CN109475560B - 神经病症的治疗 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种用于预防或治疗受试者的神经病症的式(I)化合物，以及其前药、代谢物、互变异构物、溶剂合物和药学上可接受的盐，其中X1、X2和X3彼此独立地为N或CH；其条件为X1、X2和X3中的至少两个是N；Y是N或CH；R1和R2彼此独立地为(iii)式(II)的吗啉基，其中箭头表示式(I)中的键；且其中R3和R4彼此独立地为H、任选地被一个或两个OH取代的C1‑C3烷基、C1‑C2氟烷基、C1‑C2烷氧基、C1‑C2烷氧基C1‑C3烷基、CN或C(O)O‑C1‑C2烷基；或R3与R4一起形成选自以下的二价残基‑R5R6‑：任选地被1至4个F取代的C1‑C3亚烷基、‑CH2‑O‑CH2‑、‑CH2‑NH‑CH2‑或其中箭头表示式(II)中的键的结构中的任一个；或(iv)任选地被1至3个R7取代的选自硫代吗啉基和哌嗪基的饱和6元杂环Z；其中R7在每次出现时独立地为任选地被一个或两个OH取代的C1‑C3烷基、C1‑C2氟烷基、C1‑C2烷氧基C1‑C3烷基、C3‑C6环烷基；或两个R7取代基一起形成选自任选地被1至4个F取代的C1‑C3亚烷基、‑CH2‑O‑CH2‑或‑O‑CH2CH2‑O‑的二价残基‑R8R9‑；其条件为，R1和R2中的至少一个是式II的吗啉基。

Description

神经病症的治疗
技术领域
本发明涉及用于预防或治疗受试者的神经病症的组合物。
背景技术
蛋白激酶mTOR(哺乳动物雷帕霉素靶标)是涉及细胞能量代谢、分化、生长和存活的整合因子。另外，mTOR在脑特异性机制，诸如突触可塑性、学习和皮质发育方面具有关键功能(Wong,M.,Biomed J,2013.36(2):第40-50页)。mTOR信号传导路径在许多疾病中活化。具体地，各种神经病症，诸如亨廷顿氏病和癫痫性癫痫发作已经与磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/mTOR路径相关联。
迄今为止，可用的mTOR抑制剂，诸如雷帕霉素、具有免疫抑制和消炎效力的巨环内酯抗生素以及紧密相关的雷帕霉素类似物变构地结合至mTORC1的FKBP结合袋(Laplante,M.and D.M.Sabatini,Cell,2012.149(2):第274-93页)。mTOR的重要下游效应子是S6激酶(S6K)、S6核糖体蛋白(S6rP)和4E-结合蛋白(4E-BP)。针对mTORC2的抑制作用似乎是可忽略的，引起神经病症中mTOR作用的部分抑制。另外，这些化合物显示不合需要的物理化学特性。已开发出第一代ATP定点mTOR抑制剂，如INK128。这些抑制剂抑制mTORC1和mTORC2且阻断mTOR的所有功能，但另一方面，缺乏高靶特异性，可能引起较低耐受性。另外，不利的PK特征限制穿透血脑屏障且因此限制CNS中的靶抑制，而这是治疗CNS病症所需的。
蛋白质聚集可以导致各种疾病。某些蛋白质尽管实际上普遍表达，但在中枢神经系统(CNS)中有毒。这些神经退化性疾病包含致病蛋白质可以积累于核内的病症，如同患有多麸酰胺酸扩增疾病(诸如亨廷顿氏病和脊髓小脑共济失调)的情形，以细胞质内含物为特征的病症(诸如帕金森氏病中的α-突触核蛋白)，以及致病蛋白质在细胞外(例如在普里昂蛋白疾病中)或同时在细胞内和细胞外积累(例如阿兹海默氏病中的τ蛋白和淀粉样-β(Aβ))的病症(Aguzzi,A.和T.O'Connor,Nat Rev Drug Discov,2010.9(3):第237-248页)。
亨廷顿氏病(一种常染色体显性病症)涉及基底神经节和皮质中的相对选择性神经退化，与亨廷顿蛋白(HTT)上多麸酰胺酸的三核苷酸重复扩增有关。突变亨廷顿蛋白(mHTT)无法有效地从神经元中清除，导致有毒细胞内聚集物积累和相关神经元死亡。降低mHTT水平或将mHTT转变成毒性较弱的物质是开发有效疗法的最有前景的策略。除HTT基因沉默方法以外，也已起始尝试增进mHTT蛋白质的清除，特别是通过自体吞噬(Nopoulos,P.C.,Dialogues Clin Neurosci,2016.18(1):第91-98页)。
自体吞噬是一种细胞路径，经由该路径，损伤或致病蛋白质和细胞器经双层膜自噬小体囊泡吞没，经溶酶体融合，从而引起负荷降解(Nyfeler,B.等人,Methods Mol Biol,2012.821:第239-250页)。自体吞噬可在以错误折迭的蛋白质积累为特征的神经退化性蛋白质病，诸如亨廷顿氏病中起重要作用。也已显示，减弱自体吞噬和蛋白质聚集可与其它神经病症，如阿兹海默氏症和帕金森氏病相关联。
已知活化哺乳动物雷帕霉素靶标(mTOR)信号传导路径可减少大自体吞噬(Jung,C.H.等人,FEBS Lett,2010.584(7):第1287-95页)，且mHTT促进mTOR信号传导(Pryor,W.M.等人,Sci Signal,2014.7(349):第ra103页)。在亨廷顿氏病的小鼠模型和人脑中，已显示mTOR在多麸酰胺酸聚集物中经隔离。另外，已显示在亨廷顿氏病的细胞和动物模型中，mTOR抑制剂可增进自体吞噬且因此减少mHTT积累和相关神经元死亡(Ravikumar B.等人,NatGenet,2004.36:第585-595页；Floto RA等人,Autophagy,2007.3:第620-622页)。变构mTOR抑制剂(例如，雷帕霉素/雷帕霉素类似物)通过刺激自体吞噬来介导mHTT片段的清除且防止非神经元细胞中mHTT诱导的毒性(Ravikumar,B.等人,Hum Mol Genet,2002.11(9):第1107-1117页)。然而，近期的研究显示，在R6/2小鼠HD模型中，雷帕霉素类似物在预防神经退化方面无效(Fox,J.H.等人,Mol Neurodegener,2010.5:第26页)。
相较于变构mTOR抑制剂，近来已显示催化性ATP定点mTOR抑制剂在诱导自噬潮和降低非神经元细胞中mHTT积累方面更有效(Roscic,A.等人,J Neurochem,2011.119(2):第398-407页)，而且降低mHTT聚集物积累和毒性，并防止R6/2小鼠皮质纹状体脑切片中的中型多棘神经元退化(Proenca,C.C.等人,PLoS One,2013.8(7):第e68357页)。不幸的是，当前可用的催化性mTOR抑制剂缺乏足够的脑穿透性并且可能毒性太强而无法进行长期活体内概念验证(PoC)研究。
迄今为止的大部分先进治疗方法均基于使用反义寡核苷酸或siRNA通过中枢施用而进行的HTT基因沉默。在HD动物模型中，这些方法有力地展示疾病进展的大幅减少。当前反义方法的关键问题是其侵袭性中枢施用以及这些反义分子是否能在人脑中实现充分扩散。
在全世界五千万患有诱发性癫痫症的人中，有30-40％具有疗法抗性(
Figure GDA0004040055220000031
W.等人,Nat Rev Drug Discov,2013.12(10):第757-776页)。当前标准治疗的实例是苯巴比妥和左乙拉西坦。苯巴比妥是第一代抗癫痫药物，在人类患者和动物模型中具有明显抗惊厥功效，而且具有严重副作用，如强镇静作用。左乙拉西坦属于第二代抗癫痫药物且是治疗癫痫症使用最广泛的药物之一。
与mTOR信号传导升高有关的若干基因缺陷(TOR病(TORopathy))导致癫痫性癫痫发作。TSC癫痫发作是由TSC1或TSC2常染色体显性不活化突变，诱导组成性mTOR活化，导致良性肿瘤形成、智力迟钝和癫痫发作而引起的癫痫症的一种形式。在临床研究中，依维莫司治疗降低TSC患者和TSC相关SEGA患者的癫痫发作频率。引起癫痫症的其它“TOR病”有羊水过多症、巨脑症、症状性癫痫症候群、PMSE、皮质发育不良(FCD)以及与PTEN突变有关的“TOR病”(Cardamone,M.等人,J Pediatr,2014.164(5):第1195-200页；Sadowski,K.等人,Pharmacol Rep,2015.67(3):第636-46页)。
癫痫形成是在促癫痫损害(例如，脑损伤或基因缺陷)的发生与首次自发癫痫发作之间的时间段。已经描述不同类型癫痫形成所涉及的许多因素，且mTOR活化是在许多类型癫痫中所观察到的一个因素(Sadowski,K.,K.Kotulska-Jozwiak和S.Jozwiak,PharmacolRep,2015.67(3):第636-46页)。当前使用的所有癫痫发作抑制剂均是对症作用且不会改变癫痫形成。mTOR活化涉及癫痫形成期间的不同过程：神经元生长和肥大神经细胞的形成、自体吞噬抑制和神经炎症。另外，有资料指示，在癫痫症的不同动物模型中，mTOR抑制剂雷帕霉素影响癫痫形成和癫痫发作的次数/强度。
当前疗法的一个主要缺点是报告的mTOR或mTOR/PI3K双重抑制剂跨血脑屏障(BBB)的能力有限或甚至不能跨血脑屏障，更不用说目前先进技术的化合物可能存在的细胞毒性，使其在治疗神经病症方面的医学益处有限。
发明内容
现已意外地发现，本发明化合物可用于治疗神经病症。具体地，已发现本发明化合物是mTOR特异性抑制剂或PI3K/mTOR双重抑制剂且其能够穿透血脑屏障，也就是说，已发现其抑制脑中的PI3K/mTOR路径。此外，已意外地发现本发明化合物是无细胞毒性且口服生物可用的。值得注意的是，意外地发现本发明化合物在活体外和活体内诱导自体吞噬。另外，已发现本发明化合物在小鼠中在活体外减少神经毒性突变亨廷顿蛋白聚集物的形成且减少电击诱导的癫痫发作。
由于在临床前模型中证实功效，故本发明的具有良好耐受性且穿透血脑屏障的mTOR抑制剂有可能开发出来作为治疗或预防神经病症，诸如HD和癫痫症的临床候选物，所述神经病症为迄今为止具有破坏性且通常致命的疾病，无任何治疗选择。
因此，在本发明的第一方面中，提供了一种用于预防或治疗受试者的神经病症的式(I)化合物，以及其前药、代谢物、互变异构物、溶剂合物和药学上可接受的盐，
Figure GDA0004040055220000041
其中，
X1、X2和X3彼此独立地为N或CH；其条件为，X1、X2和X3中的至少两个是N；
Y是N或CH；
R1和R2彼此独立地为
(i)式(II)的吗啉基
Figure GDA0004040055220000051
其中箭头表示式(I)中的键；且
其中R3和R4彼此独立地为H、任选地被一个或两个OH取代的C1-C3烷基、C1-C2氟烷基、C1-C2烷氧基、C1-C2烷氧基C1-C3烷基、CN或C(O)O-C1-C2烷基；或R3与R4一起形成选自以下的二价残基-R5R6-：任选地被1至4个F取代的C1-C3亚烷基、-CH2-O-CH2-、-CH2-NH-CH2-或结构
Figure GDA0004040055220000052
中的任一个；
其中箭头表示式(II)中的键；或
(ii)任选地被1至3个R7取代的选自硫代吗啉基和哌嗪基的饱和6元杂环Z；其中R7在每次出现时独立地为任选地被一个或两个OH取代的C1-C3烷基、C1-C2氟烷基、C1-C2烷氧基C1-C3烷基、C3-C6环烷基；或两个R7取代基一起形成选自任选地被1至4个F取代的C1-C3亚烷基、-CH2-O-CH2-或-O-CH2CH2-O-的二价残基-R8R9-；
其条件为，R1和R2中的至少一个是式II的吗啉基。
随着本说明书继续，本发明的其它方面和实施方式将变得显而易见。
附图说明
图1A：在史泊格多利(SD)大鼠中化合物3(“Cpd.3”)水平的药物动力学分析。在单次口服施用Cpd.3(10mg/kg)之后，通过LC-MS分析在不同时间点组织样品中的化合物水平。n＝3
图1B：在balb 6小鼠中Cpd.3和化合物8(Cpd.8)水平的药物动力学分析。在单次口服施用Cpd.3或Cpd.8(50mg/kg)之后，通过LC-MS分析在不同时间点组织样品中的化合物水平。n＝3
图2A：以单次口服施用50mg/kg向balb 6小鼠施用的Cpd.3的药效学分析。通过蛋白质免疫法分析脑溶解产物。如在30分钟与8小时之间的时间点S6磷酸化减少所指示，Cpd.3抑制mTOR信号传导。蛋白质免疫带的定量显示mTOR信号传导路径减少的显著性。n＝3，变异数分析(ANOVA)，***p<0.0005，**p<0.005，*p<0.05
图2B：以单次口服施用50mg/kg向balb 6小鼠施用的Cpd.8的药效学分析。通过蛋白质免疫法分析脑溶解产物。如在30分钟与8小时之间的时间点S6磷酸化减少所指示，Cpd.8抑制mTOR信号传导。蛋白质免疫带的定量显示mTOR信号传导路径减少的显著性。n＝3，ANOVA，***p<0.0005，**p<0.005，*p<0.05
图2C：以单次口服施用50mg/kg向balb 6小鼠施用的Cpd.3的药效学分析。通过蛋白质免疫法分析大腿肌肉溶解产物。如在30分钟与8小时之间的时间点S6磷酸化减少所指示，Cpd.3抑制mTOR信号传导。蛋白质免疫带的定量显示mTOR信号传导路径减少的显著性。n＝3，ANOVA，***p<0.0005，**p<0.005，*p<0.05
图2D：以单次口服施用50mg/kg向balb 6小鼠施用的Cpd.8的药效学分析。通过蛋白质免疫法分析大腿肌肉溶解产物。如在30分钟与8小时之间的时间点S6磷酸化减少所指示，Cpd.8抑制mTOR信号传导。蛋白质免疫带的定量显示mTOR信号传导路径减少的显著性。n＝3，ANOVA，***p<0.0005，**p<0.005，*p<0.05
图3A：来自匹鲁卡品预处理的癫痫小鼠及其未处理对应物的溶解的小鼠脑的蛋白质免疫分析。在匹鲁卡品持续性癫痫(SE)模型中mTOR信号传导升高。n＝9(未处理小鼠)，n＝8(癫痫小鼠)，ANOVA*p<0.05
图3B：来自癫痫/匹鲁卡品预处理小鼠和未处理小鼠的溶解的小鼠脑的蛋白质免疫分析，其中用单次口服剂量的化合物3和化合物8治疗显著抑制脑中S6磷酸化。在未处理小鼠中观察到较强作用。依维莫司未显示脑中显著mTOR信号传导抑制作用。平均值±SEM，ANOVA，*p<0.05，#p<0.05，n＝5
图4：在用mTOR抑制剂治疗癫痫小鼠和非癫痫小鼠之后，进行苯巴比妥或左乙拉西坦最大电击癫痫发作临限值测试(MEST)。观察到抑制剂的抗癫痫作用。
图4A、4B：未处理小鼠的MEST。
图4C、4D：匹鲁卡品处理的癫痫小鼠的MEST。
Pheno＝苯巴比妥，LEV＝左乙拉西坦，Evero＝依维莫司，Rapa＝雷帕霉素，括号：以mg/kg提供的剂量，预处理时间以小时表示，施用途径是口服(po)或腹膜内(ip)。A、C：以mA±平均值的标准误差(SEM)表示的CC50；B、D：以相对于媒剂CC50的％表示的CC50变化，ANOVA和事后邓尼特检验，*p<0.05
图5：在与不同浓度Cpd.3和Cpd.8以及mTORC1/2抑制剂INK 128(萨盘尼塞(Sapanisertib))(100nM)和雷帕霉素(400nM)一起培育之后，来源于表达具有7个(STHdhQ7 /Q7)或111个CAG重复序列(STHdhQ111/Q111)的基因嵌入小鼠模型的永生化纹状体细胞的细胞活力和蛋白质合成。
图5A+图5B乳酸脱氢酶(LDH)分析，在A中：STHdhQ7/Q7。B：STHdhQ111/Q111。在24小时与48小时之间的时间点，Cpd.3和Cpd.8均减少LDH产生；n＝3-6
图5C+图5D侦测在与Cpd.3、Cpd.8以及参考化合物INK128(100nM)和雷帕霉素(400nM)一起培育之后在不同时间点STHdhQ7/Q7和STHdhQ111/Q111的粒线体活性的PrestoBlue分析。在与1230nM Cpd.3一起培育72小时之后，化合物被良好耐受，仅引起少量抑制。n＝6-9
ANOVA***p<0.0005，**p<0.005，*p<0.05
图6：在用Cpd.3(200nM、400nM、1230nM)、Cpd.8(130nM、1230nM)、INK 128(100nM)、雷帕霉素(400nM)或DMSO对照物处理4小时之后STHdhQ7/Q7和STHdhQ111/Q111细胞中mTOR信号传导路径的抑制和自体吞噬的诱导。细胞溶解产物的蛋白质免疫分析。
图6A+图6B：mTOR信号传导分子mTOR、S6rp和4E-PB的磷酸化减少具有浓度依赖性。n＝3
图6C+图6D：由LC3-II增加指示的自体吞噬诱导。n＝3
ANOVA***p<0.0005，**p<0.005，*p<0.05
图7：分别用具有Q51或Q19延伸的mHTT外显子1转染的人胚肾细胞(HEK293)细胞上的mHTT聚集物形成减少。
图7A+图7B：用具有Q51延伸的mHTT外显子1转染且用Cpd.8(130nM、1230nM)、cpd.3(400nM、1230nM)、INK128(100nM)、雷帕霉素(400nM)或DMSO对照物预处理和用具有Q19延伸的mHTT外显子1转染且用DMSO对照物处理的溶解的HEK293细胞的过滤器截留分析。用mTOR抑制剂处理显著减少聚集物形成。n＝3,ANOVA***p<0.0005，**p<0.005，*p<0.05
图7C+图7D：用具有Q51的mHTT外显子1转染且用Cpd.8(130nM、1230nM)、Cpd.3(400nM、1230nM)、INK128(100nM)、雷帕霉素(400nM)或DMSO对照物预处理的HEK293细胞的免疫染色。手动地计算10000个细胞/样品中聚集物的量。ANOVA****p<0.00005，***p<0.0005，**p<0.005，*p<0.05
图8A：分别在单次口服施用50mg/kg Cpd.3之后0.5小时、4小时、8小时Balb/c小鼠的脑中自体吞噬的诱导。通过蛋白质免疫法分析脑溶解产物。自体吞噬性标记物LC3-II和p62在30分钟与8小时之间的时间点改变。蛋白质免疫带的定量显示自体吞噬的诱导。n＝3，ANOVA，***p<0.0005，**p<0.005，*p<0.05
图8B：在单次口服施用50mg/kg Cpd.8之后Balb/C小鼠脑中自体吞噬的诱导。通过蛋白质免疫法分析脑溶解产物。自体吞噬性标记物LC3-II和p62在30分钟与8小时之间的时间点改变。蛋白质免疫带的定量显示自体吞噬的诱导。n＝3，ANOVA，***p<0.0005，**p<0.005，*p<0.05。
图9A：在治疗之前(P21)和期间(P22-P50)的出生后不同天数用媒剂、Cpd.R、Cpd.3和Cpd.8治疗的TSC1 GFAP小鼠的体重。平均值±SEM。由于一些动物在观察期间死亡，故n在6与14之间变化。
图9B：特定治疗方案对Tsc1 GFAP小鼠中自发电图癫痫发作的影响。Cpd.3和Cpd.8明显减少自发癫痫发作，而参考分子Cpd.R具有较弱作用。数据以测试各周的平均值±SEM(N＝27-48个记录/组)呈现。统计显著性以媒剂作为比较器，通过多重性调整的p<0.05标记(威尔科克森非参数检验)。
图10：来自R6/2小鼠和一只野生型动物的纹状体的IHC分析。用媒剂、Cpd.3和Cpd.8治疗小鼠11.5周且将纹状体切片。在对mutHTT聚集物染色之后，在4个样品中计算聚集物数量并分析聚集物面积。在Cpd.3治疗之后，尽管mutHTT聚集物的数量不变，但这些聚集物覆盖的面积显著减小，表明mutHTT聚集物在治疗之后变小。(ANOVA,p<0.05)
具体实施方式
现将详细提及本发明呈现的其它方面和呈现的其它实施方式，其实施例以所附结构和式子说明。虽然结合所列举的实施方式描述本发明，但应了解其不欲将本发明限于这些实施方式。本领域技术人员应能认识到与本文所述类似或相当的多种方法和材料，其可用于本发明的实践中。本发明绝不限于本文所述的方法和材料。
除非不兼容，否则结合本发明的特定方面、实施方式或实施例描述的特征、整数和特性应理解为适用于本文中所描述的任何其它方面、实施方式或实施例。本说明书中所揭示的所有特征(包含任何随附申请专利范围、摘要和图式)和/或如此揭示的任何方法或制程的所有步骤可以任何组合形式组合，不过这些特征和/或步骤中的至少一些相互排斥的组合除外。本发明不限于任何前述具体实例的细节。本发明扩及至本说明书(包含任何随附申请专利范围、摘要和图式)中所揭示的特征的任何新颖特征或任何新颖组合，或扩及至如此揭示的任何方法或制程的步骤的任何新颖步骤或任何新颖组合。
除非另外定义，否则本文中所用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域的一般技术者通常所理解相同的含义。
出于解释本说明书的目的，将应用以下定义且只要合适，以单数形式使用的术语也将包含复数且反之亦然。也应了解，本文所用术语仅为了描述特定实施方式，而非为了限制。
定义：
除非另外指出，否则术语“包含”、“具有”和“包括”应解释为开放式术语(也就是说，意指“包括但不限于”)。
术语“个体”、“受试者”或“患者”在本文中可互换使用。在一个优选实施方式中，受试者为人类。
如本文所用，术语“治疗”包括：(1)预防或延迟可能罹患或易患病状、病症或病况但尚未经历或展示所述病状、病症或病况的临床或亚临床症状的受试者中病状、病症或病况的临床症状发展的发生；(2)抑制所述病状、病症或病况(例如，停滞、减少或延迟疾病的发生，或在维持治疗情况下其复发、其至少一种临床或亚临床症状的发生)；和/或(3)缓解病况(也就是说，使病状、病症或病况，或至少一种其临床或亚临床症状消退)。对待治疗患者的益处在统计学上显著或至少可被患者或被医师察觉。然而，应了解，当向患者施用药剂以治疗疾病时，结果可能不总是有效治疗。在一个实施方式中，如本文所用，术语“治疗”是指治疗性治疗。在另一个实施方式中，如本文所用，术语“治疗”是指预防性治疗。
术语“手性”是指与镜像配偶体具有不重迭性特性的分子，而术语“非手性”是指可与其镜像配体重迭的分子。
术语“立体异构物”是指具有相同化学构成但在空间中原子或基团的排列不同的化合物。
“非对映异构物”是指具有两个或多于两个手性中心并且其中化合物不互为镜像的立体异构物。非对映异构物具有不同物理特性，例如熔点、沸点、光谱特性，以及化学和生物反应性。非对映异构物混合物可依据高分辨率分析程序，诸如电泳和层析法分离。
“对映异构物”是指化合物的互为不可重迭镜像的两种立体异构物。本文中使用的立体化学定义和惯例一般遵循S.P.Parker编辑,McRaw-Hiff Dictionary of ChemicalTerms(1984),McGraw-Hill Book Company,New York；以及Eliel,E.和Wilen,S.,“Stereochemistry of Organic Compounds”,John Wiley&Sons,Inc.,New York,1994。本发明化合物可含有不对称或手性中心，且因此以不同立体异构形式存在。预期本发明化合物的所有立体异构形式，包括但不限于非对映异构物、对映异构物和构型异构物以及其混合物(诸如外消旋混合物)形成本发明的一部分。许多有机化合物以光学活性形式存在，也就是说，其能够使平面偏光的平面旋转。在对光活性化合物的描述中，使用前缀D和L或R和S表示分子关于其手性中心的绝对构型。前缀d和l或(+)和(-)用以表示由化合物引起的平面偏振光旋转的标志，其中(-)或l意指化合物为左旋的。具有(+)或d前缀的化合物为右旋的。对于给定化学结构，这些立体异构物是一致的，不过其互为镜像。特定立体异构物也可称为对映异构物，且这些异构体的混合物通常称为对映异构或非手性混合物。对映异构物的50:50混合物称为外消旋混合物或外消旋体。术语“互变异构物”或“互变异构形式”是指经由低能量障壁可互相转化的具有不同能量的结构异构体。举例而言，质子互变异构物包含经由质子迁移进行的相互转化，诸如酮烯醇和亚胺-烯胺异构化。
如本文所用，短语“药学上可接受的盐”是指本发明化合物的药学上可接受的有机或无机盐，特别是酸加成盐。示例性盐包括但不限于硫酸盐、柠檬酸盐、乙酸盐、草酸盐、氯化物、溴化物、碘化物、硝酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、酸式磷酸盐、异烟碱酸盐、乳酸盐、水杨酸盐、酸式柠檬酸盐、酒石酸盐、油酸盐、丹宁酸盐、泛酸盐、酒石酸氢盐、抗坏血酸盐、琥珀酸盐、顺丁烯二酸盐、龙胆酸盐、反丁烯二酸盐、葡糖酸盐、葡萄糖醛酸盐、葡糖二酸盐、甲酸盐、苯甲酸盐、麸胺酸盐、甲烷磺酸盐(甲磺酸盐)、乙烷磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐和双羟萘酸盐。药学上可接受的盐可涉及包含另一分子，诸如乙酸根离子、琥珀酸根离子或其它相对离子。相对离子可以是使母体化合物上的电荷稳定的任何有机或无机部分。此外，药学上可接受的盐的结构中可具有超过一个带电原子。多个带电原子作为药学上可接受的盐的一部分的情况可具有多个相对离子。因此，药学上可接受的盐可具有一个或多个带电原子和/或一个或多个相对离子。
若本发明化合物是碱，则可以通过此项技术中可用的任何适合方法制备所需药学上可接受的盐，例如用无机酸，诸如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、甲烷磺酸和磷酸等，或用有机酸，诸如乙酸、三氟乙酸、顺丁烯二酸、琥珀酸、杏仁酸、反丁烯二酸、丙二酸、丙酮酸、草酸、乙醇酸、水杨酸、哌喃糖酸(诸如葡糖醛酸或半乳糖醛酸)、α羟基酸(诸如柠檬酸或酒石酸)、胺基酸(诸如天冬胺酸或麸胺酸)、芳族酸(诸如苯甲酸或肉桂酸)或磺酸(诸如对甲苯磺酸或乙烷磺酸)等处理游离碱。
短语“药学上可接受的”表示物质或组合物必须与构成调配物的其它成分和/或正用其治疗的哺乳动物在化学上和/或毒理学上相容。
“溶剂合物”是指一个或多个溶剂分子与本发明化合物的缔合物或复合物。形成溶剂合物的溶剂的实例包括但不限于水、异丙醇、乙醇、甲醇、二甲亚砜(DMSO)、乙酸乙酯、乙酸和乙醇胺。术语“水合物”是指溶剂分子是水的复合物。
术语“保护基”是指在化合物上其它官能基反应期间常用于阻挡或保护特定官能基的取代基。举例而言，“胺基保护基”是附接至胺基的取代基，其阻挡或保护化合物中的胺基官能基。适合胺基保护基包含乙酰基、三氟乙酰基、叔丁氧基羰基(BOC)、苯甲氧基羰基和9-茀基亚甲氧基羰基(Fmoc)。关于保护基及其使用的一般说明，参见T.W.Greene,Protective Groups in Organic Synthesis,John Wiley&Sons,New York,1991。
术语“本发明化合物”和“式(I)化合物”包含其立体异构物、几何异构体、互变异构物、溶剂合物、药学上可接受的盐以及盐的溶剂合物。
术语“哺乳动物”包括但不限于人类、小鼠、大鼠、天竺鼠、猴、狗、猫、马、牛、猪和绵羊。如本文所用，术语“哺乳动物”优选是指人类。
术语“阿兹海默氏病”与“阿兹海默症”在本文中可互换使用。
术语“神经病症”一般是指影响神经系统(包含中枢神经系统和周边神经系统)的病症。神经病症，特别是中枢神经系统(CNS)病症，涵盖众多疾患，尤其包含神经退化性疾病，诸如亨廷顿氏病和众多中枢神经系统功能障碍，诸如癫痫症。
术语“神经退化性疾病”是指由中枢神经系统破坏引起的疾病且可通过通常经突触互连的特定神经元群的进行性功能异常、退化和死亡鉴别。神经退化引起移动和/或精神功能的功能异常。另外，如本文所用，术语“神经退化性疾病”描述与蛋白质错误折迭和/或聚集有关或由此引起的神经退化性疾病。示例性神经退化性疾病包含亨廷顿氏病、脊髓小脑共济失调、帕金森氏病、阿兹海默症、肌肉萎缩性侧索硬化(ALS)、囊肿性纤维化、家族性淀粉样变性多发性神经病、海绵状脑病、路易体痴呆、额颞叶型痴呆伴帕金森氏症、脊髓小脑共济失调、脊髓延髓肌肉萎缩、遗传性齿状核红核苍白球丘脑下部萎缩、家族性英国型痴呆、家族性丹麦型痴呆和普里昂蛋白疾病。
如本文所用，术语“癫痫症”是指以反复性癫痫发作为特征的任何慢性神经病症。每次癫痫发作可以呈现为非激发的或可以由应激、焦虑、睡眠剥夺、疾病、化学暴露(例如，药物滥用或饮酒)、光刺激(例如，闪烁/闪动的光)和/或类似因素触发或引起。所述病症可以具有未知病因(“特发性癫痫症”)或可以例如尤其由头部外伤、脑肿瘤、遗传倾向性、感染、发育缺陷或其任何组合引起(“症状性癫痫症”)。示例性癫痫性癫痫发作的类型包含部分或局灶起始的癫痫发作，这些癫痫发作是在脑内局部发生的(至少起初是)，和全身性癫痫发作，其广泛分布于脑内。部分癫痫发作可以进一步分类为不影响意识的单纯型部分癫痫发作，和影响意识的复杂型部分癫痫发作。引起意识丧失的全身性癫痫发作可以尤其包含失神、失张性、痉挛性、肌阵挛性、张力性和张力性-痉挛性癫痫发作。癫痫症和/或癫痫性癫痫发作可以通过任何适合技术或技术组合诊断，尤其包含脑电图描记术(EEG)、脑磁描记法、磁共振成像(MRI)、正电子发射断层摄影法(PET)、单光子发射计算机断层摄影术(SPECT)或视频-EEG。
如本文所用，术语“癫痫发作”意指以脑中引起至少一种临床症状的异常电活动为特征的神经事件。电活动可以脑中一部分或全部神经元超同步、机能亢进和/或兴奋过度为特征。由癫痫发作引起的示例性症状可包含突发且非自主的肌肉收缩(例如，抽搐)、身体一部分或全部麻木、记忆丧失、意识丧失、不能集中精力、幻觉和/或类似情形。因此，癫痫发作可能尤其影响运动、自主、认知、感觉(视觉、听觉、嗅觉、味觉、感觉)和/或情感功能。每一癫痫发作可以由癫痫症引起的癫痫性癫痫发作或由任何其它原因引起的非癫痫性癫痫发作为特征。
如上所指出，分类为“有症状”的癫痫症指示，存在可能病因且可以尝试除去所述病因的特定疗程，而分类为“特发性”指示未发现明显病因。
术语“TSC”涉及由TSC1或TSC2常染色体显性不活化突变，诱导组成性mTOR活化，导致良性肿瘤形成、智力迟钝和癫痫发作而引起的癫痫症的一种形式。因此，TSC是研究mTOR抑制剂对癫痫形成和癫痫性癫痫发作的影响的癫痫症的模型形式。在90％的TSC患者中发生室管膜下巨细胞星形细胞瘤(SEGA)。在脑中，正常细胞发育和功能的紊乱可导致癫痫症及神经认知、行为和精神缺陷。癫痫症见于80-90％的TSC患者中，且常见抗药性(Curatolo,P.,R.Moavero及P.J.de Vries,The Lancet Neurology.14(7):第733-745页)。在TSC小鼠模型中，用雷帕霉素抑制mTOR对行为具有正面影响，减少肿瘤形成且抑制癫痫发作。早期用雷帕霉素治疗防止癫痫症发生和过早死亡(Meikle,L.等人,J Neurosci,2008.28(21):第5422-5432页)。在成年小鼠中用雷帕霉素短时治疗不仅修复突触可塑性，而且也修复异型接合TSC模型的行为缺陷(Ehninger,D.等人,Nat Med,2008.14(8):第843-848页)。另外，雷帕霉素治疗可逆转具有TSC突变的神经元的细胞异常(Goto,J.等人,Proceedings of theNational Academy of Sciences,2011.108(45):第E1070-E1079页)。
其它的“TOR病”，(也就是说，由mTOR的向上调控所引起癫痫症的原发性疾病)为羊水过多症、巨脑症、症状性癫痫症症候群、PMSE、局灶性皮质发育不良(FCD)以及与PTEN突变有关的“TOR病”。
术语“PMSE”是指羊水过多症、巨脑症和症状性癫痫症，在一些Amish儿童中发现的以异常大脑、认识功能障碍和重度治疗抗性癫痫症为特征的罕见症候群。
术语“PTEN”是指磷酸酶和张力蛋白同源物，即使得PIP3中肌醇环的3`磷酸去磷酸化的磷酸酶。PTEN是在癌症中通常突变，导致mTOR路径信号传导增加的肿瘤抑制蛋白。CNS中PTEN缺失可与癫痫发作相关联。
术语“癫痫形成”是指在促癫痫损害(例如，脑损伤或基因缺陷)的发生与首次自发癫痫发作之间的时间段。“癫痫形成”分成原发性癫痫形成(直至首次癫痫发作)和继发性癫痫形成(在首次癫痫发作发生之后癫痫症的发展)。本发明化合物可以在原发性癫痫形成期间和继发性癫痫形成(部分癫痫发作)期间以及完全发展的癫痫症(全身性癫痫发作)中使用。
治疗癫痫症意指，例如抑制一次或多次癫痫发作和/或抑制癫痫发作活动性，也就是说，降低癫痫发作频率；降低至少一次癫痫发作的严重程度、身体范围和/或持续时间；大体上防止至少一次癫痫发作；或减慢/减少/阻止癫痫形成；或其任何组合。抑制特定受试者的癫痫发作可以直接由受试者测量(例如，若癫痫发作在治疗期间进展)和/或更典型地，可以基于由一组受试者的控制性测试或临床试验得到的结果以统计方式预测结果。
术语“有效量”意指本发明化合物的一个数量可(i)治疗或预防特定疾病、病况或病症；(ii)减轻、改善或消除特定疾病、病况或病症的一种或多种症状；或(iii)预防或延迟本文所述的特定疾病、病况或病症的一种或多种症状的发作。
在癫痫症的情况下，有效量的药物可以降低癫痫发作以及在癫痫形成期间导致癫痫症发生的事件的强度或次数。
在神经退化性疾病的情况下，有效量的药物可以降低神经元或其它细胞中和通常CNS中蛋白质聚集物以及相关认知、心理和运动症状的量。对于神经退化性疾病的疗法，可以例如通过评估蛋白质聚集物的数量、认知和运动功能测量功效。
术语“最大耐受剂量”(MTD)是指不引起不可接受的副作用的药物或治疗的最高剂量。典型地，最大耐受剂量是在临床试验期间在需要治疗的物种中，例如啮齿动物或人类中，通过测试对不同组给定物种的递增剂量，直至发现具有可接受副作用的最高剂量来测定。已经发现本发明化合物在其治疗窗内具有MTD(参见实施例3和实施例4)。
如本申请案中所用，术语“前药”是指相较于母化合物或药物可具有改善的特性，诸如优选溶解度、降低的细胞毒性或增加的生物利用率并且能够经活化或转化成活性较强的母体形式的本发明化合物的前驱体或衍生物形式。本发明的前药包括但不限于胺基连接至吡啶或嘧啶核的衍生物，其中一个或两个氢被合适取代基置换；或在R2是哌嗪-1-基情况下，为环胺基官能基的衍生物。此类前药的实例是由选自20种最常见天然L-α-胺基酸的胺基酸酰基化、由诸如L-Ala-L-Ala的二肽、由碳酸、硫酸或磷酸酰基化的化合物，以及其药学上可接受的盐。
“代谢物”是指定化合物或其盐经体内代谢产生的产物。化合物的代谢物可使用此项技术中已知的常规技术鉴别，且其活性使用测试，诸如本文中所描述的测试来测定。此类产物可例如由所施用化合物的氧化、还原、水解、酰胺化、去酰胺化、酯化、去酯化和酶裂解等反应产生。具体地，在吗啉、哌嗪或硫代吗啉环R1和/或R2中任一位置被氧化或羟基化的如上文所定义的式(I)化合物被认为是代谢物。认为的其它代谢物是硫代吗啉S-氧化物和硫代吗啉S,S-二氧化物。因此，本发明也涉及本发明化合物的代谢物，包含通过如下方法产生的化合物，所述方法包括使本发明化合物与哺乳动物接触一段时间以足以产生其代谢产物。
在第一方面中，本发明提供了用于预防或治疗受试者的神经病症的式(I)化合物，以及其前药、代谢物、互变异构物、溶剂合物和药学上可接受的盐，
Figure GDA0004040055220000161
其中，
X1、X2和X3彼此独立地为N或CH；其条件为，X1、X2和X3中的至少两个是N；
Y是N或CH；
R1和R2彼此独立地为
(i)式(II)的吗啉基
Figure GDA0004040055220000162
其中箭头表示式(I)中的键；且
