在设计程序CaDNAno中选择待延伸以用于荧光团接头结合的订书钉链,使得它们位于距中空圆柱体边缘超过2nm的位置,在中空圆柱体的内表面上具有自由端并且彼此之间具有大于5nm的距离(由于设计和序列长度,后一条件适用于满足上述标准的所有订书钉链)。染料接头在3'末端进行了染料修饰。选择该末端以确保染料尽可能靠近中空圆柱体的内表面并且具有很小的余地,并且因此尽可能少地彼此接近。可以想到每个染料接头的若干修饰,然而,它们意味着更高的成本和对其定位的某种失控。3D_3纳米结构具有T3靶标接头(寡聚物SEQ_ID_NO1265)。用于3D_3纳米结构的所有订书钉链的SEQ ID NO总结在下面的限定寡核苷酸库3D_S3中。链p7308(SEQ ID NO 1258)用作脚手架链。
所有DNA寡聚体(也是具有荧光染料的DNA寡聚体)都是从Eurofins GenomicsGmbH获得的。
在上面已经讨论过的图5中示出了实施例1的3D DNA纳米结构的图示。图5A示出了仅在附连的荧光染料分子的类型方面不同的3D DNA纳米结构3D_1、3D_2和3D_3的示意图。图5B示出了切割和展开(为了说明的目的)的图5A的中空圆柱体,图5A的中空圆柱体的内表面以平面视图示出。每个x代表一个荧光染料分子。在最邻近的成对染料分子之间的距离a为9nm。在其他染料分子之间,成对距离,例如距离g,更大。染料分子各自位于图5A中的最内侧螺旋处,使得染料分子与中空圆柱体的外部边缘的距离大致对应于圆柱体壁的壁厚,即,大约2.5个螺旋直径(对应于大约5nm)。
2.制备方案:
在本实施例中,根据下面描述的制备方案制备了3D DNA纳米结构3D_1-3。
为了制备3D DNA纳米结构3D_1、3D_2和3D_3,首先将以下组分混合以获得200μl的最终体积:
·10nM p7308脚手架链(SEQ ID NO 1258)
·每种订书钉链100nM(来自寡核苷酸库3D_S1的SEQ ID NO用于DNA纳米结构3D_1,来自寡核苷酸库3D_S2的SEQ ID NO用于DNA纳米结构3D_2,来自寡核苷酸库3D_S3的SEQID NO用于DNA纳米结构3D_3)
·120nM荧光染料修饰的DNA寡核苷酸(SEQ ID NO 1259用于DNA纳米结构3D_1,SEQ ID NO 1260用于DNA纳米结构3D_2和SEQ ID NO 1261用于DNA纳米结构3D_3)
·400nM靶标结合DNA寡核苷酸(SEQ ID NO 1263用于DNA纳米结构3D_1,SEQ IDNO 1264用于DNA纳米结构3D_2和SEQ ID NO 1265用于DNA纳米结构3D_3)
·1×缓冲液FB02(缓冲液成分见下文)
为了使DNA纳米结构折叠成它们的形状,首先加热上述混合物以熔化可能存在的二级结构,然后缓慢冷却,使得碱基配对能够达到热平衡并因此达到平面构象。为此,使用以下热循环器程序(使用德国汉堡Eppendorf GmbH的Mastercycler Nexus X2):
·在65℃下保持15分钟,并且在1分钟内冷却至50℃
·以恒定速率在66小时内从50℃降至40℃
·在66小时结束时(任选地,可以在40℃下再孵育几小时)在1分钟内冷却至4℃并在2-8℃下储存
·随后,将正确折叠的3D DNA纳米结构与单个DNA寡聚体或较小的DNA寡聚体复合物分离。为此,使用了以下的PEG纯化(用聚乙二醇的纯化):
·将获得自热循环仪的液体与相同体积的PEGX01混合(缓冲液的成分见下文)
·在室温(20-25℃)下以13000-16000rfc离心35min
·用移液管除去上清液
·重悬于200μl FB02(缓冲液成分见下文)和200μl PEGX01(缓冲液成分见下文)中
·在室温(20-25℃)下以13000-16000rfc离心35min
·重悬于100μl FB01(缓冲液成分见下文)
·在室温下在黑暗中并且以600rpm在振荡器上孵育8至16小时,优选10小时(在这种情况下过夜)以完全溶解沉淀。
·在4℃下储存用于进一步使用(可能最长达12个月,但在当前的情况下,仅储存几天)
虽然在当前的情况下,使用了DNA纳米结构的PEG纯化,可供选择地,原则上可以使用琼脂糖凝胶电泳进行纯化以及随后从凝胶中提取DNA纳米结构。基于琼脂糖凝胶电泳的纯化可以例如如下进行:
·制备1.5%w/v琼脂糖凝胶
·向样品中加入5×Orange G上样缓冲液
·在冰冷却下,在4.5V/cm电压下电泳1.5h
·用DNA折纸带切除凝胶片。后者具有大约2mm的宽度,并且任选地可以更容易地识别它,通过上样有脚手架链的相邻泳道,将其置于Freeze'N Squeeze TM DNA凝胶提取旋转柱(BioRad Laboratories GmbH)中并且在室温下以1050rcf离心4.5min。
使用的缓冲溶液
PEGX01
·15%PEG 8000
·1×TAE(Tris醋酸盐EDTA缓冲液:40mM Tris、20mM乙酸、1mM EDTA)
·12.5mM MgCl2
·500mM NaCl
FB01:
·10mM Tris pH8.0
·1mM EDTA
·12.5mM MgCl2
FB02:
·10mM Tris pH8.0
·1mM EDTA
·10mM MgCl2
DNA寡核苷酸库:
为了制备相应的3D DNA纳米结构,基于以下库中它们的SEQ_ID_NO(方括号中的数字表示相应的SEQ ID NO)组合了寡聚体:
寡核苷酸库_3D-S1:[1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、199、200、201、202、203、204、205、206、207、208、209、210、211、212、213、214、215、216、217、218、219、220、221、222、223、224、225、226、227、228、229、230、231、232、233、234、235、236、237、238、239、240、277、286、287、288、278、279、280、281、282、283、284、285、286、287、288、469、478、479、480、470、471、472、473、474、475、476、477、478、479、480、265、274、275、276、266、267、268、269、270、271、272、273、274、275、276、301、310、311、312、302、303、304、305、306、307、308、309、310、311、312、253、262、263、264、254、255、256、257、258、259、260、261、262、263、264、289、298、299、300、290、291、292、293、294、295、296、297、298、299、300、241、250、251、252、242、243、244、245、246、247、248、249、250、251、252]
寡核苷酸库_3D-S2:[1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、199、200、201、202、203、204、205、206、207、208、209、210、211、212、213、214、215、216、217、218、219、220、221、222、223、224、225、226、227、228、229、230、231、232、233、234、235、236、237、238、239、240、277、286、287、288、278、279、280、281、282、283、284、285、286、287、288、481、490、491、492、482、483、484、485、486、487、488、489、490、491、492、337、346、347、348、338、339、340、341、342、343、344、345、346、347、348、361、370、371、372、362、363、364、365、366、367、368、369、370、371、372、325、334、335、336、326、327、328、329、330、331、332、333、334、335、336、349、358、359、360、350、351、352、353、354、355、356、357、358、359、360、241、250、251、252、242、243、244、245、246、247、248、249、250、251、252]
寡核苷酸库_3D-S3:[1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、199、200、201、202、203、204、205、206、207、208、209、210、211、212、213、214、215、216、217、218、219、220、221、222、223、224、225、226、227、228、229、230、231、232、233、234、235、236、237、238、239、240、277、286、287、288、278、279、280、281、282、283、284、285、286、287、288、493、502、503、504、494、495、496、497、498、499、500、501、502、503、504、385、394、395、396、386、387、388、389、390、391、392、393、394、395、396、409、418、419、420、410、411、412、413、414、415、416、417、418、419、420、373、382、383、384、374、375、376、377、378、379、380、381、382、383、384、397、406、407、408、398、399、400、401、402、403、404、405、406、407、408、241、250、251、252、242、243、244、245、246、247、248、249、250、251、252]
实施例2:制备用于比较的2D DNA纳米结构
1.描述制备的2D DNA纳米结构
制备了矩形2D DNA纳米结构,为基于三种不同染料的变体即变体2D_1、2D_2和2D_3,每个2D DNA纳米结构具有48个染料分子,在相同的2D DNA纳米结构(这种2D DNA纳米结构,例如在WO 002016140727的图1A中示出)内染料分子具有的与最近的染料分子之间的成对距离为5nm:
·2D DNA纳米结构变体2D_1:红色荧光:
2D_1DNA纳米结构包含48个具有互补于用于红色染料的荧光团接头(称为序列S1)的附加的单链序列的DNA订书钉链,和48个相关的各自具有Atto647N染料(寡聚体SEQ_ID_NO 1259)的荧光团接头。根据它们都位于矩形的同一侧的标准在设计程序CaDNAno中选择待延伸以用于荧光团接头结合的订书钉链,并且彼此之间具有足够的长度足使得它们彼此之间不会显著地互相作用。染料接头在3'末端进行了染料修饰。选择该末端以确保染料尽可能靠近矩形的表面并且具有很小的余地,并且因此尽可能少地彼此接近。可以想到每个染料接头的若干修饰,然而,它们意味着更高的成本和对其定位的某种失控。2D_1纳米结构具有T1靶标接头(寡聚体SEQ_ID_NO 1266),根据设计,其位于结构的边缘。用于2D_1纳米结构的所有订书钉链的SEQ ID NO总结在下面的限定寡核苷酸库2D_S1中。链p7249(SEQ IDNO 1257)用作脚手架链。
·2D DNA纳米结构变体2D_2:绿色荧光:
2D_2DNA纳米结构包含48个具有互补于用于红色染料的荧光团接头(称为序列S2)的附加的单链序列的DNA订书钉链,和48个相关的各自具有Atto565染料(寡聚体SEQ_ID_NO1260)的荧光团接头。根据它们都位于矩形的同一侧的标准在设计程序CaDNAno中选择待延伸以用于荧光团接头结合的订书钉链,并且彼此之间具有足够的长度足使得它们彼此之间不会显著地互相作用。染料接头在3'末端进行了染料修饰。选择该末端以确保染料尽可能靠近矩形的内表面并且具有很小的余地,并且因此尽可能少地彼此接近。可以想到每个染料接头的几种修饰,然而,它们意味着更高的成本和对其定位的某种失控。2D_2纳米结构具有T2靶标接头(寡聚体SEQ_ID_NO 1267),根据设计,其位于结构的边缘。使用的所有订书钉链的SEQ ID NO总结在下面的限定寡核苷酸库2D_S2中。链p7249(SEQ ID NO 1257)用作脚手架链。
·2D DNA纳米结构变体2D_3:蓝色荧光:
2D_3DNA纳米结构包含48个具有互补于用于红色染料的荧光团接头(称为序列S3)的附加的单链序列的DNA订书钉链,和48个相关的各自具有Atto488染料(寡聚体SEQ_ID_NO1261)的荧光团接头。根据它们都位于矩形的同一侧的标准在设计程序CaDNAno中选择待延伸以用于荧光团接头结合的订书钉链,并且彼此之间具有足够的长度足使得它们彼此之间不会显著地互相作用。染料接头在3'末端进行了染料修饰。选择该末端以确保染料尽可能靠近矩形的内部表面并且具有很小的余地,并且因此尽可能少地彼此接近。可以想到每个染料接头的若干修饰,然而,它们意味着更高的成本和对其定位的某种失控。2D_3纳米结构具有T3靶标接头(寡聚体SEQ_ID_NO 1268),根据设计,其位于结构的边缘。所用的所有订书钉链的SEQ ID NO总结在下面的限定寡核苷酸库2D_S3中。链p7249(SEQ ID NO 1257)用作脚手架链。
2.制备方案:
在本实施例中,根据下面描述的制备方案制备了2D DNA纳米结构2D_1-3。
为了制备2D DNA纳米结构2D_1-3,首先将以下组分混合以获得200μl的最终体积:
·10nM p7249脚手架链(SEQ ID NO 1257)
·每种订书钉链100nM(来自寡核苷酸库2D_S1的SEQ ID NO用于DNA纳米结构2D_1,来自寡核苷酸库2D_S2的SEQ ID NO用于DNA纳米结构2D_2,来自寡核苷酸库2D_S3的SEQID NO用于DNA纳米结构2D_3)
·120nM荧光染料修饰的DNA寡核苷酸(SEQ ID NO 1259用于DNA纳米结构2D_1,SEQ ID NO 1260用于DNA纳米结构2D_2和SEQ ID NO 1261用于DNA纳米结构2D_3)
·400nM靶标结合DNA寡核苷酸(SEQ ID NO 1266用于DNA纳米结构2D_1,SEQ IDNO 1267用于DNA纳米结构2D_2和SEQ ID NO 1268用于DNA纳米结构2D_3)
·1×缓冲液FB02(缓冲液成分见实施例1)
为了使DNA纳米结构折叠成它们的形状,首先加热上述混合物以熔化可能存在的二级结构,然后缓慢冷却,使得碱基配对能够达到热平衡并因此达到平面构象。为此,使用以下热循环器程序(使用德国汉堡Eppendorf GmbH的Mastercycler Nexus X2):
·在65℃下保持15分钟,并且在1分钟内冷却至60℃
·以恒定速率在1小时内从60℃降至20℃
·在1分钟内冷却至4℃并在4℃下保持
随后,将正确折叠的2D DNA纳米结构与单个DNA寡聚体或较小的DNA寡聚体复合物分离。为此,使用了以下的PEG纯化(用聚乙二醇的纯化):
·将获得自热循环仪的液体与相同体积的PEGX01混合(缓冲液的成分见下文)
·在室温(20-25℃)下以13000-16000rfc离心35min
·重悬于200μl FB01和200μl FB02中(缓冲液成分见实施例1)
·在室温(20-25℃)下以13000-16000rfc离心35min
·重悬于100μl FB01中
·在室温下(20-25℃)在黑暗中并且以600rpm在振荡器上孵育过夜。
·储存于-20℃下(例如,最长达3年)或4℃下(例如,最长达12个月)以供进一步使用(在当前情况下,储存几天)
·同样在这种情况下,原则上可以使用实施例1中提到的基于琼脂糖凝胶电泳的纯化作为基于PEG的纯化的替代。
使用的DNA寡核苷酸库:
为了制备相应的2D DNA纳米结构,基于以下库中它们的SEQ_ID_NO(方括号中的数字表示相应的SEQ ID NO)组合了寡聚体:
寡核苷酸库_2D-S1:[529、538、539、540、530、531、532、533、534、535、536、537、538、539、540、563、572、573、574、564、565、566、567、568、569、570、571、572、573、574、623、632、633、634、624、625、626、627、628、629、630、631、632、633、634、657、666、667、668、658、659、660、661、662、663、664、665、666、667、668、693、702、703、704、694、695、696、697、698、699、700、701、702、703、704、705、714、715、716、706、707、708、709、710、711、712、713、714、715、716、787、796、797、798、788、789、790、791、792、793、794、795、796、797、798、799、808、809、810、800、801、802、803、804、805、806、807、808、809、810、575、584、585、586、576、577、578、579、580、581、582、583、584、585、586、587、596、597、598、588、589、590、591、592、593、594、595、596、597、598、669、678、679、680、670、671、672、673、674、675、676、677、678、679、680、681、690、691、692、682、683、684、685、686、687、688、689、690、691、541、548、549、550、542、543、544、545、546、547、548、549、550、551、560、561、562、552、553、554、555、556、557、558、559、560、561、562、635、642、643、644、636、637、638、639、640、641、642、643、644、645、654、655、656、646、647、648、649、650、651、652、653、654、655、656]
寡核苷酸库_2D-S2:[529、538、539、540、530、531、532、533、534、535、536、537、538、539、540、563、572、573、574、564、565、566、567、568、569、570、571、572、573、574、623、632、633、634、624、625、626、627、628、629、630、631、632、633、634、657、666、667、668、658、659、660、661、662、663、664、665、666、667、668、505、514、515、516、506、507、508、510、512、514、515、516、517、526、527、528、518、519、520、522、524、526、527、528、599、608、609、610、600、601、602、604、606、608、609、610、611、620、621、622、612、613、614、616、618、620、621、622、697、699、701、709、711、713、791、793、795、803、805、807、951、960、961、962、952、953、954、955、956、957、958、959、960、961、962、963、972、973、974、964、965、966、967、968、969、970、971、972、973、974、1045、1054、1055、1056、1046、1047、1048、1049、1050、1051、1052、1053、1054、1055、1056、1057、1066、1067、1068、1058、1059、1060、1061、1062、1063、1064、1065、1066、1067、1068、541、548、549、550、542、543、544、545、546、547、548、549、550、551、560、561、562、552、553、554、555、556、557、558、559、560、561、562、635、642、643、644、636、637、638、639、640、641、642、643、644、645、654、655、656、646、647、648、649、650、651、652、653、654、655、656]
寡核苷酸库_2D-S3:[529、538、539、540、530、531、532、533、534、535、536、537、538、539、540、563、572、573、574、564、565、566、567、568、569、570、571、572、573、574、623、632、633、634、624、625、626、627、628、629、630、631、632、633、634、657、666、667、668、658、659、660、661、662、663、664、665、666、667、668、505、514、515、516、506、507、508、510、512、514、515、516、517、526、527、528、518、519、520、522、524、526、527、528、599、608、609、610、600、601、602、604、606、608、609、610、611、620、621、622、612、613、614、616、618、620、621、622、697、699、701、709、711、713、791、793、795、803、805、807、575、584、585、586、576、577、578、579、580、581、582、583、584、585、586、587、596、597、598、588、589、590、591、592、593、594、595、596、597、598、669、678、679、680、670、671、672、673、674、675、676、677、678、679、680、681、690、691、692、682、683、684、685、686、687、688、689、690、691、1105、1112、1113、1114、1106、1107、1108、1109、1110、1111、1112、1113、1114、1115、1124、1125、1126、1116、1117、1118、1119、1120、1121、1122、1123、1124、1125、1126、1199、1206、1207、1208、1200、1201、1202、1203、1204、1205、1206、1207、1208、1209、1218、1219、1220、1210、1211、1212、1213、1214、1215、1216、1217、1218、1219、1220]
实施例3:比较使用实施例1的3D纳米结构和使用实施例2的2D DNA纳米结构对靶 结构进行检测
1.概述:
为了比较使用2D DNA纳米结构或使用本发明的3D DNA纳米结构通过在其实施方式中的本发明的方法检测靶结构的效果,具有靶结构和各自结合的DNA纳米结构的识别结构结合或即时结合到载体表面(在本情况下,为盖玻片的表面),在本文所述的实施例中,相同的靶DNA寡聚体用作靶结构,并且一方面基于如实施例2(2D样品)中所述的变体2D_1、2D_2和2D_3的红色、绿色和蓝色2D DNA纳米结构的结合被检测,另一方面,基于如实施例1(3D样品)中所述的变体3D_1、3D_2和3D_3的红色、绿色和蓝色3D DNA纳米结构的结合被检测。另外,对两个实验进行了对照实验,其中,检查了如果不存在靶结构,则在盖玻片的表面上是否发生假阳性检测以及在何种程度上发生假阳性检测。比较示出了,由于染料分子的最优化和精心设计的定位,3D DNA纳米结构在小得多的程度上附连于显微镜盖玻片的表面。
2.材料和方法:
为了检测靶结构(在本情况下,靶DNA寡聚体,简称:靶寡聚体),首先将其在与各自的DNA纳米结构(即,2D_1、2D_2和2D_3或3D_1、3D_2和3D_3)和捕获链在适合的缓冲液中孵育,发生的杂交反应,使得所有这些组分能够彼此结合并形成识别结构(见图1,1k)。这针对2D和3D DNA纳米结构是单独进行的。
对于使用3D DNA纳米结构的样品,杂交在具有以下组分的溶液中进行:
·根据实施例1,4μl DNA纳米颗粒3D_1-3的混合物,每DNA纳米颗粒组为200pM
·10μl 2×缓冲液RX07(成分见下文)
·具有生物素接头的1μl20nM载体接头(本文也称为捕获链)(SEQ ID NO 1262),其中,具有生物素接头的捕获链(在5’末端用生物素修饰)由Eurofins公司提供。
·1μl 750pM单链的靶DNA寡聚体(SEQ ID NO 1269)。该寡聚体具有T1、T2和T3的互补区域使得3D DNA纳米结构3D_1、3D_2和3D_3可以通过它们各自的T1、2和3区域结合到靶DNA寡聚体的相应互补区域,以及捕获链的互补区域。以这样的方式设计靶结构和相应的结合区,使得所有三种3D DNA寡聚体以及捕获链可以同时结合靶DNA寡聚体。对于对照实验,将该体积替换为H2O。
·4μl H2O
将其在30℃下孵育16小时,以使捕获链、靶寡聚体和3D DNA纳米结构彼此结合。
对于使用2D DNA纳米结构的样品的情况,杂交是在具有相同组分的溶液中进行的,然而,使用了4μl根据实施例2的DNA纳米颗粒2D_1-3混合物,每个DNA纳米颗粒组为200pM,而不是4μl根据实施例1的DNA纳米颗粒3D_1-3的混合物,每个DNA纳米颗粒组200pM。同样在这种情况下,确保了所有三种2D DNA纳米结构以及捕获链可以与靶寡聚体结合。使用的靶DNA寡聚体还具有SEQ ID NO 1269的序列。对于2D DNA纳米结构,也进行了不含靶DNA寡聚体的对照反应。
因此,总共进行了四次实验。
为了测量,将每个实验的捕获链置于相应的显微法样品载体的显微镜表面上。来自ibidi GmbH(Martinsried,Germany)的VI0.1型μ载玻片用作显微法样品载体。为此目的,根据以下方案对其进行处理用于制备作为样品的显微镜载玻片:
·用100μl缓冲液A冲洗(组成见下文)μ载玻片VI0.1(ibidi GmbH,Martinsried)
·将40μl 1mg/ml生物素化BSA(Sigma-Aldrich GmbH)移液到μ载玻片的相应通道的第一通道末端,孵育2min,经由μ载玻片的相应通道的另一个第二通道末端通过移液去除该流体,将100μl缓冲液A移液到上述第一通道末端,经由上述第二通道末端通过移液去除该流体。
·向上述第一通道末端中移液40μl 0.5mg/ml链霉亲和素蛋白(ThermoScientific),孵育2min,经由上述第二通道末端通过移液去除该流体,在上述第一通道末端移液100μl缓冲液A并经由上述第二个通道末端通过移液去除该流体。
·将100μl缓冲液B(组成见下文)移液到上述第一通道末端并经由上述第二通道末端通过移液去除该流体
·向上述第一通道末端移液40μl杂交溶液(具有用于2D样品探针的2D纳米结构的溶液,或具有用于3D样品的3D DNA纳米结构的溶液,或不含靶DNA寡聚体的相应对照实验)。孵育15min。在此期间,捕获链的生物素与表面结合的链霉亲和素结合。此外,一些DNA纳米结构非特异性地附连于表面。这是非预期的,并且用2D DNA纳米结构时发生的频率比用3DDNA纳米结构高。经由上述第二通道末端通过移液来去除。
·通过将200μl缓冲液RX07(组成见下文)移液到上述第一通道末端并经由上述第二通道末端通过移液去除来洗掉未结合的DNA纳米结构。
·将50μl缓冲液RX07(组成见下文)移液到上述第一通道末端
完成上述步骤后,有两种样品,一种2D样品和一种3D样品。此外,对于2D纳米结构和3D纳米结构,存在各自的对照(没有靶DNA)。选择上述方法中所选浓度的生物素-BSA、链霉亲和素和靶结构的组合,使得在随后的分析中可以容易地解析各种识别结构。
随后,用落射荧光显微镜对两种样品中的识别结构进行成像。为此,应用了“Elite”显微镜(DeltaVision)。也可以想到使用“Ti Eclipse”(尼康)类型的显微镜。使用的摄像头是sCMOS摄像头(PCO的edge 4.2),像素尺寸为6.5μm。在物镜放大率为100倍,并且数值孔径为1.4的情况下,给出了60nm的像素分辨率,即,图像中的一个像素对应于现实中60nm。因此,获得了DNA纳米结构的衍射极限图像。滤光片组为Chroma 49914用于红色,Chroma 49008用于绿色,Chroma 49020用于蓝色激发。
对于2D样品和3D样品以及没有靶DNA的两个对照,每种颜色拍摄了10个图像。颜色是顺序成像的。这些图像中的每一个都是在样品的特定截面拍摄的,该截面与其他图像的截面不重叠,并且位于沿着通道宽度的平均一半。
分析了每个相关样品的10个图像。本文提出的分析的目的是比较在具有靶DNA的相应样品中和不具有靶DNA的相应样品检测到的斑点数量,并与多色斑点相比指出单色斑点的数量。分析是手动进行的。为此,使用图像处理程序FIJI(www.fiji.sc)打开图像,计算了单色、三色荧光斑点的数量以及荧光斑点的总数。对于2D DNA纳米结构和3D DNA纳米结构,确定了各自10个图像的不同参数的平均值和标准偏差并绘制在图4中。
尽管在本实施例中未应用,但可以使用专门编程的分析软件而不是手动分析。在本实施例中,编程的分析软件是基于python的。基于python的分析软件加载测量数据,确定9-15像素尺寸的图像框中的局部最大值(取决于物镜的放大率和数值孔径),并计算梯度的累积绝对值作为与噪声无关的信号测量值。为了区分具有和不具有DNA纳米结构的图像框,使用了DBSCAN(有噪声应用的基于密度的空间聚类)(发表于Ester,Martin;Kriegel,Hans-Peter;Sander,Xu,Xiaowei"A density-based algorithm for discoveringclusters in large spatial databases with noise",Proceedings of the SecondInternational Conference on Knowledge Discovery and Data Mining(KDD-96)AAAIPress.pp.226–231(1996))。任选地,图像框被划分为梯度的累积绝对值的不同值的组,其对应于根据不同数量的荧光团的分类。基于它们的横向(x,y)位置,将具有每一个颜色通道的DNA纳米结构的图像框与所有具有其他颜色通道的DNA纳米结构的图像框进行比较,以便识别图像中的多色斑点。使用如本文所述的基于python的软件进行分析的目的还在于比较在具有和不具有靶DNA寡聚体的实验中检测到的斑点的数量和/或指出单色斑点与多色斑点相比的数量。软件储存单色斑点数量的确定值以及任选地它们在图像中的位置,和多色斑点数量的测量值以及它们在图像中的位置,以供进一步使用。
3.结果和讨论:
为了评估DNA纳米结构用于所述方法的适用性,测量了与具有靶DNA寡聚体的相应样品(图4的顶部)相比在相应对照(没有靶DNA寡聚体)中发现了多少DNA纳米结构。这允许得出以下结论:在存在靶结构的样品中测量的DNA纳米结构的比例是受与表面结合的非特异性纳米结构影响。发现了3D DNA纳米结构显示出对显微镜样品载体的显微镜表面的非特异性附着程度显著较低(3D为1.2%,而2D为4.0%)。3D DNA纳米结构的误差条(标准偏差)穿过零线,并且因此表明对于3D DNA纳米结构,非特异性结合率低于测量系列的分辨率极限。
再次为了2D样品与2D对照比较以及为了3D样品与3D对照比较,进一步测量了与具有靶DNA寡聚体的样品相比,在对照中可以发现多少三色斑点,即可以被解释为靶分子的数据点。这提供了在2D DNA纳米结构的情况下和在3D DNA纳米结构的情况下的关于假阳性识别的靶结构的信息。对照中三色测量点的存在可能是由不同DNA纳米结构向外暴露的染料的相互作用引起的。通过设计具有向内设置的染料的3D DNA纳米结构避免了这种情况。图4(中部)示出了2D DNA纳米结构的0.7%和3D DNA纳米结构的0.0%的结果。在3D的情况下,没有进行单一的假阳性测量。因此,结果显示,由于使用结合至靶结构的多种DNA纳米结构,测量到了非常低的假阳性信号率。结果进一步表明,具有本发明的向内设置的荧光染料分子的3D DNA纳米结构与实施例中使用的载体表面的相互作用较小。这是由于它们在3D结构内的位置。
另一个参数是具有靶DNA寡聚体的测量点总数中三色测量点的百分比。基于图像分析的结果计算了2D样品和3D样品,并在图4(底部)中表示。由于反应动力学,可以预期识别结构在某些情况下仅部分杂交。例如,如果DNA纳米结构的浓度不足以在杂交反应的持续时间内饱和反应,则可能是这种情况。如果在测量时反应未饱和,则可以进行内标绝对定量或基于经验数据。内标优选表示具有已知浓度的参考值,而经验数据优选地允许不饱和测量和饱和测量之间的比较。然而,对于相对测量(如本文所进行的),这是不相关的,因为部分杂交的识别结构与靶结构的比率不依赖于靶结构和3D DNA纳米结构的实施方式,并且因此这些中完全杂交的识别结构的相对频率与后者中靶结构的相对频率相同。然而,由于相似的尺寸,2D和3D纳米结构在这方面是相当的。然而,彼此结合的DNA纳米结构以及非特异性结合到表面的DNA纳米结构可以显著地改变该结果。这在图4(底部)中是清楚的,其中,表面上仅6.8%的测量点可被认为是关于2D DNA纳米结构的可识别结构,而25.7%可被认为是关于3D DNA纳米结构的可识别结构。因此,与2D DNA纳米结构的情况相比,在3D DNA纳米结构的情况下可以更有效地使用显微镜表面。
总之,可以注意到,本发明的3D DNA纳米结构具有的与显微镜样品载体的显微镜表面的非特异性附着趋势低于2D DNA纳米结构具有的趋势的三分之一,并且具有显著不可定量的较低的彼此附着趋势。3D DNA纳米结构的面积使用效率几乎有四倍高。
本发明的方法使用DNA纳米结构的多重结合来增加特异性,即,它降低了假阳性识别比率。对于仅有一种DNA纳米结构结合的测量方法,该比率将与如图4(顶部)中所示的一样高,即,4.0%(2D)和1.2%(3D),而它是0.7%(2D)和0%(3D)。
使用的缓冲液
RX07缓冲液
·4×SSC(盐水柠檬酸钠缓冲液,由150mM氯化钠和15mM柠檬酸三钠水溶液组成,用HCl调节至pH 7.0)
·5%葡聚糖硫酸盐
·0.1%吐温20
·5×Denhardts
缓冲液A
·10mM Tris-HCl pH7.5
·100mM NaCl
·0.05%吐温20
缓冲液B
·10mM Tris-HCl pH8.0
·10mM MgCl2
·1mM EDTA
·0.05%吐温20
实施例:4基于组织样品的基因表达分析
这里,对组织样品,例如,乳腺肿瘤的组织样品,将进行关于标记物基因数量表达的分析,例如,100个基因,诸如Her2/neu、雌激素受体、孕激素受体、TFRC、GAPDH等。
可首先例如,通过酶促和/或通过剪切力将组织样品溶解至单细胞悬浮液中。
随后,可以破坏细胞,例如,机械地、通过裂解缓冲液、酶促地和/或化学或通过光。
裂解物可以进一步处理,例如,可以提取RNA,可以过滤组分,例如通过乙醇沉淀分离核酸。或者,裂解物可以直接用于进一步的使用。
将裂解物、至少两种纳米报告子(设计成用于对应于待分析基因的相应mRNA序列),在一些应用中还将基底结合接头(靶标接头)和反应缓冲液混合,并孵育足够长的时间,例如,12h,其中,形成了复合物(识别结构)。
随后,在一些应用中检测了表面上或在溶液中的复合物。
可以通过计数检测的和识别的各个mRNA序列确定相对基因表达,例如,如果mRNA1被检测200次并且mRNA2被检测300次,则基因2的基因表达是基因1的3/2高。
另外,可以在孵育步骤中添加与已知浓度限定的纳米报告子(与mRNA序列完全相当)结合的核酸作为参考。这允许其他检测到的mRNA序列的归一化和绝对定量。如果此参照例如以初始浓度100pM识别了100次,mRNA1的浓度可确定为200pM。
实施例:5蛋白质检测
蛋白质靶分子的检测和识别可以以类似于核酸靶分子的检测和识别的方式进行,基于微流体、基于流动或基于FCS的检测。
前提条件是蛋白质靶分子具有可以被相应结合物(抗体、适体、纳米抗体、亲和子)结合的至少两个可区分的表位。
这些接头可以与识别它们的纳米报告子特异性结合。为此,基于蛋白质的结合物(抗体、亲和子、纳米抗体)可以用特定的短(15-35nt)DNA序列修饰(通过SNAP标签、HALO标签、点击化学、SMCC接头、NHS/氨基酸反应等),将其反向互补附连到相应的DNA纳米结构(纳米报告子)并且因此成为接头。基于核酸的结合物(RNA或DNA适体)可以用相应的序列延长成接头,其中,它们的反向互补物附连至相应的DNA纳米结构。
通过混合蛋白质靶分子和DNA纳米结构上的接头并具有足够的反应时间,可检测的复合物由靶蛋白质和至少两个接头组成,每个接头偶联在DNA纳米结构形式。
可以通过同时检测至少两种DNA纳米结构来识别该复合物。
检测两种蛋白质靶标的实例:
蛋白质靶标1具有分别与抗体A和抗体B结合的表位A和表位B。
蛋白质靶标2具有分别与抗体C和抗体D结合的表位C和表位D。
抗体A与标记有红色荧光染料的DNA纳米结构偶联。
抗体B与标记有绿色荧光染料的DNA纳米结构偶联。
抗体C与标记有黄色荧光染料的DNA纳米结构偶联。
抗体D与标记有蓝色荧光染料的DNA纳米结构偶联。
将蛋白质靶标和偶联的抗体/DNA纳米结构混合并反应足够长的时间,例如,12小时。
以流动检测测量复合物。稀释反应溶液,使得仅在极少数情况下检测到多于一种复合物。红色/绿色的同时检测识别一种单一蛋白质靶标1,黄色/蓝色的同时检测识别一种单一蛋白质靶标2。在预先的校准之后,可以通过计数不同的检测来定量蛋白质靶标1和蛋白质靶标2。
使用相同的方法,可以识别蛋白质簇,其中,在这种情况下,不同的抗体识别靶簇中的不同蛋白质(而不是不同的表位)。
序列表
<110> 海因里希·格拉布迈尔(GRABMAYR Heinrich)
约翰内斯·贝内迪克特·韦尔施泰因(WOEHRSTEIN Johannes Benedikt)
<120> 使用DNA纳米技术的单分子检测或定量
<130> PN18077093P
<150> DE10 2016 007 270.9
<151> 2016-06-15
<160> 1269
<170> BiSSAP 1.3
<210> 1
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0000,用于3D DNA纳米结构
<400> 1
agagtccact attttaatga acgctttcca gtcgggggtc gacgt 45
<210> 2
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0001,用于3D DNA纳米结构
<400> 2
tatctaaaat atcttttgaa tacctgaaag cgtaagagca ataca 45
<210> 3
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0002,用于3D DNA纳米结构
<400> 3
cagtacataa atcgcacgta aatggaaggg ttagaaagat taggt 45
<210> 4
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0003,用于3D DNA纳米结构
<400> 4
aacatgttca gctccgtgtg aatcttctga cctaaatgct tctaa 45
<210> 5
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0004,用于3D DNA纳米结构
<400> 5
gggtaattga gcgttaaatc atagcgaacc tcccgacaac aatac 45
<210> 6
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0005 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 6
cgtcagactg tagaatagaa aaaagacacc acggaacaag aatga 45
<210> 7
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0006 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 7
accgtactca ggagcgtcat atggaaagcg cagtctgtca tagag 45
<210> 8
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0007 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 8
aacggctaca gagcgaataa tcggagtgag aatagaaacc gcctc 45
<210> 9
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0008 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 9
aataaaacga actgtacaga cgaactgacc aacttttcat gaggc 45
<210> 10
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0009 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 10
tgttttaaat atgatgacca tccccctcaa atgctttaga aagtt 45
<210> 11
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0010 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 11
gtaatcgtaa aacgggagaa gtgtaccaaa aacattagtt tcaca 45
<210> 12
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0011 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 12
aaaacgacgg ccacatcgta accgtaatgg gataggccgg ttgcg 45
<210> 13
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0012 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 13
tcccttataa atccggtttg caagcctggg gtgcctcaag tccgg 45
<210> 14
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0013 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 14
aaccctcaat caaaactgat acagtcacac gaccagtcac ttgaa 45
<210> 15
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0014 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 15
caagaaaaca aaaagatttt catcagatga tggcaattga ggaca 45
<210> 16
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0015 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 16
aagagaatat aaataaacac ctccaatcgc aagacaattt tccat 45
<210> 17
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0016 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 17
ataaaaacag ggacagctac aatagcaagc aaatcaaata ataat 45
<210> 18
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0017 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 18
caatgaaacc atcaaagaca agtatgttag caaacgagca agaac 45
<210> 19
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0018 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 19
accaggcgga taagtgtact gcaggtcaga cgattgtctt ttcac 45
<210> 20
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0019 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 20
ggccgctttt gcgccaaaaa aacgttagta aatgaaagag ccagt 45
<210> 21
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0020 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 21
tgcgatttta agattcatca agacctgctc catgttaaat acgaa 45
<210> 22
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0021 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 22
gaggtcattt ttgcctgact aaaatgttta gactggaata ccata 45
<210> 23
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0022 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 23
ctacaaaggc tataaaattt taaggcaaag aattagcaat tctaa 45
<210> 24
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0023 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 24
ggatgtgctg caaggacgac gttaaatgtg agcgagacag gaaat 45
<210> 25
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0024 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 25
acgctggttt gccttctttt ctgaaattgt tatccggcta gtagc 45
<210> 26
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0025 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 26
gctgagagcc agcaataccg aatacctaca ttttgatatc ggccc 45
<210> 27
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0026 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 27
gcgcagaggc gaaacagtaa ccattttgcg gaacaaaaac aatac 45
<210> 28
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0027 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 28
atcgccatat ttagcctgtt tcctttttaa cctccggcga tagtc 45
<210> 29
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0028 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 29
agaaacgatt tttcgctaac gctcatcgag aacaagtgta gaaga 45
<210> 30
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0029 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 30
aattagagcc agcagggagg gacgcaataa taacggatct tacta 45
<210> 31
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0030 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 31
agtattaaga ggcgtgcctt gcagagccgc caccagagag ccagg 45
<210> 32
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0031 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 32
aacaaccatc gccattgtat cattccacag acagccgcaa gccaa 45
<210> 33
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0032 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 33
gagtagtaaa ttgatattca tcgaaacaaa gtacaaaacc taaac 45
<210> 34
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0033 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 34
ccggaagcaa actttgcatc aaaaaccaaa atagcgtaac gccac 45
<210> 35
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0034 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 35
gatattcaac cgttgcaatg caaggtggca tcaattgacc attga 45
<210> 36
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0035 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 36
aactgttggg aagcgcactc caggaacgcc atcaaaaatt gtaat 45
<210> 37
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0036 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 37
ctggccaaca gaggattagt gatagggttg agtgtacgcg cggct 45
<210> 38
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0037 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 38
tgattgtttg gataatagat caaatcaaca gttgaagtct ttatt 45
<210> 39
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0038 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 39
tttttcaaat atagtcgcta aatttcattt gaattataaa gaacc 45
<210> 40
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0039 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 40
ccggtattct aagtcctgaa aaagtaattc tgtccggcgt taaac 45
<210> 41
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0040 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 41
aaaggtggca acaagcccaa agaattaact gaacattgct attat 45
<210> 42
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0041 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 42
acaaataaat cctattagcg atcagtagcg acagatggtt tacat 45
<210> 43
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0042 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 43
ttgctaaaca actgaaccgc ttgatataag tatagtttga tgaaa 45
<210> 44
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0043 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 44
gcgcagacgg tcaccattaa gcagcgaaag acagctcacg ttgtt 45
<210> 45
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0044 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 45
cggaatcgtc ataagttgag cagtcaggac gttggatagg ctgag 45
<210> 46
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0045 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 46
agcctcagag cattaacagt ttaattgctg aatataaatc aggtg 45
<210> 47
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0046 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 47
tctccgtggg aacgaaaagc gagtctggag caaacttcaa cgcaa 45
<210> 48
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0047 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 48
cacattaatt gcgctttgat taacgccagg gtttttctgc cagat 45
<210> 49
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0048 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 49
atggattatt tacagaagaa cctgtttgat ggtgggcgcc aggca 45
<210> 50
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0049 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 50
agcggaatta tcagtattag taaagcatca ccttgaacat cgcaa 45
<210> 51
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0050 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 51
ataactatat gtatccttga acctgagcaa aagaaacgtc agagg 45
<210> 52
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0051 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 52
tcatcgtagg aatctaattt aatttaggca gaggctaatt actat 45
<210> 53
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0052 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 53
ggcatgatta agaaaatagc atgaaaatag cagcccctga atctt 45
<210> 54
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0053 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 54
gccgccagca ttgaaatcac accattacca ttagcacatt caact 45
<210> 55
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0054 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 55
cgatctaaag tttcattttc gaaggattag gattagtttt aaccc 45
<210> 56
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0055 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 56
cgcctgataa attactacga tattcggtcg ctgagcaaaa ggaaa 45
<210> 57
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0056 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 57
gaagttttgc cagctaatgc aatttcaact ttaatcttga caaat 45
<210> 58
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0057 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 58
cattaacatc caaagtagat tagagagtac ctttacagaa gcaaa 45
<210> 59
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0058 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 59
ccttcctgta gcctaagcaa aatgccggag agggtctcat ataag 45
<210> 60
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0059 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 60
acatacgagc cggaccgtat cctcttcgct attaccggcc tcagg 45
<210> 61
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0060 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 61
attgcaacag gaagtaatat cctggccctg agagaagacg ggccg 45
<210> 62
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0061 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 62
taattttaaa agtctcgtat gtcagtatta acaccaccag cagcc 45
<210> 63
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0062 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 63
tatcaaaatc atataagacg cctgattgct ttgaatttac atcat 45
<210> 64
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0063 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 64
agaacgggta ttaaataatc agccaacgct caacatatgc gtttt 45
<210> 65
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0064 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 65
caaagttacc agacttttta aaacagccat attatttcca gagca 45
<210> 66
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0065 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 66
aaccgccacc ctcaaccgcc attatcaccg tcaccatatt gacaa 45
<210> 67
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0066 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 67
accagtacaa actaacccat ctatttcgga acctagtgcc cgtag 45
<210> 68
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0067 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 68
tttgaccccc agcgaggcaa agcttgatac cgatacagct tgctc 45
<210> 69
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0068 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 69
ataaccctcg tttattacga ataaggcttg ccctgatcaa cgttc 45
<210> 70
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0069 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 70
atattttcat ttgtttcgca gcgttttaat tcgagtaaga ggatc 45
<210> 71
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0070 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 71
gttaaatcag ctcatatttt aaggccggag acagtatgtg tagct 45
<210> 72
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0071 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 72
taatcatggt cataaggatc aggcaaagcg ccatttttcc ggctt 45
<210> 73
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0072 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 73
acgtggacgg gactgcgcga gggtaggacc agctgcaaaa ga 42
<210> 74
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0073 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 74
gtggcacagt gggcacactc gagaactccc gttgtaatac 40
<210> 75
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0074 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 75
gagcactaac gggcccgaat tgagggcaag acaatatttt ag 42
<210> 76
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0075 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 76
catatcactg aggatatgag acgatgacaa ctaatcctac 40
<210> 77
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0076 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 77
atgtgagtcc agtcgccccc cgcagttgaa attatttaat at 42
<210> 78
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0077 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 78
tggtttgatc tgggtagcag cggtaggaat aaccttttaa 40
<210> 79
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0078 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 79
agaacgcgtt gcccacgagt gcggtgataa ataccgaaat gc 42
<210> 80
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0079 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 80
gggaggtatc ccggaccaca tatatccctg tttatcttgc 40
<210> 81
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0080 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 81
atcagagact gtgggccgcg caccgccctt tgaagcccta at 42
<210> 82
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0081 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 82
ttattttgag gcgacggcta ttgaccgata acccataagt 40
<210> 83
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0082 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 83
tttcatcgct agcggttcta agtcgggtgt cacaatccgc gt 42
<210> 84
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0083 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 84
tttaccgtgt aaatgcgcgg ccgagggcat tttcgctgaa 40
<210> 85
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0084 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 85
agtaccgctg ctggaccgtg gaccaaggtt ccagtaaggt tt 42
<210> 86
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0085 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 86
acaactatga gggtacggga ccatggcacc ctcagaagga 40
<210> 87
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0086 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 87
gaggactagg agttgtgcca atggcgagaa ggaattggct tt 42
<210> 88
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0087 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 88
aggacaggca ctgggcgcct tgttcaaaga cttttgaaag 40
<210> 89
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0088 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 89
aacaacatgc tctagtcgga cgtcgactat gaacggtaac gg 42
<210> 90
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0089 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 90
agttcagcgc aacgggacgc acagcatatt acaggtaaac 40
<210> 91
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0090 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 91
aaagtacgcg agggtagggc ctaactcaaa aacgagacaa ct 42
<210> 92
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0091 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 92
cctgtaagcg tctagggact cggcacgtgt ctggaatgac 40
<210> 93
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0092 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 93
tgtcaatcgc ggtggccgta ctggcccata cttttgctag ca 42
<210> 94
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0093 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 94
ttggtgttaa tctgtggata atccgaatat gtacctcacg 40
<210> 95
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0094 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 95
aagcttgccg gctcaaggcc tcgcgccaag atgggcggtg cc 42
<210> 96
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0095 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 96
tgtcgtgggc caagacgtag cgcatgatgc ctgcaaaacc 40
<210> 97
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0096 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 97
cagtttggcc ggagacccag ggataagccc tcggccatgt tc 42
<210> 98
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0097 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 98
acccttcgag gttgagggcg cagatgaact tctttataga 40
<210> 99
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0098 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 99
attgaggagc ggctgcgtac gttcgagctg ggctattaag ga 42
<210> 100
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0099 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 100
ttctgaaatg ccgcttctcc agtgttagag ccgtctatac 40
<210> 101
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0100 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 101
ttttaatgta ctacccgagg acggagctta aacagaaacc tt 42
<210> 102
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0101 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 102
gttaattcgc tgttccctgc gcgcttgagt aaatctttta 40
<210> 103
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0102 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 103
acgacaatca cacacacggc gaattatgtc taaataaaga cg 42
<210> 104
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0103 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 104
gaggcgttgt ggcgtcgtgc gatggcaaag ataagaacgc 40
<210> 105
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0104 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 105
aacaaagtgt ttcgaggagg ccgttcgttt agattagccc tg 42
<210> 106
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0105 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 106
aagaaacgtt acatccccct cacaagcatg agttatataa 40
<210> 107
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0106 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 107
gtttgcctca gtgcgtgcgc cacgtggtgc attcataatc aa 42
<210> 108
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0107 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 108
aagccagtac ctcccaggct cctacattcc cccttcatta 40
<210> 109
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0108 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 109
aataggtgga ggccggtcac cctagctgaa catggctccc gg 42
<210> 110
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0109 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 110
cagtttctgg caagggctga gggcagtaac cctcattcaa 40
<210> 111
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0110 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 111
aacgagggga actcgctgtg cgggtctgag aatttttatc gg 42
<210> 112
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0111 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 112
aagggaacac gttgcgcatg aagccataga agtttatcat 40
<210> 113
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0112 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 113
aaaatctagg tgaccgttgg cgtaccgtcc caggcgcgaa ga 42
<210> 114
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0113 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 114
tcattgaagg ttggccgctg acttctcgat tcatcaatat 40
<210> 115
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0114 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 115
tgtagctcat tcgccgtgga cgcctttgat aaatcaaaat gc 42
<210> 116
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0115 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 116
taaatcgcct atgcgcgtag acgcagaatt ccataaaagc 40
<210> 117
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0116 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 117
aatcgatgcg cagcccgcca gcacactcgt cctttataag ag 42
<210> 118
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0117 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 118
gcggattgct tcctgagatt cttactaaat aatcaaaacg 40
<210> 119
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0118 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 119
tcacgacgcg gccaaggatt tactgctcga ccgtgcaccc ag 42
<210> 120
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0119 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 120
ctcactgtgc tctgctccgc tgcggttttc tagacttgcg 40
<210> 121
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0120 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 121
aatagcccaa acgacgaggg gcacgaaaaa ggagaggaaa ag 42
<210> 122
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0121 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 122
aaagggaggc agcactgcaa gaacgggaaa taacataata 40
<210> 123
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0122 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 123
ggtcagttat cagggagtca ccgcctctca atgcgcgtat ct 42
<210> 124
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0123 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 124
caatatagcc cgcctgaaag acgcctggaa tacatttcat 40
<210> 125
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0124 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 125
tacatttact ggcgtccccc tgagtcccat attgcgttta at 42
<210> 126
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0125 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 126
cgcgagatat cactcgtgag cccagtactt aattaaagaa 40
<210> 127
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0126 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 127
gacaaaagct aagccgaagc ggaaagccaa ataagaagta cc 42
<210> 128
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0127 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 128
agaaggcggc accacacgag aaggacgtca agaaagatat 40
<210> 129
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0128 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 129
attagacgcg tggctcgcaa gggcagcgtt ttgcaccagc gc 42
<210> 130
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0129 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 130
aatacattgc tgttggttac acgccgggta ataagtagaa 40
<210> 131
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0130 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 131
cagcaccgtg ctgccgcaag cgagaaaaac cagcgccgat ag 42
<210> 132
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0131 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 132
gatattccaa gatggtaggt ccttgatatt tgccagcctt 40
<210> 133
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0132 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 133
gtcgagagca actggagtgg cgaccggtac tacaggagtg cc 42
<210> 134
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0133 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 134
tgtatgggtg cgcgagaccg ttctagggca ccctcttttc 40
<210> 135
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0134 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 135
gtcacccttc aaagcacgcc caccgtgtga aaaatctgga tc 42
<210> 136
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0135 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 136
gccggaacca cgcagtgtca gtcggacaac gggtaactta 40
<210> 137
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0136 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 137
ctcattatca acgggcacag cccatcggcg gctgaccact gg 42
<210> 138
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0137 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 138
gtccaatcgc aaggttctcc gactcaacat ttaggatagc 40
<210> 139
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0138 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 139
ggcttagacg tccctgcgca ataggccgac tctttaccgg at 42
<210> 140
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0139 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 140
ttaagcagag tgctgtgttt cgacgggctg attcccaaaa 40
<210> 141
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0140 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 141
cattgcctga gagtcgtggt acgatgtgat aaggatacag gt 42
<210> 142
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0141 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 142
acccgtcaga taggctggct ccgtgtgacc caaaataaca 40
<210> 143
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0142 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 143
ttaagttgca aggctgttcc gcaacggggg tttgaggggc ga 42
<210> 144
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0143 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 144
gtgagctgga ctgtgagcga ccggtcggag cgaggaatga 40
<210> 145
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0144 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 145
aaatcggcca gcattcccta gcctcccgta gtattggttc cg 42
<210> 146
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0145 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 146
cagattcggg aacaccacca ctgatgaacc tgagtattgg 40
<210> 147
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0146 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 147
cctcaaatgg acttgcaagg cggcgaaaac gccctaactg aa 42
<210> 148
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0147 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 148
ttcctgaggc ttcttgcggc atgatgattt tagaatcata 40
<210> 149
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0148 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 149
tgaaacaagg tcccgacagc ttcgcgtatt aggtttagat ga 42
<210> 150
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0149 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 150
tgatgcaaag cacggagcat tgccgtacct tagaaaatgc 40
<210> 151
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0150 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 151
cgagccagtg ccgcgactcg aaggtaacaa ggaatcaatt tt 42
<210> 152
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0151 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 152
ccgcgcccgg gagcagacgt gtggtgtatc ccatccatta 40
<210> 153
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0152 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 153
agagagaaga acgaacgagc gggattcaca attttatttt ac 42
<210> 154
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0153 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 154
tattacgaca ttcccattag ccgggataaa caatgctcct 40
<210> 155
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0154 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 155
cggaaacgcg acgatttgca gcgcttctca aagggcgaag gc 42
<210> 156
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0155 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 156
aggttgaacg agcagaccgg cacgggtcat aatcaacagg 40
<210> 157
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0156 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 157
gttttgctgt gcgtcgaggc gactaactgg gtaataagcg gg 42
<210> 158
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0157 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 158
