CN109490227A - 一种高灵敏度脂肪酶试剂盒 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种高灵敏度脂肪酶试剂盒，该试剂盒包括以下组分：冲体系浓度70‑180mmol/L，pH＝8.0‑9.0；甘油三月桂酸酯90‑350mmol/L；氧化型辅酶Ⅰ0.1‑0.5mmol/L；甘油脱氢酶0.3‑4KU/L；酶保护剂4‑12g/L；稳定剂0.5‑1.5g/L；展开剂0.2‑2.0g/100mL。本发明公开的脂肪酶试剂盒中不含有防腐剂，通过控制稳定剂和酶保护剂的质量比，使试剂盒的稳定性明显提高，从而避免了因为防腐剂的存在而引起的干扰，从而提高了检测的灵敏度，测试的准确度也明显提高，该试剂盒中加入了特定的展开剂，增强了水油界面的表面张力，从而增加了试剂的可测线性范围，并且该试剂盒检测结果准确度高，重复性好。
Description
技术领域
本发明涉及生物制剂领域，具体涉及一种检测试剂盒，特别涉及一种高灵敏度脂肪酶试剂盒。
背景技术
脂肪酶(LPS)属于羧基酯水解酶类，能够逐步的将甘油三酯水解成甘油和脂肪酸。主要来源于胰腺，其次为胃和小肠，能水解多种含长链(8-18碳链)脂肪酸的甘油酯。脂肪酶合成于胰腺的胰泡组织，具有较高的器官特异性。正常血液中，仅有少量脂肪酶，血中脂肪酶易被肾脏清除，当胰腺分泌亢进，胰管受阻或胰腺受损伤或坏死时，脂肪酶逆流或直接接入血液，使血中脂肪酶活力增加。当发生急性腮腺炎时，LPS分泌增加，使高浓度的LPS进入血液中并呈规律性增高，表现为：血液中的LPS在急性腮腺炎发病后4～8h开始增高，24h达到峰值，持续8～14d后恢复正常，灵敏度：80％～100％，特异性：84％～96％。血清LPS表达水平与急性腮腺炎病情进展程度成显著正相关，是急性腮腺炎病情的主要监测指标。
目前，常用与检测脂肪酶的方法有滴定法、pH-Star法、比浊法即荧光测定法。滴定法是经典方法，但是灵敏度差，需用大量的血清，反应时间长，此外橄榄油乳剂质量的优劣也直接影响脂肪酶活力测定结果的准确性，现已少用；pH-Stat法因其费力、费时，难以自动化及需特殊的仪器而未被广泛采用；比浊测定法测定标本的结果中约有3％-5％的吸光度因分子聚集而出现负结果；荧光测定法是一种方便，特异和灵敏的脂肪酶活性测定方法，但是需要的设备昂贵，难以适应常规临床化学实验室应用。
为了解决现有检测方法的不足，目前更多检测方法偏向于试剂盒，试剂盒检测方便快捷，准确度高，线性关系好，适合临床使用。、
例如，中国专利申请201410433105.6中公开了一种稳定的脂肪酶试剂盒，该试剂盒包括试剂R1：缓冲液10-200mmol/L；脱氧胆酸钠0.05-5g/L；牛磺脱氧胆酸钠0.05-10g/L；辅脂肪酶0.1-5mg/L；氯化钙1-20mmol/L；防腐剂0.01-1％；表面活性剂0.01-1％；试剂R2：酒石酸10-200mmol/L；牛黄脱氧胆酸钠0.1-10g/L；防腐剂0.01-1％；助溶剂0.01-2％；乳化剂0.01-2％；稳定剂0.01-2％；6-甲基试卤灵0.1-0.5mmol/L。本发明的试剂盒，灵敏度高，误差小，质量稳定，便于保存，对底物有很强的保护作用，提高了试剂的稳定性，检测效果好，有较大的临床应用价值。但是该试剂盒中试剂种类较多，从而对底物的干扰较多，因此会在一定程度上干扰脂肪酶的检测。
为了进一步提高灵敏度，研发者尽量减少试剂盒中试剂种类，从而减少试剂对底物的影响，例如中国专利申请201710588803.7中公开了一种脂肪酶试剂盒，该试剂盒有单试剂组成，该试剂盒包括以下组分：缓冲体系浓度80mmol/L-160mmol/L，pH＝8.8；甘油三月桂酸酯100mmol/L-300mmol/L；氧化型辅酶Ⅰ0.2mmol/L-0.4mmol/L；甘油脱氢酶0.5KU/L-3KU/L；防腐剂NaN30.6g/L-1g/L；酶保护剂5g/L-10g/L；展开剂0.4％-1.6％；溶剂为去离子水。该申请的优点是无需样品前处理，可知即利用全自动生化分析仪进行大批量样品检测，操作简单、准确度高、重现性好、线性范围宽，适合临床推广。但是该申请中加入的防腐剂的浓度较高会在一定程度上产生干扰，影响试剂盒的灵敏度。
发明内容
本发明的目的是为了克服现有技术中存在的缺点和不足，而提供一种高灵敏度脂肪酶检测试剂盒，该检测盒防腐剂含量极少或不加防腐剂的条件下，并且试剂种类较少，可以有效减少试剂对样品的干扰，从而提高了试剂盒的检测灵敏度，提高了试剂盒的稳定性。
为了实现上述目的，本发明的技术方案是一种高灵敏度脂肪酶试剂盒，该试剂盒包括以下组分：
优选地，上述高灵敏度脂肪酶试剂盒，该试剂盒包括以下组分：
再优选地，上述高灵敏度脂肪酶试剂盒，该试剂盒包括以下组分：
上述试剂盒组分中还含有溶剂，所述的溶剂为去离子水。
其中，所述的缓冲体系为醋酸钠缓冲体系、酒石酸钠缓冲体系、柠檬酸钠缓冲体系、甘氨酸钠缓冲体系和硼酸钠缓冲体系中的一种；
优选地，所述的缓冲体系为醋酸钠缓冲体系、柠檬酸钠缓冲体系和甘氨酸钠缓冲体系中的一种。
所述的酶保护剂为海藻糖、蔗糖、果糖、葡甘露醇糖和麦芽糖中的一种或多种；
优选地，所述的酶保护剂为海藻糖、果糖和葡甘露醇糖中的一种或多种；
再优选地，所述的酶保护剂为海藻糖和葡甘露醇糖中的一种或多种；
进一步优选地，所述的酶保护剂为质量比为2-4:1的海藻糖和葡甘露醇糖。
所述的稳定剂为丝氨酸、甘氨酸和甘露醇中的一种或多种；
优选地，所述的稳定剂为质量比为2-3:1的甘露醇和丝氨酸；
再优选地，所述的稳定剂为质量比为1:1的甘露醇和甘氨酸。
所述的展开剂为脂肪醇聚氧乙烯醚、脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸铵、聚乙二醇8000、月桂酸聚氧乙烯(9)酯和烷基酚聚氧乙烯(10)醚中的一种或多种。
优选地，所述的展开剂为脂肪醇聚氧乙烯醚、脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸铵和聚乙二醇8000中的一种或几种。
再优选地，所述的展开剂为质量比为1:1的脂肪醇聚氧乙烯醚和脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸铵。
其中，所述的酶保护剂和稳定剂的质量比为3-24：1；优选为5-20:1；又优选为10-15:1，再优选为12-13:1。
本申请公开的试剂盒通过控制酶保护剂与稳定剂的质量比使试剂盒在不添加防腐剂的条件下具有较高的稳定性，并且避免了因为防腐剂的存在对试剂盒灵敏度的影响。
本发明公开的试剂盒采用辅酶指示系统的连续监测法，可以确定线性期并计算每分钟吸光度的变化(△A/min)，根据此值再准确的计算酶活性，可以利用全自动生化分析仪进行检测；酶和底物反应的特异性好，计算结果准确度高。
有益效果：
(1)本发明公开的脂肪酶试剂盒中不含有防腐剂，通过控制稳定剂和酶保护剂的质量比，使试剂盒的稳定性明显提高，从而避免了因为防腐剂的存在而引起的干扰，从而提高了检测的灵敏度，测试的准确度也明显提高。
(2)本申请公开的试剂盒中加入了特定的展开剂，增强了水油界面的表面张力，从而增加了试剂的可测线性范围。
(3)本发明在试剂盒中加入了含有钠盐的缓冲溶液，意外地发现含钠盐的缓冲溶液加入试剂盒中可以提高试剂盒的灵敏度，并且使检测结果准确度高，重复性好。
附图说明
图1是本发明实施例11的线性关系结果图；
图2是本发明实施例12的线性关系结果图；
图3是本发明实施例13的线性关系结果图。
具体实施方式
下面通过实施例对本发明进行具体的描述，只用于对本发明进行进一步说明，不能能理解为对本发明保护范围的限定。
实施例1-5一种高灵敏度脂肪酶试剂盒
包括以下组分：
将实施例1-5的试剂盒进行准确度性能评价
选用朗道低、高值质控品(1530，批号1045UN；1532，批号801UE)，采用BS-420全自动生化分析仪进行检测，具体操作方法如表1所示，采用单点定标法定标后，LPS测定值及空白吸光度值可以从仪器上直接读取，为了减少偶然误差，重复测定3次取平均值，计算测定值和靶值的相对偏差。
表1实施例1-5测定低值质控(1530)准确度比较
表2实施例1-5测定高值质控(1532)准确度比较
由以上结果可知，本发明的试剂盒测定的均值位于靶值范围内，相对偏差小于10％，说明本发明试剂盒准确性较高。
实施例6-8一种高灵敏度脂肪酶试剂盒
将实施例6-8的试剂盒进行准确度性能评价
表3实施例6-8测定低值质控(1530)准确度比较
表4实施例6-8测定高值质控(1532)准确度比较
由以上结果可知，本发明的试剂盒测定的均值位于靶值范围内，相对偏差小于10％，说明本发明试剂盒准确性较高。
实施例9-11一种高灵敏度脂肪酶试剂盒
将实施例9-10的试剂盒进行准确度性能评价
表5实施例9-10测定低值质控(1530)准确度比较
表6实施例9-10测定高值质控(1532)准确度比较
由以上结果可知，将本发明的试剂盒中的酶保护剂使用本申请优选的酶保护剂并控制比例在本申请公开范围内时，制得的试剂盒测定的均值位于靶值范围内，相对偏差明显小于10％，相对于之加入一种酶保护剂的试剂盒的准确度明显提高，说明本发明要求保护的试剂盒准确性较高。
为了进一步证明本发明制备的试剂盒具有较高的准确度，将酶保护剂、稳定剂以及展开剂都选用本申请公开保护的优选组分，并控制比例在本申请范围内，对试剂盒的准确度，重复性以及线性范围进行研究。
实施例11一种高灵敏度脂肪酶试剂盒
实施例12一种高灵敏度脂肪酶试剂盒
实施例13一种高灵敏度脂肪酶试剂盒
1、稳定性试验
将实施例11-13的试剂盒进行准确度性能评价
表7实施例11-13测定低值质控(1530)准确度比较
表8实施例11-13测定高值质控(1532)准确度比较
由以上结果可知，将本发明的试剂盒中的酶保护剂使用本申请优选的酶保护剂、稳定剂以及展开剂并控制比例在本申请公开范围内时，制得的试剂盒测定的均值位于靶值范围内，相对偏差明显小于10％，相对于之加入一种酶保护剂或一种稳定剂的试剂盒的准确度明显提高，说明本发明要求保护的试剂盒准确性较高。
2、重复性试验
选用临床常规样本，用本发明实施例11-13试剂盒重复测定20此，计算变异系数，结果见下表
表9实施例11-13试剂盒重复性试验
| 测定次数 | 实施例11 | 实施例12 | 实施例13 |
| 1 | 74.2 | 74.8 | 75.2 |
| 2 | 75.3 | 74.6 | 75.2 |
| 3 | 76.5 | 75.2 | 75.4 |
| 4 | 75.3 | 75.3 | 75.3 |
| 5 | 75.2 | 75.6 | 74.9 |
| 6 | 76.8 | 75.5 | 74.8 |
| 7 | 75.1 | 76.0 | 74.8 |
| 8 | 74.8 | 74.9 | 75.3 |
| 9 | 75.3 | 74.7 | 75.2 |
| 10 | 75.8 | 74.5 | 75.6 |
| 11 | 75.2 | 74.2 | 75.4 |
| 12 | 75.6 | 74.2 | 75.5 |
| 13 | 76.0 | 74.5 | 75.5 |
| 14 | 75.4 | 74.6 | 75.2 |
| 15 | 75.3 | 74.6 | 74.2 |
| 16 | 74.9 | 75.2 | 75.8 |
| 17 | 75.2 | 75.3 | 74.6 |
| 18 | 75.6 | 74.8 | 75.2 |
| 19 | 76.1 | 74.8 | 75.1 |
| 20 | 75.2 | 75.0 | 76.3 |
| 均值 | 75.44 | 74.92 | 75.23 |
| 标准差(SD) | 0.5731 | 0.4586 | 0.4346 |
| 变异系数(CV/％) | 0.76％ | 0.61％ | 0.58％ |
由上表数据可知，本发明公开的实施例11-13的试剂盒变异系数(CV)分别是0.76％、0.61％、0.58％，均明显低于8％，说明本发明的试剂盒具有良好的精密性。
3、线性范围检测
制取脂肪酶浓度350U/L的样本，分别按照1、1/2、1/4、1/8、1/16、1/32、1/64稀释成7个不同浓度(Xi)，用本发明试剂盒实施例11-13按照检测方法均测定3次取平均值(Yi)，以Xi为自变量，Yi为因变量求出线性回归方程，计算线性回归相关系数R2，将稀释浓度(Xi)代入线性回归方程，计算yi的估计值Yi，及Yi与yi的相对偏差。
表10实施例11线性范围测定
表11实施例12线性范围测定
表12实施例13线性范围测定
从以上数据可知，本发明实施例11-13试剂盒线性相关系数分别为0.9999、0.9999、0.9999，均大于0.9900，有非常好的线性关系，且所测线性范围较宽，可以满足临床需求。
综上，性能评价可知，本发明实施例1-13试剂盒具有准确度高、灵敏性好、稳定性高、重复性好、测试线性范围宽的优点，可配合全自动生化分析仪使用，在临床诊断胰腺炎病情方面有很好的应用价值。
Claims (10)
1.一种高灵敏度脂肪酶试剂盒，其特征在于：该试剂盒包括以下组分：
2.根据权利要求1所述的高灵敏度脂肪酶试剂盒，其特征在于：该试剂盒包括以下组分：
3.根据权利要求2所述的高灵敏度脂肪酶试剂盒，其特征在于：该试剂盒包括以下组分：
4.根据权利要求1-3任一项所述的高灵敏度脂肪酶试剂盒，其特征在于：所述的缓冲体系为醋酸钠缓冲体系、酒石酸钠缓冲体系、柠檬酸钠缓冲体系、甘氨酸钠缓冲体系和硼酸钠缓冲体系中的一种。
5.根据权利要求1-3任一项所述的高灵敏度脂肪酶试剂盒，其特征在于：所述的酶保护剂为海藻糖、蔗糖、果糖、葡甘露醇糖和麦芽糖中的一种或多种。
6.根据权利要求5所述的高灵敏度脂肪酶试剂盒，其特征在于：所述的酶保护剂为质量比为2-4:1的海藻糖和葡甘露醇糖。
7.根据权利要求1-3任一项所述的高灵敏度脂肪酶试剂盒，其特征在于：所述的稳定剂为丝氨酸、甘氨酸和甘露醇中的一种或多种。
8.根据权利要求7所述的高灵敏度脂肪酶试剂盒，其特征在于：所述的稳定剂为质量比为2-3:1的甘露醇和丝氨酸。
9.根据权利要求7所述的高灵敏度脂肪酶试剂盒，其特征在于：所述的稳定剂为质量比为1:1的甘露醇和甘氨酸。
10.根据权利要求1-3任一项所述的高灵敏度脂肪酶试剂盒，其特征在于：所述的酶保护剂和稳定剂的质量比为3-24：1。
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Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN110923292A (zh) * | 2019-11-15 | 2020-03-27 | 中山市创艺生化工程有限公司 | 一种血清脂肪酶检测试剂盒及其制备方法与应用 |
| CN112051354A (zh) * | 2020-08-05 | 2020-12-08 | 武汉生之源生物科技股份有限公司 | 一种脂肪酶测定试剂盒及其制备方法 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104215632A (zh) * | 2014-08-28 | 2014-12-17 | 宁波瑞源生物科技有限公司 | 一种稳定的脂肪酶试剂盒 |
| CN107356544A (zh) * | 2017-07-19 | 2017-11-17 | 王贤俊 | 一种脂肪酶检测试剂盒 |
| CN107449746A (zh) * | 2017-07-19 | 2017-12-08 | 王贤俊 | 一种脂肪酶检测试剂盒的制备方法 |
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Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104215632A (zh) * | 2014-08-28 | 2014-12-17 | 宁波瑞源生物科技有限公司 | 一种稳定的脂肪酶试剂盒 |
| CN107356544A (zh) * | 2017-07-19 | 2017-11-17 | 王贤俊 | 一种脂肪酶检测试剂盒 |
| CN107449746A (zh) * | 2017-07-19 | 2017-12-08 | 王贤俊 | 一种脂肪酶检测试剂盒的制备方法 |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN110923292A (zh) * | 2019-11-15 | 2020-03-27 | 中山市创艺生化工程有限公司 | 一种血清脂肪酶检测试剂盒及其制备方法与应用 |
| CN110923292B (zh) * | 2019-11-15 | 2024-03-29 | 中山市创艺生化工程有限公司 | 一种血清脂肪酶检测试剂盒及其制备方法与应用 |
| CN112051354A (zh) * | 2020-08-05 | 2020-12-08 | 武汉生之源生物科技股份有限公司 | 一种脂肪酶测定试剂盒及其制备方法 |
| CN112051354B (zh) * | 2020-08-05 | 2022-06-14 | 武汉生之源生物科技股份有限公司 | 一种脂肪酶测定试剂盒及其制备方法 |
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