其中R3和R4彼此独立地为H、任选地被一个或两个OH取代的C1-C3烷基、C1-C2氟烷基、C1-C2烷氧基、C1-C2烷氧基C1-C3烷基、CN或C(O)O-C1-C2烷基；或R3与R4一起形成选自以下的二价残基-R5R6-：任选地被1至4个F取代的C1-C3亚烷基、-CH2-O-CH2-、-CH2-NH-CH2-或结构
Figure GDA0004040055220000163
中的任一个；
其中箭头表示式(II)中的键；或
(ii)任选地被1至3个R7取代的选自硫代吗啉基和哌嗪基的饱和6元杂环Z；其中R7在每次出现时独立地为任选地被一个或两个OH取代的C1-C3烷基、C1-C2氟烷基、C1-C2烷氧基C1-C3烷基、C3-C6环烷基；或两个R7取代基一起形成选自任选地被1至4个F取代的C1-C3亚烷基、-CH2-O-CH2-或-O-CH2CH2-O-的二价残基-R8R9-；
其条件为，R1和R2中的至少一个是式II的吗啉基。
在另一方面中，本发明提供了式(I)化合物，
Figure GDA0004040055220000171
其中，
X1、X2和X3彼此独立地为N或CH；其条件为，X1、X2和X3中的至少两个是N；Y是N或CH；
R1是4-吗啉基、2-甲基-4-吗啉基、3-甲基-4-吗啉基、八氘-4-吗啉基、8-氮杂-3-氧杂双环[3.2.1]辛-8-基或3-氮杂-8-氧杂双环[3.2.1]辛-3-基；且
R2是4-吗啉基、2-甲基-4-吗啉基、3-甲基-4-吗啉基、八氘-4-吗啉基、8-氮杂-3-氧杂双环[3.2.1]辛-8-基、3-氮杂-8-氧杂双环[3.2.1]辛-3-基、哌嗪-1-基、4-甲基哌嗪-1-基或4-硫代吗啉基。
单独或作为较大基团(诸如烷氧基)的一部分的每个烷基部分是直链或支链的，并且优选为C1-C3烷基，更优选为C1-C2烷基。实例具体包含甲基、乙基、正丙基和丙-2-基(异丙基)。烷氧基的实例具体包含甲氧基、乙氧基、正丙氧基和异丙氧基。如本文中所描述，烷氧基可以进一步包含取代基，诸如卤素原子，由此产生卤代烷氧基部分。
术语“烷氧基烷基”是指R-O-R'部分，其中R和R'基团是如本文所定义的烷基。实例包含甲氧基甲基、甲氧基乙基、乙氧基乙基和甲氧基丙基。
每个亚烷基部分是直链或支链的并且，特别是例如-CH2-、-CH2-CH2-、-CH(CH3)-、-CH2-CH2-CH2-、-CH(CH3)-CH2-或-CH(CH2CH3)-，优选为-CH2-、-CH2-CH2-或-CH(CH3)-。
单独或作为较大基团(诸如卤代烷氧基)的一部分的每个卤代烷基部分是被一个或多个相同或不同卤素原子取代的烷基。卤代烷基部分包含例如1至5个卤素取代基，或1至3个卤素取代基。实例具体包含氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、氯二氟甲基和2,2,2-三氟-乙基。
单独或作为较大基团(诸如卤代烯氧基)的一部分的每个卤代烯基部分是被一个或多个相同或不同卤素原子取代的烯基。实例包含2-二氟-乙烯基和1,2-二氯-2-氟-乙烯基。卤代烯基部分包含例如1至5个卤素取代基，或1至3个卤素取代基。
各环烷基部分可呈单环至双环形式，典型地且优选地呈单环形式，且优选含有3至6个碳原子。单环环烷基的优选实例具体包含环丙基、环丁基、环戊基和环己基。
术语“杂环”是指含有1至3个选自氮、氧和硫的杂原子作为环成员的饱和或部分不饱和碳环。此类环在环内不含相邻氧原子、相邻硫原子或相邻氧和硫原子。优选实例具体包含四氢呋喃基、吡咯啶基、吡唑啶基、咪唑啶基、哌啶基、哌嗪基、二氧杂环己烷基、吗啉基、恶唑啶基和异恶唑啶基。
在一个基团称为任选地被取代的情况下，优选为存在1至3个取代基，更优选为存在1至2个取代基。
某些式(I)化合物可以含有一个或两个或多于两个手性中心且这些化合物可以纯对映异构物或纯非对映异构物以及其呈任何比率的混合物形式提供。本发明化合物也包含式(I)化合物的所有互变异构形式。
在一个优选实施方式中，本发明提供了如本文所定义的式(I)化合物以及其互变异构物、溶剂合物和药学上可接受的盐。
在另一个优选实施方式中，本发明提供了式(I)化合物，其中X1、X2和X3是N。
在另一个优选实施方式中，(i)所述X1和所述X2是N，且所述X3是CH；(ii)所述X1和所述X3是N，且所述X2是CH；或(iii)所述X2和所述X3是N，且所述X1是CH，优选地以及其互变异构物、溶剂合物和药学上可接受的盐。在另一个实施方式中，(i)所述X1和所述X2是N，且所述X3是CH；或(ii)所述X2和所述X3是N，且所述X1是CH，优选地以及其互变异构物、溶剂合物和药学上可接受的盐。在另一个优选实施方式中，所述X1和所述X3是N，且所述X2是CH；优选地以及其互变异构物、溶剂合物和药学上可接受的盐。
在另一个优选实施方式中，所述Y是N，优选地以及其互变异构物、溶剂合物和药学上可接受的盐。在另一个优选实施方式中，所述Y是CH，优选地以及其互变异构物、溶剂合物和药学上可接受的盐。
在另一个优选实施方式中，所述R1和所述R2彼此独立地选自
Figure GDA0004040055220000191
Figure GDA0004040055220000201
在另一个优选实施方式中，所述R1和所述R2彼此独立地选自
Figure GDA0004040055220000202
在另一个优选实施方式中，所述R1和所述R2彼此独立地选自
Figure GDA0004040055220000203
在另一个优选实施方式中，所述化合物选自
4-(二氟甲基)-5-(4,6-二吗啉代-1,3,5-三嗪-2-基)吡啶-2-胺；
4-(二氟甲基)-5-(4,6-二吗啉代-1,3,5-三嗪-2-基)嘧啶-2-胺；
5-(4-(3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-6-(3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-1,3,5-三嗪-2-基)-4-(二氟甲基)吡啶-2-胺；
5-(4-(3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-6-吗啉代-1,3,5-三嗪-2-基)-4-(二氟甲基)吡啶-2-胺；
5-(4-(3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-6-吗啉代-1,3,5-三嗪-2-基)-4-(二氟甲基)嘧啶-2-胺；
5-(4,6-双((S)-3-甲基吗啉代)-1,3,5-三嗪-2-基)-4-(二氟甲基)吡啶-2-胺；
5-(4,6-双((S)-3-甲基吗啉代)-1,3,5-三嗪-2-基)-4-(二氟甲基)嘧啶-2-胺；
(S)-4-(二氟甲基)-5-(4-(3-甲基吗啉代)-6-吗啉代-1,3,5-三嗪-2-基)吡啶-2-胺；
(S)-4-(二氟甲基)-5-(4-(3-甲基吗啉代)-6-吗啉代-1,3,5-三嗪-2-基)嘧啶-2-胺；
5-(4-(3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-6-((S)-3-甲基吗啉代)-1,3,5-三嗪-2-基)-4-(二氟甲基)吡啶-2-胺；
5-(4-(3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-6-((S)-3-甲基吗啉代)-1,3,5-三嗪-2-基)-4-(二氟甲基)嘧啶-2-胺；
4-(二氟甲基)-5-(4-吗啉代-6-(哌嗪-1-基)-1,3,5-三嗪-2-基)吡啶-2-胺；
4-(二氟甲基)-5-(4-吗啉代-6-(哌嗪-1-基)-1,3,5-三嗪-2-基)嘧啶-2-胺；
(S)-4-(二氟甲基)-5-(4-(3-甲基吗啉代)-6-(哌嗪-1-基)-1,3,5-三嗪-2-基)吡啶-2-胺；
(S)-4-(二氟甲基)-5-(4-(3-甲基吗啉代)-6-(哌嗪-1-基)-1,3,5-三嗪-2-基)嘧啶-2-胺；
4-(二氟甲基)-5-(2,6-二吗啉代嘧啶-4-基)吡啶-2-胺；
4'-(二氟甲基)-2,6-二吗啉代-[4,5'-联嘧啶]-2'-胺；
4-(二氟甲基)-5-(4,6-二吗啉代嘧啶-2-基)吡啶-2-胺；
4'-(二氟甲基)-4,6-二吗啉代-[2,5'-联嘧啶]-2'-胺；
4-(二氟甲基)-5-(4-吗啉代-6-硫代吗啉代-1,3,5-三嗪-2-基)吡啶-2-胺；
4-(二氟甲基)-5-(4-吗啉代-6-硫代吗啉代-1,3,5-三嗪-2-基)嘧啶-2-胺；
5-(6-(3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-2-(3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)嘧啶-4-基)-4-(二氟甲基)吡啶-2-胺；
5-(2-(3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-6-吗啉代嘧啶-4-基)-4-(二氟甲基)吡啶-2-胺；
2-(3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-4’-(二氟甲基)-6-吗啉代-[4,5’-联嘧啶]-2’-胺；
5-(2,6-双((S)-3-甲基吗啉代)嘧啶-4-基)-4-(二氟甲基)吡啶-2-胺；
4'-(二氟甲基)-2,6-双((S)-3-甲基吗啉代)-[4,5'-联嘧啶]-2'-胺；
(S)-4-(二氟甲基)-5-(6-(3-甲基吗啉代)-2-吗啉代嘧啶-4-基)吡啶-2-胺；
(S)-4'-(二氟甲基)-6-(3-甲基吗啉代)-2-吗啉代-[4,5'-联嘧啶]-2'-胺；
5-(4-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)-6-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)-1,3,5-三嗪-2-基)-4-(二氟甲基)吡啶-2-胺；
5-[4,6-双(2,2-二甲基吗啉-4-基)-1,3,5-三嗪-2-基]-4-(二氟甲基)吡啶-2-胺；
(S)-4-(二氟甲基)-5-(2-(3-甲基吗啉代)-6-吗啉代嘧啶-4-基)吡啶-2-胺；
(S)-4'-(二氟甲基)-2-(3-甲基吗啉代)-6-吗啉代-[4,5'-联嘧啶]-2'-胺；
4-(二氟甲基)-5-[4-[(2S,6R)-2,6-二甲基吗啉-4-基]-6-[(3R)-3-甲基吗啉-4-基]-1,3,5-三嗪-2-基]吡啶-2-胺；
5-[4,6-双[(2R,6S)-2,6-二甲基吗啉-4-基]-1,3,5-三嗪-2-基]-4-(二氟甲基)吡啶-2-胺；
5-[4,6-双(3,7-二氧杂-9-氮杂双环[3.3.1]壬-9-基)-1,3,5-三嗪-2-基]-4-(二氟甲基)吡啶-2-胺；
4-(二氟甲基)-5-[4-(3,7-二氧杂-9-氮杂双环[3.3.1]壬-9-基)-6-(3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-1,3,5-三嗪-2-基]吡啶-2-胺；
5-[4,6-双(3,3-二甲基吗啉-4-基)-1,3,5-三嗪-2-基]-4-(二氟甲基)吡啶-2-胺；
5-[4,6-双[(3R,5S)-3,5-二甲基吗啉-4-基]-1,3,5-三嗪-2-基]-4-(二氟甲基)吡啶-2-胺；
5-[4,6-双[(3R)-3-甲基吗啉-4-基]-1,3,5-三嗪-2-基]-4-(二氟甲基)吡啶-2-胺；
4-(二氟甲基)-5-[4-(3,3-二甲基吗啉-4-基)-6-吗啉代-1,3,5-三嗪-2-基]吡啶-2-胺；
4-(二氟甲基)-5-[4-[(3R,5S)-3,5-二甲基吗啉-4-基]-6-[(3R)-3-甲基吗啉-4-基]-1,3,5-三嗪-2-基]吡啶-2-胺；
4-(二氟甲基)-5-[4-(3,3-二甲基吗啉-4-基)-6-[(3R)-3-甲基吗啉-4-基]-1,3,5-三嗪-2-基]吡啶-2-胺；
4-(二氟甲基)-5-[4-[(3R)-3-(甲氧基甲基)吗啉-4-基]-6-[(3R)-3-甲基吗啉-4-基]-1,3,5-三嗪-2-基]吡啶-2-胺；
4-(二氟甲基)-5-[4-(3,7-二氧杂-9-氮杂双环[3.3.1]壬-9-基)-6-[(3R)-3-甲基吗啉-4-基]-1,3,5-三嗪-2-基]吡啶-2-胺；
4-(二氟甲基)-5-[4-[(3R)-3-甲基吗啉-4-基]-6-(3-氧杂-6-氮杂双环[3.1.1]庚-6-基)-1,3,5-三嗪-2-基]吡啶-2-胺；
4-(二氟甲基)-5-[4-[(3R)-3-甲基吗啉-4-基]-6-(6-氧杂-3-氮杂双环[3.1.1]庚-3-基)-1,3,5-三嗪-2-基]吡啶-2-胺；
4-(二氟甲基)-5-[4-[(3R)-3-甲基吗啉-4-基]-6-[(1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚-5-基]-1,3,5-三嗪-2-基]吡啶-2-胺；
4-(二氟甲基)-5-[4-[(3R)-3-甲基吗啉-4-基]-6-[(1S,4S)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚-5-基]-1,3,5-三嗪-2-基]吡啶-2-胺；
5-[4,6-双[(3R)-3-乙基吗啉-4-基]-1,3,5-三嗪-2-基]-4-(二氟甲基)吡啶-2-胺；
5-[4,6-双(8-氧杂-5-氮杂螺[3.5]壬-5-基)-1,3,5-三嗪-2-基]-4-(二氟甲基)吡啶-2-胺；
5-[4,6-双[(3R)-3-异丙基吗啉-4-基]-1,3,5-三嗪-2-基]-4-(二氟甲基)吡啶-2-胺；
4-(二氟甲基)-5-[4-(3,3-二甲基吗啉-4-基)-6-[(3R,5S)-3,5-二甲基吗啉-4-基]-1,3,5-三嗪-2-基]吡啶-2-胺；
4-(二氟甲基)-5-[4-(3,3-二甲基吗啉-4-基)-6-[(3R)-3-(甲氧基甲基)吗啉-4-基]-1,3,5-三嗪-2-基]吡啶-2-胺；
[(3R)-4-[4-[6-胺基-4-(二氟甲基)-3-吡啶基]-6-(3,3-二甲基吗啉-4-基)-1,3,5-三嗪-2-基]吗啉-3-基]甲醇；
4-(二氟甲基)-5-[4-(3,3-二甲基吗啉-4-基)-6-(3,7-二氧杂-9-氮杂双环[3.3.1]壬-9-基)-1,3,5-三嗪-2-基]吡啶-2-胺；
5-[4-(4-环丙基哌嗪-1-基)-6-(3,3-二甲基吗啉-4-基)-1,3,5-三嗪-2-基]-4-(二氟甲基)吡啶-2-胺；
4-(二氟甲基)-5-[4-(3,3-二甲基吗啉-4-基)-6-[4-(2-甲氧基乙基)哌嗪-1-基]-1,3,5-三嗪-2-基]吡啶-2-胺；
[(3R)-4-[4-[6-胺基-4-(二氟甲基)-3-吡啶基]-6-[(3R)-3-甲基吗啉-4-基]-1,3,5-三嗪-2-基]吗啉-3-基]甲醇；
4-(二氟甲基)-5-[4-[(3R,5R)-3,5-二甲基吗啉-4-基]-6-[(3R)-3-甲基吗啉-4-基]-1,3,5-三嗪-2-基]吡啶-2-胺；
4-(二氟甲基)-5-[4-[(3S,5S)-3,5-二甲基吗啉-4-基]-6-[(3R)-3-甲基吗啉-4-基]-1,3,5-三嗪-2-基]吡啶-2-胺；
4-(二氟甲基)-5-[4-吗啉代-6-(3-氧杂-9-氮杂双环[3.3.1]壬-9-基)-1,3,5-三嗪-2-基]吡啶-2-胺；
4-(二氟甲基)-5-[4-(3,7-二氧杂-9-氮杂双环[3.3.1]壬-9-基)-6-(3-氧杂-9-氮杂双环[3.3.1]壬-9-基)-1,3,5-三嗪-2-基]吡啶-2-胺；
5-[4,6-双[(3S,5S)-3,5-二甲基吗啉-4-基]-1,3,5-三嗪-2-基]-4-(二氟甲基)吡啶-2-胺；
4-(二氟甲基)-5-[4-(3,7-二氧杂-9-氮杂双环[3.3.1]壬-9-基)-6-吗啉代-1,3,5-三嗪-2-基]吡啶-2-胺；
4-(二氟甲基)-5-[4-[(3S)-3-乙基吗啉-4-基]-6-[(3R)-3-甲基吗啉-4-基]-1,3,5-三嗪-2-基]吡啶-2-胺；
4-(二氟甲基)-5-[4-[(3R)-3-乙基吗啉-4-基]-6-[(3R)-3-甲基吗啉-4-基]-1,3,5-三嗪-2-基]吡啶-2-胺；
4-(二氟甲基)-5-[4-[(3R)-3-甲基吗啉-4-基]-6-(8-氧杂-5-氮杂螺[3.5]壬-5-基)-1,3,5-三嗪-2-基]吡啶-2-胺。
在另一个优选实施方式中，所述化合物选自
4-(二氟甲基)-5-(4,6-二吗啉代-1,3,5-三嗪-2-基)吡啶-2-胺；
4-(二氟甲基)-5-(4,6-二吗啉代-1,3,5-三嗪-2-基)嘧啶-2-胺；
5-(4-(3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-6-(3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-1,3,5-三嗪-2-基)-4-(二氟甲基)吡啶-2-胺；
5-(4-(3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-6-吗啉代-1,3,5-三嗪-2-基)-4-(二氟甲基)吡啶-2-胺；
5-(4-(3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-6-吗啉代-1,3,5-三嗪-2-基)-4-(二氟甲基)嘧啶-2-胺；
5-(4,6-双((S)-3-甲基吗啉代)-1,3,5-三嗪-2-基)-4-(二氟甲基)吡啶-2-胺；
5-(4,6-双((S)-3-甲基吗啉代)-1,3,5-三嗪-2-基)-4-(二氟甲基)嘧啶-2-胺；
(S)-4-(二氟甲基)-5-(4-(3-甲基吗啉代)-6-吗啉代-1,3,5-三嗪-2-基)吡啶-2-胺；
(S)-4-(二氟甲基)-5-(4-(3-甲基吗啉代)-6-吗啉代-1,3,5-三嗪-2-基)嘧啶-2-胺；
5-(4-(3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-6-((S)-3-甲基吗啉代)-1,3,5-三嗪-2-基)-4-(二氟甲基)吡啶-2-胺；
5-(4-(3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-6-((S)-3-甲基吗啉代)-1,3,5-三嗪-2-基)-4-(二氟甲基)嘧啶-2-胺；
4-(二氟甲基)-5-(4-吗啉代-6-(哌嗪-1-基)-1,3,5-三嗪-2-基)吡啶-2-胺；
4-(二氟甲基)-5-(4-吗啉代-6-(哌嗪-1-基)-1,3,5-三嗪-2-基)嘧啶-2-胺；
(S)-4-(二氟甲基)-5-(4-(3-甲基吗啉代)-6-(哌嗪-1-基)-1,3,5-三嗪-2-基)吡啶-2-胺；
(S)-4-(二氟甲基)-5-(4-(3-甲基吗啉代)-6-(哌嗪-1-基)-1,3,5-三嗪-2-基)嘧啶-2-胺；
4-(二氟甲基)-5-(2,6-二吗啉代嘧啶-4-基)吡啶-2-胺；
4'-(二氟甲基)-2,6-二吗啉代-[4,5'-联嘧啶]-2'-胺；
4-(二氟甲基)-5-(4,6-二吗啉代嘧啶-2-基)吡啶-2-胺；
4'-(二氟甲基)-4,6-二吗啉代-[2,5'-联嘧啶]-2'-胺；
4-(二氟甲基)-5-(4-吗啉代-6-硫代吗啉代-1,3,5-三嗪-2-基)吡啶-2-胺；
4-(二氟甲基)-5-(4-吗啉代-6-硫代吗啉代-1,3,5-三嗪-2-基)嘧啶-2-胺；
5-(6-(3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-2-(3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)嘧啶-4-基)-4-(二氟甲基)吡啶-2-胺；
5-(2-(3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-6-吗啉代嘧啶-4-基)-4-(二氟甲基)吡啶-2-胺；
2-(3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-4’-(二氟甲基)-6-吗啉代-[4,5’-联嘧啶]-2’-胺；
5-(2,6-双((S)-3-甲基吗啉代)嘧啶-4-基)-4-(二氟甲基)吡啶-2-胺；
4'-(二氟甲基)-2,6-双((S)-3-甲基吗啉代)-[4,5'-联嘧啶]-2'-胺；
(S)-4-(二氟甲基)-5-(6-(3-甲基吗啉代)-2-吗啉代嘧啶-4-基)吡啶-2-胺；
(S)-4'-(二氟甲基)-6-(3-甲基吗啉代)-2-吗啉代-[4,5'-联嘧啶]-2'-胺；
5-(4-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)-6-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)-1,3,5-三嗪-2-基)-4-(二氟甲基)吡啶-2-胺；
5-[4,6-双(2,2-二甲基吗啉-4-基)-1,3,5-三嗪-2-基]-4-(二氟甲基)吡啶-2-胺；
(S)-4-(二氟甲基)-5-(2-(3-甲基吗啉代)-6-吗啉代嘧啶-4-基)吡啶-2-胺；
(S)-4'-(二氟甲基)-2-(3-甲基吗啉代)-6-吗啉代-[4,5'-联嘧啶]-2'-胺；
4-(二氟甲基)-5-[4-[(2S,6R)-2,6-二甲基吗啉-4-基]-6-[(3R)-3-甲基吗啉-4-基]-1,3,5-三嗪-2-基]吡啶-2-胺；
5-[4,6-双[(2R,6S)-2,6-二甲基吗啉-4-基]-1,3,5-三嗪-2-基]-4-(二氟甲基)吡啶-2-胺；
5-[4,6-双(3,7-二氧杂-9-氮杂双环[3.3.1]壬-9-基)-1,3,5-三嗪-2-基]-4-(二氟甲基)吡啶-2-胺；
4-(二氟甲基)-5-[4-(3,7-二氧杂-9-氮杂双环[3.3.1]壬-9-基)-6-(3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-1,3,5-三嗪-2-基]吡啶-2-胺；
5-[4,6-双(3,3-二甲基吗啉-4-基)-1,3,5-三嗪-2-基]-4-(二氟甲基)吡啶-2-胺；
5-[4,6-双[(3R,5S)-3,5-二甲基吗啉-4-基]-1,3,5-三嗪-2-基]-4-(二氟甲基)吡啶-2-胺；
5-[4,6-双[(3R)-3-甲基吗啉-4-基]-1,3,5-三嗪-2-基]-4-(二氟甲基)吡啶-2-胺；
4-(二氟甲基)-5-[4-(3,3-二甲基吗啉-4-基)-6-吗啉代-1,3,5-三嗪-2-基]吡啶-2-胺；
4-(二氟甲基)-5-[4-[(3R,5S)-3,5-二甲基吗啉-4-基]-6-[(3R)-3-甲基吗啉-4-基]-1,3,5-三嗪-2-基]吡啶-2-胺；
4-(二氟甲基)-5-[4-(3,3-二甲基吗啉-4-基)-6-[(3R)-3-甲基吗啉-4-基]-1,3,5-三嗪-2-基]吡啶-2-胺；
4-(二氟甲基)-5-[4-[(3R)-3-(甲氧基甲基)吗啉-4-基]-6-[(3R)-3-甲基吗啉-4-基]-1,3,5-三嗪-2-基]吡啶-2-胺；
4-(二氟甲基)-5-[4-(3,7-二氧杂-9-氮杂双环[3.3.1]壬-9-基)-6-[(3R)-3-甲基吗啉-4-基]-1,3,5-三嗪-2-基]吡啶-2-胺；
4-(二氟甲基)-5-[4-(3,7-二氧杂-9-氮杂双环[3.3.1]壬-9-基)-6-(3-氧杂-9-氮杂双环[3.3.1]壬-9-基)-1,3,5-三嗪-2-基]吡啶-2-胺；
5-[4,6-双[(3S,5S)-3,5-二甲基吗啉-4-基]-1,3,5-三嗪-2-基]-4-(二氟甲基)吡啶-2-胺；
4-(二氟甲基)-5-[4-(3,7-二氧杂-9-氮杂双环[3.3.1]壬-9-基)-6-吗啉代-1,3,5-三嗪-2-基]吡啶-2-胺；
4-(二氟甲基)-5-[4-[(3S)-3-乙基吗啉-4-基]-6-[(3R)-3-甲基吗啉-4-基]-1,3,5-三嗪-2-基]吡啶-2-胺；
4-(二氟甲基)-5-[4-[(3R)-3-乙基吗啉-4-基]-6-[(3R)-3-甲基吗啉-4-基]-1,3,5-三嗪-2-基]吡啶-2-胺；
4-(二氟甲基)-5-[4-[(3R)-3-甲基吗啉-4-基]-6-(8-氧杂-5-氮杂螺[3.5]壬-5-基)-1,3,5-三嗪-2-基]吡啶-2-胺；
在另一个优选实施方式中，所述化合物选自
4-(二氟甲基)-5-(4,6-二吗啉代-1,3,5-三嗪-2-基)嘧啶-2-胺；
5-(4-(3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-6-(3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-1,3,5-三嗪-2-基)-4-(二氟甲基)吡啶-2-胺；
5-(4-(3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-6-吗啉代-1,3,5-三嗪-2-基)-4-(二氟甲基)吡啶-2-胺；
5-(4,6-双((S)-3-甲基吗啉代)-1,3,5-三嗪-2-基)-4-(二氟甲基)嘧啶-2-胺；
(S)-4-(二氟甲基)-5-(4-(3-甲基吗啉代)-6-吗啉代-1,3,5-三嗪-2-基)吡啶-2-胺；
4-(二氟甲基)-5-(4-吗啉代-6-(哌嗪-1-基)-1,3,5-三嗪-2-基)嘧啶-2-胺；
4-(二氟甲基)-5-(4,6-二吗啉代-1,3,5-三嗪-2-基)吡啶-2-胺；及
(S)-4-(二氟甲基)-5-(4-(3-甲基吗啉代)-6-吗啉代-1,3,5-三嗪-2-基)嘧啶-2-胺；
5-[4,6-双(3,7-二氧杂-9-氮杂双环[3.3.1]壬-9-基)-1,3,5-三嗪-2-基]-4-(二氟甲基)吡啶-2-胺；
4-(二氟甲基)-5-[4-(3,7-二氧杂-9-氮杂双环[3.3.1]壬-9-基)-6-(3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-1,3,5-三嗪-2-基]吡啶-2-胺；
5-[4,6-双(3,3-二甲基吗啉-4-基)-1,3,5-三嗪-2-基]-4-(二氟甲基)吡啶-2-胺；
5-[4,6-双[(3R,5S)-3,5-二甲基吗啉-4-基]-1,3,5-三嗪-2-基]-4-(二氟甲基)吡啶-2-胺；
5-[4,6-双[(3R)-3-甲基吗啉-4-基]-1,3,5-三嗪-2-基]-4-(二氟甲基)吡啶-2-胺；
4-(二氟甲基)-5-[4-(3,3-二甲基吗啉-4-基)-6-吗啉代-1,3,5-三嗪-2-基]吡啶-2-胺；
4-(二氟甲基)-5-[4-[(3R,5S)-3,5-二甲基吗啉-4-基]-6-[(3R)-3-甲基吗啉-4-基]-1,3,5-三嗪-2-基]吡啶-2-胺；
4-(二氟甲基)-5-[4-(3,3-二甲基吗啉-4-基)-6-[(3R)-3-甲基吗啉-4-基]-1,3,5-三嗪-2-基]吡啶-2-胺；
4-(二氟甲基)-5-[4-[(3R)-3-(甲氧基甲基)吗啉-4-基]-6-[(3R)-3-甲基吗啉-4-基]-1,3,5-三嗪-2-基]吡啶-2-胺；
4-(二氟甲基)-5-[4-(3,7-二氧杂-9-氮杂双环[3.3.1]壬-9-基)-6-[(3R)-3-甲基吗啉-4-基]-1,3,5-三嗪-2-基]吡啶-2-胺；
4-(二氟甲基)-5-[4-(3,7-二氧杂-9-氮杂双环[3.3.1]壬-9-基)-6-(3-氧杂-9-氮杂双环[3.3.1]壬-9-基)-1,3,5-三嗪-2-基]吡啶-2-胺；
5-[4,6-双[(3S,5S)-3,5-二甲基吗啉-4-基]-1,3,5-三嗪-2-基]-4-(二氟甲基)吡啶-2-胺；
4-(二氟甲基)-5-[4-(3,7-二氧杂-9-氮杂双环[3.3.1]壬-9-基)-6-吗啉代-1,3,5-三嗪-2-基]吡啶-2-胺；
4-(二氟甲基)-5-[4-[(3S)-3-乙基吗啉-4-基]-6-[(3R)-3-甲基吗啉-4-基]-1,3,5-三嗪-2-基]吡啶-2-胺；
4-(二氟甲基)-5-[4-[(3R)-3-乙基吗啉-4-基]-6-[(3R)-3-甲基吗啉-4-基]-1,3,5-三嗪-2-基]吡啶-2-胺；
4-(二氟甲基)-5-[4-[(3R)-3-甲基吗啉-4-基]-6-(8-氧杂-5-氮杂螺[3.5]壬-5-基)-1,3,5-三嗪-2-基]吡啶-2-胺。
在另一个优选实施方式中，所述化合物选自
4-(二氟甲基)-5-(4,6-二吗啉代-1,3,5-三嗪-2-基)嘧啶-2-胺；
5-(4-(3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-6-(3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-1,3,5-三嗪-2-基)-4-(二氟甲基)吡啶-2-胺；
5-(4-(3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-6-吗啉代-1,3,5-三嗪-2-基)-4-(二氟甲基)吡啶-2-胺；
5-(4,6-双((S)-3-甲基吗啉代)-1,3,5-三嗪-2-基)-4-(二氟甲基)嘧啶-2-胺；
(S)-4-(二氟甲基)-5-(4-(3-甲基吗啉代)-6-吗啉代-1,3,5-三嗪-2-基)吡啶-2-胺；
4-(二氟甲基)-5-(4-吗啉代-6-(哌嗪-1-基)-1,3,5-三嗪-2-基)嘧啶-2-胺；
4-(二氟甲基)-5-(4,6-二吗啉代-1,3,5-三嗪-2-基)吡啶-2-胺；及
(S)-4-(二氟甲基)-5-(4-(3-甲基吗啉代)-6-吗啉代-1,3,5-三嗪-2-基)嘧啶-2-胺；
在另一个优选实施方式中，所述化合物选自
4-(二氟甲基)-5-(4,6-二吗啉代-1,3,5-三嗪-2-基)嘧啶-2-胺；
5-(4-(3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-6-(3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-1,3,5-三嗪-2-基)-4-(二氟甲基)吡啶-2-胺；
(S)-4-(二氟甲基)-5-(4-(3-甲基吗啉代)-6-吗啉代-1,3,5-三嗪-2-基)吡啶-2-胺；
以及其互变异构物、溶剂合物和药学上可接受的盐。
在另一个非常优选的实施方式中，所述化合物选自
5-(4-(3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-6-(3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-1,3,5-三嗪-2-基)-4-(二氟甲基)吡啶-2-胺；和
(S)-4-(二氟甲基)-5-(4-(3-甲基吗啉代)-6-吗啉代-1,3,5-三嗪-2-基)吡啶-2-胺；以及其互变异构物、溶剂合物和药学上可接受的盐。
在另一个非常优选的实施方式中，所述化合物选自
5-(4-(3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-6-(3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-1,3,5-三嗪-2-基)-4-(二氟甲基)吡啶-2-胺；和
(S)-4-(二氟甲基)-5-(4-(3-甲基吗啉代)-6-吗啉代-1,3,5-三嗪-2-基)吡啶-2-胺。
在另一个非常优选的实施方式中，所述式(I)化合物是4-(二氟甲基)-5-(4,6-二吗啉代-1,3,5-三嗪-2-基)嘧啶-2-胺。
在另一个非常优选的实施方式中，所述式(I)化合物是4-(二氟甲基)-5-(4,6-二吗啉代-1,3,5-三嗪-2-基)嘧啶-2-胺；以及其互变异构物、溶剂合物和药学上可接受的盐。
在另一个非常优选的实施方式中，所述式(I)化合物是5-(4-(3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-6-(3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-1,3,5-三嗪-2-基)-4-(二氟甲基)吡啶-2-胺。
在另一个非常优选的实施方式中，所述式(I)化合物是5-(4-(3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-6-(3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-1,3,5-三嗪-2-基)-4-(二氟甲基)吡啶-2-胺；以及其互变异构物、溶剂合物和药学上可接受的盐。
在另一个非常优选的实施方式中，所述式(I)化合物是(S)-4-(二氟甲基)-5-(4-(3-甲基吗啉代)-6-吗啉代-1,3,5-三嗪-2-基)吡啶-2-胺。
在另一个非常优选的实施方式中，所述式(I)化合物是(S)-4-(二氟甲基)-5-(4-(3-甲基吗啉代)-6-吗啉代-1,3,5-三嗪-2-基)吡啶-2-胺；以及其互变异构物、溶剂合物和药学上可接受的盐。
在另一个优选实施方式中，所述R1和R2彼此独立地为式(II)的吗啉基。在一个优选实施方式中，所述R1等于R2。在另一个优选实施方式中，所述R1不等于R2。
在另一个优选实施方式中，所述R1和R2彼此独立地为式(II)的吗啉基和所述饱和6元杂环Z。
在另一个优选实施方式中，在所述式(II)的吗啉基内，
Figure GDA0004040055220000311
R3和R4彼此独立地为H、任选地被一个或两个OH取代的C1-C3烷基、C1-C2氟烷基、C1-C2烷氧基、C1-C2烷氧基C1-C3烷基、CN或C(O)O-C1-C2烷基；或R3与R4一起形成选自以下的二价残基-R5R6-：任选地被1至4个F取代的C1-C3亚烷基、-CH2-O-CH2-、-CH2-NH-CH2-或结构
Figure GDA0004040055220000312
中的任一个；其中箭头表示式(II)中的键。
在R3和R4一起形成二价残基且结合至邻近碳原子的情况下，形成成环的吗啉基取代基。在R3和R4一起形成二价残基且跨越吗啉环的情况下，形成桥连的吗啉基取代基。在R3和R4一起形成二价残基且结合至吗啉的同一碳原子的情况下，形成螺吗啉基取代基。
在一个优选实施方式中，R3和R4一起形成选自以下的二价残基-R5R6-：任选地被1至4个F取代的C1-C3亚烷基、-CH2-O-CH2-、-CH2-NH-CH2-或结构
Figure GDA0004040055220000313
中的任一个；
并形成桥连的吗啉基取代基。
在另一个优选实施方式中，所述R1和R2彼此独立地为式(II)的吗啉基，其中R3和R4一起形成二价残基，由此产生桥连的吗啉基，其中R3和R4一起形成选自以下的二价残基-R5R6-：C1-C3亚烷基(优选C1-C2亚烷基)、-CH2CF2-、-CHFCHF-、-CH2CF2CH2-、-CH2-O-CH2-、-CH2-NH-CH2-或结构