tctttcctag ttgggccggt cccgtccacc acccttgtcg 40
<210> 159
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0158 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 159
cagggagtcg ggatgccttc tgcttctcag aaggctcgct tg 42
<210> 160
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0159 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 160
gaaatccggt gcgaactgtg gccgactata atgccgtgtc 40
<210> 161
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0160 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 161
tgaattacgg gagtctgccg agaatggcgc gagtaatcat tg 42
<210> 162
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0161 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 162
gtaatagcgt gcttttccat gtcggtctca ttcaaagggg 40
<210> 163
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0162 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 163
tccttttgct acctgggcca ctgcacgcta ttatagtatt gc 42
<210> 164
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0163 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 164
catacagacg cattacctgg aacgacatgc gaacgtaaat 40
<210> 165
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0164 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 165
tttttgagct cacaccgcag tagcccgagc tagaaccagc ta 42
<210> 166
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0165 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 166
tcatcaacct acgtagaccg cacgatagga ttgtaagctt 40
<210> 167
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0166 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 167
ctggcgaagt agtgccgcga cgctgatgca acagtatgcc ag 42
<210> 168
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0167 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 168
taaagtgcgt cccttcggac ccacgtaggc tagcgaagca 40
<210> 169
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0168 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 169
aggcgaaaac ggtggtcacc ggtgcgtgca gtggtttcca gc 42
<210> 170
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0169 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 170
aatcgtcccg actgccggat ggttcgatct caaaccgctc 40
<210> 171
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0170 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 171
atgaaaaact ttccttctag cttatggctg cattaaaagc aa 42
<210> 172
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0171 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 172
ccaccagcct agggcgcccg gtgagatcac tttacagaaa 40
<210> 173
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0172 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 173
catttcaagc attgaggccc tcggaaggaa tgaatattta tt 42
<210> 174
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0173 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 174
ggttggggca tggacccagg tgaagattaa acatagctta 40
<210> 175
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0174 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 175
gccaacatgt cagctgctct ccgtccggtt agaaaaaaca ac 42
<210> 176
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0175 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 176
cgtttttcga ggcacacgtc taggttgtac gagcacaagc 40
<210> 177
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0176 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 177
aacgtcaacg ctctgttcgc gcactaccat ttaccaatgt tt 42
<210> 178
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0177 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 178
ccaaaagccg cgttcggcga aacgggaaaa tagctaatac 40
<210> 179
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0178 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 179
caccagtagg ccggaagttg tttatccaaa ccgattgaaa at 42
<210> 180
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0179 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 180
ccaccagtac aggcatgagt gcggcggccg gaaccaacca 40
<210> 181
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0180 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 181
ctcctcaaga cgtaaatgac taaacccgag ggggtcatga ga 42
<210> 182
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0181 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 182
agttagcatg gataccggcg gctggcgaag ggatactcat 40
<210> 183
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0182 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 183
ataaccgatg ccgctgctgt gctcgcaggt gcctttacac gc 42
<210> 184
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0183 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 184
atttgtacct ggcccaaaac tggagataag gcacccggag 40
<210> 185
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0184 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 185
gagatggttc gcatatgcgg atcccaactc gaaccggggc tt 42
<210> 186
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0185 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 186
cttttgcttc gcgcgttgga gtcgatttag atacaagagg 40
<210> 187
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0186 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 187
aggtcagggg ctagtgccag cccgtcctaa aagcggacca ac 42
<210> 188
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0187 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 188
aatagtagcc tacagtttgt ggccgaattt agtttctact 40
<210> 189
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0188 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 189
ctgataaagc gcgagcagtc gatagcgcgt ttttaaatct ag 42
<210> 190
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0189 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 190
ttcgcgtact cgaggctagg ttcaacttat atttaaataa 40
<210> 191
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0190 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 191
tcggtgcggc ggaattgacg tcaatgccct ggaagatggc ga 42
<210> 192
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0191 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 192
aattccagtt gttgttctct ctccgcggac gcatgctcac 40
<210> 193
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0192 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 193
agcaagcgct tcacgttaag cactgcgctg accagtggtt gc 42
<210> 194
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0193 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 194
ctcatggacc ctgtaggcct ccctcggtct tgctgaaacg 40
<210> 195
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0194 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 195
caacagtgcg gacccggctg tggagctaaa acgaaccgcc tg 42
<210> 196
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0195 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 196
taacattgga ggcctctgca tctgcacctc gacaattgag 40
<210> 197
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0196 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 197
agttacaaag accgcgtagg accgctgaat agtaccttac ca 42
<210> 198
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0197 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 198
gagagacgat gagtacgcat cgtccaaact tagatggtct 40
<210> 199
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0198 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 199
gcttaattgt aggccggcac tggcacggta agtatcagta gg 42
<210> 200
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0199 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 200
agtaccgtgt cgcaggccac aggtgagaac caatcaacca 40
<210> 201
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0200 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 201
ccaatccaca aaccgttcca gcccacatca agcgtcttta tc 42
<210> 202
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0201 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 202
accgaggaca tcgggtggtg ccctagaacg aagccaggaa 40
<210> 203
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0202 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 203
gagccattag ggcgacgcac gtcataacaa aaggtaagac tt 42
<210> 204
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0203 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 204
caccacctct gtatgctagg tgctcgtgcc accggagagc 40
<210> 205
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0204 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 205
ctgaaacagc ggccctgcca agctgcccct agtaacatta tt 42
<210> 206
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0205 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 206
gcctgtaatc gggcgtccct aacttctgca ataggacaac 40
<210> 207
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0206 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 207
gccgacaacg gcatggcgaa caaggacagc ggtttatgtt gc 42
<210> 208
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0207 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 208
taccaagtct cgccaccctc accttgtgaa cgaaagatta 40
<210> 209
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0208 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 209
aaacaccaca ccttctgcac tgtcgtcacg tacccaaacg ag 42
<210> 210
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0209 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 210
acgacgagct tcacagaccc taccgcgaaa aaggaaccag 40
<210> 211
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0210 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 211
aagcgaacaa cacctccgta ctccacccta aaaagatctt ca 42
<210> 212
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0211 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 212
cgagctgttg cgcaaaaggc gcgaagcaag atacagggcg 40
<210> 213
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0212 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 213
caccatcatg ttgagtccgc tgccatgaaa ctgagtacaa at 42
<210> 214
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0213 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 214
ttaaccactc cgaggtcgcc ggagggataa cgttaatttt 40
<210> 215
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0214 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 215
ttcaggctca cgcaacactc ccgtctagat agccagccgc ca 42
<210> 216
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0215 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 216
tttcctgact cgaaccgcac cctgcagccc cgtatagctg 40
<210> 217
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0216 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 217
cccttcactg tgcaccgccc ggatggtgtt aacagctgat tg 42
<210> 218
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0217 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 218
taccgccaag acaacagcgc caggctcgcc agaacaatat 40
<210> 219
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0218 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 219
aggtgagggt atagcgccat cgggcataag aagataaaac ag 42
<210> 220
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0219 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 220
ccgaacggga cccagccgag agccgacgta aatcctttgc 40
<210> 221
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0220 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 221
aacggattaa ctgcgtgagt gaaggaactt gggagaaaca at 42
<210> 222
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0221 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 222
aatagtgaca ggtgtaggat cgggcgcgct gagaagagtc 40
<210> 223
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0222 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 223
accagtatgg catcaactgt ggtgacggaa atacaaattc tt 42
<210> 224
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0223 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 224
ttatcataga cctctgcttg tgccacaagg ctgtctttcc 40
<210> 225
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0224 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 225
gttacaaagc gccagcgact gggcgtcctc cctaatttgc ca 42
<210> 226
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0225 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 226
agatagctct gctcaacact caccgcatag aaaagtaagc 40
<210> 227
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0226 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 227
ttaaaggtag tccgccctac agaagttccg ggaaattatt ca 42
<210> 228
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0227 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 228
gccacccccc ggtcgaaaga gcaaacgatc cctcagagcc 40
<210> 229
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0228 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 229
tgccccctag cagcccgtcc gtgatgagtc ataaacagtt aa 42
<210> 230
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0229 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 230
tgagtttagg ccagagtcga gtgcatgcgt accgtaacac 40
<210> 231
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0230 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 231
tttcttaaat ccgggcattt gggaagcccg tttcgaggtg aa 42
<210> 232
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0231 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 232
aaacactggc cggcgtctta gttacgacaa gaatacacta 40
<210> 233
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0232 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 233
cattcagtcc gggccgcgca tacggaccca aacaaagctg ct 42
<210> 234
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0233 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 234
gcaacactga ctgggcagtg gttgctgagg catagtaaga 40
<210> 235
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0234 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 235
ttcaaatatc gtcgcgcgtg tagcatatta agcccgaaag ac 42
<210> 236
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0235 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 236
cctgtttgtt cgttcgatga ttgtcgtcaa tggtcaataa 40
<210> 237
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0236 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 237
aagggtgaac cctgtcgggc cacatggtag gtaaagattc aa 42
<210> 238
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0237 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 238
attaaatctt acgtgggcgt cgagaagagt taaaattcgc 40
<210> 239
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0238 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 239
gccggaaact tgttgtgtca cctcggagtt accgcttctg gt 42
<210> 240
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0239 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 240
gctcgaagcc cgaagaggac gtgtgccccc cgggtaccga 40
<210> 241
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0240 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 241
tcgggcccgt catcgtctca tatcctcagc aactgcggg 39
<210> 242
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0241 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 242
gggcgactgg ctaccgctgc tacccagata tcaccgcac 39
<210> 243
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0242 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 243
tcgtgggcaa gatatatgtg gtccgggatg ggcggtgcg 39
<210> 244
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0243 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 244
cggcccacag ggtcaatagc cgtcgcctca cccgactta 39
<210> 245
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0244 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 245
gaaccgctag cctcggccgc gcatttacac cttggtcca 39
<210> 246
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0245 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 246
cggtccagca ccatggtccc gtaccctcac tcgccattg 39
<210> 247
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0246 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 247
gcacaactcc tgaacaaggc gcccagtgca gtcgacgtc 39
<210> 248
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0247 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 248
cgactagagc tgctgtgcgt cccgttgcgt gagttaggc 39
<210> 249
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0248 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 249
cctaccctcg gtgccgagtc cctagacgct gggccagta 39
<210> 250
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0249 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 250
cggccaccgc tcggattatc cacagattat ggcgcgagg 39
<210> 251
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0250 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 251
ccttgagccg catgcgctac gtcttggcct cctaccctc 39
<210> 252
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0251 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 252
gcgcagtccc gttctcgagt gtgcccactt gccctcaat 39
<210> 253
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0252 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 253
actccctgat aggcgtcttt caggcgggcg ggactcaggt tcctctacca cctacatcac 60
<210> 254
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0253 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 254
gggacgccag actgggctca cgagtgatag gctttccgct tcctctacca cctacatcac 60
<210> 255
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0254 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 255
ttcggcttag gtccttctcg tgtggtgccc gctgcccttt tcctctacca cctacatcac 60
<210> 256
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0255 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 256
gcgagccacg cggcgtgtaa ccaacagcat tttctcgctt tcctctacca cctacatcac 60
<210> 257
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0256 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 257
tgcggcagca tcaaggacct accatcttga ccggtcgcct tcctctacca cctacatcac 60
<210> 258
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0257 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 258
actccagttg ctagaacggt ctcgcgcaca cacggtgggt tcctctacca cctacatcac 60
<210> 259
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0258 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 259
cgtgctttga tccgactgac actgcgtggc cgatgggctt tcctctacca cctacatcac 60
<210> 260
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0259 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 260
gtgcccgttg tgagtcggag aaccttgcgc ggcctattgt tcctctacca cctacatcac 60
<210> 261
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0260 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 261
cgcagggacg ccgtcgaaac acagcactcc acatcgtact tcctctacca cctacatcac 60
<210> 262
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0261 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 262
cacgactctc acacggagcc agcctatctc ccgttgcggt tcctctacca cctacatcac 60
<210> 263
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0262 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 263
aacagccttg gaccggtcgc tcacagtcct ttcgtgccct tcctctacca cctacatcac 60
<210> 264
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0263 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 264
ctcgtcgttt ccgttcttgc agtgctgcca gaggcggtgt tcctctacca cctacatcac 60
<210> 265
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0264 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 265
agaaggaaag tctcaccggg cgccctaggc cttccgaggt tcctctacca cctacatcac 60
<210> 266
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0265 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 266
gcctcaatgc tcttcacctg ggtccatgcc cggacggagt tcctctacca cctacatcac 60
<210> 267
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0266 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 267
agcagctgac aacctagacg tgtgcctcgg gtagtgcgct tcctctacca cctacatcac 60
<210> 268
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0267 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 268
gaacagagcg cccgtttcgc cgaacgcggt ggataaacat tcctctacca cctacatcac 60
<210> 269
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0268 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 269
acttccggcc cgccgcactc atgcctgtac gggtttagtt tcctctacca cctacatcac 60
<210> 270
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0269 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 270
catttacgtc gccagccgcc ggtatccatc tgcgagcact tcctctacca cctacatcac 60
<210> 271
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0270 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 271
agcagcggca tctccagttt tgggccaggg ttgggatcct tcctctacca cctacatcac 60
<210> 272
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0271 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 272
gcatatgcga atcgactcca acgcgcgaaa ggacgggctt tcctctacca cctacatcac 60
<210> 273
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0272 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 273
ggcactagcc tcggccacaa actgtaggcg cgctatcgat tcctctacca cctacatcac 60
<210> 274
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0273 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 274
ctgctcgcgc gttgaaccta gcctcgagtg gcattgacgt tcctctacca cctacatcac 60
<210> 275
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0274 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 275
tcaattccgc gcggagagag aacaacaacc acgcaccggt tcctctacca cctacatcac 60
<210> 276
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0275 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 276
tgaccaccgt cgaaccatcc ggcagtcggg ccataagctt tcctctacca cctacatcac 60
<210> 277
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0276 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 277
ggcgctatac tcggctctcg gctgggtccg ttccttcac 39
<210> 278
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0277 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 278
tcacgcagtt cgcccgatcc tacacctgtc cgtcaccac 39
<210> 279
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0278 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 279
agttgatgcc gtggcacaag cagaggtctg gacgcccag 39
<210> 280
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0279 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 280
tcgctggcgc gcggtgagtg ttgagcagag aacttctgt 39
<210> 281
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0280 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 281
agggcggact gtttgctctt tcgaccgggc tcatcacgg 39
<210> 282
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0281 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 282
acgggctgct atgcactcga ctctggcctg gcttcccaa 39
<210> 283
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0282 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 283
atgcccggat cgtaactaag acgccggccg gtccgtatg 39
<210> 284
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0283 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 284
cgcggcccgg agcaaccact gcccagtcaa tatgctaca 39
<210> 285
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0284 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 285
cgcgcgacga cgacaatcat cgaacgaaca ccatgtggc 39
<210> 286
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0285 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 286
ccgacagggt ttctcgacgc ccacgtaagc tccgaggtg 39
<210> 287
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0286 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 287
acacaacaag gcacacgtcc tcttcgggcc accatccgg 39
<210> 288
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0287 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 288
gcggtgcaca agcctggcgc tgttgtcttt atgcccgat 39
<210> 289
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0288 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 289
cctcaacctc gctcgaacgt acgcagccgc aacactggat tcctctacca cctacatcac 60
<210> 290
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0289 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 290
gaagcggcat agctccgtcc tcgggtagta aagcgcgcat tcctctacca cctacatcac 60
<210> 291
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0290 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 291
gggaacagcg cataattcgc cgtgtgtgtg gccatcgcat tcctctacca cctacatcac 60
<210> 292
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0291 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 292
cgacgccaca acgaacggcc tcctcgaaac cttgtgaggt tcctctacca cctacatcac 60
<210> 293
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0292 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 293
gggatgtaac accacgtggc gcacgcactg tgtaggagct tcctctacca cctacatcac 60
<210> 294
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0293 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 294
ctgggaggta cagctagggt gaccggcctc ctgccctcat tcctctacca cctacatcac 60
<210> 295
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0294 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 295
gcccttgcca cagacccgca cagcgagttc tggcttcatt tcctctacca cctacatcac 60
<210> 296
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0295 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 296
gcgcaacgtg acggtacgcc aacggtcacc agaagtcagt tcctctacca cctacatcac 60
<210> 297
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0296 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 297
cggccaacct caaaggcgtc cacggcgaat ctgcgtctat tcctctacca cctacatcac 60
<210> 298
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0297 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 298
cgcgcatagg gagtgtgctg gcgggctgcg agtaagaatt tcctctacca cctacatcac 60
<210> 299
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0298 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 299
ctcaggaagc gagcagtaaa tccttggccg accgcagcgt tcctctacca cctacatcac 60
<210> 300
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0299 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 300
gagcagagca gcttatccct gggtctccgg catctgcgct tcctctacca cctacatcac 60
<210> 301
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0300 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 301
tggtgttccc tttcgccgcc ttgcaagtcc catcatgcct tcctctacca cctacatcac 60
<210> 302
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0301 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 302
gcaagaagcc tacgcgaagc tgtcgggacc acggcaatgt tcctctacca cctacatcac 60
<210> 303
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0302 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 303
ctccgtgctt gttaccttcg agtcgcggca caccacacgt tcctctacca cctacatcac 60
<210> 304
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0303 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 304
tctgctcccg tgaatcccgc tcgttcgttc tcccggctat tcctctacca cctacatcac 60
<210> 305
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0304 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 305
atgggaatgt agaagcgctg caaatcgtcg cccgtgccgt tcctctacca cctacatcac 60
<210> 306
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0305 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 306
gtctgctcgt agttagtcgc ctcgacgcac gacgggacct tcctctacca cctacatcac 60
<210> 307
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0306 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 307
ggcccaacta gagaagcaga aggcatcccg gtcggccact tcctctacca cctacatcac 60
<210> 308
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0307 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 308
agttcgcacc gccattctcg gcagactccc accgacatgt tcctctacca cctacatcac 60
<210> 309
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0308 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 309
gaaaagcacg gcgtgcagtg gcccaggtag gtcgttccat tcctctacca cctacatcac 60
<210> 310
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0309 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 310
ggtaatgcgt tcgggctact gcggtgtgag atcgtgcggt tcctctacca cctacatcac 60
<210> 311
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0310 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 311
tctacgtagg catcagcgtc gcggcactac acgtgggtct tcctctacca cctacatcac 60
<210> 312
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0311 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 312
cgaagggacg cgggaggcta gggaatgctg catcagtggt tcctctacca cctacatcac 60
<210> 313
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0312 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 313
cctacagggt tagctccaca gccgggtccg tgcagatgc 39
<210> 314
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0313 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 314
agaggcctcc tcagcggtcc tacgcggtct tggacgatg 39
<210> 315
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0314 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 315
cgtactcatc ccgtgccagt gccggcctac tcacctgtg 39
<210> 316
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0315 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 316
gcctgcgaca atgtgggctg gaacggtttg ctagggcac 39
<210> 317
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0316 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 317
cacccgatgt gttatgacgt gcgtcgccct cgagcacct 39
<210> 318
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0317 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 318
agcatacaga gggcagcttg gcagggccgc gaagttagg 39
<210> 319
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0318 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 319
gacgcccgat tgtccttgtt cgccatgccg caaggtgag 39
<210> 320
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0319 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 320
ggtggcgaga tgacgacagt gcagaaggtg gcggtaggg 39
<210> 321
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0320 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 321
tctgtgaagc gggtggagta cggaggtgtt cttcgcgcc 39
<210> 322
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0321 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 322
ttttgcgcaa tcatggcagc ggactcaaca ccctccggc 39
<210> 323
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0322 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 323
gacctcggag ctagacggga gtgttgcgtg tgcagggtg 39
<210> 324
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0323 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 324
cggttcgagt gcgcagtgct taacgtgaag cgagggagg 39
<210> 325
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0324 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 325
actccctgat aggcgtcttt caggcgggcg ggactcaggt aacattccta acttctcata 60
<210> 326
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0325 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 326
gggacgccag actgggctca cgagtgatag gctttccgct aacattccta acttctcata 60
<210> 327
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0326 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 327
ttcggcttag gtccttctcg tgtggtgccc gctgcccttt aacattccta acttctcata 60
<210> 328
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0327 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 328
gcgagccacg cggcgtgtaa ccaacagcat tttctcgctt aacattccta acttctcata 60
<210> 329
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0328 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 329
tgcggcagca tcaaggacct accatcttga ccggtcgcct aacattccta acttctcata 60
<210> 330
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0329 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 330
actccagttg ctagaacggt ctcgcgcaca cacggtgggt aacattccta acttctcata 60
<210> 331
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0330 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 331
cgtgctttga tccgactgac actgcgtggc cgatgggctt aacattccta acttctcata 60
<210> 332
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0331 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 332
gtgcccgttg tgagtcggag aaccttgcgc ggcctattgt aacattccta acttctcata 60
<210> 333
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0332 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 333
cgcagggacg ccgtcgaaac acagcactcc acatcgtact aacattccta acttctcata 60
<210> 334
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0333 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 334
cacgactctc acacggagcc agcctatctc ccgttgcggt aacattccta acttctcata 60
<210> 335
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0334 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 335
aacagccttg gaccggtcgc tcacagtcct ttcgtgccct aacattccta acttctcata 60
<210> 336
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0335 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 336
ctcgtcgttt ccgttcttgc agtgctgcca gaggcggtgt aacattccta acttctcata 60
<210> 337
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0336 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 337
agaaggaaag tctcaccggg cgccctaggc cttccgaggt aacattccta acttctcata 60
<210> 338
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0337 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 338
gcctcaatgc tcttcacctg ggtccatgcc cggacggagt aacattccta acttctcata 60
<210> 339
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0338 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 339
agcagctgac aacctagacg tgtgcctcgg gtagtgcgct aacattccta acttctcata 60
<210> 340
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0339 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 340
gaacagagcg cccgtttcgc cgaacgcggt ggataaacat aacattccta acttctcata 60
<210> 341
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0340 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 341
acttccggcc cgccgcactc atgcctgtac gggtttagtt aacattccta acttctcata 60
<210> 342
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0341 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 342
catttacgtc gccagccgcc ggtatccatc tgcgagcact aacattccta acttctcata 60
<210> 343
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0342 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 343
agcagcggca tctccagttt tgggccaggg ttgggatcct aacattccta acttctcata 60
<210> 344
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0343 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 344
gcatatgcga atcgactcca acgcgcgaaa ggacgggctt aacattccta acttctcata 60
<210> 345
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0344 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 345
ggcactagcc tcggccacaa actgtaggcg cgctatcgat aacattccta acttctcata 60
<210> 346
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0345 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 346
ctgctcgcgc gttgaaccta gcctcgagtg gcattgacgt aacattccta acttctcata 60
<210> 347
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0346 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 347
tcaattccgc gcggagagag aacaacaacc acgcaccggt aacattccta acttctcata 60
<210> 348
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0347 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 348
tgaccaccgt cgaaccatcc ggcagtcggg ccataagctt aacattccta acttctcata 60
<210> 349
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0348 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 349
cctcaacctc gctcgaacgt acgcagccgc aacactggat aacattccta acttctcata 60
<210> 350
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0349 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 350
gaagcggcat agctccgtcc tcgggtagta aagcgcgcat aacattccta acttctcata 60
<210> 351
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0350 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 351
gggaacagcg cataattcgc cgtgtgtgtg gccatcgcat aacattccta acttctcata 60
<210> 352
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0351 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 352
cgacgccaca acgaacggcc tcctcgaaac cttgtgaggt aacattccta acttctcata 60
<210> 353
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0352 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 353
gggatgtaac accacgtggc gcacgcactg tgtaggagct aacattccta acttctcata 60
<210> 354
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0353 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 354
ctgggaggta cagctagggt gaccggcctc ctgccctcat aacattccta acttctcata 60
<210> 355
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0354 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 355
gcccttgcca cagacccgca cagcgagttc tggcttcatt aacattccta acttctcata 60
<210> 356
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0355 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 356
gcgcaacgtg acggtacgcc aacggtcacc agaagtcagt aacattccta acttctcata 60
<210> 357
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0356 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 357
cggccaacct caaaggcgtc cacggcgaat ctgcgtctat aacattccta acttctcata 60
<210> 358
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0357 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 358
cgcgcatagg gagtgtgctg gcgggctgcg agtaagaatt aacattccta acttctcata 60
<210> 359
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0358 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 359
ctcaggaagc gagcagtaaa tccttggccg accgcagcgt aacattccta acttctcata 60
<210> 360
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0359 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 360
gagcagagca gcttatccct gggtctccgg catctgcgct aacattccta acttctcata 60
<210> 361
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0360 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 361
tggtgttccc tttcgccgcc ttgcaagtcc catcatgcct aacattccta acttctcata 60
<210> 362
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0361 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 362
gcaagaagcc tacgcgaagc tgtcgggacc acggcaatgt aacattccta acttctcata 60
<210> 363
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0362 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 363
ctccgtgctt gttaccttcg agtcgcggca caccacacgt aacattccta acttctcata 60
<210> 364
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0363 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 364
tctgctcccg tgaatcccgc tcgttcgttc tcccggctat aacattccta acttctcata 60
<210> 365
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0364 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 365
atgggaatgt agaagcgctg caaatcgtcg cccgtgccgt aacattccta acttctcata 60
<210> 366
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0365 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 366
gtctgctcgt agttagtcgc ctcgacgcac gacgggacct aacattccta acttctcata 60
<210> 367
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0366 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 367
ggcccaacta gagaagcaga aggcatcccg gtcggccact aacattccta acttctcata 60
<210> 368
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0367 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 368
agttcgcacc gccattctcg gcagactccc accgacatgt aacattccta acttctcata 60
<210> 369
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0368 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 369
gaaaagcacg gcgtgcagtg gcccaggtag gtcgttccat aacattccta acttctcata 60
<210> 370
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0369 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 370
ggtaatgcgt tcgggctact gcggtgtgag atcgtgcggt aacattccta acttctcata 60
<210> 371
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0370 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 371
tctacgtagg catcagcgtc gcggcactac acgtgggtct aacattccta acttctcata 60
<210> 372
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0371 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 372
cgaagggacg cgggaggcta gggaatgctg catcagtggt aacattccta acttctcata 60
<210> 373
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0372 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 373
actccctgat aggcgtcttt caggcgggcg ggactcaggt taccatctct cctaaactcg 60
<210> 374
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0373 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 374
gggacgccag actgggctca cgagtgatag gctttccgct taccatctct cctaaactcg 60
<210> 375
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0374 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 375
ttcggcttag gtccttctcg tgtggtgccc gctgcccttt taccatctct cctaaactcg 60
<210> 376
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0375 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 376
gcgagccacg cggcgtgtaa ccaacagcat tttctcgctt taccatctct cctaaactcg 60
<210> 377
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0376 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 377
tgcggcagca tcaaggacct accatcttga ccggtcgcct taccatctct cctaaactcg 60
<210> 378
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0377 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 378
actccagttg ctagaacggt ctcgcgcaca cacggtgggt taccatctct cctaaactcg 60
<210> 379
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0378 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 379
cgtgctttga tccgactgac actgcgtggc cgatgggctt taccatctct cctaaactcg 60
<210> 380
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0379 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 380
gtgcccgttg tgagtcggag aaccttgcgc ggcctattgt taccatctct cctaaactcg 60
<210> 381
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0380 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 381
cgcagggacg ccgtcgaaac acagcactcc acatcgtact taccatctct cctaaactcg 60
<210> 382
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0381 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 382
cacgactctc acacggagcc agcctatctc ccgttgcggt taccatctct cctaaactcg 60
<210> 383
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0382 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 383
aacagccttg gaccggtcgc tcacagtcct ttcgtgccct taccatctct cctaaactcg 60
<210> 384
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0383 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 384
ctcgtcgttt ccgttcttgc agtgctgcca gaggcggtgt taccatctct cctaaactcg 60
<210> 385
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0384 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 385
agaaggaaag tctcaccggg cgccctaggc cttccgaggt taccatctct cctaaactcg 60
<210> 386
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0385 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 386
gcctcaatgc tcttcacctg ggtccatgcc cggacggagt taccatctct cctaaactcg 60
<210> 387
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0386 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 387
agcagctgac aacctagacg tgtgcctcgg gtagtgcgct taccatctct cctaaactcg 60
<210> 388
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0387 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 388
gaacagagcg cccgtttcgc cgaacgcggt ggataaacat taccatctct cctaaactcg 60
<210> 389
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0388 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 389
acttccggcc cgccgcactc atgcctgtac gggtttagtt taccatctct cctaaactcg 60
<210> 390
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0389 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 390
catttacgtc gccagccgcc ggtatccatc tgcgagcact taccatctct cctaaactcg 60
<210> 391
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0390 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 391
agcagcggca tctccagttt tgggccaggg ttgggatcct taccatctct cctaaactcg 60
<210> 392
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0391 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 392
gcatatgcga atcgactcca acgcgcgaaa ggacgggctt taccatctct cctaaactcg 60
<210> 393
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0392 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 393
ggcactagcc tcggccacaa actgtaggcg cgctatcgat taccatctct cctaaactcg 60
<210> 394
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0393 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 394
ctgctcgcgc gttgaaccta gcctcgagtg gcattgacgt taccatctct cctaaactcg 60
<210> 395
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0394 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 395
tcaattccgc gcggagagag aacaacaacc acgcaccggt taccatctct cctaaactcg 60
<210> 396
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0395 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 396
tgaccaccgt cgaaccatcc ggcagtcggg ccataagctt taccatctct cctaaactcg 60
<210> 397
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0396 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 397
