CN109562054A - 栗皮提取物 - Google Patents

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Abstract

提供一种有效地制造自由神经酰胺(特别是人体型自由神经酰胺)的方法等。由栗皮得到的提取物包含较丰富的自由神经酰胺及葡糖基神经酰胺，其是有用的。另外，栗皮丙酮提取物具有紫外线吸收及紫外线波长转换作用，其是有用的。

Description

栗皮提取物
技术领域
本发明涉及栗皮提取物。另外，本发明也涉及该提取物的制造方法(提取方法)以及用途。
背景技术
关于鞘脂，其以长链脂肪酸结合至作为长链氨基醇的鞘氨醇类碱的氨基上而成的神经酰胺为基本骨架，并以糖及磷酸等极性基团结合至醇羟基上的状态而存在于细胞膜中。其中，作为糖鞘脂的糖基神经酰胺，其为广泛存在于动植物、微生物中的成分，也被称为脑苷脂，近年来，也是具有生物体功能调节作用而受到关注的功能性物质。
糖基神经酰胺当中的广泛存在于植物及真菌类中的葡糖基神经酰胺(葡萄糖结合至神经酰胺而成的糖鞘脂)通常略称为“神经酰胺”，并且源于许多原料。特别地，神经酰胺占人体表皮的细胞间脂质的约50％，因而其由于与肌肤健康相关而受到关注，并且其作为健康食品及功能性化妆品材料的市场正在扩大。已知由于年龄增长而导致角质神经酰胺减少，外用神经酰胺的补充被认为是重要的。人体的角质层中存在有各种类型的神经酰胺，其中神经酰胺NS、神经酰胺NP及神经酰胺AP的存在比例较高，特别地，由于年龄增长而导致神经酰胺AP的含有比例显著地减少(非专利文献1)，因此，神经酰胺AP的补充是特别重要的。
需要说明的是，作为神经酰胺的命名法之一，有分别由构成神经酰胺的脂肪酸和鞘氨醇类碱来确定名字的方法，例如神经酰胺AP是由α-羟基脂肪酸(A)和植物鞘氨醇(P)构成的神经酰胺。该神经酰胺的命名方法的概要如图1所示。
作为角质层细胞间脂质而存在的神经酰胺是游离型的自由神经酰胺，其是葡糖基神经酰胺和鞘磷脂被表皮特异性分解酶分解而转换得到的。该皮肤中产生自由神经酰胺，这是在陆生动物中维持表皮的阻隔功能方面重要的生命现象。需要说明的是，葡糖基神经酰胺据说在外部施用的情况下也具有提高肌肤的神经酰胺合成的作用。
另一方面，在从植物提取的被称为所谓的“神经酰胺”的植物葡糖基神经酰胺中，葡萄糖结合到神经酰胺，在这方面与人体表皮的神经酰胺(自由神经酰胺)的结构不同。另外，构成植物葡糖基神经酰胺的鞘氨醇类碱通常以人体中不包含的4,8-鞘氨二烯醇(4,8-sphingadiene)为主成分，因此在神经酰胺的基本骨架的化学结构方面也是不同于人体的。在各种神经酰胺当中，关于经常在动物及植物中可见到的鞘氨醇类碱，如图2所示。
此外，关于人体角质神经酰胺的脂肪酸，已知其碳链长度存在有多种长度，特别是当具有碳原子数为16及18(C16及C18)的较短碳链的脂肪酸的神经酰胺的含有比例增加时，皮肤阻隔功能降低(TEWL增加)，另一方面，当具有碳原子数为20、24及26(C20、C24及C26)的较长碳链的脂肪酸的神经酰胺的含有比例增加时，皮肤阻隔功能提高(TEWL降低)。因此，作为适用于人体肌肤的神经酰胺，其脂肪酸的碳链较长的神经酰胺被认为是优选的。
鉴于上述情况，一直以来，在作为皮肤外用制剂的神经酰胺材料中主要使用了化学合成的人体型的神经酰胺(神经酰胺的基本骨架的化学结构是人体型的神经酰胺)，而不是来自于植物的神经酰胺。特别是优选使用了人体型的自由神经酰胺。需要说明的是，人体型的含义是与人体角质层中所含的神经酰胺具有相同的结构，也被称作是与皮肤相同的类型。
作为合成鞘脂的中间体，自由神经酰胺也微量地存在于自然界中，但是它的含量据认为是葡糖基神经酰胺的约1/10。另一方面，已知的是，在植物及真菌类的细胞膜中，磷酸结合到神经酰胺并且寡糖结合到该处而得的酸性鞘脂磷脂质组的含量是葡糖基神经酰胺的数倍。该脂质不仅调节细胞膜的功能，而且还承担了作为产生自由神经酰胺(即信号传输的第二信使)的基质的作用。因此，由于在自然界中大量地产生并利用了糖鞘脂及鞘磷脂，因而无法容易地从自然界存在的原料中大量得到自由神经酰胺，并且更加难以大量地得到自由神经酰胺当中的、基本骨架的化学结构为人体型的自由神经酰胺。
特别地，对于来自植物的自由神经酰胺的生产，无论是自然界中还是工业上中，都难以实现用于将酸性鞘脂转换为自由神经酰胺所必要的自消化状态，因此，迄今为止尚不存在从植物有效地生产自由神经酰胺的技术。例如，专利文献1中记载了神经酰胺浓缩物的制造方法，其包括采用丙酮或己烷对蒸馏紫薯的醪糟而得的蒸馏残渣的醇提取物进行提取并回收残渣，并且也记载了该浓缩物包含自由神经酰胺，但是在该制造方法中，必须经过蒸馏紫薯的醪糟以得到蒸馏残渣这样的步骤。
现有技术文献
专利文献
专利文献1：日本特开2015-105272
非专利文献
非专利文献1：Denda M,et al.,Arch Dermatol Res(1993)285:415-417
非专利文献2：Joo K,et al.,Journal of Dermatological Science 60(2010)40-57
发明内容
发明所要解决的课题
本发明的课题在于有效地制造自由神经酰胺(特别是人体型自由神经酰胺)。
用于解决课题的手段
本发明人发现在栗的皮(外壳和内皮)中累积有自由神经酰胺，并进一步反复进行改良，从而完成了本发明。
本发明包括(例如)以下项所记载的主题。
项1。
一种栗皮提取物，其包含自由神经酰胺及葡糖基神经酰胺。
项2。
根据项1所述的提取物，其中，所包含的自由神经酰胺及葡糖基神经酰胺的重量比(自由神经酰胺/葡糖基神经酰胺)为1至10。
项3。
根据项1或2所述的提取物，其中，在所包含的自由神经酰胺当中，50摩尔％以上是鞘氨醇类碱部分的羟基数为3的自由神经酰胺。
项4。
根据项1至3中任一项所述的提取物，其中，在所包含的葡糖基神经酰胺当中，50摩尔％以上是鞘氨醇类碱部分的羟基数为3的葡糖基神经酰胺。
项5。
一种组分，其为栗皮提取物的自由神经酰胺组分，