Figure GDA0004040055220000321
中的任一个；其中箭头表示式(II)中的键。
在另一个优选实施方式中，所述式(II)的吗啉基
Figure GDA0004040055220000322
彼此独立地为所述式(II)的吗啉基，其中R3和R4彼此独立地为H、C1-C3烷基、CH2OH、CH2CH2OH、CH2F、CHF2、CF3、CH2CF3、C1-C2烷氧基、C1-C2烷氧基C1-C3烷基、CN或C(O)O-C1-C2烷基；或R3和R4一起形成选自以下的二价残基-R5R6-：C1-C3亚烷基(优选C1-C2亚烷基)、-CH2CF2-、-CHFCHF-、-CH2CF2CH2-、-CH2-O-CH2-、-CH2-NH-CH2-或结构
Figure GDA0004040055220000323
中的任一个；其中箭头表示式(II)中的键。
在另一个优选实施方式中，所述式(II)的吗啉基彼此独立地为所述式(II)的吗啉基，其中R3和R4彼此独立地为H或CH3。
在另一个优选实施方式中，所述式(II)的吗啉基彼此独立地为所述式(II)的吗啉基，其中R3和R4彼此独立地为C2-C3烷基、CH2OH、CH2CH2OH、CH2F、CHF2、CF3、CH2CF3、C1-C2烷氧基、C1-C2烷氧基C1-C3烷基、CN或C(O)O-C1-C2烷基；或R3和R4一起形成选自以下的二价残基-R5R6-：-CH2-或C3亚烷基(优选-CH2-)、-CH2CF2-、-CHFCHF-、-CH2CF2CH2-、-CH2-O-CH2-、-CH2-NH-CH2-或结构
Figure GDA0004040055220000324
中的任一个；其中箭头表示式(II)中的键。
在另一个优选实施方式中，所述式(II)的吗啉基彼此独立地选自
Figure GDA0004040055220000325
Figure GDA0004040055220000331
在另一个优选实施方式中，所述式(II)的吗啉基彼此独立地选自
Figure GDA0004040055220000341
在另一个优选实施方式中，所述杂环Z是任选地被1至3个R7取代的选自硫代吗啉基和哌嗪基的饱和6元杂环Z；其中R7在每次出现时独立地为C1-C3烷基、CH2OH、CH2CH2OH、CH2F、CHF2、CF3、CH2CF3、C1-C2烷氧基C1-C3烷基、C3-C6环烷基；或两个R7取代基一起形成选自以下的二价残基-R8R9-：任选地被1至4个F取代的C1-C3亚烷基、-CH2-O-CH2-或-O-CH2CH2-O-；
在另一个优选实施方式中，所述杂环Z选自
Figure GDA0004040055220000342
在本发明另一个优选实施方式中，所述R1和所述R2彼此独立地为式(II)的吗啉基，
Figure GDA0004040055220000343
其中箭头表示式(I)中的键；且
其中R3和R4彼此独立地为H、任选地被一个或两个OH取代的C1-C3烷基、C1-C2氟烷基、C1-C2烷氧基、C1-C2烷氧基C1-C3烷基、CN或C(O)O-C1-C2烷基；或R3与R4一起形成选自以下的二价残基-R5R6-：任选地被1至4个F取代的C1-C3亚烷基、-CH2-O-CH2-、-CH2-NH-CH2-或结构
Figure GDA0004040055220000344
中的任一个；
其中箭头表示式(II)中的键。
在另一个优选实施方式中，所述R1等于所述R2，且所述R1和所述R2彼此独立地为式(II)的吗啉基，
Figure GDA0004040055220000351
其中箭头表示式(I)中的键；且
其中R3和R4彼此独立地为H、任选地被一个或两个OH取代的C1-C3烷基、C1-C2氟烷基、C1-C2烷氧基、C1-C2烷氧基C1-C3烷基、CN或C(O)O-C1-C2烷基；或R3与R4一起形成选自以下的二价残基-R5R6-：任选地被1至4个F取代的C1-C3亚烷基、-CH2-O-CH2-、-CH2-NH-CH2-或结构
Figure GDA0004040055220000352
中的任一个；
其中箭头表示式(II)中的键。
在本发明另一个优选实施方式中，所述R1和所述R2彼此独立地为式(II)的吗啉基，
Figure GDA0004040055220000353
其中箭头表示式(I)中的键；且
其中R3和R4彼此独立地为H、C1-C3烷基、CH2OH、CH2CH2OH、CH2F、CHF2、CF3、CH2CF3、C1-C2烷氧基、C1-C2烷氧基C1-C3烷基、CN或C(O)O-C1-C2烷基；或R3和R4一起形成选自以下的二价残基-R5R6-：C1-C3亚烷基(优选C1-C2亚烷基)、-CH2CF2-、-CHFCHF-、-CH2CF2CH2-、-CH2-O-CH2-、-CH2-NH-CH2-或结构
Figure GDA0004040055220000354
中的任一个；
其中箭头表示式(II)中的键。
在本发明另一个优选实施方式中，R1等于R2，且所述R1和所述R2是式(II)的吗啉基，
Figure GDA0004040055220000361
其中箭头表示式(I)中的键；且
其中R3和R4彼此独立地为H、C1-C3烷基、CH2OH、CH2CH2OH、CH2F、CHF2、CF3、CH2CF3、C1-C2烷氧基、C1-C2烷氧基C1-C3烷基、CN或C(O)O-C1-C2烷基；或R3和R4一起形成选自以下的二价残基-R5R6-：C1-C3亚烷基(优选C1-C2亚烷基)、-CH2CF2-、-CHFCHF-、-CH2CF2CH2-、-CH2-O-CH2-、-CH2-NH-CH2-或结构
Figure GDA0004040055220000362
中的任一个；
其中箭头表示式(II)中的键。
在另一方面及优选实施方式中，本发明提供了式(I)的化合物，
Figure GDA0004040055220000363
其中，
X1、X2和X3彼此独立地为N或CH；其条件为X1、X2和X3中的至少两个是N；Y是N或CH；且其中
R1和R2彼此独立地为式(II)的吗啉基
Figure GDA0004040055220000364
其中箭头表示式(I)中的键；且R1不等于R2，且所述R1和所述R2中的至少一个是式(II)的吗啉基，
Figure GDA0004040055220000371
其中R3和R4彼此独立地为C2-C3烷基、CH2OH、CH2CH2OH、CH2F、CHF2、CF3、CH2CF3、C1-C2烷氧基、C1-C2烷氧基C1-C3烷基、CN或C(O)O-C1-C2烷基；或R3和R4一起形成选自以下的二价残基-R5R6-：-CH2-或C3亚烷基(优选-CH2-)、-CH2CF2-、-CHFCHF-、-CH2CF2CH2-、-CH2-O-CH2-、-CH2-NH-CH2-或结构
Figure GDA0004040055220000372
中的任一个；其中箭头表示式(II)中的键。
优选地，所述R3和R4一起形成选自以下的二价残基-R5R6-：-CH2-或C3亚烷基(优选-CH2-)、-CH2CF2-、-CHFCHF-、-CH2CF2CH2-、-CH2-O-CH2-、-CH2-NH-CH2-、或结构
Figure GDA0004040055220000373
中的任一个。
在另一个优选实施方式中，R1是4-吗啉基、2-甲基-4-吗啉基、3-甲基-4-吗啉基、八氘-4-吗啉基、8-氮杂-3-氧杂双环[3.2.1]辛-8-基或3-氮杂-8-氧杂双环[3.2.1]辛-3-基；且R2是4-吗啉基、2-甲基-4-吗啉基、3-甲基-4-吗啉基、八氘-4-吗啉基、8-氮杂-3-氧杂双环[3.2.1]辛-8-基、3-氮杂-8-氧杂双环[3.2.1]辛-3-基、4-哌嗪-1-基、4-甲基哌嗪-1-基或4-硫代吗啉基。
在另一个优选实施方式中，R1是4-吗啉基、2-甲基-4-吗啉基、3-甲基-4-吗啉基、八氘-4-吗啉基、8-氮杂-3-氧杂双环[3.2.1]辛-8-基或3-氮杂-8-氧杂双环[3.2.1]辛-3-基；且R2是4-吗啉基、2-甲基-4-吗啉基、3-甲基-4-吗啉基、八氘-4-吗啉基、8-氮杂-3-氧杂双环[3.2.1]辛-8-基、3-氮杂-8-氧杂双环[3.2.1]辛-3-基、4-哌嗪-1-基、4-甲基哌嗪-1-基或4-硫代吗啉基，且X1、X2和X3是N；以及其互变异构物、溶剂合物及药学上可接受的盐。优选Y是N或CH；R1是4-吗啉基、2-甲基-4-吗啉基、3-甲基-4-吗啉基、八氘-4-吗啉基、8-氮杂-3-氧杂双环[3.2.1]辛-8-基或3-氮杂-8-氧杂双环[3.2.1]辛-3-基；且R2是4-吗啉基、2-甲基-4-吗啉基、3-甲基-4-吗啉基、八氘-4-吗啉基、8-氮杂-3-氧杂双环[3.2.1]辛-8-基、3-氮杂-8-氧杂双环[3.2.1]辛-3-基、4-哌嗪-1-基、4-甲基哌嗪-1-基或4-硫代吗啉基；以及其互变异构物、溶剂合物和药学上可接受的盐。
在另一个优选实施方式中，R1是4-吗啉基、2-甲基-4-吗啉基、3-甲基-4-吗啉基、八氘-4-吗啉基、8-氮杂-3-氧杂双环[3.2.1]辛-8-基或3-氮杂-8-氧杂双环[3.2.1]辛-3-基；且R2是4-吗啉基、2-甲基-4-吗啉基、3-甲基-4-吗啉基、八氘-4-吗啉基、8-氮杂-3-氧杂双环[3.2.1]辛-8-基、3-氮杂-8-氧杂双环[3.2.1]辛-3-基、4-哌嗪-1-基、4-甲基哌嗪-1-基或4-硫代吗啉基，且X1和X3是N，且X2是CH；以及其互变异构物、溶剂合物和药学上可接受的盐。优选Y是N或CH；R1是4-吗啉基、2-甲基-4-吗啉基、3-甲基-4-吗啉基、八氘-4-吗啉基、8-氮杂-3-氧杂双环[3.2.1]辛-8-基或3-氮杂-8-氧杂双环[3.2.1]辛-3-基；且R2是4-吗啉基、2-甲基-4-吗啉基、3-甲基-4-吗啉基、八氘-4-吗啉基、8-氮杂-3-氧杂双环[3.2.1]辛-8-基、3-氮杂-8-氧杂双环[3.2.1]辛-3-基、4-哌嗪-1-基、4-甲基哌嗪-1-基或4-硫代吗啉基；以及其互变异构物、溶剂合物和药学上可接受的盐。
在一个优选实施方式中，R1是4-吗啉基、2-甲基-4-吗啉基、3-甲基-4-吗啉基、八氘-4-吗啉基、8-氮杂-3-氧杂双环[3.2.1]辛-8-基或3-氮杂-8-氧杂双环[3.2.1]辛-3-基；且R2是4-吗啉基、2-甲基-4-吗啉基、3-甲基-4-吗啉基、八氘-4-吗啉基、8-氮杂-3-氧杂双环[3.2.1]辛-8-基、3-氮杂-8-氧杂双环[3.2.1]辛-3-基、4-哌嗪-1-基、4-甲基哌嗪-1-基或4-硫代吗啉基，且X1和X2是N，且X3是CH；以及其互变异构物、溶剂合物和药学上可接受的盐。优选地，Y是N或CH；R1是4-吗啉基、2-甲基-4-吗啉基、3-甲基-4-吗啉基、八氘-4-吗啉基、8-氮杂-3-氧杂双环[3.2.1]辛-8-基或3-氮杂-8-氧杂双环[3.2.1]辛-3-基；且R2是4-吗啉基、2-甲基-4-吗啉基、3-甲基-4-吗啉基、八氘-4-吗啉基、8-氮杂-3-氧杂双环[3.2.1]辛-8-基、3-氮杂-8-氧杂双环[3.2.1]辛-3-基、4-哌嗪-1-基、4-甲基哌嗪-1-基或4-硫代吗啉基；以及其互变异构物、溶剂合物和药学上可接受的盐。
在一个优选实施方式中，R1是4-吗啉基、2-甲基-4-吗啉基、3-甲基-4-吗啉基、八氘-4-吗啉基、8-氮杂-3-氧杂双环[3.2.1]辛-8-基或3-氮杂-8-氧杂双环[3.2.1]辛-3-基；且R2是4-吗啉基、2-甲基-4-吗啉基、3-甲基-4-吗啉基、八氘-4-吗啉基、8-氮杂-3-氧杂双环[3.2.1]辛-8-基、3-氮杂-8-氧杂双环[3.2.1]辛-3-基、4-哌嗪-1-基、4-甲基哌嗪-1-基或4-硫代吗啉基，且X2和X3是N，且X1是CH；以及其互变异构物、溶剂合物和药学上可接受的盐。优选地，Y是N或CH；R1是4-吗啉基、2-甲基-4-吗啉基、3-甲基-4-吗啉基、八氘-4-吗啉基、8-氮杂-3-氧杂双环[3.2.1]辛-8-基或3-氮杂-8-氧杂双环[3.2.1]辛-3-基；且R2是4-吗啉基、2-甲基-4-吗啉基、3-甲基-4-吗啉基、八氘-4-吗啉基、8-氮杂-3-氧杂双环[3.2.1]辛-8-基、3-氮杂-8-氧杂双环[3.2.1]辛-3-基、4-哌嗪-1-基、4-甲基哌嗪-1-基或4-硫代吗啉基；以及其互变异构物、溶剂合物和药学上可接受的盐。
在另一实施方式中，提供了用于预防或治疗受试者的神经病症的根据本发明的式(I)化合物，其中所述神经病症为癫痫症或神经退化性疾病。
在另一实施方式中，提供了用于预防或治疗受试者的神经退化性疾病的根据本发明的式(I)化合物。
在另一实施方式中，提供了用于预防或治疗受试者的癫痫症的根据本发明的式(I)化合物。
在另一实施方式中，提供了用于预防或治疗受试者的癫痫症的根据本发明的式(I)化合物，其中所述式(I)化合物是在原发性癫痫形成期间或在继发性癫痫形成期间或在完全发展癫痫症时施用于所述受试者。
在另一实施方式中，提供了用于预防或治疗受试者的癫痫症的根据本发明的式(I)化合物，其中所述癫痫症是症状性癫痫症或特发性癫痫症。
在另一实施方式中，提供了用于预防或治疗受试者的癫痫症的根据本发明的式(I)化合物，其中所述癫痫症是症状性癫痫症。
在另一实施方式中，提供了用于预防或治疗受试者的癫痫症的根据本发明的式(I)化合物，其中所述癫痫症是特发性癫痫症。
在另一实施方式中，提供了用于预防或治疗受试者的症状性癫痫症的根据本发明的式(I)化合物，其中所述症状性癫痫症是由脑损伤、脑肿瘤、脑感染、肾上腺脑白质营养不良、罗斯苗逊症候群、斯特奇-韦伯症候群、巨脑症、羊水过多症、结节性硬化复合征(TSC)、症状性癫痫症症候群、PMSE、PTEN突变或局灶性皮质发育不良(FCD)引起。
在一个实施方式中，提供了用于预防或治疗受试者的症状性癫痫症的根据本发明的式(I)化合物，其中所述症状性癫痫症是由以mTOR的向上调控为特征的疾病(“TOR病”)引起。
在一个实施方式中，提供了用于预防或治疗受试者的症状性癫痫症的式(I)化合物，其中所述症状性癫痫症是由以mTOR的向上调控为特征的疾病(“TOR病”)引起，其中所述“TOR病”选自由以下组成的组：TSC、羊水过多症、巨脑症、症状性癫痫症症候群、PMSE、局灶性皮质发育不良(FCD)以及与PTEN突变有关的“TOR病”。
在另一实施方式中，提供了用于预防或治疗受试者的症状性癫痫症的根据本发明的式(I)化合物，其中所述症状性癫痫症是由脑损伤、脑感染、肾上腺脑白质营养不良、罗斯苗逊症候群、斯特奇-韦伯症候群、巨脑症、羊水过多症、结节性硬化复合征(TSC)、症状性癫痫症症候群、PMSE、PTEN突变或局灶性皮质发育不良(FCD)引起。
在又另一个实施方式中，提供了用于预防或治疗受试者的症状性癫痫症的式(I)化合物，其中所述症状性癫痫症是由脑损伤、脑感染、肾上腺脑白质营养不良、罗斯苗逊症候群或斯特奇-韦伯症候群引起。
在一个优选实施方式中，提供了用于预防或治疗受试者的症状性癫痫症的根据本发明的式(I)化合物，其中所述症状性癫痫症是由TSC引起。
在另一实施方式中，提供了用于预防或治疗受试者的特发性癫痫症的根据本发明的式(I)化合物，其中所述特发性癫痫症选自由以下组成的组：Doose症候群(儿童肌阵挛站立不能癫痫症)、West症候群、良性Rolandic癫痫症、Lennox-Gastaut症候群、Landau-Kleffner症候群、症状性癫痫症症候群、PMSE和幼年型肌痉挛癫痫症。
如上所指出，癫痫症可以是部分或全身性的。因此，在一个实施方式中，提供了用于预防或治疗受试者的癫痫症的根据本发明的式(I)化合物，其中所述癫痫症为部分癫痫症或全身性癫痫症。
在另一实施方式中，提供了用于预防或治疗受试者的癫痫症的式(I)化合物，其中所述癫痫症为部分特发性癫痫症、部分症状性癫痫症、全身特发性癫痫症或全身症状性癫痫症。
在一个优选实施方式中，提供了用于预防或治疗受试者的部分癫痫症的式(I)化合物，其中所述部分癫痫症为颞叶癫痫症。
在另一实施方式中，提供了用于预防或治疗受试者的神经退化性疾病的根据本发明的式(I)化合物，其中所述神经退化性疾病与蛋白质错误折迭和/或蛋白质聚集相关或由蛋白质错误折迭和/或蛋白质聚集引起。
在另一实施方式中，提供了用于预防或治疗受试者的神经退化性疾病的根据本发明的式(I)化合物，其中所述神经退化性疾病选自由以下组成的组：亨廷顿氏病、脊髓小脑共济失调、帕金森氏病、阿兹海默症、肌肉萎缩性侧索硬化(ALS)、囊肿性纤维化、家族性淀粉样变性多发性神经病、海绵状脑病、路易体痴呆、额颞叶型痴呆伴帕金森氏症、脊髓小脑共济失调、脊髓延髓肌肉萎缩、遗传性齿状核红核苍白球丘脑下部萎缩、家族性英国型痴呆、家族性丹麦型痴呆和普里昂蛋白疾病。
在一个优选实施方式中，提供了用于预防或治疗受试者的神经退化性疾病的根据本发明的式(I)化合物，其中所述神经退化性疾病选自由亨廷顿氏病、阿兹海默症和普里昂蛋白疾病组成的组。
在一个特别优选的实施方式中，提供了用于预防或治疗受试者的亨廷顿氏病的根据本发明的式(I)化合物。
在一个优选实施方式中，提供了根据本发明的式(I)化合物，其中所述化合物选自：
4-(二氟甲基)-5-(4,6-二吗啉代-1,3,5-三嗪-2-基)嘧啶-2-胺；
5-(4-(3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-6-(3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-1,3,5-三嗪-2-基)-4-(二氟甲基)吡啶-2-胺；
(S)-4-(二氟甲基)-5-(4-(3-甲基吗啉代)-6-吗啉代-1,3,5-三嗪-2-基)吡啶-2-胺；及其互变异构物、溶剂合物及药学上可接受的盐，以用于预防或治疗受试者的神经病症，其中所述神经病症为癫痫症或亨廷顿氏病。
在另一个优选实施方式中，提供了根据本发明的式(I)化合物，其中所述化合物选自：
4-(二氟甲基)-5-(4,6-二吗啉代-1,3,5-三嗪-2-基)嘧啶-2-胺；
5-(4-(3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-6-(3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-1,3,5-三嗪-2-基)-4-(二氟甲基)吡啶-2-胺；
(S)-4-(二氟甲基)-5-(4-(3-甲基吗啉代)-6-吗啉代-1,3,5-三嗪-2-基)吡啶-2-胺；以及其互变异构物、溶剂合物和药学上可接受的盐，以用于预防或治疗受试者的癫痫症。
在一个优选实施方式中，提供了根据本发明的式(I)化合物，其中所述化合物选自：
4-(二氟甲基)-5-(4,6-二吗啉代-1,3,5-三嗪-2-基)嘧啶-2-胺；
5-(4-(3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-6-(3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-1,3,5-三嗪-2-基)-4-(二氟甲基)吡啶-2-胺；
(S)-4-(二氟甲基)-5-(4-(3-甲基吗啉代)-6-吗啉代-1,3,5-三嗪-2-基)吡啶-2-胺；以及其互变异构物、溶剂合物和药学上可接受的盐，以用于预防或治疗受试者的亨廷顿氏病。
在一个优选实施方式中，提供了根据本发明的式(I)化合物，其中所述化合物选自5-(4-(3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-6-(3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-1,3,5-三嗪-2-基)-4-(二氟甲基)吡啶-2-胺；及(S)-4-(二氟甲基)-5-(4-(3-甲基吗啉代)-6-吗啉代-1,3,5-三嗪-2-基)吡啶-2-胺；以及其互变异构物、溶剂合物和药学上可接受的盐，以用于预防或治疗受试者的神经病症，其中所述神经病症为癫痫症或亨廷顿氏病。
在一个优选实施方式中，提供了根据本发明的式(I)化合物，其中所述化合物选自5-(4-(3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-6-(3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-1,3,5-三嗪-2-基)-4-(二氟甲基)吡啶-2-胺；及(S)-4-(二氟甲基)-5-(4-(3-甲基吗啉代)-6-吗啉代-1,3,5-三嗪-2-基)吡啶-2-胺；以及其互变异构物、溶剂合物和药学上可接受的盐，以用于预防或治疗受试者的癫痫症。
在一个优选实施方式中，提供了根据本发明的式(I)化合物，其中所述化合物选自5-(4-(3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-6-(3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-1,3,5-三嗪-2-基)-4-(二氟甲基)吡啶-2-胺；及(S)-4-(二氟甲基)-5-(4-(3-甲基吗啉代)-6-吗啉代-1,3,5-三嗪-2-基)吡啶-2-胺；以及其互变异构物、溶剂合物和药学上可接受的盐，以用于预防或治疗受试者的亨廷顿氏病。
在一个优选实施方式中，提供了化合物5-(4-(3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-6-(3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-1,3,5-三嗪-2-基)-4-(二氟甲基)吡啶-2-胺；以及其互变异构物、溶剂合物和药学上可接受的盐，以用于预防或治疗受试者的神经病症，其中所述神经病症为癫痫症或亨廷顿氏病。
在一个特别优选的实施方式中，提供了化合物5-(4-(3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-6-(3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-1,3,5-三嗪-2-基)-4-(二氟甲基)吡啶-2-胺；以及其互变异构物、溶剂合物和药学上可接受的盐，以用于预防或治疗受试者的癫痫症。
在另一个更特别优选的实施方式中，提供了化合物5-(4-(3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-6-(3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-1,3,5-三嗪-2-基)-4-(二氟甲基)吡啶-2-胺；以及其互变异构物、溶剂合物和药学上可接受的盐，以用于预防或治疗受试者的亨廷顿氏病。
在一个优选实施方式中，提供了化合物(S)-4-(二氟甲基)-5-(4-(3-甲基吗啉代)-6-吗啉代-1,3,5-三嗪-2-基)吡啶-2-胺；以及其互变异构物、溶剂合物和药学上可接受的盐，以用于预防或治疗受试者的神经病症，其中所述神经病症为癫痫症或亨廷顿氏病。
在一个特别优选的实施方式中，提供了化合物(S)-4-(二氟甲基)-5-(4-(3-甲基吗啉代)-6-吗啉代-1,3,5-三嗪-2-基)吡啶-2-胺；以及其互变异构物、溶剂合物和药学上可接受的盐，以用于预防或治疗受试者的癫痫症。
在另一个更特别优选的实施方式中，提供了化合物(S)-4-(二氟甲基)-5-(4-(3-甲基吗啉代)-6-吗啉代-1,3,5-三嗪-2-基)吡啶-2-胺；以及其互变异构物、溶剂合物和药学上可接受的盐，以用于预防或治疗受试者的亨廷顿氏病。
在一个优选实施方式中，提供了根据本发明的式(I)化合物，其中R1和R2彼此独立地为式(II)的吗啉基；以及其互变异构物、溶剂合物和药学上可接受的盐，以用于预防或治疗受试者的神经病症，其中所述神经病症为癫痫症或亨廷顿氏病。
在一个优选实施方式中，提供了根据本发明的式(I)化合物，其中R1和R2彼此独立地为式(II)的吗啉基；以及其互变异构物、溶剂合物和药学上可接受的盐，以用于预防或治疗受试者的癫痫症。
在一个优选实施方式中，提供了根据本发明的式(I)化合物，其中R1和R2彼此独立地为式(II)的吗啉基；以及其互变异构物、溶剂合物和药学上可接受的盐，以用于预防或治疗受试者的亨廷顿氏病。
在一个优选实施方式中，提供了根据本发明的式(I)化合物，其中R1等于R2；以及其互变异构物、溶剂合物和药学上可接受的盐，以用于预防或治疗受试者的神经病症，其中所述神经病症为癫痫症或亨廷顿氏病。
在一个优选实施方式中，提供了根据本发明的式(I)化合物，其中R1等于R2；以及其互变异构物、溶剂合物和药学上可接受的盐，以用于预防或治疗受试者的癫痫症。
在一个优选实施方式中，提供了根据本发明的式(I)化合物，其中R1等于R2；以及其互变异构物、溶剂合物和药学上可接受的盐，以用于预防或治疗受试者的亨廷顿氏病。
在一个优选实施方式中，提供了根据本发明的式(I)化合物，其中R1不等于R2；以及其互变异构物、溶剂合物和药学上可接受的盐，以用于预防或治疗受试者的神经病症，其中所述神经病症为癫痫症或亨廷顿氏病。
在一个优选实施方式中，提供了根据本发明的式(I)化合物，其中R1不等于R2；以及其互变异构物、溶剂合物和药学上可接受的盐，以用于预防或治疗受试者的癫痫症。
在一个优选实施方式中，提供了根据本发明的式(I)化合物，其中R1不等于R2；以及其互变异构物、溶剂合物和药学上可接受的盐，以用于预防或治疗受试者的亨廷顿氏病。
在本发明另一方面中，提供了一种用于治疗或预防受试者的神经病症的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的根据本发明的式(I)化合物。
在一个实施方式中，提供一了种用于治疗或预防受试者的神经病症的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的根据本发明的式(I)化合物，其中所述神经病症为癫痫症或亨廷顿氏病。
在一个优选实施方式中，提供了一种用于治疗或预防受试者的癫痫症的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的根据本发明的式(I)化合物。
在另一个优选实施方式中，提供了一种用于治疗或预防受试者的癫痫症的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的根据本发明的式(I)化合物，其中所述有效量的根据本发明的式(I)化合物是在原发性癫痫形成期间或继发性癫痫形成期间或在完全发展癫痫症时施用。
在另一个优选实施方式中，提供了一种用于治疗或预防受试者的亨廷顿氏病的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的根据本发明的式(I)化合物。
在一个特别优选的实施方式中，提供了一种用于治疗或预防受试者的神经病症的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的根据本发明的式(I)化合物，其中所述化合物选自：4-(二氟甲基)-5-(4,6-二吗啉代-1,3,5-三嗪-2-基)嘧啶-2-胺；5-(4-(3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-6-(3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-1,3,5-三嗪-2-基)-4-(二氟甲基)吡啶-2-胺；(S)-4-(二氟甲基)-5-(4-(3-甲基吗啉代)-6-吗啉代-1,3,5-三嗪-2-基)吡啶-2-胺；以及其互变异构物、溶剂合物和药学上可接受的盐；且其中所述神经病症为癫痫症或亨廷顿氏病。
在本发明另一方面中，提供了根据本发明的式(I)化合物用于治疗或预防受试者的神经病症的用途。
在一个实施方式中，提供了根据本发明的式(I)化合物用于治疗或预防受试者的神经病症的用途，其中所述神经病症为癫痫症或亨廷顿氏病。
在一个特别优选的实施方式中，提供了根据本发明的式(I)化合物用于治疗或预防受试者的神经病症的用途，其中所述化合物选自：
4-(二氟甲基)-5-(4,6-二吗啉代-1,3,5-三嗪-2-基)嘧啶-2-胺；
5-(4-(3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-6-(3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-1,3,5-三嗪-2-基)-4-(二氟甲基)吡啶-2-胺；
(S)-4-(二氟甲基)-5-(4-(3-甲基吗啉代)-6-吗啉代-1,3,5-三嗪-2-基)吡啶-2-胺；以及其互变异构物、溶剂合物和药学上可接受的盐；且其中所述神经病症为癫痫症或亨廷顿氏病。
在本发明另一方面中，提供了根据本发明的式(I)化合物在制造用于治疗或预防受试者的神经病症的药剂中的用途。
在一个实施方式中，提供了根据本发明的式(I)化合物在制造用于治疗或预防受试者的神经病症的药剂中的用途，其中所述神经病症为癫痫症或亨廷顿氏病。
在一个特别优选的实施方式中，提供了根据本发明的式(I)化合物在制造用于治疗或预防受试者的神经病症的药剂中的用途，其中所述化合物选自：
4-(二氟甲基)-5-(4,6-二吗啉代-1,3,5-三嗪-2-基)嘧啶-2-胺；
5-(4-(3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-6-(3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-1,3,5-三嗪-2-基)-4-(二氟甲基)吡啶-2-胺；
(S)-4-(二氟甲基)-5-(4-(3-甲基吗啉代)-6-吗啉代-1,3,5-三嗪-2-基)吡啶-2-胺；以及其互变异构物、溶剂合物和药学上可接受的盐；且其中所述神经病症为癫痫症或亨廷顿氏病。
本发明最优选的化合物是由下式显示的以下化合物：(相应结构的名称是使用ChemDraw Ultra 13.0.1版以及其较低与较高软件版本(CambridgeSoft Corp.,CambridgeMA)所产生)。
化合物1：
Figure GDA0004040055220000461
4-(二氟甲基)-5-(4,6-二吗啉代-1,3,5-三嗪-2-基)吡啶-2-胺
化合物2：
Figure GDA0004040055220000462
4-(二氟甲基)-5-(4,6-二吗啉代-1,3,5-三嗪-2-基)嘧啶-2-胺
化合物3：
Figure GDA0004040055220000463
5-(4-(3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-6-(3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-1,3,5-三嗪-2-基)-4-(二氟甲基)吡啶-2-胺
化合物4：
Figure GDA0004040055220000471
5-(4-(3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-6-吗啉代-1,3,5-三嗪-2-基)-4-(二氟甲基)吡啶-2-胺
化合物5：
Figure GDA0004040055220000472
5-(4-(3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-6-吗啉代-1,3,5-三嗪-2-基)-4-(二氟甲基)嘧啶-2-胺
化合物6：
Figure GDA0004040055220000473
5-(4,6-双((S)-3-甲基吗啉代)-1,3,5-三嗪-2-基)-4-(二氟甲基)吡啶-2-胺
化合物7：
Figure GDA0004040055220000474
5-(4,6-双((S)-3-甲基吗啉代)-1,3,5-三嗪-2-基)-4-(二氟甲基)嘧啶-2-胺
化合物8：
Figure GDA0004040055220000481
(S)-4-(二氟甲基)-5-(4-(3-甲基吗啉代)-6-吗啉代-1,3,5-三嗪-2-基)吡啶-2-胺
化合物9：
Figure GDA0004040055220000482
(S)-4-(二氟甲基)-5-(4-(3-甲基吗啉代)-6-吗啉代-1,3,5-三嗪-2-基)嘧啶-2-胺
化合物10：
Figure GDA0004040055220000483
5-(4-(3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-6-((S)-3-甲基吗啉代)-1,3,5-三嗪-2-基)-4-(二氟甲基)吡啶-2-胺
化合物11：
Figure GDA0004040055220000484
5-(4-(3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-6-((S)-3-甲基吗啉代)-1,3,5-三嗪-2-基)-4-(二氟甲基)嘧啶-2-胺
化合物12：
Figure GDA0004040055220000491
4-(二氟甲基)-5-(4-吗啉代-6-(哌嗪-1-基)-1,3,5-三嗪-2-基)吡啶-2-胺
化合物13：
Figure GDA0004040055220000492
4-(二氟甲基)-5-(4-吗啉代-6-(哌嗪-1-基)-1,3,5-三嗪-2-基)嘧啶-2-胺
化合物14：
Figure GDA0004040055220000493
(S)-4-(二氟甲基)-5-(4-(3-甲基吗啉代)-6-(哌嗪-1-基)-1,3,5-三嗪-2-基)吡啶-2-胺
化合物15：
Figure GDA0004040055220000494
(S)-4-(二氟甲基)-5-(4-(3-甲基吗啉代)-6-(哌嗪-1-基)-1,3,5-三嗪-2-基)嘧啶-2-胺
化合物16：
Figure GDA0004040055220000501
4-(二氟甲基)-5-(2,6-二吗啉代嘧啶-4-基)吡啶-2-胺
化合物17：
Figure GDA0004040055220000502
4'-(二氟甲基)-2,6-二吗啉代-[4,5'-联嘧啶]-2'-胺
化合物18：
Figure GDA0004040055220000503
4-(二氟甲基)-5-(4,6-二吗啉代嘧啶-2-基)吡啶-2-胺
化合物19：
Figure GDA0004040055220000504
4'-(二氟甲基)-4,6-二吗啉代-[2,5'-联嘧啶]-2'-胺
化合物20：
Figure GDA0004040055220000505
4-(二氟甲基)-5-(4-吗啉代-6-硫代吗啉代-1,3,5-三嗪-2-基)吡啶-2-胺
化合物21：
Figure GDA0004040055220000511