cctcaacctc gctcgaacgt acgcagccgc aacactggat taccatctct cctaaactcg 60
<210> 398
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0397 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 398
gaagcggcat agctccgtcc tcgggtagta aagcgcgcat taccatctct cctaaactcg 60
<210> 399
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0398 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 399
gggaacagcg cataattcgc cgtgtgtgtg gccatcgcat taccatctct cctaaactcg 60
<210> 400
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0399 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 400
cgacgccaca acgaacggcc tcctcgaaac cttgtgaggt taccatctct cctaaactcg 60
<210> 401
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0400 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 401
gggatgtaac accacgtggc gcacgcactg tgtaggagct taccatctct cctaaactcg 60
<210> 402
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0401 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 402
ctgggaggta cagctagggt gaccggcctc ctgccctcat taccatctct cctaaactcg 60
<210> 403
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0402 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 403
gcccttgcca cagacccgca cagcgagttc tggcttcatt taccatctct cctaaactcg 60
<210> 404
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0403 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 404
gcgcaacgtg acggtacgcc aacggtcacc agaagtcagt taccatctct cctaaactcg 60
<210> 405
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0404 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 405
cggccaacct caaaggcgtc cacggcgaat ctgcgtctat taccatctct cctaaactcg 60
<210> 406
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0405 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 406
cgcgcatagg gagtgtgctg gcgggctgcg agtaagaatt taccatctct cctaaactcg 60
<210> 407
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0406 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 407
ctcaggaagc gagcagtaaa tccttggccg accgcagcgt taccatctct cctaaactcg 60
<210> 408
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0407 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 408
gagcagagca gcttatccct gggtctccgg catctgcgct taccatctct cctaaactcg 60
<210> 409
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0408 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 409
tggtgttccc tttcgccgcc ttgcaagtcc catcatgcct taccatctct cctaaactcg 60
<210> 410
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0409 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 410
gcaagaagcc tacgcgaagc tgtcgggacc acggcaatgt taccatctct cctaaactcg 60
<210> 411
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0410 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 411
ctccgtgctt gttaccttcg agtcgcggca caccacacgt taccatctct cctaaactcg 60
<210> 412
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0411 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 412
tctgctcccg tgaatcccgc tcgttcgttc tcccggctat taccatctct cctaaactcg 60
<210> 413
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0412 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 413
atgggaatgt agaagcgctg caaatcgtcg cccgtgccgt taccatctct cctaaactcg 60
<210> 414
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0413 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 414
gtctgctcgt agttagtcgc ctcgacgcac gacgggacct taccatctct cctaaactcg 60
<210> 415
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0414 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 415
ggcccaacta gagaagcaga aggcatcccg gtcggccact taccatctct cctaaactcg 60
<210> 416
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0415 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 416
agttcgcacc gccattctcg gcagactccc accgacatgt taccatctct cctaaactcg 60
<210> 417
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0416 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 417
gaaaagcacg gcgtgcagtg gcccaggtag gtcgttccat taccatctct cctaaactcg 60
<210> 418
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0417 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 418
ggtaatgcgt tcgggctact gcggtgtgag atcgtgcggt taccatctct cctaaactcg 60
<210> 419
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0418 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 419
tctacgtagg catcagcgtc gcggcactac acgtgggtct taccatctct cctaaactcg 60
<210> 420
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0419 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 420
cgaagggacg cgggaggcta gggaatgctg catcagtggt taccatctct cctaaactcg 60
<210> 421
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0420 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 421
actccctgat aggcgtcttt caggcgggcg ggactcagg 39
<210> 422
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0421 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 422
gggacgccag actgggctca cgagtgatag gctttccgc 39
<210> 423
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0422 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 423
ttcggcttag gtccttctcg tgtggtgccc gctgccctt 39
<210> 424
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0423 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 424
gcgagccacg cggcgtgtaa ccaacagcat tttctcgct 39
<210> 425
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0424 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 425
tgcggcagca tcaaggacct accatcttga ccggtcgcc 39
<210> 426
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0425 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 426
actccagttg ctagaacggt ctcgcgcaca cacggtggg 39
<210> 427
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0426 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 427
cgtgctttga tccgactgac actgcgtggc cgatgggct 39
<210> 428
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0427 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 428
gtgcccgttg tgagtcggag aaccttgcgc ggcctattg 39
<210> 429
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0428 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 429
cgcagggacg ccgtcgaaac acagcactcc acatcgtac 39
<210> 430
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0429 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 430
cacgactctc acacggagcc agcctatctc ccgttgcgg 39
<210> 431
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0430 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 431
aacagccttg gaccggtcgc tcacagtcct ttcgtgccc 39
<210> 432
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0431 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 432
ctcgtcgttt ccgttcttgc agtgctgcca gaggcggtg 39
<210> 433
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0432 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 433
agaaggaaag tctcaccggg cgccctaggc cttccgagg 39
<210> 434
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0433 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 434
gcctcaatgc tcttcacctg ggtccatgcc cggacggag 39
<210> 435
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0434 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 435
agcagctgac aacctagacg tgtgcctcgg gtagtgcgc 39
<210> 436
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0435 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 436
gaacagagcg cccgtttcgc cgaacgcggt ggataaaca 39
<210> 437
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0436 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 437
acttccggcc cgccgcactc atgcctgtac gggtttagt 39
<210> 438
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0437 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 438
catttacgtc gccagccgcc ggtatccatc tgcgagcac 39
<210> 439
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0438 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 439
agcagcggca tctccagttt tgggccaggg ttgggatcc 39
<210> 440
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0439 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 440
gcatatgcga atcgactcca acgcgcgaaa ggacgggct 39
<210> 441
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0440 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 441
ggcactagcc tcggccacaa actgtaggcg cgctatcga 39
<210> 442
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0441 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 442
ctgctcgcgc gttgaaccta gcctcgagtg gcattgacg 39
<210> 443
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0442 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 443
tcaattccgc gcggagagag aacaacaacc acgcaccgg 39
<210> 444
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0443 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 444
tgaccaccgt cgaaccatcc ggcagtcggg ccataagct 39
<210> 445
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0444 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 445
cctcaacctc gctcgaacgt acgcagccgc aacactgga 39
<210> 446
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0445 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 446
gaagcggcat agctccgtcc tcgggtagta aagcgcgca 39
<210> 447
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0446 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 447
gggaacagcg cataattcgc cgtgtgtgtg gccatcgca 39
<210> 448
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0447 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 448
cgacgccaca acgaacggcc tcctcgaaac cttgtgagg 39
<210> 449
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0448 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 449
gggatgtaac accacgtggc gcacgcactg tgtaggagc 39
<210> 450
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0449 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 450
ctgggaggta cagctagggt gaccggcctc ctgccctca 39
<210> 451
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0450 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 451
gcccttgcca cagacccgca cagcgagttc tggcttcat 39
<210> 452
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0451 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 452
gcgcaacgtg acggtacgcc aacggtcacc agaagtcag 39
<210> 453
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0452 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 453
cggccaacct caaaggcgtc cacggcgaat ctgcgtcta 39
<210> 454
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0453 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 454
cgcgcatagg gagtgtgctg gcgggctgcg agtaagaat 39
<210> 455
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0454 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 455
ctcaggaagc gagcagtaaa tccttggccg accgcagcg 39
<210> 456
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0455 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 456
gagcagagca gcttatccct gggtctccgg catctgcgc 39
<210> 457
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0456 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 457
tggtgttccc tttcgccgcc ttgcaagtcc catcatgcc 39
<210> 458
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0457 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 458
gcaagaagcc tacgcgaagc tgtcgggacc acggcaatg 39
<210> 459
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0458 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 459
ctccgtgctt gttaccttcg agtcgcggca caccacacg 39
<210> 460
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0459 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 460
tctgctcccg tgaatcccgc tcgttcgttc tcccggcta 39
<210> 461
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0460 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 461
atgggaatgt agaagcgctg caaatcgtcg cccgtgccg 39
<210> 462
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0461 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 462
gtctgctcgt agttagtcgc ctcgacgcac gacgggacc 39
<210> 463
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0462 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 463
ggcccaacta gagaagcaga aggcatcccg gtcggccac 39
<210> 464
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0463 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 464
agttcgcacc gccattctcg gcagactccc accgacatg 39
<210> 465
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0464 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 465
gaaaagcacg gcgtgcagtg gcccaggtag gtcgttcca 39
<210> 466
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0465 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 466
ggtaatgcgt tcgggctact gcggtgtgag atcgtgcgg 39
<210> 467
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0466 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 467
tctacgtagg catcagcgtc gcggcactac acgtgggtc 39
<210> 468
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0467 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 468
cgaagggacg cgggaggcta gggaatgctg catcagtgg 39
<210> 469
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0468 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 469
cctacagggt tagctccaca gccgggtccg tgcagatgct tcctctacca cctacatcac 60
<210> 470
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0469 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 470
agaggcctcc tcagcggtcc tacgcggtct tggacgatgt tcctctacca cctacatcac 60
<210> 471
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0470 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 471
cgtactcatc ccgtgccagt gccggcctac tcacctgtgt tcctctacca cctacatcac 60
<210> 472
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0471 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 472
gcctgcgaca atgtgggctg gaacggtttg ctagggcact tcctctacca cctacatcac 60
<210> 473
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0472 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 473
cacccgatgt gttatgacgt gcgtcgccct cgagcacctt tcctctacca cctacatcac 60
<210> 474
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0473 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 474
agcatacaga gggcagcttg gcagggccgc gaagttaggt tcctctacca cctacatcac 60
<210> 475
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0474 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 475
gacgcccgat tgtccttgtt cgccatgccg caaggtgagt tcctctacca cctacatcac 60
<210> 476
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0475 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 476
ggtggcgaga tgacgacagt gcagaaggtg gcggtagggt tcctctacca cctacatcac 60
<210> 477
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0476 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 477
tctgtgaagc gggtggagta cggaggtgtt cttcgcgcct tcctctacca cctacatcac 60
<210> 478
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0477 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 478
ttttgcgcaa tcatggcagc ggactcaaca ccctccggct tcctctacca cctacatcac 60
<210> 479
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0478 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 479
gacctcggag ctagacggga gtgttgcgtg tgcagggtgt tcctctacca cctacatcac 60
<210> 480
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0479 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 480
cggttcgagt gcgcagtgct taacgtgaag cgagggaggt tcctctacca cctacatcac 60
<210> 481
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0480 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 481
cctacagggt tagctccaca gccgggtccg tgcagatgct aacattccta acttctcata 60
<210> 482
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0481 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 482
agaggcctcc tcagcggtcc tacgcggtct tggacgatgt aacattccta acttctcata 60
<210> 483
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0482 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 483
cgtactcatc ccgtgccagt gccggcctac tcacctgtgt aacattccta acttctcata 60
<210> 484
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0483 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 484
gcctgcgaca atgtgggctg gaacggtttg ctagggcact aacattccta acttctcata 60
<210> 485
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0484 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 485
cacccgatgt gttatgacgt gcgtcgccct cgagcacctt aacattccta acttctcata 60
<210> 486
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0485 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 486
agcatacaga gggcagcttg gcagggccgc gaagttaggt aacattccta acttctcata 60
<210> 487
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0486 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 487
gacgcccgat tgtccttgtt cgccatgccg caaggtgagt aacattccta acttctcata 60
<210> 488
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0487 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 488
ggtggcgaga tgacgacagt gcagaaggtg gcggtagggt aacattccta acttctcata 60
<210> 489
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0488 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 489
tctgtgaagc gggtggagta cggaggtgtt cttcgcgcct aacattccta acttctcata 60
<210> 490
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0489 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 490
ttttgcgcaa tcatggcagc ggactcaaca ccctccggct aacattccta acttctcata 60
<210> 491
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0490 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 491
gacctcggag ctagacggga gtgttgcgtg tgcagggtgt aacattccta acttctcata 60
<210> 492
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0491 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 492
cggttcgagt gcgcagtgct taacgtgaag cgagggaggt aacattccta acttctcata 60
<210> 493
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0492 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 493
cctacagggt tagctccaca gccgggtccg tgcagatgct taccatctct cctaaactcg 60
<210> 494
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0493 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 494
agaggcctcc tcagcggtcc tacgcggtct tggacgatgt taccatctct cctaaactcg 60
<210> 495
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0494 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 495
cgtactcatc ccgtgccagt gccggcctac tcacctgtgt taccatctct cctaaactcg 60
<210> 496
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0495 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 496
gcctgcgaca atgtgggctg gaacggtttg ctagggcact taccatctct cctaaactcg 60
<210> 497
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0496 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 497
cacccgatgt gttatgacgt gcgtcgccct cgagcacctt taccatctct cctaaactcg 60
<210> 498
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0497 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 498
agcatacaga gggcagcttg gcagggccgc gaagttaggt taccatctct cctaaactcg 60
<210> 499
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0498 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 499
gacgcccgat tgtccttgtt cgccatgccg caaggtgagt taccatctct cctaaactcg 60
<210> 500
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0499 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 500
ggtggcgaga tgacgacagt gcagaaggtg gcggtagggt taccatctct cctaaactcg 60
<210> 501
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0500 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 501
tctgtgaagc gggtggagta cggaggtgtt cttcgcgcct taccatctct cctaaactcg 60
<210> 502
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0501 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 502
ttttgcgcaa tcatggcagc ggactcaaca ccctccggct taccatctct cctaaactcg 60
<210> 503
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0502 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 503
gacctcggag ctagacggga gtgttgcgtg tgcagggtgt taccatctct cctaaactcg 60
<210> 504
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0503 ,用于3D DNA纳米结构
<400> 504
cggttcgagt gcgcagtgct taacgtgaag cgagggaggt taccatctct cctaaactcg 60
<210> 505
<211> 31
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0504 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 505
agaaaggaac aactaaagga attcaaaaaa a 31
<210> 506
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0505 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 506
aggctccaga ggctttgagg acacgggtaa 30
<210> 507
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0506 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 507
acggctacaa aaggagcctt taatgtgaga at 32
<210> 508
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0507 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 508
aatacgtttg aaagaggaca gactgacctt 30
<210> 509
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0508 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 509
gaccaactaa tgccactacg aagggggtag ca 32
<210> 510
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0509 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 510
catcaagtaa aacgaactaa cgagttgaga 30
<210> 511
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0510 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 511
tacgttaaag taatcttgac aagaaccgaa ct 32
<210> 512
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0511 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 512
tttaggacaa atgctttaaa caatcaggtc 30
<210> 513
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0512 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 513
atccccctat accacattca actagaaaaa tc 32
<210> 514
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0513 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 514
tttaccccaa catgttttaa atttccatat 30
<210> 515
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0514 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 515
ctgtagcttg actattatag tcagttcatt ga 32
<210> 516
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0515 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 516
aacagttttg taccaaaaac attttatttc 30
<210> 517
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0516 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 517
acaactttca acagtttcag cggatgtatc gg 32
<210> 518
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0517 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 518
tttatcagga cagcatcgga acgacaccaa cc 32
<210> 519
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0518 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 519
cagcgaaact tgctttcgag gtgttgctaa 30
<210> 520
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0519 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 520
taaaacgagg tcaatcataa gggaaccgga ta 32
<210> 521
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0520 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 521
gcgcagacaa gaggcaaaag aatccctcag 30
<210> 522
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0521 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 522
ttcattacgt caggacgttg ggaaatgcag at 32
<210> 523
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0522 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 523
ttataccacc aaatcaacgt aacgaacgag 30
<210> 524
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0523 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 524
acataacggg aatcgtcata aataaagcaa ag 32
<210> 525
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0524 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 525
aatactgccc aaaaggaatt acgtggctca 30
<210> 526
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0525 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 526
cggattgcag agcttaattg ctgaaacgag ta 32
<210> 527
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0526 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 527
gatggcttat caaaaagatt aagagcgtcc 30
<210> 528
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0527 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 528
gatttagtca ataaagcctc agagaaccct ca 32
<210> 529
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0528 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 529
taaatgaatt ttctgtatgg gattaatttc tt 32
<210> 530
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0529 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 530
aaacagcttt ttgcgggatc gtcaacacta aa 32
<210> 531
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0530 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 531
aaggccgctg ataccgatag ttgcgacgtt ag 32
<210> 532
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0531 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 532
acactcatcc atgttactta gccgaaagct gc 32
<210> 533
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0532 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 533
gacctgctct ttgaccccca gcgagggagt ta 32
<210> 534
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0533 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 534
tcattcagat gcgattttaa gaacaggcat ag 32
<210> 535
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0534 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 535
attacctttg aataaggctt gcccaaatcc gc 32
<210> 536
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0535 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 536
taagagcaaa tgtttagact ggataggaag cc 32
<210> 537
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0536 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 537
aatagtaaac actatcataa ccctcattgt ga 32
<210> 538
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0537 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 538
cgaaagactt tgataagagg tcatatttcg ca 32
<210> 539
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0538 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 539
ttgctccttt caaatatcgc gtttgagggg gt 32
<210> 540
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0539 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 540
aatggtcaac aggcaaggca aagagtaatg tg 32
<210> 541
<211> 31
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0540 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 541
tctaaagttt tgtcgtcttt ccagccgaca a 31
<210> 542
<211> 44
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0541 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 542
tgacaactcg ctgaggcttg cattatacca agcgcgatga taaa 44
<210> 543
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0542 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 543
atattcggaa ccatcgccca cgcagagaag ga 32
<210> 544
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0543 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 544
tcatcgccaa caaagtacaa cggacgccag ca 32
<210> 545
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0544 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 545
gatggtttga acgagtagta aatttaccat ta 32
<210> 546
<211> 38
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0545 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 546
cgtttaccag acgacaaaga agttttgcca taattcga 38
<210> 547
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0546 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 547
cttttgcaga taaaaaccaa aataaagact cc 32
<210> 548
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0547 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 548
gcttcaatca ggattagaga gttattttca 30
<210> 549
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0548 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 549
ccaacaggag cgaaccagac cggagccttt ac 32
<210> 550
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0549 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 550
tttggggata gtagtagcat taaaaggccg 30
<210> 551
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0550 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 551
tccacagaca gccctcatag ttagcgtaac ga 32
<210> 552
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0551 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 552
ttaggattgg ctgagactcc tcaataaccg at 32
<210> 553
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0552 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 553
tattaagaag cggggttttg ctcgtagcat 30
<210> 554
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0553 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 554
ttgacaggcc accaccagag ccgcgatttg ta 32
<210> 555
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0554 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 555
caccagaaag gttgaggcag gtcatgaaag 30
<210> 556
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0555 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 556
gcaaggcctc accagtagca ccatgggctt ga 32
<210> 557
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0556 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 557
cagcaaaagg aaacgtcacc aatgagccgc 30
<210> 558
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0557 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 558
ttattacgaa gaactggcat gattgcgaga gg 32
<210> 559
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0558 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 559
atacccaaca gtatgttagc aaattagagc 30
<210> 560
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0559 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 560
agagagaaaa aaatgaaaat agcaagcaaa ct 32
<210> 561
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0560 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 561
ttaacgtcta acataaaaac aggtaacgga 30
<210> 562
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0561 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 562
ccaatagctc atcgtaggaa tcatggcatc aa 32
<210> 563
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0562 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 563
tcaccagtac aaactacaac gcctagtacc ag 32
<210> 564
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0563 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 564
gcggataacc tattattctg aaacagacga tt 32
<210> 565
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0564 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 565
tttcggaagt gccgtcgaga gggtgagttt cg 32
<210> 566
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0565 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 566
ggccttgaag agccaccacc ctcagaaacc at 32
<210> 567
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0566 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 567
ccaccctcta ttcacaaaca aatacctgcc ta 32
<210> 568
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0567 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 568
cgatagcatt gagccatttg ggaacgtaga aa 32
<210> 569
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0568 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 569
tcaccgacgc accgtaatca gtagcagaac cg 32
<210> 570
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0569 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 570
atacataccg aggaaacgca ataagaagcg ca 32
<210> 571
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0570 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 571
aaggaaacat aaaggtggca acattatcac cg 32
<210> 572
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0571 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 572
ttagacggcc aaataagaaa cgatagaagg ct 32
<210> 573
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0572 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 573
atcccaatga gaattaactg aacagttacc ag 32
<210> 574
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0573 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 574
tatccggtct catcgagaac aagcgacaaa ag 32
<210> 575
<211> 31
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0574 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 575
aggaacccat gtaccgtaac acttgatata a 31
<210> 576
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0575 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 576
gtatagcaaa cagttaatgc ccaatcctca 30
<210> 577
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0576 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 577
gcccgtatcc ggaataggtg tatcagccca at 32
<210> 578
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0577 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 578
ttaaagccag agccgccacc ctcgacagaa 30
<210> 579
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0578 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 579
gcctccctca gaatggaaag cgcagtaaca gt 32
<210> 580
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0579 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 580
tcaagtttca ttaaaggtga atataaaaga 30
<210> 581
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0580 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 581
gaaattattg cctttagcgt cagaccggaa cc 32
<210> 582
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0581 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 582
aacgcaaaga tagccgaaca aaccctgaac 30
<210> 583
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0582 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 583
aagtaagcag acaccacgga ataatattga cg 32
<210> 584
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0583 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 584
aaagtcacaa aataaacagc cagcgtttta 30
<210> 585
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0584 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 585
gccagttaga gggtaattga gcgctttaag aa 32
<210> 586
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0585 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 586
gcgaacctcc aagaacgggt atgacaataa 30
<210> 587
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0586 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 587
ccaccctcat tttcagggat agcaaccgta ct 32
<210> 588
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0587 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 588
caggaggtgg ggtcagtgcc ttgagtctct ga 32
<210> 589
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0588 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 589
gttttaactt agtaccgcca cccagagcca 30
<210> 590
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0589 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 590
atttaccggg aaccagagcc accactgtag cg 32
<210> 591
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0590 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 591
aaatcacctt ccagtaagcg tcagtaataa 30
<210> 592
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0591 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 592
cgttttcaag ggagggaagg taaagtttat tt 32
<210> 593
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0592 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 593
accgattgtc ggcattttcg gtcataatca 30
<210> 594
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0593 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 594
tgtcacaatc ttaccgaagc cctttaatat ca 32
<210> 595
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0594 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 595
aatagctatc aatagaaaat tcaacattca 30
<210> 596
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0595 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 596
gagagataga gcgtctttcc agaggttttg aa 32
<210> 597
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0596 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 597
acgctaacac ccacaagaat tgaaaatagc 30
<210> 598
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0597 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 598
gccttaaacc aatcaataat cggcacgcgc ct 32
<210> 599
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0598 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 599
taaatcggga ttcccaattc tgcgatataa tg 32
<210> 600
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0599 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 600
aacgcaaaat cgatgaacgg taccggttga 30
<210> 601
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0600 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 601
aacaagaggg ataaaaattt ttagcataaa gc 32
<210> 602
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0601 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 602
taatcagcgg attgaccgta atcgtaaccg 30
<210> 603
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0602 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 603
acaaacggaa aagccccaaa aacactggag ca 32
<210> 604
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0603 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 604
tgcatctttc ccagtcacga cggcctgcag 30
<210> 605
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0604 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 605
ccagggttgc cagtttgagg ggacccgtgg ga 32
<210> 606
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0605 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 606
gtcgacttcg gccaacgcgc ggggtttttc 30
<210> 607
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0606 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 607
ttaatgaact agaggatccc cggggggtaa cg 32
<210> 608
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0607 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 608
ttttcactca aagggcgaaa aaccatcacc 30
<210> 609
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0608 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 609
ctccaacgca gtgagacggg caaccagctg ca 32
<210> 610
<211> 31
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0609 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 610
caaatcaagt tttttggggt cgaaacgtgg a 31
<210> 611
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0610 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 611
aaattaagtt gaccattaga tacttttgcg 30
<210> 612
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0611 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 612
tatattttgt cattgcctga gagtggaaga tt 32
<210> 613
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0612 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 613
gctatcagaa atgcaatgcc tgaattagca 30
<210> 614
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0613 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 614
gtataagcca acccgtcgga ttctgacgac ag 32
<210> 615
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0614 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 615
gcgagtaaaa atatttaaat tgttacaaag 30
<210> 616
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0615 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 616
tatcggccgc aaggcgatta agtttaccga gc 32
<210> 617
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0616 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 617
gatgtgcttc aggaagatcg cacaatgtga 30
<210> 618
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0617 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 618
tcgaattcgg gaaacctgtc gtgcagctga tt 32
<210> 619
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0618 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 619
ttccagtcgt aatcatggtc ataaaagggg 30
<210> 620
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0619 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 620
gcccttcaga gtccactatt aaagggtgcc gt 32
<210> 621
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0620 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 621
tggaacaacc gcctggccct gaggcccgct 30
<210> 622
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0621 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 622
aaagcactaa atcggaaccc taatccagtt 30
<210> 623
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0622 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 623
taaatcatat aacctgttta gctaaccttt aa 32
<210> 624
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0623 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 624
taggtaaact atttttgaga gatcaaacgt ta 32
<210> 625
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0624 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 625
gagggtagga ttcaaaaggg tgagacatcc aa 32
<210> 626
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0625 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 626
atattttggc tttcatcaac attatccagc ca 32
<210> 627
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0626 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 627
tgtagccatt aaaattcgca ttaaatgccg ga 32
<210> 628
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0627 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 628
gctttccgat tacgccagct ggcggctgtt tc 32
<210> 629
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0628 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 629
tcttcgctgc accgcttctg gtgcggcctt cc 32
<210> 630
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0629 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 630
ctgtgtgatt gcgttgcgct cactagagtt gc 32
<210> 631
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0630 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 631
cacattaaaa ttgttatccg ctcatgcggg cc 32
<210> 632
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0631 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 632
agcaagcgta gggttgagtg ttgtagggag cc 32
<210> 633
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0632 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 633
gcccgagagt ccacgctggt ttgcagctaa ct 32
<210> 634
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0633 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 634
cccgatttag agcttgacgg ggaaaaagaa ta 32
<210> 635
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0634 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 635
ttctactacg cgagctgaaa aggttaccgc gc 32
<210> 636
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0635 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 636
gagacagcta gctgataaat taatttttgt 30
<210> 637
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0636 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 637
caaccgtttc aaatcaccat caattcgagc ca 32
<210> 638
<211> 44
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0637 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 638
taaatcaaaa taattcgcgt ctcggaaacc aggcaaaggg aagg 44
<210> 639
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0638 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 639
gccatcaagc tcatttttta accacaaatc ca 32
<210> 640
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0639 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 640
caactgttgc gccattcgcc attcaaacat ca 32
<210> 641
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0640 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 641
aagcctggta cgagccggaa gcatagatga tg 32
<210> 642
<211> 38
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0641 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 642
cccagcaggc gaaaaatccc ttataaatca agccggcg 38
<210> 643
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0642 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 643
tcggcaaatc ctgtttgatg gtggaccctc aa 32
<210> 644
<211> 31
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0643 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 644
aacgtggcga gaaaggaagg gaaaccagta a 31
<210> 645
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0644 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 645
ttttatttaa gcaaatcaga tattttttgt 30
<210> 646
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0645 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 646
gtaataagtt aggcagaggc atttatgata tt 32
<210> 647
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0646 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 647
catgtaatag aatataaagt accaagccgt 30
<210> 648
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0647 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 648
atcgcaagta tgtaaatgct gatgatagga ac 32
<210> 649
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0648 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 649
tataactaac aaagaacgcg agaacgccaa 30
<210> 650
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0649 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 650
agaaaacaaa gaagatgatg aaacaggctg cg 32
<210> 651
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0650 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 651
ctgagcaaaa attaattaca ttttgggtta 30
<210> 652
