CN109528741A - 包含鸢尾黄素及鸢尾黄素糖苷的组合物 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种具有优异的促进组织分化的作用或促进体脂肪分解的作用、改善肤质的作用、改善肝功能的作用的组合物。本发明的组合物优选以质量比1：10以上的量包含鸢尾黄素及鸢尾黄素糖苷。优选所述鸢尾黄素糖苷包含在鸢尾黄素上键结1个糖而成的糖苷及在鸢尾黄素上键结2个糖而成的糖苷，且前者与后者的质量比为1：0.01以上且7.5以下。还优选在鸢尾黄素上键结1个糖而成的糖苷为鸢尾苷，在鸢尾黄素上键结2个糖而成的糖苷为鸢尾黄素‑7‑O‑木糖葡萄糖苷。

Description

包含鸢尾黄素及鸢尾黄素糖苷的组合物
背景技术
已知鸢尾黄素(Tectorigenin)或鸢尾黄素的糖苷及衍生物(鸢尾黄素类)是存在于鸢尾科或豆科植物中的类黄酮之一，且会使去乙酰化酶(Sirtuin)活化(参照专利文献1)，使 Bmal1基因的表达活化等(参照专利文献2)。鸢尾黄素类由于包含在植物中，所以认为安全性相对高，容易日常摄取，但关于其活性或功能，尚未明确之处也多。
[现有技术文献]
[专利文献]
[专利文献1]日本专利特开2006-298876号公报
[专利文献2]日本专利特开2013-56866号公报
发明内容
[发明要解决的问题]
因此，在本发明中，为了找出鸢尾黄素类的新颖用途及功能，进行了各种研究。
[解决问题的技术手段]
本发明人等针对鸢尾黄素类的作用效果进行了努力研究，结果发现，通过将鸢尾黄素类中作为糖苷配基(Aglycone)的鸢尾黄素与鸢尾黄素的糖苷进行组合，令人吃惊的是，减少脂肪、抗肥胖、促进组织分化、促进脂肪分解、提高角质层水分量、提高皮肤弹力、抑制皮肤水分蒸散或改善肝功能等鸢尾黄素与鸢尾黄素的糖苷原本所具有的功能飞跃性地提高。
即，本发明的一实施方式涉及一种减少脂肪用组合物，其包含鸢尾黄素及鸢尾黄素糖苷。
另外，本发明的一实施方式涉及一种抗肥胖用组合物，其包含鸢尾黄素及鸢尾黄素糖苷。
另外，本发明的一实施方式涉及一种促进组织分化用组合物，其包含鸢尾黄素及鸢尾黄素糖苷。
另外，本发明的一实施方式涉及一种促进脂肪分解用组合物，其包含鸢尾黄素及鸢尾黄素糖苷。
另外，本发明的一实施方式涉及一种用于提高角质层水分量、提高皮肤弹力或抑制皮肤水分蒸散的组合物，其包含鸢尾黄素及鸢尾黄素糖苷。
另外，本发明的一实施方式涉及一种改善肝功能用组合物，其包含鸢尾黄素及鸢尾黄素糖苷。
另外，本发明的一实施方式涉及一种组合物，其包含鸢尾黄素及鸢尾黄素糖苷。
本发明具有以下[1]至[10]的构成。
[1]一种组合物，其包含鸢尾黄素及鸢尾黄素糖苷。
[2]根据[1]所述的组合物，其中以质量比为1：10以上的量包含鸢尾黄素及鸢尾黄素糖苷。
[3]根据[1]或[2]所述的组合物，其中所述鸢尾黄素糖苷包含在鸢尾黄素上键结1个糖而成的糖苷及在鸢尾黄素上键结2个糖而成的糖苷，在鸢尾黄素上键结1个糖而成的糖苷与在鸢尾黄素上键结2个糖而成的糖苷的质量比为1：0.01以上且7.5以下。
[4]根据[3]所述的组合物，其中所述在鸢尾黄素上键结1个糖而成的糖苷为鸢尾苷，所述在鸢尾黄素上键结2个糖而成的糖苷为鸢尾黄素-7-O-木糖葡萄糖苷。
[5]一种根据[1]至[4]中任一项所述的组合物用以制造减少脂肪用组合物的应用。
[6]一种根据[1]至[4]中任一项所述的组合物用以制造抗肥胖用组合物的应用。
[7]一种根据[1]至[4]中任一项所述的组合物用以制造促进组织分化用组合物的应用。
[8]一种根据[1]至[4]中任一项所述的组合物用以制造促进脂肪分解用组合物的应用。
[9]一种根据[1]至[4]中任一项所述的组合物用以制造用于提高角质层水分量、提高皮肤弹力或抑制皮肤水分蒸散的组合物的应用。
[10]一种根据[1]至[4]中任一项所述的组合物用以制造改善肝功能用组合物的应用。
[发明效果]
根据本发明，能够提供一种减少脂肪用组合物，其包含鸢尾黄素及鸢尾黄素糖苷。另外，根据本发明，能够提供一种抗肥胖用组合物，其包含鸢尾黄素及鸢尾黄素糖苷。另外，根据本发明，能够提供一种促进组织分化用组合物，其包含鸢尾黄素及鸢尾黄素糖苷。另外，根据本发明，能够提供一种促进脂肪分解用组合物，其包含鸢尾黄素及鸢尾黄素糖苷。另外，根据本发明，能够提供一种用于提高角质层水分量、提高皮肤弹力或抑制皮肤水分蒸散的组合物，其包含鸢尾黄素及鸢尾黄素糖苷。另外，根据本发明，能够提供一种改善肝功能用组合物，其包含鸢尾黄素及鸢尾黄素糖苷。另外，根据本发明，能够提供一种组合物，其包含鸢尾黄素及鸢尾黄素糖苷。根据本发明，能够提供一种所述各作用优异的组合物。
附图说明
图1是表示实施例及比较例中的肌肉分化标记物的表达量的图表。
图2是表示实施例及比较例中的ALP(alkaline phosphatase，碱性磷酸酶)活性的图表。
图3是表示实施例及比较例中的促进脂肪分解的作用的图表。
图4是表示实施例及比较例中的改善肝功能的作用的图表。