在所包含的自由神经酰胺当中，50摩尔％以上是鞘氨醇类碱部分的羟基数为3的自由神经酰胺。
项6。
一种组分，其为栗皮提取物的葡糖基神经酰胺组分，
在所包含的葡糖基神经酰胺当中，50摩尔％以上是鞘氨醇类碱部分的羟基数为3的葡糖基神经酰胺。
项7。
一种化妆品组合物、食品组合物或药物组合物，其包含项1至4中任一项所述的提取物、或者项5或6所述的组分。
项A1。
一种保湿、抗皮肤老化或改善皮肤阻隔的方法，包括将包含自由神经酰胺及葡糖基神经酰胺的栗皮提取物施用于皮肤的步骤。
项A2。
根据项A1所述的方法，其中栗皮提取物中所含的自由神经酰胺及葡糖基神经酰胺的重量比(自由神经酰胺/葡糖基神经酰胺)为1至10。
项A3。
根据项A1或A2所述的方法，其中，在栗皮提取物所包含的自由神经酰胺当中，50摩尔％以上是鞘氨醇类碱部分的羟基数为3的自由神经酰胺。
项A4。
根据项A1至A3中任一项所述的方法，其中，在栗皮提取物所包含的葡糖基神经酰胺当中，50摩尔％以上是鞘氨醇类碱部分的羟基数为3的葡糖基神经酰胺。
项A5。
一种保湿、抗皮肤老化或改善皮肤阻隔的方法，包括将以下组分施用于皮肤的步骤，该组分为栗皮提取物的自由神经酰胺组分，在所包含的自由神经酰胺当中，50摩尔％以上是鞘氨醇类碱部分的羟基数为3的自由神经酰胺。
项A6。
一种保湿、抗皮肤老化或改善皮肤阻隔的方法，包括将以下组分施用于皮肤的步骤，该组分为栗皮提取物的葡糖基神经酰胺组分，在所包含的葡糖基神经酰胺当中，50摩尔％以上是鞘氨醇类碱部分的羟基数为3的葡糖基神经酰胺。
项B1。
一种栗皮提取物，其包含自由神经酰胺及葡糖基神经酰胺，并且用于保湿、抗皮肤老化或改善皮肤阻隔。
项B2。
根据项B1所述的栗皮提取物，其中，栗皮提取物中所包含的自由神经酰胺及葡糖基神经酰胺的重量比(自由神经酰胺/葡糖基神经酰胺)为1至10。
项B3。
根据项B1或B2所述的栗皮提取物，其中，在栗皮提取物所包含的自由神经酰胺当中，50摩尔％以上是鞘氨醇类碱部分的羟基数为3的自由神经酰胺。
项B4。
根据项B1至B3中任一项所述的栗皮提取物，其中，在栗皮提取物所包含的葡糖基神经酰胺当中，50摩尔％以上是鞘氨醇类碱部分的羟基数为3的葡糖基神经酰胺。
项B5。
一种组分，其为用于保湿、抗皮肤老化或改善皮肤阻隔的栗皮提取物的自由神经酰胺组分，在所包含的自由神经酰胺当中，50摩尔％以上是鞘氨醇类碱部分的羟基数为3的自由神经酰胺。
项B6。
一种组分，其为用于保湿、抗皮肤老化或改善皮肤阻隔的栗皮提取物的葡糖基神经酰胺组分，在所包含的葡糖基神经酰胺当中，50摩尔％以上是鞘氨醇类碱部分的羟基数为3的葡糖基神经酰胺。
项C1。
包含自由神经酰胺及葡糖基神经酰胺的栗皮提取物在用于保湿、抗皮肤老化或改善皮肤阻隔的化妆品或药物的制造中的应用。
项D1。
一种抗紫外线组合物，其包含栗皮丙酮提取物。
项D2。
根据项D1所述的抗紫外线组合物，其中，栗皮丙酮提取物为栗皮乙醇提取物的丙酮提取物。
项D3。
根据项D1或D2所述的抗紫外线组合物，其中，抗紫外线组合物为紫外线吸收组合物或紫外线波长转换组合物(优选为紫外线转换成可见光的转换组合物)。
项E1。
一种化妆品组合物，包含：
项1至4中任一项所述的提取物或者项5或6所述的组分、以及栗皮丙酮提取物。
项E2。
根据项E1所述的化妆品组合物，其中，化妆品组合物用于保湿、抗皮肤老化或改善皮肤阻隔，或者用于抗紫外线。
项E3。
根据项E1或E2所述的化妆品组合物，其中，用于抗紫外线是用于紫外线吸收或者用于紫外线波长转换(优选为紫外线向可见光的转换)。
项E4。
根据项E1至E3中任一项所述的化妆品组合物，其中，栗皮丙酮提取物为栗皮乙醇提取物的丙酮提取物。
发明的效果
根据本发明一个实施方式的栗皮提取物包含大量的神经酰胺AP，且包含大量的脂肪酸的碳链长度较长的神经酰胺，因而能够特别地适用于改善肌肤的功能、保湿、抗老化、改善阻隔功能等。
附图简要说明
[图1]示出了神经酰胺的命名方法的概要。
[图2]示出了各种神经酰胺当中的经常在动物及植物中可见到的鞘氨醇类碱。
[图3]示出了通过TLC密度测定法对由栗皮(外壳、内皮或这两者)得到的总脂质中的鞘脂进行定量的结果。
[图4]示出了通过LC-MS对栗皮提取物的鞘脂进行结构分析的结果。
[图5]示出了图4的LC-MS分析的峰的分子种类的表。
[图6]示出了通过TLC密度测定法对由栗子果实得到的总脂质中的鞘脂进行定量的结果。
[图7]示出了通过TLC密度测定法对由杏仁、开心果及七叶树果实的各个部位得到的总脂质中的鞘脂进行定量的结果。
[图8]示出了通过TLC密度测定法对精制栗皮提取物而得到的总脂质中的鞘脂进行定量的结果。
[图9]示出了研究栗皮提取物对皮肤的影响而得到的结果。左侧示出了角层含水量的测定结果，右侧示出了水分经皮蒸腾量的测定结果。*表示各组之间具有显著性差异(P<0.05)。#表示相对于初始值(涂布前)具有显著性差异(P<0.05)。
[图10]示出了采用分光光度计进行的栗UVP的紫外线吸收性能的测定结果。
[图11]示出了向市售UVA吸收剂溶液及栗UVP溶液进行UV照射时的照片。
[图12]示出了对栗皮提取物的水分蒸发抑制效果进行研究的结果。
具体实施方式
根据本发明一个实施方式的栗皮提取物包含自由神经酰胺及葡糖基神经酰胺。如上所述，神经酰胺是具有脂肪酸的羧基(-COOH)结合到鞘氨醇类碱的氨基(-NH2)上而成的结构(-NH-CO-)的化合物。糖及磷酸等极性基团进一步结合到神经酰胺的鞘氨醇类碱的醇羟基(-OH)上，分别成为糖鞘脂及鞘磷脂。在此，将结合有糖的神经酰胺特别称为糖基神经酰胺，并且当糖是葡萄糖时特别称为葡糖基神经酰胺。在本说明书中，将没有糖及磷酸结合到神经酰胺的情况特别称为自由神经酰胺。另外，在下文中，除非另有说明，否则在仅标示为“神经酰胺”的情况下，其包括自由神经酰胺和葡糖基神经酰胺。