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0651 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 652
gcaattcaca tattcctgat tatcaaagtg ta 32
<210> 653
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0652 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 653
attatcattc aatataatcc tgacaattac 30
<210> 654
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0653 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 654
tcaatatcga acctcaaata tcaattccga aa 32
<210> 655
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0654 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 655
accttgcttg gtcagttggc aaagagcgga 30
<210> 656
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0655 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 656
taaaagggac attctggcca acaaagcatc 30
<210> 657
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0656 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 657
gtaccgcaat tctaagaacg cgagtattat tt 32
<210> 658
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0657 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 658
gtaaagtaat cgccatattt aacaaaactt tt 32
<210> 659
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0658 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 659
aattgagaat tctgtccaga cgactaaacc aa 32
<210> 660
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0659 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 660
tcaaatataa cctccggctt aggtaacaat tt 32
<210> 661
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0660 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 661
acctttttat tttagttaat ttcatagggc tt 32
<210> 662
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0661 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 662
catttgaagg cgaattattc atttttgttt gg 32
<210> 663
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0662 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 663
cgcgcagatt acctttttta atgggagaga ct 32
<210> 664
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0663 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 664
attatactaa gaaaccacca gaagtcaaca gt 32
<210> 665
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0664 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 665
gcggaacatc tgaataatgg aaggtacaaa at 32
<210> 666
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0665 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 666
tgaaaggagc aaatgaaaaa tctagagata ga 32
<210> 667
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0666 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 667
agccagcaat tgaggaaggt tatcatcatt tt 32
<210> 668
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0667 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 668
acccttctga cctgaaagcg taagacgctg ag 32
<210> 669
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0668 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 669
cttatcattc ccgacttgcg ggagcctaat tt 32
<210> 670
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0669 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 670
acaacatgcc aacgctcaac agtcttctga 30
<210> 671
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0670 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 671
agtataaagt tcagctaatg cagatgtctt tc 32
<210> 672
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0671 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 672
cctaaatcaa aatcataggt ctaaacagta 30
<210> 673
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0672 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 673
gaatttattt aatggtttga aatattctta cc 32
<210> 674
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0673 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 674
cataaatctt tgaataccaa gtgttagaac 30
<210> 675
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0674 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 675
cctgattgca atatatgtga gtgatcaata gt 32
<210> 676
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0675 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 676
ctaccatagt ttgagtaaca tttaaaatat 30
<210> 677
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0676 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 677
attttaaaat caaaattatt tgcacggatt cg 32
<210> 678
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0677 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 678
ctttagggcc tgcaacagtg ccaatacgtg 30
<210> 679
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0678 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 679
ttaacaccag cactaacaac taatcgttat ta 32
<210> 680
<211> 31
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0679 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 680
gcacagacaa tatttttgaa tggggtcagt a 31
<210> 681
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0680 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 681
tgtagaaatc aagattagtt gctcttacca 30
<210> 682
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0681 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 682
gtttatcaat atgcgttata caaaccgacc gt 32
<210> 683
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0682 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 683
ttagtatcac aatagataag tccacgagca 30
<210> 684
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0683 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 684
gtgataaaaa gacgctgaga agagataacc tt 32
<210> 685
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0684 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 685
cttagattta aggcgttaaa taaagcctgt 30
<210> 686
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0685 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 686
gcttctgttc gggagaaaca ataacgtaaa ac 32
<210> 687
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0686 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 687
cttttacaaa atcgtcgcta ttagcgatag 30
<210> 688
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0687 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 688
agaaataaaa atcctttgcc cgaaagatta ga 32
<210> 689
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0688 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 689
ctcgtattag aaattgcgta gatacagtac 30
<210> 690
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0689 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 690
gccgtcaaaa aacagaggtg aggcctatta gt 32
<210> 691
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0690 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 691
cagaagatta gataatacat ttgtcgacaa 30
<210> 692
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0691 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 692
ctttaatgcg cgaactgata gccccaccag 30
<210> 693
<211> 52
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0692 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 693
agaaaggaac aactaaagga attcaaaaaa attcctctac cacctacatc ac 52
<210> 694
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0693 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 694
aggctccaga ggctttgagg acacgggtaa ttcctctacc acctacatca c 51
<210> 695
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0694 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 695
acggctacaa aaggagcctt taatgtgaga atttcctcta ccacctacat cac 53
<210> 696
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0695 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 696
aatacgtttg aaagaggaca gactgacctt ttcctctacc acctacatca c 51
<210> 697
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0696 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 697
gaccaactaa tgccactacg aagggggtag cattcctcta ccacctacat cac 53
<210> 698
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0697 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 698
catcaagtaa aacgaactaa cgagttgaga ttcctctacc acctacatca c 51
<210> 699
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0698 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 699
tacgttaaag taatcttgac aagaaccgaa ctttcctcta ccacctacat cac 53
<210> 700
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0699 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 700
tttaggacaa atgctttaaa caatcaggtc ttcctctacc acctacatca c 51
<210> 701
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0700 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 701
atccccctat accacattca actagaaaaa tcttcctcta ccacctacat cac 53
<210> 702
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0701 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 702
tttaccccaa catgttttaa atttccatat ttcctctacc acctacatca c 51
<210> 703
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0702 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 703
ctgtagcttg actattatag tcagttcatt gattcctcta ccacctacat cac 53
<210> 704
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0703 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 704
aacagttttg taccaaaaac attttatttc ttcctctacc acctacatca c 51
<210> 705
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0704 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 705
acaactttca acagtttcag cggatgtatc ggttcctcta ccacctacat cac 53
<210> 706
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0705 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 706
tttatcagga cagcatcgga acgacaccaa ccttcctcta ccacctacat cac 53
<210> 707
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0706 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 707
cagcgaaact tgctttcgag gtgttgctaa ttcctctacc acctacatca c 51
<210> 708
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0707 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 708
taaaacgagg tcaatcataa gggaaccgga tattcctcta ccacctacat cac 53
<210> 709
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0708 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 709
gcgcagacaa gaggcaaaag aatccctcag ttcctctacc acctacatca c 51
<210> 710
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0709 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 710
ttcattacgt caggacgttg ggaaatgcag atttcctcta ccacctacat cac 53
<210> 711
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0710 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 711
ttataccacc aaatcaacgt aacgaacgag ttcctctacc acctacatca c 51
<210> 712
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0711 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 712
acataacggg aatcgtcata aataaagcaa agttcctcta ccacctacat cac 53
<210> 713
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0712 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 713
aatactgccc aaaaggaatt acgtggctca ttcctctacc acctacatca c 51
<210> 714
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0713 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 714
cggattgcag agcttaattg ctgaaacgag tattcctcta ccacctacat cac 53
<210> 715
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0714 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 715
gatggcttat caaaaagatt aagagcgtcc ttcctctacc acctacatca c 51
<210> 716
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0715 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 716
gatttagtca ataaagcctc agagaaccct cattcctcta ccacctacat cac 53
<210> 717
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0716 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 717
taaatgaatt ttctgtatgg gattaatttc ttttcctcta ccacctacat cac 53
<210> 718
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0717 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 718
aaacagcttt ttgcgggatc gtcaacacta aattcctcta ccacctacat cac 53
<210> 719
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0718 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 719
aaggccgctg ataccgatag ttgcgacgtt agttcctcta ccacctacat cac 53
<210> 720
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0719 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 720
acactcatcc atgttactta gccgaaagct gcttcctcta ccacctacat cac 53
<210> 721
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0720 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 721
gacctgctct ttgaccccca gcgagggagt tattcctcta ccacctacat cac 53
<210> 722
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0721 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 722
tcattcagat gcgattttaa gaacaggcat agttcctcta ccacctacat cac 53
<210> 723
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0722 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 723
attacctttg aataaggctt gcccaaatcc gcttcctcta ccacctacat cac 53
<210> 724
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0723 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 724
taagagcaaa tgtttagact ggataggaag ccttcctcta ccacctacat cac 53
<210> 725
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0724 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 725
aatagtaaac actatcataa ccctcattgt gattcctcta ccacctacat cac 53
<210> 726
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0725 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 726
cgaaagactt tgataagagg tcatatttcg cattcctcta ccacctacat cac 53
<210> 727
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0726 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 727
ttgctccttt caaatatcgc gtttgagggg gtttcctcta ccacctacat cac 53
<210> 728
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0727 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 728
aatggtcaac aggcaaggca aagagtaatg tgttcctcta ccacctacat cac 53
<210> 729
<211> 52
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0728 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 729
tctaaagttt tgtcgtcttt ccagccgaca attcctctac cacctacatc ac 52
<210> 730
<211> 65
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0729 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 730
tgacaactcg ctgaggcttg cattatacca agcgcgatga taaattcctc taccacctac 60
atcac 65
<210> 731
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0730 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 731
atattcggaa ccatcgccca cgcagagaag gattcctcta ccacctacat cac 53
<210> 732
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0731 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 732
tcatcgccaa caaagtacaa cggacgccag cattcctcta ccacctacat cac 53
<210> 733
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0732 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 733
gatggtttga acgagtagta aatttaccat tattcctcta ccacctacat cac 53
<210> 734
<211> 59
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0733 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 734
cgtttaccag acgacaaaga agttttgcca taattcgatt cctctaccac ctacatcac 59
<210> 735
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0734 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 735
cttttgcaga taaaaaccaa aataaagact ccttcctcta ccacctacat cac 53
<210> 736
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0735 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 736
gcttcaatca ggattagaga gttattttca ttcctctacc acctacatca c 51
<210> 737
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0736 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 737
ccaacaggag cgaaccagac cggagccttt acttcctcta ccacctacat cac 53
<210> 738
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0737 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 738
tttggggata gtagtagcat taaaaggccg ttcctctacc acctacatca c 51
<210> 739
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0738 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 739
tccacagaca gccctcatag ttagcgtaac gattcctcta ccacctacat cac 53
<210> 740
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0739 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 740
ttaggattgg ctgagactcc tcaataaccg atttcctcta ccacctacat cac 53
<210> 741
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0740 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 741
tattaagaag cggggttttg ctcgtagcat ttcctctacc acctacatca c 51
<210> 742
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0741 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 742
ttgacaggcc accaccagag ccgcgatttg tattcctcta ccacctacat cac 53
<210> 743
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0742 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 743
caccagaaag gttgaggcag gtcatgaaag ttcctctacc acctacatca c 51
<210> 744
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0743 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 744
gcaaggcctc accagtagca ccatgggctt gattcctcta ccacctacat cac 53
<210> 745
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0744 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 745
cagcaaaagg aaacgtcacc aatgagccgc ttcctctacc acctacatca c 51
<210> 746
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0745 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 746
ttattacgaa gaactggcat gattgcgaga ggttcctcta ccacctacat cac 53
<210> 747
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0746 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 747
atacccaaca gtatgttagc aaattagagc ttcctctacc acctacatca c 51
<210> 748
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0747 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 748
agagagaaaa aaatgaaaat agcaagcaaa ctttcctcta ccacctacat cac 53
<210> 749
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0748 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 749
ttaacgtcta acataaaaac aggtaacgga ttcctctacc acctacatca c 51
<210> 750
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0749 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 750
ccaatagctc atcgtaggaa tcatggcatc aattcctcta ccacctacat cac 53
<210> 751
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0750 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 751
tcaccagtac aaactacaac gcctagtacc agttcctcta ccacctacat cac 53
<210> 752
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0751 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 752
gcggataacc tattattctg aaacagacga ttttcctcta ccacctacat cac 53
<210> 753
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0752 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 753
tttcggaagt gccgtcgaga gggtgagttt cgttcctcta ccacctacat cac 53
<210> 754
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0753 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 754
ggccttgaag agccaccacc ctcagaaacc atttcctcta ccacctacat cac 53
<210> 755
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0754 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 755
ccaccctcta ttcacaaaca aatacctgcc tattcctcta ccacctacat cac 53
<210> 756
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0755 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 756
cgatagcatt gagccatttg ggaacgtaga aattcctcta ccacctacat cac 53
<210> 757
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0756 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 757
tcaccgacgc accgtaatca gtagcagaac cgttcctcta ccacctacat cac 53
<210> 758
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0757 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 758
atacataccg aggaaacgca ataagaagcg cattcctcta ccacctacat cac 53
<210> 759
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0758 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 759
aaggaaacat aaaggtggca acattatcac cgttcctcta ccacctacat cac 53
<210> 760
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0759 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 760
ttagacggcc aaataagaaa cgatagaagg ctttcctcta ccacctacat cac 53
<210> 761
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0760 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 761
atcccaatga gaattaactg aacagttacc agttcctcta ccacctacat cac 53
<210> 762
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0761 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 762
tatccggtct catcgagaac aagcgacaaa agttcctcta ccacctacat cac 53
<210> 763
<211> 52
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0762 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 763
aggaacccat gtaccgtaac acttgatata attcctctac cacctacatc ac 52
<210> 764
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0763 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 764
gtatagcaaa cagttaatgc ccaatcctca ttcctctacc acctacatca c 51
<210> 765
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0764 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 765
gcccgtatcc ggaataggtg tatcagccca atttcctcta ccacctacat cac 53
<210> 766
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0765 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 766
ttaaagccag agccgccacc ctcgacagaa ttcctctacc acctacatca c 51
<210> 767
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0766 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 767
gcctccctca gaatggaaag cgcagtaaca gtttcctcta ccacctacat cac 53
<210> 768
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0767 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 768
tcaagtttca ttaaaggtga atataaaaga ttcctctacc acctacatca c 51
<210> 769
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0768 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 769
gaaattattg cctttagcgt cagaccggaa ccttcctcta ccacctacat cac 53
<210> 770
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0769 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 770
aacgcaaaga tagccgaaca aaccctgaac ttcctctacc acctacatca c 51
<210> 771
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0770 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 771
aagtaagcag acaccacgga ataatattga cgttcctcta ccacctacat cac 53
<210> 772
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0771 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 772
aaagtcacaa aataaacagc cagcgtttta ttcctctacc acctacatca c 51
<210> 773
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0772 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 773
gccagttaga gggtaattga gcgctttaag aattcctcta ccacctacat cac 53
<210> 774
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0773 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 774
gcgaacctcc aagaacgggt atgacaataa ttcctctacc acctacatca c 51
<210> 775
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0774 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 775
ccaccctcat tttcagggat agcaaccgta ctttcctcta ccacctacat cac 53
<210> 776
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0775 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 776
caggaggtgg ggtcagtgcc ttgagtctct gattcctcta ccacctacat cac 53
<210> 777
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0776 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 777
gttttaactt agtaccgcca cccagagcca ttcctctacc acctacatca c 51
<210> 778
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0777 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 778
atttaccggg aaccagagcc accactgtag cgttcctcta ccacctacat cac 53
<210> 779
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0778 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 779
aaatcacctt ccagtaagcg tcagtaataa ttcctctacc acctacatca c 51
<210> 780
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0779 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 780
cgttttcaag ggagggaagg taaagtttat ttttcctcta ccacctacat cac 53
<210> 781
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0780 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 781
accgattgtc ggcattttcg gtcataatca ttcctctacc acctacatca c 51
<210> 782
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0781 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 782
tgtcacaatc ttaccgaagc cctttaatat cattcctcta ccacctacat cac 53
<210> 783
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0782 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 783
aatagctatc aatagaaaat tcaacattca ttcctctacc acctacatca c 51
<210> 784
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0783 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 784
gagagataga gcgtctttcc agaggttttg aattcctcta ccacctacat cac 53
<210> 785
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0784 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 785
acgctaacac ccacaagaat tgaaaatagc ttcctctacc acctacatca c 51
<210> 786
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0785 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 786
gccttaaacc aatcaataat cggcacgcgc ctttcctcta ccacctacat cac 53
<210> 787
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0786 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 787
taaatcggga ttcccaattc tgcgatataa tgttcctcta ccacctacat cac 53
<210> 788
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0787 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 788
aacgcaaaat cgatgaacgg taccggttga ttcctctacc acctacatca c 51
<210> 789
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0788 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 789
aacaagaggg ataaaaattt ttagcataaa gcttcctcta ccacctacat cac 53
<210> 790
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0789 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 790
taatcagcgg attgaccgta atcgtaaccg ttcctctacc acctacatca c 51
<210> 791
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0790 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 791
acaaacggaa aagccccaaa aacactggag cattcctcta ccacctacat cac 53
<210> 792
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0791 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 792
tgcatctttc ccagtcacga cggcctgcag ttcctctacc acctacatca c 51
<210> 793
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0792 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 793
ccagggttgc cagtttgagg ggacccgtgg gattcctcta ccacctacat cac 53
<210> 794
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0793 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 794
gtcgacttcg gccaacgcgc ggggtttttc ttcctctacc acctacatca c 51
<210> 795
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0794 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 795
ttaatgaact agaggatccc cggggggtaa cgttcctcta ccacctacat cac 53
<210> 796
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0795 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 796
ttttcactca aagggcgaaa aaccatcacc ttcctctacc acctacatca c 51
<210> 797
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0796 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 797
ctccaacgca gtgagacggg caaccagctg cattcctcta ccacctacat cac 53
<210> 798
<211> 52
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0797 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 798
caaatcaagt tttttggggt cgaaacgtgg attcctctac cacctacatc ac 52
<210> 799
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0798 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 799
aaattaagtt gaccattaga tacttttgcg ttcctctacc acctacatca c 51
<210> 800
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0799 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 800
tatattttgt cattgcctga gagtggaaga ttttcctcta ccacctacat cac 53
<210> 801
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0800 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 801
gctatcagaa atgcaatgcc tgaattagca ttcctctacc acctacatca c 51
<210> 802
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0801 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 802
gtataagcca acccgtcgga ttctgacgac agttcctcta ccacctacat cac 53
<210> 803
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0802 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 803
gcgagtaaaa atatttaaat tgttacaaag ttcctctacc acctacatca c 51
<210> 804
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0803 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 804
tatcggccgc aaggcgatta agtttaccga gcttcctcta ccacctacat cac 53
<210> 805
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0804 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 805
gatgtgcttc aggaagatcg cacaatgtga ttcctctacc acctacatca c 51
<210> 806
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0805 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 806
tcgaattcgg gaaacctgtc gtgcagctga ttttcctcta ccacctacat cac 53
<210> 807
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0806 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 807
ttccagtcgt aatcatggtc ataaaagggg ttcctctacc acctacatca c 51
<210> 808
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0807 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 808
gcccttcaga gtccactatt aaagggtgcc gtttcctcta ccacctacat cac 53
<210> 809
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0808 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 809
tggaacaacc gcctggccct gaggcccgct ttcctctacc acctacatca c 51
<210> 810
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0809 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 810
aaagcactaa atcggaaccc taatccagtt ttcctctacc acctacatca c 51
<210> 811
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0810 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 811
taaatcatat aacctgttta gctaaccttt aattcctcta ccacctacat cac 53
<210> 812
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0811 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 812
taggtaaact atttttgaga gatcaaacgt tattcctcta ccacctacat cac 53
<210> 813
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0812 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 813
gagggtagga ttcaaaaggg tgagacatcc aattcctcta ccacctacat cac 53
<210> 814
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0813 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 814
atattttggc tttcatcaac attatccagc cattcctcta ccacctacat cac 53
<210> 815
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0814 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 815
tgtagccatt aaaattcgca ttaaatgccg gattcctcta ccacctacat cac 53
<210> 816
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0815 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 816
gctttccgat tacgccagct ggcggctgtt tcttcctcta ccacctacat cac 53
<210> 817
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0816 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 817
tcttcgctgc accgcttctg gtgcggcctt ccttcctcta ccacctacat cac 53
<210> 818
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0817 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 818
ctgtgtgatt gcgttgcgct cactagagtt gcttcctcta ccacctacat cac 53
<210> 819
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0818 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 819
cacattaaaa ttgttatccg ctcatgcggg ccttcctcta ccacctacat cac 53
<210> 820
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0819 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 820
agcaagcgta gggttgagtg ttgtagggag ccttcctcta ccacctacat cac 53
<210> 821
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0820 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 821
gcccgagagt ccacgctggt ttgcagctaa ctttcctcta ccacctacat cac 53
<210> 822
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0821 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 822
cccgatttag agcttgacgg ggaaaaagaa tattcctcta ccacctacat cac 53
<210> 823
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0822 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 823
ttctactacg cgagctgaaa aggttaccgc gcttcctcta ccacctacat cac 53
<210> 824
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0823 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 824
gagacagcta gctgataaat taatttttgt ttcctctacc acctacatca c 51
<210> 825
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0824 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 825
caaccgtttc aaatcaccat caattcgagc cattcctcta ccacctacat cac 53
<210> 826
<211> 65
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0825 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 826
taaatcaaaa taattcgcgt ctcggaaacc aggcaaaggg aaggttcctc taccacctac 60
atcac 65
<210> 827
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0826 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 827
gccatcaagc tcatttttta accacaaatc cattcctcta ccacctacat cac 53
<210> 828
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0827 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 828
caactgttgc gccattcgcc attcaaacat cattcctcta ccacctacat cac 53
<210> 829
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0828 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 829
aagcctggta cgagccggaa gcatagatga tgttcctcta ccacctacat cac 53
<210> 830
<211> 59
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0829 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 830
cccagcaggc gaaaaatccc ttataaatca agccggcgtt cctctaccac ctacatcac 59
<210> 831
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0830 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 831
tcggcaaatc ctgtttgatg gtggaccctc aattcctcta ccacctacat cac 53
<210> 832
<211> 52
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0831 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 832
aacgtggcga gaaaggaagg gaaaccagta attcctctac cacctacatc ac 52
<210> 833
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0832 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 833
ttttatttaa gcaaatcaga tattttttgt ttcctctacc acctacatca c 51
<210> 834
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0833 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 834
gtaataagtt aggcagaggc atttatgata ttttcctcta ccacctacat cac 53
<210> 835
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0834 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 835
catgtaatag aatataaagt accaagccgt ttcctctacc acctacatca c 51
<210> 836
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0835 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 836
atcgcaagta tgtaaatgct gatgatagga acttcctcta ccacctacat cac 53
<210> 837
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0836 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 837
tataactaac aaagaacgcg agaacgccaa ttcctctacc acctacatca c 51
<210> 838
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0837 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 838
agaaaacaaa gaagatgatg aaacaggctg cgttcctcta ccacctacat cac 53
<210> 839
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0838 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 839
ctgagcaaaa attaattaca ttttgggtta ttcctctacc acctacatca c 51
<210> 840
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0839 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 840
gcaattcaca tattcctgat tatcaaagtg tattcctcta ccacctacat cac 53
<210> 841
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0840 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 841
attatcattc aatataatcc tgacaattac ttcctctacc acctacatca c 51
<210> 842
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0841 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 842
tcaatatcga acctcaaata tcaattccga aattcctcta ccacctacat cac 53
<210> 843
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0842 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 843
accttgcttg gtcagttggc aaagagcgga ttcctctacc acctacatca c 51
<210> 844
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0843 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 844
taaaagggac attctggcca acaaagcatc ttcctctacc acctacatca c 51
<210> 845
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0844 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 845
gtaccgcaat tctaagaacg cgagtattat ttttcctcta ccacctacat cac 53
<210> 846
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0845 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 846
gtaaagtaat cgccatattt aacaaaactt ttttcctcta ccacctacat cac 53
<210> 847
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0846 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 847
aattgagaat tctgtccaga cgactaaacc aattcctcta ccacctacat cac 53
<210> 848
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0847 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 848
tcaaatataa cctccggctt aggtaacaat ttttcctcta ccacctacat cac 53
<210> 849
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0848 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 849
acctttttat tttagttaat ttcatagggc ttttcctcta ccacctacat cac 53
<210> 850
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0849 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 850
catttgaagg cgaattattc atttttgttt ggttcctcta ccacctacat cac 53
<210> 851
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0850 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 851
cgcgcagatt acctttttta atgggagaga ctttcctcta ccacctacat cac 53
<210> 852
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0851 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 852
attatactaa gaaaccacca gaagtcaaca gtttcctcta ccacctacat cac 53
<210> 853
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0852 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 853
gcggaacatc tgaataatgg aaggtacaaa atttcctcta ccacctacat cac 53
<210> 854
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0853 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 854
tgaaaggagc aaatgaaaaa tctagagata gattcctcta ccacctacat cac 53
<210> 855
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0854 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 855
agccagcaat tgaggaaggt tatcatcatt ttttcctcta ccacctacat cac 53
<210> 856
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0855 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 856
acccttctga cctgaaagcg taagacgctg agttcctcta ccacctacat cac 53
<210> 857
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0856 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 857
cttatcattc ccgacttgcg ggagcctaat ttttcctcta ccacctacat cac 53
<210> 858
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0857 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 858
acaacatgcc aacgctcaac agtcttctga ttcctctacc acctacatca c 51
<210> 859
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0858 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 859
agtataaagt tcagctaatg cagatgtctt tcttcctcta ccacctacat cac 53
<210> 860
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0859 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 860
cctaaatcaa aatcataggt ctaaacagta ttcctctacc acctacatca c 51
<210> 861
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0860 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 861
gaatttattt aatggtttga aatattctta ccttcctcta ccacctacat cac 53
<210> 862
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0861 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 862
cataaatctt tgaataccaa gtgttagaac ttcctctacc acctacatca c 51
<210> 863
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0862 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 863
cctgattgca atatatgtga gtgatcaata gtttcctcta ccacctacat cac 53
<210> 864
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0863 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 864
ctaccatagt ttgagtaaca tttaaaatat ttcctctacc acctacatca c 51
<210> 865
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0864 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 865
attttaaaat caaaattatt tgcacggatt cgttcctcta ccacctacat cac 53
<210> 866
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0865 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 866
ctttagggcc tgcaacagtg ccaatacgtg ttcctctacc acctacatca c 51
<210> 867
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0866 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 867
ttaacaccag cactaacaac taatcgttat tattcctcta ccacctacat cac 53
<210> 868
<211> 52
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0867 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 868
gcacagacaa tatttttgaa tggggtcagt attcctctac cacctacatc ac 52
<210> 869
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0868 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 869
tgtagaaatc aagattagtt gctcttacca ttcctctacc acctacatca c 51
<210> 870
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0869 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 870
gtttatcaat atgcgttata caaaccgacc gtttcctcta ccacctacat cac 53
<210> 871
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0870 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 871
ttagtatcac aatagataag tccacgagca ttcctctacc acctacatca c 51
<210> 872
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0871 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 872
gtgataaaaa gacgctgaga agagataacc ttttcctcta ccacctacat cac 53
<210> 873
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0872 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 873
cttagattta aggcgttaaa taaagcctgt ttcctctacc acctacatca c 51
<210> 874
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0873 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 874
gcttctgttc gggagaaaca ataacgtaaa acttcctcta ccacctacat cac 53
<210> 875
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0874 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 875
cttttacaaa atcgtcgcta ttagcgatag ttcctctacc acctacatca c 51
<210> 876
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0875 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 876
agaaataaaa atcctttgcc cgaaagatta gattcctcta ccacctacat cac 53
<210> 877
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0876 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 877
ctcgtattag aaattgcgta gatacagtac ttcctctacc acctacatca c 51
<210> 878
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0877 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 878
gccgtcaaaa aacagaggtg aggcctatta gtttcctcta ccacctacat cac 53
<210> 879
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0878 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 879
cagaagatta gataatacat ttgtcgacaa ttcctctacc acctacatca c 51
<210> 880
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0879 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 880
ctttaatgcg cgaactgata gccccaccag ttcctctacc acctacatca c 51
<210> 881
<211> 52
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0880 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 881
agaaaggaac aactaaagga attcaaaaaa ataacattcc taacttctca ta 52
<210> 882
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0881 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 882
aggctccaga ggctttgagg acacgggtaa taacattcct aacttctcat a 51
<210> 883
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0882 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 883
acggctacaa aaggagcctt taatgtgaga attaacattc ctaacttctc ata 53
<210> 884
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0883 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 884
aatacgtttg aaagaggaca gactgacctt taacattcct aacttctcat a 51
<210> 885
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0884 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 885
gaccaactaa tgccactacg aagggggtag cataacattc ctaacttctc ata 53
<210> 886
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0885 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 886
catcaagtaa aacgaactaa cgagttgaga taacattcct aacttctcat a 51
<210> 887
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0886 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 887
tacgttaaag taatcttgac aagaaccgaa cttaacattc ctaacttctc ata 53
<210> 888
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0887 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 888
tttaggacaa atgctttaaa caatcaggtc taacattcct aacttctcat a 51
<210> 889
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0888 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 889
atccccctat accacattca actagaaaaa tctaacattc ctaacttctc ata 53
<210> 890
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0889 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 890
tttaccccaa catgttttaa atttccatat taacattcct aacttctcat a 51
<210> 891
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0890 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 891