图5是表示实施例中的角质层水分量的图表。
图6是表示实施例中的皮肤水分蒸散量的图表。
图7是表示实施例中的皮肤弹力的图表。
具体实施方式
以下，列举本发明的实施方式，对本发明进一步详细地进行说明，但本发明并不限定于这些。以下，在本发明中，将包含鸢尾黄素及鸢尾黄素糖苷的组合物、及包含这些的减少脂肪用组合物、抗肥胖用组合物、促进组织分化用组合物、促进脂肪分解用组合物、用于提高角质层水分量、提高皮肤弹力或抑制皮肤水分蒸散的组合物、改善肝功能用组合物统称为“本发明的组合物”。
(鸢尾黄素)
本发明中所使用的鸢尾黄素是由分子式C16H12O6表示，也有称为5,7-二羟基-3-(4-羟基苯基)-6-甲氧基-4H-1-苯并吡喃-4-酮 (5,7-Dihydroxy-3-(4-hydroxyphenyl)-6-methoxy-4H-1-benzopyran-4-one)或者6-甲氧基 -5,7-二羟基-3-(4-羟基苯基)-4H-1-苯并吡喃-4-酮 (6-Methoxy-5,7-dihydroxy-3-(4-hydroxyphenyl)-4H-1-benzopyran-4-one)的情况。以下还将鸢尾黄素记载为TGE。鸢尾黄素的化学式如下所示。
[化1]
(鸢尾黄素糖苷)
作为鸢尾黄素糖苷(以下也称为TGE糖苷)，是将所述TGE中1处或2处的氢取代为糖而成，例如可列举：键结选自葡萄糖、木糖、山梨糖、半乳糖、洋芹糖、鼠李糖的 1种或2种以上的糖而成的糖苷。就提高促进组织分化、促进脂肪分解、改善肝功能、改善肤质等本发明的效果的观点而言，优选在TGE上键结选自葡萄糖、木糖的1种或2 种以上的糖而成的糖苷。在糖苷中，这些糖通常与TGE的4位及/或7位的羟基键结，就更确实地获得所述效果的方面或糖苷的获取容易性的方面而言，优选与7位的羟基键结。TGE糖苷中的糖的数量(也称为糖的键结数)例如可列举1个以上，就提高所述效果的观点而言，糖的键结数优选1个～3个，更优选1～2个。这里所谓糖的数量，是指单糖单元的数量。作为TGE糖苷，可仅使用1种，但优选组合2种以上。TGE及TGE糖苷在本发明的组合物中，可为有机合成品，也可从植物等萃取。TGE及TGE糖苷可为粉末状等固体状，也可为溶解于水或有机溶剂中的状态。TGE及TGE糖苷也可仅以它们的混合物的形式存在，还可为溶解、分散或混合至其它物质中的状态。
作为在TGE上键结1个糖而成的糖苷，例如可列举：鸢尾苷(Tectoridin)、鸢尾苷4'-葡糖苷。另外，作为在TGE上键结2个糖而成的糖苷，可列举鸢尾黄素-7-O-木糖葡萄糖苷(tectorigenin-7-O-xylosylglucoside)。这里，所谓在TGE上键结n个糖，可键结n 个糖的连结体，也可键结于鸢尾苷的不同部位的糖的合计数为n个。所谓鸢尾苷，是在 TGE的7位上键结1个葡萄糖而成的糖苷，例如也表示为鸢尾黄素7-O-β-D-葡萄糖苷或 7-(β-D-吡喃葡萄糖氧基)-4',5-二羟基-6-甲氧基异黄酮 (7-(β-D-Glucopyranosyloxy)-4',5-dihydroxy-6-methoxyisoflavone)等。所谓鸢尾苷4'-葡糖苷，是在TGE的4位上键结1个葡萄糖而成的糖苷，例如也称为鸢尾黄素4'-O-β-D-葡萄糖苷或3-[4-(β-D-吡喃葡萄糖氧基)苯基]-5,7-二羟基-6-甲氧基-4H-1-苯并吡喃-4-酮 (3-[4-(β-D-Glucopyranosyloxy)phenyl]-5,7-dihydroxy-6-methoxy-4H-1-benzopyran-4-one) 等。鸢尾黄素-7-O-木糖葡萄糖苷是在TGE的7位上键结1个葡萄糖，且在该葡萄糖上进而键结木糖而成的糖苷，例如也称为6”-O-木糖鸢尾苷(6”-O-Xylosyltectoridin)。例如，鸢尾苷(以下也称为TD)具有以下化学式的结构。
[化2]
另外，例如鸢尾黄素-7-O-木糖葡萄糖苷(以下也称为TGXG)具有以下化学式的结构。式中，Glu是葡萄糖基，Xyl是木糖基。
[化3]
在本发明中，就所述效果优异的方面而言，优选TGE糖苷包含在TGE上键结1个糖而成的糖苷及在TGE上键结2个糖而成的配合体。在TGE糖苷包含在TGE上键结1 个糖而成的糖苷及在TGE上键结2个糖而成的配合体的情况下，在TGE上键结1个糖而成的糖苷与在TGE上键结2个糖而成的糖苷的质量比优选前者：后者为1：0.01以上且7.5以下。该质量比为1：0.01以上有如下优点：能够获得本发明的高作用，并且将 TD等在TGE上键结1个糖而成的糖苷的量限制为一定量。另外，通过使该质量比为1： 7.5以下，能够进一步提高所述效果。就这些观点而言，在TGE上键结1个糖而成的糖苷与在TGE上键结2个糖而成的糖苷的量比优选前者：后者为1：0.01以上且5以下，尤其优选1：0.1以上且2.5以下。