4-(二氟甲基)-5-(4-吗啉代-6-硫代吗啉代-1,3,5-三嗪-2-基)嘧啶-2-胺
更优选为以下化合物
化合物22：
Figure GDA0004040055220000512
5-(6-(3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-2-(3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)嘧啶-4-基)-4-(二氟甲基)吡啶-2-胺
化合物23：
Figure GDA0004040055220000513
5-(2-(3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-6-吗啉代嘧啶-4-基)-4-(二氟甲基)吡啶-2-胺
化合物24：
Figure GDA0004040055220000514
2-(3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-4’-(二氟甲基)-6-吗啉代-[4,5’-联嘧啶]-2’-胺
化合物25：
Figure GDA0004040055220000521
5-(2,6-双((S)-3-甲基吗啉代)嘧啶-4-基)-4-(二氟甲基)吡啶-2-胺
化合物26：
Figure GDA0004040055220000522
4'-(二氟甲基)-2,6-双((S)-3-甲基吗啉代)-[4,5'-联嘧啶]-2'-胺
化合物27：
Figure GDA0004040055220000523
(S)-4-(二氟甲基)-5-(6-(3-甲基吗啉代)-2-吗啉代嘧啶-4-基)吡啶-2-胺
化合物28：
Figure GDA0004040055220000524
(S)-4'-(二氟甲基)-6-(3-甲基吗啉代)-2-吗啉代-[4,5'-联嘧啶]-2'-胺
化合物29：
Figure GDA0004040055220000531
5-(4-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)-6-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)-1,3,5-三嗪-2-基)-4-(二氟甲基)吡啶-2-胺
化合物30：
Figure GDA0004040055220000532
5-[4,6-双(2,2-二甲基吗啉-4-基)-1,3,5-三嗪-2-基]-4-(二氟甲基)吡啶-2-胺
化合物31：
Figure GDA0004040055220000533
(S)-4-(二氟甲基)-5-(2-(3-甲基吗啉代)-6-吗啉代嘧啶-4-基)吡啶-2-胺
化合物32：
Figure GDA0004040055220000534
(S)-4'-(二氟甲基)-2-(3-甲基吗啉代)-6-吗啉代-[4,5'-联嘧啶]-2'-胺
化合物33：
Figure GDA0004040055220000541
4-(二氟甲基)-5-[4-[(2S,6R)-2,6-二甲基吗啉-4-基]-6-[(3R)-3-甲基吗啉-4-基]-1,3,5-三嗪-2-基]吡啶-2-胺
化合物34：
Figure GDA0004040055220000542
5-[4,6-双[(2R,6S)-2,6-二甲基吗啉-4-基]-1,3,5-三嗪-2-基]-4-(二氟甲基)吡啶-2-胺
化合物37：
Figure GDA0004040055220000543
5-[4,6-双(3,7-二氧杂-9-氮杂双环[3.3.1]壬-9-基)-1,3,5-三嗪-2-基]-4-(二氟甲基)吡啶-2-胺
化合物38：
Figure GDA0004040055220000544
4-(二氟甲基)-5-[4-(3,7-二氧杂-9-氮杂双环[3.3.1]壬-9-基)-6-(3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-1,3,5-三嗪-2-基]吡啶-2-胺
化合物39：
Figure GDA0004040055220000551
5-[4,6-双(3,3-二甲基吗啉-4-基)-1,3,5-三嗪-2-基]-4-(二氟甲基)吡啶-2-胺
化合物40：
Figure GDA0004040055220000552
5-[4,6-双[(3R,5S)-3,5-二甲基吗啉-4-基]-1,3,5-三嗪-2-基]-4-(二氟甲基)吡啶-2-胺
化合物41：
Figure GDA0004040055220000553
5-[4,6-双[(3R)-3-甲基吗啉-4-基]-1,3,5-三嗪-2-基]-4-(二氟甲基)吡啶-2-胺化合物42
Figure GDA0004040055220000554
4-(二氟甲基)-5-[4-(3,3-二甲基吗啉-4-基)-6-吗啉代-1,3,5-三嗪-2-基]吡啶-2-胺
化合物44：
Figure GDA0004040055220000561
4-(二氟甲基)-5-[4-[(3R,5S)-3,5-二甲基吗啉-4-基]-6-[(3R)-3-甲基吗啉-4-基]-1,3,5-三嗪-2-基]吡啶-2-胺
化合物45：
Figure GDA0004040055220000562
4-(二氟甲基)-5-[4-(3,3-二甲基吗啉-4-基)-6-[(3R)-3-甲基吗啉-4-基]-1,3,5-三嗪-2-基]吡啶-2-胺
化合物46：
Figure GDA0004040055220000563
4-(二氟甲基)-5-[4-[(3R)-3-(甲氧基甲基)吗啉-4-基]-6-[(3R)-3-甲基吗啉-4-基]-1,3,5-三嗪-2-基]吡啶-2-胺
化合物47：
Figure GDA0004040055220000564
4-(二氟甲基)-5-[4-(3,7-二氧杂-9-氮杂双环[3.3.1]壬-9-基)-6-[(3R)-3-甲基吗啉-4-基]-1,3,5-三嗪-2-基]吡啶-2-胺
化合物50：
Figure GDA0004040055220000571
4-(二氟甲基)-5-[4-[(3R)-3-甲基吗啉-4-基]-6-(3-氧杂-6-氮杂双环[3.1.1]庚-6-基)-1,3,5-三嗪-2-基]吡啶-2-胺
化合物51：
Figure GDA0004040055220000572
4-(二氟甲基)-5-[4-[(3R)-3-甲基吗啉-4-基]-6-(6-氧杂-3-氮杂双环[3.1.1]庚-3-基)-1,3,5-三嗪-2-基]吡啶-2-胺
化合物52：
Figure GDA0004040055220000573
4-(二氟甲基)-5-[4-[(3R)-3-甲基吗啉-4-基]-6-[(1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚-5-基]-1,3,5-三嗪-2-基]吡啶-2-胺
化合物53：
Figure GDA0004040055220000574
4-(二氟甲基)-5-[4-[(3R)-3-甲基吗啉-4-基]-6-[(1S,4S)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚-5-基]-1,3,5-三嗪-2-基]吡啶-2-胺
化合物54：
Figure GDA0004040055220000581
5-[4,6-双[(3R)-3-乙基吗啉-4-基]-1,3,5-三嗪-2-基]-4-(二氟甲基)吡啶-2-胺
化合物55：
Figure GDA0004040055220000582
5-[4,6-双(8-氧杂-5-氮杂螺[3.5]壬-5-基)-1,3,5-三嗪-2-基]-4-(二氟甲基)吡啶-2-胺
化合物56：
Figure GDA0004040055220000583
5-[4,6-双[(3R)-3-异丙基吗啉-4-基]-1,3,5-三嗪-2-基]-4-(二氟甲基)吡啶-2-胺
化合物66：
Figure GDA0004040055220000584
4-(二氟甲基)-5-[4-(3,3-二甲基吗啉-4-基)-6-[(3R,5S)-3,5-二甲基吗啉-4-基]-1,3,5-三嗪-2-基]吡啶-2-胺
化合物67：
Figure GDA0004040055220000591
4-(二氟甲基)-5-[4-(3,3-二甲基吗啉-4-基)-6-[(3R)-3-(甲氧基甲基)吗啉-4-基]-1,3,5-三嗪-2-基]吡啶-2-胺
化合物68：
Figure GDA0004040055220000592
[(3R)-4-[4-[6-胺基-4-(二氟甲基)-3-吡啶基]-6-(3,3-二甲基吗啉-4-基)-1,3,5-三嗪-2-基]吗啉-3-基]甲醇
化合物69：
Figure GDA0004040055220000593
4-(二氟甲基)-5-[4-(3,3-二甲基吗啉-4-基)-6-(3,7-二氧杂-9-氮杂双环[3.3.1]壬-9-基)-1,3,5-三嗪-2-基]吡啶-2-胺
化合物70：
Figure GDA0004040055220000594
5-[4-(4-环丙基哌嗪-1-基)-6-(3,3-二甲基吗啉-4-基)-1,3,5-三嗪-2-基]-4-(二氟甲基)吡啶-2-胺
化合物71：
Figure GDA0004040055220000601
4-(二氟甲基)-5-[4-(3,3-二甲基吗啉-4-基)-6-[4-(2-甲氧基乙基)哌嗪-1-基]-1,3,5-三嗪-2-基]吡啶-2-胺
化合物77：
Figure GDA0004040055220000602
[(3R)-4-[4-[6-胺基-4-(二氟甲基)-3-吡啶基]-6-[(3R)-3-甲基吗啉-4-基]-1,3,5-三嗪-2-基]吗啉-3-基]甲醇
更优选化合物是
化合物78：
Figure GDA0004040055220000603
4-(二氟甲基)-5-[4-[(3R,5R)-3,5-二甲基吗啉-4-基]-6-[(3R)-3-甲基吗啉-4-基]-1,3,5-三嗪-2-基]吡啶-2-胺
化合物79：
Figure GDA0004040055220000604
4-(二氟甲基)-5-[4-[(3S,5S)-3,5-二甲基吗啉-4-基]-6-[(3R)-3-甲基吗啉-4-基]-1,3,5-三嗪-2-基]吡啶-2-胺
化合物80：
Figure GDA0004040055220000611
4-(二氟甲基)-5-[4-吗啉代-6-(3-氧杂-9-氮杂双环[3.3.1]壬-9-基)-1,3,5-三嗪-2-基]吡啶-2-胺
化合物82：
Figure GDA0004040055220000612
4-(二氟甲基)-5-[4-(3,7-二氧杂-9-氮杂双环[3.3.1]壬-9-基)-6-(3-氧杂-9-氮杂双环[3.3.1]壬-9-基)-1,3,5-三嗪-2-基]吡啶-2-胺
化合物83：
Figure GDA0004040055220000613
5-[4,6-双[(3S,5S)-3,5-二甲基吗啉-4-基]-1,3,5-三嗪-2-基]-4-(二氟甲基)吡啶-2-胺
化合物84：
Figure GDA0004040055220000614
4-(二氟甲基)-5-[4-(3,7-二氧杂-9-氮杂双环[3.3.1]壬-9-基)-6-吗啉代-1,3,5-三嗪-2-基]吡啶-2-胺
化合物85：
Figure GDA0004040055220000621
4-(二氟甲基)-5-[4-[(3S)-3-乙基吗啉-4-基]-6-[(3R)-3-甲基吗啉-4-基]-1,3,5-三嗪-2-基]吡啶-2-胺
化合物86：
Figure GDA0004040055220000622
4-(二氟甲基)-5-[4-[(3R)-3-乙基吗啉-4-基]-6-[(3R)-3-甲基吗啉-4-基]-1,3,5-三嗪-2-基]吡啶-2-胺
化合物88：
Figure GDA0004040055220000623
4-(二氟甲基)-5-[4-[(3R)-3-甲基吗啉-4-基]-6-(8-氧杂-5-氮杂螺[3.5]壬-5-基)-1,3,5-三嗪-2-基]吡啶-2-胺
本发明化合物的制备
本发明化合物可通过合成途径合成，所述合成途径包含与化学技术中熟知的方法类似的方法，确切地说根据本文中所含的描述合成。起始物质一般购自商业来源或易于使用本领域技术人员熟知的方法制备。
在制备本发明化合物时，可能需要保护中间物的远程官能基(例如一级或二级胺)。对此类保护的需要将取决于远程官能基的性质及制备方法的条件而不同。适合胺基保护基包含叔丁氧基羰基(BOC)、双叔丁氧基羰基或二甲基胺基亚甲基。本领域技术人员容易确定对此类保护的需要。关于保护基及其使用的一般说明，参见T.W.Greene,ProtectiveGroups in Organic Synthesis,John Wiley&Sons,New York,1991。
分离方法
在制备本发明化合物的方法中，有利地使反应产物彼此分离和/或使反应产物与起始物质分离。每个步骤或一系列步骤的所需产物通过此项技术中常见的技术分离和/或纯化至所需均质性程度。典型地，此类分离涉及多相萃取、自溶剂或溶剂混合物结晶、蒸馏、升华或层析。层析法可涉及多种方法，包含(例如)：反相和正相层析；高压、中压和低压液相层析法和设备；小规模分析型层析；和制备型薄层或厚层层析法，以及小规模薄层层析和急骤层析技术。
适当分离方法的选择取决于所涉及材料的性质，例如在层析法中存在或不存在极性官能基、在多相萃取中材料于酸性和碱性介质中的稳定性，和类似性质。本领域技术人员将应用最可能的技术以达成所需分离。
实施例
实施例旨在说明本发明而非限制本发明。
实施例中描述的化学反应可容易用于制备本发明的多种其它脂质激酶抑制剂，且用于制备本发明化合物的替代方法认为在本发明的范围内。举例而言，本发明的非例示性化合物的合成可通过本领域技术人员显而易知的修改成功地进行，例如通过适当保护干扰基团，通过利用除所描述试剂外的此项技术中已知的其它适合试剂，和/或通过对反应条件作出常规修改。或者，本文揭示或此项技术中已知的其它反应将公认为适用于制备本发明的其它化合物。
一般而言，已获得所制备化合物的1H NMR谱图和质谱。在下述实施例中，除非另外指明，否则所有温度均用摄氏度(℃)阐述。试剂是购自商业供货商，诸如Sigma Aldrich、Fluorochem、Acros、Lancaster、TCI或Maybridge，且除非另外指示，否则不经进一步纯化即使用。下文所阐述的反应一般是在氮气正压力下或在无水溶剂中利用干燥管完成(除非另外说明)，且反应烧瓶典型地装配有橡胶膈膜以便经由注射器引入基质和试剂。玻璃器皿经烘箱干燥。管柱层析法是使用Merck硅胶进行。1H NMR谱图记录于以400MHz操作的Bruker仪器上。获得在诸如CDCl3、(CD3)2SO、CD3OD或(CD3)2CO的各种氘化溶剂中的溶液的1H NMR谱图。化学位移δ值以ppm报告且针对氘化溶剂(对于CDCl3为7.26ppm)或TMS(0ppm)的信号校正。19F NMR谱图相对于作为外部标准的CFCl3(δ＝0ppm)校准。记录的19F NMR谱图经1H解耦。当报告峰多重性时，使用以下缩写：s(单峰)、d(二重峰)、t(三重峰)、m(多重峰)、quint(五重峰)、br(加宽峰)。耦合常数当提供时以赫兹(Hz)报告。MALDI-ToF质谱(MS)在以m/z测量的Voyager-DeTM Pro上获得。
在下文中使用以下缩写：BSA(牛血清白蛋白)、DMSO(二甲亚砜)、ESI(电喷雾电离)、HCl(盐酸)、M(莫耳浓度)、MALDI(基质辅助雷射脱附/电离)、MS(质谱)、PBS(磷酸盐缓冲盐液)、TLC(薄层层析法)、nd(未测定)。
实施例1
制备中间化合物和本发明化合物
制备中间化合物
使用以下方法制备用于制造式(I)化合物的中间化合物。
方法1：8-(4-(3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-6-氯-1,3,5-三嗪-2-基)-3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷(i1)
Figure GDA0004040055220000641
将3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷·HCl(Advanced ChemBlocks Inc，产品编号A-861，2.00g，13.4mmol，2.0当量)和N,N-二异丙基乙胺(4.80mL，27.6mmol，4.1当量)装入烧瓶中并溶解于二氯甲烷(20mL)中。将烧瓶放入冰浴中且随后将溶液冷却至0℃。接着，在0℃下将此溶液逐滴添加至三聚氯化氰于二氯甲烷中的溶液(20mL)中。将所得反应混合物搅拌隔夜，同时使其升温至室温。再添加二氯甲烷(100mL)并用饱和硫酸氢钠水溶液洗涤有机层。接着，有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并减压蒸发溶剂。通过急骤层析法(环己烷/乙酸乙酯4:1)纯化，得到呈无色固体状的所需中间物i1(79％产率)。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ4.70-4.54(m,4H),3.80-3.58(m,8H),2.14-1.89(m,8H)；MS(MALDI):m/z＝338.4([M+H]+)。
方法1也用于制备以下中间化合物i2至中间化合物i10，和中间物i79至中间物i81和中间物i90。
Figure GDA0004040055220000651
Figure GDA0004040055220000661
Figure GDA0004040055220000671
方法2：2,4-二氯-6-吗啉代-1,3,5-三嗪(i11)
Figure GDA0004040055220000672
在-78℃下，经2小时向三聚氯化氰(18.1g，0.100mol，1.0当量)于二氯甲烷(200mL)中的溶液中逐滴添加吗啉溶液(17.4g，0.200mol，2.0当量)。在搅拌下，使所得混合物升温至0℃并将其与冰冷的硫酸氢钠饱和水溶液混合。分离各相且用半浓缩盐水洗涤有机相，经硫酸钠干燥并蒸发，得到呈无色固体状的标题化合物i11。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ3.90-3.86(m,4H),3.77-3.72(m,4H)。
方法3：8-(4-氯-6-吗啉代-1,3,5-三嗪-2-基)-3-氧杂-8-氮杂双环-[3.2.1]辛烷(i12)
Figure GDA0004040055220000681
将3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷·HCl(Advanced ChemBlocks Inc，产品编号A-861，200mg，1.34mmol，1.1当量)和N,N-二异丙基乙胺(470μL，2.69mmol，2.1当量)装入烧瓶中并溶解于乙醇(3mL)中。将烧瓶放入冰浴中。在0℃下，将化合物i11(300mg，1.28mmol，1.0当量)于乙醇(2mL)中的溶液添加至以上溶液中。将所得混合物搅拌隔夜，同时使其升温至室温。添加去离子水(20mL)且用乙酸乙酯(3×30mL)萃取水层。合并的有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并减压蒸发溶剂。通过急骤层析法(环己烷/乙酸乙酯9:1→8:2)纯化，得到呈无色固体状的所需中间物i12(78％产率)。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ4.69-4.56(m,2H),3.86-3.59(m,12H),2.12-1.91(m,4H)；MS(MALDI):m/z＝312.7([M+H]+)。
方法3也用于制备以下中间化合物i13至中间化合物i16，以及中间物i87和中间物i91。
Figure GDA0004040055220000682
Figure GDA0004040055220000691
方法4：(S)-4-(4,6-二氯-1,3,5-三嗪-2-基)-3-甲基吗啉(i17)
Figure GDA0004040055220000692
在-50℃下，向三聚氯化氰(450mg，2.44mol，1.0当量)于二氯甲烷(4mL)中的溶液中缓慢添加(S)-3-甲基吗啉(Activate Scientific，产品编号AS3424，0.28mL，2.44mol，1.0当量)和三乙胺(0.35mL，2.51mol，1.02当量)于二氯甲烷(2mL)中的溶液。在-50℃下，将所得混合物搅拌2小时，接着在搅拌下，使其升温至0℃并与冰冷的硫酸氢钠饱和水溶液混合。分离各相并用盐水洗涤有机相，经硫酸钠干燥并蒸发，得到呈无色固体状的标题化合物i17(95％产率)。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ4.78-4.69(m,1H),4.43-4.39(m,1H),3.98-3.96(m,1H),3.78-3.76(m,1H),3.67-3.65(m,1H),3.51-3.47(m,1H),3.40-3.37(m,1H),1.36(m,3H)。
方法5：8-(4-氯-6-((S)-3-甲基吗啉代)-1,3,5-三嗪-2-基)-3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷(i18)
Figure GDA0004040055220000701
将3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷·HCl(Advanced ChemBlocks Inc，产品编号A-861，383mg，2.55mmol，1.1当量)和N,N-二异丙基乙胺(1.0mL，5.60mmol，2.4当量)装入烧瓶中并溶解于乙醇(4mL)中。将烧瓶放入冰浴中。在0℃下，将化合物i17(580mg，2.33mmol，1.0当量)于乙醇(2mL)中的溶液添加至以上溶液中。搅拌所得混合物4小时，同时使其升温至室温。添加去离子水(20mL)并用乙酸乙酯(3×30mL)萃取水层。合并的有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并减压蒸发溶剂.通过急骤层析法(环己烷/乙酸乙酯9:1→8:2)纯化，得到呈无色固体状的所需中间物i18(88％产率)。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ4.75-4.52(m,3H),4.37-4.24(m,1H),3.95-3.92(m,1H),3.73-3.70(m,3H),3.64-3.61(m,3H),3.52-3.42(m,1H),3.29-3.17(m,1H),2.11-1.89(m,4H),1.31(m,3H)。
方法6：4-(4,6-二氯-1,3,5-三嗪-2-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(i19)
Figure GDA0004040055220000702
向三聚氯化氰(1.0g，5.42mmol，1.0当量)于二氯甲烷(4mL)中的冷却(-50℃)溶液中逐滴添加哌嗪-1-甲酸叔丁酯(Sigma，产品编号343536，1.02g，5.48mmol，1.01当量)和三乙胺(0.767mL，5.53mmol，1.02当量)于二氯甲烷(2mL)中的溶液。在-50℃下，将所得反应混合物搅拌4小时。添加饱和硫酸氢钠水溶液(10mL)和二氯甲烷(20mL)。将混合物转移至分液漏斗中。分离有机层，用饱和硫酸氢钠水溶液(20mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤且接着减压蒸发溶剂，得到纯中间物i19(80％产率)。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ3.88-3.85(m,4H),3.53-3.51(m,4H),1.49(m,9H)。
方法7：4-(4-(3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-6-氯-1,3,5-三嗪-2-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(i20)
Figure GDA0004040055220000711
将3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷·HCl(Advanced ChemBlocks Inc，产品编号A-861，235mg，1.57mmol，1.0当量)和N,N-二异丙基乙胺(592μL，3.14mmol，2.1当量)装入烧瓶中并溶解于乙醇(6mL)中。将烧瓶放入冰浴中。在0℃下，将化合物i19(500mg，1.5mmol，1.0当量)于乙醇(2mL)中的溶液添加至以上溶液中。搅拌所得混合物隔夜，同时使其升温至室温。添加去离子水(10mL)并用乙酸乙酯(3×30mL)萃取水层。合并的有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并减压蒸发溶剂。通过急骤层析法(环己烷/乙酸乙酯8:2)纯化，得到呈无色固体状的所需中间物i20(77％产率)。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ4.68-4.60(m,2H),3.76-3.70(m,6H),3.64-3.62(m,2H),3.47-3.45(m,4H),2.08-1.95(m,4H),1.48(br s,9H)；MS(MALDI):m/z＝411.8([M+H]+)。
方法7也用于制备以下中间化合物i21。
Figure GDA0004040055220000721
方法8：4,4'-(6-氯嘧啶-2,4-二基)二吗啉(i22)和4,4'-(2-氯嘧啶-4,6-二基)二吗啉(i23)
Figure GDA0004040055220000722
将2,4,6-三氯嘧啶(Manchester Organics，产品编号Y17832，11.2g，61mmol，1.0当量)、N,N-二异丙基乙胺(23.3mL，134.2mmol，2.2当量)和吗啉(11.7mL，134.2mmol，2.2当量)装入烧瓶中并将其溶解于乙醇(120mL)中。烧瓶配备有回流冷凝器且将其放入在100℃下预先加热的油浴中。在此温度下搅拌反应混合物18小时。随后，将反应混合物冷却至室温并减压移除挥发性物质。将所得混合物溶解于二氯甲烷(100mL)中并用硫酸氢钠水溶液(2×80mL)洗涤两次。有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并使用旋转蒸发器减压浓缩。产物i22和产物i23通过硅胶急骤层析法(环己烷/乙酸乙酯3:1至1:1)分离。汇集产物部分并蒸发，得到呈无色粉末状的i22(13.8g，80％)和呈无色粉末状的i23(2.2g，13％产率)。
4,4'-(6-氯嘧啶-2,4-二基)二吗啉(i22)：1H NMR(400MHz,CDCl3):δ5.85(s,1H),3.71-3.75(m,12H),3.52-3.55(m,4H)；MS(MALDI):m/z:285.4([M+H]+)。
4,4'-(2-氯嘧啶-4,6-二基)二吗啉(i23)：1H NMR(400MHz,CDCl3):δ5.38(s,1H),3.73-3.76(m,8H),3.52-3.54(m,8H)；MS(MALDI):m/z:285.2([M+H]+)。
方法9：8-(4-(3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-6-氯嘧啶-2-基)-3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷(i24)
Figure GDA0004040055220000731
将2,4,6-三氯嘧啶(0.676mL，5.88mmol，1.0当量)、3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷盐酸盐(1.76g，11.8mmol，2.0当量)和N,N-二异丙基乙胺(4.10mL，23.5mmol，4.0当量)于乙酸乙酯(18体积)中的溶液加热16小时(100℃)。接着，减压移除溶剂并将残余物溶解于二氯甲烷(60体积)中并用饱和硫酸氢钠水溶液(3×60体积)洗涤。有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。通过硅胶管柱层析法(环己烷/乙酸乙酯3:1至1:1)纯化，得到呈无色固体状的所需中间物i24(1.23g，62％)。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ5.80(s,1H),4.59(s,2H),4.35(m,2H),3.76(t,2JH,H＝10.8Hz,4H),3.59(d,2JH,H＝10.8Hz,4H),2.03(m,8H)；MS(MALDI):m/z＝337.7([M+H]+)。
方法9也用于制备以下中间化合物i25。
Figure GDA0004040055220000732
方法10：4-(4,6-二氯嘧啶-2-基)吗啉(i26)和4-(2,6-二氯嘧啶-4-基)吗啉(i27)
Figure GDA0004040055220000741
在0℃下，向2,4,6-三氯嘧啶(14.0mL，122mmol，1.0当量)于EtOH(150mL)中的溶液中逐滴添加吗啉(11.2mL，256mmol，2.1当量)和N,N-二异丙基乙胺(44.6mL，256mmol，2.1当量)于EtOH(150mL)中的溶液。在室温下，将反应混合物搅拌隔夜并减压移除溶剂。用二氯甲烷(3×100mL)萃取粗产物且连续用饱和硫酸氢钠水溶液(3×400mL)洗涤有机相。合并的有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并减压蒸发。粗混合物通过急骤层析法(SiO2，环己烷/乙酸乙酯9:1至3:1)纯化，得到i26(5.02g，18％)和i27(16.7g，59％)，均呈无色固体状。
4-(4,6-二氯嘧啶-2-基)吗啉(i26)：1H NMR(400MHz,CDCl3):δ6.56(s,1H),3.78(m,4H)3.74(m,4H)。
4-(2,6-二氯嘧啶-4-基)吗啉(i27)：1H NMR(400MHz,CDCl3):δ6.41(s,1H),3.78(m,4H),3.65(m,4H)。
方法11：(S)-4-(2-氯-6-吗啉代嘧啶-4-基)-3-甲基吗啉(i28)
Figure GDA0004040055220000742
将i27(694mg，2.97mmol，1.0当量)、(S)-3-甲基吗啉(0.500mL，4.46mmol，1.5当量)和N,N-二异丙基乙胺(1.29mL，7.43mmol，2.5当量)于EtOH(5.0mL)中的溶液加热至回流，保持3天。接着，减压移除溶剂。将残余物溶解于二氯甲烷(60体积)中并用饱和硫酸氢钠水溶液(3×60体积)洗涤。有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。粗混合物通过急骤层析法(SiO2，环己烷/乙酸乙酯3:1至1:1)纯化，得到呈无色固体状的标题化合物(S)-4-(2-氯-6-吗啉代嘧啶-4-基)-3-甲基吗啉(i28)(425mg，48％)。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ5.85(s,1H),4.62(dd,2JH,H＝13.6Hz,3JH,H＝2.9Hz,1H),4.25(dd,2JH,H＝13.6Hz,3JH,H＝2.9Hz,1H),3.93(dd,2JH,H＝11.4Hz,3JH,H＝3.8Hz,1H),3.75,(t,3JH,H＝5.0Hz,4H),3.71(s,1H),3.66(dd,2JH,H＝11.3Hz,3JH,H＝3.2Hz,1H),3.53(m,5H),3.23(m,1H),1.26(d,2JH,H＝11.3Hz,3H)；MS(MALDI):m/z＝299.4([M+H]+)。
方法11也用于制备以下中间化合物i29。
Figure GDA0004040055220000751
方法12：(S)-4-(6-氯-2-吗啉代嘧啶-4-基)-3-甲基吗啉(i30)
Figure GDA0004040055220000752
将(S)-3-甲基吗啉(194mg，1.32mmol，1.5当量)、i26(300mg，1.28mmol，1.0当量)和N,N-二异丙基乙胺(3.0当量)于DMF(17体积)中的溶液加热16小时(130℃)。接着，减压移除溶剂。将残余物溶解于二氯甲烷(100体积)中并用饱和硫酸氢钠水溶液(3×100体积)洗涤。有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。粗混合物通过急骤层析法(SiO2，环己烷/乙酸乙酯5:1)纯化，得到呈无色固体状的标题化合物i30(257mg，67％)。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ5.84(s,1H),4.18(m,1H),3.94(m,2H),3.71(m,10H),3.53,(dt,2JH,H＝12.0Hz,3JH,H＝3.1Hz,1H),3.20(dt,2JH,H＝12.8Hz,3JH,H＝3.8Hz,1H),1.27(d,3JH,H＝6.8Hz,3H)；MS(MALDI):m/z＝298.4([M]+)。
方法14：8-(4,6-二氯-1,3,5-三嗪-2-基)-3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷(i32)
Figure GDA0004040055220000761
将三聚氯化氰(1.97g，10.7mmol，1.0当量)于二氯甲烷(10mL)中的溶液冷却至-50℃。经5小时的时间缓慢添加3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷盐酸盐(1.60g，10.7mmol，1.0当量)和N,N-二异丙基乙胺(3.73mL，21.4mmol，2.0当量)于二氯甲烷(40mL)中的溶液。在此温度下再搅拌混合物5小时。接着，添加二氯甲烷(20mL)和饱和硫酸氢钠水溶液(50mL)并使混合物升温至室温。分离各层并用饱和硫酸氢钠水溶液(2×50mL)洗涤有机层。有机层经无水硫酸钠干燥并减压移除溶剂。粗混合物由正庚烷/二氯甲烷(20mL/13mL)再结晶，得到呈无色固体状的标题化合物8-(4,6-二氯-1,3,5-三嗪-2-基)-3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷(i32)(2.47g，47％)。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ4.74(m,2H),3.72(d,3JH,H＝1.5Hz,4H),2.08(m,4H)。
方法14也用于制备以下中间化合物i33和中间化合物i34。
Figure GDA0004040055220000762
方法15：9-(4-(3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-6-氯-1,3,5-三嗪-2-基)-3,7-二氧杂-9-氮杂双环[3.3.1]壬烷(i35)
Figure GDA0004040055220000771
向3,7-二氧杂-9-氮杂双环[3.3.1]壬烷(184mg，0.700mmol，1.0当量)和N,N-二异丙基乙胺(0.170mL，0.970mmol，1.4当量)于1,4-二恶烷(1.0mL)中的溶液中添加i32(100mg，0.770mmol，1.1当量)于1,4-二恶烷(2.0mL)中的溶液。在70℃下，将所得混合物加热1小时。接着，添加二氯甲烷(50mL)和水(50mL)。用二氯甲烷(3×50mL)萃取水层，合并的有机层经无水硫酸钠干燥并蒸发溶剂。粗混合物通过自动硅胶急骤层析法(环己烷/乙酸乙酯2:1至0:1)纯化，得到呈无色固体状的标题化合物9-(4-(3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-6-氯-1,3,5-三嗪-2-基)-3,7-二氧杂-9-氮杂双环[3.3.1]壬烷(i35)(192mg，77％)。1H NMR(400MHz,(CD3)2SO):δ4.70(m,1H),4.55(m,2H),4.44(m,1H),4.12(m,4H),3.90(m,4H),3.72(m,2H),3.64(m,2H),2.08(m,2H),1.97(m,2H)；MS(MALDI):m/z＝354.3([M]+)。
方法16：9-(4-氯-6-((R)-3-甲基吗啉代)-1,3,5-三嗪-2-基)-3,7-二氧杂-9-氮杂双环[3.3.1]壬烷(i36)
Figure GDA0004040055220000772
向3,7-二氧杂-9-氮杂双环[3.3.1]壬烷(173mg，1.27mmol，1.05当量)和N,N-二异丙基乙胺(0.50mL，2.52mmol，2.1当量)于四氢呋喃(5mL)中的溶液中添加i33(300mg，2.52mmol，2.1当量)于1,4-二恶烷(2.0mL)中的溶液。将所得混合物加热2小时(70℃)。接着，添加乙酸乙酯(20mL)和饱和硫酸氢钠水溶液(20mL)。分离各相并用饱和硫酸氢钠水溶液(2×20mL)洗涤有机层。有机层经无水硫酸钠干燥并减压移除溶剂。粗混合物通过自动急骤层析法(SiO2，环己烷/乙酸乙酯2:1至0:1)纯化，得到呈无色固体状的标题化合物i36(316mg，76％)。1H NMR(400MHz,(CD3)2SO):δ4.55-4.53(m,1H),4.42(m,1H),4.32(m,1H),4.25-4.16(m,1H),4.01-3.97(m,4H),3.87(dd,3JH,H＝3.8Hz,2JH,H＝11.2Hz,1H),3.73-3.65(m,5H),3.53(dd,3JH,H＝3.0Hz,2JH,H＝11.6Hz,1H),3.38(m,1H),3.15(m,1H),1.20(d,3JH,H＝6.9Hz,3H)。
方法16也用于制备以下中间化合物i37至中间化合物i53、中间物i82以及中间物i85、中间物i86、中间物i92、中间物i93、中间物i94。
Figure GDA0004040055220000781
Figure GDA0004040055220000791
Figure GDA0004040055220000801
Figure GDA0004040055220000811
方法17：9-(4-氯-6-(3,3-二甲基吗啉代)-1,3,5-三嗪-2-基)-3,7-二氧杂-9-氮杂双环[3.3.1]壬烷(i54)
Figure GDA0004040055220000812
向3,7-二氧杂-9-氮杂双环[3.3.1]壬烷(155mg，1.20mmol，1.05当量)和N,N-二异丙基乙胺(0.42mL，2.40mmol，2.1当量)于1,4-二恶烷(5mL)中的溶液中添加i34(300mg，1.14mmol，1当量)于1,4-二恶烷(1mL)中的溶液。将所得混合物加热2小时(70℃)。接着，添加乙酸乙酯(20mL)和饱和硫酸氢钠水溶液(20mL)。分离各相并用饱和硫酸氢钠水溶液(2×20mL)洗涤有机层。有机层经无水硫酸钠干燥并减压移除溶剂。粗混合物通过自动急骤层析法(SiO2，环己烷/乙酸乙酯2:1至0:1)纯化，得到呈无色固体状的标题化合物i54(178mg，44％)。1H NMR(400MHz,(CD3)2SO):δ4.32(m,2H),4.05-3.98(m,4H),3.77(m,4H),3.71(m,4H),3.44(m,2H),1.41(s,6H)。MS(MALDI):m/z＝356.3([M+H]+)。
方法17也用于制备以下中间化合物i55至中间化合物i64。
Figure GDA0004040055220000821
Figure GDA0004040055220000831
方法18：4-(二氟甲基)吡啶-2-胺(i65)
Figure GDA0004040055220000832
在氮气环境中，将乙酸钯(275mg，1.22mmol，0.05当量)和2-二环己基膦基-2’,4’,6’-三异丙基联苯(Sigma-Aldrich，产品编号638064，1.17g，2.45mmol，0.10当量)溶解于1,4-二恶烷(10mL)中，并在室温下搅拌所得混合物45分钟。接着在氮气环境中，将此溶液添加至胺基甲酸叔丁酯(Sigma，产品编号167398，4.30g，36.7mmol，1.5当量)、Cs2CO3(15.9g，48.8mmol，2.0当量)和2-氯-4-二氟甲基-吡啶(Manchester Organics，产品编号U15343，4.00g，24.5mmol，1.0当量)于1,4-二恶烷(80mL)中的混合物中。接着，在90℃下将所得反应混合物加热3小时，在此期间，其变为褐色。随后，使混合物冷却至室温。接着将其用乙酸乙酯稀释，用饱和氯化铵水溶液(2×30mL)和去离子水洗涤。机层经无水硫酸钠干燥，过滤并减压蒸发溶剂。将褐色残余物与4M HCl的二恶烷溶液(50mL，过量)和甲醇(20mL)混合，且接着在80℃加热45分钟。添加去离子水并用乙酸乙酯(3x)洗涤水层。接着，用固体氢氧化钠将水层碱化至pH＝9。用乙酸乙酯(3x)萃取水层。合并的有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩至干。获得呈无色固体状的所得产物i65，不经进一步纯化即用于下一步骤中(98％产率)。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.16(d,2JH,H＝5.2Hz,1H),6.74(d,2JH,H＝4.8Hz,1H),6.59(s,1H),6.51(t,2JH,F＝56Hz,1H),4.61(br s,2H)；19F NMR(376MHz,CDCl3):δ-116.0(s,2F)。
方法19：5-溴-4-(二氟甲基)吡啶-2-胺(i66)
Figure GDA0004040055220000841
在冰浴中，在0℃下向化合物i65(3.00g，20.8mmol，1.0当量)于四氢呋喃(60mL)中的溶液中添加N-溴代琥珀酰亚胺(3.89g，21.9mmol，1.05当量)。搅拌所得混合物隔夜，同时使其升温至室温。添加乙酸乙酯并用碳酸钠水溶液(8％)洗涤有机层。接着分离有机层并用3M HCl水溶液酸化。用乙酸乙酯(3×50mL)洗涤水层且接着用固体氢氧化钠碱化至pH＝10。用乙酸乙酯(3×50mL)萃取水层。合并的有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩至干。获得呈褐色固体状的所得产物i66，不经进一步纯化即用于下一步骤中(79％产率)。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.20(s,1H),6.75(s,1H),6.71(t,2JH,F＝54Hz,1H)；4.62(br s,2H)；19FNMR(376MHz,CDCl3):δ-118.9(s,2F)。
方法20：N'-(5-溴-4-(二氟甲基)吡啶-2-基)-N,N-二甲基甲脒(i67)
Figure GDA0004040055220000842
向化合物i66(3.68g，16.5mmol，1.0当量)于四氢呋喃(50mL)中的溶液中添加N,N-二甲基甲酰胺二甲基缩醛(Manchester Organics，产品编号005030，3.30mL，24.8mmol，1.5当量)并在60℃下搅拌所得混合物3小时。使混合物冷却至室温并减压蒸发溶剂。粗产物通过硅胶管柱层析法(环己烷/乙酸乙酯1:1)纯化，得到呈黄色固体状的所需产物i67(82％产率)。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.43(s,1H),8.34(br s,1H),7.17(s,1H),6.73(t,2JH,F＝54Hz,1H),3.12(s,3H),3.10(s,3H)；19F NMR(376MHz,CDCl3):δ-118.6(s,2F)；MS(MALDI):m/z＝278.5([M+H]+)。
方法21：N'-(4-(二氟甲基)-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)吡啶-2-基)-N,N-二甲基甲脒(i68)
Figure GDA0004040055220000851
在0℃下，向氯化异丙基镁(Sigma，产品编号230111，3.10mL，6.20mmol，1.15当量)于四氢呋喃(6mL)中的2M溶液中缓慢添加化合物i67(1.50g，5.39mmol，1.0当量)于四氢呋喃(5mL)中的溶液。在0℃下搅拌所得褐色混合物45分钟且接着在室温搅拌15分钟。随后，TLC监测(环己烷/乙酸乙酯1:1)显示起始物质完全消耗。添加2-异丙氧基-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷(Manchester Organics，产品编号W23343，1.43mL，7.00mmol，1.3当量)并在60℃下加热混合物3小时。接着将混合物放入Erlenmeyer烧瓶中，用冰浴冷却至0℃并用15％氯化铵水溶液淬灭。分离各层并用乙酸乙酯(3×40mL)萃取水层。合并的有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并减压蒸发溶剂。添加庚烷并用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤有机层，经无水硫酸钠干燥，过滤且接着减压浓缩至干。获得呈褐色油状的所得产物i68，不经进一步纯化即用于下一步骤中(94％产率)。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.66(s,1H),8.51(s,1H),7.34-7.04(m,2H),3.12(s,3H),3.12(s,3H),1.34(s,12H)；19F NMR(376MHz,CDCl3):δ-115.6(s,2F)；MS(MALDI):m/z＝326.0([M+H]+)。
方法22：4-(二氟甲基)嘧啶-2-胺(i69)
Figure GDA0004040055220000852
在干冰/异丙醇浴中，在-70℃下向乙基乙烯基醚(4.00mL，41.8mmol，1.0当量)于吡啶(4.10mL，50.7mmol，1.2当量)和二氯甲烷(40mL)的混合物中的溶液中逐滴添加2,2-二氟乙酸酐(Manchester Organics，产品编号L24754，5.90mL，50.1mmol，1.2当量)于二氯甲烷(5mL)中的溶液。使所得溶液升温至室温隔夜。接着用去离子水洗涤混合物，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压蒸发溶剂，得到橙色油状物。
同时，在室温下将盐酸胍(Sigma，产品编号50940，4.80g，50.2mmol，1.2当量)于乙醇(20mL)中的悬浮液搅拌1小时。向此溶液中一次性添加氢氧化钠团粒(2.00g，50.0mmol，1.2当量)。在室温下搅拌所得悬浮液隔夜。
用二氯甲烷(20mL)稀释橙色油状物并经1小时逐滴添加至所述乙醇悬浮液中。在室温下搅拌所得悬浮液2小时。减压蒸发二氯甲烷。将去离子水(25mL)添加至残余物中。剧烈搅拌所得混合物2小时且接着使其在室温下静置隔夜。滤出形成的固体，用去离子水(2x)和庚烷(1x)洗涤且接着真空干燥。获得呈无色固体状的所得产物i69(65％产率)。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.43(d,2JH,H＝4.8Hz,1H),7.02(br s,2H),6.76(d,2JH,H＝5.2Hz,1H),6.67(t,2JH,F＝55Hz,1H)；19F NMR(376MHz,CDCl3):δ-120.5(s,2F)。
方法23：5-溴-4-(二氟甲基)嘧啶-2-胺(i70)
Figure GDA0004040055220000861
在0℃下，向化合物i69(3.00g，20.7mmol，1.0当量)于四氢呋喃(90mL)中的溶液中逐份添加N-溴代琥珀酰亚胺(3.86g，21.7mmol，1.0当量)。使反应混合物升温至室温隔夜。随后，减压蒸发溶剂。将残余物溶解于乙酸乙酯(200mL)中，用饱和碳酸钠水溶液(4x)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤且接着减压浓缩至干。获得呈黄色固体状的所得产物i70，不经进一步纯化即用于下一步骤中(98％产率)。1H NMR(400MHz,(CD3)2SO):δ8.50(s,1H),7.30(brs,2H),6.87(t,2JH,F＝53Hz,1H)；19F NMR(376MHz,(CD3)2SO):δ-121.4(s,2F)。
方法24：N-叔丁基甲酸酯-N-(5-溴-4-(二氟甲基)嘧啶-2-基)胺基甲酸酯(i71)
Figure GDA0004040055220000871
将化合物i70(4.35g，19.4mmol，1.0当量)和4-(二甲基胺基)吡啶(480mg，3.92mmol，0.20当量)溶解于四氢呋喃(50mL)中。接着，在0℃下添加N,N-二异丙基乙胺(7.50mL，42.1mmol，2.2当量)和二碳酸二叔丁酯(9.33g，42.7mmol，2.2当量)并使所得溶液升温至室温隔夜。减压蒸发溶剂。粗产物通过硅胶管柱层析法(环己烷/乙酸乙酯9:1→4:1)纯化，得到呈无色固体状的所需产物i71(85％产率)。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.92(s,1H),6.73(t,2JH,F＝53Hz,1H),1.47(s,18H)；19F NMR(376MHz,CDCl3):δ-120.4(s,2F)。
通用程序1：
Figure GDA0004040055220000872
将经取代单氯-三嗪或经取代单氯-嘧啶(1.0当量)、化合物i68(1.1当量)、磷酸钾(2.0当量)和氯(2-二环己基膦基-2’,4’,6’-三异丙基-1,1’-联苯)[2-(2’-胺基-1,1’-联苯)]-钯(II)(Sigma-Aldrich，产品编号741825，0.05当量)装入烧瓶中。在氮气环境中，添加1,4-二恶烷(30体积)和去离子水(1.5体积)且接着将所得混合物直接放入在95℃预先加热的油浴中。在此温度下搅拌反应混合物2小时。添加5M HCl水溶液(20当量)。将所得混合物加热至60℃隔夜。通过添加2M氢氧化钠水溶液将所得混合物的pH值调至8-9，接着用乙酸乙酯(3×20体积)萃取混合物。合并的有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并减压蒸发溶剂。通过急骤层析法纯化，得到结构(I)的所需产物。
通用程序2：
Figure GDA0004040055220000881
在氮气环境中，将化合物i71(1.0当量)、4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-二(1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷)(Manchester Organics，产品编号M23170，1.5当量)、乙酸钾(3.0当量)和[1,1’-双(二苯基膦基)-二茂铁]-二氯钯(II)(Sigma-Aldrich，产品编号697230，0.099当量)溶解于1,4-二恶烷(12.5体积)中。在100℃下加热所得混合物15分钟(溶液变为黑色)。使用TLC监测(环己烷/乙酸乙酯3:1)，显示起始物质完全消耗。
向所得混合物中添加经取代的氯-三嗪或经取代的氯-嘧啶(1.1当量)、碳酸钾水溶液(2M，3.0当量)和预先混合的三苯基膦(0.12当量)和乙酸钯(0.04当量)于四氢呋喃(100体积)中的溶液。在60℃下加热所得混合物2小时且随后使其冷却至室温。
添加5M HCl水溶液(20当量)。将所得混合物加热至60℃隔夜。通过添加2M氢氧化钠水溶液将所得混合物的pH值调至8-9，接着用乙酸乙酯(3×20体积)萃取混合物。合并的有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并减压蒸发溶剂。通过急骤层析法纯化，得到所需产物。
方法27：N-叔丁氧羰基-N-(5-(4-氯-6-吗啉代-1,3,5-三嗪-2-基)-4-(二氟甲基)嘧啶-2-基)胺基甲酸叔丁酯(i74)
Figure GDA0004040055220000882
在氮气环境中，将中间物i71(2.00g，4.71mmol，1.0当量)、双(频哪醇根基)二硼(1.80g，7.09mmol，1.5当量)、KOAc(1.60g，16.3mmol，3.4当量)和[1,1’-双(二苯基膦基)二茂铁]-二氯钯(II)(350mg，478μmol，0.10当量)混合于1,4-二恶烷中并在95℃下加热45分钟。也制备乙酸钯(II)(43.0mg，192μmol，0.04当量)和三苯基膦(148mg，564μmol，0.12当量)于四氢呋喃(2mL)中的前体催化剂溶液并在室温下搅拌1小时。接着，在室温下将此溶液添加至冷却的以上溶液中，随后添加4-(4,6-二氯-1,3,5-三嗪-2-基)吗啉i11(1.65g，7.05mmol，1.5当量)和K2CO3水溶液(2.4M，5.90mL，14.2mmol，3.0当量)。在55℃下加热所得混合物隔夜。随后，将混合物倾倒于NH4Cl水溶液(15％)上并用乙酸乙酯(3x)萃取。合并的有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。通过硅胶管柱层析法(环己烷/乙酸乙酯1:0至4:1)纯化，得到呈无色固体状的产物i74(36％产率)。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ9.57(s,1H),7.55(t,2JH,F＝54Hz,1H),3.99-3.91(m,4H),3.84-3.76(m,4H),1.49(s,18H)；19F NMR(376MHz,CDCl3):δ-121.0(s,2F)。
方法32：(E)-4-乙氧基-1,1-二氟-丁-3-烯-2-酮(i83)
Figure GDA0004040055220000891
向吡啶(61.5mL，760.5mmol，1.2当量)于二氯甲烷(500mL)中的冷却的(-70℃)溶液中添加乙基乙烯基醚(60mL，626.5mmol，1当量)，随后添加二氟乙酸酐(88.5mL，760.5mmol，1.2当量)于二氯甲烷(75mL)中的溶液。接着，使混合物缓慢升温至室温隔夜。将混合物转移至分液漏斗中并用水(6×800mL)洗涤有机层，直至水层的pH变为中性。有机层经硫酸钠干燥并减压移除溶剂，得到呈橙色油状的所需产物i83(76.7g，81％)。1H NMR(400MHz,(CD3)2SO):δ7.92(d,3JH,H＝12.5Hz,1H),6.34(t,2JH,F＝53.6Hz,1H),5.87(d,3JH,H＝12.5Hz,1H),4.14(q,3JH,H＝7,1Hz,2H),1.28(t,3JH,H＝7,1Hz,3H)；19F NMR(400MHz,(CD3)2SO):δ-127.39(s,2F)。
方法33：(E)-3-(二氟甲基)-5-乙氧基-3-羟基-戊-4-烯腈(i84)
Figure GDA0004040055220000901
向正丁基锂2.5M(102.9mL，256.7mmol，1当量)于四氢呋喃(435mL)中的冷却的(-70℃)溶液中添加乙腈(13.4mL，256.7mmol，1当量)。形成白色悬浮液且在-70℃下搅拌1.5小时。将(E)-4-乙氧基-1,1-二氟-丁-3-烯-2-酮(i83)(38.5g，256.7mmol，1当量)于四氢呋喃(65mL)中的溶液添加至所述白色悬浮液中(混合物变为橙色溶液)。在-70℃下搅拌混合物1小时并使其缓慢升温至室温。添加水(400mL)。接着，添加乙酸乙酯(600mL)。分离各层且用乙酸乙酯(3×600mL)萃取水层。合并的有机层经硫酸钠干燥且减压蒸发溶剂。在短硅胶垫上，使用环己烷/乙酸乙酯混合物(3:1)作为溶离剂进行过滤，得到呈深橙色油状的所需产物i84(43.4g，88％)。1H NMR(400MHz,(CD3)2SO):δ6.66(d,3JH,H＝12.8Hz,1H),6.20(s,1H),5.79(t,2JH,F＝55.8Hz,1H),4.75(d,3JH,H＝12.8Hz,1H),3.74(q,3JH,H＝7.0Hz,2H),2.88(d,3JH,H＝16.8Hz,1H),2.81(d,3JH,H＝16.8Hz,1H),1.21(t,3JH,H＝7.0Hz,3H)；19F NMR(400MHz,(CD3)2SO):δ-129.32(d,2JF,F＝311.2Hz,1F),-130.05(d,2JF,F＝311.2Hz,1F)。
方法34：4-(二氟甲基)吡啶-2-胺(i65)
Figure GDA0004040055220000902
向(E)-3-(二氟甲基)-5-乙氧基-3-羟基-戊-4-烯腈(i84)(8.1g，42.4mmol，1当量)于乙酸(80mL)中的溶液中添加O-甲基羟胺盐酸盐(Fluorochem，产品编号078603)(10.6g，127.2mmol，3当量)。在50℃下搅拌混合物7小时。将反应混合物冷却至室温并添加氢溴酸的乙酸溶液(33％)(14.2mL，84.8mmol，2当量)。在90℃下搅拌反应混合物隔夜。使反应混合物脱气并放于氮气下。用水浴将反应混合物维持在室温，同时逐份添加锌粉(8.12g，127.2mmol，3当量)。在室温下搅拌反应混合物3小时。经短硅藻土垫过滤混合物且用乙酸乙酯洗涤滤饼。接着减压移除大部分溶剂。添加60mL氢氧化铵水溶液(28％)。用二氯甲烷(3×150mL)萃取水层。合并的有机层经硫酸钠干燥。化合物i65从作为反溶剂的二氯甲烷和庚烷再结晶(在旋转蒸发时溶剂变换)。通过过滤收集呈浅黄色固体状的化合物i65(5.12g，84％)。
方法35：9-[4-氯-6-(3-氧杂-9-氮杂双环[3.3.1]壬-9-基)-1,3,5-三嗪-2-基]-3,7-二氧杂-9-氮杂双环[3.3.1]壬烷(i89)
Figure GDA0004040055220000911
向3-氧杂-9-氮杂双环[3.3.1]壬烷盐酸盐(176mg，1.20mmol，1.05当量)和N,N-二异丙基乙胺(0.42mL，2.40mmol，2.1当量)于1,4-二恶烷(5mL)中的溶液中添加i88(300mg，1.14mmol，1当量)于1,4-二恶烷(1mL)中的溶液。将所得混合物加热3小时(75℃)。接着，添加乙酸乙酯(20mL)和饱和硫酸氢钠水溶液(20mL)。分离各相并用饱和硫酸氢钠水溶液(2×20mL)洗涤有机层。有机层经无水硫酸钠干燥并减压移除溶剂。粗混合物通过自动急骤层析法(SiO2，环己烷/乙酸乙酯2:1至0:1)纯化，得到呈无色固体状的标题化合物i89(297mg，75％)。1H NMR(400MHz,(CD3)2SO):δ4.58(m,1H),4.44(m,1H),4.40(m,1H),4.32(m,1H),4.00-3.97(m,4H),3.94-3.90(m,2H),3.72-3.64(m,6H),2.46(m,1H),1.90-1.70(m,4H),1.53(m,1H)。MS(MALDI):m/z＝368.0([M+H]+)。
制备本发明化合物
化合物1：4-(二氟甲基)-5-(4,6-二吗啉代-1,3,5-三嗪-2-基)吡啶-2-胺(1)
Figure GDA0004040055220000921
根据通用程序1，由起始物质i2和i68获得呈无色固体状的化合物1，产率73％。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ9.02(s,1H),7.65(t,2JH,F＝55Hz,1H),6.83(s,1H),4.85(br s,2H),3.89-3.79(m,8H),3.77-3.72(m,8H)；19F NMR(376MHz,CDCl3):δ-115.9(s,2F)；MS(MALDI):m/z＝393.9([M+H]+)。
化合物2：4-(二氟甲基)-5-(4,6-二吗啉代-1,3,5-三嗪-2-基)嘧啶-2-胺(2)
Figure GDA0004040055220000922
根据通用程序2，由起始物质i2和i71获得呈无色固体状的化合物2，产率74％。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ9.20(s,1H),7.62(t,2JH,F＝54Hz,1H),5.97(br s,2H),3.91-3.68(m,16H)；19F NMR(376MHz,CDCl3):δ-121.5(s,2F)；MS(MALDI):m/z＝395.2([M+H]+)。
化合物3：5-(4-(3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-6-(3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-1,3,5-三嗪-2-基)-4-(二氟甲基)吡啶-2-胺(3)
Figure GDA0004040055220000923
根据通用程序1，由起始物质i1和i68获得呈无色固体状的化合物3，产率75％。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ9.04(s,1H),7.71(t,2JH,F＝55Hz,1H),6.83(s,1H),4.89(br s,2H),4.71-4.64(m,4H),3.79-3.76(m,4H),3.67-3.62(m,4H),2.09-1.98(m,8H)；19F NMR(376MHz,CDCl3):δ-115.4-(-117.3)(m,2F)；MS(MALDI):m/z＝446.3([M+H]+)。
化合物4：5-(4-(3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-6-吗啉代-1,3,5-三嗪-2-基)-4-(二氟甲基)吡啶-2-胺(4)
Figure GDA0004040055220000931
根据通用程序1，由起始物质i12和i68获得呈无色固体状的化合物4，产率57％。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ9.03(s,1H),7.68(m,1H),6.83(s,1H),4.94(br s,2H),4.70-4.65(m,2H),3.93-3.57(m,12H),2.14-1.92(m,4H)；19F NMR(376MHz,CDCl3):δ-116.0-(-116.2)(m,2F)；MS(MALDI):m/z＝420.6([M+H]+)。
化合物5：5-(4-(3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-6-吗啉代-1,3,5-三嗪-2-基)-4-(二氟甲基)嘧啶-2-胺(5)
Figure GDA0004040055220000932
根据通用程序2，由起始物质i71和i12获得呈无色固体状的化合物5，产率50％。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ9.23(s,1H),7.65(t,2JH,F＝54Hz,1H),5.66(br s,2H),4.68(m,2H),3.90-3.61(m,12H),2.13-1.92(4H)；19F NMR(376MHz,CDCl3):δ-120.4-(-121.5)(m,2F)；MS(MALDI):m/z＝420.9([M+H]+)。
化合物6：5-(4,6-双((S)-3-甲基吗啉代)-1,3,5-三嗪-2-基)-4-(二氟甲基)吡啶-2-胺(6)
Figure GDA0004040055220000941
根据通用程序1，由起始物质i3和i68获得呈无色固体状的化合物6，产率79％。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ8.87(s,1H),7.70(t,2JH,F＝55Hz,1H),6.86(s,1H),5.48(br s,2H),4.73-4.72(m,2H),4.41-4.38(m,2H),3.98(dd,JH,H＝11.6,3.8Hz,2H),3.78(d,JH,H＝12Hz,2H),3.67(dd,JH,H＝12,3.2Hz,2H),3.52(td,JH,H＝12,3.0Hz,2H),3.27(td,JH,H＝13,3.8Hz,2H),1.33(d,3JH,H＝6.8Hz,6H)；19F NMR(376MHz,CDCl3):δ-115.4-(-116.2)(m,2F)；MS(MALDI):m/z＝421.9([M+H]+)。
化合物7：5-(4,6-双((S)-3-甲基吗啉代)-1,3,5-三嗪-2-基)-4-(二氟甲基)嘧啶-2-胺(7)
Figure GDA0004040055220000942
根据通用程序2，由起始物质i71和i3获得呈无色固体状的化合物7，产率52％。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ9.24(s,1H),7.66(t,2JH,F＝54Hz,1H),5.77(br s,2H),4.73(br s,2H),4.45-4.32(m,2H),3.98(dd,JH,H＝12,3.6Hz,2H),3.78(d,JH,H＝12Hz,2H),3.67(dd,JH,H＝11,2.8Hz,2H),3.52(td,JH,H＝12,2.8Hz,2H),3.27(td,JH,H＝13,3.2Hz,2H),1.33(d,3JH,H＝6.8Hz,6H)；19F NMR(376MHz,CDCl3):δ-120.5-(-122.7)(m,2F)；MS(MALDI):m/z＝423.3([M+H]+)。
化合物8：(S)-4-(二氟甲基)-5-(4-(3-甲基吗啉代)-6-吗啉代-1,3,5-三嗪-2-基)吡啶-2-胺(8)
Figure GDA0004040055220000951
根据通用程序1，由起始物质i13和i68获得呈无色固体状的化合物8，产率47％。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ9.03(s,1H),7.70(t,2JH,F＝55Hz,1H),6.84(s,1H),4.78(br s,2H),4.75(m,1H),4.42-4.38(m,1H),4.00-3.96(m,1H),3.84-3-66(m,10H),3.55-3.50(m,1H),3.30-3.25(m,1H),1.33(d,3JH,H＝6.8Hz,3H)；19F NMR(376MHz,CDCl3):δ-116.1-(-115.9)(m,2F)；MS(MALDI):m/z＝408.9([M+H]+)。
化合物9：(S)-4-(二氟甲基)-5-(4-(3-甲基吗啉代)-6-吗啉代-1,3,5-三嗪-2-基)嘧啶-2-胺(9)
Figure GDA0004040055220000952
根据通用程序2，由起始物质i71和i13获得呈无色固体状的化合物9，产率60％。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ9.24(s,1H),7.66(t,2JH,F＝54Hz,1H),5.67(br s,2H),4.74(m,1H),4.41-4.38(m,1H),4.00-3.97(m,1H),3.90-3.72(m,9H),3.68-3.36(m,1H),3.56-3.49(m,1H),3.32-3.25(m,1H),1.33(d,3JH,H＝6.9Hz,3H)；19F NMR(376MHz,CDCl3):δ-121.3-(-121.6)(m,2F)；MS(MALDI):m/z＝409.4([M+H]+)。
化合物10：5-(4-(3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-6-((S)-3-甲基吗啉代)-1,3,5-三嗪-2-基)-4-(二氟甲基)吡啶-2-胺(10)
Figure GDA0004040055220000961
根据通用程序1，由起始物质i18和i68获得呈无色固体状的化合物10，产率42％。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ9.04(s,1H),7.69(t,2JH,F＝55Hz,1H),6.84(s,1H),4.85(br s,2H),4.71-4.65(m,3H),4.42-4.39(m,1H),3.98-3.95(m,1H),3.79-3.76(m,3H),3.70-3.65(m,3H),3.56-3.53(m,1H),3.30-3.27(m,1H),2.10-1.99(m,4H),1.33(m,3H)；19F NMR(376MHz,CDCl3):δ-115.9-(-116.2)(m,2F)；MS(MALDI):m/z＝434.2([M+H]+)。