ctgtagcttg actattatag tcagttcatt gataacattc ctaacttctc ata 53
<210> 892
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0891 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 892
aacagttttg taccaaaaac attttatttc taacattcct aacttctcat a 51
<210> 893
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0892 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 893
acaactttca acagtttcag cggatgtatc ggtaacattc ctaacttctc ata 53
<210> 894
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0893 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 894
tttatcagga cagcatcgga acgacaccaa cctaacattc ctaacttctc ata 53
<210> 895
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0894 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 895
cagcgaaact tgctttcgag gtgttgctaa taacattcct aacttctcat a 51
<210> 896
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0895 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 896
taaaacgagg tcaatcataa gggaaccgga tataacattc ctaacttctc ata 53
<210> 897
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0896 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 897
gcgcagacaa gaggcaaaag aatccctcag taacattcct aacttctcat a 51
<210> 898
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0897 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 898
ttcattacgt caggacgttg ggaaatgcag attaacattc ctaacttctc ata 53
<210> 899
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0898 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 899
ttataccacc aaatcaacgt aacgaacgag taacattcct aacttctcat a 51
<210> 900
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0899 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 900
acataacggg aatcgtcata aataaagcaa agtaacattc ctaacttctc ata 53
<210> 901
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0900 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 901
aatactgccc aaaaggaatt acgtggctca taacattcct aacttctcat a 51
<210> 902
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0901 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 902
cggattgcag agcttaattg ctgaaacgag tataacattc ctaacttctc ata 53
<210> 903
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0902 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 903
gatggcttat caaaaagatt aagagcgtcc taacattcct aacttctcat a 51
<210> 904
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0903 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 904
gatttagtca ataaagcctc agagaaccct cataacattc ctaacttctc ata 53
<210> 905
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0904 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 905
taaatgaatt ttctgtatgg gattaatttc tttaacattc ctaacttctc ata 53
<210> 906
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0905 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 906
aaacagcttt ttgcgggatc gtcaacacta aataacattc ctaacttctc ata 53
<210> 907
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0906 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 907
aaggccgctg ataccgatag ttgcgacgtt agtaacattc ctaacttctc ata 53
<210> 908
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0907 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 908
acactcatcc atgttactta gccgaaagct gctaacattc ctaacttctc ata 53
<210> 909
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0908 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 909
gacctgctct ttgaccccca gcgagggagt tataacattc ctaacttctc ata 53
<210> 910
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0909 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 910
tcattcagat gcgattttaa gaacaggcat agtaacattc ctaacttctc ata 53
<210> 911
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0910 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 911
attacctttg aataaggctt gcccaaatcc gctaacattc ctaacttctc ata 53
<210> 912
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0911 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 912
taagagcaaa tgtttagact ggataggaag cctaacattc ctaacttctc ata 53
<210> 913
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0912 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 913
aatagtaaac actatcataa ccctcattgt gataacattc ctaacttctc ata 53
<210> 914
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0913 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 914
cgaaagactt tgataagagg tcatatttcg cataacattc ctaacttctc ata 53
<210> 915
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0914 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 915
ttgctccttt caaatatcgc gtttgagggg gttaacattc ctaacttctc ata 53
<210> 916
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0915 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 916
aatggtcaac aggcaaggca aagagtaatg tgtaacattc ctaacttctc ata 53
<210> 917
<211> 52
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0916 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 917
tctaaagttt tgtcgtcttt ccagccgaca ataacattcc taacttctca ta 52
<210> 918
<211> 65
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0917 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 918
tgacaactcg ctgaggcttg cattatacca agcgcgatga taaataacat tcctaacttc 60
tcata 65
<210> 919
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0918 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 919
atattcggaa ccatcgccca cgcagagaag gataacattc ctaacttctc ata 53
<210> 920
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0919 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 920
tcatcgccaa caaagtacaa cggacgccag cataacattc ctaacttctc ata 53
<210> 921
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0920 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 921
gatggtttga acgagtagta aatttaccat tataacattc ctaacttctc ata 53
<210> 922
<211> 59
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0921 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 922
cgtttaccag acgacaaaga agttttgcca taattcgata acattcctaa cttctcata 59
<210> 923
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0922 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 923
cttttgcaga taaaaaccaa aataaagact cctaacattc ctaacttctc ata 53
<210> 924
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0923 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 924
gcttcaatca ggattagaga gttattttca taacattcct aacttctcat a 51
<210> 925
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0924 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 925
ccaacaggag cgaaccagac cggagccttt actaacattc ctaacttctc ata 53
<210> 926
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0925 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 926
tttggggata gtagtagcat taaaaggccg taacattcct aacttctcat a 51
<210> 927
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0926 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 927
tccacagaca gccctcatag ttagcgtaac gataacattc ctaacttctc ata 53
<210> 928
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0927 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 928
ttaggattgg ctgagactcc tcaataaccg attaacattc ctaacttctc ata 53
<210> 929
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0928 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 929
tattaagaag cggggttttg ctcgtagcat taacattcct aacttctcat a 51
<210> 930
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0929 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 930
ttgacaggcc accaccagag ccgcgatttg tataacattc ctaacttctc ata 53
<210> 931
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0930 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 931
caccagaaag gttgaggcag gtcatgaaag taacattcct aacttctcat a 51
<210> 932
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0931 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 932
gcaaggcctc accagtagca ccatgggctt gataacattc ctaacttctc ata 53
<210> 933
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0932 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 933
cagcaaaagg aaacgtcacc aatgagccgc taacattcct aacttctcat a 51
<210> 934
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0933 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 934
ttattacgaa gaactggcat gattgcgaga ggtaacattc ctaacttctc ata 53
<210> 935
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0934 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 935
atacccaaca gtatgttagc aaattagagc taacattcct aacttctcat a 51
<210> 936
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0935 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 936
agagagaaaa aaatgaaaat agcaagcaaa cttaacattc ctaacttctc ata 53
<210> 937
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0936 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 937
ttaacgtcta acataaaaac aggtaacgga taacattcct aacttctcat a 51
<210> 938
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0937 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 938
ccaatagctc atcgtaggaa tcatggcatc aataacattc ctaacttctc ata 53
<210> 939
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0938 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 939
tcaccagtac aaactacaac gcctagtacc agtaacattc ctaacttctc ata 53
<210> 940
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0939 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 940
gcggataacc tattattctg aaacagacga tttaacattc ctaacttctc ata 53
<210> 941
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0940 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 941
tttcggaagt gccgtcgaga gggtgagttt cgtaacattc ctaacttctc ata 53
<210> 942
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0941 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 942
ggccttgaag agccaccacc ctcagaaacc attaacattc ctaacttctc ata 53
<210> 943
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0942 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 943
ccaccctcta ttcacaaaca aatacctgcc tataacattc ctaacttctc ata 53
<210> 944
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0943 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 944
cgatagcatt gagccatttg ggaacgtaga aataacattc ctaacttctc ata 53
<210> 945
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0944 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 945
tcaccgacgc accgtaatca gtagcagaac cgtaacattc ctaacttctc ata 53
<210> 946
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0945 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 946
atacataccg aggaaacgca ataagaagcg cataacattc ctaacttctc ata 53
<210> 947
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0946 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 947
aaggaaacat aaaggtggca acattatcac cgtaacattc ctaacttctc ata 53
<210> 948
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0947 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 948
ttagacggcc aaataagaaa cgatagaagg cttaacattc ctaacttctc ata 53
<210> 949
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0948 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 949
atcccaatga gaattaactg aacagttacc agtaacattc ctaacttctc ata 53
<210> 950
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0949 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 950
tatccggtct catcgagaac aagcgacaaa agtaacattc ctaacttctc ata 53
<210> 951
<211> 52
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0950 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 951
aggaacccat gtaccgtaac acttgatata ataacattcc taacttctca ta 52
<210> 952
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0951 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 952
gtatagcaaa cagttaatgc ccaatcctca taacattcct aacttctcat a 51
<210> 953
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0952 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 953
gcccgtatcc ggaataggtg tatcagccca attaacattc ctaacttctc ata 53
<210> 954
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0953 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 954
ttaaagccag agccgccacc ctcgacagaa taacattcct aacttctcat a 51
<210> 955
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0954 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 955
gcctccctca gaatggaaag cgcagtaaca gttaacattc ctaacttctc ata 53
<210> 956
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0955 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 956
tcaagtttca ttaaaggtga atataaaaga taacattcct aacttctcat a 51
<210> 957
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0956 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 957
gaaattattg cctttagcgt cagaccggaa cctaacattc ctaacttctc ata 53
<210> 958
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0957 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 958
aacgcaaaga tagccgaaca aaccctgaac taacattcct aacttctcat a 51
<210> 959
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0958 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 959
aagtaagcag acaccacgga ataatattga cgtaacattc ctaacttctc ata 53
<210> 960
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0959 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 960
aaagtcacaa aataaacagc cagcgtttta taacattcct aacttctcat a 51
<210> 961
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0960 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 961
gccagttaga gggtaattga gcgctttaag aataacattc ctaacttctc ata 53
<210> 962
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0961 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 962
gcgaacctcc aagaacgggt atgacaataa taacattcct aacttctcat a 51
<210> 963
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0962 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 963
ccaccctcat tttcagggat agcaaccgta cttaacattc ctaacttctc ata 53
<210> 964
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0963 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 964
caggaggtgg ggtcagtgcc ttgagtctct gataacattc ctaacttctc ata 53
<210> 965
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0964 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 965
gttttaactt agtaccgcca cccagagcca taacattcct aacttctcat a 51
<210> 966
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0965 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 966
atttaccggg aaccagagcc accactgtag cgtaacattc ctaacttctc ata 53
<210> 967
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0966 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 967
aaatcacctt ccagtaagcg tcagtaataa taacattcct aacttctcat a 51
<210> 968
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0967 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 968
cgttttcaag ggagggaagg taaagtttat tttaacattc ctaacttctc ata 53
<210> 969
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0968 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 969
accgattgtc ggcattttcg gtcataatca taacattcct aacttctcat a 51
<210> 970
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0969 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 970
tgtcacaatc ttaccgaagc cctttaatat cataacattc ctaacttctc ata 53
<210> 971
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0970 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 971
aatagctatc aatagaaaat tcaacattca taacattcct aacttctcat a 51
<210> 972
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0971 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 972
gagagataga gcgtctttcc agaggttttg aataacattc ctaacttctc ata 53
<210> 973
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0972 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 973
acgctaacac ccacaagaat tgaaaatagc taacattcct aacttctcat a 51
<210> 974
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0973 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 974
gccttaaacc aatcaataat cggcacgcgc cttaacattc ctaacttctc ata 53
<210> 975
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0974 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 975
taaatcggga ttcccaattc tgcgatataa tgtaacattc ctaacttctc ata 53
<210> 976
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0975 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 976
aacgcaaaat cgatgaacgg taccggttga taacattcct aacttctcat a 51
<210> 977
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0976 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 977
aacaagaggg ataaaaattt ttagcataaa gctaacattc ctaacttctc ata 53
<210> 978
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0977 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 978
taatcagcgg attgaccgta atcgtaaccg taacattcct aacttctcat a 51
<210> 979
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0978 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 979
acaaacggaa aagccccaaa aacactggag cataacattc ctaacttctc ata 53
<210> 980
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0979 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 980
tgcatctttc ccagtcacga cggcctgcag taacattcct aacttctcat a 51
<210> 981
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0980 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 981
ccagggttgc cagtttgagg ggacccgtgg gataacattc ctaacttctc ata 53
<210> 982
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0981 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 982
gtcgacttcg gccaacgcgc ggggtttttc taacattcct aacttctcat a 51
<210> 983
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0982 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 983
ttaatgaact agaggatccc cggggggtaa cgtaacattc ctaacttctc ata 53
<210> 984
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0983 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 984
ttttcactca aagggcgaaa aaccatcacc taacattcct aacttctcat a 51
<210> 985
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0984 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 985
ctccaacgca gtgagacggg caaccagctg cataacattc ctaacttctc ata 53
<210> 986
<211> 52
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0985 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 986
caaatcaagt tttttggggt cgaaacgtgg ataacattcc taacttctca ta 52
<210> 987
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0986 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 987
aaattaagtt gaccattaga tacttttgcg taacattcct aacttctcat a 51
<210> 988
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0987 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 988
tatattttgt cattgcctga gagtggaaga tttaacattc ctaacttctc ata 53
<210> 989
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0988 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 989
gctatcagaa atgcaatgcc tgaattagca taacattcct aacttctcat a 51
<210> 990
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0989 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 990
gtataagcca acccgtcgga ttctgacgac agtaacattc ctaacttctc ata 53
<210> 991
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0990 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 991
gcgagtaaaa atatttaaat tgttacaaag taacattcct aacttctcat a 51
<210> 992
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0991 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 992
tatcggccgc aaggcgatta agtttaccga gctaacattc ctaacttctc ata 53
<210> 993
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0992 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 993
gatgtgcttc aggaagatcg cacaatgtga taacattcct aacttctcat a 51
<210> 994
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0993 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 994
tcgaattcgg gaaacctgtc gtgcagctga tttaacattc ctaacttctc ata 53
<210> 995
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0994 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 995
ttccagtcgt aatcatggtc ataaaagggg taacattcct aacttctcat a 51
<210> 996
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0995 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 996
gcccttcaga gtccactatt aaagggtgcc gttaacattc ctaacttctc ata 53
<210> 997
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0996 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 997
tggaacaacc gcctggccct gaggcccgct taacattcct aacttctcat a 51
<210> 998
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0997 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 998
aaagcactaa atcggaaccc taatccagtt taacattcct aacttctcat a 51
<210> 999
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0998 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 999
taaatcatat aacctgttta gctaaccttt aataacattc ctaacttctc ata 53
<210> 1000
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_0999 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1000
taggtaaact atttttgaga gatcaaacgt tataacattc ctaacttctc ata 53
<210> 1001
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1000 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1001
gagggtagga ttcaaaaggg tgagacatcc aataacattc ctaacttctc ata 53
<210> 1002
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1001 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1002
atattttggc tttcatcaac attatccagc cataacattc ctaacttctc ata 53
<210> 1003
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1002 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1003
tgtagccatt aaaattcgca ttaaatgccg gataacattc ctaacttctc ata 53
<210> 1004
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1003 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1004
gctttccgat tacgccagct ggcggctgtt tctaacattc ctaacttctc ata 53
<210> 1005
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1004 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1005
tcttcgctgc accgcttctg gtgcggcctt cctaacattc ctaacttctc ata 53
<210> 1006
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1005 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1006
ctgtgtgatt gcgttgcgct cactagagtt gctaacattc ctaacttctc ata 53
<210> 1007
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1006 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1007
cacattaaaa ttgttatccg ctcatgcggg cctaacattc ctaacttctc ata 53
<210> 1008
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1007 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1008
agcaagcgta gggttgagtg ttgtagggag cctaacattc ctaacttctc ata 53
<210> 1009
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1008 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1009
gcccgagagt ccacgctggt ttgcagctaa cttaacattc ctaacttctc ata 53
<210> 1010
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1009 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1010
cccgatttag agcttgacgg ggaaaaagaa tataacattc ctaacttctc ata 53
<210> 1011
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1010 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1011
ttctactacg cgagctgaaa aggttaccgc gctaacattc ctaacttctc ata 53
<210> 1012
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1011 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1012
gagacagcta gctgataaat taatttttgt taacattcct aacttctcat a 51
<210> 1013
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1012 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1013
caaccgtttc aaatcaccat caattcgagc cataacattc ctaacttctc ata 53
<210> 1014
<211> 65
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1013 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1014
taaatcaaaa taattcgcgt ctcggaaacc aggcaaaggg aaggtaacat tcctaacttc 60
tcata 65
<210> 1015
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1014 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1015
gccatcaagc tcatttttta accacaaatc cataacattc ctaacttctc ata 53
<210> 1016
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1015 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1016
caactgttgc gccattcgcc attcaaacat cataacattc ctaacttctc ata 53
<210> 1017
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1016 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1017
aagcctggta cgagccggaa gcatagatga tgtaacattc ctaacttctc ata 53
<210> 1018
<211> 59
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1017 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1018
cccagcaggc gaaaaatccc ttataaatca agccggcgta acattcctaa cttctcata 59
<210> 1019
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1018 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1019
tcggcaaatc ctgtttgatg gtggaccctc aataacattc ctaacttctc ata 53
<210> 1020
<211> 52
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1019 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1020
aacgtggcga gaaaggaagg gaaaccagta ataacattcc taacttctca ta 52
<210> 1021
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1020 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1021
ttttatttaa gcaaatcaga tattttttgt taacattcct aacttctcat a 51
<210> 1022
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1021 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1022
gtaataagtt aggcagaggc atttatgata tttaacattc ctaacttctc ata 53
<210> 1023
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1022 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1023
catgtaatag aatataaagt accaagccgt taacattcct aacttctcat a 51
<210> 1024
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1023 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1024
atcgcaagta tgtaaatgct gatgatagga actaacattc ctaacttctc ata 53
<210> 1025
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1024 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1025
tataactaac aaagaacgcg agaacgccaa taacattcct aacttctcat a 51
<210> 1026
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1025 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1026
agaaaacaaa gaagatgatg aaacaggctg cgtaacattc ctaacttctc ata 53
<210> 1027
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1026 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1027
ctgagcaaaa attaattaca ttttgggtta taacattcct aacttctcat a 51
<210> 1028
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1027 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1028
gcaattcaca tattcctgat tatcaaagtg tataacattc ctaacttctc ata 53
<210> 1029
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1028 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1029
attatcattc aatataatcc tgacaattac taacattcct aacttctcat a 51
<210> 1030
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1029 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1030
tcaatatcga acctcaaata tcaattccga aataacattc ctaacttctc ata 53
<210> 1031
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1030 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1031
accttgcttg gtcagttggc aaagagcgga taacattcct aacttctcat a 51
<210> 1032
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1031 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1032
taaaagggac attctggcca acaaagcatc taacattcct aacttctcat a 51
<210> 1033
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1032 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1033
gtaccgcaat tctaagaacg cgagtattat tttaacattc ctaacttctc ata 53
<210> 1034
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1033 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1034
gtaaagtaat cgccatattt aacaaaactt tttaacattc ctaacttctc ata 53
<210> 1035
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1034 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1035
aattgagaat tctgtccaga cgactaaacc aataacattc ctaacttctc ata 53
<210> 1036
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1035 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1036
tcaaatataa cctccggctt aggtaacaat tttaacattc ctaacttctc ata 53
<210> 1037
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1036 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1037
acctttttat tttagttaat ttcatagggc tttaacattc ctaacttctc ata 53
<210> 1038
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1037 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1038
catttgaagg cgaattattc atttttgttt ggtaacattc ctaacttctc ata 53
<210> 1039
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1038 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1039
cgcgcagatt acctttttta atgggagaga cttaacattc ctaacttctc ata 53
<210> 1040
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1039 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1040
attatactaa gaaaccacca gaagtcaaca gttaacattc ctaacttctc ata 53
<210> 1041
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1040 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1041
gcggaacatc tgaataatgg aaggtacaaa attaacattc ctaacttctc ata 53
<210> 1042
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1041 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1042
tgaaaggagc aaatgaaaaa tctagagata gataacattc ctaacttctc ata 53
<210> 1043
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1042 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1043
agccagcaat tgaggaaggt tatcatcatt tttaacattc ctaacttctc ata 53
<210> 1044
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1043 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1044
acccttctga cctgaaagcg taagacgctg agtaacattc ctaacttctc ata 53
<210> 1045
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1044 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1045
cttatcattc ccgacttgcg ggagcctaat tttaacattc ctaacttctc ata 53
<210> 1046
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1045 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1046
acaacatgcc aacgctcaac agtcttctga taacattcct aacttctcat a 51
<210> 1047
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1046 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1047
agtataaagt tcagctaatg cagatgtctt tctaacattc ctaacttctc ata 53
<210> 1048
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1047 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1048
cctaaatcaa aatcataggt ctaaacagta taacattcct aacttctcat a 51
<210> 1049
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1048 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1049
gaatttattt aatggtttga aatattctta cctaacattc ctaacttctc ata 53
<210> 1050
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1049 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1050
cataaatctt tgaataccaa gtgttagaac taacattcct aacttctcat a 51
<210> 1051
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1050 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1051
cctgattgca atatatgtga gtgatcaata gttaacattc ctaacttctc ata 53
<210> 1052
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1051 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1052
ctaccatagt ttgagtaaca tttaaaatat taacattcct aacttctcat a 51
<210> 1053
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1052 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1053
attttaaaat caaaattatt tgcacggatt cgtaacattc ctaacttctc ata 53
<210> 1054
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1053 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1054
ctttagggcc tgcaacagtg ccaatacgtg taacattcct aacttctcat a 51
<210> 1055
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1054 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1055
ttaacaccag cactaacaac taatcgttat tataacattc ctaacttctc ata 53
<210> 1056
<211> 52
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1055 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1056
gcacagacaa tatttttgaa tggggtcagt ataacattcc taacttctca ta 52
<210> 1057
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1056 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1057
tgtagaaatc aagattagtt gctcttacca taacattcct aacttctcat a 51
<210> 1058
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1057 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1058
gtttatcaat atgcgttata caaaccgacc gttaacattc ctaacttctc ata 53
<210> 1059
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1058 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1059
ttagtatcac aatagataag tccacgagca taacattcct aacttctcat a 51
<210> 1060
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1059 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1060
gtgataaaaa gacgctgaga agagataacc tttaacattc ctaacttctc ata 53
<210> 1061
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1060 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1061
cttagattta aggcgttaaa taaagcctgt taacattcct aacttctcat a 51
<210> 1062
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1061 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1062
gcttctgttc gggagaaaca ataacgtaaa actaacattc ctaacttctc ata 53
<210> 1063
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1062 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1063
cttttacaaa atcgtcgcta ttagcgatag taacattcct aacttctcat a 51
<210> 1064
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1063 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1064
agaaataaaa atcctttgcc cgaaagatta gataacattc ctaacttctc ata 53
<210> 1065
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1064 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1065
ctcgtattag aaattgcgta gatacagtac taacattcct aacttctcat a 51
<210> 1066
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1065 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1066
gccgtcaaaa aacagaggtg aggcctatta gttaacattc ctaacttctc ata 53
<210> 1067
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1066 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1067
cagaagatta gataatacat ttgtcgacaa taacattcct aacttctcat a 51
<210> 1068
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1067 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1068
ctttaatgcg cgaactgata gccccaccag taacattcct aacttctcat a 51
<210> 1069
<211> 52
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1068 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1069
agaaaggaac aactaaagga attcaaaaaa attaccatct ctcctaaact cg 52
<210> 1070
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1069 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1070
aggctccaga ggctttgagg acacgggtaa ttaccatctc tcctaaactc g 51
<210> 1071
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1070 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1071
acggctacaa aaggagcctt taatgtgaga atttaccatc tctcctaaac tcg 53
<210> 1072
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1071 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1072
aatacgtttg aaagaggaca gactgacctt ttaccatctc tcctaaactc g 51
<210> 1073
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1072 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1073
gaccaactaa tgccactacg aagggggtag cattaccatc tctcctaaac tcg 53
<210> 1074
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1073 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1074
catcaagtaa aacgaactaa cgagttgaga ttaccatctc tcctaaactc g 51
<210> 1075
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1074 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1075
tacgttaaag taatcttgac aagaaccgaa ctttaccatc tctcctaaac tcg 53
<210> 1076
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1075 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1076
tttaggacaa atgctttaaa caatcaggtc ttaccatctc tcctaaactc g 51
<210> 1077
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1076 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1077
atccccctat accacattca actagaaaaa tcttaccatc tctcctaaac tcg 53
<210> 1078
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1077 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1078
tttaccccaa catgttttaa atttccatat ttaccatctc tcctaaactc g 51
<210> 1079
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1078 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1079
ctgtagcttg actattatag tcagttcatt gattaccatc tctcctaaac tcg 53
<210> 1080
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1079 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1080
aacagttttg taccaaaaac attttatttc ttaccatctc tcctaaactc g 51
<210> 1081
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1080 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1081
acaactttca acagtttcag cggatgtatc ggttaccatc tctcctaaac tcg 53
<210> 1082
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1081 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1082
tttatcagga cagcatcgga acgacaccaa ccttaccatc tctcctaaac tcg 53
<210> 1083
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1082 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1083
cagcgaaact tgctttcgag gtgttgctaa ttaccatctc tcctaaactc g 51
<210> 1084
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1083 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1084
taaaacgagg tcaatcataa gggaaccgga tattaccatc tctcctaaac tcg 53
<210> 1085
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1084 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1085
gcgcagacaa gaggcaaaag aatccctcag ttaccatctc tcctaaactc g 51
<210> 1086
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1085 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1086
ttcattacgt caggacgttg ggaaatgcag atttaccatc tctcctaaac tcg 53
<210> 1087
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1086 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1087
ttataccacc aaatcaacgt aacgaacgag ttaccatctc tcctaaactc g 51
<210> 1088
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1087 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1088
acataacggg aatcgtcata aataaagcaa agttaccatc tctcctaaac tcg 53
<210> 1089
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1088 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1089
aatactgccc aaaaggaatt acgtggctca ttaccatctc tcctaaactc g 51
<210> 1090
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1089 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1090
cggattgcag agcttaattg ctgaaacgag tattaccatc tctcctaaac tcg 53
<210> 1091
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1090 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1091
gatggcttat caaaaagatt aagagcgtcc ttaccatctc tcctaaactc g 51
<210> 1092
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1091 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1092
gatttagtca ataaagcctc agagaaccct cattaccatc tctcctaaac tcg 53
<210> 1093
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1092 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1093
taaatgaatt ttctgtatgg gattaatttc ttttaccatc tctcctaaac tcg 53
<210> 1094
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1093 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1094
aaacagcttt ttgcgggatc gtcaacacta aattaccatc tctcctaaac tcg 53
<210> 1095
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1094 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1095
aaggccgctg ataccgatag ttgcgacgtt agttaccatc tctcctaaac tcg 53
<210> 1096
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1095 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1096
acactcatcc atgttactta gccgaaagct gcttaccatc tctcctaaac tcg 53
<210> 1097
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1096 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1097
gacctgctct ttgaccccca gcgagggagt tattaccatc tctcctaaac tcg 53
<210> 1098
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1097 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1098
tcattcagat gcgattttaa gaacaggcat agttaccatc tctcctaaac tcg 53
<210> 1099
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1098 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1099
attacctttg aataaggctt gcccaaatcc gcttaccatc tctcctaaac tcg 53
<210> 1100
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1099 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1100
taagagcaaa tgtttagact ggataggaag ccttaccatc tctcctaaac tcg 53
<210> 1101
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1100 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1101
aatagtaaac actatcataa ccctcattgt gattaccatc tctcctaaac tcg 53
<210> 1102
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1101 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1102
cgaaagactt tgataagagg tcatatttcg cattaccatc tctcctaaac tcg 53
<210> 1103
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1102 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1103
ttgctccttt caaatatcgc gtttgagggg gtttaccatc tctcctaaac tcg 53
<210> 1104
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1103 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1104
aatggtcaac aggcaaggca aagagtaatg tgttaccatc tctcctaaac tcg 53
<210> 1105
<211> 52
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1104 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1105
tctaaagttt tgtcgtcttt ccagccgaca attaccatct ctcctaaact cg 52
<210> 1106
<211> 65
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1105 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1106
tgacaactcg ctgaggcttg cattatacca agcgcgatga taaattacca tctctcctaa 60
actcg 65
<210> 1107
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1106 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1107
atattcggaa ccatcgccca cgcagagaag gattaccatc tctcctaaac tcg 53
<210> 1108
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1107 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1108
tcatcgccaa caaagtacaa cggacgccag cattaccatc tctcctaaac tcg 53
<210> 1109
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1108 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1109
gatggtttga acgagtagta aatttaccat tattaccatc tctcctaaac tcg 53
<210> 1110
<211> 59
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1109 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1110
cgtttaccag acgacaaaga agttttgcca taattcgatt accatctctc ctaaactcg 59
<210> 1111
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1110 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1111
cttttgcaga taaaaaccaa aataaagact ccttaccatc tctcctaaac tcg 53
<210> 1112
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1111 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1112
gcttcaatca ggattagaga gttattttca ttaccatctc tcctaaactc g 51
<210> 1113
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1112 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1113
ccaacaggag cgaaccagac cggagccttt acttaccatc tctcctaaac tcg 53
<210> 1114
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1113 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1114
tttggggata gtagtagcat taaaaggccg ttaccatctc tcctaaactc g 51
<210> 1115
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1114 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1115
tccacagaca gccctcatag ttagcgtaac gattaccatc tctcctaaac tcg 53
<210> 1116
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1115 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1116
ttaggattgg ctgagactcc tcaataaccg atttaccatc tctcctaaac tcg 53
<210> 1117
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1116 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1117
tattaagaag cggggttttg ctcgtagcat ttaccatctc tcctaaactc g 51
<210> 1118
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1117 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1118
ttgacaggcc accaccagag ccgcgatttg tattaccatc tctcctaaac tcg 53
<210> 1119
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1118 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1119
caccagaaag gttgaggcag gtcatgaaag ttaccatctc tcctaaactc g 51
<210> 1120
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1119 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1120
gcaaggcctc accagtagca ccatgggctt gattaccatc tctcctaaac tcg 53
<210> 1121
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1120 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1121
cagcaaaagg aaacgtcacc aatgagccgc ttaccatctc tcctaaactc g 51
<210> 1122
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1121 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1122
ttattacgaa gaactggcat gattgcgaga ggttaccatc tctcctaaac tcg 53
<210> 1123
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1122 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1123
atacccaaca gtatgttagc aaattagagc ttaccatctc tcctaaactc g 51
<210> 1124
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1123 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1124
agagagaaaa aaatgaaaat agcaagcaaa ctttaccatc tctcctaaac tcg 53
<210> 1125