另外，作为TGE糖苷，就更确实地提高所述效果的观点、及糖苷的获取容易性等观点而言，也优选包含TD作为在TGE上键结1个糖而成的糖苷，并且包含TGXG作为在TGE上键结2个糖而成的配合体，且TD与TGXG的调配比为所述优选比率1：0.01 以上且7.5以下。TD与TGXG的调配比尤其优选1：0.01以上且5以下，尤其优选1： 0.1以上且2.5以下。
在本发明中，关于TGE与TGE糖苷的量比，并没有特别限制，在将TGE与TGE 糖苷以特定比率组合的情况下，能够获得尤其优异的效果。在TGE糖苷相对于TGE的质量比为1：10以上的情况下，促进脂肪分解的作用或改善肝功能的作用飞跃性地提高。进而，就使促进脂肪分解的作用或改善肝功能的效果变得尤其优异的观点而言，TGE与 TGR糖苷的质量比更优选1：13以上，进而优选1：16以上，尤其优选1：18以上。另外，发现就使减少脂肪、抗肥胖、促进组织分化、提高角质层水分量、提高皮肤弹力或抑制皮肤水分蒸散的效果变得尤其优异的观点而言，也优选将TGE与TGE糖苷的质量比设为所述特定比率。本发明的组合物可将所合成的鸢尾黄素及鸢尾黄素糖苷组合而调配，也可为鸢尾科的射干(Belamcandachinensis)或豆科的葛(粉葛(Pueraria thomsonii)、野葛(Pueraria lobata)、葛藤(Pueraria thunbergiana)等)的花部等植物的萃取物。作为植物的萃取物，尤其优选豆科的葛的花部的萃取物。另外，可在植物的萃取物中添加有机合成品而制备，也可将源自多种植物的萃取物组合而制备，还可将有机合成品组合而制备。
关于TGE与TGE糖苷的质量比，就防止由TGE糖苷引起的皮肤炎、呕吐、下痢、肠胃炎等副作用的观点而言，优选将TGE糖苷的量设为一定以下。就该观点而言，优选将TGE与TGE糖苷的质量比设为优选1：500以下、更优选1：250以下、进而优选 1：100以下、尤其优选1：50以下。
就提高上述效果的观点而言，作为TGE与TGE糖苷的质量比、以及在TGE上键结 1个糖而成的糖苷与在TGE上键结2个糖而成的糖苷的质量比的组合，优选TGE与TGE 糖苷的质量比为1：10以上，且在TGE上键结1个糖而成的糖苷与在TGE上键结2个糖而成的糖苷的质量比为1：0.01以上且7.5以下。该组合中质量比或TGE糖苷的优选例已经如上所述。
本发明的组合物中的TGE及TGE糖苷的量的测定能够利用HPLC(High performanceliquid chromatography，高效液相层析)法定量地或定性地确认。用来供于HPLC的试样是通过适当去除杂质或调整浓度等公知的方法制备。
本发明的组合物只要以特定比率包含TGE及TGE糖苷，那么就会发挥尤其优异的效果，就更进一步提高减少脂肪、抗肥胖、促进组织分化、促进脂肪分解、提高角质层水分量、提高皮肤弹力、抑制皮肤水分蒸散或改善肝功能的效果的观点而言，尤其优选包含赋形剂。作为赋形剂，例如可列举：还原麦芽糖、还原帕拉金糖(reduced palatinose)、糊精、难消化性糊精、纤维素、聚葡萄糖、淀粉、环糊精、乳糖、葡萄糖、砂糖、还原麦芽糖、麦芽糖、山梨糖醇、赤藓糖醇、木糖醇、乳糖醇、甘露糖醇。其中，就提高本发明的效果的观点而言，尤其优选还原麦芽糖、还原帕拉金糖、糊精、难消化性糊精、纤维素、聚葡萄糖。
另外，就更进一步提高减少脂肪、抗肥胖、促进组织分化、促进脂肪分解、提高角质层水分量、提高皮肤弹力、抑制皮肤水分蒸散或改善肝功能的效果的观点而言，本发明的组合物尤其优选包含油脂类。作为油脂类，例如可列举：红花油、橄榄油、菜籽油、棕榈油、芝麻油、大豆油、紫苏油、亚麻仁油、洋甘菊油、米糠油、小麦胚芽油、牛油树油脂、蓖麻油、葵花籽油、澳洲胡桃油、糙米胚芽油、山茶油、玉米油、鱼油、椰子油、长链/中长链/短链脂肪酸甘油三酯、二酰基甘油酯、以及这些油脂类的氢化物等。其中，就提高本发明的效果的观点而言，尤其优选红花油、橄榄油、菜籽油、棕榈油、芝麻油、大豆油。
本发明的组合物除所述以外，还可在无损本发明的效果的范围内含有通常所使用的其它成分。作为这种成分，可列举：各种结合剂、光泽剂、润滑剂、稳定剂、稀释剂、增量剂、增粘剂、乳化剂、抗氧化剂、pH值调整剂、着色料、香料、添加剂等。其它成分的含量能够视本发明的组合物的形态等而适当地选择。
本发明的组合物能够用作外用或口服用。作为外用剂，只要涂抹于皮肤、头皮等上使用，那么就没有特别限制，作为其形态，可列举：软膏剂、乳霜剂、凝胶剂、洗剂、乳液剂、敷剂、湿敷剂等皮肤外用剂、或注射剂等形态。
另外，在将本发明的组合物用作口服剂的情况下，作为其形态，例如可列举：片剂、胶囊剂、粉末剂(另外，本发明的粉末包括颗粒、细粒)、液剂、棒状剂、板状剂、块状剂、固体状剂、丸状剂、膏状剂、乳霜状剂、胶囊片状剂、凝胶状剂、咀嚼片状剂、条状剂等。这些之中，就更进一步提升提高角质层水分量、提高皮肤弹力或抑制皮肤水分蒸散的效果的观点而言，尤其优选片剂、胶囊剂、粉末剂或液剂的形态。以片剂、胶囊剂、粉末剂或液剂的形态摄取本发明的组合物的情况与以膏状或乳霜状、凝胶状等其它形态摄取的情况相比，能够在提高角质层水分量、提高皮肤弹力或抑制皮肤水分蒸散方面获得更高的效果。其原因并未明确，但认为主要原因在于：根据组合物的形态不同，对于摄取者产生的心理上的影响不同；或者根据形状不同，TGE及TGE糖苷的体内吸收率不同。