化合物11：5-(4-(3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-6-((S)-3-甲基吗啉代)-1,3,5-三嗪-2-基)-4-(二氟甲基)嘧啶-2-胺(11)
Figure GDA0004040055220000962
根据通用程序2，由起始物质i71和i18获得呈无色固体状的化合物11，产率46％。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ9.25(s,1H),7.68(t,2JH,F＝55Hz,1H),5.81(br s,2H),4.71-4.65(m,3H),4.42-4.38(m,1H),4.00-3.96(m,1H),3.81-3.60(m,6H),3.55-3.50(m,1H),3.31-3.24(m,1H),2.11-2.00(m,4H),1.37-1.28(m,3H)；19F NMR(376MHz,CDCl3):δ-121.5-(-121.7)(m,2F)；MS(MALDI):m/z＝434.6([M+H]+)。
化合物12：4-(二氟甲基)-5-(4-吗啉代-6-(哌嗪-1-基)-1,3,5-三嗪-2-基)吡啶-2-胺(12)
Figure GDA0004040055220000971
根据通用程序1，由起始物质i68和i14获得呈无色固体状的化合物12，产率86％。1H NMR(400MHz,(CD3)2SO):δ8.85(s,1H),7.74(t,2JH,F＝55Hz,1H),6.84(s,2H),6.75(s,1H),3.82-3.70(m,8H),3.69-3.60(m,4H),2.88-2.80(m,4H)；19F NMR(376MHz,(CD3)2SO):δ-115.4(s,2F)；MS(MALDI):m/z＝393.8([M+H]+)。
化合物13：4-(二氟甲基)-5-(4-吗啉代-6-(哌嗪-1-基)-1,3,5-三嗪-2-基)嘧啶-2-胺(13)
Figure GDA0004040055220000972
根据通用程序2，由起始物质i71和i14获得呈无色固体状的化合物13，产率55％。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ9.23(s,1H),7.64(t,2JH,F＝55Hz,1H),5.60(br s,2H),3.83-3.75(m,12H),2.94-2.88(m,4H)；19F NMR(376MHz,CDCl3):δ-111.4(s,2F)；MS(MALDI):m/z＝394.1([M+H]+)。
化合物14：(S)-4-(二氟甲基)-5-(4-(3-甲基吗啉代)-6-(哌嗪-1-基)-1,3,5-三嗪-2-基)吡啶-2-胺(14)
Figure GDA0004040055220000973
根据通用程序1，由起始物质i21和i68获得呈无色固体状的化合物14，产率47％。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ9.02(s,1H),7.67(t,2JH,F＝56Hz,1H),6.84(s,1H),4.90(br s,2H),4.74(s,1H),4.40(d,JH,H＝16Hz,1H),3.98(dd,JH,H＝4.0Hz,12Hz,1H),3.91(m,4H),3.78(d,JH,H＝12Hz,1H),3.68(dd,JH,H＝4.0,12Hz,1H),3.56(t,JH,H＝4.0Hz,1H),3.26(dt,JH,H＝4.0,12Hz,1H),2.99(t,JH,H＝4.0Hz,4H),1.32(d,JH,H＝8.0Hz,3H)；19F NMR(376MHz,CDCl3):δ-115.9(s,2F)；MS(MALDI):m/z＝407.2([M+H]+)。
化合物15：(S)-4-(二氟甲基)-5-(4-(3-甲基吗啉代)-6-(哌嗪-1-基)-1,3,5-三嗪-2-基)嘧啶-2-胺(15)
Figure GDA0004040055220000981
根据通用程序2，由起始物质i71和i21获得呈无色固体状的化合物15，产率30％。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ9.24(s,1H),7.66(t,2JH,F＝56Hz,1H),5.69(br s,2H),4.74(s,1H),4.40(d,JH,H＝16Hz,1H),4.38(dd,JH,H＝4.0,12Hz,1H),3.83(m,4H),3.78(d,JH,H＝12Hz,1H),3.68(dd,JH,H＝4.0,12Hz,1H),3.54(dt,JH,H＝4.0,12Hz,1H),3.28(dt,JH,H＝4.0,12Hz,1H),2.92(t,JH,H＝8.0Hz,4H),1.33(t,JH,H＝8.0Hz,3H)；19F NMR(376MHz,CDCl3):δ-121.4(s,2F)；MS(MALDI):m/z＝408.7([M+H]+)。
化合物16：4-(二氟甲基)-5-(2,6-二吗啉代嘧啶-4-基)吡啶-2-胺(16)
Figure GDA0004040055220000982
根据通用程序1，由起始物质i22和i68获得呈无色固体状的化合物16，产率73％。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.31(s,1H),7.30(t,2JH,F＝55Hz,1H),6.85(s,1H),6.04(s,1H),4.73(br s,2H),3.81-3.72(m,12H),3.65-3.59(m,4H)；19F NMR(376MHz,CDCl3):δ-115.1(s,2F)；MS(MALDI):m/z＝393.3([M+H]+)。
化合物17：4'-(二氟甲基)-2,6-二吗啉代-[4,5'-联嘧啶]-2'-胺(17)
Figure GDA0004040055220000991
根据通用程序2，由起始物质i71和i22获得呈无色固体状的化合物17，产率7％。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ8.60(s,1H),7.11(t,2JH,F＝55Hz,1H),6.02(s,1H),5.46(br s,2H),3.80-3.74(m,12H),3.64-3.60(m,4H)；19F NMR(376MHz,CDCl3):δ-119.5(s,2F)；MS(MALDI):m/z＝394.3([M+H]+)。
化合物18：4-(二氟甲基)-5-(4,6-二吗啉代嘧啶-2-基)吡啶-2-胺(18)
Figure GDA0004040055220000992
根据通用程序1，由起始物质i23和i68获得呈无色固体状的化合物18，产率89％。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.94(s,1H),7.61(t,2JH,F＝55Hz,1H),6.83(s,1H),5.50(s,1H),4.74(br s,2H),3.82-3.78(m,8H),3.61-3.57(m,8H)；19F NMR(376MHz,CDCl3):δ-115.4(s,2F)；MS(MALDI):m/z＝393.3([M+H]+)。
化合物19：4'-(二氟甲基)-4,6-二吗啉代-[2,5'-联嘧啶]-2'-胺(19)
Figure GDA0004040055220000993
根据通用程序2，由起始物质i71和i23获得呈无色固体状的化合物19，产率7％。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ9.16(s,1H),7.58(t,2JH,F＝55Hz,1H),5.75(br s,2H),5.50(s,1H),3.82-3.79(m,8H),3.61-3.58(m,8H)；19F NMR(376MHz,CDCl3):δ-121.1(s,2F)；MS(MALDI):m/z＝395.3([M+H]+)。
化合物20：4-(二氟甲基)-5-(4-吗啉代-6-硫代吗啉代-1,3,5-三嗪-2-基)吡啶-2-胺(20)
Figure GDA0004040055220001001
根据通用程序1，由起始物质i15和i68获得呈无色固体状的化合物20，产率7 7％。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ9.02(s,1H),7.65(t,2JH,F＝55Hz,1H),6.84(s,1H),4.83(br s,2H),4.23-4.07(m,4H),3.90-3.79(m,4H),3.79-3.71(m,4H),2.71-2.62(m,4H)；19F NMR(376MHz,CDCl3):δ-116.0(s,2F)；MS(MALDI):m/z＝410.3([M+H]+)。
化合物21：4-(二氟甲基)-5-(4-吗啉代-6-硫代吗啉代-1,3,5-三嗪-2-基)嘧啶-2-胺(21)
Figure GDA0004040055220001002
根据通用程序2，由起始物质i71和i15获得呈无色固体状的化合物21，产率70％。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ9.21(s,1H),7.60(t,2JH,F＝54Hz,1H),5.90(br s,2H),4.22-4.06(m,4H),3.91-3.78(m,4H),3.78-3.71(m,4H),2.71-2.62(m,4H)；19F NMR(376MHz,CDCl3):δ-120.5-(-121.5)(m,2F)；MS(MALDI):m/z＝411.2([M+H]+)。
化合物22：5-(6-(3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-2-(3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)嘧啶-4-基)-4-(二氟甲基)吡啶-2-胺(22)
Figure GDA0004040055220001011
根据通用程序1，由起始物质i24和i68获得呈无色固体状的化合物22，产率61％。1HNMR(400MHz,(CD3)2SO):δ8.34(s,1H),7.55(t,2JH,F＝55Hz,1H),6.76(s,1H),6.60(br s,2H),6.36(s,1H),4.64-4.47(m,4H),3.67-3.49(m,4H),3.56-3.49(m,4H),1.98-1.79(m,8H)；19FNMR(376MHz,(CD3)2SO):δ-114.9-(-115.2)(m,2F)；MS(MALDI):m/z＝445.3([M+H]+)。
化合物23：5-(2-(3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-6-吗啉代嘧啶-4-基)-4-(二氟甲基)吡啶-2-胺(23)
Figure GDA0004040055220001012
根据通用程序1，由起始物质i29和i68获得呈无色固体状的化合物23，产率54％。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.30(s,1H),7.30(t,2JH,F＝55Hz,1H),6.84(s,1H),6.04(s,1H),4.85(br s,2H),4.62(br s,2H),3.82-3.74(m,6H),3.65-3.56(m,6H),2.09-2.00(m,2H),2.00-1.91(m,2H)；19F NMR(376MHz,CDCl3):δ-115.2-(-116.2)(m,2F)；MS(MALDI):m/z＝419.0([M+H]+)。
化合物24：2-(3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-4’-(二氟甲基)-6-吗啉代-[4,5’-联嘧啶]-2’-胺(24)
Figure GDA0004040055220001013
根据通用程序2，由起始物质i29和i71获得呈无色固体状的化合物24，产率72％。1H NMR(400MHz,(CD3)2SO):δ8.71(s,1H),7.35(s,2H),7.32(t,2JH,F＝54Hz,1H),6.45(s,1H),4.54(br s,2H),3.71-3.50(m,12H),1.95-1.78(m,4H)；19F NMR(376MHz,(CD3)2SO):δ-119.2(s,2F)；MS(MALDI):m/z＝420.6([M+H]+)。
化合物25：5-(2,6-双((S)-3-甲基吗啉代)嘧啶-4-基)-4-(二氟甲基)吡啶-2-胺(25)
Figure GDA0004040055220001021
根据通用程序1，由起始物质i25和i68获得呈无色固体状的化合物25，产率57％。1H NMR(400MHz,(CD3)2SO):δ8.31(s,1H),7.52(t,2JH,F＝55Hz,1H),6.76(s,1H),6.59(brs,2H),6.30(s,1H),4.60-4.50(m,1H),4.44-4.33(m,1H),4.24-4.15(m,1H),4.12-4.04(m,1H),3.94-3.83(m,2H),3.74-3.64(m,2H),3.59-3.51(m,2H),3.45-3.35(m,2H),3.14-3.02(m,2H),1.18(t,3JH,H＝7.2Hz,6H)；19F NMR(376MHz,(CD3)2SO):δ-113.7-(-115.9)(m,2F)；MS(MALDI):m/z＝421.1([M+H]+)。
化合物26：4’-(二氟甲基)-2,6-双((S)-3-甲基吗啉代)-[4,5’-联嘧啶]-2’-胺(26)
Figure GDA0004040055220001022
根据通用程序2，由起始物质i25和i71获得呈无色固体状的化合物26，产率56％。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.60(s,1H),7.14(t,2JH,F＝54Hz,1H),5.98(s,1H),5.48(br s,2H),4.71-4.62(m,1H),4.34-4.23(m,2H),4.08-3.92(m,3H),3.83-3.65(m,4H),3.61-3.49(m,2H),3.25(dt,2JH,H＝13Hz,3JH,H＝3.6Hz,2H),1.33-1.27(m,6H)；19F NMR(376MHz,CDCl3):δ-119.5(s,1F),119.7(m,1F)；MS(MALDI):m/z＝422.2([M+H]+)。
化合物27：(S)-4-(二氟甲基)-5-(6-(3-甲基吗啉代)-2-吗啉代嘧啶-4-基)吡啶-2-胺(27)
Figure GDA0004040055220001031
根据通用程序1，由起始物质i30和i68获得呈无色固体状的化合物27，产率74％。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.31(s,1H),7.30(t,2JH,F＝55Hz,1H),6.85(s,1H),6.02(s,1H),4.75(br s,2H),4.35-4.25(m,1H),4.06-3.96(m,2H),3.83-3.69(m,10H),3.58(dt,2JH,H＝12Hz,3JH,H＝3.2Hz,1H),3.25(dt,2JH,H＝13Hz,3JH,H＝3.8Hz,1H),1.31(d,3JH,H＝6.8Hz,3H)；19F NMR(376MHz,CDCl3):δ-114.9-(-115.0)(m,2F)；MS(MALDI):m/z＝407.1([M+H]+)。
化合物28：(S)-4’-(二氟甲基)-6-(3-甲基吗啉代)-2-吗啉代-[4,5’-联嘧啶]-2’-胺(28)
Figure GDA0004040055220001032
根据通用程序2，由起始物质i30和i71获得呈无色固体状的化合物28，产率53％。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.60(s,1H),7.13(t,2JH,F＝54Hz,1H),6.01(s,1H),5.47(br s,2H),4.71-4.63(m,1H),4.31(dd,2JH,H＝14Hz,3JH,H＝2.4Hz,1H),3.97(dd,2JH,H＝11Hz,3JH,H＝3.4Hz,1H),3.79(t,3JH,H＝4.6Hz,4H),3.72-3.66(m,2H),3.65-3.58(m,3H),3.58-3.50(m,2H),3.30-3.21(m,1H),1.30(d,3JH,H＝6.8Hz,3H)；19F NMR(376MHz,CDCl3):δ-119.7(brs,2F)；MS(MALDI):m/z＝408.9([M+H]+)。
化合物29：5-(4-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)-6-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)-1,3,5-三嗪-2-基)-4-(二氟甲基)吡啶-2-胺(29)
Figure GDA0004040055220001041
根据通用程序1，由起始物质i68和i81获得呈无色固体状的化合物29，产率89％。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ9.03(s,1H),7.69(t,2JH,F＝55Hz,1H),6.83(s,1H),4.85(br s,2H),4.50-4.24(m,8H),3.28-3.12(m,4H),1.94(br s,4H),1.86-1.71(m,4H)；19F NMR(376MHz,CDCl3):δ-115.1-(-117.2)(m,2F)；MS(MALDI):m/z＝446.3([M+H]+)。
化合物30：5-[4,6-双(2,2-二甲基吗啉-4-基)-1,3,5-三嗪-2-基]-4-(二氟甲基)吡啶-2-胺(30)
Figure GDA0004040055220001042
根据通用程序1，由起始物质i68和i80获得呈无色固体状的化合物30，产率63％。1H NMR(400MHz,(CD3)2SO):δ8.86(s,1H),7.71(t,2JH,F＝55Hz,1H),6.84(br s,2H),6.76(s,1H),3.81-3.56(m,12H),1.14(s,12H)；MS(MALDI):m/z＝450.0([M+H]+)。
化合物31：(S)-4-(二氟甲基)-5-(2-(3-甲基吗啉代)-6-吗啉代嘧啶-4-基)吡啶-2-胺(31)
Figure GDA0004040055220001051
根据通用程序1，由起始物质i28和i68获得呈无色固体状的化合物31，产率58％。1H NMR(400MHz,(CD3)2SO):δ8.31(s,1H),7.52(t,2JH,F＝55Hz,1H),6.74(s,1H),6.59(brs,2H),6.35(s,1H),4.59-4.51(m,1H),4.22-4.14(m,1H),3.91-3.84(m,1H),3.72-3.50(m,10H),3.44-3.35(m,1H),3.14-3.03(m,1H),1.16(d,3JH,H＝6.7Hz,3H)；19F NMR(376MHz,(CD3)2SO):δ-113.7-(-115.3)(m,2F)；MS(MALDI):m/z＝407.1([M+H]+)。
化合物32：(S)-4’-(二氟甲基)-2-(3-甲基吗啉代)-6-吗啉代-[4,5’-联嘧啶]-2’-胺(32)
Figure GDA0004040055220001052
根据通用程序2，由起始物质i28和i71获得呈无色固体状的化合物32，产率63％。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.60(s,1H),7.13(t,2JH,F＝54Hz,1H),5.99(s,1H),5.46(br s,2H),4.34-4.25(m,1H),4.06-3.97(m,2H),3.82-3.68(m,10H),3.58(dt,2JH,H＝12Hz,3JH,H＝3.2Hz,1H),3.26(dt,2JH,H＝13Hz,3JH,H＝3.7Hz,1H),1.31(d,3JH,H＝6.8Hz,3H)；19F NMR(376MHz,(CD3)2SO):δ-119.5(s,2F)；MS(MALDI):m/z＝408.7([M+H]+)。
化合物33：4-(二氟甲基)-5-[4-[(2S,6R)-2,6-二甲基吗啉-4-基]-6-[(3R)-3-甲基吗啉-4-基]-1,3,5-三嗪-2-基]吡啶-2-胺(33)
Figure GDA0004040055220001061
根据通用程序1，由起始物质i68和i82获得呈无色固体状的化合物33，产率71％。1H NMR(400MHz,(CD3)2SO):δ8.87(s,1H),7.74(t,2JH,F＝55Hz,1H),6.83(br s,2H),6.76(s,1H),4.71-4.62(m,1H),4.45-4.34(m,2H),4.31-4.09(m,1H),3.90(m,1H),3.71(m,1H),3.55(m,3H),3.38(m,1H),3.13(m,1H),2.55(m,2H),1.20(d,3JH,H＝6.9Hz,3H),1.19(d,3JH,H＝6.9Hz,6H)；MS(MALDI):m/z＝436.1([M+H]+)。
化合物34：5-[4,6-双[(2R,6S)-2,6-二甲基吗啉-4-基]-1,3,5-三嗪-2-基]-4-(二氟甲基)吡啶-2-胺(34)
Figure GDA0004040055220001062
根据通用程序1，由起始物质i68和i79获得呈无色固体状的化合物34，产率75％。1H NMR(400MHz,(CD3)2SO):δ8.86(s,1H),7.71(t,2JH,F＝55Hz,1H),6.83(br s,2H),6.76(s,1H),4.64-4.46(m,4H),3.60-3.48(m,4H),2.63(m,4H),1.14(m,12H)；MS(MALDI):m/z＝450.0([M+H]+)。
化合物37：5-[4,6-双(3,7-二氧杂-9-氮杂双环[3.3.1]壬-9-基)-1,3,5-三嗪-2-基]-4-(二氟甲基)吡啶-2-胺(37)
Figure GDA0004040055220001063
根据通用程序1，由起始物质i7和i68获得呈无色固体状的化合物37，产率39％。1HNMR(400MHz,(CD3)2SO):δ8.85(s,1H),7.68(t,3JH,F＝55Hz,1H),6.87(br s,2H),6.74(s,1H),4.51(br s,2H),4.45(br s,2H),4.07-3.93(m,8H),3.79-3.67(m,8H)；19F NMR(376MHz,(CD3)2SO):δ-115.8(s,2F)；MS(MALDI):m/z＝478.1([M+H]+)。
化合物38：4-(二氟甲基)-5-[4-(3,7-二氧杂-9-氮杂双环[3.3.1]壬-9-基)-6-(3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-1,3,5-三嗪-2-基]吡啶-2-胺(38)
Figure GDA0004040055220001071
根据通用程序1，由起始物质i35和i68获得呈无色固体状的化合物38，产率67％。1H NMR(400MHz,(CD3)2SO):δ8.87(s,1H),7.73(t,3JH,F＝55Hz,1H),6.87(br s,2H),6.75(s,1H),4.70-4.54(m,2H),4.53-4.43(m,2H),4.05-3.97(m,4H),3.79-3.67(m,4H),3.63-3.55(m,4H)2.00-1.83(m,4H)；19F NMR(376MHz,(CD3)2SO):δ-115.8(s,1F),-115.9(s,1F)；MS(MALDI):m/z＝462.1([M+H]+)。
化合物39：5-[4,6-双(3,3-二甲基吗啉-4-基)-1,3,5-三嗪-2-基]-4-(二氟甲基)吡啶-2-胺(39)
Figure GDA0004040055220001072
根据通用程序1，由起始物质i4和i68获得呈无色固体状的化合物39，产率28％。1HNMR(400MHz,(CD3)2SO):δ8.78(s,1H),7.70(t,2JH,F＝55Hz,1H),6.82(br s,2H),6.77(s,1H),3.87-3.75(m,8H),3.45(br s,4H),1.49(s,12H)；19F NMR(376MHz,(CD3)2SO):δ-114.9-(-115.1)(m,2F)；MS(MALDI):m/z＝450.1([M+H]+)。
化合物40：5-[4,6-双[(3R,5S)-3,5-二甲基吗啉-4-基]-1,3,5-三嗪-2-基]-4-(二氟甲基)吡啶-2-胺(40)
Figure GDA0004040055220001081
根据通用程序1，由起始物质i6和i68获得呈无色固体状的化合物40，产率42％。1HNMR(400MHz,(CD3)2SO):δ8.90(s,1H),7.82(t,2JH,F＝55Hz,1H),6.84(br s,2H),6.77(s,1H),4.59-4.43(m,4H),3.82-3.73(m,4H),3.60-3.51(m,4H),1.29(d,2JH,H＝6.9Hz,12H)；19F NMR(376MHz,(CD3)2SO):δ-114.9-(-115.0)(m,2F)；MS(MALDI):m/z＝450.2([M+H]+)。
化合物41：5-[4,6-双[(3R)-3-甲基吗啉-4-基]-1,3,5-三嗪-2-基]-4-(二氟甲基)吡啶-2-胺(41)
Figure GDA0004040055220001082
根据通用程序1，由起始物质i5和i68获得呈无色固体状的化合物41，产率98％。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ9.04(s,1H),7.70(t,2JH,F＝52.0Hz,1H),6.84(s,1H),4.88(br s,2H),4.77-4.72(m,2H),4.41(d,2JH,H＝12.0Hz,2H),3.98(dd,2JH,H＝12.0Hz,3JH,H＝4.0Hz,2H),3.78(d,2JH,H＝12.0Hz,2H),3.68(dd,2JH,H＝12.0Hz,3JH,H＝4.0Hz,2H),3.53(dt,2JH,H＝12.0Hz,3JH,H＝4.0Hz,2H),3.28(dt,2JH,H＝12.0Hz,3JH,H＝4.0Hz,2H),1.33(d,2JH,H＝8.0Hz,6H)；19F NMR(376MHz,CDCl3):δ-115.9(s,1F),-116.0(s,1F)；MS(MALDI):m/z＝421.7([M+H]+)。
化合物42：4-(二氟甲基)-5-[4-(3,3-二甲基吗啉-4-基)-6-吗啉代-1,3,5-三嗪-2-基]吡啶-2-胺(42)
Figure GDA0004040055220001091
根据通用程序1，由起始物质i16和i68获得呈无色固体状的化合物42，产率35％。1H NMR(400MHz,(CD3)2SO):δ8.83(s,1H),7.73(t,2JH,F＝55Hz,1H),6.84(br s,2H),6.76(s,1H),3.85-3.76(m,4H),3.76-3.63(m,8H),3.45(br s,2H),1.49(s,6H)；19F NMR(376MHz,(CD3)2SO):δ-116(s,2F)；MS(MALDI):m/z＝422.1([M+H]+)。
化合物44：4-(二氟甲基)-5-[4-[(3R,5S)-3,5-二甲基吗啉-4-基]-6-[(3R)-3-甲基吗啉-4-基]-1,3,5-三嗪-2-基]吡啶-2-胺(44)
Figure GDA0004040055220001092
根据通用程序1，由起始物质i37和i68获得呈无色固体状的化合物44，75％产率。1H NMR(400MHz,(CD3)2SO):δ8.89(s,1H),7.79(t,2JH,F＝55Hz,1H),6.83(br s,2H),6.76(s,1H),4.65(br s,1H),4.50(br s,2H),4.37-4.25(m,1H),3.93(dd,3JH,H＝11Hz,3JH,H＝3.2Hz,1H),3.79-3.67(m,3H),3.59-3.51(m,3H),3.45-3.36(m,1H),3.22-3.11(m,1H),1.30(d,3JH,H＝6.7Hz,6H),1.24(d,3JH,H＝6.7Hz,3H)；19F NMR(376MHz,(CD3)2SO):δ-115.0(br s,2F)；MS(MALDI):m/z＝436.1([M+H]+)。
化合物45：4-(二氟甲基)-5-[4-(3,3-二甲基吗啉-4-基)-6-[(3R)-3-甲基吗啉-4-基]-1,3,5-三嗪-2-基]吡啶-2-胺(45)
Figure GDA0004040055220001101
根据通用程序1，由起始物质i38和i68获得呈无色固体状的化合物45，产率71％。1H NMR(400MHz,(CD3)2SO):δ8.84(s,1H),7.74(t,2JH,F＝55Hz,1H),6.83(br s,2H),6.76(s,1H),4.58(br s,1H),4.31-4.19(m,1H),3.93(dd,2JH,H＝12Hz,3JH,H＝3.9Hz,1H),3.84-3.81(m,4H),3.76-3.69(m,1H),3.58(dd,2JH,H＝11Hz,3JH,H＝3.2Hz,1H),3.46-3.38(m,3H),3.23-3.13(m,1H),1.50(br s,6H),1.23(d,3JH,H＝6.7Hz,3H)；19F NMR(376MHz,(CD3)2SO):δ-114.8-(-115.5)(m,2F)；MS(MALDI):m/z＝436.0([M+H]+)。
化合物46：4-(二氟甲基)-5-[4-[(3R)-3-(甲氧基甲基)吗啉-4-基]-6-[(3R)-3-甲基吗啉-4-基]-1,3,5-三嗪-2-基]吡啶-2-胺(46)
Figure GDA0004040055220001102
根据通用程序1，由起始物质i39和i68获得呈无色固体状的化合物46，产率67％。1H NMR(400MHz,(CD3)2SO):δ8.87(s,1H),7.77(t,2JH,F＝55Hz,1H),6.84(br s,2H),6.76(s,1H),4.67(br s,2H),4.44-4.24(m,2H),3.96-3.83(m,3H),3.75-3.63(m,2H),3.60-3.36(m,5H),3.31(s,3H),3.21-3.04(m,2H),1.23(d,3JH,H＝6.7Hz,3H)；19F NMR(376MHz,(CD3)2SO):δ-115.0(br s,2F)；MS(MALDI):m/z＝452.3([M+H]+)。
化合物47：4-(二氟甲基)-5-[4-(3,7-二氧杂-9-氮杂双环[3.3.1]壬-9-基)-6-[(3R)-3-甲基吗啉-4-基]-1,3,5-三嗪-2-基]吡啶-2-胺(47)
Figure GDA0004040055220001111
根据通用程序1，由起始物质i36和i68获得呈无色固体状的化合物47，产率85％。1H NMR(400MHz,(CD3)2SO):δ8.86(s,1H),7.72(t,2JH,F＝55Hz,1H),6.84(br s,2H),6.75(s,1H),4.64(br s,1H),4.53-4.42(m,2H),4.37-4.25(m,1H),4.05-3.96(m,4H),3.92-3.84(m,1H),3.77-3.66(m,5H),3.60-3.52(m,1H),3.44-3.35(m,1H),3.22-3.10(m,1H),1.23(d,3JH,H＝6.7Hz,3H)；19F NMR(376MHz,(CD3)2SO):δ-114.9-(-117.1)(m,2F)；MS(MALDI):m/z＝450.0([M+H]+)。
化合物50：4-(二氟甲基)-5-[4-[(3R)-3-甲基吗啉-4-基]-6-(3-氧杂-6-氮杂双环[3.1.1]庚-6-基)-1,3,5-三嗪-2-基]吡啶-2-胺(50)
Figure GDA0004040055220001112
根据通用程序1，由起始物质i40和i68获得呈无色固体状的化合物50，产率52％。1H NMR(400MHz,(CD3)2SO):δ8.90(s,1H),7.82(t,2JH,F＝55Hz,1H),6.87(br s,2H),6.76(s,1H),4.55-4.51(m,1H),4.34-4.14(m,3H),4.12-4.25(m,2H),3.92-3.80(m,1H),3.76-3.68(m,3H),3.55-3.51(m,1H),3.38(m,1H),3.20-3.13(m,1H),2.68(m,1H),1.78(m,1H),1.20(d,3JH,H＝6.9Hz,3H)；19F NMR(376MHz,(CD3)2SO):δ-115.0(br s,2F)；MS(MALDI):m/z＝420.6([M+H]+)。
化合物51：4-(二氟甲基)-5-[4-[(3R)-3-甲基吗啉-4-基]-6-(6-氧杂-3-氮杂双环[3.1.1]庚-3-基)-1,3,5-三嗪-2-基]吡啶-2-胺(51)
Figure GDA0004040055220001121
根据通用程序1，由起始物质i41和i68获得呈无色固体状的化合物51，产率36％。1H NMR(400MHz,(CD3)2SO):δ8.99(s,1H),7.89(t,2JH,F＝55Hz,1H),6.84(br s,2H),6.77(s,1H),4.69(m,3H),4.37(m,1H),3.91-3.85(m,3H),3.75-3.53(m,4H),3.42-3.35(m,1H),3.22-3.15(m,1H),3.12-3.08(m,1H),1.85(m,1H),1.24(d,3JH,H＝6.9Hz,3H)；19F NMR(376MHz,(CD3)2SO):δ-116.0(br s,2F)；MS(MALDI):m/z＝420.6([M+H]+)。
化合物52：4-(二氟甲基)-5-[4-[(3R)-3-甲基吗啉-4-基]-6-[(1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚-5-基]-1,3,5-三嗪-2-基]吡啶-2-胺(52)
Figure GDA0004040055220001122
根据通用程序1，由起始物质i42和i68获得呈无色固体状的化合物52，产率44％(1:1旋转异构体混合物)。1H NMR(400MHz,(CD3)2SO):δ8.89(m,1H),7.77(m,1H),6.84(br s,2H),6.76(s,1H),5.02-4.97(m,1H),4.68-4.66(m,2H),4.31(m,1H),3.89-3.85(m,1H),3.79-3.57(m,3H),3.57-3.44(m,4H),3.22(m,1H),1.90-1.83(m,2H),1.21(d,3JH,H＝6.9Hz,3H)；19FNMR(376MHz,(CD3)2SO):δ-115.5(br s,2F)；MS(MALDI):m/z＝420.2([M+H]+)。
化合物53：4-(二氟甲基)-5-[4-[(3R)-3-甲基吗啉-4-基]-6-[(1S,4S)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚-5-基]-1,3,5-三嗪-2-基]吡啶-2-胺(53)
Figure GDA0004040055220001131
根据通用程序1，由起始物质i43和i68获得呈无色固体状的化合物53，产率53％(1:1旋转异构体混合物)。1H NMR(400MHz,(CD3)2SO):δ8.90(m,1H),7.77(m,1H),6.84(brs,2H),6.76(s,1H),5.02-4.96(m,1H),4.68-4.62(m,2H),3.90(m,1H),3.80(m,1H),3.70(m,2H),3.57(m,2H),3.45(m,3H),3.20(m,1H),1.90-1.83(m,2H),1.21(d,3JH,H＝6.9Hz,3H)；19F NMR(376MHz,(CD3)2SO):δ-115.0(br s,2F)；MS(MALDI):m/z＝420.2([M+H]+)。
化合物54：5-[4,6-双[(3R)-3-乙基吗啉-4-基]-1,3,5-三嗪-2-基]-4-(二氟甲基)吡啶-2-胺(54)
Figure GDA0004040055220001132
根据通用程序1，由起始物质i8和i68获得呈无色固体状的化合物54，产率61％。1HNMR(400MHz,(CD3)2SO):δ8.87(s,1H),7.77(t,2JH,F＝55Hz,1H),6.83(br s,2H),6.76(s,1H),4.47(m,4H),3.89-3.81(m,4H),3.51-3.34(m,4H),3.12(m,2H),1.71(m,4H),0.86(m,6H)。19F NMR(376MHz,(CD3)2SO):δ-115.0(br s,2F)；MS(MALDI):m/z＝450.3([M+H]+)。
化合物55：5-[4,6-双(8-氧杂-5-氮杂螺[3.5]壬-5-基)-1,3,5-三嗪-2-基]-4-(二氟甲基)吡啶-2-胺(55)
Figure GDA0004040055220001133
根据通用程序1，由起始物质i9和i68获得呈无色固体状的化合物55，产率59％。1HNMR(400MHz,(CD3)2SO):δ8.74(s,1H),7.65(t,2JH,F＝55Hz,1H),6.81(br s,2H),6.75(s,1H),3.68(m,8H),3.49(m,4H),2.46-2.38(m,4H),2.25-2.16(m,4H),1.72-1.66(m,4H)；19FNMR(376MHz,(CD3)2SO):δ-115.5(br s,2F)；MS(MALDI):m/z＝474.3([M+H]+)。
化合物56：5-[4,6-双[(3R)-3-异丙基吗啉-4-基]-1,3,5-三嗪-2-基]-4-(二氟甲基)吡啶-2-胺(56)
Figure GDA0004040055220001141
根据通用程序1，由起始物质i10和i68获得呈无色固体状的化合物56，产率59％。1H NMR(400MHz,(CD3)2SO):δ8.87(s,1H),7.76(t,2JH,F＝55Hz,1H),6.82(br s,2H),6.76(s,1H),4.50(m,2H),4.29(m,2H),4.02-3.84(m,4H),3.40(m,4H),3.08(m,2H),2.34(m,2H),1.02(m,6H),0.77(m,6H)；19F NMR(376MHz,(CD3)2SO):δ-115.0(br s,2F)；MS(MALDI):m/z＝478.4([M+H]+)。
化合物66：4-(二氟甲基)-5-[4-(3,3-二甲基吗啉-4-基)-6-[(3R,5S)-3,5-二甲基吗啉-4-基]-1,3,5-三嗪-2-基]吡啶-2-胺(66)
Figure GDA0004040055220001142
根据通用程序1，由起始物质i55和i68获得呈无色固体状的化合物66，产率61％。1H NMR(400MHz,(CD3)2SO):δ8.87(s,1H),7.77(t,2JH,F＝55Hz,1H),6.83(br s,2H),6.76(s,1H),4.46(m,2H),3.81-3.77(m,6H),3.55(m,2H),3.44(m,2H),1.49(s,6H),1.28(d,3JH,H＝6.9Hz,6H)；19F NMR(376MHz,(CD3)2SO):δ-115.0(br s,2F)；MS(MALDI):m/z＝450.4([M+H]+)。
化合物67：4-(二氟甲基)-5-[4-(3,3-二甲基吗啉-4-基)-6-[(3R)-3-(甲氧基甲基)吗啉-4-基]-1,3,5-三嗪-2-基]吡啶-2-胺(67)
Figure GDA0004040055220001151
根据通用程序1，由起始物质i56和i68获得呈无色固体状的化合物67，产率37％。1H NMR(400MHz,(CD3)2SO):δ8.84(s,1H),7.89(t,2JH,F＝55Hz,1H),6.85(br s,2H),6.76(s,1H),4.60(m,1H),4.31(m,1H),3.92(m,2H),3.83(m,4H),3.65(m,1H),3.51-3.41(m,5H),3.28(s,3H),3.12(m,1H),1.49(s,3H),1.48(s,3H)；19F NMR(376MHz,(CD3)2SO):δ-115.5(br s,2F)；MS(MALDI):m/z＝466.4([M+H]+)。
化合物68：[(3R)-4-[4-[6-胺基-4-(二氟甲基)-3-吡啶基]-6-(3,3-二甲基吗啉-4-基)-1,3,5-三嗪-2-基]吗啉-3-基]甲醇(68)
Figure GDA0004040055220001152
根据通用程序1，由起始物质i57和i68获得呈无色固体状的化合物68，产率58％。1H NMR(400MHz,(CD3)2SO):δ8.83(s,1H),7.77(m,1H),6.84(br s,2H),6.76(s,1H),4.91(m,1H),4.35(m,2H),4.05(m,1H),3.97-3.70(m,6H),3.54-3.38(m,5H),3.12(m,1H),1.49(s,3H),1.48(s,3H)；19F NMR(376MHz,(CD3)2SO):δ-115.5(br s,2F)；MS(MALDI):m/z＝452.2([M+H]+)。
化合物69：4-(二氟甲基)-5-[4-(3,3-二甲基吗啉-4-基)-6-(3,7-二氧杂-9-氮杂双环[3.3.1]壬-9-基)-1,3,5-三嗪-2-基]吡啶-2-胺(69)
Figure GDA0004040055220001161
根据通用程序1，由起始物质i54和i68获得呈无色固体状的化合物69，产率57％。1H NMR(400MHz,(CD3)2SO):δ8.83(s,1H),7.69(t,2JH,F＝55Hz,1H),6.85(br s,2H),6.76(s,1H),4.47-4.37(m,2H),4.01(m,4H),3.80-3.71(m,8H),3.45(m,2H),1.48(s,6H)；19FNMR(376MHz,(CD3)2SO):δ-115.7(br s,2F)；MS(MALDI):m/z＝464.3([M+H]+)。
化合物70：5-[4-(4-环丙基哌嗪-1-基)-6-(3,3-二甲基吗啉-4-基)-1,3,5-三嗪-2-基]-4-(二氟甲基)吡啶-2-胺(70)
Figure GDA0004040055220001162
根据通用程序1，由起始物质i58和i68获得呈无色固体状的化合物70，产率12％。1H NMR(400MHz,(CD3)2SO):δ8.82(s,1H),7.72(t,2JH,F＝55Hz,1H),6.83(br s,2H),6.76(s,1H),3.82(m,4H),3.71(m,4H),3.44(m,2H),2.58(m,4H),1.64(m,1H),1.44(s,6H),0.45(m,2H),0.36(m,2H)；19F NMR(376MHz,(CD3)2SO):δ-115.4(br s,2F)；MS(MALDI):m/z＝460.4([M]+)。
化合物71：4-(二氟甲基)-5-[4-(3,3-二甲基吗啉-4-基)-6-[4-(2-甲氧基乙基)哌嗪-1-基]-1,3,5-三嗪-2-基]吡啶-2-胺(71)
Figure GDA0004040055220001163
根据通用程序1，由起始物质i59和i68获得呈无色固体状的化合物71，产率42％。1H NMR(400MHz,(CD3)2SO):δ8.82(s,1H),7.73(t,2JH,F＝55Hz,1H),6.83(br s,2H),6.76(s,1H),3.88-3.69(m,10H),3.47-3.44(m,4H),3.24(m,3H),2.52-2.45(m,4H),1.44(s,6H)；19F NMR(376MHz,(CD3)2SO):δ-115.4(br s,2F)；MS(MALDI):m/z＝478.4([M]+)。
化合物77：[(3R)-4-[4-[6-胺基-4-(二氟甲基)-3-吡啶基]-6-[(3R)-3-甲基吗啉-4-基]-1,3,5-三嗪-2-基]吗啉-3-基]甲醇(77)
Figure GDA0004040055220001171
根据通用程序1，由起始物质i53和i68获得呈无色固体状的化合物77，产率31％。1H NMR(400MHz,(CD3)2SO):δ8.88(s,1H),7.78(t,2JH,F＝55Hz,1H),6.84(br s,2H),6.76(s,1H),4.96(m,1H),4.73(m,1H),4.58-4.24(m,3H),4.05(m,1H),3.90(m,2H),3.72(m,2H),3.59(m,1H),3.51-3.36(m,4H),3.23-3.02(m,2H),1.23(d,3JH,H＝6.9Hz,3H)；MS(MALDI):m/z＝438.3([M+H]+)。
化合物78：4-(二氟甲基)-5-[4-[(3R,5R)-3,5-二甲基吗啉-4-基]-6-[(3R)-3-甲基吗啉-4-基]-1,3,5-三嗪-2-基]吡啶-2-胺(78)
Figure GDA0004040055220001172
根据通用程序1，由起始物质i85和i68获得呈无色固体状的化合物78，产率71％。1H NMR(400MHz,(CD3)2SO):δ8.90(s,1H),7.82(t,2JH,F＝55Hz,1H),6.84(br s,2H),6.76(s,1H),4.66(m,1H),4.32(m,3H),4.15-4.11(m,2H),3.92(m,1H),3.70(m,3H),3.57(m,1H),3.40(m,1H),3.18(m,1H),1.37(m,6H),1.24(d,3JH,H＝6.9Hz,3H)；19F NMR(376MHz,(CD3)2SO):δ-114.9(br s,2F)；MS(MALDI):m/z＝435.4([M]+)。
化合物79：4-(二氟甲基)-5-[4-[(3S,5S)-3,5-二甲基吗啉-4-基]-6-[(3R)-3-甲基吗啉-4-基]-1,3,5-三嗪-2-基]吡啶-2-胺(79)
Figure GDA0004040055220001181
根据通用程序1，由起始物质i86和i68获得呈无色固体状的化合物79，产率65％。1H NMR(400MHz,(CD3)2SO):δ8.91(s,1H),7.82(t,2JH,F＝55Hz,1H),6.85(br s,2H),6.76(s,1H),4.66(m,1H),4.32(m,3H),4.15-4.11(m,2H),3.92(m,1H),3.70(m,3H),3.57(m,1H),3.40(m,1H),3.19(m,1H),1.37(m,6H),1.24(d,3JH,H＝6.9Hz,3H)；19F NMR(376MHz,(CD3)2SO):δ-114.9(br s,2F)；MS(MALDI):m/z＝434.3([M]+)。
化合物80：4-(二氟甲基)-5-[4-吗啉代-6-(3-氧杂-9-氮杂双环[3.3.1]壬-9-基)-1,3,5-三嗪-2-基]吡啶-2-胺(80)
Figure GDA0004040055220001182
根据通用程序1，由起始物质i87和i68获得呈无色固体状的化合物80，产率57％。1H NMR(400MHz,(CD3)2SO):δ8.85(s,1H),7.73(t,2JH,F＝55Hz,1H),6.84(br s,2H),6.75(s,1H),4.61-4.57(m,2H),3.95(m,2H),3.75-3.65(m,10H),2.48(m,1H),1.88-1.72(m,4H),1.57(m,1H)；19F NMR(376MHz,(CD3)2SO):δ-115.4(m,2F)；MS(MALDI):m/z＝434.3([M+H]+)。
化合物82：4-(二氟甲基)-5-[4-(3,7-二氧杂-9-氮杂双环[3.3.1]壬-9-基)-6-(3-氧杂-9-氮杂双环[3.3.1]壬-9-基)-1,3,5-三嗪-2-基]吡啶-2-胺(82)
Figure GDA0004040055220001191
根据通用程序1，由起始物质i89和i68获得呈无色固体状的化合物82，产率51％。1H NMR(400MHz,(CD3)2SO):δ8.84(s,1H),7.70(t,2JH,F＝55Hz,1H),6.85(br s,2H),6.75(s,1H),4.62(m,1H),4.54(m,1H),4.52(m,1H),4.44(m,1H),4.04-3.92(m,6H),3.75-3.62(m,6H),2.45(m,1H),1.89-1.75(m,4H),1.57(m,1H)；19F NMR(376MHz,(CD3)2SO):δ-115.7(m,2F)；MS(MALDI):m/z＝476.2([M+H]+)。
化合物83：5-[4,6-双[(3S,5S)-3,5-二甲基吗啉-4-基]-1,3,5-三嗪-2-基]-4-(二氟甲基)吡啶-2-胺(83)
Figure GDA0004040055220001192
根据通用程序1，由起始物质i90和i68获得呈无色固体状的化合物83，产率56％。1H NMR(400MHz,(CD3)2SO):δ8.92(s,1H),7.87(t,2JH,F＝55Hz,1H),6.84(br s,2H),6.77(s,1H),4.32(m,4H),4.14(m,4H),3.70(m,4H),1.39(d,3JH,H＝6.9Hz,12H)；19F NMR(376MHz,(CD3)2SO):δ-115.5(br s,2F)；MS(MALDI):m/z＝448.3([M]+)。
化合物84：4-(二氟甲基)-5-[4-(3,7-二氧杂-9-氮杂双环[3.3.1]壬-9-基)-6-吗啉代-1,3,5-三嗪-2-基]吡啶-2-胺(84)
Figure GDA0004040055220001201
根据通用程序1，由起始物质i91和i68获得呈无色固体状的化合物84，产率63％。1H NMR(400MHz,(CD3)2SO):δ8.86(s,1H),7.71(t,2JH,F＝55Hz,1H),6.87(br s,2H),6.75(s,1H),4.49(m,2H),4.02(m,4H),3.74-3.65(m,12H)；19F NMR(376MHz,(CD3)2SO):δ-115.6(br s,2F)；MS(MALDI):m/z＝436.4([M+H]+)。
化合物85：4-(二氟甲基)-5-[4-[(3S)-3-乙基吗啉-4-基]-6-[(3R)-3-甲基吗啉-4-基]-1,3,5-三嗪-2-基]吡啶-2-胺(85)
Figure GDA0004040055220001202
根据通用程序1，由起始物质i92和i68获得呈无色固体状的化合物85，产率52％。1H NMR(400MHz,(CD3)2SO):δ8.88(s,1H),7.77(t,2JH,F＝55Hz,1H),6.85(br s,2H),6.76(s,1H),4.70-4.25(m,4H),3.90(m,3H),3.72(m,1H),3.60-3.45(m,4H),3.16(m,2H),1.73(m,2H),1.22(d,3JH,H＝6.9Hz,3H),0.86(m,3H)；19F NMR(376MHz,(CD3)2SO):δ-114.9(br s,2F)；MS(MALDI):m/z＝436.9([M+H]+)。
化合物86：4-(二氟甲基)-5-[4-[(3R)-3-乙基吗啉-4-基]-6-[(3R)-3-甲基吗啉-4-基]-1,3,5-三嗪-2-基]吡啶-2-胺(86)
Figure GDA0004040055220001211
根据通用程序1，由起始物质i93和i68获得呈无色固体状的化合物86，产率47％。1H NMR(400MHz,(CD3)2SO):δ8.88(s,1H),7.77(t,2JH,F＝55Hz,1H),6.85(br s,2H),6.76(s,1H),4.65(m,1H),4.49-4.30(m,3H),3.93-3.82(m,3H),3.72(m,1H),3.57(m,1H),3.50(m,1H),3.43-3.37(m,2H),3.19-3.14(m,2H),1.73(m,2H),1.22(d,3JH,H＝6.9Hz,3H),0.86(m,3H)；19F NMR(376MHz,(CD3)2SO):δ-115.3(br s,2F)；MS(MALDI):m/z＝436.9([M+H]+)。
化合物88：4-(二氟甲基)-5-[4-[(3R)-3-甲基吗啉-4-基]-6-(8-氧杂-5-氮杂螺[3.5]壬-5-基)-1,3,5-三嗪-2-基]吡啶-2-胺(88)
Figure GDA0004040055220001212
根据通用程序1，由起始物质i94和i68获得呈无色固体状的化合物88，产率50％。1HNMR(400MHz,(CD3)2SO):δ8.82(s,1H),7.71(t,2JH,F＝55Hz,1H),6.84(br s,2H),6.75(s,1H),4.55(m,1H),4.23(m,1H),3.91(m,1H),3.78(m,2H),3.69(m,3H),3.56(m,1H),3.50(m,2H),3.41(m,1H),3.16(m,1H),2.50(m,2H),2.26(m,2H),1.73(m,2H),1.21(d,3JH,H＝6.9Hz,3H)；19F NMR(376MHz,(CD3)2SO):δ-114.9(br s,2F)；MS(MALDI):m/z＝446.8([M+H]+)。
实施例2
活体外mTOR结合分析和细胞内蛋白质免疫法
活体外mTOR结合分析
N末端GST标记的mTOR(目录号PR8683B；0.45mg/ml；截短型：胺基酸1360-2549)、Alexa
Figure GDA0004040055220001221
647标记的激酶示踪剂314(目录号PV6087)、LanthaScreen Eu-抗GST卷标抗体(目录号PV5594)是购自Life Technologies。1x mTOR激酶缓冲液由50mM HEPES(pH7.5)、5mM MgCl2、1mM EGTA和0.01％普洛尼克F-127(Pluronic F-127)(Sigma目录号P2443-250G)组成。
在384孔盘中，一式两份测试各化合物的10点4倍连续稀释液(最高浓度为10μmol/L且最低浓度为40pmol/L)的mTOR结合情况。为了进行LanthaScreen激酶结合分析，将5μl浓缩3x最终浓度的测试化合物、5μl的9nM GST-mTOR/6nM Eu-抗GST抗体混合物和5μl的30nM示踪剂314溶液混合在一起，产生每孔3nM GST-mTOR、2nM Eu-抗GST抗体和10nM示踪剂314的最终浓度。在室温下温育30分钟之后，用Synergy 4多模式微量盘读取器(BiotekInstruments)，使用以下设置测量时差式FRET：在数据收集之前的100微秒延迟，200微秒时间用于数据收集，每个数据点10个测量值。发射滤光片：665nM/8nM且灵敏度设定成190和620nM/10nM且灵敏度设定成130；激发滤光片：340nM/30nM；双色镜400nM。
对于资料分析，减去背景平均值(仅含mTOR激酶缓冲液的孔)并且通过用在665nM下由受体(
Figure GDA0004040055220001222
647标记的示踪剂314)发射的信号除以在620nM下由供体(Eu标记的抗体)发射的信号来计算发射比率。通过将发射比率相对于化合物浓度(以对数标度表示)作图并且接着通过使用GraphPadTM Prism将具有可变斜率的S形剂量-反应曲线与数据拟合来测定各化合物的IC50值。
细胞内蛋白质免疫法
将A2058细胞以20000个细胞/孔涂铺于96孔盘(Perkin Elmer，目录号6005558)中并且在24小时后，用不同化合物处理1小时。对于各化合物，将7种不同浓度施加于细胞上(5μM、1.25μM、0.625μM、0.3125μM、0.155μM、0.08μM和0.04μM)。在室温下，用4％多聚甲醛固定细胞30分钟，用含1％BSA的PBS洗涤2次，在室温下用含0.1％ Triton X-100的PBS/1％ BSA使其透性化，保持30分钟，并且在室温下，用含5％山羊血清的PBS/1％ BSA/0.1％TritonX-100阻断30分钟。在4℃下，用一次抗体，即用兔抗pPKB S473(1:500；Cell SignalingTechnology，目录号4058)与小鼠抗α-微管蛋白(1:2000；用于归一化；Sigma，目录号T9026)的组合，或用兔抗pS6 S235/S236(1:500；Cell Signaling Technology，目录号4856)与小鼠抗α-微管蛋白(1:2000；用于归一化)的组合对细胞染色隔夜。在用PBS/1％ BSA/0.1％triton洗涤3次5分钟之后，在振荡下，在暗处用二次抗体山羊抗小鼠IRDye680(LICOR，目录号926-68070)和山羊抗兔IRDye800(LICOR，926-32211)(分别在PBS/1％BSA/0.1％triton中以1:500稀释)处理细胞1小时。用PBS/1％ BSA/0.1％triton洗涤细胞3次5分钟并用Odyssey红外光扫描系统，使用700nM和800nM波段扫描盘。作为对照，对于0％抑制，将媒剂(0.2％ DMSO)添加至细胞中。为了在数据分析中针对背景染色进行校正，仅用二次抗体处理孔。
对于数据分析，分别用波段700nM和800nM中的每个信号减去来自波段700nM和800nM的平均背景信号。每个波段中的信号均针对0％抑制归一化并且接着进行800nM相对于700nM的信号比率以获得针对α-微管蛋白归一化的pPKB S473或pS6 S235/S236的值。
通过将归一化的pPBK S473和pS6 S235/S236信号分别相对于化合物浓度(以对数标度表示)作图并且接着通过使用GraphPadTM Prism将具有可变斜率的S形剂量-反应曲线与数据拟合来测定各化合物的IC50值。
表1：比较性生物活性
Figure GDA0004040055220001231
表2：比较性生物活性
Figure GDA0004040055220001241
表3：比较性生物活性
Figure GDA0004040055220001242
表4：比较性生物活性
Figure GDA0004040055220001243
表5：比较性生物活性
Figure GDA0004040055220001251
表6：比较性生物活性
Figure GDA0004040055220001252
表7：比较性生物活性
Figure GDA0004040055220001253
表8：比较性生物活性
Figure GDA0004040055220001261
表9：比较性生物活性
Figure GDA0004040055220001262
表10：比较性生物活性
Figure GDA0004040055220001263
表11：比较性生物活性
Figure GDA0004040055220001271
表12：细胞内蛋白质免疫法和mTOR结合的结果
Figure GDA0004040055220001272
Figure GDA0004040055220001281
Figure GDA0004040055220001291
实施例3
小鼠中化合物3和化合物8的耐受性
BALB/c裸小鼠中化合物3和化合物8的最大耐受剂量(MTD)
为了发现可用于进一步实验的剂量且为了显示本发明化合物的耐受性，通过每天两次口服(p.o.)管饲用Cpd.3和Cpd.8治疗雌性BALB/c裸小鼠，持续五天，且在其间有两天的停药期。用以下媒剂施用化合物：20％羟丙基-β-环糊精(HPBCD)、10％ DMSO和70％水。主要终点是评价体重减轻和动物存活情况。给药日和之后每周至少两次每天记录体重。对于存活情况，每天检查动物死亡。最后一次剂量后连续7天对动物进行评价。耐受剂量定义为在研究期间引起小于20％的平均体重减轻且无治疗相关死亡的剂量。使用随机分组设计将实验动物指派至各组。首先，根据初始体重将实验动物分成均匀的数组。其次，在每组中，将实验动物随机分至各治疗。
动物供货商：Shanghai Bio-Technology Co.Ltd(LC，Shanghai,China)。动物证书号：2013001803305。在恒定温度和湿度下，将小鼠保持在个别通风笼(IVC)系统中，并且每个笼中5只动物。
饮食：小鼠饮食，C060照射灭菌的干燥颗粒状食品。动物在整个研究时间段期间自由取用。水：在使用之前高压处理的RO水。动物自由取用无菌饮用水。
连续21天或15天，分别在相同条件下用100mg/kg Cpd.3(p.o.)治疗带有OVCAR-3和SUDHL/6肿瘤的BALB/c裸小鼠。小鼠的体重稳定。
在BALB/c小鼠中测定以下MTD：Cpd.3：100mg/kg，Cpd.8：25mg/kg。总之，Cpd.3和Cpd.8在治疗有效剂量下均为良好耐受的(参见实施例4)。
实施例4
cpd.3和cpd.8的药物动力学(PK)
为了确定化合物在体内的分布，在大鼠和小鼠中测定化合物的PK。对于神经病症的治疗，需要采用跨血脑屏障且在脑中达到有效浓度的化合物。
A.在史泊格多利(SD)大鼠中的PK
以由DMSO/HPBCD 20％(10/90)组成的媒剂向雌性SD大鼠口服施用单剂10mg/kg的cpd.3。将动物圈养于受控环境中且外罩提供无菌和适当空间，以及寝具材料、食品和水、环境和社群丰富活动(成组圈养)。根据个体的体重对大鼠随机分组，治疗并在以下时间点收集血液、脑和肝且急速冷冻：0.5小时、2小时、4小时和8小时。将血液(约500-700μL，在麻醉下经由心脏穿刺收集)立即转移至含有肝素锂作为抗凝血剂(Ref：TmLH，
Figure GDA0004040055220001301
Terumo)的管中。在+4℃下，以1300g离心管10分钟。收集所得血浆并在液氮中急速冷冻且于-80℃下储存以待分析。
通过HPLC-MS/MS侦测化合物浓度。使用已知浓度的标准品绘制校准曲线。
结果描绘于图1A中。Cpd.3显示良好口服生物可用性和脑中优良的穿透性。在血浆中1.4ng/ml和在脑中1.3ng/ml的Cmax指示暴露量足够高以用于靶接合(表1)。
B.B57BL/6J小鼠中的PK
通过管饲向B57BL/6J小鼠口服施用单剂50mg/kg的Cpd.3和Cpd.8。将动物圈养于控制温度室中，使其自由取用食品和水。称取测试物放入玻璃瓶中且先将其溶解于DMSO中。随后添加Tween 80且最后用HPβCD 20％完成配制。在t＝0h时，经由管饲施用配制物且分别在8个时间点，用异氟烷使每个治疗组的三只小鼠麻醉，以经由眼球后的静脉神经丛穿刺对血液取样。将血液收集于含有K3-EDTA的管中且储存于冰上，直至以3000xg离心(10分钟，4℃)。分离血浆上清液且保持在-20℃以待分析。将小鼠的大腿肌肉和脑急速冷冻。脑和肌肉样品在PBS中使用Precellys 24/Dual匀浆器均质化。
通过LC-MS分析样品。通过向20μl无药物空白血浆中掺入校准溶液来制备校准标准品。接着，将含有内标(对于2015PQR002样品，150ng/ml地西泮；和对于2015PQR004样品，300ng/ml灰黄霉素)的40μl体积乙腈添加至20μl脑或肌肉匀浆、脑/肌肉校正标准品和脑/肌肉QC样品中。剧烈振荡样品并在6000g和20℃下离心10分钟。用1体积水稀释无粒子上清液。将等分试样转移至200μl取样小瓶中，随后用1.5μl注射体积进行LC-MS。
Cpd.3和Cpd.8在小鼠中均具有良好口服生物可用性(图1B)。血浆与脑之间的分布指示穿透血脑屏障。估计在小鼠中化合物的半衰期是约4.7-4.8小时。药理学参数显示于表1中。
表1
在向大鼠或小鼠单次口服施用之后Cpd.3和Cpd.8的PK参数。
Figure GDA0004040055220001311
实施例5
脑和肌肉中Cpd.3和Cpd.8的靶接合
从B57BL/6J小鼠的脑和大腿肌肉取样用于PK分析(实例4)。在液氮中急速冷冻组织并在-80℃下储存。将组织解冻并溶解于RIPA缓冲液1ml/半脑中。在溶解之前，将完全蛋白酶抑制剂和PhosStop磷酸酶抑制剂(Roche)添加至缓冲液中。将组织手动均质化并在16000rpm、4℃下离心两次，持续20分钟。在-80℃下，在10％甘油存在下冷冻上清液。使用Bradford试剂测定蛋白质浓度。对于有关AKT和S6rP磷酸化的蛋白质免疫分析，在95℃下用β-巯基乙醇使30μg蛋白质变性并在100V下于SDS page凝胶上分离。接着，在80V下将蛋白质转移至硝化纤维素膜(Bio-Rad，美国)上。用5％牛血清白蛋白(BSA)(Sigma-Aldrich，美国)阻断非特异性结合。在4℃下，将膜与溶解于TBST、5％ BSA中的一次抗体温育隔夜且在室温下与偶合至辣根过氧化酶(GE Healthcare，英国)的二次抗体一起温育1小时，并洗涤。使用Luminol(Biozym,Hamburg,德国)，在Li-Cor Odyssey FC读取器上对蛋白质谱带进行成像。用相同成像系统测定S6-磷酸化的量。
使用以下抗体：
AKT、P-AKT(S473)、S6rP、P-S6rP(S235/236)：Cell Signaling(英国)
β-肌动蛋白：Sigma Aldrich，美国
在向小鼠口服施用单剂之后，可在脑和大腿肌肉中显示Cpd.3和Cpd.8的靶接合(图2)。如由S6rP和AKT磷酸化显著减少所示，化合物跨血脑屏障且抑制mTOR信号级联。在施用之后30分钟信号传导改变且持续至少8小时。
实施例6
在癫痫小鼠中mTOR路径活化
为了评价用于本研究的癫痫模型中mTOR信号传导是否活化，通过施用匹鲁卡品(一种蕈毒碱乙酰胆碱受体激动剂)诱发慢性癫痫症。对大鼠或小鼠全身注射匹鲁卡品引起全身性痉挛性持续性癫痫(SE)且随后在接下来数周内发展自发癫痫性癫痫发作。用匹鲁卡品诱导SE之后六周，差不多100％的小鼠发展慢性癫痫症。
使用逐步增加的剂量方案，所述方案的优势在于，可以根据每只小鼠的易感性个别地施用匹鲁卡品。对雌性NMRI小鼠腹膜内施用100mg/kg剂量的匹鲁卡品(Sigma-Aldrich，德国)(Pilo-SE组)。若小鼠未展示SE，则每20分钟再次注射100mg/kg匹鲁卡品，直至发展SE。一旦小鼠显示全身性癫痫发作活动，即停止匹鲁卡品注射。为了降低匹鲁卡品的周围副作用，在第一次注射匹鲁卡品之前30分钟，施用甲基莨菪碱(Sigma-Aldrich，德国)。持续监测动物且记录痉挛性SE的持续时间[参照拉辛量表]。SE发作定义为在出现一次或两次全身性张力性-痉挛性癫痫发作之后的连续持续癫痫发作活动[拉辛量表上的第4阶段或第5阶段]。SE的特征在于，在处于竖直(坐)身体位置时点头、斯特劳布举尾反应和轻微至中度前肢抽搐，有时间杂有进一步全身性张力性-痉挛性癫痫发作。为降低死亡率，在SE发作之后90分钟，通过地西泮(10mg/kg i.p.；diazepam-ratiopharm 10，注射液)终止SE。接下来2-5天，一天两次向小鼠注射0.9％氯化钠溶液并喂以婴儿食品，因为在SE之后第一天期间，大部分小鼠无法自行进食或饮水。在假SE组中，用与pilo-SE组相同的治疗方案治疗小鼠，但匹鲁卡品替换为0.9％氯化钠溶液。在pilo-SE小鼠模型中的死亡率相对较高(总体为约50％)且可在实验组/天之间明显地变化。因此，开始需用大量小鼠进行SE诱导以便可靠地获得一组20-22只规模的动物进行MEST。
A.脑样品中的mTOR信号传导
将来自匹鲁卡品处理的小鼠和未处理小鼠的脑样品急速冷冻并将组织溶解于含有25mM Tris-HCl(pH 8)、50mM NaCl、0.5％(w/v)脱氧胆酸钠(DOC)和0.5％(w/v)TritonX-100且补充有完全蛋白酶抑制剂(Roche,Mannheim，德国)和Phosphostop(NEB，美国)的缓冲液中。在冰上，通过用小号针(21G)将细胞悬浮液抽吸至注射器中二十次来破坏细胞溶解产物。根据制造商的说明，通过使用Pierce BCA蛋白质分析套组(Thermo Scientific,Bonn,德国)测定溶解产物中的蛋白质浓度。在4℃下，在4-20％ SDS-PAGE凝胶上分离等量的总蛋白质且将其转印至PVDF膜上，在含5％牛奶且补充有Tween-20的磷酸盐缓冲生理食盐水(PBST：137mM NaCl、2.7mM KCl、4.3mM Na2HPO4、1.4mM KH2PO4，pH 7.3，0.05％(w/v)Tween-20)中阻断隔夜。在室温(RT)下，将膜与一次抗体抗S6 1:1000、抗S6磷酸丝胺酸(240/244)1:1000、抗S6磷酸丝胺酸(235/236)1:2000(NEB)和抗肌动蛋白1:100(Sigma-Aldrich)一起于含2％牛奶的PBST中温育1小时，并在PBS-T中洗涤三次，持续10分钟。在室温下，将二次抗体抗兔HRP 1:1000(Dako,Hamburg,德国)于含2％牛奶的PBST中温育1小时并在PBST中洗涤三次，持续10分钟。根据制造商的方案，使用SuperSignal West Femto化学发光基质(Scientific)和ChemiDoc系统(Bio-Rad,Munich，德国)，利用QuantityOne软件(Bio-Rad)通过增强的化学发光侦测蛋白质。用QuantityOne(Bio-Rad)软件以比重定量相对蛋白质表达且用GraphPad Prism软件(GraphPad,San Diego,CA,美国)，通过针对肌动蛋白参考信号归一化进行计算。
诱发癫痫症的小鼠显示在脑样品中总S6-蛋白质以及P-S6rP(Ser240/244)水平显著升高(图3)。由于S6rP磷酸化是mTOR活化的下游事件，故在用匹鲁卡品预处理以诱发癫痫性癫痫发作的小鼠中mTOR信号传导超活化。总之，数据指示，匹鲁卡品模型的癫痫形成涉及mTOR过活化。
B.在施用Cpd.3、Cpd.8和依维莫司之后脑样品中的mTOR信号传导
用单次口服剂量的Cpd.3(40mg/kg)、Cpd.8(25mg/kg)、依维莫司(5mg/kg)或媒剂治疗经匹鲁卡品预处理的小鼠和未经处理的小鼠。每组利用5只小鼠且在3小时之后处死。产生脑溶解产物且如实施例6A所描述，通过蛋白质免疫法分析。根据制造商的方案，用QuantityOne软件(Bio-Rad)定量S6磷酸化(S235/236)。
在未经处理的小鼠和癫痫小鼠中，Cpd.3(分别为4.6倍；4.3倍)、Cpd.8(分别为10.9倍；2.8倍)使S6磷酸化(S235/236)相对于对照组显著地降低(图3B)。在依维莫司治疗的小鼠中观察到mTOR信号传导无显著变化，表明在癫痫小鼠以及未经处理小鼠中有效剂量的Cpd.3和Cpd.8穿透至脑中且抑制脑组织中mTOR信号传导。依维莫司看来在所用条件下于脑中未达到有效浓度，因为mTOR信号传导不受此化合物抑制。
实施例7
在最大电击癫痫发作临限值测试(MEST)中Cpd.3和Cpd.8抑制癫痫发作
使用最大电击癫痫发作临限值测试(MEST；一种小鼠癫痫症模型)测试Cpd.3和Cpd.8的抗癫痫作用。如先前所示，雷帕霉素在此模型中增加癫痫发作临限值(Macias,M.等人,PLoS One,2013.8(5):第e64455页)。
使用从Charles River(Sulzfeld，德国)获得的总计166只体重在21-25g(小鼠)范围内的成年雌性NMRI小鼠。在以下条件下保持动物：圈养：在控制条件(温度：22±1℃；湿度：50％-60％)下，根据12小时亮-暗循环(在上午6:00亮灯)，以数组最多8只小鼠圈养动物。饲喂：任意提供标准实验室食物(Altromin 1324标准饮食,Altromin SpezialfutterGmbH,Lage,德国)。饮用水：任意提供自来水。
在半数动物中通过施用匹鲁卡品诱发癫痫症(参见实施例4)。MEST测定数组约20只动物的群体癫痫发作临限值而非个别动物的临限值。在本研究中，如先前所描述通过阶梯程序测定MEST。使用以持续0.2秒的正弦脉冲(50/sec)递送恒定电流的刺激器(BMTMedizintechnik,Berlin,德国)(在1-200mA间可调节，不管动物的阻抗如何)。
经由两侧透角膜刺激(使用铜电极)供给电流。在透角膜刺激之前，向小鼠的眼部施用一滴四卡因溶液(2％)用于局部麻醉。两分钟后，手动限制小鼠以按压在两个角膜上的铜电极，同时通过在与刺激器连接的脚踏板开关上踩踏来施加刺激。在每次施加电流之前，电极用软皮革覆盖且用生理食盐水浸泡。在刺激之后，立即将小鼠从限制释放以允许观察所展现的癫痫发作。通过升降法改变刺激强度，在所述方法中，根据前一只小鼠是否发生张力性后肢伸展将电流降低或升高0.06mA log间隔。用接近对照临限值的电流值开始第一次刺激。
在每一实验之前，新鲜制备药物溶液：
Figure GDA0004040055220001351
使用由20-22只非癫痫对照小鼠构成的组(假SE)和20-25只癫痫小鼠构成的组(pilo-SE)产生的数据计算CC50(在95％概率的置信界限下，在每组50％的小鼠中诱发张力性后肢癫痫发作的惊厥电流)。使用学生t检验计算统计分析。所有测试都使用双侧；P<0.05视为显著的。
在数组20-25只小鼠中进行实验。平均CC50对照值(无媒剂注射)在非癫痫小鼠中是15.8±0.36mA(在3组不同小鼠中测定的5个临限值的平均值±SEM)且在癫痫小鼠中是15.6±0.45mA(在3组不同小鼠中测定的5个临限值的平均值±SEM)。苯巴比妥产生在本研究所测试的化合物中最明显的抗惊厥作用。CC50在非癫痫小鼠中是25.7mA且在癫痫小鼠中是26.56mA，使临限值分别增加69％和66％。非癫痫小鼠与癫痫小鼠之间无显著差异(图4)。左乙拉西坦(50mg/kg)使非癫痫小鼠中CC50显著地增加21％，而在癫痫小鼠中无影响(表2，图4)。
如先前Hartman等人[25]所示，5mg/kg雷帕霉素在MEST中使癫痫发作临限值在非癫痫小鼠中显著地增加13％且在癫痫小鼠中仅增加5％(图4)。在腹膜内注射之后，雷帕霉素仅使非癫痫小鼠中临限值增加20％，而在癫痫小鼠中无影响(图4)。10mg/kg和5mg/kg依维莫司分别使非癫痫小鼠中CC50显著地增加10％和13％。在癫痫小鼠中，仅较低剂量使CC50增加16％，而10mg/kg无效(表3及图4)。
当在临限值测定之前仅1小时施用40mg/kg Cpd.3时，癫痫小鼠和非癫痫小鼠中CC50均显著地降低。当预处理时间延长至3小时，仅非癫痫小鼠中的CC50显著地增加6％，而癫痫小鼠中的CC50不再降低，但保持在对照值。施用较高剂量(100mg/kg)在癫痫小鼠中引起CC50显著增加9％，但在非癫痫小鼠中则不然(表2及图4)。
总体而言，在本研究中所测试的参数下，Cpd.3展现微小但不一致的抗惊厥作用。延长预处理时间看来具有有利的作用。使用悬浮液可引起边际效应和数据的显而易见的不一致性。
Cpd.8在非癫痫小鼠中展现明显的剂量依赖性抗惊厥作用。CC50增加30％(25mg/kg)和8％(12.5mg/kg)。此与左乙拉西坦的抗惊厥作用相当。预处理时间缩短至1小时使抗惊厥作用降低。当预处理时间增加至24小时，抗惊厥作用消失(表3及图4)。在癫痫小鼠中，在任何测试剂量或预处理时间下，Cpd.8均不引起抗惊厥作用。当预处理时间缩短至1小时，与Cpd.3类似，Cpd.8使CC50降低9％(表3及图4A-D)。
对于不良作用确定，未进行专门的测试。在注射之后约30分钟，关于明显镇静或活跃度减小，观察居住笼中的小鼠。在电刺激之前五分钟和在刺激之前两分钟在用局部麻醉处理进行处置程序期间，再次观察居住笼中的小鼠。记录相对于正常行为的每个明显变化。仅苯巴比妥诱导明显的镇静作用，持续超过60分钟。所有测试药物(包含媒剂溶液)均耐受，且无任何明显不良作用。
表2
Cpd.3与依维莫司/左乙拉西坦的癫痫发作临限值的比较。对于每一临限值，指定诱导各别组中50％的小鼠癫痫发作伴发完全后肢紧张所需的电流(CC50)和标准偏差。
另外，显示出以相对于媒剂临限值的百分比表示的药物测试的临限值变化和以百分比表示的各测试的非癫痫小鼠与癫痫小鼠的临限值差异。*：p<0.05；始终相较于媒剂组(黄色)进行ANOVA+事后邓尼特检验。未指示非癫痫小鼠与癫痫小鼠之间的显著差异。
Figure GDA0004040055220001371
表3
Cpd.8与依维莫司的癫痫发作临限值比较。对于每一临限值，指定诱导各别组中50％的小鼠癫痫发作伴发完全后肢紧张所需的电流(CC50)及标准偏差。
另外，显示出以相对于媒剂临限值的百分比表示的药物测试的临限值变化及以百分比表示的各测试的非癫痫小鼠与癫痫小鼠的临限值差异。*：p<0.05；始终相较于媒剂组(黄色)进行ANOVA+事后邓尼特检验。未指示非癫痫小鼠与癫痫小鼠之间的显著差异。
Figure GDA0004040055220001381
实施例8
用mTOR抑制剂处理的STHdh细胞的活力和蛋白质合成
STHdh细胞是来源于表达含111个CAG重复序列的全长HTT的基因嵌入小鼠模型的永生化纹状体细胞(STHdhQ111/Q111)。对照STHdhQ7/Q7细胞是由野生型小鼠胚胎产生。可以用含有多巴胺的混合液使细胞分化成神经元细胞。
A.LDH分析
LDH是在质膜破坏后，例如在细胞凋亡期间排出的细胞质酶。根据制造商的说明，使用来自Roche(Switzerland)的乳酸脱氢酶(LDH)分析测量测试化合物的细胞毒性。
在含湿气培育箱中，在37℃和5％CO2下将STHdhQ111/Q111及STHdhQ7/Q7(CoriellInstitute for Medical Research，美国)培养于补充有10％ FBS(Invitrogen，美国)、1％Geniticine(G418，Biochrom，德国)和1％抗生素抗霉菌素(Invitrogen，美国)的DMEM(Invitrogen，美国)中。对于本发明所描述的所有实施例，在添加化合物时，使用含最终浓度50μM毛喉素(Forskolin)、750μM IBMX、200nM TPA、10μM多巴胺、10μg/μlα-FGF的培养基分化STHdh细胞。将104个STHdhQ7/Q7细胞及STHdhQ111/Q111细胞/孔接种于96孔盘中，与Cpd.3(130nM、1230nM)、Cpd.8(400nM及1230nM)、INK128(100nM)和雷帕霉素(400nM)一起培育并在8小时、24小时、34小时、48小时和72小时后测量LDH(图5A、B)。
测试化合物在培养基中均不诱导LDH活性增加，表明mTOR抑制剂不诱导细胞毒性。在较高Cpd.3和Cpd.8浓度下，LDH活性相较于对照物有所降低。STHdh细胞对mTOR抑制剂具有良好耐受性且长达72小时的细胞处理未增加凋亡细胞的数量。总之，本发明化合物适于在这些细胞株中进行评估，且另外，化合物看来一般对神经元细胞的代谢活性不具有直接影响。
B.PrestoBlue分析
根据制造商的说明，使用PrestoBlue活力试剂(Invitrogen,美国)侦测细胞活力/代谢活性。将104个STHdhQ7/Q7细胞及STHdhQ111/Q111细胞/孔接种于96孔盘中，与Cpd.3(130nM、1230nM)、Cpd.8(400nM及1230nM)、INK128(100nM)和雷帕霉素(400nM)一起培育并在8小时、24小时、34小时、48小时和72小时后测量PrestoBlue。测定的无毒浓度转移至本研究中随后使用的初级神经元。对于各测试化合物，在8小时、24小时、34小时和48小时的时候，细胞不显示代谢活性变化(图5C、D)。在较低Cpd.3和Cpd.8浓度下，可侦测到甚至微小的粒线体活性增加。在72小时，在用1230nM Cpd.3和(不显著地)Cpd.8处理之后，在STHdhQ111/Q111中侦测到代谢活性降低。在STHdhQ7/Q7细胞中未观察到此作用，表明1.野生型细胞对mTOR抑制不太敏感且2.化合物是良好耐受的且因此适于测试作为这些细胞株中的自体吞噬诱导剂。
实施例9
在STHdhQ7/Q7和STHdhQ111/Q111细胞中Cpd.3和Cpd.8抑制mTOR信号传导
为了测试Cpd.3和Cpd.8在HD神经元细胞模型中是否抑制mTOR信号传导且诱导自体吞噬，采用针对STHdhQ111/Q111和STHdhQ7/Q7细胞的处理。如实施例6所描述维持STHdhQ111/Q111和STHdhQ7/Q7细胞。将细胞接种于10cm培养皿中。当细胞约80％汇合时，细胞分化且同时用化合物处理。用Cpd.3(200nM、400nM、1230nM)、Cpd.8(130nM、1230nM)、INK128(100nM)、雷帕霉素(400nM)或DMSO对照物处理细胞4小时。在培育时间结束时，用冷PBS缓冲液洗涤细胞并用200μl补充有4％完全蛋白酶抑制剂(Roche,Switzerland)和10％ PhosStop(Roche,Switzerland)的RIPA缓冲液溶解。在冰上培育30分钟之后，涡旋溶解产物，离心(20分钟，4℃，16000rpm)并收集上清液。如上文所描述测定蛋白质浓度。如上文所描述，使用以下一次抗体，通过蛋白质免疫法分析30μg蛋白质/样品：
4E-PB1(1:1000)、P-4E-BP1(T37/46)(1:1000)、mTOR(1:1000)、P-mTOR(S2448)(1:1000)、S6rP(1:1000)、P-S6rP(S235/236)(1:1000) Cell Signaling,英国
β-肌动蛋白(1:50000) Sigma-Aldrich,美国
LC3(1:200) Nanotools,德国
如STHdhQ111/Q111细胞和STHdhQ7/Q7细胞中S6rP磷酸化和4E-BP磷酸化减少所指示，Cpd.3以浓度依赖性方式抑制mTOR信号传导。参考化合物/阳性对照物INK128和雷帕霉素显示类似程度的路径抑制(图6A)。Cpd.8也抑制mTOR信号传导。在STHdhQ7/Q7细胞中可在130nM低浓度下观察到作用(图6B)。
为了侦测LC3-II(自噬小体中的自体吞噬标记物)的水平，在存在和不存在巴弗洛霉素A(一种自噬小体降解抑制剂)下进行细胞处理。因此，当诱导自体吞噬时，化合物导致LC3-II水平累积。Cpd.3(图6C)和Cpd.8(图6D)在纹状体细胞中诱导自体吞噬。对于Cpd.3，在STHdhQ111/Q111细胞中观察到对自体吞噬的较强影响。在非mutHTT对应物中自体吞噬诱导作用不显著，但在这些细胞中同样观察到LC3II升高迹象。Cpd.8在纹状体细胞株中也诱导自体吞噬，程度与INK 128相当。
资料指示，Cpd.3和Cpd.8在带有mutHTT或未突变的Q7延长的亨廷顿蛋白的纹状体细胞株中抑制mTOR信号传导。mTOR路径的抑制导致自体吞噬的诱导。在神经元环境中mTOR或PI3K/mTOR抑制剂Cpd.3和Cpd.8诱导经由大自体吞噬清除亨廷顿蛋白聚集物的基本机制。
实施例10
在表达mutHTT外显子1的HEK细胞中Cpd.3和Cpd.8抑制聚集物形成
在含湿气培育箱中，在37℃和5％CO2下，将HEK细胞(DSMZ,德国)维持于DMEM/Glutamax(Invitrogen,美国)、1％抗生素/抗霉菌素(Invitrogen,美国)、10％ FBS中。使用Attractene转染试剂(Qiagen,Netherlands)，用来自Clontech(Mountain View,美国)的含有具19Q(无聚集)或51Q延伸的HTT外显子1表达序列和增强的绿色荧光蛋白质(eGFP)标签的pcDNA3.1/V5-His载体短暂转染HEK细胞。将1×106个细胞接种于6孔盘中。次日，将2μgDNA与95.5μl转染介质和4.5μl转染试剂混合。15分钟培育时间之后，将混合物添加至细胞中。72小时之后，收集细胞或将其固定用于分析。
A.如过滤器截留分析中所示，Cpd.3和Cpd.8减少经转染HEK细胞中聚集物的形成
用DMSO对照物处理经19Q-HTT-外显子1-eGFP或51Q-HTT-外显子1-eGFP转染的HEK细胞。51Q HTT-外显子1-eGFP HEK细胞形成聚集物。用Cpd.3(400nM、1230nM)、Cpd.8(130nM、1230nM)、INK128(100nM)或雷帕霉素(400nM)处理这些细胞8小时，并且接着用RIPA缓冲液溶解。在冰上培育30分钟之后，将细胞均质化(Dounce均质机,Thermo Fisher,美国)。含50μg蛋白质溶液的PBS补充有2％ SDS(Roth,德国)。抽吸样品穿过硝化纤维素膜(0.45μm)且用PBS缓冲液洗涤两次。聚集的蛋白质不溶解于SDS溶液中且结合至膜。使用在补充有5％奶粉的TBST中1:1000稀释的ployQ抗体(1C2,Millipore,德国)和HRP偶联的二次抗小鼠抗体侦测膜上的mutHTT(图7A、B)。用Odyssey LI-CORE系统(Li-Core,美国)定量谱带(图7B)。
资料展示，用mTOR抑制剂(Cpd.3、Cpd.8、INK128和雷帕霉素)处理51Q-HTT-外显子1HEK细胞引起这些细胞中细胞毒性mutHTT聚集物的显著减少。130nM的Cpd.8不足以诱导显著聚集物减少。聚集物清除引起聚集物减少，但未达到完全清除(相较于19Q-HTT)。由于先前已展示自体吞噬的诱导，故可认为聚集物清除是通过大自体吞噬进行。
B.如免疫细胞化学分析所示，Cpd.3和Cpd.8减少经转染HEK细胞中聚集物的形成
将HEK细胞以104个细胞/孔接种于24孔盘中涂布聚L-离胺酸(Sigma-Aldrich,美国)的盖玻片中，并用19Q-HTT-外显子1-eGFP或51Q-HTT-外显子1-eGFP短暂转染。如A所描述，用化合物处理细胞8小时或24小时。此培育在转染之后72小时结束。用4％(三聚甲醛)PFA固定细胞。使用含有4',6-二脒-2-苯基吲哚(DAPI)的封片介质将盖玻片固定于玻璃载片(图7C)。对含有HTT-外显子1-eGFP的核和聚集物进行手动计数。对每份样品10000个细胞计数(图7D)。
由于eGFP标记的HTT的荧光极亮，故用DMSO处理的样品总体看来较暗。mTOR抑制剂通过大自体吞噬减少HEK细胞中mutHTT聚集物的数量，表明此机制也可清除动物模型或患者神经元中的亨廷顿蛋白聚集物。相较于8小时(55％减少，Cpd.8，130nM；66％减少，Cpd.3，400nM)处理，所述作用在24小时之后(77％减少，Cpd.8，130nM；73％减少，Cpd.3，400nM)较为明显。就剂量发现而言，较低浓度的Cpd.3(400nM)和Cpd.8(130nM)看来与高浓度至少同样高效。因此，有可能以较低的无毒剂量治疗患者。
实施例11
Cpd.3和Cpd.8在野生型小鼠脑中诱导自体吞噬
为了研究Cpd.3和Cpd.8的mTOR抑制作用是否在脑中诱导自体吞噬(亨廷顿蛋白聚集物清除的必需机制)，如样品5中所描述，用Cpd.3和Cpd.8处理BALB/c裸小鼠。
如实例5中所描述，使用LC3抗体(1:20,Nanotools,德国)和p62抗体(SQTS1/p621:1000,Cell Signaling,美国)以及相应地HRP偶合的二次抗体，通过蛋白质免疫法分析脑溶解产物(图8A、B)。
在单次口服施用Cpd.3和Cpd.8之后自体吞噬标记物LC3II时间依赖性增加(上部谱带)和自体吞噬标记物p62降低证实自体吞噬诱导。数据指示，脑中化合物的浓度足以在神经元细胞中诱导自体吞噬。由于在细胞模型中显示，诱导自体吞噬导致亨廷顿蛋白聚集物的清除，故Cpd.3和Cpd.3以及其它mTOR抑制剂可能在动物或人类中诱导mutHTT聚集物的自体吞噬性减少。
实施例12
在TSC1GFAP ko小鼠中Cpd.3和Cpd.8长期治疗对电图癫痫发作的影响
进行本研究是为了测试在Tsc1GFAP基因剔除小鼠中，相较于媒剂治疗，Cpd.3、Cpd.8和参考化合物(Cpd.R，CAS编号1225037-39-7)对自发癫痫发作和死亡的影响。Tsc1(Tsc1flox/flox-GFAP-Cre(Tsc1GFAP条件性基因剔除)是GFAP阳性细胞中Tsc1基因条件性失活的TSC小鼠模型(Tsc1GFAPCKO小鼠)，所述小鼠发展进行性癫痫症、脑病和过早死亡，以及可能促成癫痫形成的细胞和分子脑异常。
A：动物和治疗
在起始研究之前，使属于任一性别的Tsc1小鼠适应环境，体检，处理并称重以确保适当健康状况和适用性并使与人类处理有关的非特异性应激减到最少。在研究过程期间，保持12/12亮/暗循环。室温维持在20℃与23℃之间且相对湿度维持在约50％。在研究持续时间内，任意提供食品和水。将每只小鼠随机地指派至指定治疗组。在动物的亮循环阶段期间，进行给药。
在以下描述的整个手术程序中使用无菌技术。用异氟烷(3％用于诱导和1-2％用于维持，且以氧气作为载气；近似流动速率，1公升/分钟)使小鼠麻醉且将其放在恒定加热的垫上以维持芯温度在37±1℃。通过针对脚趾夹捏的回缩反应的缺乏和呼吸速率的明显变化确保适当麻醉程度。将小鼠头部固定于立体定位框架中，利用前端片持续供应麻醉剂。将眼用软膏施加至眼睛以防止角膜干燥。标识手术切口区域并用氯己定擦洗，随后酒精擦洗。在头部上沿延喙尾方向切开背侧皮肤并剥开皮肤以暴露颅骨。用无菌棉尖施料器和生理食盐水钝性剥离皮下组织。清洁颅骨以暴露前囟。使用牙科钻或20-23号针，产生一个小孔以允许植入留置的电极线或颅骨螺钉。使用在前额和顶叶皮质中带有双半球形导线的8201-EEG头戴装置(Pinnacle,Inc.,Lawrence,KS)和留置的靶向CA1上方区域的局部场电位电极。此装置与颅骨的初始固定是万能胶实现。接着，将头戴装置用牙科用丙烯酸黏结至颅骨上。用牙科黏固剂覆盖头戴装置和螺钉。施加牙科黏固剂也用以闭合伤口。典型地，拉紧植入物/头戴装置周围的皮肤且仅在植入物尾侧的皮肤保持不闭合。在牙科丙烯酸固化后，关闭异氟烷且自立体定位设备中移出动物。
手术后，将动物置放于清洁的恢复笼中，放在位于笼下方的用温热的水循环加热的垫上，直至其可走动。在手术之前、期间和之后，视兽医护理计划(Program ofVeterinary Care，PVC)团队和IACUC，以及主治兽医的需要/推荐和/或根据IACUC指导原则，向动物施用流体、营养物、抗生素和镇痛剂。在术后7天时间段期间，动物护理工作人员每天检查动物。在实验中仅使用从手术完全恢复(看起来健康且展示正常行为，诸如进食、理毛、探索和筑巢)的动物。手术后，将小鼠单独圈养。个别地圈养动物以防止其它动物污染手术部位或损害植入物。在P22至P27年龄向小鼠植入电极且使其恢复至多4周龄(P35)。对总计56只小鼠进行植入，得到四组各约10只小鼠用于研究。
使用Pinnacle Technology 8206数据调节和采集系统(DCAS)持续记录EEG，所述系统在传送数据至Pinnacle's
Figure GDA0004040055220001441
采集软件以经由USB连接收集之前，进行二次放大和过滤。使用10x或100x增益前置放大器记录EEG。对于在幅值中引起大尖峰的癫痫发作活动，典型地，10x增益是最优选的。将预先放大的系链连接至安装在笼上方的低扭矩换向器上且允许不受妨碍的自由移动且减少移动伪影。使用Sirenia或PAL-8400软件实时观测来自所有小鼠的所有EEG波段。在EEG记录持续时间里，收集同步视频记录。
将化合物溶解于由含20％ Dexolve-7(Davos Pharma,Liberty,MO,美国)的水(pH3)组成的媒剂中。将研究中的小鼠随机指派至以下治疗组之一中：媒剂10mL/kg(D组；出生后天数(PND)21-53；p.o.q.d.)、Cpd.R 50mg/kg(C组；PND21-53；p.o.q.d.)、Cpd.8 25mg/kg(A组；PND21-53；p.o.q.d.)、Cpd.3 100mg/kg(B组；PND21-53；p.o.q.d.)。
B：脑电图仪记录及分析
在术后完全恢复之后，将小鼠在其居住笼中个别地系拴至pinnacle记录系统且在随后两周(PND 35-48；第6周和第7周)里，记录自发EEG。同时，视需要在此时间段内制备视频图形记录以提供数据流用于小鼠行为评价。在记录时间段完成之后，针对异常EEG活动评价个别EEG迹线。电图癫痫发作是通过具有不连续的节律尖峰放电时间段的特征性图案鉴别，所述尖峰放电的频率和幅值演变，持续至少10秒，典型地以反复瞬间放电和电压抑制结束。这些定义为具有极典型的开始、结束和中间演变，由低幅值快速活动和高频尖峰(张力性)开始，逐渐演变成较慢、脉冲(痉挛性)阶段，随后是通常迭加有节律伪影的严重电压抑制，所述伪影表示呼吸且可清晰提取，因为EEG本身受到抑制。在TS小鼠中最典型的癫痫发作持续至少30-40秒。应注意，这些小鼠具有异常EEG图，通常以频繁发生的发作间期尖峰(也可称为尖峰串)为特征，但基于以上标准，不将此视为癫痫发作(通常不存在典型演变)。对每只小鼠的癫痫发作的发生率列表且概述第6周(PND36)、第7周和第8周(PND55)各治疗组的情况。
通过变异数分析(ANOVA)对数据进行分析。若这些因子中有一种或多种是显著的(P<0.05)，则进一步进行后测试(邓尼特氏或威尔科克森)以鉴别哪种特定对比(也就是说，对于第6周，媒剂对Cpd.R)是显著的。针对多重比较调整P值且p<0.05视为显著的。汇总数据以组平均值±平均值的标准误差(SEM)报告。
体重
在任何处理之前指派至不同治疗组的个别受试者的体重显示于图9A中。单因素ANOVA揭示各组之间无统计学差异。在研究即将结束时，用Cpd.3和Cpd.8治疗的动物的体重较高。此时，TSC小鼠的正常寿命接近结束。其将减轻更多重量并死亡。由于经治疗动物显示较高重量，故其看来具有改善的健康状况且因此可能具有延长的寿命。
电图癫痫发作和死亡率
在PND21-55间每天用媒剂治疗的Tsc1基因型小鼠经历稳定的电图癫痫发作(n＝150)，而在PND21-53间用25mg/kg Cpd.8治疗的小鼠显示显著减少的癫痫发作次数(n＝8)且在PND21-53间用100mg/kg Cpd.3治疗的小鼠在相同时间段内显示显著减少的癫痫发作次数(n＝2)。在PND21-55间接受Cpd.R的参考组在所有时间点时显示癫痫发作次数适度减少(n＝76)，显著不同于媒剂。进行成对威尔科克森检验以鉴别哪种特定对比是显著的(图9B)。媒剂与Cpd.8/Cpd.8的癫痫发作的发生率在第6周(PND35-42；分别是p＝0.0009和p＝0.0005)、第7周(PND43-48；p＝0.0427和p＝0.0023)和第8周(PND49-55；p＝0.0017和p＝0.0002)显著不同(图9B)。
可显示Cpd.3和Cpd.8针对Tsc1 GFAP条件性基因剔除小鼠中癫痫发作的防护作用。Cpd.R的癫痫发作抑制不如测试的新化合物。这可能通过Cpd.R的半衰期(11小时)比Cpd.3(5小时)和Cpd.8(5小时)短来解释。
实施例13
R6/2小鼠和zQ175小鼠的治疗
R6/2小鼠是表达具有160±5个CAG重复序列延伸的人类亨廷顿基因外显子1的B6CBA-Tg(HDexon1)62Gbp/1J小鼠模型。小鼠在4周与12周之间发展重度表型。在R6/2小鼠中进行PK/PD研究以测定尽可能低且仍接合不同脑区(纹状体、皮质、小脑)中的靶的剂量。R6/2小鼠及其野生型对应物是在以下由19只动物组成的治疗组中治疗：1.野生型，媒剂；2.R6/2媒剂；3.R6/2，Cpd.3；4.R6/2，Cpd.8。连续5天进行口服给药，随后是2天的停药期，总计持续8周。在4周和8周之后，在两种表型测试中测试动物：LabMaster和Rotarod。接下来，处死小鼠且使用蛋白质免疫分析分析脑中的mTOR信号传导和自体吞噬的诱导，且使用TR-FRET分析来分析易溶和聚集的mHTT的水平。
zQ175基因嵌入(KI)小鼠展现暗示人类疾病的多种行为、组织病理学和分子表型。这些小鼠在2-12个月龄间展现纹状体和皮质中mHTT包涵体的年龄相关增加。在3个月至5个月龄间，用1.媒剂；2.Cpd.3；3.Cpd.8治疗每组10只小鼠。连续5天对小鼠口服给与化合物或媒剂，随后是2天的停药期。关键读取结果是1)使用Singulex(中枢对比周围影响)测定纹状体和四头肌匀浆中mHTT聚集物的形成。
在给药最后一天(给药后2小时)实验动物的血浆、脑和四头肌中的化合物水平。在研究第一天将使用卫星动物测定PK和基础HTT水平。
实施例14
在活体内亨廷顿氏病模型中治疗R6/2小鼠
使用活体内亨廷顿氏病模型评价Cpd.3和Cpd.8在减少纹状体中mutHTT聚集物形成方面的功效。R6/2小鼠是表达具有160±5个CAG重复序列延伸的人类亨廷顿基因外显子1的B6CBA-Tg(HDexon1)62Gbp/3J亨廷顿氏病小鼠模型。小鼠在4周与12周之间发展重度表型。由于这些动物极其脆弱，故剂量必须减少至较稳固动物模型中所用剂量的65％。
B6CBA-Tg(HDexon1)62Gpb/3J(R6/2)小鼠是由购自Charles River(CharlesRiver Laboratories,Sulzfeld,德国)的40对野生型雄性与卵巢移植雌性育种对获得。幼畜对于HTT基因人类N末端片段为转殖基因的。在本研究中，使用雄性小鼠且保持在独立笼中以减少由断奶引起的等级争斗应激。使用具有12小时亮/暗循环的标准笼。任意供应标准食物和水。
R6/2药物动力学
为了测试脑区的暴露，用单次口服剂量的Cpd.3(75mg/kg、50mg/kg、25mg/kg)或Cpd.8(25mg/kg、16mg/kg、8mg/kg)治疗R6/2小鼠，每组3只动物。一小时之后，收集血浆并处死动物。分别急速冷冻纹状体、小脑和皮质且使用LC/MS/MS分析化合物浓度。
达到的组织浓度均在所有Cpd.3浓度的有效范围内。对于Cpd.8，在所有浓度下均达到足够水平，不过8mg/kg产生的靶覆盖可能有点过短(图10)。
R6/2小鼠的化合物长期治疗
根据基因型和重量测量值、旋杆表现及仔畜确定治疗组。将其均等地分配至四个组中，每组含有12只动物。R6/2小鼠及其野生型对应物按以下治疗组给药：1.野生型，媒剂(含20％ SBECD的水，pH3)；2.R6/2，媒剂(含20％ SBECD的水，pH3)；3.R6/2，Cpd.3(65mg/kg)；4.R6/2，Cpd.8(16.25mg/kg)。连续6天进行口服给药，随后是1天的停药期，持续总计11.5周。
免疫组织化学分析
为了侦测mutHTT聚集物，对纹状体进行免疫染色。将脑固定于4％三聚甲醛(SAVLP GmbH,Flintsbach am Inn,德国)中。在包埋于O.C.T(Sakura Finetek Germany GmbH,Staufen im Breisgau,德国)中之前，将整个脑浸泡于蔗糖溶液(30％w/v)中，保持3天，并在低温恒温器(Leica CM-3050-S,Leica Biosystems Nussloch GmbH,德国)上将其连续切割成25μm冠状面切片。在4℃下，将切片储存于补充有0.03％乙酸钠的PBS中。对于自由漂浮染色，将纹状体切片置放于新鲜PBS中。所有步骤均在室温下进行。在含0.5％硼氢化钠的PBS中阻断30分钟，且随后洗涤。将一次抗体与1:1000稀释的EM48(MAB5374；MerckChemicals GmbH,Darmstadt,德国)一起培育隔夜。次日，用TBST洗涤切片并将其与1:1000稀释的生物素化山羊抗小鼠IG-G(Vecta BA9200,Vector Laboratories,Burlingame,Ca)一起培育2小时。使用1:400稀释的抗生物素蛋白-生物素复合物(
Figure GDA0004040055220001481
Elite ABCKit,Vector Laboratories,Burlingame,Ca)。培育时间是1小时。为了进一步增强信号，在施用补充有0.001％ H2O2的生物素化酪胺8分钟之后，重复ABC培育。为了显色，将切片在含有镍-DAB-H2O2的缓冲液(0.6％镍、0.01％ DAB和0.001％ H2O2于0.05M Tris、0.05M咪唑中)中培育4分钟。通过将切片放入TI缓冲液(0.05M Tris、0.05M咪唑)中停止反应并将其安放于水中，自由漂浮。用乙醇和二甲苯稀释液系列使切片脱水并用封固剂(CV,Leica)密封盖玻片。
使用Zeiss Axioplan显微镜(Plan-NEOFLUAR×40/0.75物镜，AxioCam MRc)和Axiovision 4.8软件(Carl Zeiss Microscopy GmbH,Jena,德国)获取图像。每只动物分析三个后续纹状体切片，分析4只动物利用在粒子分析中构建的ImageJ，对于所有图片使用固定临限值(ImageJ 1.47v；NIH,Bethesda,MD,美国)来分析EM48阳性结构。用GraphPadPrism 6(GraphPad Software Inc.,La Jolla,CA,美国)进行统计分析。通过与安慰剂组多重比较和Dunnet校正方法，进行单因子ANOVA。
针对染色的纹状体的图像分析显示染色特异性，因为在野生型动物中未侦测到聚集物(图10)。另外，在Cpd.3或Cpd.8治疗的R6/2小鼠中计算的聚集物数量相对于媒剂对照组无变化。但mutHTT聚集物的捕捉在Cpd.8治疗的动物中略微(但不显著)减少且在Cpd.3治疗的动物中减少40％(图10)。此聚集物减少可影响HD患者的疾病进展。

Claims (7)

1.选自5-(4-(3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-6-(3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-1,3,5-三嗪-2-基)-4-(二氟甲基)吡啶-2-胺和(S)-4-(二氟甲基)-5-(4-(3-甲基吗啉代)-6-吗啉代-1,3,5-三嗪-2-基)吡啶-2-胺的化合物及其药学上可接受的盐在制造用于预防或治疗受试者的神经病症的药剂中的用途，其中所述神经病症为癫痫症或亨廷顿氏病。
2.根据权利要求1所述的用途，其中，所述化合物为
5-(4-(3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-6-(3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-1,3,5-三嗪-2-基)-4-(二氟甲基)吡啶-2-胺；
以及药学上可接受的盐。
3.根据权利要求1所述的用途，其中所述化合物为
(S)-4-(二氟甲基)-5-(4-(3-甲基吗啉代)-6-吗啉代-1,3,5-三嗪-2-基)吡啶-2-胺；
以及药学上可接受的盐。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的用途，其中，所述神经病症为亨廷顿氏病。
5.根据权利要求1至3中任一项所述的用途，其中，所述神经病症为癫痫症。
6.根据权利要求5所述的用途，其中，所述癫痫症为症状性癫痫症，并且其中所述症状性癫痫症由脑损伤、脑肿瘤、脑感染、肾上腺脑白质营养不良、罗斯苗逊症候群、斯特奇-韦伯症候群、巨脑症、羊水过多症、结节性硬化复合征（TSC）、症状性癫痫症症候群、PMSE、PTEN突变或局灶性皮质发育不良（FCD）引起。
7.根据权利要求5所述的用途，其中，所述癫痫症为症状性癫痫症，其中，所述症状性癫痫症由以mTOR的向上调控为特征的疾病引起。
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