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1124 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1125
ttaacgtcta acataaaaac aggtaacgga ttaccatctc tcctaaactc g 51
<210> 1126
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1125 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1126
ccaatagctc atcgtaggaa tcatggcatc aattaccatc tctcctaaac tcg 53
<210> 1127
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1126 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1127
tcaccagtac aaactacaac gcctagtacc agttaccatc tctcctaaac tcg 53
<210> 1128
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1127 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1128
gcggataacc tattattctg aaacagacga ttttaccatc tctcctaaac tcg 53
<210> 1129
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1128 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1129
tttcggaagt gccgtcgaga gggtgagttt cgttaccatc tctcctaaac tcg 53
<210> 1130
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1129 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1130
ggccttgaag agccaccacc ctcagaaacc atttaccatc tctcctaaac tcg 53
<210> 1131
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1130 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1131
ccaccctcta ttcacaaaca aatacctgcc tattaccatc tctcctaaac tcg 53
<210> 1132
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1131 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1132
cgatagcatt gagccatttg ggaacgtaga aattaccatc tctcctaaac tcg 53
<210> 1133
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1132 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1133
tcaccgacgc accgtaatca gtagcagaac cgttaccatc tctcctaaac tcg 53
<210> 1134
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1133 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1134
atacataccg aggaaacgca ataagaagcg cattaccatc tctcctaaac tcg 53
<210> 1135
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1134 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1135
aaggaaacat aaaggtggca acattatcac cgttaccatc tctcctaaac tcg 53
<210> 1136
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1135 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1136
ttagacggcc aaataagaaa cgatagaagg ctttaccatc tctcctaaac tcg 53
<210> 1137
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1136 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1137
atcccaatga gaattaactg aacagttacc agttaccatc tctcctaaac tcg 53
<210> 1138
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1137 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1138
tatccggtct catcgagaac aagcgacaaa agttaccatc tctcctaaac tcg 53
<210> 1139
<211> 52
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1138 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1139
aggaacccat gtaccgtaac acttgatata attaccatct ctcctaaact cg 52
<210> 1140
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1139 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1140
gtatagcaaa cagttaatgc ccaatcctca ttaccatctc tcctaaactc g 51
<210> 1141
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1140 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1141
gcccgtatcc ggaataggtg tatcagccca atttaccatc tctcctaaac tcg 53
<210> 1142
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1141 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1142
ttaaagccag agccgccacc ctcgacagaa ttaccatctc tcctaaactc g 51
<210> 1143
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1142 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1143
gcctccctca gaatggaaag cgcagtaaca gtttaccatc tctcctaaac tcg 53
<210> 1144
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1143 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1144
tcaagtttca ttaaaggtga atataaaaga ttaccatctc tcctaaactc g 51
<210> 1145
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1144 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1145
gaaattattg cctttagcgt cagaccggaa ccttaccatc tctcctaaac tcg 53
<210> 1146
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1145 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1146
aacgcaaaga tagccgaaca aaccctgaac ttaccatctc tcctaaactc g 51
<210> 1147
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1146 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1147
aagtaagcag acaccacgga ataatattga cgttaccatc tctcctaaac tcg 53
<210> 1148
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1147 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1148
aaagtcacaa aataaacagc cagcgtttta ttaccatctc tcctaaactc g 51
<210> 1149
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1148 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1149
gccagttaga gggtaattga gcgctttaag aattaccatc tctcctaaac tcg 53
<210> 1150
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1149 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1150
gcgaacctcc aagaacgggt atgacaataa ttaccatctc tcctaaactc g 51
<210> 1151
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1150 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1151
ccaccctcat tttcagggat agcaaccgta ctttaccatc tctcctaaac tcg 53
<210> 1152
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1151 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1152
caggaggtgg ggtcagtgcc ttgagtctct gattaccatc tctcctaaac tcg 53
<210> 1153
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1152 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1153
gttttaactt agtaccgcca cccagagcca ttaccatctc tcctaaactc g 51
<210> 1154
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1153 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1154
atttaccggg aaccagagcc accactgtag cgttaccatc tctcctaaac tcg 53
<210> 1155
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1154 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1155
aaatcacctt ccagtaagcg tcagtaataa ttaccatctc tcctaaactc g 51
<210> 1156
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1155 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1156
cgttttcaag ggagggaagg taaagtttat ttttaccatc tctcctaaac tcg 53
<210> 1157
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1156 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1157
accgattgtc ggcattttcg gtcataatca ttaccatctc tcctaaactc g 51
<210> 1158
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1157 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1158
tgtcacaatc ttaccgaagc cctttaatat cattaccatc tctcctaaac tcg 53
<210> 1159
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1158 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1159
aatagctatc aatagaaaat tcaacattca ttaccatctc tcctaaactc g 51
<210> 1160
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1159 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1160
gagagataga gcgtctttcc agaggttttg aattaccatc tctcctaaac tcg 53
<210> 1161
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1160 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1161
acgctaacac ccacaagaat tgaaaatagc ttaccatctc tcctaaactc g 51
<210> 1162
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1161 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1162
gccttaaacc aatcaataat cggcacgcgc ctttaccatc tctcctaaac tcg 53
<210> 1163
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1162 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1163
taaatcggga ttcccaattc tgcgatataa tgttaccatc tctcctaaac tcg 53
<210> 1164
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1163 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1164
aacgcaaaat cgatgaacgg taccggttga ttaccatctc tcctaaactc g 51
<210> 1165
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1164 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1165
aacaagaggg ataaaaattt ttagcataaa gcttaccatc tctcctaaac tcg 53
<210> 1166
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1165 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1166
taatcagcgg attgaccgta atcgtaaccg ttaccatctc tcctaaactc g 51
<210> 1167
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1166 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1167
acaaacggaa aagccccaaa aacactggag cattaccatc tctcctaaac tcg 53
<210> 1168
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1167 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1168
tgcatctttc ccagtcacga cggcctgcag ttaccatctc tcctaaactc g 51
<210> 1169
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1168 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1169
ccagggttgc cagtttgagg ggacccgtgg gattaccatc tctcctaaac tcg 53
<210> 1170
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1169 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1170
gtcgacttcg gccaacgcgc ggggtttttc ttaccatctc tcctaaactc g 51
<210> 1171
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1170 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1171
ttaatgaact agaggatccc cggggggtaa cgttaccatc tctcctaaac tcg 53
<210> 1172
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1171 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1172
ttttcactca aagggcgaaa aaccatcacc ttaccatctc tcctaaactc g 51
<210> 1173
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1172 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1173
ctccaacgca gtgagacggg caaccagctg cattaccatc tctcctaaac tcg 53
<210> 1174
<211> 52
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1173 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1174
caaatcaagt tttttggggt cgaaacgtgg attaccatct ctcctaaact cg 52
<210> 1175
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1174 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1175
aaattaagtt gaccattaga tacttttgcg ttaccatctc tcctaaactc g 51
<210> 1176
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1175 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1176
tatattttgt cattgcctga gagtggaaga ttttaccatc tctcctaaac tcg 53
<210> 1177
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1176 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1177
gctatcagaa atgcaatgcc tgaattagca ttaccatctc tcctaaactc g 51
<210> 1178
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1177 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1178
gtataagcca acccgtcgga ttctgacgac agttaccatc tctcctaaac tcg 53
<210> 1179
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1178 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1179
gcgagtaaaa atatttaaat tgttacaaag ttaccatctc tcctaaactc g 51
<210> 1180
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1179 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1180
tatcggccgc aaggcgatta agtttaccga gcttaccatc tctcctaaac tcg 53
<210> 1181
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1180 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1181
gatgtgcttc aggaagatcg cacaatgtga ttaccatctc tcctaaactc g 51
<210> 1182
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1181 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1182
tcgaattcgg gaaacctgtc gtgcagctga ttttaccatc tctcctaaac tcg 53
<210> 1183
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1182 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1183
ttccagtcgt aatcatggtc ataaaagggg ttaccatctc tcctaaactc g 51
<210> 1184
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1183 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1184
gcccttcaga gtccactatt aaagggtgcc gtttaccatc tctcctaaac tcg 53
<210> 1185
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1184 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1185
tggaacaacc gcctggccct gaggcccgct ttaccatctc tcctaaactc g 51
<210> 1186
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1185 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1186
aaagcactaa atcggaaccc taatccagtt ttaccatctc tcctaaactc g 51
<210> 1187
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1186 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1187
taaatcatat aacctgttta gctaaccttt aattaccatc tctcctaaac tcg 53
<210> 1188
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1187 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1188
taggtaaact atttttgaga gatcaaacgt tattaccatc tctcctaaac tcg 53
<210> 1189
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1188 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1189
gagggtagga ttcaaaaggg tgagacatcc aattaccatc tctcctaaac tcg 53
<210> 1190
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1189 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1190
atattttggc tttcatcaac attatccagc cattaccatc tctcctaaac tcg 53
<210> 1191
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1190 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1191
tgtagccatt aaaattcgca ttaaatgccg gattaccatc tctcctaaac tcg 53
<210> 1192
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1191 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1192
gctttccgat tacgccagct ggcggctgtt tcttaccatc tctcctaaac tcg 53
<210> 1193
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1192 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1193
tcttcgctgc accgcttctg gtgcggcctt ccttaccatc tctcctaaac tcg 53
<210> 1194
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1193 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1194
ctgtgtgatt gcgttgcgct cactagagtt gcttaccatc tctcctaaac tcg 53
<210> 1195
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1194 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1195
cacattaaaa ttgttatccg ctcatgcggg ccttaccatc tctcctaaac tcg 53
<210> 1196
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1195 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1196
agcaagcgta gggttgagtg ttgtagggag ccttaccatc tctcctaaac tcg 53
<210> 1197
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1196 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1197
gcccgagagt ccacgctggt ttgcagctaa ctttaccatc tctcctaaac tcg 53
<210> 1198
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1197 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1198
cccgatttag agcttgacgg ggaaaaagaa tattaccatc tctcctaaac tcg 53
<210> 1199
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1198 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1199
ttctactacg cgagctgaaa aggttaccgc gcttaccatc tctcctaaac tcg 53
<210> 1200
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1199 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1200
gagacagcta gctgataaat taatttttgt ttaccatctc tcctaaactc g 51
<210> 1201
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1200 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1201
caaccgtttc aaatcaccat caattcgagc cattaccatc tctcctaaac tcg 53
<210> 1202
<211> 65
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1201 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1202
taaatcaaaa taattcgcgt ctcggaaacc aggcaaaggg aaggttacca tctctcctaa 60
actcg 65
<210> 1203
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1202 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1203
gccatcaagc tcatttttta accacaaatc cattaccatc tctcctaaac tcg 53
<210> 1204
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1203 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1204
caactgttgc gccattcgcc attcaaacat cattaccatc tctcctaaac tcg 53
<210> 1205
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1204 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1205
aagcctggta cgagccggaa gcatagatga tgttaccatc tctcctaaac tcg 53
<210> 1206
<211> 59
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1205 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1206
cccagcaggc gaaaaatccc ttataaatca agccggcgtt accatctctc ctaaactcg 59
<210> 1207
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1206 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1207
tcggcaaatc ctgtttgatg gtggaccctc aattaccatc tctcctaaac tcg 53
<210> 1208
<211> 52
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1207 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1208
aacgtggcga gaaaggaagg gaaaccagta attaccatct ctcctaaact cg 52
<210> 1209
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1208 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1209
ttttatttaa gcaaatcaga tattttttgt ttaccatctc tcctaaactc g 51
<210> 1210
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1209 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1210
gtaataagtt aggcagaggc atttatgata ttttaccatc tctcctaaac tcg 53
<210> 1211
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1210 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1211
catgtaatag aatataaagt accaagccgt ttaccatctc tcctaaactc g 51
<210> 1212
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1211 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1212
atcgcaagta tgtaaatgct gatgatagga acttaccatc tctcctaaac tcg 53
<210> 1213
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1212 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1213
tataactaac aaagaacgcg agaacgccaa ttaccatctc tcctaaactc g 51
<210> 1214
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1213 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1214
agaaaacaaa gaagatgatg aaacaggctg cgttaccatc tctcctaaac tcg 53
<210> 1215
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1214 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1215
ctgagcaaaa attaattaca ttttgggtta ttaccatctc tcctaaactc g 51
<210> 1216
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1215 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1216
gcaattcaca tattcctgat tatcaaagtg tattaccatc tctcctaaac tcg 53
<210> 1217
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1216 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1217
attatcattc aatataatcc tgacaattac ttaccatctc tcctaaactc g 51
<210> 1218
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1217 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1218
tcaatatcga acctcaaata tcaattccga aattaccatc tctcctaaac tcg 53
<210> 1219
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1218 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1219
accttgcttg gtcagttggc aaagagcgga ttaccatctc tcctaaactc g 51
<210> 1220
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1219 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1220
taaaagggac attctggcca acaaagcatc ttaccatctc tcctaaactc g 51
<210> 1221
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1220 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1221
gtaccgcaat tctaagaacg cgagtattat ttttaccatc tctcctaaac tcg 53
<210> 1222
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1221 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1222
gtaaagtaat cgccatattt aacaaaactt ttttaccatc tctcctaaac tcg 53
<210> 1223
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1222 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1223
aattgagaat tctgtccaga cgactaaacc aattaccatc tctcctaaac tcg 53
<210> 1224
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1223 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1224
tcaaatataa cctccggctt aggtaacaat ttttaccatc tctcctaaac tcg 53
<210> 1225
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1224 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1225
acctttttat tttagttaat ttcatagggc ttttaccatc tctcctaaac tcg 53
<210> 1226
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1225 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1226
catttgaagg cgaattattc atttttgttt ggttaccatc tctcctaaac tcg 53
<210> 1227
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1226 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1227
cgcgcagatt acctttttta atgggagaga ctttaccatc tctcctaaac tcg 53
<210> 1228
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1227 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1228
attatactaa gaaaccacca gaagtcaaca gtttaccatc tctcctaaac tcg 53
<210> 1229
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1228 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1229
gcggaacatc tgaataatgg aaggtacaaa atttaccatc tctcctaaac tcg 53
<210> 1230
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1229 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1230
tgaaaggagc aaatgaaaaa tctagagata gattaccatc tctcctaaac tcg 53
<210> 1231
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1230 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1231
agccagcaat tgaggaaggt tatcatcatt ttttaccatc tctcctaaac tcg 53
<210> 1232
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1231 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1232
acccttctga cctgaaagcg taagacgctg agttaccatc tctcctaaac tcg 53
<210> 1233
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1232 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1233
cttatcattc ccgacttgcg ggagcctaat ttttaccatc tctcctaaac tcg 53
<210> 1234
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1233 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1234
acaacatgcc aacgctcaac agtcttctga ttaccatctc tcctaaactc g 51
<210> 1235
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1234 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1235
agtataaagt tcagctaatg cagatgtctt tcttaccatc tctcctaaac tcg 53
<210> 1236
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1235 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1236
cctaaatcaa aatcataggt ctaaacagta ttaccatctc tcctaaactc g 51
<210> 1237
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1236 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1237
gaatttattt aatggtttga aatattctta ccttaccatc tctcctaaac tcg 53
<210> 1238
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1237 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1238
cataaatctt tgaataccaa gtgttagaac ttaccatctc tcctaaactc g 51
<210> 1239
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1238 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1239
cctgattgca atatatgtga gtgatcaata gtttaccatc tctcctaaac tcg 53
<210> 1240
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1239 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1240
ctaccatagt ttgagtaaca tttaaaatat ttaccatctc tcctaaactc g 51
<210> 1241
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1240 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1241
attttaaaat caaaattatt tgcacggatt cgttaccatc tctcctaaac tcg 53
<210> 1242
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1241 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1242
ctttagggcc tgcaacagtg ccaatacgtg ttaccatctc tcctaaactc g 51
<210> 1243
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1242 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1243
ttaacaccag cactaacaac taatcgttat tattaccatc tctcctaaac tcg 53
<210> 1244
<211> 52
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1243 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1244
gcacagacaa tatttttgaa tggggtcagt attaccatct ctcctaaact cg 52
<210> 1245
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1244 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1245
tgtagaaatc aagattagtt gctcttacca ttaccatctc tcctaaactc g 51
<210> 1246
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1245 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1246
gtttatcaat atgcgttata caaaccgacc gtttaccatc tctcctaaac tcg 53
<210> 1247
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1246 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1247
ttagtatcac aatagataag tccacgagca ttaccatctc tcctaaactc g 51
<210> 1248
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1247 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1248
gtgataaaaa gacgctgaga agagataacc ttttaccatc tctcctaaac tcg 53
<210> 1249
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1248 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1249
cttagattta aggcgttaaa taaagcctgt ttaccatctc tcctaaactc g 51
<210> 1250
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1249 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1250
gcttctgttc gggagaaaca ataacgtaaa acttaccatc tctcctaaac tcg 53
<210> 1251
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1250 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1251
cttttacaaa atcgtcgcta ttagcgatag ttaccatctc tcctaaactc g 51
<210> 1252
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1251 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1252
agaaataaaa atcctttgcc cgaaagatta gattaccatc tctcctaaac tcg 53
<210> 1253
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1252 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1253
ctcgtattag aaattgcgta gatacagtac ttaccatctc tcctaaactc g 51
<210> 1254
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1253 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1254
gccgtcaaaa aacagaggtg aggcctatta gtttaccatc tctcctaaac tcg 53
<210> 1255
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1254 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1255
cagaagatta gataatacat ttgtcgacaa ttaccatctc tcctaaactc g 51
<210> 1256
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 订书钉链_1255 ,用于2D-DNA纳米结构
<400> 1256
ctttaatgcg cgaactgata gccccaccag ttaccatctc tcctaaactc g 51
<210> 1257
<211> 7249
<212> DNA
<213> 噬菌体 M13mp18
<220>
<223> 脚手架DNA p7249_tillibit.txt
<400> 1257
aatgctacta ctattagtag aattgatgcc accttttcag ctcgcgcccc aaatgaaaat 60
atagctaaac aggttattga ccatttgcga aatgtatcta atggtcaaac taaatctact 120
cgttcgcaga attgggaatc aactgttata tggaatgaaa cttccagaca ccgtacttta 180
gttgcatatt taaaacatgt tgagctacag cattatattc agcaattaag ctctaagcca 240
tccgcaaaaa tgacctctta tcaaaaggag caattaaagg tactctctaa tcctgacctg 300
ttggagtttg cttccggtct ggttcgcttt gaagctcgaa ttaaaacgcg atatttgaag 360
tctttcgggc ttcctcttaa tctttttgat gcaatccgct ttgcttctga ctataatagt 420
cagggtaaag acctgatttt tgatttatgg tcattctcgt tttctgaact gtttaaagca 480
tttgaggggg attcaatgaa tatttatgac gattccgcag tattggacgc tatccagtct 540
aaacatttta ctattacccc ctctggcaaa acttcttttg caaaagcctc tcgctatttt 600
ggtttttatc gtcgtctggt aaacgagggt tatgatagtg ttgctcttac tatgcctcgt 660
aattcctttt ggcgttatgt atctgcatta gttgaatgtg gtattcctaa atctcaactg 720
atgaatcttt ctacctgtaa taatgttgtt ccgttagttc gttttattaa cgtagatttt 780
tcttcccaac gtcctgactg gtataatgag ccagttctta aaatcgcata aggtaattca 840
caatgattaa agttgaaatt aaaccatctc aagcccaatt tactactcgt tctggtgttt 900
ctcgtcaggg caagccttat tcactgaatg agcagctttg ttacgttgat ttgggtaatg 960
aatatccggt tcttgtcaag attactcttg atgaaggtca gccagcctat gcgcctggtc 1020
tgtacaccgt tcatctgtcc tctttcaaag ttggtcagtt cggttccctt atgattgacc 1080
gtctgcgcct cgttccggct aagtaacatg gagcaggtcg cggatttcga cacaatttat 1140
caggcgatga tacaaatctc cgttgtactt tgtttcgcgc ttggtataat cgctgggggt 1200
caaagatgag tgttttagtg tattcttttg cctctttcgt tttaggttgg tgccttcgta 1260
gtggcattac gtattttacc cgtttaatgg aaacttcctc atgaaaaagt ctttagtcct 1320
caaagcctct gtagccgttg ctaccctcgt tccgatgctg tctttcgctg ctgagggtga 1380
cgatcccgca aaagcggcct ttaactccct gcaagcctca gcgaccgaat atatcggtta 1440
tgcgtgggcg atggttgttg tcattgtcgg cgcaactatc ggtatcaagc tgtttaagaa 1500
attcacctcg aaagcaagct gataaaccga tacaattaaa ggctcctttt ggagcctttt 1560
ttttggagat tttcaacgtg aaaaaattat tattcgcaat tcctttagtt gttcctttct 1620
attctcactc cgctgaaact gttgaaagtt gtttagcaaa atcccataca gaaaattcat 1680
ttactaacgt ctggaaagac gacaaaactt tagatcgtta cgctaactat gagggctgtc 1740
tgtggaatgc tacaggcgtt gtagtttgta ctggtgacga aactcagtgt tacggtacat 1800
gggttcctat tgggcttgct atccctgaaa atgagggtgg tggctctgag ggtggcggtt 1860
ctgagggtgg cggttctgag ggtggcggta ctaaacctcc tgagtacggt gatacaccta 1920
ttccgggcta tacttatatc aaccctctcg acggcactta tccgcctggt actgagcaaa 1980
accccgctaa tcctaatcct tctcttgagg agtctcagcc tcttaatact ttcatgtttc 2040
agaataatag gttccgaaat aggcaggggg cattaactgt ttatacgggc actgttactc 2100
aaggcactga ccccgttaaa acttattacc agtacactcc tgtatcatca aaagccatgt 2160
atgacgctta ctggaacggt aaattcagag actgcgcttt ccattctggc tttaatgagg 2220
atttatttgt ttgtgaatat caaggccaat cgtctgacct gcctcaacct cctgtcaatg 2280
ctggcggcgg ctctggtggt ggttctggtg gcggctctga gggtggtggc tctgagggtg 2340
gcggttctga gggtggcggc tctgagggag gcggttccgg tggtggctct ggttccggtg 2400
attttgatta tgaaaagatg gcaaacgcta ataagggggc tatgaccgaa aatgccgatg 2460
aaaacgcgct acagtctgac gctaaaggca aacttgattc tgtcgctact gattacggtg 2520
ctgctatcga tggtttcatt ggtgacgttt ccggccttgc taatggtaat ggtgctactg 2580
gtgattttgc tggctctaat tcccaaatgg ctcaagtcgg tgacggtgat aattcacctt 2640
taatgaataa tttccgtcaa tatttacctt ccctccctca atcggttgaa tgtcgccctt 2700
ttgtctttgg cgctggtaaa ccatatgaat tttctattga ttgtgacaaa ataaacttat 2760
tccgtggtgt ctttgcgttt cttttatatg ttgccacctt tatgtatgta ttttctacgt 2820
ttgctaacat actgcgtaat aaggagtctt aatcatgcca gttcttttgg gtattccgtt 2880
attattgcgt ttcctcggtt tccttctggt aactttgttc ggctatctgc ttacttttct 2940
taaaaagggc ttcggtaaga tagctattgc tatttcattg tttcttgctc ttattattgg 3000
gcttaactca attcttgtgg gttatctctc tgatattagc gctcaattac cctctgactt 3060
tgttcagggt gttcagttaa ttctcccgtc taatgcgctt ccctgttttt atgttattct 3120
ctctgtaaag gctgctattt tcatttttga cgttaaacaa aaaatcgttt cttatttgga 3180
ttgggataaa taatatggct gtttattttg taactggcaa attaggctct ggaaagacgc 3240
tcgttagcgt tggtaagatt caggataaaa ttgtagctgg gtgcaaaata gcaactaatc 3300
ttgatttaag gcttcaaaac ctcccgcaag tcgggaggtt cgctaaaacg cctcgcgttc 3360
ttagaatacc ggataagcct tctatatctg atttgcttgc tattgggcgc ggtaatgatt 3420
cctacgatga aaataaaaac ggcttgcttg ttctcgatga gtgcggtact tggtttaata 3480
cccgttcttg gaatgataag gaaagacagc cgattattga ttggtttcta catgctcgta 3540
aattaggatg ggatattatt tttcttgttc aggacttatc tattgttgat aaacaggcgc 3600
gttctgcatt agctgaacat gttgtttatt gtcgtcgtct ggacagaatt actttacctt 3660
ttgtcggtac tttatattct cttattactg gctcgaaaat gcctctgcct aaattacatg 3720
ttggcgttgt taaatatggc gattctcaat taagccctac tgttgagcgt tggctttata 3780
ctggtaagaa tttgtataac gcatatgata ctaaacaggc tttttctagt aattatgatt 3840
ccggtgttta ttcttattta acgccttatt tatcacacgg tcggtatttc aaaccattaa 3900
atttaggtca gaagatgaaa ttaactaaaa tatatttgaa aaagttttct cgcgttcttt 3960
gtcttgcgat tggatttgca tcagcattta catatagtta tataacccaa cctaagccgg 4020
aggttaaaaa ggtagtctct cagacctatg attttgataa attcactatt gactcttctc 4080
agcgtcttaa tctaagctat cgctatgttt tcaaggattc taagggaaaa ttaattaata 4140
gcgacgattt acagaagcaa ggttattcac tcacatatat tgatttatgt actgtttcca 4200
ttaaaaaagg taattcaaat gaaattgtta aatgtaatta attttgtttt cttgatgttt 4260
gtttcatcat cttcttttgc tcaggtaatt gaaatgaata attcgcctct gcgcgatttt 4320
gtaacttggt attcaaagca atcaggcgaa tccgttattg tttctcccga tgtaaaaggt 4380
actgttactg tatattcatc tgacgttaaa cctgaaaatc tacgcaattt ctttatttct 4440
gttttacgtg caaataattt tgatatggta ggttctaacc cttccattat tcagaagtat 4500
aatccaaaca atcaggatta tattgatgaa ttgccatcat ctgataatca ggaatatgat 4560
gataattccg ctccttctgg tggtttcttt gttccgcaaa atgataatgt tactcaaact 4620
tttaaaatta ataacgttcg ggcaaaggat ttaatacgag ttgtcgaatt gtttgtaaag 4680
tctaatactt ctaaatcctc aaatgtatta tctattgacg gctctaatct attagttgtt 4740
agtgctccta aagatatttt agataacctt cctcaattcc tttcaactgt tgatttgcca 4800
actgaccaga tattgattga gggtttgata tttgaggttc agcaaggtga tgctttagat 4860
ttttcatttg ctgctggctc tcagcgtggc actgttgcag gcggtgttaa tactgaccgc 4920
ctcacctctg ttttatcttc tgctggtggt tcgttcggta tttttaatgg cgatgtttta 4980
gggctatcag ttcgcgcatt aaagactaat agccattcaa aaatattgtc tgtgccacgt 5040
attcttacgc tttcaggtca gaagggttct atctctgttg gccagaatgt cccttttatt 5100
actggtcgtg tgactggtga atctgccaat gtaaataatc catttcagac gattgagcgt 5160
caaaatgtag gtatttccat gagcgttttt cctgttgcaa tggctggcgg taatattgtt 5220
ctggatatta ccagcaaggc cgatagtttg agttcttcta ctcaggcaag tgatgttatt 5280
actaatcaaa gaagtattgc tacaacggtt aatttgcgtg atggacagac tcttttactc 5340
ggtggcctca ctgattataa aaacacttct caggattctg gcgtaccgtt cctgtctaaa 5400
atccctttaa tcggcctcct gtttagctcc cgctctgatt ctaacgagga aagcacgtta 5460
tacgtgctcg tcaaagcaac catagtacgc gccctgtagc ggcgcattaa gcgcggcggg 5520
tgtggtggtt acgcgcagcg tgaccgctac acttgccagc gccctagcgc ccgctccttt 5580
cgctttcttc ccttcctttc tcgccacgtt cgccggcttt ccccgtcaag ctctaaatcg 5640
ggggctccct ttagggttcc gatttagtgc tttacggcac ctcgacccca aaaaacttga 5700
tttgggtgat ggttcacgta gtgggccatc gccctgatag acggtttttc gccctttgac 5760
gttggagtcc acgttcttta atagtggact cttgttccaa actggaacaa cactcaaccc 5820
tatctcgggc tattcttttg atttataagg gattttgccg atttcggaac caccatcaaa 5880
caggattttc gcctgctggg gcaaaccagc gtggaccgct tgctgcaact ctctcagggc 5940
caggcggtga agggcaatca gctgttgccc gtctcactgg tgaaaagaaa aaccaccctg 6000
gcgcccaata cgcaaaccgc ctctccccgc gcgttggccg attcattaat gcagctggca 6060
cgacaggttt cccgactgga aagcgggcag tgagcgcaac gcaattaatg tgagttagct 6120
cactcattag gcaccccagg ctttacactt tatgcttccg gctcgtatgt tgtgtggaat 6180
tgtgagcgga taacaatttc acacaggaaa cagctatgac catgattacg aattcgagct 6240
cggtacccgg ggatcctcta gagtcgacct gcaggcatgc aagcttggca ctggccgtcg 6300
ttttacaacg tcgtgactgg gaaaaccctg gcgttaccca acttaatcgc cttgcagcac 6360
atcccccttt cgccagctgg cgtaatagcg aagaggcccg caccgatcgc ccttcccaac 6420
agttgcgcag cctgaatggc gaatggcgct ttgcctggtt tccggcacca gaagcggtgc 6480
cggaaagctg gctggagtgc gatcttcctg aggccgatac tgtcgtcgtc ccctcaaact 6540
ggcagatgca cggttacgat gcgcccatct acaccaacgt gacctatccc attacggtca 6600
atccgccgtt tgttcccacg gagaatccga cgggttgtta ctcgctcaca tttaatgttg 6660
atgaaagctg gctacaggaa ggccagacgc gaattatttt tgatggcgtt cctattggtt 6720
aaaaaatgag ctgatttaac aaaaatttaa tgcgaatttt aacaaaatat taacgtttac 6780
aatttaaata tttgcttata caatcttcct gtttttgggg cttttctgat tatcaaccgg 6840
ggtacatatg attgacatgc tagttttacg attaccgttc atcgattctc ttgtttgctc 6900
cagactctca ggcaatgacc tgatagcctt tgtagatctc tcaaaaatag ctaccctctc 6960
cggcattaat ttatcagcta gaacggttga atatcatatt gatggtgatt tgactgtctc 7020
cggcctttct cacccttttg aatctttacc tacacattac tcaggcattg catttaaaat 7080
atatgagggt tctaaaaatt tttatccttg cgttgaaata aaggcttctc ccgcaaaagt 7140
attacagggt cataatgttt ttggtacaac cgatttagct ttatgctctg aggctttatt 7200
gcttaatttt gctaattctt tgccttgcct gtatgattta ttggatgtt 7249
<210> 1258
<211> 7308
<212> DNA
<213> 噬菌体 M13mp18
<220>
<223> 脚手架DNA p7308_NatChem2012.txt
<400> 1258
aatgctacta ctattagtag aattgatgcc accttttcag ctcgcgcccc aaatgaaaat 60
atagctaaac aggttattga ccatttgcga aatgtatcta atggtcaaac taaatctact 120
cgttcgcaga attgggaatc aactgttata tggaatgaaa cttccagaca ccgtacttta 180
gttgcatatt taaaacatgt tgagctacag cattatattc agcaattaag ctctaagcca 240
tccgcaaaaa tgacctctta tcaaaaggag caattaaagg tactctctaa tcctgacctg 300
ttggagtttg cttccggtct ggttcgcttt gaagctcgaa ttaaaacgcg atatttgaag 360
tctttcgggc ttcctcttaa tctttttgat gcaatccgct ttgcttctga ctataatagt 420
cagggtaaag acctgatttt tgatttatgg tcattctcgt tttctgaact gtttaaagca 480
tttgaggggg attcaatgaa tatttatgac gattccgcag tattggacgc tatccagtct 540
aaacatttta ctattacccc ctctggcaaa acttcttttg caaaagcctc tcgctatttt 600
ggtttttatc gtcgtctggt aaacgagggt tatgatagtg ttgctcttac tatgcctcgt 660
aattcctttt ggcgttatgt atctgcatta gttgaatgtg gtattcctaa atctcaactg 720
atgaatcttt ctacctgtaa taatgttgtt ccgttagttc gttttattaa cgtagatttt 780
tcttcccaac gtcctgactg gtataatgag ccagttctta aaatcgcata aggtaattca 840
caatgattaa agttgaaatt aaaccatctc aagcccaatt tactactcgt tctggtgttt 900
ctcgtcaggg caagccttat tcactgaatg agcagctttg ttacgttgat ttgggtaatg 960
aatatccggt tcttgtcaag attactcttg atgaaggtca gccagcctat gcgcctggtc 1020
tgtacaccgt tcatctgtcc tctttcaaag ttggtcagtt cggttccctt atgattgacc 1080
gtctgcgcct cgttccggct aagtaacatg gagcaggtcg cggatttcga cacaatttat 1140
caggcgatga tacaaatctc cgttgtactt tgtttcgcgc ttggtataat cgctgggggt 1200
caaagatgag tgttttagtg tattcttttg cctctttcgt tttaggttgg tgccttcgta 1260
gtggcattac gtattttacc cgtttaatgg aaacttcctc atgaaaaagt ctttagtcct 1320
caaagcctct gtagccgttg ctaccctcgt tccgatgctg tctttcgctg ctgagggtga 1380
cgatcccgca aaagcggcct ttaactccct gcaagcctca gcgaccgaat atatcggtta 1440
tgcgtgggcg atggttgttg tcattgtcgg cgcaactatc ggtatcaagc tgtttaagaa 1500
attcacctcg aaagcaagct gataaaccga tacaattaaa ggctcctttt ggagcctttt 1560
ttttggagat tttcaacgtg aaaaaattat tattcgcaat tcctttagtt gttcctttct 1620
attctcactc cgctgaaact gttgaaagtt gtttagcaaa atcccataca gaaaattcat 1680
ttactaacgt ctggaaagac gacaaaactt tagatcgtta cgctaactat gagggctgtc 1740
tgtggaatgc tacaggcgtt gtagtttgta ctggtgacga aactcagtgt tacggtacat 1800
gggttcctat tgggcttgct atccctgaaa atgagggtgg tggctctgag ggtggcggtt 1860
ctgagggtgg cggttctgag ggtggcggta ctaaacctcc tgagtacggt gatacaccta 1920
ttccgggcta tacttatatc aaccctctcg acggcactta tccgcctggt actgagcaaa 1980
accccgctaa tcctaatcct tctcttgagg agtctcagcc tcttaatact ttcatgtttc 2040
agaataatag gttccgaaat aggcaggggg cattaactgt ttatacgggc actgttactc 2100
aaggcactga ccccgttaaa acttattacc agtacactcc tgtatcatca aaagccatgt 2160
atgacgctta ctggaacggt aaattcagag actgcgcttt ccattctggc tttaatgagg 2220
atttatttgt ttgtgaatat caaggccaat cgtctgacct gcctcaacct cctgtcaatg 2280
ctggcggcgg ctctggtggt ggttctggtg gcggctctga gggtggtggc tctgagggtg 2340
gcggttctga gggtggcggc tctgagggag gcggttccgg tggtggctct ggttccggtg 2400
attttgatta tgaaaagatg gcaaacgcta ataagggggc tatgaccgaa aatgccgatg 2460
aaaacgcgct acagtctgac gctaaaggca aacttgattc tgtcgctact gattacggtg 2520
ctgctatcga tggtttcatt ggtgacgttt ccggccttgc taatggtaat ggtgctactg 2580
gtgattttgc tggctctaat tcccaaatgg ctcaagtcgg tgacggtgat aattcacctt 2640
taatgaataa tttccgtcaa tatttacctt ccctccctca atcggttgaa tgtcgccctt 2700
ttgtctttgg cgctggtaaa ccatatgaat tttctattga ttgtgacaaa ataaacttat 2760
tccgtggtgt ctttgcgttt cttttatatg ttgccacctt tatgtatgta ttttctacgt 2820
ttgctaacat actgcgtaat aaggagtctt aatcatgcca gttcttttgg gtattccgtt 2880
attattgcgt ttcctcggtt tccttctggt aactttgttc ggctatctgc ttacttttct 2940
taaaaagggc ttcggtaaga tagctattgc tatttcattg tttcttgctc ttattattgg 3000
gcttaactca attcttgtgg gttatctctc tgatattagc gctcaattac cctctgactt 3060
tgttcagggt gttcagttaa ttctcccgtc taatgcgctt ccctgttttt atgttattct 3120
ctctgtaaag gctgctattt tcatttttga cgttaaacaa aaaatcgttt cttatttgga 3180
ttgggataaa taatatggct gtttattttg taactggcaa attaggctct ggaaagacgc 3240
tcgttagcgt tggtaagatt caggataaaa ttgtagctgg gtgcaaaata gcaactaatc 3300
ttgatttaag gcttcaaaac ctcccgcaag tcgggaggtt cgctaaaacg cctcgcgttc 3360
ttagaatacc ggataagcct tctatatctg atttgcttgc tattgggcgc ggtaatgatt 3420
cctacgatga aaataaaaac ggcttgcttg ttctcgatga gtgcggtact tggtttaata 3480
cccgttcttg gaatgataag gaaagacagc cgattattga ttggtttcta catgctcgta 3540
aattaggatg ggatattatt tttcttgttc aggacttatc tattgttgat aaacaggcgc 3600
gttctgcatt agctgaacat gttgtttatt gtcgtcgtct ggacagaatt actttacctt 3660
ttgtcggtac tttatattct cttattactg gctcgaaaat gcctctgcct aaattacatg 3720
ttggcgttgt taaatatggc gattctcaat taagccctac tgttgagcgt tggctttata 3780
ctggtaagaa tttgtataac gcatatgata ctaaacaggc tttttctagt aattatgatt 3840
ccggtgttta ttcttattta acgccttatt tatcacacgg tcggtatttc aaaccattaa 3900
atttaggtca gaagatgaaa ttaactaaaa tatatttgaa aaagttttct cgcgttcttt 3960
gtcttgcgat tggatttgca tcagcattta catatagtta tataacccaa cctaagccgg 4020
aggttaaaaa ggtagtctct cagacctatg attttgataa attcactatt gactcttctc 4080
agcgtcttaa tctaagctat cgctatgttt tcaaggattc taagggaaaa ttaattaata 4140
gcgacgattt acagaagcaa ggttattcac tcacatatat tgatttatgt actgtttcca 4200
ttaaaaaagg taattcaaat gaaattgtta aatgtaatta attttgtttt cttgatgttt 4260
gtttcatcat cttcttttgc tcaggtaatt gaaatgaata attcgcctct gcgcgatttt 4320
gtaacttggt attcaaagca atcaggcgaa tccgttattg tttctcccga tgtaaaaggt 4380
actgttactg tatattcatc tgacgttaaa cctgaaaatc tacgcaattt ctttatttct 4440
gttttacgtg caaataattt tgatatggta ggttctaacc cttccattat tcagaagtat 4500
aatccaaaca atcaggatta tattgatgaa ttgccatcat ctgataatca ggaatatgat 4560
gataattccg ctccttctgg tggtttcttt gttccgcaaa atgataatgt tactcaaact 4620
tttaaaatta ataacgttcg ggcaaaggat ttaatacgag ttgtcgaatt gtttgtaaag 4680
tctaatactt ctaaatcctc aaatgtatta tctattgacg gctctaatct attagttgtt 4740
agtgctccta aagatatttt agataacctt cctcaattcc tttcaactgt tgatttgcca 4800
actgaccaga tattgattga gggtttgata tttgaggttc agcaaggtga tgctttagat 4860
ttttcatttg ctgctggctc tcagcgtggc actgttgcag gcggtgttaa tactgaccgc 4920
ctcacctctg ttttatcttc tgctggtggt tcgttcggta tttttaatgg cgatgtttta 4980
gggctatcag ttcgcgcatt aaagactaat agccattcaa aaatattgtc tgtgccacgt 5040
attcttacgc tttcaggtca gaagggttct atctctgttg gccagaatgt cccttttatt 5100
actggtcgtg tgactggtga atctgccaat gtaaataatc catttcagac gattgagcgt 5160
caaaatgtag gtatttccat gagcgttttt cctgttgcaa tggctggcgg taatattgtt 5220
ctggatatta ccagcaaggc cgatagtttg agttcttcta ctcaggcaag tgatgttatt 5280
actaatcaaa gaagtattgc tacaacggtt aatttgcgtg atggacagac tcttttactc 5340
ggtggcctca ctgattataa aaacacttct caggattctg gcgtaccgtt cctgtctaaa 5400
atccctttaa tcggcctcct gtttagctcc cgctctgatt ctaacgagga aagcacgtta 5460
tacgtgctcg tcaaagcaac catagtacgc gccctgtagc ggcgcattaa gcgcggcggg 5520
tgtggtggtt acgcgcagcg tgaccgctac acttgccagc gccctagcgc ccgctccttt 5580
cgctttcttc ccttcctttc tcgccacgtt cgccggcttt ccccgtcaag ctctaaatcg 5640
ggggctccct ttagggttcc gatttagtgc tttacggcac ctcgacccca aaaaacttga 5700
tttgggtgat ggttcacgta gtgggccatc gccctgatag acggtttttc gccctttgac 5760
gttggagtcc acgttcttta atagtggact cttgttccaa actggaacaa cactcaaccc 5820
tatctcgggc tattcttttg atttataagg gattttgccg atttcggaac caccatcaaa 5880
caggattttc gcctgctggg gcaaaccagc gtggaccgct tgctgcaact ctctcagggc 5940
caggcggtga agggcaatca gctgttgccc gtctcactgg tgaaaagaaa aaccaccctg 6000
gcgcccaata cgcaaaccgc ctctccccgc gcgttggccg attcattaat gcagctggca 6060
cgacaggttt cccgactgga aagcgggcag tgagcgcaac gcaattaatg tgagttagct 6120
cactcattag gcaccccagg ctttacactt tatgcttccg gctcgtatgt tgtgtggaat 6180
tgtgagcgga taacaatttc acacaggaaa cagctatgac catgattacg aattcgagct 6240
cggtacccgg ggatccttat acgggtacta gccatgcgta tacggtcgct agcggacttg 6300
cctcgctatc aaaggtctag agtcgacctg caggcatgca agcttggcac tggccgtcgt 6360
tttacaacgt cgtgactggg aaaaccctgg cgttacccaa cttaatcgcc ttgcagcaca 6420
tccccctttc gccagctggc gtaatagcga agaggcccgc accgatcgcc cttcccaaca 6480
gttgcgcagc ctgaatggcg aatggcgctt tgcctggttt ccggcaccag aagcggtgcc 6540
ggaaagctgg ctggagtgcg atcttcctga ggccgatact gtcgtcgtcc cctcaaactg 6600
gcagatgcac ggttacgatg cgcccatcta caccaacgtg acctatccca ttacggtcaa 6660
tccgccgttt gttcccacgg agaatccgac gggttgttac tcgctcacat ttaatgttga 6720
tgaaagctgg ctacaggaag gccagacgcg aattattttt gatggcgttc ctattggtta 6780
aaaaatgagc tgatttaaca aaaatttaat gcgaatttta acaaaatatt aacgtttaca 6840
atttaaatat ttgcttatac aatcttcctg tttttggggc ttttctgatt atcaaccggg 6900
gtacatatga ttgacatgct agttttacga ttaccgttca tcgattctct tgtttgctcc 6960
agactctcag gcaatgacct gatagccttt gtagatctct caaaaatagc taccctctcc 7020
ggcattaatt tatcagctag aacggttgaa tatcatattg atggtgattt gactgtctcc 7080
ggcctttctc acccttttga atctttacct acacattact caggcattgc atttaaaata 7140
tatgagggtt ctaaaaattt ttatccttgc gttgaaataa aggcttctcc cgcaaaagta 7200
ttacagggtc ataatgtttt tggtacaacc gatttagctt tatgctctga ggctttattg 7260
cttaattttg ctaattcttt gccttgcctg tatgatttat tggatgtt 7308
<210> 1259
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> DNA染料接头红色 3'修饰: Atto 647N
<400> 1259
gtgatgtagg tggtagagga a 21
<210> 1260
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> DNA染料接头绿色, 3'修饰: Atto 565
<400> 1260
tatgagaagt taggaatgtt a 21
<210> 1261
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> DNA染料接头蓝色, 3'修饰: Atto 488
<400> 1261
cgagtttagg agagatggta a 21
<210> 1262
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> DNA载体接头, 5'修饰: 生物素
<400> 1262
gaatcggtca cagtacaacc g 21
<210> 1263
<211> 68
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> DNA T1靶标接头3D
<400> 1263
taattttaaa agtctcgtat gtcagtatta acaccaccag cagccttgag acgatgttga 60
ccttaacc 68
<210> 1264
<211> 68
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> DNA T2靶标接头3D
<400> 1264
taattttaaa agtctcgtat gtcagtatta acaccaccag cagccttcat gtcaggagat 60
tttcagcc 68
<210> 1265
<211> 68
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> DNA T3靶标接头3D
<400> 1265
taattttaaa agtctcgtat gtcagtatta acaccaccag cagcctttac cctatctgag 60
tgagtagc 68
<210> 1266
<211> 61
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> DNA T1靶标接头2D
<400> 1266
ttgtgtcgtg acgagaaaca ccaaatttca actttaattt gagacgatgt tgaccttaac 60
c 61
<210> 1267
<211> 61
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> DNA T2靶标接头2D
<400> 1267
ttgtgtcgtg acgagaaaca ccaaatttca actttaattt catgtcagga gattttcagc 60
c 61
<210> 1268
<211> 61
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> DNA T3靶标接头2D
<400> 1268
ttgtgtcgtg acgagaaaca ccaaatttca actttaattt taccctatct gagtgagtag 60
c 61
<210> 1269
<211> 87
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> DNA 靶结构
<400> 1269
gctactcact cagatagggt atggctgaaa atctcctgac atgtggttaa ggtcaacatc 60
gtctctcggt tgtactgtga ccgattc 87