作为构成自由神经酰胺的鞘氨醇类碱，没有特别的限制，但优选为具有2或3个羟基的鞘氨醇类碱，更优选为具有3个羟基的鞘氨醇类碱。另外，作为该鞘氨醇类碱，优选碳原子数为14至22的鞘氨醇类碱，更优选碳原子数为16至20的鞘氨醇类碱，特别优选碳原子数为18的鞘氨醇类碱。此外，具有0或1个碳-碳双键的鞘氨醇类碱是优选的。作为更具体的优选鞘氨醇类碱，可列举出(例如)鞘氨醇、二氢鞘氨醇、植物鞘氨醇、6-羟基鞘氨醇等。另外，可列举出(例如)具有图2所示结构式的物质。需要说明的是，鞘氨醇是2-氨基-4-十八碳烯-1,3-二醇。
作为构成自由神经酰胺的脂肪酸，优选碳原子数为16至30的脂肪酸，更优选碳原子数为18至28的脂肪酸，进一步优选碳原子数为20至26的脂肪酸，更进一步优选碳原子数为22至26的脂肪酸。另外，具有0或1个碳-碳双键的脂肪酸是优选的，具有0个碳-碳双键的脂肪酸(即饱和脂肪酸)是更加优选的。另外，具有0个、1个或2个羟基的脂肪酸是优选的，具有1个或2个羟基的脂肪酸是更加优选的。在具有羟基的情况下，优选为α-羟基。
在自由神经酰胺中，神经酰胺骨架的(鞘氨醇类碱)-(脂肪酸)的组合可以是上述鞘氨醇类碱及脂肪酸的任何组合。其中，作为优选的组合，例如可列举出(具有2个或3个(特别是3个)羟基的鞘氨醇类碱)-(具有羟基(特别是具有α-羟基)的脂肪酸)的组合。该脂肪酸的羟基数优选为1或2。需要说明的是，在本发明中，特别将神经酰胺骨架为(植物鞘氨醇)-(具有α-羟基的脂肪酸)的组合的自由神经酰胺称为神经酰胺AP(参照图1及图2)。需要说明的是，一些脂肪酸除了α-羟基之外还具有羟基，但是在那种情况下，具有α-羟基的也包括在神经酰胺AP中。例如，具有α羟基及β羟基这两个羟基的神经酰胺被称为神经酰胺DP，但在本说明书中神经酰胺DP也包括在神经酰胺AP中。在神经酰胺AP中，特别地，下文中有时将仅具有α羟基作为羟基的神经酰胺AP称为神经酰胺AP1，将仅具有α羟基及β羟基作为羟基的神经酰胺AP称为神经酰胺AP2。神经酰胺DP为神经酰胺AP2。
据认为，神经酰胺的羟基数越多，则形成越强的氢键，能够构筑更稳定的膜结构，由此提高肌肤中的保湿效果，因而优选具有多个羟基的神经酰胺。另外，作为其他优选的组合，例如可列举出(具有2个或3个羟基、碳原子数为18、且具有0个或1个碳-碳双键的鞘氨醇类碱)-(碳原子数为20至26、碳-碳双键为0、且具有1个或2个羟基(特别是具有α-羟基)的脂肪酸)的组合。
作为构成葡糖基神经酰胺的鞘氨醇类碱，没有特别的限制，但优选为具有2或3个羟基的鞘氨醇类碱，更优选为具有3个羟基的鞘氨醇类碱。另外，优选碳原子数为14至22的鞘氨醇类碱，更优选碳原子数为16至20的鞘氨醇类碱，特别优选碳原子数为18的鞘氨醇类碱。此外，具有0或1个碳-碳双键的鞘氨醇类碱是优选的。作为更具体的优选鞘氨醇类碱，例如可列举出鞘氨醇、二氢鞘氨醇、植物鞘氨醇、4-羟基鞘氨醇、4,8-鞘氨二烯醇、6-羟基鞘氨醇等。另外，例如可列举出具有图2所示结构式的物质。
作为构成葡糖基神经酰胺的脂肪酸，优选碳原子数为16至30的脂肪酸，更优选碳原子数为18至28的脂肪酸，进一步优选碳原子数为20至26的脂肪酸，更进一步优选碳原子数为22至26的脂肪酸。另外，具有0或1个碳-碳双键的脂肪酸是优选的，具有0个碳-碳双键的脂肪酸(即饱和脂肪酸)是更加优选的。另外，具有0个、1个或2个羟基是优选的，具有1个或2个羟基是更加优选的。在具有羟基的情况下，优选为α-羟基。
在葡糖基神经酰胺中，神经酰胺骨架的(鞘氨醇类碱)-(脂肪酸)的组合可以是上述鞘氨醇类碱及脂肪酸的任何组合。其中，作为优选的组合，例如可列举出(具有2个或3个(特别是3个)羟基的鞘氨醇类碱)-(具有羟基(特别是具有α-羟基)的脂肪酸)的组合。该脂肪酸的羟基数优选为1或2。据认为，神经酰胺的羟基数越多，则形成越强的氢键，能够构筑更稳定的膜结构，由此提高肌肤中的保湿效果，因而优选具有多个羟基的神经酰胺。另外，作为优选的组合，例如可列举出(具有2个或3个羟基、碳原子数为18、且具有0个或1个碳-碳双键的鞘氨醇类碱)-(碳原子数为20至26、碳-碳双键为0、且具有1个或2个羟基(特别是具有α-羟基)的脂肪酸)的组合。
需要说明的是，在自由神经酰胺及葡糖基神经酰胺的任一者中，当脂肪酸具有2个羟基时，优选的是具有α-羟基及β-羟基这两个羟基(即α、β-二羟基脂肪酸)。另外，在自由神经酰胺及葡糖基神经酰胺的任一者中，当其神经酰胺骨架中的鞘氨醇类碱具有碳-碳双键时，优选的是反式异构体，另外，当其神经酰胺骨架中的脂肪酸具有碳-碳双键时，优选的是反式异构体。
如上所述，自由神经酰胺及葡糖基神经酰胺根据构成其骨架的鞘氨醇类碱及脂肪酸的种类而成为各种结构(例如参照图1及图2)。在本发明中，栗皮提取物包含具有各种结构的多种自由神经酰胺及葡糖基神经酰胺。在本说明书中，有时将这种结构不同的各种自由神经酰胺称为自由神经酰胺类。另外，有时将这种结构不同的各种葡糖基神经酰胺称为葡糖基神经酰胺类。
栗皮提取物中所包含的自由神经酰胺类的种类数没有特别的限制，优选包含多种自由神经酰胺，例如优选包含5种以上、6种以上、7种以上、8种以上、9种以上或10种以上。在所包含的自由神经酰胺当中，优选的是，50摩尔％以上为鞘氨醇类碱部分的羟基数为3(三羟基鞘氨醇类碱)的自由神经酰胺类，更优选为60摩尔％以上，进一步优选为70摩尔％以上，更进一步优选为80摩尔％以上。另外，进一步地，在所包含的自由神经酰胺当中，优选的是50摩尔％以上为神经酰胺AP，更优选为60摩尔％以上，进一步优选为70摩尔％以上，更进一步优选为80摩尔％以上。
另外，在所包含的自由神经酰胺类当中，优选的是，神经酰胺骨架中的脂肪酸链长度为C22以上的自由神经酰胺是所包含的自由神经酰胺的60摩尔％以上，更优选为70摩尔％以上，进一步优选为80摩尔％以上，更进一步为90摩尔％以上。另外，在所包含的自由神经酰胺类当中，优选的是，神经酰胺骨架中的脂肪酸链长度为C26以上的自由神经酰胺是所包含的自由神经酰胺的10摩尔％以上，更优选为15摩尔％以上，进一步优选为20摩尔％以上。