作为将本发明的组合物用作口服剂的情况的具体例，可例示：补充品(supplement)；食品添加剂；填充至宝特瓶、罐、瓶等中的容器装饮料；用来溶解于水(热水)、牛奶、果汁等中饮用的即溶粉末饮料等。这些就进食时等容易简单地饮食，另外能够提高可口性的方面而言优选。
一般，在本发明的组合物为片剂、胶囊剂的情况下，就更为提高由本发明带来的所述各效果的观点而言，优选在其固形物成分中，有效成分包含固形物成分总体的2.0～0.001质量％的TGE，更优选包含1.0～0.01质量％，进而优选包含0.5～0.025质量％。另外，TGE及TGE糖苷的合计量如果在本发明的组合物的固形物成分中例如为0.5质量％以上、尤其是1质量％以上，那么所述各效果进一步优异，所以是优选的。关于作为片剂或胶囊剂的本发明的组合物，例如可列举医药品或补充品等。
在本发明的组合物为液剂的情况下，就更为提高由本发明带来的所述各效果的观点而言，优选在该液剂中，有效成分包含总体的0.00001～0.5质量％的TGE，更优选包含0.00005～0.1质量％，进而优选包含0.0001～0.05质量％。另外，TGE及TGE糖苷的合计量如果在本发明的组合物的固形物成分中例如为0.0001质量％以上、尤其是0.1质量％以上，那么所述各效果进一步优异，所以是优选的。关于作为液剂的本发明的组合物，可列举容器装饮料等。
另外，在本发明的组合物为粉末剂或颗粒剂的情况下，就更为提高由本发明带来的所述各效果的观点而言，优选在其固形物成分中，有效成分包含固形物成分总体的0.0001 ～2.5质量％的TGE，更优选包含0.001～2.0质量％，进而优选包含0.005～1.5质量％。另外，TGE及TGE糖苷的合计量如果在本发明的组合物的固形物成分中例如为0.001质量％以上、尤其是0.01质量％以上，那么所述各效果进一步优异，所以是优选的。关于作为粉末剂的本发明的组合物，可列举即溶粉末饮料等。
在口服摄取本发明的组合物的情况下，关于其口服给药量，以所述TGE及TGE糖苷的干燥物合计量计，优选成人每天大约5mg以上且200mg以下，更优选10mg以上且100mg以下。另外，关于本发明的组合物的1次的摄取量，优选以所述TGE及TGE 糖苷的干燥物合计量计，成人每天大约15mg以上且50mg以下。本发明的组合物能够以1天量收容于1个容器中，或者分开收容于例如2～3个的多个容器中，以使1天的摄取量成为所述摄取量。
作为本发明的组合物的利用形态，具体而言，可列举：医药品(包括准药品)、化妆品、普通食品、营养功能食品、效能的标示得到特定机构认可的特定保健用食品、功能性标示食品等所谓健康食品等。
本发明的组合物的应用形态中，作为食品，例如可列举：碳酸饮料、营养饮料、果实饮料、乳酸饮料、果昔(Smoothie)、青汁等饮料；冰淇淋、雪酪、刨冰等冷冻甜点：荞麦面、乌冬面、粉丝、中华面、即食面等面类；饴糖、糖果、口香糖、巧克力、模压点心、休闲点心、饼干、果冻、果酱、奶油、烘烤糕点、面包等点心类；鱼糕、火腿、香肠等水产、畜产加工食品；加工乳、发酵乳、酸奶等乳制品；沙拉油、天妇罗油、人造黄油、蛋黄酱、起酥油、稠奶油、调味酱等油脂及其加工食品；酱料、酱油等调味料；咖喱、炖菜、鸡肉鸡蛋盖饭、粥、杂烩、中华盖饭、猪排盖饭、炸虾盖饭、牛肉盖饭、肉丁盖饭、蛋包饭、关东煮、麻婆豆腐、饺子、烧卖、煎肉饼、肉丸子、各种酱料、各种汤等杀菌袋装食品等。
本发明的组合物不仅能够经济且安全地口服摄取，而且根据下述实施例的记载可明确，本发明的组合物通过含有TGE及TGE糖苷，能够通过摄取其来促进从横纹肌等成肌细胞进行肌肉分化，此外，还可促进从前成骨细胞向成骨细胞分化，从而能够促进骨分化。另外，本发明的组合物通过含有TGE及TGE糖苷，能够通过摄取其来获得优异的脂肪分解作用。例如，根据下述实施例的记载可明确，能够通过摄取TGE及TGE糖苷来促进分解体脂肪的酶的基因的表达，促进体脂肪分解。
进而，在本发明中，TGE及TGE糖苷有效地提高改善肝功能的作用。具体而言，根据下述实施例的记载可明确，TGE及TGE糖苷能够提高在无血清培养基中培养的肝细胞的活性(酶活性)，该肝细胞存在各种应力成为诱因而导致容易产生细胞凋亡等问题。即，TGE及TGE糖苷抑制肝细胞的活性降低，即保护肝细胞。如上所述，TGE及TGE 糖苷能够保护肝细胞，因此防止肝细胞的损害，维持或增进肝细胞的活性而改善肝功能。尤其是期待通过保护肝细胞免受各种应力而防止肝细胞的损伤，从而抑制肝细胞中的天冬氨酸转胺酶(AST)、丙氨酸转胺酶(Alanine transaminase，ALT)、γ-谷氨酰转肽酶 (γ-glutamyltransferase，γ-GTP)向血中转移。
另外，通过摄取TGE及TGE糖苷而能够获得提高皮肤的角质层水分量的作用、提高皮肤弹力的作用、抑制皮肤水分蒸散的作用。这些改善肤质的作用是通过持续地摄取本发明的组合物而显著地表现，例如在口服摄取开始后4周以内表现，进而通过8周的持续摄取、尤其是12周的持续摄取而显著地表现。这里所谓持续摄取，是指持续例如在1～3天内至少摄取1次的状态。
这种本发明的组合物能够用作促进肌肉分化用组合物、促进肌肉形成用组合物、促进骨分化用组合物、促进骨形成用组合物、促进脂肪分解用组合物、促进脂质代谢用组合物、减少脂肪用组合物、抗肥胖用组合物、减重用组合物、美容组合物、增加皮肤水分量用组合物、抑制水分蒸散用组合物、提高肌肤弹力用组合物、改善肤质组合物等，此外，还能够用作基于预防或抑制肝细胞的脱离酶流出的作用、预防或抑制肝细胞损伤的作用、保护肝细胞的作用、保护或改善肝功能的作用的肝功能改善剂或肝功能改善组合物，能够用于病毒性肝炎、药物性肝损伤、自身免疫性肝炎、原发性胆汁性肝硬化、布加氏(Budd-Chiari)综合症等肝功能损伤的治疗或预防。如上所述，本发明的组合物能够用于防止宿醉等与饮酒相关的疾病以外的损伤。
另外，本发明的组合物只要在用于促进肌肉分化、促进肌肉形成、促进骨分化、促进骨形成、促进脂肪分解、抗肥胖、减重、美容、改善肤质、改善肝功能的用途的方面，能够作为制品与其它制品进行区分即可，例如可列举在本发明的改善肝功能剂的制品的主体、包装、说明书、宣传物的任一种上标示出有肝功能改善功能的内容。例如所谓有肝功能改善功能的内容的标示是指：告知像在意肝功能的人、在意肝脏的健康的人等那样关心肝脏运作的对象者的标示；或者标示有助于维持增进肝脏的健康，如维持肝脏的健康、辅助肝脏运作、维持健康的肝脏、维持健康的肝脏的功能、降低肝功能酶在正常范围内偏高的数值等。另外，所谓有促进脂肪分解的功能的内容的标示，是指：告知像在意肥胖的人、在意腹部周围的人、在意体重的人、在意腹部的脂肪(内脏脂肪与皮下脂肪等)的人等那样关心体脂肪的对象者的标示；或者标示有助于减少身体的脂肪，如帮助减少体重、帮助减少腹部的脂肪(内脏脂肪与皮下脂肪等)、帮助减少腰围直径、辅助消除肥胖、辅助减重等。
本发明的组合物安全，即便持续长期(例如3个月以上)给药(例如在1天中以所述给药量给药的情况)也无妨。本发明的组合物优选如上所述持续使用。另外，作为本发明的组合物的给药对象，适宜列举有AST、ALT、γ-GTP等脱离酶的血中浓度高的倾向的对象者，从而发挥其保护肝细胞的作用。通过使这种对象者摄取本发明的组合物，能够进一步提高防止肝功能降低的效果，且对于防止宿醉等也有效。
[实施例]
以下，列举实施例对本发明进一步详细地进行说明。但，本发明的范围并不限定于这些实施例。以下，在没有特别事先说明的情况下，“％”表示质量％，“份”表示质量份。
[实施例1]作为实施例1的受试物质，使用质量比为鸢尾黄素(TGE)：鸢尾黄素糖苷＝1：21(糖苷的详细成分以质量比计为TD：TGXG＝1：1.9)的粉末状组合物。将其分别供于下述(1)～(3)的顺序的肌肉分化试验、及下述(I)～(V)的顺序的骨分化试验。
(肌肉分化试验)(1)将源自小鼠横纹肌的成肌细胞C2C12(从理化学研究所获取)利用含10％FBS(Fetal bovine serum，胎牛血清)的DMEM(Dulbecco's minimum essentialmedium，杜尔伯科最小必需培养基)在5体积％CO2培养箱中以37℃、湿润条件进行培养直至成为特定数。其次，去除培养基，利用DPBS(Dulbecco's phosphate buffered saline，杜尔伯科磷酸缓冲液)清洗3次后，利用胰蛋白酶-乙二胺四乙酸(Trypsin-EDTA)将细胞剥离。添加新鲜的含10％FBS的DMEM，使胰蛋白酶反应停止后，将细胞收集至试管，利用离心机以800rpm进行3分钟离心而使细胞沉淀。以成为2×104cells/mL的方式使细胞悬浮在新鲜的含10％FBS的DMEM中，以100μL/well接种于96孔板中，在5体积％CO2培养箱中以37℃、湿润条件预培养2天。
(2)使实施例1的受试物质以TGE及TGE糖苷的总量的浓度成为40mM的方式溶解于DMSO(Dimethyl sulfoxide，二甲基亚砜)中，将其利用含2％马血清(HS)的DMEM 稀释至200倍，进而将其以成为特定浓度的2倍的方式利用包含0.5％DMSO的含2％HS 的DMEM进行稀释。这里所谓特定浓度，是指以TGE及TGE糖苷的总量的浓度计为 25μM。
(3)将在(1)中进行过预培养的细胞的培养基去除，添加作为分化诱导培养基的含2％HS的DMEM 50μL、及在所述(2)中制备的含2％HS的DMEM 50μL，进而在5％体积CO2培养箱中以37℃、湿润条件继续培养24小时。另一方面，作为对照组，添加作为分化诱导培养基的含2％HS的DMEM 100μL，以相同方式进行培养。24小时后，去除培养基，使用Rneasy mini(Qiagen公司制造)从细胞纯化RNA(ribonucleic acid，核糖核酸)。利用ReverTra Ace(注册商标)qPCR RT Master Mix with gDNA Remover(东洋纺公司制造)，由经纯化的RNA合成cDNA(complementary deoxyribonucleic acid，互补脱氧核糖核酸)。使用GAPDH(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，3-磷酸甘油醛脱氢酶)(Mm_Gapdh_3_SGQuantiTect Primer Assay，Qiagen公司制造)作为内部标准，且使用肌细胞生成素(Myogenin)(Mm_Myog_1_SG QuantiTect primer assay，Qiagen公司制造)的引物、QuantiNOVA SVBR GREEN(Qiagen公司制造)作为测定基因，利用Rotor-Gene Q(Qiagen公司制造)进行PCR(Polymerase chain reaction，聚合酶链反应)。PCR的结果是使用RotorGene Q Pure Detection(Qiagen公司制造)进行分析所得。关于通过分析所得的基因表达量，算出将对照组(比较例1)设为100％的相对值。将结果示于图1中。
一般在成肌细胞中，肌细胞生成素基因的表达被广泛地用作向肌肉组织的分化诱导标记物。如图1所示，通过将具有特定的TGE：TGE糖苷量比的实施例1的组合物添加于分化诱导培养基中的成肌细胞中，肌细胞生成素基因表达量提高。该情况表示在添加了实施例1的组合物的成肌细胞中，向肌肉组织的分化得到了促进。
(骨分化试验)(I)：将源自小鼠头顶的前成骨细胞MC3T3-E1细胞(从DS PharmaBiomedical公司获取)利用含10％FBS的MEM(minimum essential medium，最低必需培养基)α培养基(不含抗坏血酸)在5体积％CO2培养箱中以37℃、湿润条件进行培养直至成为特定数。去除培养基，利用DPBS清洗2次后，利用胰蛋白酶-乙二胺四乙酸将细胞剥离。添加新鲜的含10％FBS的MEMα培养基，使胰蛋白酶反应停止后，将细胞收集至试管，利用离心机以800rpm进行3分钟离心而使细胞沉淀。以成为4×105cells/mL 的方式使细胞悬浮在新鲜的含10％FBS的MEMα培养基中，以100μL/well接种于96 孔板中，于5体积％CO2、37℃、湿润条件下预培养1天。
(II)：使抗坏血酸钠与β甘油磷酸二钠以分别成为50μg/mL、10mM的方式溶解于含10％FBS的MEMα培养基中，制成诱导向骨组织分化的分化诱导培养基。使实施例1 的受试物质以按TGE及TGE糖苷的总量的浓度计成为20mM的方式溶解于DMSO中，将其利用分化诱导培养基稀释至200倍，进而将其以成为特定浓度的2倍的方式利用包含0.5％DMSO的含10％FBS的MEMα培养基进行稀释，制成含受试物质的分化诱导培养基。这里所谓特定浓度，是指以TGE及TGE糖苷的总量的浓度计为100μM。
(III)：将在(I)中进行过预培养的细胞的培养基去除，以100μl/well添加(II)中制备的含受试物质的分化诱导培养基，2天或3天更换一次培养基，并在5体积％CO2、37℃、湿润条件下继续培养14天。另一方面，作为对照组，将不含受试物质的分化诱导培养基以相同量添加于其它孔中，除此以外，以相同方式进行培养。
(IV)所述(III)的培养后，去除培养基，利用无血清DMEM清洗1次后，添加利用无血清DMEM培养基稀释至30倍的细胞计数试剂盒-8(Cell Counting-Kit 8)(同仁化学公司制造)150μL，于37℃下进行保温直至适当显色。利用读板仪(ThermoScientific公司制造) 测定450nm的吸光度(A1)。(V)从(IV)的测定后的培养基去除细胞计数试剂盒-8，依据 TRAP/ALP(tartrate-resistant acid phosphatase/alkaline phosphatase，抗酒石酸性磷酸酶/碱性磷酸酶)染色试剂盒(和光纯药公司制造)的说明书，进行碱性磷酸酶(ALP)活性测定用的染色。其次，使甘氨酸、无水氯化镁、氯化锌以分别成为0.1M、1mM、1mM的方式溶解于超纯水中，利用氢氧化钠将pH值调整至10.4，制成甘氨酸缓冲液。使一粒4- 硝基苯基磷酸二钠盐六水合物5mg片剂(Sigma Aldrich公司制造)溶解于所获得的甘氨酸缓冲液5ml中。将所得的液体添加至ALP染色后的各孔中150μL。以37℃加温30 分钟后，将上清液100μL移至分析板(assay plate)(AGC Techno Glass公司制造)中，利用读板仪对405nm的吸光度(A2)进行测定。使用在所述中所测得的吸光度A1及A2，通过下述式求出ALP活性。关于由ALP活性＝A2/A1
所获得的ALP活性的值，将对照组(比较例1)设为100％而算出相对值。将结果示于图2中。
一般，ALP活性被广泛地用作MC3T3-E1细胞向成骨细胞的分化诱导标记物。如图 2所示，通过将具有特定的TGE：TGE糖苷量比的实施例1的组合物添加于分化诱导培养基中的MC3T3-E1细胞中，ALP活性提高。该情况表示在添加了实施例1的组合物的 MC3T3-E1细胞中，成骨分化得到了促进。
[实施例2-1～2-8、比较例2]作为受试物质，使用将TD、TGXG及TGE以下述表1 的记载进行调配所得的样品。表1中的TGE糖苷是指TD及TGXG的合计量。将这些实施例及比较例的受试物质供于下述(i)～(viii)的顺序的(脂肪分解酶表达试验)。
[表1]
(表中，数字表示质量比)
(脂肪分解酶表达试验)利用下述方法测定激素敏感性脂肪酶(HSL)的基因表达。(i) 在37℃、5体积％CO2培养箱内，使用75cm2烧瓶，将供分化为脂肪细胞的小鼠成纤维(fibroblast)细胞(3T3-L1)于预培养培养基中进行培养。作为预培养培养基，使用10％FBS-DMEM。(ii)使通过胰蛋白酶处理而浮游的细胞悬浮在10％FBS-DMEM中，以 2×103cells/well的细胞密度接种至96孔板的各孔中。将接种后的细胞在37℃、5体积％CO2培养箱内预培养2天。(iii)去除培养基，以100μL/well添加预先以分别包含1μM 的地塞米松、1mM的3-异丁基-1-甲基黄嘌呤(3-Isobutyl-1-methylxanthine)、2.0μg/mL 的胰岛素的方式制备的10％FBS-DMEM(向脂肪细胞的分化诱导培养基)，在37℃、5体积％CO2培养箱内培养2天。(iv)从各孔去除一半培养基，更换为预先以包含20μg/mL 的胰岛素的方式制备的10％FBS-DMEM(脂肪细胞分化维持培养基)，进而在37℃、5体积％CO2培养箱内培养5天。在此期间，每隔2天将培养基的一半更换为包含胰岛素的 10％FBS-DMEM。(v)从各孔将培养基完全去除，以100μL/well(TGE及TGE糖苷的总量的浓度为100μM)添加预先以受试物质成为100μg/mL的方式制备的10％FBS-DMEM，进而在37℃、5体积％CO2培养箱内继续培养48小时。(vi)将培养基完全去除，利用经冰浴冷却的DPBS清洗2次后，以100μL/well添加ISOGEN(NIPPON GENE公司制造)，按照使用说明书将总RNA进行纯化。(vii)利用ReverTra AceRqPCR RT Master Mix with gDNA Remover，依据使用说明书，从(vi)中所获得的总RNA合成cDNA。(viii)使用 QuantiNova SYBR Green PCR试剂盒，将(vii)中所获得的cDNA作为模板，进行 RT-PCR(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction，逆转录-聚合酶链反应)。作为引物，使用作为HSL基因表达用的Mm_Lipe_1_SG QuantiTect Primer Assay。内部标准使用Mm_Actb_1_SG QuantiTect Primer Assay进行Actb。关于HSL基因表达量，将以比较例2(对照组)的基因表达量为1时的实施例2-1～2-8的相对值示于图3中。
如图3所示，通过使用各实施例的受试物质，激素敏感性脂肪酶(HSL)的基因表达量大幅地高于比较例2。已知激素敏感性脂肪酶(HSL)为中性脂肪分解酶，且存在于脂肪细胞内，将甘油三酯分解为游离脂肪酸与甘油，并使游离脂肪酸释出于血液中。因此，判明本发明的组合物通过促进激素敏感性脂肪酶(HSL)基因表达，而有效地促进脂肪细胞中的脂肪分解。
(肝功能改善试验)[实施例3-1～3-16以及比较例3](1)细胞培养在37℃、5体积％CO2培养箱内，使用75cm2烧瓶，通过含10％胎牛血清(FBS)的培养基培养源自人类肝癌的细胞(HepG2，ATCC公司制造)。其次，将通过胰蛋白酶处理而浮游的细胞以 4.0×104cells/well的细胞密度从75cm2烧瓶接种至96孔板的各孔中。其后，在37℃、5 体积％CO2培养箱内预培养24小时。从各孔去除培养基后，以100μL/well添加制备成特定浓度的含受试物质的培养基，在CO2培养箱内培养24小时。作为含受试物质的培养基中的培养基，使用无血清DMEM。作为受试物质，使用将TD、TGXG及TGE以下述表2的记载调配所得的样品。表2中的TGE糖苷是指TD及TGXG的合计量。作为所述特定浓度，以TD、TGXG及TGE的总量的浓度计设为400μg/ml。比较例3为对照组(control)，使用含0.5％DMSO的无血清DMEM代替含受试物质的培养基。
[表2]
＜细胞活性测定＞所述24小时培养后，去除培养基，将利用无血清DMEM稀释至 30体积倍的细胞计数试剂盒-8溶液(同仁化学制造)以每孔150μl的方式添加至各孔中。在37℃、5体积％CO2培养箱内进行静置而适度地显色后，测定450nm下的吸光度。基于所获得的数据，算出相对于对照组的百分率(％of control)。将由相对于对照组的百分率(％ofcontrol)＝(样本数据(Data sample)－空白数据(Data blank))/(对照数据(Datacontrol)－空白数据(Data blank))×100所获得的结果示于图4。在图4中记载平均值及标准偏差。
根据图4所示的结果可知，TGE及其糖苷的量比特定的鸢尾黄素类具有保护在无血清DMEM中培养的肝细胞的活性的优异作用。因此，通过使用该质量比特定的鸢尾黄素类，能够保护肝细胞而改善肝功能。
[实施例4]作为实施例4的受试物质，使用质量比为TGE：TGE糖苷＝1：22.19(TD：TGXG＝1：1.81)的粉末状组合物43.14mg(TGE及TGE糖苷的总量)。将其供于下述美容试验。
(美容试验)将健康正常的2名女性(平均年龄19.7岁)作为受试者。请受试者每天早晨摄取溶解于水中的实施例4的受试物质。将其持续12周。在摄取开始前、摄取开始后(4、8、12周后)，分别利用下述测定装置测定左颊部(用直线连接外眼角与鼻翼时的中央附近)的角质层水分量、水分蒸散量、弹力。将角质层水分量的平均值示于图5，将水分蒸散量的平均值示于图6，将弹力的平均值示于图7。
·角质层水分量：利用皮表角质层水分量测定装置SKICON-200EX(I.B.S.公司制造) 进行测定。该皮表角质层水分量测定装置是将皮肤的导电率(conductance，单位：μS)作为角质层的水分量进行评价的装置。
·水分蒸散量：利用Tewameter TH300(Courage+Khazaka公司制造)进行测定。
·弹力：利用皮肤粘弹力测定装置Cutometer MPA580(Courage+Khazaka公司制造) 进行测定。关于弹力，使用恢复弹性比率作为能够利用作为测定器的Cutometer获得的皮肤粘弹性值的测定参数，该恢复弹性比率是以负压吸引测定部的皮肤一定时间，对被吸入的高度及从吸引部顶点恢复的皮肤的位移量进行分析而求出。恢复弹性比率越接近1.00，可谓皮肤的弹力性越高。这些测定是利用机器所附带的说明书所记载的标准方法实施。
根据图5～图7的结果，判明随着具有特定的TGE：TGE糖苷量比的本发明的组合物摄取时间变长，肌肤的角质层水分量提高，水分蒸散量得到抑制，且弹力提高。
以下列举本发明的组合物的调配例，但下述调配例并不限定本发明。
调配例1～10：片剂
以成为表3的比例的方式调配各成分，依据惯例进行压片而制造调配例1～10的片剂(1片250mg)。调配例1～10的片剂在尤其良好地发挥提高角质层水分量、提高皮肤弹力、抑制皮肤水分蒸散等本发明的效果的方面而言优异。
[表3]
调配例11～20：软胶囊
通过以成为表4的比例的方式制备软胶囊的内容液并填充于胶囊皮膜中，而制造软胶囊(1粒300mg)。将胶囊皮膜液流延来制成膜，并且将内容液填充于内部进行热密封，并使成形的软胶囊进行干燥而制成胶囊。调配例11～20的软胶囊在尤其良好地发挥提高角质层水分量、提高皮肤弹力、抑制皮肤水分蒸散等本发明的效果的方面而言优异。
[表4]
调配例21～30：粉末(颗粒剂)
依据表5，将各成分投入至Flow Coater NFLO-200型流动层造粒机(FreundCorporation(股)制造)中，在气流下混合数分钟。通过对其喷雾水而进行造粒。其次，利用30目的筛子筛选所获得的造粒物而制造颗粒剂。调配例21～22的颗粒剂在尤其良好地发挥提高角质层水分量、提高皮肤弹力、抑制皮肤水分蒸散等本发明的效果的方面而言优异。
[表5]
调配例21-22：液剂(液体饮料)
以表6的比例调配各成分而制成液体饮料。调配例31～40的液体饮料在尤其良好地发挥提高角质层水分量、提高皮肤弹力、抑制皮肤水分蒸散等本发明的效果的方面而言优异。
[表6]

Claims (10)

1.一种组合物，其包含鸢尾黄素及鸢尾黄素糖苷。
2.根据权利要求1所述的组合物，其中以质量比为1：10以上的量包含鸢尾黄素及鸢尾黄素糖苷。
3.根据权利要求1或2所述的组合物，其中所述鸢尾黄素糖苷包含在鸢尾黄素上键结1个糖而成的糖苷及在鸢尾黄素上键结2个糖而成的糖苷，在鸢尾黄素上键结1个糖而成的糖苷与在鸢尾黄素上键结2个糖而成的糖苷的质量比为1：0.01以上且7.5以下。
4.根据权利要求3所述的组合物，其中所述在鸢尾黄素上键结1个糖而成的糖苷为鸢尾苷，所述在鸢尾黄素上键结2个糖而成的糖苷为鸢尾黄素-7-O-木糖葡萄糖苷。
5.一种根据权利要求1至4中任一项所述的组合物用以制造减少脂肪用组合物的应用。
6.一种根据权利要求1至4中任一项所述的组合物用以制造抗肥胖用组合物的应用。
7.一种根据权利要求1至4中任一项所述的组合物用以制造促进组织分化用组合物的应用。
8.一种根据权利要求1至4中任一项所述的组合物用以制造促进脂肪分解用组合物的应用。
9.一种根据权利要求1至4中任一项所述的组合物用以制造用于提高角质层水分量、提高皮肤弹力或抑制皮肤水分蒸散的组合物的应用。
10.一种根据权利要求1至4中任一项所述的组合物用以制造改善肝功能用组合物的应用。
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