Claims (112)

1.一种用于检测靶结构的方法,包括:
a)形成识别结构,包括:
(i)靶结构,以及
(ii)至少两种3D DNA纳米结构,其中,每种所述3D DNA纳米结构包含一个或多个向内设置的荧光染料分子,其中,每种所述3D DNA纳米结构特异性地结合所述靶结构,并且,其中,所述3D DNA纳米结构与成对不同的靶结构的区域结合;
b)通过测量至少一个荧光信号检测所述靶结构,
其中,选择所述3D DNA纳米结构和荧光测量参数,使得在a)中形成的所述识别结构的至少一个测量的荧光信号与至少两种分离的3D DNA纳米结构在它们未结合在所述识别结构中时的每一种的荧光信号可区分。
2.根据权利要求1所述的方法,其中,所述靶结构包含或者是部分单链的多核苷酸,优选单链的多核苷酸,并且特别优选mRNA。
3.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其中,所述识别结构结合至载体,优选结合所述载体的第一表面,和/或,其中,所述方法还包括将所形成的识别结构与所述载体结合优选与所述载体的第一表面结合的步骤。
4.根据权利要求3所述的方法,其中,所述载体和/或所述载体的第一表面包括和/或由以下组成:玻璃表面和/或聚合物表面,其中,所述载体和/或所述载体的第一表面是任选钝化的,和/或,其中,所述载体包括聚合物网络,所述聚合物网络优选包含以下材料中的一种或其组合:生物聚合物、琼脂糖、胶原。
5.根据权利要求3或4所述的方法,其中,所述载体是显微镜芯片或盖玻片。
6.根据权利要求3至5所述的方法,其中,所述识别结构与所述载体和/或所述载体的第一表面的连接或即时结合是经由所述靶结构介导或即时介导的。
7.根据权利要求6所述的方法,其中,所述靶结构与所述载体和/或所述载体的第一表面结合或即时结合,其中,所述连接或即时结合由与所述靶结构特异性结合或即时结合的载体接头介导。
8.根据权利要求7所述的方法,其中,所述载体接头直接地结合或即时结合所述载体或所述载体的第一表面。
9.根据权利要求7或8所述的方法,其中,所述载体接头经由共价键或经由非共价键结合或即时结合至所述载体或所述载体的第一表面。
10.根据权利要求7至9中任一项所述的方法,其中,所述载体接头经由生物素链霉亲和素键结合或即时结合至所述载体或所述载体的第一表面,其中,所述载体接头包含生物素,并且所述载体和/或所述载体的第一表面包含链霉亲和素,或者,其中,所述载体接头包含链霉亲和素,并且所述载体和/或所述载体的第一表面包含生物素。
11.根据权利要求7至10中任一项所述的方法,其中,所述靶结构是权利要求2的靶结构,并且,其中,所述载体接头是寡核苷酸或多核苷酸,所述寡核苷酸或多核苷酸的核酸序列被设计为使其与权利要求2的所述靶结构的核酸序列的第一单链区段特异性结合,优选通过杂交。
12.根据权利要求7至10中任一项所述的方法,其中,所述靶结构是具有多(A)尾的mRNA,并且,其中,所述载体接头是寡核苷酸,所述寡核苷酸的核酸序列被设计为使得其与所述mRNA的多(A)尾特异性结合。
13.根据权利要求3至12中任一项所述的方法,其中,所述方法在a)之后且b)之前还包括用缓冲溶液洗涤所述载体和/或所述第一载体表面。
14.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其中,一种,优选多种,并且特别优选所有3D DNA纳米结构被设计成用于直接结合所述靶结构的相应区域并且直接结合所述靶分子。
15.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其中,至少一种,优选所有3D DNA纳米结构的特异性结合由分配给对应3D DNA纳米结构的靶标接头介导,其中,所述靶标接头或每个靶标接头设计成结合相应的DNA纳米结构和所述靶结构的相应区域,和/或,其中,所述靶标接头或每个靶标接头包含或者是优选寡核苷酸或多核苷酸,特别优选DNA。
16.根据权利要求15所述的方法,其中,所述3D DNA纳米结构包含至少一个单链的DNA区段,所述单链的DNA区段布置在所述纳米结构的外部处或外部上,并且被设计成使得其特异性结合相应的靶标接头。
17.根据权利要求15或16中任一项所述的方法,其中,一个或多个靶标接头各自包含单链的DNA区段,所述单链的DNA区段各自设计成使得其介导与相应的3D DNA纳米结构的所述特异性结合。
18.根据权利要求15或17中任一项所述的方法,其中,所述一个或多个靶标接头各自包含靶结合区段,所述靶结合区段各自设计成使得其介导与所述靶结构的相应区域的所述特异性结合。
19.根据权利要求18所述的方法,其中,所述靶结构是权利要求2所限定的所述靶结构,并且,其中,所述相应的靶结合区段包含与所述靶结构的一个单链区段特异性结合的核苷酸序列。
20.根据权利要求18所述的方法,其中,所述靶结构包含或者是蛋白质,并且,其中,所述相应的靶结合区段包含肽,优选抗体,其与所述靶结构的蛋白质特异性结合。
21.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其中,所述方法还包括提供优选水性样品溶液,所述水性样品溶液含有所述靶结构并且包含至少两种3D DNA纳米结构,并且任选地所述方法还包括提供所述载体、所述载体接头和/或所述靶标接头,其中,所述样品溶液优选包含细胞裂解物、从细胞悬浮液和/或组织中提取的核酸和/或mRNA。
22.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其中,所述方法还包括将包含所述所述靶结构的优选水性样品溶液与所述至少两种3D DNA纳米结构以及任选的所述载体接头和/或所述靶标接头混合,其中,所述样品溶液优选包含细胞裂解物、从细胞悬浮液和/或组织中提取的核酸和/或mRNA。
23.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其中,所述方法另外还适用于检测彼此不同的一种或多种其他靶结构,其中,所述不同的靶结构是成对不同的,并且,其中,所述方法还包括:
c)对于所述彼此不同的一种或多种其他靶结构中的每一个:形成分别分配的识别结构,其中,每种其他识别结构包括:
(i)分配的所述其他靶结构,以及
(ii)至少两种3D DNA纳米结构,其中,所述至少两种3D DNA纳米结构中的每一种包含一个或多个向内设置的荧光染料分子,并且,其中,所述至少两种3D DNA纳米结构中的每一种特异性地结合相应的其他靶结构,并且,其中,所述至少两种3D DNA纳米结构结合成对不同的相应的所述靶结构的区域;
其中,步骤b)还包括:
d)通过测量所述至少一个荧光信号检测所述一种或多种其他靶结构,
其中,选择所有3D DNA纳米结构和荧光测量参数,使得a)和c)中形成的所述识别结构的所述至少一个测量的荧光信号可与所有分离的3D DNA纳米结构在它们未与所述识别结构的一种结合时的荧光信号区分,并且使得所有形成的识别结构的测量的荧光信号是可彼此成对区分,其中,每种所述不同的靶结构可以存在多次,并且所述方法可以包括多次检测一种或多种所述不同的靶结构。
24.根据权利要求23所述的方法,其中,所述其他靶结构各自包含或者是部分单链的多核苷酸,优选单链的多核苷酸,并且特别优选mRNA。
25.根据权利要求23或24中任一项所述的方法,其中,至少一种识别结构,优选所有的识别结构与载体结合,优选与所述载体的第一表面结合,和/或,其中,所述方法还包括将至少一种,优选所有形成的识别结构与载体结合,优选与所述载体的第一表面结合的步骤。
26.根据权利要求25所述的方法,其中,所述载体的表面包含或者是玻璃表面和/或聚合物表面,并且,所述载体的表面任选地被钝化,和/或,其中,所述载体包含聚合物网络,所述聚合物网络优选包含以下材料中的一种或其组合:生物聚合物、琼脂糖、胶原蛋白。
27.根据权利要求25或26所述的方法,其中,所述载体是显微镜芯片或盖玻片。
28.根据权利要求25至27所述的方法,其中,与所述载体和/或所述载体的第一表面结合的/即时结合的至少一种所述识别结构,优选所有所述识别结构的连接或即时结合经由所述相应的靶结构介导或即时介导。
29.根据权利要求28所述的方法,其中,所述相应的靶结构与所述载体和/或所述载体的第一表面的连接或即时结合由相应分配的载体接头介导,所述载体接头特异性结合所述相应的靶结构。
30.根据权利要求29所述的方法,其中,所述相应的载体接头直接与所述载体或所述载体的第一表面结合或即时结合。
31.根据权利要求29或30所述的方法,其中,所述相应的载体接头经由共价键或经由非共价键与所述载体或所述载体的第一表面结合或即时结合。
32.根据权利要求29至31中任一项所述的方法,其中,所述相应的载体接头经由生物素-链霉亲和素键与所述载体或所述载体的第一表面结合或即时结合,其中,所述相应的载体接头包含生物素,和/或所述载体和所述载体的第一表面包含链霉亲和素,或者,其中所述相应的载体接头包含链霉亲和素,并且所述载体和/或所述载体的第一表面包含生物素。
33.根据权利要求29至32中任一项所述的方法,其中,所述相应的靶结构是权利要求2的靶结构,并且,其中所述相应的载体接头是寡核苷酸或多核苷酸,所述寡核苷酸或多核苷酸的核酸序列被设计为使得其特异性结合权利要求2的所述相应的靶结构的核酸序列的第一单链区段。
34.根据权利要求29至33中任一项所述的方法,其中,与所述载体和/或所述载体的第一表面结合的所述靶结构是具有多(A)尾的mRNA,并且,其中用于所述结合靶结构的所述相应的载体接头是寡核苷酸,所述寡核苷酸的核酸序列被设计为使得其特异性结合所述mRNA的所述多(A)尾。
35.根据权利要求23至34中任一项所述的方法,其中,a)和c)在一步中进行,优选同时进行。
36.根据权利要求25至35中任一项所述的方法,其中,所述方法在a)和c)之后且在b)之前还包括用缓冲溶液洗涤所述载体和/或第一载体表面。
37.根据权利要求23至26中任一项所述的方法,其中,一种所述3D DNA纳米结构,优选多种所述3D DNA纳米结构,并且特别优选所有所述3D DNA纳米结构被设计成用于直接结合所述相应的靶结构的相应区域并且直接结合所述靶分子。
38.根据权利要求23至37中任一项所述的方法,其中,至少一种所述3D DNA纳米结构,优选所有所述3D DNA纳米结构的所述特异性结合由相应分配的靶标接头介导,其中,所述靶标接头或每个靶标接头设计成结合所述相应的DNA纳米结构并结合所述相应的靶结构的相应的区域。
39.根据权利要求38所述的方法,其中,所述至少一种所述3D DNA纳米结构,优选所有所述3D DNA纳米结构包含至少一个单链的DNA区段,所述单链的DNA区段布置在所述纳米结构的外部处或外部上,并且被设计成使得其特异性结合所述相应的靶标接头。
40.根据权利要求38或39中任一项所述的方法,其中,所述一个或多个靶标接头各自包含单链的DNA区段,所述单链的DNA区段各自设计成使得其介导与所述相应的3D DNA纳米结构的所述特异性结合。
41.根据权利要求38至40中任一项所述的方法,其中,所述一个或多个靶标接头各自包含靶结合区段,所述靶结合区段各自设计成使得其介导与所述靶结构的相应区域的所述特异性结合。
42.根据权利要求23至41中任一项所述的方法,其中,所有靶结构存在于相同样品中并且优选地以样品溶液的形式提供。
43.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其中,使用荧光显微法测量所述至少一个荧光信号,优选通过以下技术中的一种或其组合来执行:点扫描、宽视场显微法、(旋转盘)共聚焦显微法;其中,优选进行交替激发(ALEX)或脉冲交错地使用脉冲光源的激发。
44.根据权利要求1、2、14至24、35或37至42中任一项所述的方法,其中,所述至少一个荧光信号的测量通过流式细胞术和/或荧光相关光谱法(FCS)进行,优选通过以下技术中的一种或其组合:共聚焦显微法、双光子光谱、落射荧光、光片显微法、TIRF;其中,优选进行交替激发(ALEX)或脉冲交错地使用脉冲光源的激发。
45.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其中,多次形成所述识别结构或所述识别结构中的至少一种或全部。
46.一种用于检测至少两种不同的靶结构的方法,其中,所述至少两种不同的靶结构可彼此成对区分,并且所述方法包括:
a)形成识别结构,所述识别结构包含针对所述至少两种不同的靶结构中的每一种的一种识别结构,包括:
(i)相应的靶结构,以及
(ii)至少两种3D DNA纳米结构,其中,所述至少两种3D DNA纳米结构中的每一种包含一个或多个向内设置的荧光染料分子,并且其中所述至少两种3D DNA纳米结构中的每一种特异性地结合所述相应的靶结构,并且其中所述至少两种3D DNA纳米结构与成对不同的所述相应的靶结构的区域结合;
b)通过测量至少一个荧光信号检测所述至少两种不同的靶结构,
其中,选择所有3D DNA纳米结构和荧光测量参数,使得a)中形成的所述识别结构的所述至少一个测量的荧光信号可与所有分离的3D DNA纳米结构在它们未在所述相应的识别结构的一种中结合时的所述荧光信号区分,并且使得针对各个靶结构形成的各个不同的识别结构的测量的所述荧光信号是可彼此成对区分的,其中,所述不同的靶结构的每一种能够多次存在,并且所述方法可以包括多次检测一种或多种所述不同的靶结构。
47.根据权利要求46所述的方法,其中,所述至少两种靶结构存在于相同样品中。
48.根据权利要求1所述的方法,其中,至少一种所述靶结构,优选每一种所述靶结构包含或者是部分单链的多核苷酸,优选单链的多核苷酸,并且特别优选mRNA。
49.根据权利要求46或48中任一项所述的方法,其中,至少一种识别结构,优选所有的识别结构与载体结合,优选与所述载体的第一表面结合,和/或其中所述方法还包括将至少一种形成的识别结构,优选所有形成的识别结构与载体结合,优选与所述载体的第一表面结合的步骤。
50.根据权利要求49所述的方法,其中,所述载体和/或所述载体的第一表面包含或由以下组成:玻璃表面和/或聚合物表面,并且任选地被钝化。
51.根据权利要求49或50所述的方法,其中,所述载体是显微镜芯片或盖玻片。
52.根据权利要求49至51所述的方法,其中,与所述载体和/或所述载体的第一表面结合或即时结合的一种所述识别结构,优选所有所述识别结构的连接或即时结合经由所述相应的靶结构介导或即时介导。
53.根据权利要求52所述的方法,其中,所述相应的靶结构与所述载体和/或所述载体的第一表面结合或即时结合,其中,所述连接或即时结合由载体接头介导,该载体接头被分配给所述相应的靶结构,并且特异性地结合所述相应的靶结构。
54.根据权利要求53所述的方法,其中,所述相应的载体接头直接与所述载体或所述载体的第一表面结合或即时结合。
55.根据权利要求53或54所述的方法,其中,所述相应的载体接头经由共价键或经由非共价键与所述载体或所述载体的第一表面结合或即时结合。
56.根据权利要求53至55中任一项所述的方法,其中,所述相应的载体接头经由生物素-链霉亲和素键与所述载体或所述载体的第一表面结合或即时结合,其中,所述相应的载体接头包含生物素,并且所述载体和所述载体的第一表面包含链霉亲和素,或者,其中,所述相应的载体接头包含链霉亲和素,并且所述载体和/或所述载体的第一表面包含生物素。
57.根据权利要求53至56中任一项所述的方法,其中,所述相应的靶结构是权利要求2的靶结构,并且,其中,所述相应的载体接头是寡核苷酸,所述寡核苷酸的核酸序列被设计为使得其特异性结合权利要求2的所述相应的靶结构的核酸序列的第一单链区段。
58.根据权利要求53至57中任一项所述的方法,其中,与所述载体和/或所述载体的第一表面结合的所述靶结构是具有多(A)尾的mRNA,并且其中用于所述结合靶结构的所述相应的载体接头是寡核苷酸,所述寡核苷酸的核酸序列被设计为使得其与所述mRNA的多(A)尾特异性结合。
59.根据权利要求49至58中任一项所述的方法,其中,所述方法在a)之后且在b)之前的还包括用缓冲溶液洗涤所述载体和/或所述第一载体表面。
60.根据权利要求46至59中任一项所述的方法,其中,一种所述3D DNA纳米结构,优选多种所述3D DNA纳米结构,并且特别优选所有所述3D DNA纳米结构被设计成用于与所述相应的靶结构的相应区域直接结合并且直接与所述靶分子结合。
61.根据权利要求46至60中任一项所述的方法,其中,至少一种所述3D DNA纳米结构,优选所有所述3D DNA纳米结构的所述特异性结合由相应分配的靶标接头介导,其中,所述靶标接头或每种所述靶标接头设计成与所述相应的DNA纳米结构结合并与所述相应的靶结构的相应的区域结合。
62.根据权利要求61所述的方法,其中,所述至少一种所述3D DNA纳米结构,优选所有所述3D DNA纳米结构包含至少一个单链的DNA区段,所述单链的DNA区段向内设置,并且被设计成使得其与所述相应的靶标接头特异性结合。
63.根据权利要求61或62中任一项所述的方法,其中,一个或多个靶标接头各自包含单链的DNA区段,所述单链的DNA区段各自设计成使得其介导与相应的3D DNA纳米结构的所述特异性结合。
64.根据权利要求61至63中任一项所述的方法,其中,所述一个或多个靶标接头各自包含靶结合区段,所述靶结合区段各自设计成使得其介导与所述相应的靶结构的相应区域的所述特异性结合。
65.根据权利要求64所述的方法,其中,所述至少两种靶结构中的第一种是如权利要求48所限定的所述靶结构,并且其中与所述第一种靶结构结合的所述靶结合接头的靶结合区段包含核苷酸序列,所述核苷酸序列与所述第一种靶结构的一个单链区段特异性结合。
66.根据权利要求65所述的方法,其中,权利要求63的特征还适用于所有其他靶结构和所述相应的靶结合接头的相应的靶结合区段。
67.根据权利要求64所述的方法,其中,所述至少两种靶结构中的第一种包括或是蛋白质,并且其中与所述第一种靶结构结合的所述靶结合接头的靶结合区段包括肽,优选抗体,其中所述肽与所述第一种靶结构特异性结合。
68.根据权利要求67所述的方法,其中,权利要求63的特征还适用于所有其他靶结构和所述相应的靶结合接头的相应的靶结合区段。
69.根据权利要求46至68中任一项所述的方法,其中,所述方法还包括提供样品溶液,所述样品溶液包含至少两种靶结构并且包含至少两种3D DNA纳米结构,并且所述方法任选地还包括提供所述载体、所述载体接头和/或所述靶标接头。
70.根据权利要求46至69中任一项所述的方法,其中,所述方法还包括将包含所述至少两种靶结构的样品溶液与所述至少两种3D DNA纳米结构以及任选的所述载体接头和/或所述靶标接头混合。
71.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其中,测量至少一个荧光信号包括:
e)通过使用荧光显微镜,优选以落射荧光、TIRF、光片和/或共聚焦显微法创建包含由样品截面发射的荧光信号的数据的数据集;
并且其中所述靶结构和/或所述一种或多种其他靶结构的所述检测包括:
f)识别包含在所述数据集中的一个或多个数据,其表示所述识别结构中的一种的所述荧光信号。
72.根据权利要求71所述的方法,其中,步骤e)包括:
记录包含所述样品截面的荧光数据的至少一个图像文件。
73.根据权利要求71或72所述的方法,其中,步骤f)中的所述识别包括以下步骤:
f1)读出数据和/或图像元素的颜色和/或强度信息;以及
f2)将所述数据和/或图像元素的所述颜色和/或强度信息与代表所述识别结构的颜色和/或强度信息进行比较。
74.根据权利要求73所述的方法,其中,步骤f)中的所述识别包括以下步骤:
f1)读出数据和/或图像元素的颜色和/或强度信息;以及
f2)将所述数据和/或图像元素的所述颜色和/或强度信息与代表所述识别结构的颜色和/或强度信息进行比较。
75.根据权利要求73或74所述的方法,其中,针对所述各个不同的靶结构形成的所述识别结构的荧光信号不同于所有分离3D DNA纳米结构在它们未与识别结构中的一种结合时的所述荧光信号,并且,针对所述各个不同靶结构形成的所述识别结构的荧光信号成对不同,在其中所述对应的荧光信号包括颜色和/或强度信息的可区分的不同组合。
76.根据权利要求75所述的方法,其中,在所述3D DNA纳米结构中使用了可彼此区分的k个强度水平和/或可彼此区分的m个颜色水平,其中优选地k个强度水平的每一个由强度分布形成,并且其中所述k个强度分布优选地在统计上是可彼此区分的,和/或其中优选地所述m个颜色水平中的每一个由颜色分布形成,并且其中所述m个颜色分布优选地在统计上是可彼此区分的,其中相邻分布的相应重叠优选低于30%,更优选低于10%,甚至更优选低于5%,特别优选低于2%,并且非常特别优选低于1%。
77.根据权利要求76所述的方法,其中,k>2,优选k>3,更优选k>4,甚至更优选k>5,特别优选k>6。
78.根据权利要求76或77所述的方法,其中,m>2,优选m>3,更优选m>4,甚至更优选m>5,特别优选m>6。
79.根据权利要求73至78中任一项所述的方法,其中,步骤f1)包括以下步骤和技术中的一个或其组合:确定所述图像元素的平均值,确定所述图像元素的最大值,计算累积梯度,计算一个或多个统计矩,诸如,例如,所述图像元素中像素的变化、变异系数、Fano因子;和/或,其中步骤f2)基于聚类方法,优选DBSCAN(有噪声应用的基于密度的空间聚类)来进行;和/或,其中步骤f1)和/或f2)基于概率观察,优选地通过考虑贝叶斯定理。
80.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其中,所述方法包括:
将含有所述靶结构的溶液引入微流体系统;以及
测量包含在所述微流体系统中的所述溶液的至少一个荧光信号。
81.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其中,所述方法包括:
在微流体系统中形成所述靶结构;以及
测量包含在所述微流体系统中的所述溶液的至少一个荧光信号。
82.一种3D DNA纳米结构,所述3D DNA纳米结构上附连有至少一个荧光染料分子,其中,所述3D DNA纳米结构的形状防止当接近其上附连有至少一个荧光染料分子的第二3DDNA纳米结构时,两3D DNA纳米结构的荧光染料分子显著相互作用。
83.根据权利要求82所述的3D DNA纳米结构,其中,所述相互作用包括猝灭和/或FRET。
84.根据权利要求82或83所述的3D DNA纳米结构,其中,至少两个荧光染料分子附连在所述3D DNA纳米结构上,并且其中所述至少两个荧光染料分子之间的距离成对地大于它们显著相互作用的距离。
85.根据权利要求82至84中任一项所述的3D DNA纳米结构,其中,所述3D DNA纳米结构基本上形成为中空圆柱体,并且,其中,所述至少一个荧光染料分子或所述至少两个荧光染料分子附连在所述圆柱体DNA纳米结构内侧。
86.一种3D DNA纳米结构,具有腔和至少一个向内设置的荧光染料分子的,其中,所述至少一个向内设置的荧光染料分子与3D DNA纳米结构的边缘的距离为至少2nm,优选至少3nm,并且,特别优选至少5nm。
87.根据权利要求86所述的3D DNA纳米结构,其中,所述3D DNA纳米结构包括至少两个向内设置的荧光染料分子,并且,其中,所述至少两个向内设置的荧光染料分子的距离为至少2nm,优选至少5nm,并且,特别优选至少9nm。
88.根据权利要求82至87中任一项所述的3D DNA纳米结构,其中,所述3D DNA纳米结构基本上形成为椭圆形中空圆柱体,优选为圆形中空圆柱体。
89.根据权利要求88所述的3D DNA纳米结构,其中,所述中空圆柱体是圆形圆柱体并且具有至少为5nm的内半径,优选30nm至60nm的内半径,特别优选60nm的内半径,和/或至多200nm的高度,优选30nm至60nm的高度,特别优选30nm的高度。
90.根据权利要求88至89中任一项所述的3D DNA纳米结构,其中,所述中空圆柱体的壁厚度为至少2nm,优选2nm至7nm,特别优选5nm,和/或,其中,所述中空圆柱体包含具有螺旋直径的DNA螺旋,并且,其中,所述壁厚度为至少一个螺旋直径,优选至少两个螺旋直径,和/或,其中,壁厚度为至多四个螺旋直径,优选至多三个螺旋直径。
91.根据权利要求82至90中任一项所述的3D DNA纳米结构,其中,所述3D DNA纳米结构包括至少3000个碱基,优选5000-50000个碱基,特别优选10000-11000个碱基的单链的DNA脚手架链,其中,所述DNA脚手架链优选为圆形。
92.根据权利要求91所述的3D DNA纳米结构,其中,所述3D DNA纳米结构还包括多个订书钉链,优选包含100至500个订书钉链,每个订书钉链具有优选30至100个碱基。
93.根据权利要求92所述的3D DNA纳米结构,其中,所述向内设置的荧光染料分子中的一个与订书钉链的向内设置的区段结合,优选其中每个向内设置的荧光染料分子与订书钉链的相应的向内设置的区段结合。
94.根据权利要求91至93中任一项所述的3D DNA纳米结构,所述3D DNA纳米结构还包括至少一种向内设置的单链的染料接头DNA寡聚体,所述单链的染料接头DNA寡聚体被设计为使得其特异性结合所述脚手架链的向内设置的单链序列区段或所述订书钉链中的一个,并且,其中,所述至少一种染料接头DNA寡聚体包含一种所述向内设置的染料分子。
95.根据权利要求94所述的3D DNA纳米结构,其中,所述订书钉链的向内设置的单链序列区段是突出端,所述突出端向内设置并且所述突出端对于所述3D DNA纳米结构的组装是不需要的。
96.根据权利要求82至95中任一项所述的3D DNA纳米结构,其中,所述3D DNA纳米结构包括特异性结合靶结构,优选结合多核苷酸靶结构,特别优选结合单链多核苷酸靶结构的单链DNA区段。
97.根据权利要求82至96中任一项所述的3D DNA纳米结构,其中,所述3D DNA纳米结构还包括至少一个靶标接头,其中,所述靶标接头可介导与靶结构的所述特异性结合。
98.根据权利要求97所述的3D DNA纳米结构,其中,所述靶标接头包含第一单链多核苷酸序列,并且,其中,所述第一单链多核苷酸序列结合所述3D DNA纳米结构的单链序列区段,优选结合所述脚手架链的单链序列区段或所述订书钉链中的一个,并且特别优选结合所述订书钉链中的一个的单链序列区段。
99.根据权利要求97或98所述的3D DNA纳米结构,其中,所述靶标接头还包含可以特异性结合靶结构的靶结合区段。
100.根据权利要求99所述的3D DNA纳米结构,其中,所述靶结合区段包含或者是第二单链多核苷酸序列,并且其中所述靶结构包含单链多核苷酸,优选mRNA。
101.根据权利要求99所述的3D DNA纳米结构,其中,所述靶结合区段包含特异性结合所述靶结构的蛋白质,优选抗体或抗体的抗体结合片段。
102.根据权利要求97至101中任一项所述的3D DNA纳米结构,其中,所述靶标接头,优选至少所述靶结合区段是向外指向的。
103.根据权利要求82至102中任一项所述的3D DNA纳米结构,其中,所述3D纳米结构不包含向外定位的荧光染料分子。
104.权利要求82至103中任一项的所述3D DNA纳米结构用于权利要求1至81中任一项的方法的用途。
105.一种组,包含多种权利要求82至103中任一项所述的3D DNA纳米结构,其中,所述组包含彼此不同的N种3D DNA纳米结构,并且其中所述组的N种3D DNA纳米结构由于荧光染料分子彼此成对不同。
106.根据权利要求105所述的组,其中,所述彼此不同的N种3D DNA纳米结构包含不同数量的荧光染料分子和/或不同的荧光染料分子,使得所述组的N种3D DNA纳米结构彼此不同,能够产生可彼此区分的k个强度水平和/或可彼此区分的m个颜色水平。
107.根据权利要求106所述的组,其中,所述彼此不同的N种3D DNA纳米结构的至少一部分多次包含在所述组中,使得所述k个强度水平中的每一个由强度分布形成,并且,其中,所述k个强度分布优选在统计上是可彼此区分的。
108.根据权利要求106或107所述的组,其中,所述彼此不同的N种3D DNA纳米结构的至少一部分多次包含在所述组中,使得所述m个颜色水平中的每一个由颜色分布形成,并且,其中,所述m个颜色分布优选在统计上是可彼此区分的。
109.根据权利要求107或108所述的组,其中,相邻分布的所述重叠低于30%,优选低于10%,更优选低于5%,甚至更优选低于2%,并且特别优选低于1%。
110.根据权利要求106至109中任一项所述的组,其中,k>2,优选k>3,更优选k>4,甚至更优选k>5,特别优选k>6。
111.根据权利要求106至110中任一项所述的组,其中,m>2,优选m>3,更优选m>4,甚至更优选m>5,特别优选m>6。
112.权利要求105至111中任一项所述的组用于权利要求1至81中任一项的方法的用途。
CN201780049976.XA 2016-06-15 2017-06-14 使用dna纳米技术的单分子检测或定量 Pending CN109563539A (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE102016007270 2016-06-15
DE102016007270.9 2016-06-15
PCT/EP2017/064634 WO2017216270A1 (de) 2016-06-15 2017-06-14 Einzelmolekülnachweis bzw. -quantifizierung durch dna-nanotechnologie