此外，在所包含的自由神经酰胺类当中，含量最多的优选为以下4种当中的任一种自由神经酰胺类：神经酰胺骨架为(具有3个羟基、碳原子数为18、且具有1个碳-碳双键的鞘氨醇类碱)-(碳原子数为22、碳-碳双键为0、且具有1个羟基(具有α-羟基)的脂肪酸)的组合的自由神经酰胺类(即，t18：1-22:0h)、神经酰胺骨架为(具有3个羟基、碳原子数为18、且具有1个碳-碳双键的鞘氨醇类碱)-(碳原子数为24、碳-碳双键为0、且具有1个羟基(具有α-羟基)的脂肪酸)的组合的自由神经酰胺类(即，t18：1-24:0h)、神经酰胺骨架为(具有3个羟基、碳原子数为18、且没有碳-碳双键的鞘氨醇类碱)-(碳原子数为24、碳-碳双键为0、且具有1个羟基(具有α-羟基)的脂肪酸)的组合的自由神经酰胺类(即，t18：0-24:0h)、以及神经酰胺骨架为(具有3个羟基、碳原子数为18、且具有1个碳-碳双键的鞘氨醇类碱)-(碳原子数为26、碳-碳双键为0、且具有1个羟基(具有α-羟基)的脂肪酸)的组合的自由神经酰胺类(即，t18：1-26:0h)。另外，更优选地，在所包含的自由神经酰胺类当中，含量最多的及含量第二多的是上述4种自由神经酰胺中的任意2种。此外，更优选地，在所包含的自由神经酰胺类当中，含量最多的、含量第二多的以及含量第三多的是上述4种自由神经酰胺中的任意3种。另外，更进一步优选地，在所包含的自由神经酰胺类当中，含量最多的、含量第二多的、含量第三多的以及含量第四多的选自上述4种自由神经酰胺。特别地，优选的是，含量最多的为t18：0-24:0h。另外，更优选的是，含量最多的是t18：0-24:0h，含量第二多的是t18：1-24:0h。此外，进一步优选的是，含量最多的是t18：0-24:0h，含量第二多的是t18：1-24:0h，含量第三多的是t18：1-22:0h。另外，更进一步优选的是，含量最多的是t18：0-24:0h，含量第二多的是t18：1-24:0h，含量第三多的是t18：1-22:0h，含量第四多的是t18：1-26:0h。
栗皮提取物中所包含的葡糖基神经酰胺类的种类数没有特别的限制，优选包含多种葡糖基神经酰胺类，例如优选包含3种以上、4种以上或5种以上。在所包含的葡糖基神经酰胺当中，优选的是，50摩尔％以上为鞘氨醇类碱部分的羟基数为3(三羟基鞘氨醇类碱)的自由神经酰胺类，更优选为60摩尔％以上，进一步优选为70摩尔％以上，更进一步优选为80摩尔％以上。
此外，在所包含的葡糖基神经酰胺类当中，含量最多的优选是神经酰胺骨架为(具有3个羟基、碳原子数为18、且具有1个碳-碳双键的鞘氨醇类碱)-(碳原子数为22、碳-碳双键为0、且具有1个羟基(具有α-羟基)的脂肪酸)的组合的葡糖基神经酰胺类(即，t18：1-22:0h)，并且该葡糖基神经酰胺类的含量优选为栗皮提取物中所含的葡糖基神经酰胺的30摩尔％以上，更优选为40摩尔％以上，进一步优选为50摩尔％以上。另外，在所包含的葡糖基神经酰胺类当中，更优选的是，含量最多的为t18：1-22:0h，且含量第二多的及含量第三多的选自以下葡糖基神经酰胺类：神经酰胺骨架为(具有3个羟基、碳原子数为18、且具有1个碳-碳双键的鞘氨醇类碱)-(碳原子数为25、碳-碳双键为0、且具有1个羟基(具有α-羟基)的脂肪酸)的组合的葡糖基神经酰胺类(即，t18：1-25:0h)、以及神经酰胺骨架为(具有3个羟基、碳原子数为18、且具有1个碳-碳双键的鞘氨醇类碱)-(碳原子数为24、碳-碳双键为0、且具有1个羟基(具有α-羟基)的脂肪酸)的组合的葡糖基神经酰胺类(即，t18：1-24:0h)。特别优选的是，含量第二多的为t18：1-25:0h，含量第三多的为t18：1-24:0h。
另外，在栗皮提取物所含的自由神经酰胺及葡糖基神经酰胺的总量当中，鞘氨醇类碱部分的羟基数为3的神经酰胺优选为70摩尔％以上，更优选为80摩尔％以上。
需要说明的是，在将栗皮提取物的总脂质精制以后，通过对该总脂质进行LC-MS分析以得到各个自由神经酰胺类或各个葡糖基神经酰胺类的峰的面积比，并将由该面积比计算出的值作为本文中的自由神经酰胺类的含量(摩尔％)及葡糖基神经酰胺类的含量(摩尔％)。关于LC-MS分析，自由神经酰胺分析通过负离子模式进行，葡糖基神经酰胺分析通过正离子模式进行。
栗皮提取物中所含的自由神经酰胺及葡糖基神经酰胺的重量比(自由神经酰胺/葡糖基神经酰胺)优选为1至10，更优选为1至7，进一步优选为1至5，更进一步优选为1至3，特别优选为1至2。在将栗皮提取物的总脂质精制以后，通过薄层层析(TLC)密度测定法对该总脂质进行定量，由此得到的值的比率作为此处的重量比。
需要说明的是，在涉及上述栗皮提取物中所含的自由神经酰胺及葡糖基神经酰胺的事项中，通过将1个或多个组合，从而能够限定更优选的事项。
栗皮提取物优选是采用水、乙醇、或者水和乙醇的混合液而从栗皮提取的。另外，1,3-丁二醇和丙酮也可用作提取溶剂。当使用水和乙醇的混合液时，其混合容量比率没有特别的限制，优选的是(例如)水：乙醇约为0.1～30:99.9～70，特别优选为95～99.9v/v％的乙醇。
作为用于提取的栗皮，可以使用内皮及外壳中的任一者，可以对它们挑选后进行提取，特别地，也可以在不进行挑选的情况下作为栗皮而进行提取。另外，获得栗皮的栗的品种也没有特别的限制。作为优选品种的一个例子，可列举出栗皮容易与种子部分(可食用部分)剥离的“ぽろたん”。
本发明也包括使用上述提取溶剂而从栗皮提取(制造)上述栗皮提取物的方法。该方法包括采用上述提取溶剂来提取栗皮的步骤。进一步地，在提取步骤前可以包括栗皮干燥步骤及/或栗皮的破碎步骤，另外，在提取步骤后可以包括浓缩固化步骤等。
作为更具体的提取方法，例如可列举出以下方法。首先，将栗皮干燥并粉碎，向粉碎物中加入提取溶剂(例如95v/v％乙醇的含水乙醇)，然后在约30至50℃下静置或搅拌12至24小时并进行提取。随后，进行固液分离处理，除去栗皮并回收提取液。固液分离处理可通过(例如)过滤、离心分离、压榨法(例如压滤)等来进行。溶剂回收率优异的压滤等压榨法是优选的。所得的提取液可以直接用作栗皮提取物，也可以进行浓缩固化后用作固体(粉末状)。浓缩固化可使用(例如)旋转蒸发器等来进行。
如上所述的栗皮提取物的总脂质的精制如下地进行。采用Folch法将对提取液进行浓缩固化而得的固体提取物(粉末提取物)分为水溶性组分和脂溶性组分，将下层(脂溶性组分)回收并进行浓缩固化。更具体地，将粉末提取物溶解于9容量份的氯仿/甲醇(2:1，v/v)中，向其中添加2.25容量份的水并充分搅拌后，进行离心分离，回收脂溶性组分并进行浓缩固化。
栗皮提取物可以包含除了自由神经酰胺及葡糖基神经酰胺以外的其他成分。作为该其他成分，可列举出(例如)栗皮中所含的成分、用于提取操作的成分(特别是提取溶剂)等。更具体地，可列举出(例如)原花色素(单宁酸)、水、乙醇等，没有特别的限制。另外，栗皮提取物中的自由神经酰胺及葡糖基神经酰胺的含量没有特别的限制，可通过进行适当的精制来设定。例如，可例示出0.01至50重量％、0.1至10重量％、或1至5重量％等，没有特别的限制。另外，进一步地，通过提取物的精制条件，能够得到仅包含自由神经酰胺作为神经酰胺的提取物(自由神经酰胺组分)，或者能够得到仅包含葡糖基神经酰胺作为神经酰胺的提取物(葡糖基神经酰胺组分)。本发明也包括这样的自由神经酰胺组分及葡糖基神经酰胺组分。对于该自由神经酰胺组分中所含的自由神经酰胺，优选的是其也同样地适用于关于上述栗皮提取物中所含的自由神经酰胺的说明。另外，对于该葡糖基神经酰胺组分中所含的葡糖基神经酰胺，优选的是其也同样地适用于关于上述栗皮提取物中所含的葡糖基神经酰胺的说明。
需要说明的是，自由神经酰胺组分及葡糖基神经酰胺组分可以(例如)如下所述地获得。也就是说，通过采用丙酮对栗皮提取物(优选为固体，例如粉末状)进行反复提取，由此能够对丙酮可溶的葡糖基神经酰胺与丙酮不溶的自由神经酰胺进行分离精制。此时的溶剂温度优选为(例如)室温(15℃至35℃，特别为20℃至30℃)。或者，通过采用含水乙醇(乙醇为50～90v/v％，特别为50～70v/v％)进行反复提取，由此能够对亲水性高的葡糖基神经酰胺与疏水性高的自由神经酰胺进行分离精制。
如上所述，为了人体肌肤(特别是角质层)的健康(抗老化)，特别地，具有较多(特别是3个或4个)羟基的自由神经酰胺(其中优选为神经酰胺AP)的补充据认为是重要的，另外，为了促进皮肤阻隔功能，神经酰胺的脂肪酸的碳链长度较长(特别为C20以上，C20、C22、C24或C26等)据认为是重要的。根据本发明一个实施方式的栗皮提取物及各个组分包含大量的神经酰胺AP，且包含大量的脂肪酸的碳链长度较长的神经酰胺，因而能够特别地适用于肌肤的功能改善、保湿、抗老化、阻隔功能改善等。更具体地，例如可用于防止皮肤干燥、调节肌肤纹理、赋予肌肤湿润、防止肌肤粗糙、使肌肤光滑、皱纹的改善、干燥性小皱纹的改善等。特别地，增加角质层含水量或减少水分经皮蒸腾量(TEWL)的效果优异，可适用于这样的用途。
此外，根据本发明其他实施方式的栗皮提取物是栗皮丙酮提取物。用于丙酮提取的栗皮可优选使用与上述相同的栗皮。另外，在丙酮提取前，更优选预先进行醇(优选乙醇)提取，然后对所得的栗皮乙醇提取物进行丙酮提取。
作为优选的丙酮提取的一个具体例子，可列举出以下方法：首先使栗皮干燥并进行粉碎，向粉碎物中加入提取溶剂(例如醇，更具体地，例如95v/v％乙醇的含水乙醇)，然后在约30至50℃下静置或搅拌12至24小时以进行醇提取，进一步对该醇提取物进行丙酮提取。
栗皮丙酮提取物表现出了优异的紫外线吸收效果及/或紫外线波长转换效果(更具体而言，例如将紫外线转换为可见光的效果)。因此，该栗皮丙酮提取物以及包含其的组合物可用于紫外线吸收的用途或者紫外线波长转换的用途(优选用于将紫外线转换为可见光)。
此外进一步地，栗皮丙酮提取物通过与包含上述自由神经酰胺及葡糖基神经酰胺的栗皮提取物组合使用，从而也表现出了优异的水分蒸发抑制效果。因此，包含这两种提取物的组合物可用作保湿、抗皮肤老化、改善皮肤阻隔的用途、或者抗紫外线的用途。
上述各个栗皮提取物及各个组分均可适用于化妆品领域。本发明包括含有该栗皮提取物或组分的化妆品组合物。作为该化妆品组合物，可以是上述栗皮提取物或组分自身，也可以是除了栗皮提取物或组分以外还包含载体等其它成分等。
在化妆品领域中使用的、包含上述栗皮提取物或组分的化妆品组合物可如下地进行制造：将被许可用于化妆品的溶剂、基质、载体、添加剂、以及根据需要的被许可用于化妆品的其他成分及材料适当地混合到上述栗皮提取物或组分中，并根据常规方法进行制造。作为该化妆品组合物的形式，可列举出(例如)乳液、化妆水、霜、美容液、粉底、面膜、防晒剂等。这种根据本发明的化妆品组合物可优选地用于(例如)保湿用途、抗皮肤老化用途(例如预防或改善肌肤干燥、肌肤粗糙、肌肤的皱纹/松弛等的用途)、改善皮肤阻隔用途。
或者，该栗皮提取物及各个组分也可适用于食品领域中。本发明包括含有该栗皮提取物或组分的食品组合物。作为该食品组合物，可以是上述栗皮提取物或组分自身，也可以是除了栗皮提取物或组分以外还包含载体等其它成分等。
在这种情况下，作为其他成分，可例示出食品卫生上许可的基质、载体、添加剂、以及根据需要的可用于食品的其他成分及材料。另外，该食品组合物的形式也没有特别的限制，可例示出(例如)加工食品、饮料、健康食品(营养功能食品、特定保健用食品、功能显现性食品等)、补充剂、患者用食品(医院饮食、病人饮食或护理饮食等)等。这些可以通过常规方法进行制备。特别地，当制备酮体产生促进食品组合物作为健康食品(营养功能食品、特定保健用食品、功能显现性食品等)或补充剂时，为了容易进行连续的摄取，优选以(例如)颗粒、胶囊、片剂(包括咀嚼片等)、饮料(饮品)等形式进行制备，其中，从摄取便利性这方面考虑，胶囊、片剂、饮料等形式是优选的，但是也不特别地限定于这些。
需要说明的是，该食品组合物也包括食品添加剂组合物，特别是当用作食品添加剂组合物时，作为其形式，可列举出(例如)液体、粉末、薄片、颗粒、浆料等。更具体地，可例示出调味料(酱油、调味汁、番茄酱、调味品等)、薄片(撒料)、烤肉酱、香料、卤浆料(咖喱浆料等)等。
或者，该栗皮提取物及各个组分也可适用于药物领域中。本发明包括含有该栗皮提取物或组分的药物组合物。作为该药物组合物，可以是上述栗皮提取物或组分自身，也可以是除了栗皮提取物或组分以外还包含载体等其它成分等。
在药物领域中使用的、包含上述栗皮提取物或组分的药物组合物可如下地进行制造：将被许可用于药物的溶剂、基质、载体、添加剂、以及根据需要的被许可用于药物的其他成分及材料适当地混合到上述栗皮提取物或组分中，并根据常规方法进行制造。作为该药物组合物的形式，可制备为(例如)液体制剂、混悬剂、乳剂、乳液剂、凝胶剂、霜剂、片剂、丸剂、粉剂、颗粒剂、胶囊剂等制剂。特别地，优选用作外用制剂(外用组合物)或口服制剂(口服组合物)。
上述化妆品组合物、食品组合物及药物组合物中的栗皮提取物或组分的含量没有特别的限制，可适宜地进行设定。例如，可例示出100～0.01重量％、或99～0.1重量％。
上述化妆品组合物及药物组合物的适用对象也没有特别的限制，特别适合于在意由年龄增长所带来的肌肤衰老(下垂、皱纹、松弛、肌肤粗糙等)的人士。例如，适合于20岁以上、30岁以上、40岁以上、50岁以上或60岁以上的女性。
需要说明的是，在本说明书中，术语“包含”包括“基本上由...组成”，也包括“由......组成”。
实施例
以下对本发明进行具体说明，但是本发明不限于以下的例子。需要说明的是，在以下的例子中，除非另有说明，否则神经酰胺AP表示神经酰胺AP1，神经酰胺DP表示神经酰胺AP2。另外，乙醇的％符号表示乙醇水溶液中的乙醇体积％。例如，95％乙醇表示95v/v％乙醇的乙醇水溶液。
栗皮的制备
在研究中使用了栗皮容易与种子部分(可食用部分)剥离的品种“ぽろたん”。栗皮与种子的重量比例为约30:70。手工剥离后的内皮和外壳的平均水分比率分别为约30％。干燥后的栗皮的内皮和外壳的平均重量比例为68:32。
外壳和内皮的分析
将外壳和内皮粉碎，向各60g中添加4倍容量的95％乙醇，在保持40℃的同时搅拌18小时以进行提取。抽滤(Advantech No.1滤纸)后，通过旋转蒸发器将滤液浓缩固化。外壳和内皮的提取物收率分别为5.0％和0.8％。对于内皮，向过滤残渣中再次添加80ml的95％乙醇，并进行同样的操作。此时的提取物收率为0.3％。外壳提取物为红棕色粉末，推测其主成分为原花青素(单宁酸)。
采用Folch法从各个提取物分出水溶性组分和脂溶性组分。也就是说，将0.48g的外壳提取物及0.44g的内皮提取物分别溶解于9ml的氯仿/甲醇(2：1，v/v)中，添加2.25ml的水，充分搅拌后，进行离心分离(3000rpm，5分钟)。当分取下层并进行浓缩固化时，以来自外壳提取物的组分和来自内皮提取物的组分计，分别得到了17mg和142mg的总脂质(TL)样品。在下文中，有时将由此获得的总脂质(样品)称为TL。每个提取物的TL收率分别为3.5％及32.2％。
以氯仿/甲醇/水(90：10：1，v/v/v)作为展开溶剂，采用硅胶薄层层析(以下TLC)对所得的TL进行分析(图3)。涂布50％硫酸后进行加热从而进行检测。外壳TL示于条带1，内皮TL示于条带2。条带4的斑点是来自于玉米的葡糖基神经酰胺和α木蜡基-植物鞘氨醇(神经酰胺AP)。两种皮示出了共同的脂质图案，并且包括通常包含在植物中的甾醇类(甾醇(S)、酰基甾基葡糖苷(ASG)、甾基葡糖苷(SG))以及葡糖基神经酰胺(GC)。
进一步地，在酰基甾基葡糖苷与甾基葡糖苷的斑点之间检测到了两个颜色深的斑点。据判断，它们为自由神经酰胺(Cer)，上面为α(2)-羟基脂肪酸-植物鞘氨醇(相当于神经酰胺AP(也称为神经酰胺6II))，下面的自由神经酰胺为2,3-二羟基脂肪酸-植物鞘氨醇(神经酰胺DP)。
栗皮的分析
为了确认栗的外壳和内皮这两者包含自由神经酰胺和葡糖基神经酰胺，对整个栗皮进行提取试验。采用Milsar将1.02kg的干燥栗皮粉碎，添加3.5L的95％乙醇并搅拌5小时进行提取。随后，进行抽滤(Advantech No.1滤纸)，通过旋转蒸发器将滤液浓缩固化。固化后得到了31.9g(3.1％)的红棕色粉末提取物。提取物中的TL含量为12.9％。同样地，对所得的TL进行TLC分析，确认到了自由神经酰胺和葡糖基神经酰胺的斑点(图3，条带3)。
鞘脂的定量
通过TLC密度测定法来对TL中的各个鞘脂的含量进行定量。作为标准试剂，使用了来自玉米的葡糖基神经酰胺和a-木蜡基-植物鞘氨醇(Avanti Polar lipids)。展开溶剂使用了氯仿/甲醇/水(90：10：1，v/v/v)。关于栗皮的葡糖基神经酰胺含量，其在每单位TL中为140mg/g，在每单位提取物中为18mg/g，在每单位原料中为0.56mg/g。将自由神经酰胺含量定为神经酰胺AP和神经酰胺DP的合计值，其在每单位TL中为242mg/g(AP 112mg；DP130mg)，在每单位提取物中为31.2mg/g，在每个原料中为0.97mg/g。
需要说明的是，据报道，作为其他植物的葡糖基神经酰胺的含量，桃为1.7mg/g，苹果榨汁残渣为0.9mg/g，米糠为0.2mg/g等。
LC-MS分析
接下来，通过LC-MS来进行鞘脂的结构分析。分析条件如下所述。
装置：岛津Prominence-i LC-2030C；检测器：岛津LCMS-2020ESI、扫描模式m/z650–900(葡糖基神经酰胺)、m/z 500–800(自由神经酰胺)、界面温度：350℃、喷雾器流速1.5L/分钟、加热块的温度：200℃、A液：5mM甲酸铵/甲醇、B液：5mM甲酸铵、等度条件(A/B＝98：2)、柱子：Waters SunFireTM(C18、5微米、4.6×250毫米)，流速：1毫升/分钟
通过LC-MS对栗皮提取物的鞘脂进行结构分析。需要说明的是，在LC-MS分析中，使用总脂质，并切换LC-MS的模式，由此分开地对葡糖基神经酰胺和自由神经酰胺进行分析(也就是说，若为正模式则容易使葡糖基神经酰胺离子化，若为负模式则容易使自由神经酰胺离子化，通过利用这一点，从而采用正离子模式分析葡糖基神经酰胺，采用负离子模式分析自由神经酰胺。)。另外，也考虑到了葡糖基神经酰胺和自由神经酰胺的保留时间不同而对其进行了分析。作为葡糖基神经酰胺，检测出了7种峰，作为自由神经酰胺，检测出了13种峰(图4)。将由质谱分析(以及与ECN(等效碳数；equivalent carbon number)和标准品的比较)的结果而判定的分子种类作成表并示出于图5中。需要说明的是，图5中表示分子种类的缩写示出了神经酰胺骨架的鞘氨醇类碱-脂肪酸，因而例如t18:1表示三羟基碱/碳原子数18/双键1个，26:0h表示脂肪酸碳原子数26/双键0个/α羟基。葡糖基神经酰胺的7种峰当中的6种是被称为植物型的三羟基碱。最大成分的4-羟基鞘氨醇(Sphingenin)-α羟基山萮酸(t18:1-22:0h)占总离子色谱(TIC)的面积比例为52％，也包含有其他的C24至C26的超长链脂肪酸结合型。
通过质谱分析，从自由神经酰胺的13种峰中至少鉴定出18种神经酰胺(图5)。鞘氨醇类碱均为三羟基碱，并且存在饱和型和8-不饱和型。不饱和型基本上是反式的。脂肪酸由链长为C22至C27的超长链脂肪酸构成。确认到了链长为C26以上的5种神经酰胺，占总量的20％以上。
需要说明的是，对于基于鞘氨醇类碱的碳-碳双键的结构异构体(顺式或反式)，通过GC分析如下地进行了确认。采用1M HCl甲醇溶液2ml在70℃下将5mg神经酰胺处理18小时，使得全部鞘氨醇类碱游离。采用2ml己烷提取并除去脂肪酸3次，采用6M的NaOH调整为pH10，然后添加2ml水并采用2ml乙醚提取鞘氨醇类碱3次。将游离的鞘氨醇类碱作成三甲基甲硅烷基醚衍生物并供给至GC分析。相比于顺式体，反式体的保留时间更短从而更快地检出，通过利用这一点，确认了顺式体及反式体(分析条件，GC：Agilent 6890N，柱子：CP-Sil88)。
一般而言，已知植物葡糖基神经酰胺中包含有大量的4,8-鞘氨二烯醇及8-鞘氨醇这样的二羟基碱，且脂肪酸链长为22以上的是微量成分，但是由栗皮得到的神经酰胺包含大量的三羟基鞘氨醇类碱，且包含大量的碳链长度为22以上的脂肪酸，因而可知其与现有已知的植物葡糖基神经酰胺的组成具有显著的差异。
化学合成的神经酰胺(例如用作化妆品原料)一般由C18脂肪酸构成，但是据报道，若人体角质神经酰胺中C18脂肪酸神经酰胺的比例增加，则阻隔功能降低。另一方面，据报道，若超长链脂肪酸的比例增加，则阻隔功能提高，特别是C26神经酰胺在阻隔功能中起到重要作用。因此，来自栗皮的神经酰胺被认为能够用于提高或改善肌肤的阻隔功能。
另外特别地，为了肌肤功能，神经酰胺中的脂肪酸及鞘氨醇类碱优选是饱和型的，当具有碳-碳双键时，神经酰胺中的脂肪酸及鞘氨醇类碱优选是反式的，在来自栗皮的神经酰胺中，脂肪酸中富含饱和型脂肪酸，并且鞘氨醇类碱为饱和型或反式的，从这些方面来看，来自栗皮的神经酰胺被认为是有用的。
栗的部位之间的差异的研究
接下来，为了进行栗的果实(可食用部分)的鞘脂的检测，与上述同样地提取TL，并进行了碱处理。也就是说，称取25mg的TL，添加0.4M甲醇性KOH 3ml，在37℃下处理40分钟。恢复至室温后，添加6ml氯仿和2.25ml水并进行搅拌，然后进行离心分离并回收下层。采用旋转蒸发器将来自下层的回收液干燥固化，从而制备了碱处理物。若采用TLC进行检测，则在栗的果实中检测到微量的葡糖基神经酰胺，但是在栗的果实中完全没有检测到自由神经酰胺(图6)。由此可知，自由神经酰胺特异性地包含在栗的皮(外皮：内皮及外壳)中。需要说明的是，进行碱处理的原因在于：单糖基甘油二酯(MGDG)这样的甘油糖脂包含在栗的果实中，并且在TLC上正好位于ASG与SG之间的自由神经酰胺的位置处，因而提前将其分解。
其他植物的分析
对于除了栗以外的其他植物种子的外皮等也进行了脂质分析。通过常规方法使用氯仿/甲醇(2:1，v/v)从杏仁、开心果及七叶树的果实的各个部位制备TL。当采用TLC检测TL时，基本上都没有检测出鞘脂(图7)。
精制操作1
通过乙醇提取从1kg栗皮中得到提取物，分取3g该提取物，将其充分地悬浮于10ml水中，进行离心分离(4℃、15分钟、5000rpm)，然后除去液体层。进行该操作3次。采用66％乙醇10ml搅拌沉淀物，同样地进行冷却并且进行离心分离。进行该操作3次。采用丙酮5ml搅拌沉淀物，同样地进行冷却并进行离心分离。进行该操作2次。采用真空干燥机对沉淀物进行干燥处理，得到了0.06g的精制提取物(1)。
需要说明的是，采用丙酮进行搅拌，将离心分离后的上清液(即，可溶于丙酮的部分)回收，并用于下述紫外线吸收组合物的制备。
精制操作2
通过乙醇提取从1kg栗皮2得到提取物，分取3g该提取物，将其充分地悬浮于10ml水中，进行离心分离(4℃、15分钟、5000rpm)，然后除去液体层。进行该操作3次。向沉淀物中添加0.4M NaOH/水10ml，并在37℃下处理1小时。随后，在15℃下进行离心分离，采用10ml水将沉淀物洗净3次。向沉淀物中添加丙酮5ml，在4℃下进行离心分离15分钟，并除去液体层。采用真空干燥机对沉淀物进行干燥处理，得到了0.19g的精制提取物(2)。
对所得的精制提取物进行了TLC分析(图8)。在精制提取物(1)和(2)中，除了葡糖基神经酰胺以外，还确认到了自由神经酰胺的斑点。当通过TLC密度测定法进行定量时，精制提取物(1)的葡糖基神经酰胺的量为15.8％，自由神经酰胺的量为22.7％。
对皮肤的影响的研究
向精制提取物(1)中进一步添加乙醇及活性炭，并进行过滤及脱色，然后采用真空干燥机进行干燥处理。进一步地，采用冷丙酮将所得的干燥产物洗净，然后采用真空干燥机进行干燥处理。将所得的干燥产物粉碎，过筛，将所得的粉末作为试验栗神经酰胺。
通过TLC密度测定法对该试验栗神经酰胺进行检查，发现人体型神经酰胺的含量为30至50摩尔％，植物甾醇的含量为30至60摩尔％，葡糖基神经酰胺的含量为10至30摩尔％。
将该试验栗神经酰胺溶解于试验溶剂中，使其成为含有0.1质量％浓度的试验栗神经酰胺的试验栗神经酰胺溶液。需要说明的是，试验溶液为水及1,3-丁二醇的混合溶液(混合质量比为73:25)，并使用了含有2质量％的表面活性剂(聚氧乙烯氢化蓖麻油)的溶液。由于神经酰胺是难以水溶性的，因而需要使用表面活性剂来进行乳化。
以每人80μL的方式，将试验栗神经酰胺溶液分别塗布于10名试验者的前臂内侧部。然后，在涂布前及涂布1小时后测定皮肤(角质层)含水量以及水分经皮蒸腾量(TEWL)。
皮肤含水量测定使用CORNEOMETER CM 825，水分经皮蒸腾量测定使用TewameterTM300(均为Courage+Khazaka(德国)公司制)，并分别进行测定。需要说明的是，试验在环境调节室(温度22±2℃，湿度50±10％)中进行，对于每个部位，将测定部分偏离约5mm并测定3次以上，计算出平均值。
另外，将试验溶剂作为无效对照剂，此外，将作为试验栗神经酰胺的替代品的市售神经酰胺AP溶解于试验溶剂中，并将所得的溶液作为试验合成神经酰胺AP溶液，然后进行与上述相同的研究。该市售的神经酰胺AP是纯度99％的神经酰胺AP1(更具体地，为神经酰胺6II)。
研究结果示出于图9中。需要说明的是，图9中的“涂布后”表示涂布1小时后。另外，在该研究中，使用了相同质量的市售神经酰胺AP及栗神经酰胺。更具体地，都使用了相同量的0.1质量％溶液来进行研究(如上所述，由于栗神经酰胺中包含植物甾醇，结果据推测栗神经酰胺中所含的神经酰胺的量比市售神经酰胺AP中所含的神经酰胺的量少)。
紫外线吸收组合物的制备
在精制操作1的步骤中，采用丙酮搅拌、并将离心分离后的离心上清液(即丙酮可溶部分)回收并浓缩固化，得到了浓缩固化物0.12g。将其悬浮于2ml乙醇中，采用No.1的滤纸进行自然过滤。在冰箱中将滤液冷却之后，再次采用No.1的滤纸进行自然过滤。将滤纸内的固体成分(乙醇不溶组分)回收并合并，并且进行干燥，由此得到了12mg的固体成分。将该固体成分悬浮于6ml的氯仿/甲醇(2：1)中，添加1.5ml水后进行搅拌，然后进行离心分离。将下层(氯仿层)回收并浓缩固化，得到了8.4mg的固体成分。有时将该固体成分称为“栗UVP”。
紫外线吸收试验
将市售的紫外线A波(UVA)吸收剂及紫外线B波(UVB)吸收剂分别溶解于乙醇中，用作目标对象。需要说明的是，将该乙醇溶液的各个吸收剂浓度设为10ppm或20ppm。另外，使用二乙基氨基羟基苯甲酰苯甲酸己酯(Uvinul A Plus Granular，BASF公司制)作为市售的紫外线A波(UVA)吸收剂，使用对甲氧基肉桂酸2-乙基己酯(ESCALOL 557，Ashland公司制)作为市售的紫外线B波(UVB)吸收剂。
制备栗UVP的40ppm乙醇溶液，并将其用作试验样品。
使用分光光度计(V-630BIO型，日本分光)，以乙醇作为空白，通过光谱测定以进行紫外线的吸光度测定。结果示出于图10中。栗UVP的40ppm乙醇溶液示出了相当于市售合成UVA吸收剂约12.5ppm的紫外线吸收能力。
紫外线照射试验
在暗处对市售UVA吸收剂的20ppm乙醇溶液和栗UVP的40ppm乙醇溶液进行254nm(1013μW/cm2)或365nm(1407μW/cm2)的紫外线照射(ハンディーUV灯，“アズワン”制)，并进行数码照相。结果示出于图11中。在图11中，将市售UVA吸收剂的20ppm乙醇溶液标记为“市售”，将栗UVP的40ppm乙醇溶液标记为“栗”。在栗UVP乙醇溶液中，通过365nm波长的UV照射，确认到了可见光。由此表示栗UVP将紫外光转换成可见光。
申请人不希望进行限制性的解释，但是从上述结果可推测，栗UVP被紫外线激发，通过激发光而位移至波长较大的可见光，并释放出作为荧光的能量。
水分蒸发抑制试验
将介质(vehicle)、0.05质量％栗神经酰胺溶液、0.05质量％栗UVP溶液、0.05质量％栗神经酰胺+0.05质量％栗UVP溶液这四者分别取5g添加到端口内径为14mm的15ml玻璃容器中，在电子天平上静置(室温23℃、湿度50％)以测定由水分蒸发造成的重量变化，算出1小时后的数值(将对照组设为1的相对值)。结果示出于图12中。在图12中，上述栗神经酰胺溶液标记为Cer，上述栗UVP溶液标记为UVP。在任何一种溶液中，溶剂组成均设为3％的表面活性剂(聚氧乙烯氢化蓖麻油)、30％的丁二醇、余量为水。需要说明的是，所使用的栗神经酰胺是在上述“对皮肤的影响的研究”中所制备的试验栗神经酰胺。
将介质(vehicle)设为没有添加评价成分(即溶剂本身)。当将对照组(即介质(vehicle))的水分蒸发量设为1时，在栗神经酰胺组中蒸发比例减少至0.84(减少了0.16)，在栗UVP组中减少至0.92(减少了0.08)，在栗神经酰胺和栗UVP混合组中减少至0.55(减少了0.45)。在混合组中示出了相比于单一组的总数值为1.87倍的较高数值(0.45/(0.16+0.08))。

Claims (7)

1.一种栗皮提取物，其包含自由神经酰胺及葡糖基神经酰胺。
2.根据权利要求1所述的提取物，其中，所包含的自由神经酰胺及葡糖基神经酰胺的重量比(自由神经酰胺/葡糖基神经酰胺)为1至10。
3.根据权利要求1或2所述的提取物，其中，在所包含的自由神经酰胺当中，50摩尔％以上是鞘氨醇类碱部分的羟基数为3的自由神经酰胺。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的提取物，其中，在所包含的葡糖基神经酰胺当中，50摩尔％以上是鞘氨醇类碱部分的羟基数为3的葡糖基神经酰胺。
5.一种组分，其为栗皮提取物的自由神经酰胺组分，
在所包含的自由神经酰胺当中，50摩尔％以上是鞘氨醇类碱部分的羟基数为3的自由神经酰胺。
6.一种组分，其为栗皮提取物的葡糖基神经酰胺组分，
在所包含的葡糖基神经酰胺当中，50摩尔％以上是鞘氨醇类碱部分的羟基数为3的葡糖基神经酰胺。
7.一种化妆品组合物、食品组合物或药物组合物，其包含权利要求1至4中任一项所述的提取物、或者权利要求5或6所述的组分。
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