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN109563539A true CN109563539A (zh) 2019-04-02

Family

ID=59313194

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201780049976.XA Pending CN109563539A (zh) 2016-06-15 2017-06-14 使用dna纳米技术的单分子检测或定量

Country Status (5)

Country Link
US (1) US11513076B2 (zh)
EP (1) EP3472351B1 (zh)
CN (1) CN109563539A (zh)
DK (1) DK3472351T3 (zh)
WO (1) WO2017216270A1 (zh)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111638330A (zh) * 2020-06-10 2020-09-08 青岛农业大学 检测鼠伤寒沙门氏菌的生物传感器及其应用
CN111754040A (zh) * 2020-06-23 2020-10-09 邢冠南 一种基于用户需求的信息处理推送方法

Families Citing this family (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8503825B2 (en) * 2004-05-06 2013-08-06 Christopher L. Kavanau Method and system for aligning and classifying images
CN115876735A (zh) * 2017-04-13 2023-03-31 豪夫迈·罗氏有限公司 荧光图像中靶分子密度的确定
US20180340217A1 (en) * 2017-05-19 2018-11-29 Brookhaven Science Associates, Llc Methods for isothermal molecular amplification with nanoparticle-based reactions
EP3438649B1 (en) * 2017-07-31 2020-03-11 Vestel Elektronik Sanayi ve Ticaret A.S. Identification tag and method of identifying an object
WO2019236549A1 (en) * 2018-06-08 2019-12-12 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Near infra-red light sheet microscopy through scattering tissues
US20220333216A1 (en) * 2019-06-03 2022-10-20 Arizona Board Of Regents On Behalf Of Arizona State University Selective detection of different dengue virus rna serotypes using tandem toehold-mediated displacement reactions
EP4211508A1 (en) * 2020-09-14 2023-07-19 Singular Genomics Systems, Inc. Methods and systems for multidimensional imaging
CN113514429B (zh) * 2021-03-08 2022-11-18 复旦大学 一种dna纳米结构标记细胞目的蛋白的荧光染色方法
WO2022262941A1 (en) 2021-06-14 2022-12-22 Mbiomics Gmbh System and method for performing a microbiome-analysis
US20230227892A1 (en) 2022-01-14 2023-07-20 Mbiomics Gmbh Method of Determining a Quantitative Fingerprint of a Subset of Bacteria in a Person's Gastrointestinal Microbiome

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2012151328A2 (en) * 2011-05-02 2012-11-08 President And Fellows Of Harvard College Spatial sequestration of dynamic nucleic acid circuits
WO2014134338A1 (en) * 2013-03-01 2014-09-04 Arizona Board Of Regents, A Body Corporate Of The State Of Arizona, Acting For And On Behalf Of Arizona State University Oligonucleotide functionalized quantum dots
US20160083783A1 (en) * 2013-03-15 2016-03-24 The Broad Institute Inc. Novel hybridization probes and uses thereof

Family Cites Families (193)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4599315A (en) 1983-09-13 1986-07-08 University Of California Regents Microdroplet test apparatus
US4790640A (en) 1985-10-11 1988-12-13 Nason Frederic L Laboratory slide
US7560273B2 (en) 2002-07-23 2009-07-14 Applied Biosystems, Llc Slip cover for heated platen assembly
US6017696A (en) 1993-11-01 2000-01-25 Nanogen, Inc. Methods for electronic stringency control for molecular biological analysis and diagnostics
US5342581A (en) 1993-04-19 1994-08-30 Sanadi Ashok R Apparatus for preventing cross-contamination of multi-well test plates
WO1998042874A2 (en) 1997-03-24 1998-10-01 Fields Robert E Biomolecular processor
US6902703B2 (en) 1999-05-03 2005-06-07 Ljl Biosystems, Inc. Integrated sample-processing system
US6037168A (en) 1997-12-31 2000-03-14 Cytonix Corporation Microbiological assembly comprising resealable closure means
US20060216744A1 (en) 1998-12-23 2006-09-28 American Registry Of Pathology Armed Forces Institute Of Pathology Apparatus and methods for efficient processing of biological samples on slides
DE60025172T2 (de) 1999-03-18 2006-09-21 Exiqon A/S Einstufige probezubereitung und bestimmung von nukleinsäure in biologischen proben
US6395559B1 (en) 1999-05-04 2002-05-28 Orchid Biosciences, Inc. Multiple fluid sample processor with single well addressability
AU5870800A (en) 1999-06-09 2000-12-28 Ljl Biosystems, Inc. Cell-signaling assays
GB2356253B (en) 1999-11-09 2003-11-05 Bruker Daltonik Gmbh Contamination-free transfer of biological specimens
US6544477B1 (en) 2000-08-01 2003-04-08 Regents Of The University Of Minnesota Apparatus for generating a temperature gradient
US20030180191A1 (en) 2000-09-18 2003-09-25 Hideyuki Suzuki Micro well array and method of sealing liquid using the micro well array
US6538810B1 (en) 2000-10-26 2003-03-25 Christopher I. Karanfilov Single cell isolation apparatus and method of use
GB2369086B (en) 2000-11-20 2005-06-08 Herfurth Laser Technology Ltd Reaction plate
WO2002042775A2 (en) 2000-11-27 2002-05-30 Genevention L.L.C. Clinically intelligent diagnostic devices and methods
US6682703B2 (en) 2001-09-05 2004-01-27 Irm, Llc Parallel reaction devices
AU2003202120A1 (en) 2002-01-17 2003-07-30 University College Cork-National University Of Ireland, Cork An assay device and method for chemical or biological screening
AU2003242613B2 (en) 2002-06-03 2009-04-02 Pamgene B.V. High throughput cellular response assay using microarrays
US20030232344A1 (en) 2002-06-14 2003-12-18 Arthur Schleifer Hybridization process for arrays
ATE536548T1 (de) 2002-11-14 2011-12-15 Vivalis Mikrowell-array-chip zum nachweis eines antigenspezifischen lymphozyten, verfahren zum nachweis eines antigenspezifischen lymphozyten und verfahren zur klonierung eines antigenrezeptorgens eines antigenspezifischen lymphozyten
EP1608952B1 (en) 2002-12-20 2016-08-10 Life Technologies Corporation Assay apparatus and method using microfluidic arrays
KR20060004958A (ko) 2003-04-25 2006-01-16 제이에스알 가부시끼가이샤 바이오칩 및 바이오칩 키트 및 그의 제조 방법 및 사용방법
US20050079517A1 (en) 2003-06-19 2005-04-14 Michael Goncharko Controlled evaporation, temperature control and packaging for optical inspection of biological samples
US20050048571A1 (en) 2003-07-29 2005-03-03 Danielson Paul S. Porous glass substrates with reduced auto-fluorescence
US20050106602A1 (en) 2003-11-17 2005-05-19 Hashem Akhavan-Tafti Simplified methods for isolating nucleic acids from cellular materials
US20050136477A1 (en) 2003-11-17 2005-06-23 Hashem Akhavan-Tafti Methods for isolating nucleic acids from biological and cellular materials
US20050208501A1 (en) 2004-03-16 2005-09-22 Ambion, Inc. Process and reagents for extraction of RNA from fractionated blood leukocytes
EP1774045A4 (en) 2004-06-10 2012-06-06 Univ New York POLYGONAL NANOSTRUCTURES OF POLYNUCLEIC ACID MULTI-CORSSOVER MOLECULES AND LAYER ARRANGEMENT BASED ON DOUBLE CROSSOVER COHESION
CN100458443C (zh) 2004-07-09 2009-02-04 中国医学科学院药物研究所 一种高通量筛选反向蛋白质芯片、制备方法及其检测方法
US7842793B2 (en) 2005-06-14 2010-11-30 The California Institute Of Technology Methods of making nucleic acid nanostructures
EP1920045A4 (en) 2005-08-11 2011-07-06 Life Technologies Corp DEVICE FOR TEST, SYNTHESIS AND STORAGE, AND METHOD FOR THE PRODUCTION, USE AND MANIPULATION THEREOF
US7776553B2 (en) 2005-09-16 2010-08-17 Presidents And Fellows Of Harvard College Screening assays and methods
WO2007079229A2 (en) 2005-12-29 2007-07-12 Cellpoint Diagnostics, Inc. Devices and methods for enrichment and alteration of circulating tumor cells and other particles
US20070190526A1 (en) 2006-02-16 2007-08-16 Nexgen Diagnostics Llc Methods of extracting nucleic acids
WO2007102785A1 (en) 2006-03-09 2007-09-13 Agency For Science, Technology And Research Apparatus for performing a reaction in a droplet and method of using the same
US7951596B2 (en) 2006-04-21 2011-05-31 Dana Farber Cancer Instittute Nucleic acid nanotube liquid crystals and use for NMR structure determination of membrane proteins
KR100813266B1 (ko) 2006-09-19 2008-03-13 삼성전자주식회사 마이크로어레이-커버 슬립 조립체로부터 기포를 제거하는방법 및 이를 위한 마이크로어레이 키트
GB0625595D0 (en) 2006-12-21 2007-01-31 Oxford Gene Tech Ip Ltd Sample analyser
EP2134832A1 (en) 2007-03-12 2009-12-23 Cell Kinetics, Ltd. Holder for hole-type cell carrier
US20100216978A1 (en) 2007-04-17 2010-08-26 Dsna-Farber Cancer Institute Inc. Wireframe nanostructures
US20080287668A1 (en) 2007-05-14 2008-11-20 Tihamer Thomas Toth-Fejel Nanostructures and methods of making
US8043814B2 (en) 2007-07-31 2011-10-25 Eric Guilbeau Thermoelectric method of sequencing nucleic acids
JP4148367B1 (ja) 2007-08-02 2008-09-10 富山県 細胞のスクリーニング方法
US8222048B2 (en) 2007-11-05 2012-07-17 Abbott Laboratories Automated analyzer for clinical laboratory
GB0723725D0 (en) 2007-12-05 2008-01-16 Ge Healthcare Uk Ltd Apparatus and method for detecting dna damage
US20120004139A1 (en) 2008-02-01 2012-01-05 Complete Genomics, Inc. Flow cells for biochemical analysis
AU2009251881B2 (en) 2008-03-31 2015-03-26 Pacific Biosciences Of California, Inc Single molecule loading methods and compositions
US20100022416A1 (en) 2008-07-25 2010-01-28 Life Bioscience, Inc. Assay plates, methods and systems having one or more etched features
US9340416B2 (en) 2008-08-13 2016-05-17 California Institute Of Technology Polynucleotides and related nanoassemblies, structures, arrangements, methods and systems
US20110237445A1 (en) 2008-10-10 2011-09-29 Picovitro Ab Genetic analysis in microwells
GB2464300A (en) 2008-10-10 2010-04-14 Univ Dublin City Microfluidic multiplexed cellular and molecular analysis device and method
US9404924B2 (en) 2008-12-04 2016-08-02 Massachusetts Institute Of Technology Method of performing one-step, single cell RT-PCR
AU2009338127B2 (en) 2009-01-21 2015-11-26 Massachusetts Institute Of Technology Compositions and methods for assessing cytotoxicity of single cells
US20110294208A1 (en) 2009-02-11 2011-12-01 Nancy Allbritton Method and device for cell selection and collection in an isolated culturing environment
US20130337500A1 (en) 2009-04-24 2013-12-19 National University Of Singapore System and method for isolation of cells
WO2011112634A2 (en) 2010-03-08 2011-09-15 California Institute Of Technology Molecular indicia of cellular constituents and resolving the same by super-resolution technologies in single cells
US10266876B2 (en) 2010-03-08 2019-04-23 California Institute Of Technology Multiplex detection of molecular species in cells by super-resolution imaging and combinatorial labeling
US8815507B2 (en) 2010-03-18 2014-08-26 California Institute Of Technology Method and materials for the cooperative hybridization of oligonucleotides
WO2011156432A2 (en) 2010-06-07 2011-12-15 Firefly Bioworks, Inc. Scanning multifunctional particles
EP2407242A1 (en) 2010-07-13 2012-01-18 Dublin City University Direct clone analysis and selection technology
US8877438B2 (en) 2010-07-20 2014-11-04 California Institute Of Technology Self-assembled polynucleotide structure
EP2606336A1 (en) 2010-08-20 2013-06-26 ETH Zurich Microwell arrays for direct quantification of analytes on a flat sample
US10247656B2 (en) 2010-09-09 2019-04-02 Children's Hospital & Research Center At Oakland Single-cell microchamber array
CN103124796B (zh) 2010-10-04 2016-08-03 霍夫曼-拉罗奇有限公司 用于pcr反应缓冲液中的细胞裂解的方法
WO2012045669A1 (en) 2010-10-04 2012-04-12 Roche Diagnostics Gmbh Method for cell lysis and pcr within the same reaction vessel
JP5978220B2 (ja) 2010-10-29 2016-08-24 プレジデント アンド フェローズ オブ ハーバード カレッジ 核酸ナノ構造バーコードプローブ
US8986986B2 (en) 2010-10-29 2015-03-24 Samsung Electronics Co., Ltd. Cell lysis device and methods of lysing cells or viruses
US8554489B2 (en) 2010-12-22 2013-10-08 Massachusetts Institute Of Technology Method and apparatus for controlling properties of nucleic acid nanostructures
WO2013006411A1 (en) 2011-07-01 2013-01-10 President And Fellows Of Harvard College Method for forming nanoparticles having predetermined shapes
CN103946392B (zh) 2011-07-14 2018-07-27 赛雷纳(中国)医疗科技有限公司 生化分析的系统、设备和方法
KR20140054179A (ko) 2011-08-05 2014-05-08 프레지던트 앤드 펠로우즈 오브 하바드 칼리지 핵산 나노- 및 마이크로-기술에 관한 조성물 및 방법
US9810704B2 (en) 2013-02-18 2017-11-07 Theranos, Inc. Systems and methods for multi-analysis
US20150004193A1 (en) 2012-02-06 2015-01-01 Arizona Board of Regents, a body Corporate of the State of Arizona, Acting for and on Behalf of Ariz Novel dna-origami nanovaccines
US20130244909A1 (en) 2012-03-09 2013-09-19 Firefly Bioworks, Inc. Methods and apparatus for classification and quantification of multifunctional objects
EP2830991A1 (en) 2012-03-26 2015-02-04 President and Fellows of Harvard College Lipid-coated nucleic acid nanostructures of defined shape
CN102719357B (zh) 2012-05-31 2014-07-09 博奥生物集团有限公司 一种实时监控微阵列芯片分析过程的杂交系统
US9638636B2 (en) 2012-06-01 2017-05-02 Vycap B.V. Microsieve diagnostic device in the isolation and analysis of single cells
JP6596336B2 (ja) 2012-07-24 2019-10-23 プレジデント アンド フェローズ オブ ハーバード カレッジ 核酸ナノ構造の自己集合
DE102012107718B4 (de) 2012-08-22 2020-04-02 Technische Universität Braunschweig Kalibrierprobe auf DNA-Origami-Basis
DE102012107719B4 (de) 2012-08-22 2017-09-21 Technische Universität Braunschweig Standard auf DNA-Origami-Basis
CN108267581A (zh) 2012-08-24 2018-07-10 耶鲁大学 用于高通量多重检测的系统、装置和方法
US9975916B2 (en) 2012-11-06 2018-05-22 President And Fellows Of Harvard College Compositions and methods relating to complex nucleic acid nanostructures
US9752181B2 (en) 2013-01-26 2017-09-05 Denovo Sciences, Inc. System and method for capturing and analyzing cells
CN103159170B (zh) 2013-03-06 2014-06-18 中国科学院苏州纳米技术与纳米仿生研究所 一种三维纳米结构的构建方法
GB2517864B (en) 2013-03-07 2015-12-09 Univ California Electrophoretic separation devices and methods for using the same
US9909162B2 (en) 2013-03-11 2018-03-06 Becton, Dickinson And Company Bacterial detection cartridge
US20160271268A1 (en) * 2013-11-08 2016-09-22 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Nucleic acid nanostructures for in vivo agent delivery
WO2015089506A2 (en) 2013-12-15 2015-06-18 President And Fellows Of Harvard College Methods and compositions relating to optical super-resolution patterning
US10370630B2 (en) 2014-02-10 2019-08-06 Technion Research & Development Foundation Limited Method and apparatus for cell isolation, growth, replication, manipulation, and analysis
WO2015130805A1 (en) 2014-02-26 2015-09-03 Arizona Board Of Regents On Behalf Of Arizona State University Dna gridiron compositions and methods
CN106459132A (zh) 2014-03-08 2017-02-22 哈佛学院院长及董事 由自组装的含顶点的固定角度核酸结构形成的核酸多面体
JPWO2015147004A1 (ja) 2014-03-26 2017-04-13 東レ株式会社 分析用チップ
CN103894248B (zh) 2014-04-09 2015-09-16 国家纳米科学中心 一种单细胞分析用微流控芯片和系统及单细胞分析方法
DE102014105488B3 (de) 2014-04-17 2015-05-28 Technische Universität Braunschweig Verfahren zum Positionieren von Strukturen in Vertiefungen und so erhältliche Anordnungen
JP2017514467A (ja) 2014-04-23 2017-06-08 チルドレンズ メディカル センター コーポレーション 核酸キャリパーを用いた高スループット構造決定
EP2940150A1 (en) 2014-04-29 2015-11-04 Baseclick GmbH Self-assembly of DNA Origami: a new diganostic tool
KR20170009929A (ko) 2014-05-22 2017-01-25 프레지던트 앤드 펠로우즈 오브 하바드 칼리지 스케일링가능한 핵산-기반 나노제조
CN103997404B (zh) 2014-05-22 2017-07-14 华北电力大学 一种dna自组装结构和基于其的对称加密系统
KR20170016915A (ko) 2014-06-11 2017-02-14 마이크로닉스 인코포레이티드. 핵산의 분석을 위한 통합 검정 대조군을 갖는 마이크로 유체 공학적 카트리지 및 장치
US9757707B2 (en) 2014-06-12 2017-09-12 Takara Bio Usa, Inc. Single cell capture with capture chips
CN114214314A (zh) 2014-06-24 2022-03-22 生物辐射实验室股份有限公司 数字式pcr条码化
WO2016007819A1 (en) 2014-07-10 2016-01-14 Xiujun Li Paper-based and hybrid microfluidic devices integrated with nucleic acid amplification
EP3191605B1 (en) 2014-09-09 2022-07-27 The Broad Institute, Inc. A droplet-based method and apparatus for composite single-cell nucleic acid analysis
EP3234187B1 (en) 2014-12-15 2021-02-17 Illumina, Inc. Method for single molecular placement on a substrate
WO2016140726A2 (en) 2014-12-16 2016-09-09 President And Fellows Of Harvard College Triggered assembly of metafluorophores
CN104513787B (zh) 2015-01-07 2016-08-24 东北大学 用于单细胞捕获、培养和给药的集成微流控芯片及系统
CN107407691B (zh) 2015-01-22 2021-07-27 贝克顿迪金森公司 用于单细胞中核酸靶标的分子条码化的装置和系统
US11639522B2 (en) 2015-01-30 2023-05-02 President And Fellows Of Harvard College Microscope-free imaging
CN115011670A (zh) 2015-02-04 2022-09-06 加利福尼亚大学董事会 通过在离散实体中条形码化对核酸进行测序
WO2016138231A2 (en) 2015-02-27 2016-09-01 Sauder Timothy Lee Molcular barcoded bi-stable switch
US10550145B2 (en) 2015-03-07 2020-02-04 President And Fellows Of Harvard College Single-stranded DNA nanostructures
US10488321B2 (en) 2015-03-19 2019-11-26 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Devices and methods for high-throughput single cell and biomolecule analysis and retrieval in a microfluidic chip
US10870830B2 (en) 2015-03-26 2020-12-22 EWHA University—Industry Collaboration Foundation Method for culturing differentiation-promoting and -sustaining spheroid form of tonsil-derived stem cells
US11396650B2 (en) 2015-06-02 2022-07-26 Children's Medical Center Corporation Nucleic acid complexes for screening barcoded compounds
US20180223344A1 (en) 2015-06-27 2018-08-09 Children's Medical Center Corporation Compositions and methods for analyte detection using nanoswitches
JP2017026516A (ja) 2015-07-24 2017-02-02 株式会社古河電工アドバンストエンジニアリング マイクロウェルプレート、ウェルへの検体導入方法
CN107924473B (zh) 2015-08-07 2021-11-23 哈佛学院院长及董事 蛋白质-蛋白质相互作用的超分辨成像
WO2017027549A1 (en) 2015-08-10 2017-02-16 Duke University Magnetic single cell arrays for probing cell-drug and cell-cell communication
FR3040895B1 (fr) 2015-09-11 2020-01-10 Elvesys Substrat de support d'echantillon liquide, ensemble comportant un tel substrat et son utilisation
WO2017048975A1 (en) 2015-09-17 2017-03-23 The Regents Of The University Of California Droplet-trapping devices for bioassays and diagnostics
US10549277B2 (en) 2015-10-14 2020-02-04 The Regents Of The University Of California Integrated microfluidic platform for selective extraction of single-cell mRNA
US9862941B2 (en) 2015-10-14 2018-01-09 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Single cell microfluidic device
EP3368220B1 (en) 2015-10-26 2020-07-22 IDEXX Laboratories, Inc. Hematology test slide
WO2017074934A1 (en) 2015-10-28 2017-05-04 Wafergen, Inc. Single cell capture with capture chips
US11364502B2 (en) 2015-11-13 2022-06-21 Arizona Board Of Regents On Behalf Of Arizona State University Device and method for high-throughput multiparameter measurements in one or more live and fixed cells
JP2019500856A (ja) 2015-11-18 2019-01-17 タカラ バイオ ユーエスエー, インコーポレイテッド マルチウェルデバイスから試料をプールするための装置及び方法
ES2875759T3 (es) 2015-12-01 2021-11-11 Illumina Inc Sistema microfluídico digital para aislamiento de células individuales y caracterización de analitos
WO2017100251A1 (en) 2015-12-08 2017-06-15 President And Fellows Of Harvard College Target detection using barcode conjugates and nucleic acid nanoarrays
US20170182493A1 (en) 2015-12-28 2017-06-29 QIAGEN Waltham Thin-film flowcells
US11420204B2 (en) 2016-01-13 2022-08-23 Duke University Platforms for single cell analysis
CN105602949A (zh) 2016-01-29 2016-05-25 同济大学 链间交换由支架dna达成的核酸结构及其合成方法
WO2017134303A1 (en) 2016-02-05 2017-08-10 Ludwig-Maximilians-Universität München Molecular identification with sub-nanometer localization accuracy
CN105930586B (zh) 2016-04-21 2019-02-01 郑州轻工业学院 基于局域性dna发卡链置换反应的异或门及求反电路
WO2017184776A1 (en) 2016-04-22 2017-10-26 Becton, Dickinson And Company High density deposition for array production
WO2017189870A1 (en) 2016-04-27 2017-11-02 Massachusetts Institute Of Technology Stable nanoscale nucleic acid assemblies and methods thereof
WO2017223254A1 (en) 2016-06-21 2017-12-28 Massachusetts Institute Of Technology Methods for cell proliferation and toxicity testing
JP2019522975A (ja) 2016-06-22 2019-08-22 ザ チャールズ スターク ドレイパー ラボラトリー, インク.The Charles Stark Draper Laboratory, Inc. 分子鎖合成装置
CN107774347B (zh) 2016-08-31 2019-11-26 中国科学院青岛生物能源与过程研究所 一种微流控动态液滴操控的方法及其动态液滴平台
DK3516055T3 (da) 2016-09-21 2022-03-21 Univ Muenchen Tech Skalerbar bioteknologisk fremstilling af enkeltstrengede dna-molekyler med defineret sekvens og længde
JP2019533156A (ja) 2016-10-21 2019-11-14 ザ ユナイテッド ステイツ オブ アメリカ, アズ リプレゼンテッド バイ ザ セクレタリー, デパートメント オブ ヘルス アンド ヒューマン サービシーズ 分子ナノタグ
WO2018085835A1 (en) 2016-11-07 2018-05-11 Battelle Memorial Institute Nanoscale biochemical sample preparation and analysis
CN110225980B (zh) 2016-11-21 2023-01-06 纳米线科技公司 化学组合物及其使用方法
WO2018129333A1 (en) 2017-01-05 2018-07-12 President And Fellows Of Harvard College Systems and methods for determining molecular motion
IL250207A0 (en) 2017-01-19 2017-03-30 Augmanity Nano Ltd Origami RNA from ribosomal RNA and methods for its preparation
WO2018140302A1 (en) 2017-01-24 2018-08-02 The Regents Of The University Of Michigan Systems and methods for whole cell analysis
WO2018144723A1 (en) 2017-02-03 2018-08-09 Claremont Biosolutions Llc Arrayed lyser and homogenizer systems with multiple agitator devices
CN106893722B (zh) 2017-02-20 2020-05-08 国家纳米科学中心 一种刺激响应型核酸纳米结构载体手性贵金属纳米复合物及其制备方法和应用
CA3055565A1 (en) 2017-03-08 2018-09-13 The Regents Of The University Of Michigan Analyte detection
CN110799654A (zh) 2017-03-21 2020-02-14 穆韦尔斯有限公司 密封微孔测定法
WO2018174899A1 (en) 2017-03-24 2018-09-27 Zs Genetics, Inc. Continuous confinement fluidics
KR101974890B1 (ko) 2017-03-24 2019-05-03 서울대학교산학협력단 Dna 구조체
CN109477096B (zh) 2017-06-02 2021-08-31 清华大学 Dna折纸单元分步组装法
CN107262170B (zh) 2017-07-03 2019-04-09 重庆大学 一种多重数字pcr芯片及其使用方法
US10606054B2 (en) 2017-07-14 2020-03-31 Sony Corporation Super-resolution far-field scanning optical microscope
CN107437003B (zh) 2017-07-17 2021-03-23 北京大学 一种基于dna计算的探针机实现方法及装置
EP3720606A4 (en) 2017-07-27 2021-05-05 Board Of Regents, The University Of Texas System AMPLIFICATION OF PAIRED PROTEINCODING MRNA SEQUENCES
US11125748B2 (en) 2017-09-01 2021-09-21 University Of British Columbia Method for organizing individual molecules on a patterned substrate and structures assembled thereby
US20210001330A1 (en) 2017-09-08 2021-01-07 President And Fellows Of Harvard College Nanosensor methods and apparatuses for determination of analytes
CN107488661B (zh) 2017-09-21 2020-12-15 国家纳米科学中心 一种核酸纳米结构及其制备方法和应用
CN111971124B (zh) 2017-09-25 2022-08-23 普莱克斯姆公司 寡核苷酸编码的化学文库
WO2019075321A1 (en) 2017-10-13 2019-04-18 The Charles Stark Draper Laboratory, Inc. MINIATURIZED DNA MICROARRAY FOR SMALL VOLUME SAMPLE PROCESSING
US20200256862A1 (en) 2017-10-23 2020-08-13 Massachusetts Institute Of Technology Functionalized solid support
CN107894411B (zh) 2017-10-27 2020-06-02 上海纳米技术及应用国家工程研究中心有限公司 荧光精确定量dna折纸结构完整度的方法
US11441118B2 (en) 2017-11-02 2022-09-13 The Board Of Trustees Of The University Of Illinois Nucleic acid and other compositions and methods for the modulation of cell membranes
EP3707150A1 (en) 2017-11-10 2020-09-16 Massachusetts Institute Of Technology Microbial production of pure single stranded nucleic acids
US20190154679A1 (en) 2017-11-14 2019-05-23 Massachusetts Institute Of Technology Apparatuses and methods for cell and tissue assays and agent delivery
US11162192B2 (en) 2017-12-01 2021-11-02 Arizona Board Of Regents On Behalf Of Arizona State University Materials and methods relating to single molecule arrays
EP3720605A1 (en) 2017-12-07 2020-10-14 Massachusetts Institute Of Technology Single cell analyses
US10606058B2 (en) 2018-01-11 2020-03-31 Carol Lynn Espensen Microscope slide for liquid cultures
CN110079633A (zh) 2018-01-25 2019-08-02 上海交通大学 一种基于dna折纸标记检测乙肝病毒亚型的方法
WO2019149932A1 (en) 2018-02-02 2019-08-08 Aarhus Universitet Dna origami beads for fluorescence quantification in microfluidics
US20210031186A1 (en) 2018-02-07 2021-02-04 The Trustees Of The University Of Pennsylvania High throughput microfluidic device
US10982210B2 (en) 2018-03-02 2021-04-20 Sixfold Bioscience Ltd. Compositions for delivery of cargo to cells
US10871430B2 (en) 2018-03-03 2020-12-22 Labcyte Inc. System and method for extracting a target moiety from a sample using acoustic droplet ejection
EP3762494B1 (en) 2018-03-07 2022-11-23 Wisconsin Alumni Research Foundation High throughput nucleic acid profiling of single cells
CN108535145A (zh) 2018-03-09 2018-09-14 深圳市瑞图生物技术有限公司 快速检测外周血液中网织红细胞数量的方法及装置
WO2019183554A1 (en) 2018-03-23 2019-09-26 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Systems and methods for capturing cells
WO2020036654A2 (en) 2018-04-27 2020-02-20 Arizona Board Of Regents On Behalf Of Arizona State University Highly knotted molecular topologies from single-stranded nucleic acids
GB201807409D0 (en) 2018-05-04 2018-06-20 Oxford Nanoimaging Ltd Assay
US11560565B2 (en) 2018-06-13 2023-01-24 Auburn University Electrochemical detection nanostructure, systems, and uses thereof
CN108795939A (zh) 2018-06-25 2018-11-13 上海纳米技术及应用国家工程研究中心有限公司 基于DNAzyme在DNA折纸表面聚合化的方法
US20220162692A1 (en) 2018-07-30 2022-05-26 Oxford University Innovation Limited Assemblies
KR102187862B1 (ko) 2018-12-21 2020-12-07 서울대학교산학협력단 Dna 구조체의 형상 조절 기술
CN110508335A (zh) 2019-03-27 2019-11-29 广州万孚生物技术股份有限公司 微流控芯片及含有该微流控芯片的体外检测装置
US10633693B1 (en) 2019-04-16 2020-04-28 Celsee Diagnostics, Inc. System and method for leakage control in a particle capture system
CN110437992B (zh) 2019-08-14 2021-05-04 重庆大学 一种液相样品大规模、快速数字化分解芯片及其使用方法
CN110586209A (zh) 2019-08-28 2019-12-20 广州万孚生物技术股份有限公司 微流控芯片及包含该微流控芯片的体外检测装置
CN111298129B (zh) 2019-08-28 2023-05-09 中国人民解放军陆军军医大学第二附属医院 二甲双胍介导核酸纳米材料自组装方法及采用该方法制备的纳米制剂和应用
CN110628567B (zh) 2019-09-25 2021-04-02 中国科学院苏州生物医学工程技术研究所 超高通量单细胞核酸分子实时荧光定量分析芯片
CN111019941B (zh) 2020-01-21 2023-09-08 福州大学 一种dna纳米材料及其制备方法和应用

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2012151328A2 (en) * 2011-05-02 2012-11-08 President And Fellows Of Harvard College Spatial sequestration of dynamic nucleic acid circuits
WO2014134338A1 (en) * 2013-03-01 2014-09-04 Arizona Board Of Regents, A Body Corporate Of The State Of Arizona, Acting For And On Behalf Of Arizona State University Oligonucleotide functionalized quantum dots
US20160083783A1 (en) * 2013-03-15 2016-03-24 The Broad Institute Inc. Novel hybridization probes and uses thereof

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
GLASGOW: ""Conventional fluorescence microscopy below the diffraction limit with simultaneous capture of two fluorophores in DNA origami"", 《PROGRESS IN BIOMEDICAL OPTICS AND IMAGING》 *
NAKATA ET AL: ""Zinc-Finger Proteins for Site-Specific Protein Positioning on DNA-Origami Structures"", 《ANGEWANDTE CHEMIE INTERNATIONAL EDITION》 *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111638330A (zh) * 2020-06-10 2020-09-08 青岛农业大学 检测鼠伤寒沙门氏菌的生物传感器及其应用
CN111638330B (zh) * 2020-06-10 2021-04-02 青岛农业大学 检测鼠伤寒沙门氏菌的生物传感器及其应用
CN111754040A (zh) * 2020-06-23 2020-10-09 邢冠南 一种基于用户需求的信息处理推送方法

Also Published As

Publication number Publication date
WO2017216270A1 (de) 2017-12-21
US11513076B2 (en) 2022-11-29
US20190271647A1 (en) 2019-09-05
DK3472351T3 (da) 2020-11-09
EP3472351B1 (de) 2020-10-28
EP3472351A1 (de) 2019-04-24

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN109563539A (zh) 使用dna纳米技术的单分子检测或定量
CN113637729B (zh) 用于单分子检测的测定及其应用
US10435739B2 (en) Methods and devices for single-molecule whole genome analysis
Crut et al. Detection of single DNA molecules by multicolor quantum-dot end-labeling
US20160168621A1 (en) Methods and related devices for single molecule whole genome analysis
US20050244863A1 (en) Molecular arrays and single molecule detection
KR20220029760A (ko) 순차적 하이브리드화 바코딩에 의한 분자의 멀티플렉스 표지화
CN111479930A (zh) 微孔中通过dna纳米技术进行单分子检测或定量
JP2006520463A (ja) ポリマー集団を解析するための方法
US10196683B2 (en) Formation of hairpins in situ using force-induced strand invasion
EP3411496A1 (en) Molecular identification with sub-nanometer localization accuracy
CN114277098A (zh) 基于dna折纸结构的条形码系统

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

Application publication date: 20190402

WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication