ES2863250T3 - Tratamiento de trastornos neurológicos - Google Patents

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Wolfgang Löscher
Claudia Brandt
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Abstract

Un compuesto de Fórmula (I), **(Ver fórmula)** en donde X1, X2 y X3 son independientemente entre sí, N o CH; con la condición de que al menos dos de X1, X2 y X3 sean N; Y es N o CH; R1 y R2 son independientemente entre sí un morfolinilo de Fórmula (II) **(Ver fórmula)** en donde la flecha indica el enlace en la Fórmula (I); y en donde R3 y R4 son independientemente entre sí H, C1-C3alquilo opcionalmente sustituido con uno o dos OH, C1-C2fluoroalquilo, C1-C2alcoxi, C1-C2alcoxiC1-C3alquilo, CN, o C(O)O-C1-C2alquilo; o R3 y R4 forman juntos un residuo bivalente -R5R6- seleccionado de C1-C3alquileno opcionalmente sustituido con 1 a 4 F, - CH2-O-CH2-, -CH2-NH-CH2- o cualquiera de las estructuras **(Ver fórmula)** en donde las flechas indican los enlaces en la Fórmula (II); o (ii) un anillo heterocíclico saturado de 6 miembros Z seleccionado de tiomorfolinilo y piperazinilo, opcionalmente sustituido con 1 a 3 R7; en donde R7 es independientemente en cada aparición C1-C3alquilo opcionalmente sustituido con uno o dos OH, C1-C2fluoroalquilo, C1-C2alcoxiC1- C3alquilo, C3-C6cicloalquilo; o dos sustituyentes R7 forman juntos un residuo bivalente -R8R9- seleccionado de C1-C3alquileno opcionalmente sustituido con 1 a 4 F, -CH2-O-CH2- o -O- CH2CH2-O-; con la condición de que al menos uno de R1 y R2 sea un morfolinilo de Fórmula II; y tautómeros, solvatos y sus sales farmacéuticamente aceptables, para su uso en la prevención o tratamiento de un trastorno neurológico en un sujeto.

Description

DESCRIPCIÓN
Tratamiento de trastornos neurológicos
La presente invención se refiere a composiciones para su uso en la prevención o el tratamiento de un trastorno neurológico en un sujeto.
Técnica relacionado
La proteína quinasa mTOR (objetivo de la rapamicina en mamíferos) es un factor integrador en el metabolismo energético, diferenciación, crecimiento y la supervivencia de la célula. Además, mTOR tiene funciones críticas en mecanismos específicos del cerebro tales como la plasticidad sináptica, el aprendizaje y el desarrollo cortical (Wong, M., Biomed J, 2013. 36(2): pág. 40-50). La vía de señalización de mTOR se activa en muchas enfermedades. Particularmente, varios trastornos neurológicos tales como la enfermedad de Huntington y los ataques epilépticos se han relacionado con la vía fosfatidilinositol-3-quinasa (PI3K)/mTOR.
Los inhibidores de mTOR disponibles hasta ahora, tales como la rapamicina, un antibiótico macrólido con potencia inmunosupresora y antiinflamatoria, y los rapálogos estrechamente relacionados se unen alostéricamente al bolsillo de unión a FKBP de mTORC1 (Laplante, M. y DM Sabatini, Cell, 2012. 149(2): pág. 274-93.). Los efectores descendentes prominentes de mTOR son la quinasa S6 (S6K), la proteína ribosómica S6 (S6rP) y la proteína de unión a 4E (4E-BP). Los efectos inhibidores sobre mTORC2 parecen insignificantes, lo que resulta en una inhibición parcial de los efectos de mTOR en trastornos neurológicos. Además, estos compuestos muestran propiedades fisicoquímicas indeseables. Se ha desarrollado una primera generación de inhibidores de mTOR dirigidos al sitio ATP como INK128. Estos inhibidores inhiben mTORC1 y mTORC2 y bloquean todas las funciones de mTOR pero, por otro lado, carecen de una alta especificidad del objetivo, lo que podría resultar en una menor tolerabilidad. Además, un perfil farmacocinético no favorable limita la penetración a través de la barrera hematoencefálica y, por tanto, la inhibición del objetivo en el SNC, que es necesaria para el tratamiento de los trastornos del SNC.
La agregación de proteínas puede conducir a diversas enfermedades. Ciertas proteínas son tóxicas en el sistema nervioso central (SNC) a pesar de que se expresan de forma ubicua. Estas enfermedades neurodegenerativas incluyen trastornos en los que las proteínas patológicas pueden acumularse dentro del núcleo, como es el caso de las enfermedades de expansión de poliglutaminas (tales como la enfermedad de Huntington y las ataxias espinocerebelosas), trastornos caracterizados por inclusiones citoplasmáticas (tales como a-sinucleína en la enfermedad de Parkinson), así como trastornos en los que las proteínas patológicas se acumulan extracelularmente (por ejemplo, en enfermedades priónicas) o tanto intracelularmente como extracelularmente (por ejemplo, tau y pamiloide) -(Ap) en la enfermedad de Alzheimer) (Aguzzi, A. y T. O'Connor, Nat Rev Drug Discov, 2010. 9(3): pág. 237­ 248).
La enfermedad de Huntington, un trastorno autosómico dominante, implica una neurodegeneración relativamente selectiva en los ganglios basales y la corteza, relacionada con la expansión por repetición de trinucleótidos de la poliglutamina en la proteína huntingtina (HTT). La proteína huntingtina mutante (mHTT) no se elimina eficazmente de las neuronas, lo que conduce a la acumulación de agregados intracelulares tóxicos y la muerte neuronal asociada. Reducir los niveles de mHTT o transformar mHTT en especies menos tóxicas son las estrategias más prometedoras para el desarrollo de terapias eficaces. Además de los enfoques de silenciamiento del gen HTT, se han iniciado intentos de mejorar el aclaramiento de la proteína mHTT, particularmente mediante autofagia (Nopoulos, PC, Dialogues Clin Neurosci, 2016. 18(1): pág. 91-98).
La autofagia es una vía celular a través de la cual proteínas y orgánulos dañados o patológicos se engullen por una vesícula autofagosoma de doble membrana, que se fusiona con el lisosoma, lo que lleva a la degradación de la carga (Nyfeler, B., y otros, Methods Mol Biol, 2012. 821: pág. 239-250.). La autofagia puede desempeñar un papel clave en las proteinopatías neurodegenerativas, tales como la enfermedad de Huntington, que se caracterizan por la acumulación de proteínas mal plegadas. También se ha demostrado que la autofagia alterada y la agregación de proteínas se relacionan con otros trastornos neurológicos, como la enfermedad de Alzheimer y Parkinson.
Se conoce que la activación de la vía de señalización del objetivo de rapamicina en mamíferos (mTOR) reduce la macroautofagia (Jung, CH, y otros, FEBS Lett, 2010. 584 (7): pág. 1287-95), y mHTT promueve la señalización de mTOR (Pryor, WM, y otros, Sci Signal, 2014. 7 (349): pág. ra103). En modelos de ratón y cerebros humanos de la enfermedad de Huntington, se ha demostrado que mTOR se secuestra en agregados de poliglutamina. Además, se ha demostrado que los inhibidores de mTOR mejoran la autofagia y, en consecuencia, reducen la acumulación de mHTT y la muerte neuronal asociada en modelos celulares y animales de la enfermedad de Huntington (Ravikumar B. y otros, Nat Genet, 2004. 36: pág. 585-595.; Floto RA y otros, Autophagy, 2007. 3: pág. 620-622). Los inhibidores alostéricos de mTOR (por ejemplo, rapamicina/rapálogos) median la eliminación de fragmentos de mHTT y protegen contra la toxicidad inducida por mHTT en células no neuronales estimulando la autofagia (Ravikumar, B. y otros, Hum Mol Genet, 2002. 11(9): pág. 1107-1117). Sin embargo, estudios recientes demostraron que los rapálogos son ineficaces para prevenir la neurodegeneración en el modelo de HD de ratón R6/2 (Fox, JH, y otros, Mol Neurodegener, 2010. 5: pág. 26).
En comparación con los inhibidores de mTOR alostéricos, recientemente se demostró que los inhibidores de mTOR catalíticos dirigidos al sitio de ATP son más potentes para inducir el flujo autofágico y reducir la acumulación de mHTT en células no neuronales (Roscic, A., y otros, J Neurochem, 2011. 119 (2): pág. 398-407), así como para reducir la acumulación de agregados de mHTT y la toxicidad, y previno la degeneración de neuronas espinosas medias en cortes de cerebro corticostriatales de ratones R6/2 (Proenca, CC, y otros, PLoS One, 2013. 8 (7): pág. e68357.). Desafortunadamente, los inhibidores catalíticos de mTOR actualmente disponibles carecen de suficiente penetración cerebral y podrían ser demasiado tóxicos para estudios de prueba de concepto (PoC) in vivo a largo plazo.
Los enfoques terapéuticos más avanzados hasta la fecha se basan en el silenciamiento del gen HTT con el uso de oligonucleótidos antisentido o ARNip mediante administración central. En el modelo animal de HD, estos enfoques han demostrado de manera convincente una fuerte reducción en la progresión de la enfermedad. Los desafíos clave actuales del enfoque antisentido es su administración central invasiva, así como si estas moléculas antisentido logran una propagación suficiente en el cerebro humano.
Entre los 50 millones de personas con epilepsia activada en todo el mundo, 30-40 % son resistentes a la terapia (Loscher, W. y otros, Nat Rev Drug Discov, 2013. 12(10): pág. 757-776.). Ejemplos de tratamiento estándar actual son el fenobarbital y el levetiracetam. El fenobarbital es un fármaco anticonvulsivo de primera generación con una eficacia anticonvulsiva pronunciada, pero también con efectos secundarios graves, como una fuerte sedación en pacientes humanos y modelos animales. El levetiracetam pertenece a los fármacos anticonvulsivos de segunda generación y es uno de los fármacos más usados en el tratamiento de la epilepsia.
Varios defectos genéticos asociados con la señalización elevada de mTOR (TORopatías) conducen a ataques epilépticos. Las convulsiones de TSC son una forma de epilepsia causada por una mutación de inactivación autosómica dominante de TSC1 o TSC2 que induce la activación constitutiva de mTOR que resulta en la formación de tumores benignos, retraso mental y convulsiones. En estudios clínicos, el tratamiento con everolimus redujo la frecuencia de las convulsiones en pacientes con TSC y en pacientes con SEGA asociado a TSC. Otras "TORopatías" que causan epilepsia son polihidramnios, megalencefalia, síndrome de epilepsia sintomática, PMSE, displasia cortical focal (FCD) y "TORopatías" asociadas con mutaciones de PTEN (Cardamone, M., y otros, J Pediatr, 2014. 164 (5): pág. 1195-200; Sadowski, K., y otros, Pharmacol Rep, 2015. 67 (3): pág. 636-46).
La epileptogénesis es el período entre la aparición de una agresión proepiléptica (por ejemplo, lesión cerebral o defecto genético) y la primera convulsión espontánea. Se han descrito muchos factores que se involucran en diferentes tipos de epileptogénesis, y la activación de mTOR es un factor que se ha observado en muchos tipos de epilepsias (Sadowski, K., K. Kotulska-Jozwiak, y S. Jozwiak, Pharmacol Rep, 2015). 67(3): pág. 636-46.). Todos los agentes supresores de convulsiones que se usan actualmente actúan sintomáticamente y no alteran la epileptogénesis. La activación de mTOR se involucra en diferentes procesos durante la epileptogénesis: crecimiento neuronal y formación de células neurales hipertróficas, inhibición de la autofagia y neuroinflamación. Además, hay datos que indican que el inhibidor de mTOR rapamicina influye en la epileptogénesis y el número/fuerza de las convulsiones en diferentes modelos animales de epilepsia.
Un gran inconveniente de las terapias actuales es la capacidad limitada o incluso la incapacidad de los inhibidores mTOR o mTOR/PI3K duales reportados para cruzar la barrera hematoencefálica (BBB), y mucho menos el potencial citotóxico de los compuestos del estado de la técnica, que hace lo mismo con un beneficio médico limitado para el tratamiento de trastornos neurológicos.
Resumen de la invención
Sorprendentemente, se ha descubierto ahora que los compuestos de la invención son útiles para el tratamiento de trastornos neurológicos. Particularmente, se ha encontrado que los compuestos de la presente invención son inhibidores específicos de mTOR o inhibidores duales de PI3K/mTOR y que son capaces de penetrar la barrera hematoencefálica, es decir, se ha encontrado que inhiben la vía PI3K/mTOR en el cerebro. Además, se ha descubierto sorprendentemente que los compuestos de la invención no son citotóxicos y están biodisponibles por vía oral. Particularmente, se ha descubierto sorprendentemente que los compuestos de la invención inducen autofagia in vitro e in vivo. Además, se ha descubierto que los compuestos de la invención reducen la formación de agregados de huntingtina mutantes neurotóxicos in vitro y reducen las convulsiones inducidas por electrochoque en ratones.
Debido a la eficacia probada en modelos preclínicos, los inhibidores de mTOR bien tolerados y que penetran la barrera hematoencefálica de la presente invención tienen el potencial de convertirse en candidatos clínicos para el tratamiento o la prevención de trastornos neurológicos, tales como la HD y la epilepsia, que son tan enfermedades muy devastadoras y, frecuentemente, mortales sin opciones de tratamiento.
Por tanto, en un primer aspecto de la invención, se proporciona un compuesto de fórmula (I),
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en donde
X1, X2 y X3 son, independientemente entre sí, N o CH; con la condición de que al menos dos de X1, X2 y X3 son N; Y es N o CH;
R1 y R2 son independientes entre sí
(i) un morfolinilo de fórmula (II)
Figure imgf000004_0002
en donde la flecha indica el enlace en la fórmula (I); y
en la que R3 y R4 son independientemente entre sí H, C1-C3 alquilo opcionalmente sustituido con uno o dos OH, C1-C2 fluoroalquilo, C1-C2 alcoxi, C1-2 alcoxi C1-C3 alquilo, CN o C(O) OC1-C2 alquilo; o R3 y R4 forman juntos un residuo bivalente -R5R6- seleccionado de C1-C3 alquileno opcionalmente sustituido con 1 a 4 F, -CH2-O-CH2-, -CH2-NH-CH2-, o cualquiera de las estructuras
Figure imgf000004_0004
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en donde las flechas indican los enlaces en la fórmula (II); o
(ii) un anillo heterocíclico saturado de 6 miembros Z seleccionado de tiomorfolinilo y piperazinilo, opcionalmente sustituido con 1 a 3 R7 ; en donde R7 es independientemente en cada aparición C1-C3 alquilo opcionalmente sustituido con uno o dos OH, C1-C2 fluoroalquilo, C1-C2 alcoxi C1-C3 alquilo, C3-C6 cicloalquilo; o dos sustituyentes R7 forman juntos un residuo bivalente -R8R9- seleccionado de C1-C3 alquileno opcionalmente sustituido con 1 a 4 F, -CH2-O-CH2- o -O-CH2CH2- O-;
con la condición de que al menos uno de R1 y R2 sea un morfolinilo de fórmula II;
y tautómeros, solvatos y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, para su uso en la prevención o el tratamiento de un trastorno neurológico en un sujeto.
Otros aspectos y modalidades de la presente invención resultarán evidentes a medida que continúe esta descripción.
Descripcion de figuras
Figura 1A: Análisis farmacocinético de niveles del Compuesto 3 ("Cpd. 3") en ratas Sprague Dawley (SD). Después de una única administración oral del Cpd. 3 (10 mg/kg), se analizaron muestras de tejido para determinar los niveles de compuesto en diferentes intervalos de tiempo mediante LC-MS. n=3
Figura 1B: Análisis farmacocinético de niveles del Cpd. 3 y Compuesto 8 (Cpd. 8) en ratones balb 6. Después de una única administración oral del Cpd. 3 o Cpd. 8 (50 mg/kg), se analizaron muestras de tejido para determinar los niveles de compuesto en diferentes intervalos de tiempo mediante LC-MS. n=3
Figura 2 A: Análisis farmacodinámico del Cpd. 3 administrado a ratones balb 6 en una sola aplicación oral de 50 mg/kg. Los lisados de cerebro se analizaron mediante membrana de Western. La señalización de mTOR se inhibe por el Cpd.3 como lo indica la reducción de la fosforilación de S6 en intervalo de tiempo entre 30 minutos y 8 horas.
La cuantificación de las bandas de membrana de Western muestra la importancia de la reducción de la vía de señalización de mTOR. n=3, análisis de varianza (ANOVA), *** p <0,0005, ** p <0,005, * p <0,05
Figura 2B: Análisis farmacodinámico del Cpd. 8 administrado a ratones balb 6 en una sola aplicación oral de 50 mg/kg. Los lisados de cerebro se analizaron mediante membrana de Western. La señalización de mTOR se inhibe por el Cpd. 8 como lo indica la reducción de la fosforilación de S6 en intervalos de tiempo entre 30 minutos y 8 horas. La cuantificación de las bandas de membrana de Western muestra la importancia de la reducción de la vía de señalización de mTOR. n=3, ANOVA, *** p <0,0005, ** p <0,005, * p <0,05
Figura 2C: Análisis farmacodinámico del Cpd. 3 administrado a ratones balb 6 en una sola aplicación oral de 50 mg/kg. Los lisados de los músculos del muslo se analizaron mediante membrana de Western. La señalización de mTOR se inhibe por el Cpd. 3 como lo indica la reducción de la fosforilación de S6 en intervalos de tiempo entre 30 minutos y 8 horas. La cuantificación de las bandas de membrana de Western muestra la importancia de la reducción de la vía de señalización de mTOR. n=3, ANOVA, *** p <0,0005, ** p <0,005, * p <0,05
Figura 2D: Análisis farmacodinámico del Cpd. 8 administrado a ratones balb 6 en una sola aplicación oral de 50 mg/kg. Los lisados de los músculos del muslo se analizaron mediante membrana de Western. La señalización de mTOR se inhibe por el Cpd. 8 como lo indica la reducción de la fosforilación de S6 en intervalos de tiempo entre 30 minutos y 8 horas. La cuantificación de las bandas de membrana de Western muestra la importancia de la reducción de la vía de señalización de mTOR. n=3, ANOVA, *** p <0,0005, ** p <0,005, * p <0,05
Figura 3A: Análisis de membrana de Western de cerebros de ratón lisados de ratones epilépticos pretratados con pilocarpina y sus homólogos no tratados. La señalización de mTOR se eleva en el modelo de estado epiléptico (SE) de pilocarpina. n=9 (ratones sin tratamiento previo), n=8 (ratones epilépticos), ANOVA * p <0,05 Figura 3B: El análisis de transferencia Western de cerebro de ratón lisado de ratones sin tratamiento previo y sin tratamiento previo con epilépticos/pilocarpina que se trataron con una única dosis oral del Compuesto 3 y 8 inhibió significativamente la fosforilación de S6 en el cerebro. Se observaron efectos más fuertes en ratones vírgenes. Everolimus no mostró una inhibición significativa de la señalización de mTOR en el cerebro. MEDIA 6 SEM, ANOVA, * p <0,05, # p <0,05, n=5
Figura 4: Después del tratamiento de ratones epilépticos y no epilépticos con inhibidores de mTOR, se realizó la prueba del umbral máximo de convulsiones por electrochoque (MEST) con fenobarbital o levetiracetam. Se observó un efecto antiepiléptico de los inhibidores.
Figura 4 A, B: MeSt de ratones vírgenes.
Figura 4 C, D: MEST de ratones epilépticos tratados con pilocarpina.
Feno = Fenobarbital, LEV = Levetiracetam, Evero = Everolimus, Rapa = Rapamicina, Corchetes: dosis proporcionada en mg/kg, tiempo de pretratamiento en h, vía de administración por vía oral (po) o intraperitoneal (ip). A, C: CC50 en mA 6 error estándar de la media (SEM); B, D: Cambio de CC50 en % al vehículo CC50, ANOVA y prueba post hoc de Dunnett, * p <0,05
Figura 5: Viabilidad celular y síntesis de proteínas de células estriatales inmortalizadas derivadas de un modelo de ratón con inserción génica que expresa HTT de longitud completa con 7 (STHdhQ7/Q7) o 111 repeticiones de CAG (STHdhQ111/Q111) después de la incubación con diferentes concentraciones de Cpd. 3 y Cpd. 8 y el inhibidor de mTORC1/2 INK 128 (Sapanisertib) (100 nM) y rapamicina (400 nM).
Figura 5 Ensayo de lactato deshidrogenasa (LDH) A+B en A: STHdhQ7/Q7. B: STHdhQ111/Q111. Ambos, Cpd. 3 y Cpd.
8 redujeron la producción de LDH en los intervalos de tiempo entre 24 horas y 48 horas; n=3-6
Figura 5 C+D Ensayo PrestoBlue que detecta la actividad mitocondrial de STHdhQ7/Q7 y STHdhQ111/Q111 en diferentes momentos después de la incubación con Cpd. 3, Cpd. 8 y compuestos de referencia INK128 (100 nM) y rapamicina (400 nM). Los compuestos se toleraron bien solo conduciendo a una ligera inhibición después de 72 horas de incubación con 1230 nM de Cpd. 3. n=6-9
ANOVA *** p <0,0005, ** p <0,005, * p <0,05
Figura 6: Inhibición de la vía de señalización de mTOR e inducción de autofagia en células STHdhQ7/Q7 y STHdhQ111/Q111 después del tratamiento con Cpd. 3 (200 nM, 400 nM, 1230 nM), Cpd. 8 (130 nM, 1230 nM), INK 128 (100 nM), rapamicina (400 nM) o control de DMSO durante 4 horas. Análisis de membrana de Western de lisados celulares.
Figura 6 A+B: La disminución en la fosforilación de las moléculas MTOR, S6rp y 4E-PB en la señalización mTOR, es dependiente de la concentración. n=3
Figura 6 C+D: Inducción de autofagia indicada por aumento de LC3-II. n=3
ANOVA *** p <0,0005, ** p <0,005, * p <0,05
Figura 7: Reducción de la formación de agregados de mHTT en células de riñón embrionario humano (HEK293) transfectadas con el exón 1 de mHTT con extensión Q51 o Q19, respectivamente.
Figura 7 A+B: Ensayo de trampa de filtro de células HEK293 lisadas transfectadas con el exón 1 de mHTT con un Q51 pretratado con Cpd. 8 (130 nM, 1230 nM), cpd. 3 (400 nM), 1230 nM), INK128 (100 nM), rapamicina (400 nM) o control DMSO y extensión Q19 tratada con control DMSO. El tratamiento con inhibidores de mTOR redujo significativamente la formación de agregados. n=3, ANOVA *** p <0,0005, ** p <0,005, * p <0,05
Figura 7 C+D: Inmunotinción de células HEK293 transfectadas con el exón 1 de mHTT con un Q51 pretratado con Cpd. 8 (130 nM, 1230 nM), cpd. 3 (400 nM), 1230 nM), INK128 (100 nM), rapamicina (400 nM) o control DMSO. Los agregados se contaron manualmente en 10000 células por muestra. ANOVA **** p <0,00005, *** p <0,0005, ** p <0,005, * p <0,05
Figura 8A: Inducción de autofagia en cerebros de ratones BALB/C 0,5 horas, 4 horas, 8 horas, respectivamente, después de una única administración oral de Cpd. 3, 50 mg/kg. Los lisados de cerebro se analizaron mediante transferencia Western. Los marcadores autofágicos LC3-II y p62 se alteraron en intervalos de tiempo entre 30 minutos y 8 horas. La cuantificación de las bandas de membrana de Western muestra la inducción de autofagia. n=3, ANOVA, *** p <0,0005, ** p <0,005, * p <0,05
Figura 8B: Inducción de autofagia en cerebros de ratones BALB/C después de una única administración oral de Cpd. 8, 50 mg/kg. Los lisados de cerebro se analizaron mediante transferencia Western. Los marcadores autofágicos LC3-II y p62 se alteraron en intervalos de tiempo entre 30 minutos y 8 horas. La cuantificación de las bandas de membrana de Western muestra la inducción de autofagia. n=3, ANOVA, *** p <0,0005, ** p <0,005, * p <0,05.
Figura 9A: Peso corporal de ratones TSC1 GFAP tratados con vehículo, Cpd. R, Cpd. 3 y Cpd. 8 en diferentes días posnatales antes (P21) y durante el tratamiento (P22-P50). Media 6 SEM. Como algunos animales murieron durante el período de observación, n varió entre 6 y 14.
Figura 9B: Efectos de regímenes de tratamiento específicos sobre convulsiones electrográficas espontáneas en ratones Tsc1 GFAP. Cpd. 3 y Cpd. 8 reducen fuertemente las convulsiones espontáneas mientras que la molécula de referencia Cpd. R tuvo un efecto más débil. Los datos se presentan como media ± SEM (N=27-48 grabaciones/grupo) para cada semana de prueba. La significación estadística se marca por una p <0,05 ajustada por multiplicidad con el vehículo como comparador (prueba no paramétrica de Wilcoxon).
Figura 10: Análisis IHC de estriados de ratones R6/2 y un animal silvestre. Los ratones se trataron con vehículo, Cpd. 3 y Cpd.8 durante 11,5 semanas y se seccionaron los estriados. Después de teñir los agregados mutHTT, se contó el número de agregados y se analizó el área de los agregados en 4 muestras. Si bien el número de agregados mutHTT se mantuvo sin cambios, el área cubierta por estos agregados se redujo significativamente después del tratamiento de Cpd. 3 que indica que los agregados de mutHTT fueron más pequeños después del tratamiento. (ANOVA, p <0,05)
Descripción detallada de la invención
Ahora se hará referencia en detalle a los aspectos presentados y adicionales y las modalidades presentadas y adicionales de la invención, ejemplos de los cuales se ilustran en las estructuras y fórmulas adjuntas. Si bien la invención se describirá junto con las modalidades enumeradas, se entenderá que no se pretende que limiten la invención a esas modalidades.
A menos que se defina de cualquier otra forma, todos los términos técnicos y científicos usados en la presente descripción tienen los mismos significados que los entendidos comúnmente por un experto en la técnica a la que pertenece esta invención.
Para los propósitos de interpretar esta especificación, se aplicarán las siguientes definiciones y cuando sea apropiado, los términos usados en singular también incluirán el plural y viceversa. Debe entenderse que la terminología usada en la presente descripción tiene el propósito de describir modalidades particulares únicamente y no pretende ser limitante.
Definiciones:
Los términos "que comprende", "que tiene", y "que incluye" deben interpretarse como términos abiertos (es decir, que significa "que incluye, pero no se limita a") a menos que se indique de cualquier otra forma.
Los términos "individuo", "sujeto" o "paciente" se usan en la presente descripción indistintamente. En una modalidad preferida, el sujeto es un ser humano.
Los términos "tratamiento"/"tratar" como se usan en la presente descripción incluyen: (1) prevenir o retrasar la aparición de síntomas clínicos del estado, trastorno o afección que se desarrolla en un sujeto que puede estar afligido o predispuesto al estado, trastorno o afección pero aún no experimenta ni muestra síntomas clínicos o subclínicos del estado, trastorno o afección; (2 ) inhibir el estado, trastorno o afección (por ejemplo, detener, reducir o retrasar el desarrollo de la enfermedad, o una recaída de la misma en caso de tratamiento de mantenimiento, de al menos un síntoma clínico o subclínico de la misma); y/o (3) aliviar la afección (es decir, provocar la regresión del estado, trastorno o afección o al menos uno de sus síntomas clínicos o subclínicos). El beneficio para un paciente que se trata es ya sea estadísticamente significativo o al menos perceptible para el paciente o el médico. Sin embargo, se apreciará que cuando se administra un medicamento a un paciente para tratar una enfermedad, el resultado puede no ser siempre un tratamiento eficaz. En una modalidad, los términos "tratamiento"/"tratar" como se usan en la presente descripción, se refieren a un tratamiento terapéutico. En otra modalidad, los términos "tratamiento'V'tratar" como se usan en la presente descripción, se refieren a un tratamiento profiláctico.
El término "quiral" se refiere a moléculas que tienen la propiedad de no superponerse a la pareja de imagen especular, mientras que el término "aquiral" se refiere a moléculas que pueden superponerse sobre su pareja de imagen especular.
El término "estereoisómeros" se refiere a compuestos que tienen una constitución química idéntica, pero que difieren con respecto a la disposición de los átomos o grupos en el espacio.
"Diastereómero" se refiere a un estereoisómero con dos o más centros de quiralidad en el que los compuestos no son imágenes especulares entre sí. Los diastereómeros tienen diferentes propiedades físicas, por ejemplo, puntos de fusión, puntos de ebullición, propiedades espectrales, y reactividades químicas y biológicas. Las mezclas de diastereómeros pueden separarse mediante procedimientos analíticos de alta resolución, tales como electroforesis y cromatografía.
Los "enantiómeros" se refieren a dos estereoisómeros de un compuesto que son imágenes especulares no superponibles entre sí. Las definiciones y convenciones estereoquímicas usadas en la presente descripción siguen generalmente a SP Parker, Ed., Diccionario de términos químicos McRaw-Hiff (1984), McGraw-Hill Book Company, Nueva York; y Eliel, E. y Wilen, S., "Stereochemistry of Organic Compounds", John Wiley & Sons, Inc., Nueva York, 1994. Los compuestos de la invención pueden contener centros asimétricos o quirales y, por tanto, existen en diferentes formas estereoisoméricas. Se pretende que todas las formas estereoisoméricas de los compuestos de la invención, que incluyen pero no se limitan a, diastereómeros, enantiómeros y atropisómeros, así como mezclas de los mismos, tales como mezclas racémicas, formen parte de la presente invención. Muchos compuestos orgánicos existen en formas ópticamente activas, es decir, tienen la capacidad de rotar el plano de la luz polarizada en el plano. Al describir un compuesto ópticamente activo, los prefijos D y L, o R y S, se usan para indicar la configuración absoluta de la molécula alrededor de su(s) centro(s) quirales. Los prefijos d y 1 o (+) y (-) se emplean para designar el signo de rotación de la luz polarizada en el plano por el compuesto, con (-) o 1 que significa que el compuesto es levógiro. Un compuesto con el prefijo (+) o d es dextrorrotatorio. Para una estructura química dada, estos estereoisómeros son idénticos excepto que son imágenes especulares entre sí. Un estereoisómero específico también puede denominarse enantiómero, y una mezcla de tales isómeros frecuentemente se denomina mezcla enantiomérica o escalémica. Una mezcla 50:50 de enantiómeros se denomina mezcla racémica o un racemato. El término "tautómero" o "forma tautomérica" se refiere a isómeros estructurales de diferentes energías, que son interconvertibles a través de una barrera de baja energía. Por ejemplo, los tautómeros de protones incluyen interconversiones a través de la migración de un protón, tales como las isomerizaciones de ceto-enol e imina-enamina.
La frase "sal farmacéuticamente aceptable" como se usa en la presente descripción, se refiere a sales orgánicas o inorgánicas farmacéuticamente aceptables de un compuesto de la invención, particularmente sales de adición de ácido. Las sales ilustrativas incluyen, pero no se limitan a, sales de sulfato, citrato, acetato, oxalato, cloruro, bromuro, yoduro, nitrato, bisulfato, fosfato, fosfato ácido, isonicotinato, lactato, salicilato, citrato ácido, tartrato, oleato, tanato, pantotenato, bitartrato, ascorbato, succinato, maleato, gentisinato, fumarato, gluconato, glucuronato, sacarato, formiato, benzoato, glutamato, metanosulfonato (mesilato), etanosulfonato, bencenosulfonato, p-toluenosulfonato y pamoato. Una sal farmacéuticamente aceptable puede implicar la inclusión de otra molécula tal como un ion acetato, un ion succinato u otro contraión. El contraión puede ser cualquier porción orgánica o inorgánica que estabilice la carga del compuesto original. Además, una sal farmacéuticamente aceptable puede tener más de un átomo cargado en su estructura. Los casos en los que múltiples átomos cargados son parte de la sal farmacéuticamente aceptable pueden tener múltiples contraiones. Por tanto, una sal farmacéuticamente aceptable puede tener uno o más átomos cargados y/o uno o más contraiones.
Si el compuesto de la invención es una base, la sal farmacéuticamente aceptable deseada puede prepararse mediante cualquier método adecuado disponible en la técnica, por ejemplo, tratamiento de la base libre con un ácido inorgánico, tal como ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido sulfúrico, ácido nítrico, ácido metanosulfónico, ácido fosfórico y similares, o con un ácido orgánico, tal como ácido acético, ácido trifluoroacético, ácido maleico, ácido succínico, ácido mandélico, ácido fumárico, ácido malónico, ácido pirúvico, ácido oxálico, ácido glicólico, ácido salicílico, un ácido piranosidílico, tal como ácido glucurónico o ácido galacturónico, un alfa hidroxiácido, tal como ácido cítrico o ácido tartárico, un aminoácido, tal como ácido aspártico o ácido glutámico, un ácido aromático, tal como ácido benzoico o ácido cinámico, un ácido sulfónico, tal como ácido p-toluensulfónico o ácido etanosulfónico, o similares.
La frase "farmacéuticamente aceptable" indica que la sustancia o composición debe ser compatible química y/o toxicológicamente, con los otros ingredientes que comprenden una formulación y/o el mamífero que se está tratando con la misma.
Un "solvato" se refiere a una asociación o complejo de una o más moléculas de disolvente y un compuesto de la invención. Los ejemplos de disolventes que forman solvatos incluyen, pero no se limitan a, agua, isopropanol, etanol, metanol, dimetilsulfóxido (DMSO), acetato de etilo, ácido acético, y etanolamina. El término "hidrato" se refiere al complejo en el que la molécula de disolvente es agua.
El término "grupo protector" se refiere a un sustituyente que se emplea comúnmente para bloquear o proteger una funcionalidad particular durante la reacción de otros grupos funcionales en el compuesto. Por ejemplo, un "grupo protector de amino" es un sustituyente unido a un grupo amino que bloquea o protege la funcionalidad amino en el compuesto. Los grupos protectores de amino adecuados incluyen acetilo, trifluoroacetilo, ferc-butoxicarbonilo (BOC), benciloxicarbonilo y 9-fluorenil-metilenoxicarbonilo (Fmoc). Para una descripción general de los grupos protectores y su uso, ver TW Greene, Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley & Sons, Nueva York, 1991.
Los términos "compuesto de esta invención" y "compuestos de la presente invención" y "compuestos de fórmula (I)" incluyen estereoisómeros, isómeros geométricos, tautómeros, solvatos, sales farmacéuticamente aceptables, y solvatos de las sales de los mismos.
El término "mamífero" incluye, pero no se limita a, seres humanos, ratones, ratas, cobayas, monos, perros, gatos, caballos, vacas, cerdos, y ovejas. El término "mamífero", como se usa en la presente descripción, se refiere preferentemente a seres humanos.
Los términos "enfermedad de Alzheimer" y "morbus Alzheimer" se usan en la presente descripción indistintamente.
El término "trastorno neurológico" se refiere generalmente a un trastorno que afecta al sistema nervioso, que incluye el sistema nervioso central y el sistema nervioso periférico. Los trastornos neurológicos, particularmente los trastornos del sistema nervioso central (SNC), abarcan numerosas afecciones, que incluyen, entre otras, enfermedades neurodegenerativas, tales como la enfermedad de Huntington, y un gran número de disfunciones del sistema nervioso central, tal como la epilepsia.
El término "enfermedad neurodegenerativa" se refiere a una enfermedad que es causada por daño al sistema nervioso central y puede identificarse por disfunción progresiva, degeneración y muerte de poblaciones específicas de neuronas que frecuentemente se interconectan sinápticamente. La neurodegeneración causa disfunción del movimiento y/o función mental. Además, el término "enfermedad neurodegenerativa", como se usa en la presente descripción, describe enfermedades neurodegenerativas que se asocian con o son causadas por un plegamiento incorrecto y/o agregación de proteínas. Las enfermedades neurodegenerativas ilustrativas incluyen enfermedad de Huntington, ataxias espinocerebelosas, enfermedad de Parkinson, morbus Alzheimer, esclerosis lateral amiotrófica (ALS), fibrosis quística, polineuropatía amiloidótica familiar, encefalopatías espongiformes, demencia con cuerpos de Lewy, demencia frontotemporal con parkinsonismo, ataxias espinocerebrales, atrofia muscular bulbar y espinal, atrofia hereditaria dentato-rubro-pálido-luisiana, demencia británica familiar, demencia danesa familiar y enfermedad priónica.
Los términos "epilepsia" como se usan en la presente descripción se refieren a cualquier trastorno neurológico crónico caracterizado por convulsiones recurrentes. Cada convulsión puede parecer no provocada o puede ser desencadenada o provocada por estrés, ansiedad, falta de sueño, enfermedad, exposición química (por ejemplo, abuso de fármacos o consumo de alcohol), estimulación fótica (por ejemplo, una luz intermitente/parpadeante) y/o similares. El trastorno puede tener una causa desconocida ("epilepsia idiopática") o puede ser causado, por ejemplo, por un traumatismo craneoencefálico, un tumor cerebral, una predisposición genética, una infección, un defecto del desarrollo o cualquier combinación de los mismos, entre otros ("epilepsia sintomática"). Los tipos ilustrativos de ataques epilépticos incluyen ataques de inicio parcial o focal, que se localizan (al menos inicialmente) dentro del cerebro, y ataques generalizados, que se distribuyen ampliamente dentro del cerebro. Las convulsiones parciales pueden clasificarse además como convulsiones parciales simples, que no afectan la conciencia, y convulsiones parciales complejas, que sí afectan la conciencia. Las convulsiones generalizadas, que producen pérdida del conocimiento, pueden incluir convulsiones de ausencia, atónicas, clónicas, mioclónicas, tónicas, y tónico-clónicas, entre otras. La epilepsia y/o un ataque epiléptico pueden diagnosticarse mediante cualquier técnica adecuada o combinación de técnicas, que incluyen la electroencefalografía (EEG), magnetoencefalografía, resonancia magnética (MRI), tomografía por emisión de positrones (PET), tomografía computarizada por emisión de fotón único (SPECT), o video-EEG, entre otros.
El término "convulsión", como se usa en la presente descripción, significa un evento neurológico caracterizado por una actividad eléctrica anormal en el cerebro que resulta en al menos un síntoma clínico. La actividad eléctrica puede caracterizarse por hipersincronía, hiperactividad y/o hiperexcitabilidad de las neuronas en una parte o en todo el cerebro. Los síntomas ilustrativos producidos por convulsiones pueden incluir contracción muscular repentina e involuntaria (por ejemplo, convulsiones), entumecimiento de una parte o de todo el cuerpo, pérdida de memoria, pérdida de conciencia, incapacidad para concentrarse, alucinaciones y/o similares. Por tanto, las convulsiones pueden afectar la función motora, autónoma, cognitiva, sensorial (visual, auditiva, olfativa, gustativa, táctil) y/o emocional, entre otras. Cada ataque puede caracterizarse como un ataque epiléptico, producido por la epilepsia, o un ataque no epiléptico con cualquier otra causa.
Como se indicó anteriormente, la clasificación de la epilepsia como "sintomática" indica que existe una causa probable y puede probarse un curso específico de terapia para eliminar esa causa, mientras que la clasificación como "idiopática" indica que no se puede encontrar una causa obvia.
El término "TSC" se refiere a una forma de epilepsia causada por una mutación de inactivación autosómica dominante de TSC1 o TSC2 que induce la activación constitutiva de mTOR lo que resulta en la formación de tumores benignos, retraso mental y convulsiones. Por lo tanto, el TSC es una forma modelo de epilepsia para investigar los efectos de los inhibidores de mTOR sobre la epileptogénesis y las convulsiones epilépticas. Los astrocitomas subependimarios de células gigantes (SEGA) se desarrollan en el 90 % de los pacientes con TSC. En el cerebro, las alteraciones del desarrollo y la función celular normales pueden provocar epilepsia y déficits neurocognitivos, conductuales, y psiquiátricos. La epilepsia ocurre en el 80-90 % de los pacientes con t Sc y la resistencia a los fármacos es común (Curatolo, P., R. Moavero y PJ de Vries, The Lancet Neurology. 14(7): pág. 733-745). La inhibición de mTOR con rapamicina tiene efectos positivos sobre el comportamiento, reduce la formación de tumores y suprime las convulsiones en modelos de ratón TSC. El tratamiento temprano con rapamicina previene el desarrollo de epilepsia y muerte prematura (Meikle, L., y otros, J Neurosci, 2008. 28(21): pág. 5422-5432). Un breve tratamiento con rapamicina en ratones adultos rescató no solo la plasticidad sináptica, sino también los déficits conductuales de un modelo heterocigoto de TSC (Ehninger, D., y otros, Nat Med, 2008. 14(8): pág. 843-848.). Además, el tratamiento con rapamicina podría revertir las anomalías celulares de las neuronas con mutación TSC (Goto, J., y otros, Proceedings of the National Academy of Sciences, 2011. 108(45): pág. E1070-E1079.).
Otras "TORopatías", es decir, enfermedades primarias que se deben a la regulación positiva de mTOR, que causan epilepsia son polihidramnios, megalencefalia, síndrome de epilepsia sintomática, PMSE, displasia cortical focal (FCD) y "TORopatías" asociadas con mutaciones de PTEN.
El término "PMSE" se refiere a polihidramnios, megalencefalia, y epilepsia sintomática, un síndrome raro que se encuentra en algunos niños Amish caracterizado por un cerebro anormalmente grande, discapacidad cognitiva, y epilepsia severa resistente al tratamiento.
El término "PTEN" se refiere al homólogo de fosfatasa y tensina, una fosfatasa que desfosforila el fosfato 3' del anillo de inositol en PIP3. PTEN es un supresor de tumores que suele mutar en el cáncer, lo que aumenta la señalización de la vía mTOR. La deleción de PTEn en el SNC puede asociarse con convulsiones.
El término "epileptogénesis" se refiere al período entre la aparición de una agresión proepiléptica (por ejemplo, lesión cerebral o defecto genético) y la primera convulsión espontánea. La "epileptogénesis" se divide en epileptogénesis primaria (hasta la primera convulsión) y epileptogénesis secundaria (progresión de la epilepsia después de la aparición de una primera convulsión). Los compuestos de la invención pueden usarse tanto durante la epileptogénesis primaria como durante la epileptogénesis secundaria (ataques parciales) así como en trastornos epilépticos completamente desarrollados (ataques generalizados).
Tratar la epilepsia significa, por ejemplo, suprimir una o más convulsiones y/o suprimir la actividad de las convulsiones, es decir, reducir la frecuencia de las convulsiones; para reducir la gravedad, extensión física y/o duración de al menos una convulsión; para prevenir sustancialmente al menos una convulsión; o ralentizar/reducir/impedir la epileptogénesis; o cualquier combinación de los mismos. La supresión de las convulsiones para un sujeto particularmente puede medirse directamente del sujeto (por ejemplo, si una convulsión está en progreso durante el tratamiento) y/o, más típicamente, puede ser un resultado predicho estadísticamente basado en los resultados de pruebas controladas o ensayos clínicos con un grupo de sujetos.
El término "cantidad eficaz" significa una cantidad de un compuesto de la presente invención que (i) trata o previene la enfermedad, afección o trastorno particular, (ii) atenúa, mejora, o elimina uno o más síntomas de la enfermedad particular, afección o trastorno, o (iii) previene o retrasa la aparición de uno o más síntomas de la enfermedad, afección o trastorno particular descrito en la presente descripción.
En caso de epilepsia, la cantidad eficaz del fármaco puede reducir la fuerza o el número de convulsiones, así como los eventos durante la epileptogénesis que conducen al desarrollo de la epilepsia.
En el caso de enfermedades neurodegenerativas, la cantidad eficaz del fármaco puede reducir la cantidad de agregados de proteínas en las neuronas u otras células y en el SNC en general, así como los síntomas cognitivos, psicológicos y motores asociados. Para la terapia de enfermedades neurodegenerativas, la eficacia puede medirse, por ejemplo, evaluando el número de agregados de proteínas, función cognitiva y motora.
El término "dosis máxima tolerada" (MTD) se refiere a la dosis más alta de un fármaco o tratamiento que no causa efectos secundarios inaceptables. Típicamente, la dosis máxima tolerada se determina en la especie que necesita tratarse, por ejemplo, en roedores o en humanos durante un ensayo clínico probando dosis crecientes en diferentes grupos de una especie dada hasta encontrar la dosis más alta con efectos secundarios aceptables. Se ha encontrado que los compuestos de la presente invención tienen una MTD dentro de su ventana terapéutica (ver los Ejemplos 3 y 4).
En un primer aspecto, la presente invención proporciona un compuesto de fórmula (I),
Figure imgf000009_0001
en donde
X1, X2 y X 3 son, independientemente entre sí, N o CH; con la condición de que al menos dos de X1, X2 y X3 sean N;
Y es N o CH;
R1 y R2 son independientes entre sí
(i) un morfolinilo de fórmula (II)
Figure imgf000010_0001
en donde la flecha indica el enlace en la fórmula (I); y
en la que R3 y R4 son independientemente entre sí H, C1-C3 alquilo opcionalmente sustituido con uno o dos OH, C1-C2 fluoroalquilo, C1-C2 alcoxi, C1-C2 alcoxi C1-C3 alquilo, c N, o C(O)OC1-C2 alquilo; o R3 y R4 forman juntos un residuo bivalente -R5R6- seleccionado de C1-C3 alquileno opcionalmente sustituido con 1 a 4 F, -CH2-O-CH2-, -CH2-NH-CH2-, o cualquiera de las estructuras
Figure imgf000010_0004
Figure imgf000010_0002
en donde las flechas indican los enlaces en la fórmula (II); o
(ii) un anillo heterocíclico saturado de 6 miembros Z seleccionado de tiomorfolinilo y piperazinilo, opcionalmente sustituido con 1 a 3 R7 ; en donde R7 es independientemente en cada aparición C1-C3 alquilo opcionalmente sustituido con uno o dos OH, C1-C2 fluoroalquilo, C1-C2 alcoxi C1-C3 alquilo, C3-C6 cicloalquilo; o dos sustituyentes R7 forman juntos un residuo bivalente -R8R9- seleccionado de C1-C3 alquileno opcionalmente sustituido con 1 a 4 F, -CH2-O-CH2- o -O-CH2CH2-O-;
con la condición de que al menos uno de R1 y R2 es un morfolinilo de fórmula II;
y tautómeros, solvatos y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, para su uso en la prevención o el tratamiento de un trastorno neurológico en un sujeto.
En otro aspecto, la invención proporciona un compuesto de fórmula (I),
Figure imgf000010_0003
en donde
X1, X2 y X3 son, independientemente entre sí, N o CH; con la condición de que al menos dos de X1, X2 y X3 son N; Y es N o CH;
R1 es 4-morfolinilo, 2-metil-4-morfolinilo, 3-metil-4-morfolinilo, octadeuterio-4-morfolinilo, 8-aza-3-oxabiciclo[3.2.1]oct-8-ilo o 3-aza-8-oxabiciclo[3.2.1]oct-3-ilo; y
R2 es 4-morfolinilo, 2-metil-4-morfolinilo, 3-metil-4-morfolinilo, octadeuterio-4-morfolinilo, 8-aza-3-oxabiciclo[3.2.1]oct-8-ilo, 3-aza-8-oxabiciclo[3.2.1]oct-3-ilo, piperazin-1-ilo, 4-metilpiperazin-1-ilo, o 4-tiomorfolinilo.
Cada porción alquilo, ya sea solo o como parte de un grupo más grande, tal como alcoxi, es una cadena lineal o ramificada y es preferentemente C1-C3 alquilo, con mayor preferencia C1-C2 alquilo. Los ejemplos incluyen particularmente metilo, etilo, n- propilo y prop-2-ilo (/so-propilo). Los ejemplos de un alcoxi incluyen particularmente metoxi, etoxi, n-propoxi e /so-propoxi. Como se describe en la presente descripción, alcoxi puede incluir sustituyentes adicionales tales como átomos de halógeno que conducen a porciones haloalcoxi.
El término "alcoxialquilo" se refiere a una porción RO-R' en el que los grupos R y R' son grupos alquilo como se define en la presente descripción. Los ejemplos incluyen metoximetilo, metoxietilo, etoxietilo y metoxipropilo.
Cada porción alquileno es una cadena lineal o ramificada y es, particularmente, por ejemplo, -CH2-, -CH2-CH2-, -CH(CHa)- -CH2-CH2-CH2-, -CH(CHa)-CH2-, o -CH(CH2CHa)-, preferentemente -CH2-, -CH2-CH2- o -CH(CHa)-.
Cada porción haloalquilo, ya sea solo o como parte de un grupo más grande, tal como haloalcoxi, es un grupo alquilo sustituido con uno o más átomos de halógeno iguales o diferentes. Las porciones haloalquilo incluyen, por ejemplo, de 1 a 5 sustituyentes halo, o de 1 a 3 sustituyentes halo. Los ejemplos incluyen particularmente fluorometilo, difluorometilo, trifluorometilo, clorodifluorometilo y 2 ,2 ,2-trifluoro-etilo.
Cada porción haloalquenilo solo o como parte de un grupo más grande tal como haloalqueniloxi es un grupo alquenilo sustituido con uno o más átomos de halógeno igual o diferente. Los ejemplos incluyen 2-difluoro-vinilo y 1,2-dicloro-2-fluoro-vinilo. Las porciones haloalquenilo incluyen, por ejemplo, de 1 a 5 sustituyentes halo, o de 1 a 3 sustituyentes halo.
Cada porción cicloalquilo puede estar en forma mono o bicíclica, típica y preferentemente en forma monocíclica, y preferentemente contiene de 3 a 6 átomos de carbono. Los ejemplos preferidos de grupos cicloalquilo monocíclicos incluyen particularmente ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo y ciclohexilo.
El término "anillo heterocíclico" se refiere a un anillo carbocíclico saturado o parcialmente insaturado que contiene de uno a tres heteroátomos seleccionados entre nitrógeno, oxígeno y azufre como miembros del anillo. Dichos anillos no contienen átomos de oxígeno adyacentes, átomos de azufre adyacentes o átomos de oxígeno y azufre adyacentes dentro del anillo. Los ejemplos preferidos incluyen particularmente tetrahidrofuranilo, pirrolidinilo, pirazolidinilo, imidazolidinilo, piperidinilo, piperazinilo, dioxanilo, morfolinilo, oxazolidinilo e isooxazolidinilo.
Cuando se dice que un grupo está opcionalmente sustituido, preferentemente hay opcionalmente 1-3 sustituyentes, con mayor preferencia opcionalmente 1-2 sustituyentes.
Ciertos compuestos de fórmula (I) pueden contener uno o dos o más centros de quiralidad y tales compuestos pueden proporcionarse como enantiómeros puros o diastereoisómeros puros así como mezclas de los mismos en cualquier relación. Los compuestos de la invención también incluyen todas las formas tautoméricas de los compuestos de fórmula (I).
En una modalidad preferida, la presente invención proporciona el compuesto de fórmula (I) como se define en la presente descripción y tautómeros, solvatos y sales farmacéuticamente aceptables del mismo
En otra modalidad preferida, la presente invención proporciona el compuesto de fórmula (I), en donde X1, X2 y X3 son N.
En otra modalidad preferida, (i) dicho X1 y dicho X2 son N, y dicho X3 es CH; (ii) dicho X1 y dicho X3 son N, y dicho X2 es CH; o (iii) dicho X2 y dicho X3 son N, y dicho X1 es CH, y preferentemente tautómeros, solvatos y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos. En otra modalidad, (i) dicho X1 y dicho X2 son N, y dicho X3 es CH; o (ii) dicho X2 y dicho X3 son N, y dicho X1 es CH, y preferentemente tautómeros, solvatos y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos. En otra modalidad preferida, dicho X1 y dicho X3 son N, y dicho X2 es CH; y preferentemente tautómeros, solvatos y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos.
En otra modalidad preferida, dicho Y es N, y preferentemente tautómeros, solvatos y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos. En otra modalidad preferida, dicho Y es CH, y preferentemente tautómeros, solvatos y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos.
En otra modalidad preferida, dicho R1 y dicho R2 se seleccionan independientemente entre sí de
Figure imgf000012_0001
Figure imgf000013_0001
En otra modalidad preferida, dicho R1 y dicho R2 se seleccionan independientemente entre sí de En otra modalidad preferida, dicho compuesto se selecciona de
4-(difluorometil)-5-(4,6-dimorfolino-1,3,5-triazin-2-il)piridin-2-amina;
4- (difluorometil)-5-(4,6-dimorfolino-1,3,5-triazin-2-il)pirimidin-2-amina;
5-(4-(3-oxa-8-azabicido[3.2.1]octan-8-il)-6-(3-oxa-8-azabicido [3.2.1]odan-8-il)-1,3,5-triazin-2-il)-4-(difluorometil)piridin-2-amina;
5-(4-(3-oxa-8-azabiciclo[3.2.1]octan-8-il)-6-morfolino-1,3,5-triazin-2-il)-4-(difluorometil)piridin-2-amina;
5-(4-(3-oxa-8-azabiddo[3.2.ljodan-8-il)-6-morfolino-1,3,5-triazin-2-il)-4-(difluorometil)pirimidin-2-amina;
5-(4,6-bis((S)-3-metilmorfolino)-1,3,5-triazin-2-il)-4-(difluorometil)piridin-2-amina;
5-(4,6-bis((S)-3-metilmorfolino)-1,3,5-triazin-2-il)-4-(difluorometil)pirimidin-2-amina;
(S)-4-(difluorometil)-5-(4-(3-metilmorfolino)-6-morfolino-1,3,5-triazin-2-il)piridin-2-amina;
(S)-4-(difluorometil)-5-(4-(3-metilmorfolino)-6-morfolino-1,3,5-triazin-2-il)pirimidin-2-amina;
5-(4-(3-oxa-8-azabiciclo[3.2.1]octan-8-il)-6-((S)-3-metilmorfolino)-1,3,5-triazin-2-il)-4-(difluorometil)piridin-2-amina; 5-(4-(3-oxa-8-azabiciclo[3.2.1]octan-8-il)-6-((s)-3-metilmorfolino)-1,3,5-triazin-2-il)-4-(difluorometil)pirimidin-2-amina;
4-(difluorometil) -5-(4-morfolino-6-(piperazin-1-il)-1,3,5-triazin-2-il)piridin-2-amina;
4-(difluorometil)-5-(4-morfolino-6-(piperazin-1-il)-1,3,5-triazin-2-il)pirimidin-2-amina;
(S)-4-(difluorometil)-5-(4-(3-metilmorfolino)-6-(piperazin-1-il)-1,3,5-triazin-2-il)piridin-2-amina;
(S)-4-(difluorometil)-5-(4-(3-metilmorfolino)-6-(piperazin-1-il)-1,3,5-triazin-2-il)pirimidin-2-amina;
4-(difluorometil)-5-(2,6-dimorfolinopirimidin-4-il)piridin-2-amina;
4'-(difluorometil)-2,6-dimorfolino-[4,5'-bipirimidin]-2'-amina;
4-(difluorometil)-5-(4,6-dimorfolinopirimidin-2-il)piridin-2-amina;
4'-(difluorometil)-4,6-dimorfolino-[2,5'-bipirimidin]-2'-amina;
4-(difluorometil)-5-(4-morfolino-6-tiomorfolino-1,3,5-triazin-2-il)piridin-2-amina;
4- (difluorometil)-5-(4-morfolino-6-tiomorfolino-1,3,5-triazin-2-il)pirimidin-2-amina;
5- (6-(3-oxa-8-azabiddo[3.2.1]odan-8-il)-2-(3-oxa-8-azabiddo[3.2.1]odan-8-N)piriiTiidin-4-N)-4-(difluorometil)piridin-2-amina;
5-(2-(3-oxa-8-azabicido[3.2.1]octan-8-il)-6-morfolinopirimidin-4-il)-4-(difluorometil)piridin-2-amina;
2-(3-oxa-8-azabicido[3.2.1]octan-8-il)-4'-(difluorometil)-6-morfolino-[4,5'-bipirimidin]-2'-amina;
5-(2,6-bis((S)-3-metilmorfolino)pirimidin-4-il)-4-(difluorometil)piridin-2-amina;
4'-(difluorometil)-2,6-bis((S)-3-metilmorfolino)-[4,5'-bipirimidin]-2'-amina;
(S)-4-(difluorometil)-5-(6-(3-metilmorfolino)-2-morfolinopirimidin-4-il)piridin-2-amina;
(S)-4'-(difluorometil)-6-(3-metilmorfolino)-2-morfolino-[4,5'-bipirimidin]-2'-amina;
5-(4-(8-Oxa-3-azabiddo[3.2.1]odan-3-il)-6-(8-oxa-3-azabiddo[3.2.1]odan-3-il)-1,3,5-triazin-2-il)-4-(difluorometil)piridin-2-amina;
5-[4,6-bis(2,2-dimetilmorfolin-4-il)-1,3,5-triazin-2-il]-4-(difluorometil)piridin-2-amina;
(S)-4-(difluorometil)-5-(2-(3-metilmorfolino)-6-morfolinopirimidin-4-il)piridin-2-amina;
(S)-4'-(difluorometil)-2-(3-metilmorfolino)-6-morfolino-[4,5'-bipirimidin]-2'-amina;
4- (difluorometil)-5-[4-[(2s,6R)-2,6-dimetilmorfolin-4-il]-6-[(3R)-3-metilmorfolin-4-il]-1,3,5-triazin-2-il]piridin-2-amina; 5- [4,6-bis[(2R,6S)-2,6-dimetilmorfolin-4-il]-1,3,5-triazin-2-il]-4-(difluorometil)piridin-2-amina;
5-[4,6-bis(3,7-dioxa-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-9-il)-1,3,5-triazin-2-il]-4-(difluorometil)piridin-2-amina;
4- (difluorometil)-5-[4-(3,7-dioxa-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-9-il)-6-(3-oxa-8-azabiciclo[3.2.1]octan-8-il)-1,3,5-triazin-2-il]piridin-2-amina;
5- [4,6-bis(3,3-dimetilmorfolin-4-il)-1,3,5-triazin-2-il]-4-(difluorometil)piridin-2-amina;
5-[4,6-bis[(3R,5S)-3,5-dimetilmorfolin-4-il]-1,3,5-triazin-2-il]-4-(difluorometil)piridin-2-amina;
5-[4,6-bis[(3R)-3-metilmorfolin-4-il]-1,3,5-triazin-2-il]-4-(difluorometil)piridin-2-amina;
4-(difluorometil)-5-[4-(3,3-dimetilmorfolin-4-il)-6-morfolino-1,3,5-triazin-2-il]piridin-2-amina;
4-(difluorometil)-5-[4-[(3R,5S)-3,5-dimetilmorfolin-4-il]-6-[(3R)-3-metilmorfolin-4-il]-1,3,5-triazin-2-il]piridin-2-amina; 4-(difluorometil)-5-[4-(3,3-dimetilmorfolin-4-il)-6-[(3R)-3-metilmorfolin-4-il]-1,3,5-triazin-2-il]piridin-2-amina;
4-(difluorometil)-5-[4-[(3R)-3-(metoximetil)morfolin-4-il]-6-[(3R)-3-metilmorfolin-4-il]-1,3,5-triazin-2-il]piridin-2-amina;
4-(difluorometil)-5-[4-(3,7-dioxa-9-azabiddo[3.3.1]nonan-9-il)-6-[(3R)-3-metilmorfolin-4-il]-1,3,5-triazin-2-il]piridin-2-amina;
4-(difluorometil)-5-[4-[(3R)-3-metilmorfolin-4-il]-6-(3-oxa-6-azabiddo[3.1.1]heptan-6-il)-1,3,5-triazin-2-il]piridin-2-amina;
4-(difluorometil)-5-[4-[(3R)-3-metilmorfolin-4-il]-6-(6-oxa-3-azabiddo[3.1.1]heptan-3-il)-1,3,5-triazin-2-il]piridin-2-amina;
4-(difluorometil)-5-[4-[(3R)-3-metilmorfolin-4-il]-6-[(1R,4R)-2-oxa-5-azabiddo[2.2.1]heptan-5-il]-1,3,5-triazin-2-il]piridin-2-amina;
4- (difluorometil)-5-[4-[(3R)-3-metilmorfolin-4-il]-6-[(1S,4S)-2-oxa-5-azabiddo[2.2.1]heptan-5-il]-1,3,5-triazin-2-il]piridin-2-amina;
5- [4,6-bis[(3R)-3-etilmorfolin-4-il]-1,3,5-triazin-2-il]-4-(difluorometil)piridin-2-amina;
5-[4,6-bis(8-oxa-5-azaspiro[3.5]nonan-5-il)-1,3,5-triazin-2-il]-4-(difluorometil)piridin-2-amina;
5-[4,6-bis[(3R)-3-isopropilmorfolin-4-il]-1,3,5-triazin-2-il]-4-(difluorometil)piridin-2-amina
4-(difluorometil)-5-[4-(3,3-dimetilmorfolin-4-il)-6-[(3R,5S)-3,5-dimetilmorfolin-4-il]-1,3,5-triazin-2-il]piridin-2-amina; 4-(d¡fluoromet¡l)-5-[4-(3,3-d¡met¡lmorfol¡n-4-¡l)-6-[(3R)-3-(methox¡met¡l)morfol¡n-4-¡l]-1,3,5-tr¡az¡n-2-¡l]p¡r¡d¡n-2-amina;
[(3R)-4-[4-[6-am¡no-4-(d¡fluoromet¡l)-3-p¡r¡d¡l]-6-(3,3-d¡met¡lmorfol¡n-4-¡l)-1,3,5-tr¡az¡n-2-¡l]morfol¡n-3-¡l]metanol; 4- (d¡fluoromet¡l)-5-[4-(3,3-d¡met¡lmorfol¡n-4-¡l)-6-(3,7-d¡oxa-9-azab¡c¡do[3.3.1]nonan-9-¡l)-1,3,5-tr¡az¡n-2-¡l]p¡r¡d¡n-2-am¡na;
5- [4-(4-c¡doprop¡lp¡peraz¡n-1-¡l)-6-(3,3-d¡met¡lmorfol¡n-4-¡l)-1,3,5-tr¡az¡n-2-¡l]-4-(d¡fluoromet¡l)p¡r¡d¡n-2-am¡na; 4-(d¡fluoromet¡l)-5-[4-(3,3-d¡met¡lmorfol¡n-4-¡l)-6-[4-(2-metox¡et¡l)p¡peraz¡n-1-¡l]-1,3,5-tr¡az¡n-2-¡l]p¡r¡d¡n-2-am¡na; [(3R)-4-[4-[6-am¡no-4-(d¡fluoromet¡l)-3-p¡r¡d¡l]-6-[(3R)-3-met¡lmorfol¡n-4-¡l]-1,3,5-tr¡az¡n-2-¡l]morfol¡n-3-¡l]metanol; 4-(d¡fluoromet¡l)-5-[4-[(3R,5R)-3,5-d¡met¡lmorfol¡n-4-¡l]-6-[(3R)-3-met¡lmorfol¡n-4-¡l]-1,3,5-tr¡az¡n-2-¡l]p¡r¡d¡n-2-am¡na; 4-(d¡fluoromet¡l)-5-[4-[(3S,5S)-3,5-d¡met¡lmorfol¡n-4-¡l]-6-[(3R)-3-met¡lmorfol¡n-4-¡l]-1,3,5-tr¡az¡n-2-¡l]p¡r¡d¡n-2-am¡na; 4-(d¡fluoromet¡l)-5-[4-morfol¡no-6-(3-oxa-9-azab¡ddo[3.3.1]nonan-9-¡l)-1,3,5-tr¡az¡n-2-¡l]p¡r¡d¡n-2-am¡na;
4- (d¡fluoromet¡l)-5-[4-(3,7-d¡oxa-9-azab¡c¡do[3.3.1]nonan-9-¡l)-6-(3-oxa-9-azab¡c¡do[3.3.1]nonan-9-¡l)-1,3,5-tr¡az¡n-2-¡l]p¡r¡d¡n-2-am¡na;
5- [4,6-b¡s[(3S,5S)-3,5-d¡met¡lmorfol¡n-4-¡l]-1,3,5-tr¡az¡n-2-¡l]-4-(d¡fluoromet¡l)p¡r¡d¡n-2-am¡na;
4-(d¡fluoromet¡l)-5-[4-(3,7-d¡oxa-9-azab¡c¡do[3.3.1]nonan-9-¡l)-6-morfol¡no-1,3,5-tr¡az¡n-2-¡l]p¡r¡d¡n-2-am¡na;
4-(d¡fluoromet¡l)-5-[4-[(3S)-3-et¡lmorfol¡n-4-¡l]-6-[(3R)-3-met¡lmorfol¡n-4-¡l]-1,3,5-tr¡az¡n-2-¡l]p¡r¡d¡n-2-am¡na;
4-(d¡fluoromet¡l)-5-[4-[(3R)-3-et¡lmorfol¡n-4-¡l]-6-[(3R)-3-met¡lmorfol¡n-4-¡l]-1,3,5-tr¡az¡n-2-¡l]p¡r¡d¡n-2-am¡na;
4-(d¡fluoromet¡l)-5-[4-[(3R)-3-met¡lmorfol¡n-4-¡l]-6-(8-oxa-5-azasp¡ro[3.5]nonan-5-¡l)-1,3,5-tr¡az¡n-2-¡l]p¡r¡d¡n-2-am¡na.
En otra modal¡dad prefer¡da, d¡cho compuesto se selecc¡ona de
4-(d¡fluoromet¡l)-5-(4,6-d¡morfol¡no-1,3,5-tr¡az¡n-2-¡l)p¡r¡d¡n-2-am¡na;
4- (d¡fluoromet¡l)-5-(4,6-d¡morfol¡no-1,3,5-tr¡az¡n-2-¡l)p¡r¡m¡d¡n-2-am¡na;
5- (4-(3-oxa-8-azab¡c¡do[3.2.1]octan-8-¡l)-6-(3-oxa-8-azab¡c¡do[3.2.1]octan-8-¡l)-1,3,5-tr¡az¡n-2-¡l)-4-(d¡fluoromet¡l)p¡r¡d¡n-2-am¡na;
5-(4-(3-oxa-8-azab¡ddo[3.2.1]octan-8-¡l)-6-morfol¡no-1,3,5-tr¡az¡n-2-¡l)-4-(d¡fluoromet¡l)p¡r¡d¡n-2-am¡na;
5-(4-(3-oxa-8-azab¡c¡do[3.2.l]octan-8-¡l)-6-morfol¡no-1,3,5-tr¡az¡n-2-¡l)-4-(d¡fluoromet¡l)p¡r¡m¡d¡n-2-am¡na;
5-(4,6-b¡s((S)-3-met¡lmorfol¡no)-1,3,5-tr¡az¡n-2-¡l)-4-(d¡fluoromet¡l)p¡r¡d¡n-2-am¡na;
5-(4,6-b¡s((S)-3-met¡lmorfol¡no)-1,3,5-tr¡az¡n-2-¡l)-4-(d¡fluoromet¡l)p¡r¡m¡d¡n-2-am¡na;
(S)-4-(d¡fluoromet¡l)-5-(4-(3-met¡lmorfol¡no)-6-morfol¡no-1,3,5-tr¡az¡n-2-¡l)p¡r¡d¡n-2-am¡na;
(S)-4-(d¡fluoromet¡l)-5-(4-(3-met¡lmorfol¡no)-6-morfol¡no-1,3,5-tr¡az¡n-2-¡l)p¡r¡m¡d¡n-2-am¡na;
5-(4-(3-oxa-8-azab¡c¡clo [3.2.1]octan-8-¡l)-6-((S)-3-met¡lmorfol¡no)-1,3,5-tr¡az¡n-2-¡l)-4-(d¡fluoromet¡l)p¡r¡d¡n-2-am¡na; 5-(4-(3-oxa-8-azab¡c¡do[3.2.1]octan-8-¡l)-6-((S)-3-met¡lmorfol¡no)-1,3,5-tr¡az¡n-2-¡l)-4-(d¡fluoromet¡l)p¡r¡m¡d¡n-2-am¡na;
4-(d¡fluoromet¡l)-5-(4-morfol¡no-6-(p¡peraz¡n-1-¡l)-1,3,5-tr¡az¡n-2-¡l)p¡r¡d¡n-2-am¡na;
4-(d¡fluoromet¡l)-5-(4-morfol¡no-6-(p¡peraz¡n-1-¡l)-1,3,5-tr¡az¡n-2-¡l)p¡r¡m¡d¡n-2-am¡na;
(S)-4-(d¡fluoromet¡l)-5-(4-(3-met¡lmorfol¡no)-6-(p¡peraz¡n-1-¡l)-1,3,5-tr¡az¡n-2-¡l)p¡r¡d¡n-2-am¡na;
(S)-4-(d¡fluoromet¡l)-5-(4-(3-met¡lmorfol¡no)-6-(p¡peraz¡n-1-¡l)-1,3,5-tr¡az¡n-2-¡l)p¡r¡m¡d¡n-2-am¡na;
4-(d¡fluoromet¡l)-5-(2,6-d¡morfol¡nop¡r¡m¡d¡n-4-¡l)p¡r¡d¡n-2-am¡na;
4'-(d¡fluoromet¡l)-2,6-d¡morfol¡no-[4,5'-b¡p¡r¡m¡d¡n]-2'-am¡na;
4-(d¡fluoromet¡l)-5-(4,6-d¡morfol¡nop¡r¡m¡d¡n-2-¡l)p¡r¡d¡n-2-am¡na;
4'-(d¡fluoromet¡l)-4,6-d¡morfol¡no-[2,5'-b¡p¡r¡m¡d¡n]-2'-am¡na;
4-(d¡fluoromet¡l)-5-(4-morfol¡no-6-t¡omorfol¡no-1,3,5-tr¡az¡n-2-¡l)p¡r¡d¡n-2-am¡na;
4- (d¡fluoromet¡l)-5-(4-morfol¡no-6-t¡omorfol¡no-1,3,5-tr¡az¡n-2-¡l)p¡r¡m¡d¡n-2-am¡na;
5- (6-(3-oxa-8-azab¡c¡do[3.2.1]octan-8-¡l)-2-(3-oxa-8-azab¡c¡do[3.2.1]octan-8-¡l)p¡r¡m¡d¡n-4-¡l)-4-(d¡fluoromet¡l)p¡r¡d¡n-2-am¡na;
5-(2-(3-oxa-8-azab¡c¡do[3.2.1]octan-8-¡l)-6-morfol¡nop¡r¡m¡d¡n-4-¡l)-4-(d¡fluoromet¡l)p¡r¡d¡n-2-am¡na;
2-(3-oxa-8-azab¡c¡do[3.2.1]octan-8-¡l)-4'-(d¡fluoromet¡l)-6-morfol¡no-[4,5'-b¡p¡r¡m¡d¡n]-2'-am¡na;
5-(2,6-b¡s((S)-3-met¡lmorfol¡no)p¡r¡m¡d¡n-4-¡l)-4-(d¡fluoromet¡l)p¡r¡d¡n-2-am¡na;
4'-(d¡fluoromet¡l)-2,6-b¡s((S)-3-met¡lmorfol¡no)-[4,5'-b¡p¡r¡m¡d¡n]-2'-am¡na;
(S)-4-(d¡fluoromet¡l)-5-(6-(3-met¡lmorfol¡no)-2-morfol¡nop¡r¡m¡d¡n-4-¡l)p¡r¡d¡n-2-am¡na;
(S)-4'-(d¡fluoromet¡l)-6-(3-met¡lmorfol¡no)-2-morfol¡no-[4,5'-b¡p¡r¡m¡d¡n]-2'-am¡na;
5-(4-(8-Oxa-3-azab¡c¡do[3.2.1]octan-3-¡l)-6-(8-oxa-3-azab¡c¡do[3.2.1]octan-3-¡l)-1,3,5-tr¡az¡n-2-¡l)-4-(d¡fluoromet¡l)p¡r¡d¡n-2-am¡na;
5-[4,6-b¡s(2,2-d¡met¡lmorfol¡n-4-¡l)-1,3,5-tr¡az¡n-2-¡l]-4-(d¡fluoromet¡l)p¡r¡d¡n-2-am¡na;
(S)-4-(d¡fluoromet¡l)-5-(2-(3-met¡lmorfol¡no)-6-morfol¡nop¡r¡m¡d¡n-4-¡l)p¡r¡d¡n-2-am¡na;
(S)-4'-(d¡fluoromet¡l)-2-(3-met¡lmorfol¡no)-6-morfol¡no-[4,5'-b¡p¡r¡m¡d¡n]-2'-am¡na;
4- (d¡fluoromet¡l)-5-[4-[(2s,6R)-2,6-d¡met¡lmorfol¡n-4-¡l]-6-[(3R)-3-met¡lmorfol¡n-4-¡l]-1,3,5-tr¡az¡n-2-¡l]p¡r¡d¡n-2-am¡na; 5- [4,6-b¡s[(2R,6S)-2,6-d¡met¡lmorfol¡n-4-¡l]-1,3,5-tr¡az¡n-2-¡l]-4-(d¡fluoromet¡l)p¡r¡d¡n-2-am¡na;
5-[4,6-b¡s(3,7-d¡oxa-9-azab¡c¡do[3.3.1]nonan-9-¡l)-1,3,5-tr¡az¡n-2-¡l]-4-(d¡fluoromet¡l)p¡r¡d¡n-2-am¡na;
4- (d¡fluoromet¡l)-5-[4-(3,7-d¡oxa-9-azab¡c¡do[3.3.1]nonan-9-¡l)-6-(3-oxa-8-azab¡c¡do[3.2.1]octan-8-¡l)-1,3,5-tr¡az¡n-2-¡l]p¡r¡d¡n-2-am¡na;
5- [4,6-b¡s(3,3-d¡met¡lmorfol¡n-4-¡l)-1,3,5-tr¡az¡n-2-¡l]-4-(d¡fluoromet¡l)p¡r¡d¡n-2-am¡na;
5-[4,6-b¡s[(3R,5S)-3,5-d¡met¡lmorfol¡n-4-¡l]-1,3,5-tr¡az¡n-2-¡l]-4-(d¡fluoromet¡l)p¡r¡d¡n-2-am¡na;
5-[4,6-b¡s[(3R)-3-met¡lmorfol¡n-4-¡l]-1,3,5-tr¡az¡n-2-¡l]-4-(d¡fluoromet¡l)p¡r¡d¡n-2-am¡na;
4-(d¡fluoromet¡l)-5-[4-(3,3-d¡met¡lmorfol¡n-4-¡l)-6-morfol¡no-1,3,5-tr¡az¡n-2-¡l]p¡r¡d¡n-2-am¡na;
4-(d¡fluoromet¡l)-5-[4-[(3R,5S)-3,5-d¡met¡lmorfol¡n-4-¡l]-6-[(3R)-3-met¡lmorfol¡n-4-¡l]-1,3,5-tr¡az¡n-2-¡l]p¡r¡d¡n-2-am¡na; 4-(d¡fluoromet¡l)-5-[4-(3,3-d¡met¡lmorfol¡n-4-¡l)-6-[(3R)-3-met¡lmorfol¡n-4-¡l]-1,3,5-tr¡az¡n-2-¡l]p¡r¡d¡n-2-am¡na;
4-(d¡fluoromet¡l)-5-[4-[(3R)-3-(metox¡met¡l)morfol¡n-4-¡l]-6-[(3R)-3-met¡lmorfol¡n-4-¡l]-1,3,5-tr¡az¡n-2-¡l]p¡r¡d¡n-2-am¡na;
4-(d¡fluoromet¡l)-5-[4-(3,7-d¡oxa-9-azab¡c¡do[3.3.1]nonan-9-¡l)-6-[(3R/)-3-met¡lmorfol¡n-4-¡l]-1,3,5-tr¡az¡n-2-¡l]p¡r¡d¡n-2-am¡na;
4- (d¡fluoromet¡l)-5-[4-(3,7-d¡oxa-9-azab¡c¡clo[3.3.1]nonan-9-¡l)-6-(3-oxa-9-azab¡c¡clo[3.3.1]nonan-9-¡l)-1,3,5-tr¡az¡n-2-¡l]p¡r¡d¡n-2-am¡na;
5- [4,6-b¡s[(3S,5S)-3,5-d¡met¡lmorfol¡n-4-¡l]-1,3,5-tr¡az¡n-2-¡l]-4-(d¡fluoromet¡l)p¡r¡d¡n-2-am¡na;
4-(d¡fluoromet¡l)-5-[4-(3,7-d¡oxa-9-azab¡c¡clo[3.3.1]nonan-9-¡l)-6-morfol¡no-1,3,5-tr¡az¡n-2-¡l]p¡r¡d¡na-2-am¡na;
4-(d¡fluoromet¡l)-5-[4-[(3S)-3-et¡lmorfol¡n-4-¡l]-6-[(3R)-3-met¡lmorfol¡n-4-¡l]-1,3,5-tr¡az¡n-2-¡l]p¡r¡d¡n-2-am¡na;
4-(d¡fluoromet¡l)-5-[4-[(3R)-3-et¡lmorfol¡n-4-¡l]-6-[(3R)-3-met¡lmorfol¡n-4-¡l]-1,3,5-tr¡az¡n-2-¡l]p¡r¡d¡n-2-am¡na;
4-(d¡fluoromet¡l)-5-[4-[(3R)-3-met¡lmorfol¡n-4-¡l]-6-(8-oxa-5-azasp¡ro[3.5]nonan-5-¡l)-1,3,5-tr¡az¡n-2-¡l]p¡r¡d¡n-2-am¡na;
En otra modal¡dad prefer¡da, d¡cho compuesto se selecc¡ona de
4- (d¡fluoromet¡l)-5-(4,6-d¡morfol¡no-1,3,5-tr¡az¡n-2-¡l)p¡r¡m¡d¡n-2-am¡na;
5- (4-(3-oxa-8-azab¡c¡clo[3.2.1]octan-8-¡l)-6-(3-oxa-8-azab¡c¡clo[3.2.1]octan-8-¡l)-1,3,5-tr¡az¡n-2-¡l)-4-(d¡fluoromet¡l)p¡r¡d¡n-2-am¡na;
5-(4-(3-oxa-8-azab¡c¡clo[3.2.1]octan-8-¡l)-6-morfol¡no-1,3,5-tr¡az¡n-2-¡l)-4-(d¡fluoromet¡l)p¡r¡d¡n-2-am¡na;
5-(4,6-b¡s((S)-3-met¡lmorfol¡no)-1,3,5-tr¡az¡n-2-¡l)-4-(d¡fluoromet¡l)p¡r¡m¡d¡n-2-am¡na;
(S)-4-(d¡fluoromet¡l)-5-(4-(3-met¡lmorfol¡no)-6-morfol¡no-1,3,5-tr¡az¡n-2-¡l)p¡r¡d¡n-2-am¡na;
4-(d¡fluoromet¡l)-5-(4-morfol¡no-6-(p¡peraz¡n-1-¡l)-1,3,5-tr¡az¡n-2-¡l)p¡r¡m¡d¡n-2-am¡na;
4- (d¡fluoromet¡l)-5-(4,6-d¡morfol¡no-1,3,5-tr¡az¡n-2-¡l)p¡r¡d¡n-2-am¡na; y
(S)-4-(d¡fluoromet¡l)-5-(4-(3-met¡lmorfol¡no)-6-morfol¡no-1,3,5-tr¡az¡n-2-¡l)p¡r¡m¡d¡n-2-am¡na;
5- [4,6-b¡s(3,7-d¡oxa-9-azab¡c¡clo[3.3.1]nonan-9-¡l)-1,3,5-tr¡az¡n-2-¡l]-4-(d¡fluoromet¡l)p¡r¡d¡n-2-am¡na;
4- (d¡fluoromet¡l)-5-[4-(3,7-d¡oxa-9-azab¡c¡clo[3.3.1]nonan-9-¡l)-6-(3-oxa-8-azab¡c¡clo[3.2.1]octan-8-¡l)-1,3,5-tr¡az¡n-2-¡l]p¡r¡d¡n-2-am¡na;
5- [4,6-b¡s(3,3-d¡met¡lmorfol¡n-4-¡l)-1,3,5-tr¡az¡n-2-¡l]-4-(d¡fluoromet¡l)p¡r¡d¡n-2-am¡na;
5-[4,6-b¡s[(3R,5S)-3,5-d¡met¡lmorfol¡n-4-¡l]-1,3,5-tr¡az¡n-2-¡l]-4-(d¡fluoromet¡l)p¡r¡d¡n-2-am¡na;
5-[4,6-b¡s[(3R)-3-met¡lmorfol¡n-4-¡l]-1,3,5-tr¡az¡n-2-¡l]-4-(d¡fluoromet¡l)p¡r¡d¡n-2-am¡na;
4-(d¡fluoromet¡l)-5-[4-(3,3-d¡met¡lmorfol¡n-4-¡l)-6-morfol¡no-1,3,5-tr¡az¡n-2-¡l]p¡r¡d¡n-2-am¡na;
4-(d¡fluoromet¡l)-5-[4-[(3R,5S)-3,5-d¡met¡lmorfol¡n-4-¡l]-6-[(3R)-3-met¡lmorfol¡n-4-¡l]-1,3,5-tr¡az¡n-2-¡l]p¡r¡d¡n-2-am¡na; 4-(d¡fluoromet¡l)-5-[4-(3,3-d¡met¡lmorfol¡n-4-¡l)-6-[(3R)-3-met¡lmorfol¡n-4-¡l]-1,3,5-tr¡az¡n-2-¡l]p¡r¡d¡n-2-am¡na;
4-(d¡fluoromet¡l)-5-[4-[(3R)-3-(metox¡met¡l)morfol¡n-4-¡l]-6-[(3R)-3-met¡lmorfol¡n-4-¡l]-1,3,5-tr¡az¡n-2-¡l]p¡r¡d¡n-2-am¡na;
4-(d¡fluoromet¡l)-5-[4-(3,7-d¡oxa-9-azab¡c¡do[3.3.1]nonan-9-¡l)-6-[(3R)-3-met¡lmorfol¡n-4-¡l]-1,3,5-tr¡az¡n-2-¡l]p¡r¡d¡n-2-am¡na;
4- (d¡fluoromet¡l)-5-[4-(3,7-d¡oxa-9-azab¡c¡clo[3.3.1]nonan-9-¡l)-6-(3-oxa-9-azab¡c¡clo[3.3.1]nonan-9-¡l)-1,3,5-tr¡az¡n-2-¡l]p¡r¡d¡n-2-am¡na;
5- [4,6-b¡s[(3S,5S)-3,5-d¡met¡lmorfol¡n-4-¡l]-1,3,5-tr¡az¡n-2-¡l]-4-(d¡fluoromet¡l)p¡r¡d¡n-2-am¡na;
4-(d¡fluoromet¡l)-5-[4-(3,7-d¡oxa-9-azab¡c¡clo[3.3.1]nonan-9-¡l)-6-morfol¡no-1,3,5-tr¡az¡n-2-¡l]p¡r¡d¡n-2-am¡na;
4-(d¡fluoromet¡l)-5-[4-[(3S)-3-et¡lmorfol¡n-4-¡l]-6-[(3R)-3-met¡lmorfol¡n-4-¡l]-1,3,5-tr¡az¡n-2-¡l]p¡r¡d¡n-2-am¡na;
4-(d¡fluoromet¡l)-5-[4-[(3R)-3-et¡lmorfol¡n-4-¡l]-6-[(3R)-3-met¡lmorfol¡n-4-¡l]-1,3,5-tr¡az¡n-2-¡l]p¡r¡d¡n-2-am¡na;
4-(d¡fluoromet¡l)-5-[4-[(3R)-3-met¡lmorfol¡n-4-¡l]-6-(8-oxa-5-azasp¡ro[3.5]nonan-5-¡l)-1,3,5-tr¡az¡n-2-¡l]p¡r¡d¡n-2-am¡na
En otra modal¡dad prefer¡da, d¡cho compuesto se selecc¡ona de
4- (d¡fluoromet¡l)-5-(4,6-d¡morfol¡no-1,3,5-tr¡az¡n-2-¡l)p¡r¡m¡d¡n-2-am¡na;
5- (4-(3-oxa-8-azab¡c¡clo[3.2.1]octan-8-¡l)-6-(3-oxa-8-azab¡c¡clo[3.2.1]octan-8-¡l)-1,3,5-tr¡az¡n-2-¡l)-4-(d¡fluoromet¡l)p¡r¡d¡n-2-am¡na;
5-(4-(3-oxa-8-azab¡c¡clo[3.2.1]octan-8-¡l)-6-morfol¡no-1,3,5-tr¡az¡n-2-¡l)-4-(d¡fluoromet¡l)p¡r¡d¡n-2-am¡na;
5-(4,6-b¡s((S)-3-met¡lmorfol¡no)-1,3,5-tr¡az¡n-2-¡l)-4-(d¡fluoromet¡l)p¡r¡m¡d¡n-2-am¡na;
(S)-4-(d¡fluoromet¡l)-5-(4-(3-met¡lmorfol¡no)-6-morfol¡no-1,3,5-tr¡az¡n-2-¡l)p¡r¡d¡n-2-am¡na;
4-(d¡fluoromet¡l)-5-(4-morfol¡no-6-(p¡peraz¡n-1-¡l)-1,3,5-tr¡az¡n-2-¡l) p¡r¡m¡d¡n-2-am¡na;
4-(d¡fluoromet¡l)-5-(4,6-d¡morfol¡no-1,3,5-tr¡az¡n-2-¡l)p¡r¡d¡n-2-am¡na; y
(S)-4-(d¡fluoromet¡l)-5-(4-(3-met¡lmorfol¡no)-6-morfol¡no-1,3,5-tr¡az¡n-2-¡l)p¡r¡m¡d¡n-2-am¡na;
En otra modal¡dad prefer¡da, d¡cho compuesto se selecc¡ona de
4- (d¡fluoromet¡l)-5-(4,6-d¡morfol¡no-1,3,5-tr¡az¡n-2-¡l)p¡r¡m¡d¡n-2-am¡na;
5- (4-(3-oxa-8-azab¡c¡clo[3.2.1]octan-8-¡l)-6(3-oxa-8-azab¡c¡clo[3.2.1]octan-8-¡l)-1,3,5-tr¡az¡n-2-¡l)-4-(d¡fluoromet¡l)p¡r¡d¡n-2-am¡na;
(S)-4-(d¡fluoromet¡l)-5-(4-(3-met¡lmorfol¡no)-6-morfol¡no-1,3,5-tr¡az¡n-2-¡l)p¡r¡d¡n-2-am¡na;
y tautómeros, solvatos y sales farmacéut¡camente aceptables de los m¡smos.
En otra modalidad muy preferida, dicho compuesto se selecciona de
5-(4-(3-oxa-8-azabicido[3.2.1]octan-8-il)-6-(3-oxa-8-azabicido[3.2.1]octan-8-il)1,3,5-triazin-2-il) 4-(difluorometil)piridin-2-amina; y
(S)-4-(difluorometil)-5-(4-(3-metilmorfolino)-6-morfolino-1,3,5-triazin-2-il)piridin-2-amina; y tautómeros, solvatos y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos.
En otra modalidad muy preferida, dicho compuesto se selecciona de
5-(4-(3-oxa-8-azabiciclo[3.2.1]octan-8-il)-6-(3-oxa-8-azabiciclo[3.2.1]octan-8-il)-1,3,5-triazin-2-il)-4-(difluorometil)piridin-2-amina; y
(S)-4-(difluorometil)-5-(4-(3-metilmorfolino)-6-morfolino-1,3,5-triazin-2-il)piridin-2-amina.
En otra modalidad muy preferida, dicho compuesto de fórmula (I) es 4-(difluorometil)-5-(4,6-dimorfolino-1,3,5-triazin-2-il)pirimidin-2-amina.
En otra modalidad muy preferida, dicho compuesto de fórmula (I) es 4-(difluorometil)-5-(4,6-dimorfolino-1,3,5-triazin-2-il)pirimidin-2-amina; y tautómeros, solvatos y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos.
En otra modalidad muy preferida, dicho compuesto de fórmula (I) es 5-(4-(3-oxa-8-azabiciclo[3.2.1]octan-8-il)-6-(3-oxa-8-azabiciclo[3.2.1]octan-8-il)-1,3,5-triazin-2-il)-4-(difluorometil)piridin-2-amina.
En otra modalidad muy preferida, dicho compuesto de fórmula (I) es 5-(4-(3-oxa-8-azabiciclo[3.2.1]octan-8-il)-6-(3-oxa-8-azabiciclo[3.2.1]octan-8-il)-1,3,5-triazin-2-il)-4-(difluorometil)piridin-2-amina; y tautómeros, solvatos y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos.
En otra modalidad muy preferida, dicho compuesto de fórmula (I) es (S)-4-(difluorometil)-5-(4-(3-metil-morfolino)-6-morfolino-1,3,5-triazin-2-il)piridin-2-amina.
En otra modalidad muy preferida, dicho compuesto de fórmula (I) es (S)-4-(difluorometil)-5-(4-(3-metilmorfolino)-6-morfolino-1,3,5-triazin-2-il)piridin-2-amina; y tautómeros, solvatos y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos.
En otra modalidad preferida, dichos R1 y R2 son independientemente entre sí un morfolinilo de fórmula (II). En una modalidad preferida, dicho R1 es igual a R2 En otra modalidad preferida, dicho R1 no es igual a R2
En otra modalidad preferida, dichos R1 y R2 son independientemente entre sí un morfolinilo de fórmula (II) y dicho anillo heterocíclico saturado de 6 miembros Z.
En otra modalidad preferida, dentro de dicho morfolinilo de fórmula (II)
Figure imgf000017_0001
R3 y R4 son independientemente entre sí H, C1-C3 alquilo opcionalmente sustituido con uno o dos OH, C1-C2 fluoroalquilo C1-C2 alcoxi, C1-C2 alcoxi C1-C3 alquilo, CN, o C(O)O C1-C2 alquilo; o R3 y R4 forman juntos bivalente -R5R6- seleccionado de C1-C3 alquileno opcionalmente sustituido con 1 a 4 F, -CH2-O-CH2-, -CH2-NH-CH2-, o cualquiera de las estructuras
Figure imgf000017_0003
Figure imgf000017_0002
en donde las flechas indican los enlaces en la fórmula (II).
En el caso de que R3 y R4 forman juntos un residuo bivalente y se unen a átomos de carbono vecinos, se forman sustituyentes morfolinilo anulados. En el caso de que R3 y R4 forman juntos un residuo bivalente y se extienden a
través del anillo de morfolina, se forman sustituyentes morfolinilo puenteados. En el caso de que R3 y R4 forman juntos un residuo bivalente y se unen al mismo átomo de carbono de la morfolina, se forman sustituyentes espiromorfolinilo.
En una modalidad preferida, R3 y R4 forman juntos un residuo bivalente -R5 R6 - seleccionado de C1-C3 alquileno opcionalmente sustituido con 1 a 4 F, -CH2-O-CH2-, -CH2-NH-CH2-, o cualquiera de las estructuras
Figure imgf000018_0008
Figure imgf000018_0001
y que forman un sustituyente morfolinilo con puente.
En otra modalidad preferida, dichos R1 y R2 son independientemente entre sí un morfolinilo de fórmula (II), donde R3 y R4 forman juntos un residuo bivalente que conduce a un morfolinilo puenteado, donde R3 y R4 forman juntos un residuo bivalente -R5R6- seleccionado de C1-C3 alquileno, preferentemente C1-C2 alquileno, -CH2CF2-, -CHFCHF-, -CH2CF2CH2-, -CH2-O-CH2-, -CH2-NH-CH2-, o cualquiera de las estructuras
Figure imgf000018_0006
Figure imgf000018_0002
en donde las flechas indican los enlaces en la fórmula (II).
En una modalidad preferida adicional, dicho morfolinilo de fórmula (II)
Figure imgf000018_0003
es independientemente entre sí un morfolinilo de dicha fórmula (II), en donde R3 y R4 son independientemente entre sí H, C1-C3 alquilo, CH2OH, CH2CH2OH, CH2F, CHF2 , CF3 , CH2CF3 , C1-C2 alkoxi, C1-C2 alkoxi C1-C3 alquilo, CN, o C(O)O-C1-C2 alquilo; o R3 y R4 forman juntos un residuo bivalente -R5R6- seleccionado de C1-C3 alquileno, preferentemente C1-C2 alquileno, -CH2CF2-, -CHFCHF-, -CH2CF2CH2-, -CH2-O-CH2-, -CH2-NH-CH2-, o cualquiera de las estructuras
Figure imgf000018_0009
Figure imgf000018_0004
en donde las flechas indican los enlaces en la fórmula (II).
En una modalidad preferida adicional, dicho morfolinilo de fórmula (II) es independientemente entre sí un morfolinilo de dicha fórmula (II), en donde R3 y R4 son independientemente entre sí H o CH3.
En una modalidad preferida adicional, dicho morfolinilo de fórmula (II) es independientemente entre sí un morfolinilo de dicha fórmula (II), en donde R3 y R4 son independientemente entre sí C2-C3 alquilo, CH2OH, CH2CH2OH, CH2F, CHF2 , CF3, CH2CF3, C1-C2 alkoxi, C1-C2 alkoxi C1-C3 alquilo, CN, o C(O)O-C1-C2alquilo forman juntos un residuo bivalente -R5R6- seleccionado entre -CH2- o C3 alquileno, preferentemente -CH2-, -CH2CF2-, -CHFCHF--CH2CF2CH2-, -CH2-O-CH2-, -CH2-NH-CH2-, o cualquiera de las estructuras
Figure imgf000018_0007
Figure imgf000018_0005
en donde las flechas indican los enlaces en la fórmula (II).
En una modalidad preferida adicional, dicho morfolinilo de fórmula (II) se selecciona independientemente entre sí de
Figure imgf000020_0001
En una modalidad preferida adicional, dicho morfolinilo de fórmula (II) se selecciona independientemente entre sí de
Figure imgf000020_0002
En una modalidad preferida adicional, dicho anillo heterocíclico Z es un anillo heterocíclico Z saturado de 6 miembros seleccionado de tiomorfolinilo y piperazinilo, opcionalmente sustituido por 1 a 3 R7; en donde R7 es independientemente en cada caso C1-C3 alquilo, CH2OH, CH2CH2OH, CH2F, CHF2, CF3 , CH2CF3 , C1-C2 alcoxi C1-C3 alquilo, C3-C6 cicloalquilo; o dos sustituyentes R7 forman juntos un residuo bivalente -R8R9- seleccionado de C1-C3 alquileno opcionalmente sustituido con 1 a 4 F, -CH2-O-CH2- o -O-CH2CH2-O-;
En una modalidad preferida adicional, dicho anillo heterocíclico Z se selecciona de
Figure imgf000020_0003
En otra modalidad preferida de la presente invención, dicho R1 y dicho R2 son independientemente entre sí un morfolinilo de fórmula (II)
Figure imgf000020_0004
en donde la flecha indica el enlace en la fórmula (I); y
en donde R3 y R4 son independientemente entre sí H, C1-C3 alquilo opcionalmente sustituido con uno o dos OH, C1-C2 fluoroalquilo, C1-C2 alcoxi, C1-C2 alcoxi C1-C3 alquilo, CN o C(O)OC1-C2 alquilo; o R3 y R4 forman juntos un residuo bivalente -R5R6- seleccionado de C1-C3 alquileno opcionalmente sustituido con 1 a 4 F, -CH2-O-CH2-, -CH2-NH-CH2-, o cualquiera de las estructuras
Figure imgf000021_0006
Figure imgf000021_0001
en donde las flechas indican los enlaces en la fórmula (II).
En una modalidad preferida adicional, dicho R1 es igual a dicho R2, y dicho R1 y dicho R2 son independientemente entre sí un morfolinilo de fórmula (II)
Figure imgf000021_0002
en donde la flecha indica el enlace en la fórmula (I); y
en donde R3 y R4 son independientemente entre sí H, C1-C3 alquilo opcionalmente sustituido con uno o dos OH, C1-C2 fluoroalquilo, C1-C2 alcoxi, C1-C2 alcoxi C1-C3 alquilo, CN o C(O)OC1-C2 alquilo; o R3 y R4 forman juntos un residuo bivalente -R5R6- seleccionado de C1-C3 alquileno opcionalmente sustituido con 1 a 4 F, -CH2-O-CH2-, -CH2-NH-CH2-, o cualquiera de las estructuras
Figure imgf000021_0007
Figure imgf000021_0003
en donde las flechas indican los enlaces en la fórmula (II).
En una modalidad preferida adicional de la presente invención, dicho R1 y dicho R2 son independientemente entre sí un morfolinilo de fórmula (II)
Figure imgf000021_0004
en donde la flecha indica el enlace en la fórmula (I); y
en donde R3 y R4 son independientemente entre sí H, C1-C3 alquilo, CH2OH, CH2CH2OH, CH2F, CHF2, CF3, CH2CF3 , C1-C2 alkoxi, C1-C2 alkoxi C1-C3 alquilo, CN, o C(O)O-C1-C2 alquilo; o R3 y R4 forman juntos un residuo bivalente -R5R6- seleccionado de C1-C3 alquileno, preferentemente C1-C2 alquileno, -CH2CF2-, -CHFCHF-, -CH2CF2CH2-, -CH2-O-CH2-, -CH2-NH-CH2-, o cualquiera de las estructuras
Figure imgf000021_0008
Figure imgf000021_0005
en donde las flechas indican los enlaces en la fórmula (II).
En una modalidad preferida adicional de la presente invención, R1 es igual a R2, y dicho R1 y dicho R2 son un morfolinilo de fórmula (II)
Figure imgf000022_0001
en donde la flecha indica el enlace en la fórmula (I); y
en donde R3 y R4 son independientemente entre sí H, C1-C3 alquilo, CH2OH, CH2CH2OH, CH2F, CHF2, CF3, CH2CF3 , C1-C2 alkoxi, C1-C2 alkoxi C1-C3 alquilo, CN, o C(O)O-C1-C2 alquilo; o R3 y R4 forman juntos un residuo bivalente -R5R6- seleccionado de C1-C3 alquileno, preferentemente C1-C2 alquileno, -CH2CF2-, -CHFCHF-, -CH2CF2CH2-, -CH2-O-CH2-, -CH2-NH-CH2-, o cualquiera de las estructuras
Figure imgf000022_0005
Figure imgf000022_0002
en donde las flechas indican los enlaces en la fórmula (II).
En otro aspecto y modalidad preferida, la presente invención proporciona un compuesto de (I)
Figure imgf000022_0003
en donde
X1, X2 y X3 son, independientemente entre sí, N o CH; con la condición de que al menos dos de X1, X2 y X3 son N; Y es N o CH; y en donde
R1 y R2 son independientemente entre sí un morfolinilo de fórmula (II)
Figure imgf000022_0004
en donde la flecha indica el enlace en la fórmula (I); y R1 no es igual a R2, y al menos uno de dichos R1 y dicho R2 son un morfolinilo de fórmula (II),
en donde R3 y R4 son independientemente entre sí C2-C3 alquilo, CH2OH, CH2CH2OH, CH2F, CHF2 , CF3 , CH2CF3 , C1-C2 alkoxi, C1-C2 alkoxi C1-C3 alquilo, CN, o C(O)O-C-i -C2 alquilo; o R3 y R4 forman juntos un residuo bivalente -R5R6-seleccionado de CH2- o C1-C3 alquileno, preferentemente -CH2-, -CH2CF2-, -CHFCHF-, -CH2CF2CH2-, -CH2-O-CH2-, -CH2-NH-CH2-, o cualquiera de las estructuras
Figure imgf000023_0003
Figure imgf000023_0001
en donde las flechas indican los enlaces en la fórmula (II).
Preferentemente, dichos R3 y R4 forman juntos un residuo bivalente -R5R6- seleccionado de - CH2- o C3 alquileno, preferentemente -CH2-, -CH2CF2-, -CHFCHF-, -CH2CF2CH2-, -CH2-O-CH2-, -CH2-NH-CH2-, o cualquiera de las estructuras
Figure imgf000023_0004
Figure imgf000023_0002
En otra modalidad preferida, R1 es 4-morfolinilo, 2-metil-4-morfolinilo, 3-metil-4-morfolinilo, octadeuterio-4-morfolinilo, 8-aza-3-oxabiciclo[3.2.1]oct-8-ilo o 3-aza-8-oxabiciclo[3.2.1]oct-3-ilo; y R2 es 4-morfolinilo, 2-metil-4-morfolinilo, 3-metil-4-morfolinilo, octadeuterio-4-morfolinilo, 8-aza-3-oxabiciclo[3.2.1]oct-8-ilo, 3-aza-8-oxabiciclo[3.2.1]oct-3-ilo, 4-piperazin-1-ilo, 4-metilpiperazin-1-ilo o 4-tiomorfolinilo.
En otra modalidad preferida, R1 es 4-morfolinilo, 2-metil-4-morfolinilo, 3-metil-4-morfolinilo, octa-deuterio-4-morfolinilo, 8-aza-3-oxabiciclo[3.2.1]oct- 8-ilo o 3-aza-8-oxabiciclo[3.2.1]oct-3-ilo; y R2 es 4-morfolinilo, 2-metil-4-morfolinilo, 3-metil-4-morfolinilo, octadeuterio-4-morfolinilo, 8-aza-3-oxabiciclo[3.2.1]oct-8-ilo, 3-aza-8-oxabiciclo[3.2.1]oct-3-ilo, 4-piperazin-1-ilo, 4-metilpiperazin-1-ilo, o 4-tiomorfolinilo, y X1, X2 y X3 son N; y tautómeros, solvatos y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos. Preferentemente, Y es N o CH; R1 es 4-morfolinilo, 2-metil-4-morfolinilo, 3-metil-4-morfolinilo, octadeuterio-4-morfolinilo, 8-aza-3-oxabiciclo[3.2.1]oct-8-ilo o 3-aza-8-oxabiciclo[3.2.1]oct-3-ilo; y R2 es 4-morfolinilo, 2-metil-4-morfolinilo, 3-metil-4-morfolinilo, octadeuterio-4-morfolinilo, 8-aza-3-oxabiciclo[3.2.1]oct-8-ilo, 3-aza-8-oxabiciclo[3.2.1]oct-3-ilo, 4-piperazin-1-ilo, 4-metilpiperazin-1-ilo, o 4-tiomorfolinilo; y tautómeros, solvatos y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos.
En una modalidad preferida adicional, R1 es 4-morfolinilo, 2-metil-4-morfolinilo, 3-metil-4-morfolinilo, octa-deuterio-4-morfolinilo, 8-aza-3-oxabiciclo[3.2.1]oct-8-ilo o 3-aza-8-oxabiciclo[3.2.1]oct-3-ilo; y R2 es 4-morfolinilo, 2-metil-4-morfolinilo, 3-metil-4-morfolinilo, octadeuterio-4-morfolinilo, 8-aza-3-oxabiciclo[3.2.1]oct-8-ilo, 3-aza-8-oxabiciclo[3.2.1]oct-3-ilo, 4-piperazin-1-ilo, 4-metilpiperazin-1-ilo o 4-tiomorfolinilo, y X1 y X3 son N, y X2 es CH; y tautómeros, solvatos y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos. Preferentemente, Y es N o CH; R1 es 4-morfolinilo, 2-metil-4-morfolinilo, 3-metil-4-morfolinilo, octadeuterio-4-morfolinilo, 8-aza-3-oxabiciclo[3.2.1]oct-8-ilo o 3-aza-8-oxabiciclo[3.2.1]oct-3-ilo; y R2 es 4-morfolinilo, 2-metil-4-morfolinilo, 3-metil-4-morfolinilo, octadeuterio-4-morfolinilo, 8-aza-3-oxabiciclo[3.2.1]oct-8-ilo, 3-aza-8-oxabiciclo[3.2.1]oct-3-ilo, 4-piperazin-1-ilo, 4-metilpiperazin-1-ilo, o 4-tiomorfolinilo; y tautómeros, solvatos y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos.
En una modalidad preferida, R1 es 4-morfolinilo, 2-metil-4-morfolinilo, 3-metil-4-morfolinilo, octadeuterio-4-morfolinilo, 8-aza-3-oxabiciclo[3.2.1]oct-8-ilo o 3-aza-8-oxabiciclo[3.2.1]oct-3-ilo; y R2 es 4-morfolinilo, 2-metil-4-morfolinilo, 3-metil-4-morfolinilo, octadeuterio-4-morfolinilo, 8-aza-3-oxabiciclo[3.2.1]oct-8-ilo, 3-aza-8-oxabiciclo[3.2.1]oct-3-ilo, 4-piperazin-1-ilo, 4-metilpiperazin-1-ilo o 4-tiomorfolinilo, y X1 y X2 son N, y X3 es CH; y tautómeros, solvatos y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos. Preferentemente, Y es N o CH; R1 es 4-morfolinilo, 2-metil-4-morfolinilo, 3-metil-4-morfolinilo, octadeuterio-4-morfolinilo, 8-aza-3-oxabiciclo[3.2.1]oct-8-ilo o 3-aza-8-oxabiciclo[3.2.1]oct-3-ilo; y R2 es 4-morfolinilo, 2-metil-4-morfolinilo, 3-metil-4-morfolinilo, octadeuterio-4-morfolinilo, 8-aza-3-oxabiciclo[3.2.1]oct-8-ilo, 3-aza-8-oxabiciclo[3.2.1]oct-3-ilo, 4-piperazin-1-ilo, 4-metilpiperazin-1-ilo o 4-tiomorfolinilo; y tautómeros, solvatos y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos.
En una modalidad preferida, R1 es 4-morfolinilo, 2-metil-4-morfolinilo, 3-metil-4-morfolinilo, octadeuterio-4-morfolinilo, 8-aza-3-oxabiciclo[3.2.1]oct-8-ilo o 3-aza-8-oxabiciclo[3.2.1]oct-3-ilo; y R2 es 4-morfolinilo, 2-metil-4-morfolinilo, 3-metil-4-morfolinilo, octadeuterio-4-morfolinilo, 8-aza-3-oxabiciclo[3.2.1]oct-8-ilo, 3-aza-8-oxabiciclo[3.2.1]oct-3-ilo, 4-piperazin-1-ilo, 4-metilpiperazin-1-ilo o 4-tiomorfolinilo, y X2 y X3 son N, y X1 es CH; y tautómeros, solvatos y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos. Preferentemente, Y es N o CH; R1 es 4-morfolinilo, 2-metil-4-morfolinilo, 3-metil-4-morfolinilo, octadeuterio-4-morfolinilo, 8-aza-3-oxabiciclo[3.2.1]oct-8-ilo o 3-aza-8-oxabiciclo[3.2.1]oct-3-ilo; y R2 es 4-morfolinilo, 2-metil-4-morfolinilo, 3-metil-4-morfolinilo, octadeuterio-4-morfolinilo, 8-aza-3-oxabiciclo[3.2.1]oct-8-ilo, 3-aza-8-oxabiciclo[3.2.1]oct-3-ilo, 4-piperazin-1-ilo, 4-metilpiperazin-1-ilo, o 4-tiomorfolinilo; y tautómeros, solvatos y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos.
En una modalidad adicional, se proporciona un compuesto de fórmula (I) de acuerdo con la invención para su uso en la prevención o el tratamiento de un trastorno neurológico en un sujeto, en donde el trastorno neurológico es epilepsia o una enfermedad neurodegenerativa.
En una modalidad adicional, se proporciona un compuesto de fórmula (I) de acuerdo a la invención para su uso en la prevención o el tratamiento de una enfermedad neurodegenerativa en un sujeto.
En una modalidad adicional, se proporciona un compuesto de fórmula (I) de acuerdo a la invención para su uso en la prevención o el tratamiento de la epilepsia en un sujeto.
En una modalidad adicional, se proporciona un compuesto de fórmula (I) de acuerdo con la invención para su uso en la prevención o el tratamiento de la epilepsia en un sujeto, en donde el compuesto de fórmula (I) se administra a dicho sujeto durante la epileptogénesis primaria o durante epileptogénesis secundaria o en epilepsia completamente desarrollada.
En una modalidad adicional, se proporciona un compuesto de fórmula (I) de acuerdo con la invención para su uso en la prevención o el tratamiento de la epilepsia en un sujeto, en donde la epilepsia es epilepsia sintomática o epilepsia idiopática.
En una modalidad adicional, se proporciona un compuesto de fórmula (I) de acuerdo con la invención para su uso en la prevención o el tratamiento de la epilepsia en un sujeto, en donde la epilepsia es epilepsia sintomática.
En una modalidad adicional, se proporciona un compuesto de fórmula (I) de acuerdo con la invención para su uso en la prevención o el tratamiento de la epilepsia en un sujeto, en donde la epilepsia es epilepsia idiopática.
En una modalidad adicional, se proporciona un compuesto de fórmula (I) de acuerdo con la invención para su uso en la prevención o el tratamiento de la epilepsia sintomática en un sujeto, en donde dicha epilepsia sintomática se causa por lesión cerebral, tumor cerebral, infección cerebral, adrenoleucodistrofia, Síndrome de Rasmussen, síndrome de Sturge-Weber, megalencefalia, polihidramnios, complejo de esclerosis tuberosa (TSC), síndrome de epilepsia sintomática, PMSE, mutaciones de PTEN o displasia cortical focal (FCD).
En una modalidad, se proporciona un compuesto de fórmula (I) de acuerdo con la invención para su uso en la prevención o el tratamiento de la epilepsia sintomática en un sujeto, en donde dicha epilepsia sintomática se debe a una enfermedad caracterizada por regulación positiva de mTOR ("TORopatía").
En una modalidad, se proporciona un compuesto de fórmula (I) para su uso en la prevención o el tratamiento de la epilepsia sintomática en un sujeto, en donde dicha epilepsia sintomática se debe a una enfermedad caracterizada por regulación positiva de mTOR ("TORopatía"), en donde dicha "TORopatía" se selecciona del grupo que consiste en TSC, polihidramnios, megalencefalia, síndrome de epilepsia sintomática, PMSE, displasia cortical focal (FCD) y una "TORopatía" asociada con mutaciones de PTEN.
En una modalidad adicional, se proporciona un compuesto de fórmula (I) de acuerdo con la invención para su uso en la prevención o el tratamiento de la epilepsia sintomática en un sujeto, en donde dicha epilepsia sintomática se causa por lesión cerebral, infección cerebral, adrenoleucodistrofia, síndrome de Rasmussen, Síndrome de Sturge-Weber, megalencefalia, polihidramnios, complejo de esclerosis tuberosa (CET), síndrome de epilepsia sintomática, PMSE, mutaciones de PTEN o displasia cortical focal (FCD).
Aun en otra modalidad, se proporciona un compuesto de fórmula (I) para su uso en la prevención o el tratamiento de la epilepsia sintomática en un sujeto, en donde dicha epilepsia sintomática se causa por lesión cerebral, infección cerebral, adrenoleucodistrofia, síndrome de Rasmussen o Sturge- Síndrome de Weber.
En una modalidad preferida, se proporciona un compuesto de fórmula (I) de acuerdo con la invención para su uso en la prevención o el tratamiento de la epilepsia sintomática en un sujeto, en donde dicha epilepsia sintomática se causa por TSC.
En una modalidad adicional, se proporciona un compuesto de fórmula (I) de acuerdo con la invención para su uso en la prevención o el tratamiento de la epilepsia idiopática en un sujeto, en donde dicha epilepsia idiopática se selecciona del grupo que consiste en síndrome de Doose (epilepsia astática mioclónica de la infancia), síndrome de West, epilepsia rolándica benigna, síndrome de Lennox-Gastaut, síndrome de Landau-Kleffner, síndrome de epilepsia sintomática, PMSE y epilepsia mioclónica juvenil.
Como se indicó anteriormente, la epilepsia puede ser parcial o generalizada. Por tanto, en una modalidad, se proporciona un compuesto de fórmula (I) de acuerdo con la invención para su uso en la prevención o el tratamiento de la epilepsia en un sujeto, en donde la epilepsia es epilepsia parcial o epilepsia generalizada.
En una modalidad adicional, se proporciona un compuesto de fórmula (I) para su uso en la prevención o el tratamiento de la epilepsia en un sujeto, en donde la epilepsia es epilepsia idiopática parcial, epilepsia sintomática parcial, epilepsia idiopática generalizada o epilepsia sintomática generalizada.
En una modalidad preferida, se proporciona un compuesto de fórmula (I) para su uso en la prevención o el tratamiento de la epilepsia parcial en un sujeto, en donde dicha epilepsia parcial es epilepsia del lóbulo temporal.
En una modalidad adicional, se proporciona un compuesto de fórmula (I) de acuerdo con la invención para su uso en la prevención o el tratamiento de una enfermedad neurodegenerativa en un sujeto, en donde dicha enfermedad neurodegenerativa se asocia o se causa por un plegamiento incorrecto de proteínas y/o agregación de proteínas.
En una modalidad adicional, se proporciona un compuesto de fórmula (I) de acuerdo con la invención para su uso en la prevención o el tratamiento de una enfermedad neurodegenerativa en un sujeto, en donde la enfermedad neurodegenerativa se selecciona del grupo que consiste en la enfermedad de Huntington, ataxias espinocerebelosas, Enfermedad de Parkinson, morbus Alzheimer, esclerosis lateral amiotrófica (ALS), fibrosis quística, polineuropatía amiloidótica familiar, encefalopatías espongiformes, demencia con cuerpos de Lewy, demencia frontotemporal con parkinsonismo, ataxias espinocerebelosas, atrofia muscular espinal y bulbar, atrofia dentato-rubro-pálido-luisiana hereditaria, demencia británica, demencia familiar danesa y enfermedad priónica.
En una modalidad preferida, se proporciona un compuesto de fórmula (I) de acuerdo con la invención para su uso en la prevención o el tratamiento de una enfermedad neurodegenerativa en un sujeto, en donde la enfermedad neurodegenerativa se selecciona del grupo que consiste en la enfermedad de Huntington, morbus Alzheimer y enfermedad priónica.
En una modalidad particularmente preferida, se proporciona un compuesto de fórmula (I) de acuerdo con la invención para su uso en la prevención o el tratamiento de la enfermedad de Huntington en un sujeto.
En una modalidad preferida, se proporciona un compuesto de fórmula (I) de acuerdo con la invención, en donde dicho compuesto se selecciona de:
4- (difluorometil)-5-(4,6-dimorfolino-1,3,5-triazin-2-il)pirimidin-2-amina;
5- (4-(3-oxa-8-azabiciclo[3.2.1]octan-8-il)-6-(3-oxa-8-azabiciclo[3.2.1]octan-8-il)-1,3,5-triazin-2-il)-4-(difluorometil)piridin-2-amina;
(S)-4-(difluorometil)-5-(4-(3-metilmorfolino)-6-morfolino-1,3,5-triazin-2-il)piridin-2-amina; y tautómeros, solvatos y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos,
para su uso en la prevención o el tratamiento de un trastorno neurológico en un sujeto, en donde el trastorno neurológico es epilepsia o enfermedad de Huntington.
En una modalidad preferida adicional, se proporciona un compuesto de fórmula (I) de acuerdo con la invención, en donde dicho compuesto se selecciona de:
4- (difluorometil)-5-(4,6-dimorfolino-1,3,5-triazin-2-il)pirimidin-2-amina;
5- (4-(3-oxa-8-azabiciclo[3.2.1]octan-8-il)-6-(3-oxa-8-azabiciclo[3.2.1]octan-8-il)-1,3,5-triazin-2-il)-4-(difluorometil)piridin-2-amina;
(S)-4-(difluorometil)-5-(4-(3-metilmorfolino)-6-morfolino-1,3,5-triazin-2-il)piridin-2-amina; y tautómeros, solvatos y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos,
para su uso en la prevención o el tratamiento de la epilepsia en un sujeto.
En una modalidad preferida, se proporciona un compuesto de fórmula (I) de acuerdo con la invención, en donde dicho compuesto se selecciona de:
4- (difluorometil)-5-(4,6-dimorfolino-1,3,5-triazin-2-il)pirimidin-2-amina;
5- (4-(3-oxa-8-azabiciclo[3.2.1]octan-8-il)-6-(3-oxa-8-azabiciclo[3.2.1]octan-8-il)-1,3,5-triazin-2-il)-4-(difluorometil)piridin-2-amina;
(S)-4-(difluorometil)-5-(4-(3-metilmorfolino)-6-morfolino-1,3,5-triazin-2-il)piridin-2-amina; y tautómeros, solvatos y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos,
para su uso en la prevención o el tratamiento de la enfermedad de Huntington en un sujeto.
En una modalidad preferida, se proporciona un compuesto de fórmula (I) de acuerdo con la invención, en donde dicho compuesto se selecciona de 5-(4-(3-oxa-8-azabiciclo[3.2.1]octan-8-il)-6-(3-oxa-8-azabiciclo[3.2.1]octan-8-il)-1,3,5-triazin-2-il)-4-(difluorometil)piridin-2-amina; y (S)-4-(difluorometil)-5-(4-(3-metilmorfolino)-6-morfolino-1,3,5-triazin-2-il)piridin-2-amina; y tautómeros, solvatos y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, para su uso en la prevención o el tratamiento de un trastorno neurológico en un sujeto, en donde el trastorno neurológico es epilepsia o enfermedad de Huntington.
En una modalidad preferida, se proporciona un compuesto de fórmula (I) de acuerdo con la invención, en donde dicho compuesto se selecciona de 5-(4-(3-oxa-8-azabiciclo[3.2.1]octan-8-il)-6-(3-oxa-8-azabiciclo[3.2.1]octan-8-il)-1,3,5-triazin-2-il)-4-(difluorometil)piridin-2-amina; y (S)-4-(difluorometil)-5-(4-(3-metilmorfolino)-6-morfolino-1,3,5-triazin-2-il)piridin-2-amina; y tautómeros, solvatos y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, para su uso en la prevención o el tratamiento de la epilepsia en un sujeto.
En una modalidad preferida, se proporciona un compuesto de fórmula (I) de acuerdo con la invención, en donde dicho compuesto se selecciona de 5-(4-(3-oxa-8-azabiciclo[3.2.1]octan-8-il)-6-(3-oxa-8-azabiciclo[3.2.1]octan-8-il)-1,3,5-triazin-2-il)4-(difluorometil)piridin-2-amina; y (S)-4-(difluorometil)-5-(4-(3-metilmorfolino)-6-morfolino-1,3,5-triazin-2-il)piridin-2-amina; y tautómeros, solvatos y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, para su uso en la prevención o el tratamiento de la enfermedad de Huntington en un sujeto.
En una modalidad preferida, se proporciona el compuesto 5-(4-(3-oxa-8-azabiciclo[3.2.1]octan-8-il)-6-(3-oxa-8-azabiciclo[3.2.1]octan-8-il)-1,3,5-triazin-2-il)-4-(difluorometil)piridin-2-amina; y tautómeros, solvatos y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, para su uso en la prevención o el tratamiento de un trastorno neurológico en un sujeto, en donde el trastorno neurológico es epilepsia o enfermedad de Huntington.
En una modalidad particularmente preferida, se proporciona el compuesto 5-(4-(3-oxa-8-azabiciclo[3.2.1]octan-8-il)-6-(3-oxa-8-azabiciclo[3.2.1]octan-8-il)-1,3,5-triazin-2-il)-4-(difluorometil)piridin-2-amina; y tautómeros, solvatos y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, para su uso en la prevención o el tratamiento de la epilepsia en un sujeto.
En otra modalidad particularmente preferida, se proporciona el compuesto 5-(4-(3-oxa-8-azabiciclo[3.2.1]octan-8-il)-6-(3-oxa-8-azabiciclo[3.2.1]octan-8-il)-1,3,5-triazin-2-il)-4-(difluorometil)piridin-2-amina; y tautómeros, solvatos y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, para su uso en la prevención o el tratamiento de la enfermedad de Huntington en un sujeto.
En una modalidad preferida, se proporciona el compuesto (S)-4-(difluorometil)-5-(4-(3-metilmorfolino)-6-morfolino-1,3,5-triazin-2-il)piridin-2-amina; y tautómeros, solvatos y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, para su uso en la prevención o el tratamiento de un trastorno neurológico en un sujeto, en donde el trastorno neurológico es epilepsia o enfermedad de Huntington.
En una modalidad particularmente preferida, se proporciona el compuesto (S)-4-(difluorometil)-5-(4-(3-metilmorfolino)-6-morfolino-1,3,5-triazin-2-il)piridin-2-amina; y tautómeros, solvatos y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, para su uso en la prevención o el tratamiento de la epilepsia en un sujeto.
En otra modalidad particularmente preferida, se proporciona el compuesto (S)-4-(difluorometil)-5-(4-(3-metilmorfolino)-6-morfolino-1,3,5-triazin-2-il)piridin-2-amina; y tautómeros, solvatos y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, para su uso en la prevención o el tratamiento de la enfermedad de Huntington en un sujeto.
En una modalidad preferida, se proporciona un compuesto de fórmula (I) de acuerdo con la invención, en donde R1 y R2 son independientemente entre sí un morfolinilo de fórmula (II); y tautómeros, solvatos y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, para su uso en la prevención o el tratamiento de un trastorno neurológico en un sujeto, en donde el trastorno neurológico es epilepsia o enfermedad de Huntington.
En una modalidad preferida, se proporciona un compuesto de fórmula (I) de acuerdo con la invención, en donde R1 y R2 son independientemente entre sí un morfolinilo de fórmula (II); y tautómeros, solvatos y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, para su uso en la prevención o el tratamiento de la epilepsia en un sujeto.
En una modalidad preferida, se proporciona un compuesto de fórmula (I) de acuerdo con la invención, en donde R1 y R2 son independientemente entre sí un morfolinilo de fórmula (II); y tautómeros, solvatos y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, para su uso en la prevención o el tratamiento de la enfermedad de Huntington en un sujeto.
En una modalidad preferida, se proporciona un compuesto de fórmula (I) de acuerdo con la invención, en donde R1 es igual a R2; y tautómeros, solvatos y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, para su uso en la prevención o el tratamiento de un trastorno neurológico en un sujeto, en donde el trastorno neurológico es epilepsia o enfermedad de Huntington.
En una modalidad preferida, se proporciona un compuesto de fórmula (I) de acuerdo con la invención, en donde R1 es igual a R2; y tautómeros, solvatos y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, para su uso en la prevención o el tratamiento de la epilepsia en un sujeto.
En una modalidad preferida, se proporciona un compuesto de fórmula (I) de acuerdo con la invención, en donde R1 es igual a R2; y tautómeros, solvatos y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, para su uso en la prevención o el tratamiento de la enfermedad de Huntington en un sujeto.
En una modalidad preferida, se proporciona un compuesto de fórmula (I) de acuerdo con la invención, en donde R1 no es igual a R2; y tautómeros, solvatos y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, para su uso en la prevención o el tratamiento de un trastorno neurológico en un sujeto, en donde el trastorno neurológico es epilepsia o enfermedad de Huntington.
En una modalidad preferida, se proporciona un compuesto de fórmula (I) de acuerdo con la invención, en donde R1 no es igual a R2; y tautómeros, solvatos y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, para su uso en la prevención o el tratamiento de la epilepsia en un sujeto.
En una modalidad preferida, se proporciona un compuesto de fórmula (I) de acuerdo con la invención, en donde R1 no es igual a R2; y tautómeros, solvatos y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, para su uso en la prevención o el tratamiento de la enfermedad de Huntington en un sujeto.
En un aspecto adicional de la invención, se proporciona un método para tratar o prevenir un trastorno neurológico en un sujeto, que comprende administrar una cantidad eficaz de un compuesto de fórmula (I) de acuerdo con la invención a dicho sujeto.
En una modalidad, se proporciona un método para tratar o prevenir un trastorno neurológico en un sujeto, que comprende administrar una cantidad eficaz de un compuesto de fórmula (I) de acuerdo con la invención a dicho sujeto, en donde el trastorno neurológico es epilepsia o enfermedad de Huntington.
En una modalidad preferida, se proporciona un método para tratar o prevenir la epilepsia en un sujeto, que comprende administrar una cantidad eficaz de un compuesto de fórmula (I) de acuerdo con la invención a dicho sujeto.
En una modalidad preferida adicional, se proporciona un método para tratar o prevenir la epilepsia en un sujeto, que comprende administrar una cantidad eficaz de un compuesto de fórmula (I) de acuerdo con la invención a dicho sujeto, en donde dicha cantidad eficaz de un compuesto de fórmula (I) de acuerdo con la invención se administra durante la epileptogénesis primaria o durante la epileptogénesis secundaria o en la epilepsia completamente desarrollada.
En una modalidad preferida adicional, se proporciona un método para tratar o prevenir la enfermedad de Huntington en un sujeto, que comprende administrar una cantidad eficaz de un compuesto de fórmula (I) de acuerdo con la invención a dicho sujeto.
En una modalidad particularmente preferida, se proporciona un método para tratar o prevenir un trastorno neurológico en un sujeto, que comprende administrar una cantidad eficaz de un compuesto de fórmula (I) de acuerdo con la invención a dicho sujeto, en donde dicho compuesto se selecciona de: 4-(difluorometil)-5-(4,6-dimorfolino-1,3,5-triazin-2-il)pirimidin-2-amina; 5-(4-(3-oxa-8-azabiciclo[3.2.1]octan-8-il)-6-(3-oxa-8-azabiciclo[3.2.1]octan-8-il)-1,3,5-triazin-2-il)-4-(difluorometil)piridin-2-amina; (S)-4-(difluorometil)-5-(4-(3-metilmorfolino)-6-morfolino-1,3,5-triazin-2-il)piridin-2-amina; y tautómeros, solvatos y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos; y en donde el trastorno neurológico es epilepsia o enfermedad de Huntington.
En un aspecto adicional de la invención, se proporciona el uso de un compuesto de fórmula (I) de acuerdo con la invención para tratar o prevenir un trastorno neurológico en un sujeto.
En una modalidad, se proporciona el uso de un compuesto de fórmula (I) de acuerdo con la invención para tratar o prevenir un trastorno neurológico en un sujeto, en donde el trastorno neurológico es epilepsia o enfermedad de Huntington.
En una modalidad particularmente preferida, se proporciona el uso de un compuesto de fórmula (I) de acuerdo con la invención para tratar o prevenir un trastorno neurológico en un sujeto, en donde dicho compuesto se selecciona de:
4- (difluorometil)-5-(4,6-dimorfolino-1,3,5-triazin-2-il)pirimidin-2-amina;
5- (4-(3-oxa-8-azabiciclo[3.2.1]octan-8-il)-6-(3-oxa-8-azabiciclo[3.2.1]octan-8-il)-1,3,5-triazin-2-il)-4-(difluorometil)piridin-2-amina;
(S)-4-(difluorometil)-5-(4-(3-metilmorfolino)-6-morfolino-1,3,5-triazin-2-il)piridin-2-amina; y tautómeros, solvatos y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos; y en donde el trastorno neurológico es epilepsia o enfermedad de Huntington.
En un aspecto adicional de la invención, se proporciona el uso de un compuesto de fórmula (I) de acuerdo con la invención para la fabricación de un medicamento para tratar o prevenir un trastorno neurológico en un sujeto.
En una modalidad, se proporciona el uso de un compuesto de fórmula (I) de acuerdo con la invención para la fabricación de un medicamento para tratar o prevenir un trastorno neurológico en un sujeto, en donde el trastorno neurológico es epilepsia o enfermedad de Huntington.
En una modalidad particularmente preferida, se proporciona el uso de un compuesto de fórmula (I) de acuerdo con la invención para la fabricación de un medicamento para tratar o prevenir un trastorno neurológico en un sujeto, en donde dicho compuesto se selecciona de:
4- (difluorometil)-5-(4,6-dimorfolino-1,3,5-triazin-2-il)pirimidin-2-amina;
5- (4-(3-oxa-8-azabiciclo[3.2.1]octan-8-il)-6-(3-oxa-8-azabiciclo[3.2.1]octan-8-il)-1,3,5-triazin-2-il)-4-(difluorometil)piridin-2-amina;
(S)-4-(difluorometil)-5-(4-(3-metilmorfolino)-6-morfolino-1,3,5-triazin-2-il)piridin-2-amina; y tautómeros, solvatos y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos; y en donde el trastorno neurológico es epilepsia o enfermedad de Huntington.
Los más preferidos para la presente invención son los siguientes compuestos que se muestran por la fórmula: (Los nombres de las estructuras correspondientes se produjeron con el uso de ChemDraw Ultra, versión 13.0.1 así como versiones de software inferiores y superiores de los mismos, CambridgeSoft Corp., Cambridge MA).
Compuesto 1:
Figure imgf000028_0001
4-(difluorometil)-5-(4,6-dimorfolino-1,3,5-triazin-2-il)piridin-2-amina
Compuesto 2:
Figure imgf000028_0002
4-(difluorometil)-5-(4,6-dimorfolino-1,3,5-triazin-2-il)pirimidin-2-amina
Compuesto 3:
Figure imgf000028_0003
5-(4-(3-oxa-8-azabiciclo[3.2.1]octan-8-il)-6-(3-oxa-8-azabiciclo[3.2.1]octan-8-il)-1,3,5-triazin-2-il)-4-(difluorometil)piridin-2-amina
Compuesto 4:
Figure imgf000029_0001
5-(4-(3-oxa-8-azabicido[3.2.1]octan-8-il)-6-morfolino-1,3,5-triazin-2-il)-4-(difluorometil)piridin-2-amina
Compuesto 5:
Figure imgf000029_0002
5-(4-(3-oxa-8-azabicido[3.2.1]octan-8-il)-6-morfolino-1,3,5-triazin-2-il)-4-(difluorometil)pirimidin-2-amina Compuesto 6:
Figure imgf000029_0003
5-(4,6-bis((S)-3-metilmorfolino)-1,3,5-triazin-2-il)-4-(difluorometil)piridin-2-amina
Compuesto 7:
Figure imgf000029_0004
5-(4,6-bis((S)-3-metilmorfolino)-1,3,5-triazin-2-il)-4-(difluorometil)pirimidin-2-amina
Compuesto 8:
Figure imgf000030_0001
(S)-4-(difluorometil)-5-(4-(3-metilmorfolino)-6-morfolino-1,3,5-triazin-2-il)piridin-2-amina
Compuesto 9:
Figure imgf000030_0002
(S)-4-(difluorometil)-5-(4-(3-metilmorfolino)-6-morfolino-1,3,5-triazin-2-il)pirimidin-2-amina
Compuesto 10:
Figure imgf000030_0003
5-(4-(3-oxa-8-azabicido[3.2.1]octan-8-il)-6-((S)-3-metilmorfolino)-1,3,5-triazin-2-il)-4-(difluorometil)piridin-2-amina Compuesto 11:
Figure imgf000030_0004
5-(4-(3-oxa-8-azabicido[3.2.1]octan-8-il)-6-((S)-3-metilmorfolino)-1,3,5-triazin-2-il)-4-(difluorometil)pirimidin-2-amina Compuesto 12:
Figure imgf000031_0001
4-(difluorometil)-5-(4-morfolino-6-(piperazin-1-il)-1,3,5-triazin-2-il)piridin-2-amina Compuesto 13:
Figure imgf000031_0002
4-(difluorometil)-5-(4-morfolino-6-(piperazin-1-il)-1,3,5-triazin-2-il)pirimidin-2-amina Compuesto 14:
Figure imgf000031_0003
(S)-4-(difluorometil)-5-(4-(3-metilmorfolino)-6-(piperazin-1-il)-1,3,5-triazin-2-il)piridin-2-amina Compuesto 15:
Figure imgf000031_0004
(S)-4-(difluorometil)-5-(4-(3-metilmorfolino)-6-(piperazin-1-il)-1,3,5-triazin-2-il)pirimidin-2-amina Compuesto 16:
Figure imgf000032_0001
4-(difluorometil)-5-(2,6-dimorfolinopirimidin-4-il)piridin-2-amina Compuesto 17:
Figure imgf000032_0002
4'-(difluorometil)-2,6-dimorfolino-[4,5'-bipirimidin]-2'-amina
Compuesto 18:
Figure imgf000032_0003
4-(difluorometil)-5-(4,6-dimorfolinopirimidin-2-il)piridin-2-amina Compuesto 19:
Figure imgf000032_0004
4'-(difluorometil)-4,6-dimorfolino-[2,5'-bipirimidin]-2'-amina
Compuesto 20:
Figure imgf000032_0005
4-(difluorometil)-5-(4-morfolino-6-tiomorfolino-1,3,5-triazin-2-il)piridin-2-amina
Compuesto 21:
Figure imgf000033_0001
4-(difluorometil)-5-(4-morfolino-6-tiomorfolino-1,3,5-triazin-2-il)pirimidin-2-amina
Se prefieren además los siguientes compuestos
Compuesto 22:
Figure imgf000033_0002
5-(6-(3-oxa-8-azabicido[3.2.1]octan-8-il)-2-(3-oxa-8-azabicido[3.2.1]octan-8-il)pirimidin-4-il)-4-(difluorometil)piridin-2-amina
Compuesto 23:
Figure imgf000033_0003
5-(2-(3-oxa-8-azabiciclo[3.2.1]octan-8-il)-6-morfolinopirimidin-4-il)-4-(difluorometil)piridin-2-amina
Compuesto 24:
Figure imgf000033_0004
2-(3-oxa-8-azabiciclo[3.2.1]octan-8-il)-4'-(difluorometil)-6-morfolino-[4,5'-bipirimidin]-2'-amina
Compuesto 25:
Figure imgf000034_0001
5-(2,6-bis((S)-3-metilmorfolino)pirimidin-4-il)-4-(difluorometil)piridin-2-amina Compuesto 26:
Figure imgf000034_0002
4'-(difluorometil)-2,6-bis((S)-3-metilmorfolino)-[4,5'-bipirimidin]-2'-amina Compuesto 27:
Figure imgf000034_0003
(S)-4-(difluorometil)-5-(6-(3-metilmorfolino)-2-morfolinopirimidin-4-il)piridin-2-amina Compuesto 28:
Figure imgf000034_0004
(S)-4'-(difluorometil)-6-(3-metilmorfolino)-2-morfolino-[4,5'-bipirimidin]-2'-amina Compuesto 29:
Figure imgf000035_0001
5-(4-(8-Oxa-3-azabicido[3.2.1]octan-3-il)-6-(8-oxa-3-azabicido[3.2.1]octan-3-il)-1,3,5-triazin-2-il)-4-(difluorometil)piridin-2-amina
Compuesto 30:
Figure imgf000035_0002
5-[4,6-bis(2,2-dimetilmorfolin-4-il)-1,3,5-triazin-2-il]-4-(difluorometil)piridin-2-amina Compuesto 31:
Figure imgf000035_0003
(S)-4-(difluorometil)-5-(2-(3-metilmorfolino)-6-morfolinopirimidin-4-il)piridin-2-amina Compuesto 32:
Figure imgf000035_0004
(S)-4'-(difluorometil)-2-(3-metilmorfolino)-6-morfolino-[4,5'-bipirimidin]-2'-amina
Compuesto 33:
Figure imgf000036_0001
4-(difluorometil)-5-[4-[(2S,6R)-2,6-dimetilmorfolin-4-il]-6-[(3R)-3-metilmorfolin-4-il]-1,3,5-triazin-2-il]piridin-2-amina Compuesto 34:
Figure imgf000036_0002
5-[4,6-bis[(2R,6S)-2,6-dimetilmorfolin-4-il]-1,3,5-triazin-2-il]-4-(difluorometil)piridin-2-amina
Compuesto 37:
Figure imgf000036_0003
5-[4,6-bis(3,7-dioxa-9-azabicido[3.3.1]nonan-9-il)-1,3,5-triazin-2-il]-4-(difluorometil)piridin-2-amina Compuesto 38:
Figure imgf000036_0004
4-(difluorometil)-5-[4-(3,7-dioxa-9-azabicido[3.3.1]nonan-9-il)-6-(3-oxa-8-azabicido[3.2.1]octan-8-il)-1,3,5-triazin-2-il]piridin-2-amina
Compuesto 39:
Figure imgf000037_0001
5-[4,6-bis(3,3-dimetilmorfolin-4-il)-1,3,5-triazin-2-il]-4-(difluorometil)piridin-2-amina Compuesto 40:
Figure imgf000037_0002
5-[4,6-b¡s[(3R,5S)-3,5-d¡met¡lmorfol¡n-4-¡l]-1,3,5-tr¡az¡n-2-¡l]-4-(d¡fluoromet¡l)p¡r¡d¡n-2-am¡na Compuesto 41:
Figure imgf000037_0003
5-[4,6-b¡s[(3R)-3-met¡lmorfol¡n-4-¡l]-1,3,5-tr¡az¡n-2-¡l]-4-(d¡fluoromet¡l)p¡r¡d¡n-2-am¡na Compuesto 42
Figure imgf000037_0004
4-(d¡fluoromet¡l)-5-[4-(3,3-d¡met¡lmorfol¡n-4-¡l)-6-morfol¡no-1,3,5-tr¡az¡n-2-¡l]p¡r¡d¡n-2-am¡na Compuesto 44:
Figure imgf000037_0005
4-(d¡fluoromet¡l)-5-[4-[(3R,5S)-3,5-d¡met¡lmorfol¡n-4-¡l]-6-[(3R)-3-met¡lmorfol¡n-4-¡l]-1,3,5-tr¡az¡n-2-¡l]p¡nd¡n-2-am¡na Compuesto 45:
Figure imgf000038_0001
4-(d¡fluoromet¡l)-5-[4-(3,3-d¡met¡lmorfol¡n-4-¡l)-6-[(3R)-3-met¡lmorfol¡n-4-¡l]-1,3,5-tr¡az¡n-2-¡l]p¡nd¡n-2-am¡na Compuesto 46:
Figure imgf000038_0002
4-(d¡fluoromet¡l)-5-[4-[(3R)-3-(methox¡met¡l)morfol¡n-4-¡l]-6-[(3R)-3-met¡lmorfol¡n-4-¡l]-1,3,5-tr¡az¡n-2-¡l]p¡nd¡n-2-am¡na Compuesto 47:
Figure imgf000038_0003
4-(d¡fluoromet¡l)-5-[4-(3,7-d¡oxa-9-azab¡ddo[3.3.1]nonan-9-¡l)-6-[(3R)-3-met¡lmorfol¡n-4-¡l]-1,3,5-tr¡az¡n-2-¡l]p¡r¡d¡n-2-am¡na
Compuesto 50:
Figure imgf000038_0004
4-(d¡fluoromet¡l)-5-[4-[(3R)-3-met¡lmorfol¡n-4-¡l]-6-(3-oxa-6-azab¡ddo[3.1.1]heptan-6-¡l)-1,3,5-tr¡az¡n-2-¡l]p¡nd¡n-2-am¡na
Compuesto 51:
Figure imgf000039_0001
4-(d¡fluoromet¡l)-5-[4-[(3R)-3-met¡lmorfol¡n-4-¡l]-6-(6-oxa-3-azab¡ddo[3.1.1]heptan-3-¡l)-1,3,5-tr¡az¡n-2-¡l]p¡nd¡n-2-amina
Compuesto 52:
Figure imgf000039_0002
4-(d¡fluoromet¡l)-5-[4-[(3R)-3-met¡lmorfol¡n-4-¡l]-6-[(1R,4R)-2-oxa-5-azab¡ddo[2.2.1]heptan-5-¡l]-1,3,5-tr¡az¡n-2-¡l]p¡r¡d¡n-2-am¡na
Compuesto 53:
Figure imgf000039_0003
4-(d¡fluoromet¡l)-5-[4-[(3R)-3-met¡lmorfol¡n-4-¡l]-6-[(1S,4S)-2-oxa-5-azab¡ddo[2.2.1]heptan-5-¡l]-1,3,5-tr¡az¡n-2-¡l]p¡r¡d¡n-2-am¡na
Compuesto 54:
Figure imgf000039_0004
5-[4,6-b¡s[(3R)-3-et¡lmorfol¡n-4-¡l]-1,3,5-triaz¡n-2-¡l]-4-(d¡fluoromet¡l)p¡r¡d¡n-2-am¡na
Compuesto 55:
Figure imgf000040_0001
5-[4,6-bis(8-oxa-5-azaspiro[3.5]nonan-5-il)-1,3,5-triazin-2-il]-4-(difluorometil)piridin-2-amina
Compuesto 56:
Figure imgf000040_0002
5-[4,6-b¡s[(3R)-3-¡soprop¡lmorfol¡n-4-¡l]-1,3,5-triaz¡n-2-¡l]-4-(d¡fluoromet¡l)p¡r¡d¡n-2-am¡na
Compuesto 66:
Figure imgf000040_0003
4-(d¡fluoromet¡l)-5-[4-(3,3-d¡met¡lmorfol¡n-4-¡l)-6-[(3R,5S)-3,5-d¡met¡lmorfol¡n-4-¡l]-1,3,5-tr¡az¡n-2-¡l]p¡r¡d¡n-2-am¡na Compuesto 67:
Figure imgf000040_0004
4-(d¡fluoromet¡l)-5-[4-(3,3-d¡met¡lmorfol¡n-4-¡l)-6-[(3R)-3-(metox¡met¡l)morfol¡n-4-¡l]-1,3,5-tr¡az¡n-2-¡l]p¡nd¡n-2-am¡na Compuesto 68:
Figure imgf000041_0001
[(3R)-4-[4-[6-am¡no-4-(d¡fluoromet¡l)-3-p¡r¡d¡l]-6-(3,3-d¡met¡lmorfol¡n-4-¡l)-1,3,5-tr¡az¡n-2-¡l]morfol¡n-3-¡l]metanol Compuesto 69:
Figure imgf000041_0002
4-(d¡fluoromet¡l)-5-[4-(3,3-d¡met¡lmorfol¡n-4-¡l)-6-(3,7-d¡oxa-9-azab¡c¡clo[3.3.1]nonan-9-¡l)-1,3,5-tr¡az¡n-2-¡l]p¡r¡d¡n-2-am¡na
Compuesto 70:
Figure imgf000041_0003
5-[4-(4-c¡cloprop¡lp¡peraz¡n-1-¡l)-6-(3,3-d¡met¡lmorfol¡n-4-¡l)-1,3,5-tr¡az¡n-2-¡l]-4-(d¡fluoromet¡l)p¡r¡d¡n-2-am¡na Compuesto 71:
Figure imgf000041_0004
4-(d¡fluoromet¡l)-5-[4-(3,3-d¡met¡lmorfol¡n-4-¡l)-6-[4-(2-metox¡et¡l)p¡peraz¡n-1-¡l]-1,3,5-tr¡az¡n-2-¡l]p¡r¡d¡n-2-am¡na Compuesto 77:
Figure imgf000042_0001
[(3R)-4-[4-[6-amino-4-(difluorometil)-3-pindil]-6-[(3R)-3-metilmorfolin-4-il]-1,3,5-triazin-2-il]morfolin-3-il]metanol Otros compuestos preferidos son
Compuesto 78:
Figure imgf000042_0002
4-(difluorometil)-5-[4-[(3R,5R)-3,5-dimetilmorfolin-4-il]-6-[(3R)-3-metilmorfolin-4-il]-1,3,5-triazin-2-il]pindin-2-amina Compuesto 79:
Figure imgf000042_0003
4-(difluorometil)-5-[4-[(3S,5S)-3,5-dimetilmorfolin-4-il]-6-[(3R)-3-metilmorfolin-4-il]-1,3,5-triazin-2-il]pindin-2-amina Compuesto 80:
Figure imgf000042_0004
4-(difluorometil)-5-[4-morfolino-6-(3-oxa-9-azabicido[3.3.1]nonan-9-il)-1,3,5-triazin-2-il]piridin-2-amina Compuesto 82:
Figure imgf000043_0001
4-(difluorometil)-5-[4-(3,7-dioxa-9-azabicido[3.3.1]nonan-9-il)-6-(3-oxa-9-azabicido[3.3.1]nonan-9-il)-1,3,5-triazin-2-il]piridin-2-amina
Compuesto 83:
Figure imgf000043_0002
5-[4,6-bis[(3S,5S)-3,5-dimetilmorfolin-4-il]-1,3,5-triazin-2-il]-4-(difluorometil)piridin-2-amina
Compuesto 84:
Figure imgf000043_0003
4-(difluorometil)-5-[4-(3,7-dioxa-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-9-il)-6-morfolino-1,3,5-triazin-2-il]piridin-2-amina Compuesto 85:
Figure imgf000043_0004
4-(difluorometil)-5-[4-[(3S)-3-etilmorfolin-4-il]-6-[(3R)-3-metilmorfolin-4-il]-1,3,5-triazin-2-il]piridin-2-amina Compuesto 86:
Figure imgf000044_0001
4-(difluorometil)-5-[4-[(3R)-3-etilmorfolin-4-il]-6-[(3R)-3-metilmorfolin-4-il]-1,3,5-triazin-2-il]piridin-2-amina
Compuesto 88:
Figure imgf000044_0002
4-(difluorometil)-5-[4-[(3R)-3-metilmorfolin-4-il]-6-(8-oxa-5-azaspiro[3.5]nonan-5-il)-1,3,5-triazin-2-il]piridin-2-amina
Preparación de compuestos de la invención
Los compuestos de la invención pueden sintetizarse mediante rutas sintéticas que incluyen procesos análogos a los bien conocidos en las técnicas químicas, particularmente a la luz de la descripción contenida en la presente descripción. Los materiales de partida están generalmente disponibles en fuentes comerciales o se preparan fácilmente con el uso de métodos bien conocidos por los expertos en la técnica.
Al preparar los compuestos de la invención, puede ser necesaria la protección de la funcionalidad remota (por ejemplo, amina primaria o secundaria) de los intermedios. La necesidad de tal protección variará según la naturaleza de la funcionalidad remota y las condiciones de los métodos de preparación. Los grupos protectores de amino adecuados incluyen terc-butiloxicarbonilo (BOC), bis-terc-butiloxicarbonilo o dimetilaminometilenilo. Un experto en la técnica determinará fácilmente la necesidad de tal protección. Para una descripción general de los grupos protectores y su uso, ver TW Greene, Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley & Sons, Nueva York, 1991.
Métodos de separación
En los métodos de preparación de los compuestos de esta invención, puede resultar ventajoso separar los productos de reacción entre sí y/o de los materiales de partida. Los productos deseados de cada etapa o serie de etapas se separan y/o purifican hasta el grado deseado de homogeneidad mediante las técnicas comunes en la técnica. Típicamente, tales separaciones implican extracción multifase, cristalización en un disolvente o mezcla de disolventes, destilación, sublimación, o cromatografía. La cromatografía puede implicar cualquier número de métodos que incluyen, por ejemplo: fase normal y fase inversa; métodos y aparatos de cromatografía líquida de alta, media y baja presión; analítica a pequeña escala; y cromatografía preparativa en capa fina o gruesa, así como técnicas de cromatografía en capa fina y rápida a pequeña escala.
La selección de métodos apropiados de separación depende de la naturaleza de los materiales involucrados, por ejemplo, presencia o ausencia de grupos funcionales polares en cromatografía, estabilidad de materiales en medios ácidos y básicos en extracción multifase y similares. Un experto en la técnica aplicará las técnicas más probables para lograr la separación deseada.
Ejemplos
Los ejemplos se destinan a ilustrar la presente invención sin restringirla.
Las reacciones químicas descritas en los Ejemplos pueden adaptarse fácilmente para preparar varios otros inhibidores de lípido quinasas de la invención, y son posibles métodos alternativos para preparar los compuestos de esta invención. Por ejemplo, la síntesis de compuestos no ejemplificados de acuerdo con la invención puede realizarse con éxito mediante modificaciones evidentes para los expertos en la técnica, por ejemplo, protegiendo adecuadamente los grupos interferentes, utilizando otros reactivos adecuados conocidos en la técnica distintos de los descritos, y/o realizando modificaciones rutinarias de las condiciones de reacción. Alternativamente, se reconocerá que otras reacciones descritas en la presente descripción o conocidas en la técnica tienen aplicabilidad para preparar otros compuestos de la invención.
Como regla general, se han obtenido espectros de masa y 1H NMR para los compuestos preparados. En los Ejemplos descritos más abajo, a menos que se indique de cualquier otra forma, todas las temperaturas se establecen en grados Celsius (°C). Los reactivos se adquirieron de proveedores comerciales tales como Sigma Aldrich, Fluorochem, Acros, Lancaster, TCI o Maybridge, y se usaron sin purificación adicional a menos que se indique de cualquier otra forma. Las reacciones expuestas más abajo se realizaron generalmente bajo presión positiva de nitrógeno o con un tubo de secado (a menos que se indique de cualquier otra forma) en disolventes anhidros, y los matraces de reacción se equiparon típicamente con septos de goma para la introducción de sustratos y reactivos mediante una jeringa. La cristalería se secó al horno. La cromatografía en columna se realizó con el uso de gel de sílice Merck. Los espectros de 1H NMR se registraron en un instrumento Bruker que funcionaba a 400 MHz. Se obtuvieron espectros de 1H NMR para soluciones en varios disolventes deuterados tales como CDCh, (CD3)2SO, CD3OD o (CD3)2CO. Los valores de cambio químico 5 se informaron en ppm y se corrigieron según la señal de los disolventes deuterados (7,26 ppm para CDCh) o TMS (0 ppm). Espectros de 19F NMR se calibra con respecto a CFCh(5 = 0 ppm) como estándar externo.
19F NMR se registraron espectros de 1H desacoplado. Cuando se informan las multiplicidades de picos, se usan las siguientes abreviaturas: s (singlete), d (doblete), t (triplete), m (multiplete), quint (quinteto), br (ensanchado). Las constantes de acoplamiento, cuando se dan, se expresan en hercios (Hz). Se han obtenido espectros de masas (MS) MALDI-ToF en un Voyager-DeTM Pro medidos en m/z.
A continuación se usan las siguientes abreviaturas: BSA (albúmina de suero bovino), DMSO (dimetilsulfóxido), ESI (ionización por pulverización de electrones), HCl (ácido clorhídrico), M (molar), MALDI (desorción/ionización láser asistida por matriz), MS (espectrometría de masas), PBS (solución salina tamponada con fosfato), TLC (cromatografía en capa fina), nd (no determinado).
Ejemplo 1
Preparación de compuestos intermedios y de compuestos de la invención.
Preparación de compuestos intermedios
Se usaron los siguientes métodos para preparar los compuestos intermedios usados para producir compuestos de fórmula (I).
Método 1: 8-(4-(3-oxa-8-azabiciclo[3.2.1]octan-8-il)-6-cloro-1,3,5-triazin-2-il)-3-oxa-8-azabiciclo[3.2.1]octano (i1)
Figure imgf000045_0001
3-Oxa-8-azabiciclo[3.2.1]octano HCl (Advanced ChemBlocks Inc, número de producto A-861, 2,00 g, 13,4 mmol, 2,0 eq.) y W,W-diisopropiletilamina (4,80 mL, 27,6 mmol, 4,1 eq.) se cargan en un matraz y se disuelven en diclorometano (20 mL). El matraz se coloca en un baño de hielo y la solución se enfría posteriormente a 0 °C. Después, esta solución se añade gota a gota a una solución de cloruro cianúrico en diclorometano (20 mL) a 0 °C. La mezcla de reacción resultante se agita durante toda la noche, mientras se deja calentar a temperatura ambiente. Se añade más diclorometano (100 mL) y la capa orgánica se lava con una solución acuosa saturada de bisulfato de sodio. Después, se seca la capa orgánica sobre sulfato de sodio anhidro, se filtra y se evapora el disolvente a presión reducida. La purificación por cromatografía rápida (ciclohexano/acetato de etilo 4:1) da el intermedio deseado i1 como un sólido incoloro (rendimiento de 79 %). 1H NMR (400 MHz, CDCh): 54,70-4,54 (m, 4 H), 3,80-3,58 (m, 8 H), 2,14-1,89 (m, 8 H); MS (MALDI): m/z = 338,4 ([M+H]+).
El método 1 también se usa para la preparación de los siguientes compuestos intermedios i2 a i10, y los intermedios i79 a i81 e i90.
Figure imgf000046_0001
Figure imgf000047_0001
Figure imgf000048_0003
Método 2: 2,4-dicloro-6-morfolino-1,3,5-triazina (i11)
Figure imgf000048_0001
A una solución de cloruro cianúrico (18,1 g, 0,100 mol, 1,0 eq.) en diclorometano (200 mL) se le añade gota a gota una solución de morfolina (17,4 g, 0,200 mol, 2,0 eq.) a -78 °C durante 2 horas. La mezcla resultante se deja calentar a 0 °C con agitación y se mezcla con una solución saturada de bisulfato de sodio enfriada con hielo en agua. Las fases se separan y la fase orgánica se lava con salmuera semiconcentrada, se seca sobre sulfato de sodio y se evapora para producir el compuesto del título i11 como un sólido incoloro. 1H NMR (400 MHz, CDCh): 83,90-3,86 (m, 4 H), 3,77-3,72 (m, 4 H).
Método 3: 8-(4-cloro-6-morfolino-1,3,5-triazin-2-il)-3-oxa-8-azabiciclo-[3.2.1]octano (i12)
Figure imgf000048_0002
3-Oxa-8-azabiciclo[3.2.1]octanoHCl (Advanced ChemBlocks Inc, número de producto A-861, 200 mg, 1,34 mmol, 1,1 eq.) y W,A/-diisopropiletilamina (470 m L, 2,69 mmol, 2,1 eq.) se cargan en un matraz y se disuelven en etanol (3 mL). El matraz se coloca en un baño de hielo. Se añade una solución del compuesto i11 (300 mg, 1,28 mmol, 1,0 eq.) en etanol (2 mL) a la solución anterior a 0 °C. La mezcla resultante se agita durante toda la noche, mientras se deja calentar a temperatura ambiente. Se añade agua desionizada (20 mL) y la capa acuosa se extrae con acetato de etilo (3 x 30 mL). La capa orgánica combinada se seca sobre sulfato de sodio anhidro, se filtra y el disolvente se evapora a presión reducida. Purificación por cromatografía rápida (ciclohexano/acetato de etilo 9:1 88:2) da el intermedio i12 deseado como un sólido incoloro (78 % de rendimiento). 1H NMR (400 MHz, CDCh): 84,69-4,56 (m, 2 H), 3,86-3,59 (m, 12 H), 2,12-1,91 (m, 4 H); MS (MALDI): m/z = 312,7 ([M+H]+).
El método 3 también se usa para la preparación de los siguientes compuestos intermedios i13 a il6, y los intermedios i87 e i91.
Figure imgf000049_0001
Método 4: (S)-4-(4,6-didoro-1,3,5-triazin-2-il)-3-metilmorfolina (i17)
Figure imgf000050_0001
A una solución de cloruro cianúrico (450 mg, 2,44 mol, 1,0 eq.) en diclorometano (4 mL) se le añade lentamente una solución de (S)-3-metilmorfolina (Activate Scientific, número de producto AS3424, 0,28 mL, 2,44 mol, 1,0 eq.) y trietilamina (0,35 ml, 2,51 mol, 1,02 eq.) en diclorometano (2 mL) a -50 °C. La mezcla resultante se agita durante 2 horas a -50 °C, después se deja calentar a 0 °C con agitación y se mezcla con una solución saturada helada de bisulfato de sodio en agua. Las fases se separan y la fase orgánica se lava con salmuera, se seca sobre sulfato de sodio y se evapora para producir el compuesto del título i17 como un sólido incoloro (rendimiento de 95 %). 1H NMR (400 MHz, CDCla): 84,78-4,69 (m, 1 H), 4,43-4,39 (m, 1 H), 3,98-3,96 (m, 1 H), 3,78-3,76 (m, 1 H), 3,67-3,65 (m, 1 H), 3,51-3,47 (m, 1 H), 3,40-3,37 (m, 1 H), 1,36 (m, 3 H).
Método 5: 8-(4-cloro-6-((S)-3-metilmorfolino)-1,3,5-triazin-2-il)-3-oxa-8-azabiciclo[3.2.1]octano (i18)
Figure imgf000050_0002
3-Oxa-8-azabiciclo[3.2.1]octano HCl (Advanced ChemBlocks Inc, número de producto A-861, 383 mg, 2,55 mmol, 1,1 eq.) y W,A/-diisopropiletilamina (1,0 mL, 5,60 mmol, 2,4 eq.) se cargan en un matraz y se disuelven en etanol (4 mL). El matraz se coloca en un baño de hielo. Se añade una solución del compuesto i17 (580 mg, 2,33 mmol, 1,0 eq.) en etanol (2 mL) a la solución anterior a 0 °C. La mezcla resultante se agita durante 4 horas, mientras se deja calentar a temperatura ambiente. Se añade agua desionizada (20 mL) y la capa acuosa se extrae con acetato de etilo (3 x 30 mL). La capa orgánica combinada se seca sobre sulfato de sodio anhidro, se filtra y el disolvente se evapora a presión reducida. Purificación por cromatografía rápida (ciclohexano/acetato de etilo 9:1 88:2) da el intermedio i18 deseado como un sólido incoloro (rendimiento de 88 %). 1H NMR (400 MHz, CDCla): 84,75-4,52 (m, 3 H), 4,37-4,24 (m, 1 H), 3,95-3,92 (m, 1 H), 3,73-3,70 (m, 3 H), 3,64-3,61 (m, 3 H), 3,52-3,42 (m, 1 H), 3,29-3,17 (m, 1 H), 2,11-1,89 (m, 4 H), 1,31 (m, 3 H).
Método 6: 4-(4,6-dicloro-1,3,5-triazin-2-il)piperazina-1-carboxilato de terc-butilo (i19)
Figure imgf000050_0003
il9
A una solución enfriada (-50 °C) de cloruro cianúrico (1,0 g, 5,42 mmol, 1,0 eq.) en diclorometano (4 mL) se añade gota a gota una solución de piperazina-1-carboxilato de ferc-butilo (Sigma, número de producto 343536 , 1,02 g, 5,48 mmol, 1,01 eq.) y trietilamina (0,767 ml, 5,53 mmol, 1,02 eq.) en diclorometano (2 mL). La mezcla de reacción resultante se agita a -50 °C durante 4 horas. Se añaden una solución acuosa saturada de bisulfato de sodio (10 mL) y diclorometano (20 mL). La mezcla se transfiere a un embudo de decantación. La capa orgánica se separa, se lava con una solución acuosa saturada de bisulfato de sodio (20 mL), se seca sobre sulfato de sodio anhidro, se filtra y después se evapora el disolvente a presión reducida para dar el intermedio puro i19 (rendimiento de 80 %). 1H NMR (400 MHz, CDCla): 83,88-3,85 (m, 4 H), 3,53-3,51 (m, 4 H), 1,49 (m, 9 H).
Método 7: 4-(4-(3-oxa-8-azabiciclo[3.2.1loctan-8-il)-6-cloro-1,3,5-triazin-2-il)piperazina-1-carboxilato de terc butilo (i20)
Figure imgf000051_0001
il9 i20
3-Oxa-8-azabiciclo[3.2.1]octano HCl (Advanced ChemBlocks Inc, número de producto A-861, 235 mg, 1,57 mmol, 1,0 eq.) y W,W-diisopropiletilamina (592 pL, 3,14 mmol, 2,1 eq.) se cargan en un matraz y se disuelven en etanol (6 mL). El matraz se coloca en un baño de hielo. Se añade una solución del compuesto i19 (500 mg, 1,5 mmol, 1,0 eq.) en etanol (2 mL) a la solución anterior a 0 °C. La mezcla resultante se agita durante toda la noche, mientras se deja calentar a temperatura ambiente. Se añade agua desionizada (10 mL) y la capa acuosa se extrae con acetato de etilo (3 x 30 mL). La capa orgánica combinada se seca sobre sulfato de sodio anhidro, se filtra y el disolvente se evapora a presión reducida. La purificación por cromatografía rápida (ciclohexano/acetato de etilo 8:2) dio el intermedio deseado i20 como un sólido incoloro (rendimiento de 77 %). 1H NMR (400 MHz, CDCla): 84,68-4,60 (m, 2 H), 3,76-3,70 (m, 6 H), 3,64-3,62 (m, 2 H), 3,47-3,45 (m, 4 H), 2,08-1,95 (m, 4 H), 1,48 (br s, 9 H); MS (MALDI): m/z = 411,8 ([M+H]+).
El método 7 también se usa para la preparación del siguiente compuesto intermedio i21.
Figure imgf000051_0003
Método 8: 4,4'-(6-cloropirimidina-2,4-diil)dimorfolina (i22) y 4,4'-(2-cloropirimidina-4,6-diil)dimorfolina (i23)
Figure imgf000051_0002
2,4,6-tridoropirimidina (Manchester Organics, número de producto Y17832, 11,2 g, 61 mmol, 1,0 eq.), N,N-diisopropiletilamina (23,3 mL, 134,2 mmol, 2,2 eq.) y morfolina (11,7 mL, 134,2 mmol , 2,2 eq.) se cargan en un matraz y se disuelven en etanol (120 mL). El matraz se equipa con un condensador a reflujo y se coloca en un baño de aceite precalentado a 100 °C. La mezcla de reacción se agita a esta temperatura durante 18 horas. Después de este tiempo, la mezcla de reacción se enfría a temperatura ambiente y los volátiles se eliminan a presión reducida. La mezcla resultante se disuelve en diclorometano (100 mL) y se lava dos veces con una solución acuosa de bisulfato de sodio (2 x 80 mL). La capa orgánica se seca sobre sulfato de sodio anhidro, se filtra y se concentra a presión reducida con el uso de un rotavapor. Los productos i22 y i23 se aíslan mediante cromatografía rápida en gel de sílice (ciclohexano/acetato de etilo 3:1 a 1:1). Las fracciones de producto se combinan y evaporan para producir i22 como un polvo incoloro (13,8 g, 80 %) e i23 como un polvo incoloro (2,2 g, rendimiento de 13 %). 4,4'-(6-cloro-pirimidina-2,4-diil)dimorfolina (i22): 1H NMR (400 MHz, CDCh): 85,85 (s, 1 H), 3,71-3,75 (m, 12 H), 3,52-3,55 (m, 4 H); MS (MALDI): m/z: 285,4 ([M+H]+). 4,4'-(2-cloro-pirimidina-4,6-diil)dimorfolina i23): 1H NMR (400 MHz, CDCla): 85,38 (s, 1 H), 3,73­ 3,76 (m, 8 H), 3,52-3,54 (m, 8 H); MS (MALDI): m/z: 285,2 ([M+H]+).
Método 9: 8-(4-(3-oxa-8-azabiciclo[3.2.1]octan-8-il)-6-cloropirimidin-2-il)-3-oxa-8-azabiciclo[3.2.1]octano (i24)
Figure imgf000052_0001
Una solución de 2,4,6-tricloropirimidina (0,676 mL, 5,88 mmol, 1,0 eq.), clorhidrato de 3-oxa-8-azabiciclo[3.2.1]octano (1,76 g, 11,8 mmol, 2,0 eq.) y N,N-diisopropiletilamina (4,10 ml, 23,5 mmol, 4,0 eq.) en acetato de etilo (18 volúmenes) se calienta durante 16 horas (100 °C). Después, el disolvente se elimina a presión reducida y el residuo se disuelve en diclorometano (60 volúmenes) y se lava con una solución acuosa saturada de bisulfato de sodio (3 x 60 volúmenes). La capa orgánica se seca sobre sulfato de sodio anhidro, se filtra y se concentra a presión reducida. La purificación mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice (ciclohexano/acetato de etilo de 3:1 a 1:1) proporciona el intermedio i24 deseado como un sólido incoloro (1,23 g, 62 %). 1H NMR (400 MHz, CDCh): 85,80 (s, 1 h ), 4,59 (s, 2 H), 4,35 (m, 2 H), 3,76 (t,2Jh h = 10,8 Hz, 4 H), 3,59 (d, 2Jh h = 10,8 Hz, 4 H), 2,03 (m, 8 H); MS (MALDI): m/z = 337,7 ([M+H]+).
El método 9 también se usa para la preparación del siguiente compuesto intermedio i25.
Figure imgf000052_0004
Método 10: 4-(4,6-dicloropirimidin-2-il)morfolina (i26) y 4-(2,6-dicloropirimidin-4-il)morfolina
Figure imgf000052_0002
Figure imgf000052_0003
A una solución de 2,4,6-tridoropirimidina (14,0 mL, 122 mmol, 1,0 eq.) en EtOH (150 mL) se añade una solución de morfolina (11,2 mL, 256 mmol, 2,1 eq.) y N,N-diisopropiletilamina (44,6 ml, 256 mmol, 2,1 eq.) en EtOH (150 ml) gota a gota a 0 °C. La mezcla de reacción se agita durante toda la noche a temperatura ambiente y el disolvente se elimina a presión reducida. El producto crudo se extrae con diclorometano (3 x 100 mL) y la fase orgánica se lava sucesivamente con bisulfato de sodio acuoso saturado (3 x 400 mL). Las capas orgánicas combinadas se secan sobre sulfato de sodio anhidro, se filtran y se evaporan a presión reducida. La mezcla en bruto se purifica por cromatografía en columna rápida (SO 2, ciclohexano/acetato de etilo 9:1 a 3:1) para producir i26 (5,02 g, 18 %) y i27 (16,7 g, 59 %), ambos como sólidos incoloros.
4-(4,6-dicloropirimidin-2-il)morfolina (i26): 1H NMR (400 MHz, CDCh): 86,56 (s, 1 H), 3,78 (m, 4 H) 3,74 (m, 4 H). 4-(2,6-dicloropirimidin-4-il)morfolina (i27): 1H NMR (400 MHz, CDCla): 86,41 (s, 1 H), 3,78 (m, 4 H), 3,65 (m, 4 H).
Método 11: (S)-4-(2-cloro-6-morfolinopirimidin-4-il)-3-metilmorfolina (i28)
Figure imgf000053_0002
Una solución de i27 (694 mg, 2,97 mmol, 1,0 eq.), (S)-3-metilmorfolina(0,500 ml, 4,46 mmol, 1,5 eq.) y N,N-diisopropiletilamina (1,29 ml, 7,43 mmol, 2,5 eq.) en EtOH (5,0 ml) se calienta a reflujo durante 3 días. Después, el disolvente se elimina a presión reducida. El residuo se disuelve en diclorometano (60 volúmenes) y se lava con bisulfato de sodio acuoso saturado (3 x 60 volúmenes). La capa orgánica se seca sobre sulfato de sodio anhidro, se filtra y se concentra a presión reducida. La mezcla bruta se purifica mediante cromatografía rápida (SO 2, ciclohexano/acetato de etilo 3:1 a 1:1) para producir el compuesto del título (S)-4-(2-cloro-6-morfolinopirimidin-4-il)-3-metilmorfolina (i28) como un sólido incoloro (425 mg, 48 %). 1H NMR (400 MHz, CDCh): 85,85 (s, 1 H), 4,62 (dd, 2Jh,h = 13,6 Hz, 3Jh, h = 2,9 Hz, 1 H), 4,25 (dd, 2Jh, h = 13,6 Hz, 3Jh h = 2,9 Hz, 1 H), 3,93 (dd, 2Jh, h = 11,4 Hz, 3Jh, h = 3,8 Hz, 1 H), 3,75, (t, 3Jh h = 5,0 Hz, 4 H), 3,71 (s, 1 H), 3,66 (dd, 2Jh.h = 11.3 Hz, 3Jh h = 3,2 Hz, 1 H), 3,53 (m, 5 H), 3,23 (m, 1 H), 1,26 (d, 2Jh.h =11,3 Hz, 3 H); MS (MALDI): m/z = 299,4 ([M+H]+).
El método 11 también se usa para la preparación del siguiente compuesto intermedio i29.
Figure imgf000053_0003
Método 12: (S)-4-(6-cloro-2-morfolinopirimidin-4-il)-3-metilmorfolina(i30)
Figure imgf000053_0001
Una solución de (S)-3-metilmorfolina (194 mg, 1,32 mmol, 1,5 eq.), i26 (300 mg, 1,28 mmol, 1,0 eq.) y N,N-diisopropiletilamina (3,0 eq.) en DMF (17 volúmenes) se calienta durante 16 horas (130 °C). Después, el disolvente se elimina a presión reducida. El residuo se disuelve en diclorometano (100 volúmenes) y se lava con bisulfato de sodio acuoso saturado (3 x 100 volúmenes). La capa orgánica se seca sobre sulfato de sodio anhidro, se filtra y se concentra a presión reducida. La mezcla en bruto se purifica por cromatografía rápida (SiO2, ciclohexano/acetato de etilo 5:1) para proporcionar el compuesto del título i30 como un sólido incoloro (257 mg, 67 %). 1H NMR (400 MHz, CDCh): 8 5,84 (s, 1 H), 4,18 (m, 1 H), 3,94 (m, 2 H), 3,71 (m, 10 H), 3,53, (dt, 2Jh h = 12,0 Hz, 3Jh h = 3,1 Hz, 1 H), 3,20 (dt, 2Jh,h = 12,8 Hz, 3Jh h = 3,8 Hz, 1 H), 1,27 (d, 3Jh h = 6,8 Hz, 3 H); MS (MALDI): m/z = 298,4 ([M]+).
Método 14: 8-(4,6-dicloro-1,3,5-triazin-2-il)-3-oxa-8-azabiciclo[3.2.1]octano (i32)
Figure imgf000054_0001
Una solución de cloruro cianúrico (1,97 g, 10,7 mmol, 1,0 eq.) en diclorometano (10 mL) se enfría a -50 °C. Una solución de clorhidrato de 3-oxa-8-azabiciclo[3.2.1]octano (1,60 g, 10,7 mmol, 1,0 eq.) y N,N-diisopropiletilamina (3,73 mL, 21,4 mmol, 2,0 eq.) en diclorometano (40 mL) se añade lentamente durante un período de 5 horas. La mezcla se agita durante otras 5 horas a esta temperatura. Después, se añaden diclorometano (20 mL) y bisulfato de sodio acuoso saturado (50 mL) y la mezcla se deja calentar a temperatura ambiente. Las capas se separan y la capa orgánica se lava con bisulfato de sodio acuoso saturado (2 x 50 mL). La capa orgánica se seca sobre sulfato de sodio anhidro y el disolvente se elimina a presión reducida. La mezcla bruta se recristaliza en n-heptano/diclorometano (20 ml/13 mL) para producir el compuesto del título 8-(4,6-dicloro-1,3,5-triazin-2-il)-3-oxa-8-azabiciclo[3.2.1]octano (i32) como un sólido incoloro (2,47 g, 47 %). 1H NMR (400 MHz, CDCh): 84,74 (m, 2 H), 3,72 (d,3Jh,h = 1,5 Hz, 4 H), 2,08 (m, 4 H).
El método 14 también se usa para la preparación de los siguientes compuestos intermedios i33 e i34.
Figure imgf000054_0003
n
Método 15: 9-(4-(3-oxa-8-azabiciclo[3.2.1]octan-8-il)-6-cloro-1,3,5-triazin-2-il)-3,7-dioxa-9-azabiciclo[3.3.1]nonano (i35)
Figure imgf000054_0002
____
cr N ' Ci .. ci
o / i
O
i32 135
A una solución de 3,7-dioxa-9-azabiciclo[3.3.1]nonano (184 mg, 0,700 mmol, 1,0 eq.) y WW-diisopropiletilamina (0,170 ml, 0,970 mmol, 1,4 eq.) en 1,4-dioxano (1,0 ml) se añade a una solución de ¡32 (100 mg, 0,770 mmol, 1,1 eq.) en 1,4-dioxano (2,0 mL). La mezcla resultante se calienta durante 1 hora a 70 °C. Después, se añaden diclorometano (50 mL) y agua (50 mL). La capa acuosa se extrae con diclorometano (3 x 50 mL), las capas orgánicas combinadas se secan sobre sulfato de sodio anhidro y el solvente se evapora. La mezcla bruta se purifica mediante cromatografía rápida automatizada sobre gel de sílice (ciclohexano/acetato de etilo 2:1 a 0:1) para producir el compuesto del título 9-(4-(3-oxa-8-azab¡c¡clo[3.2.1]octan-8-¡l)-6-cloro-1,3,5-tr¡az¡n-2-¡l)-3,7-d¡oxa-9-azab¡c¡clo[3.3.1]nonano (i35) como un sólido incoloro (192 mg, 77 %). 1H NMR (400 MHz, (CDa^SO): 84,70 (m, 1 H), 4,55 (m, 2 H), 4,44 (m, 1 H), 4,12 (m, 4 H), 3,90 (m, 4 H), 3,72 (m, 2 H), 3,64 (m, 2 H), 2,08 (m, 2 H), 1,97 (m, 2 H); MS (MALDI): m/z = 354,3 ([M]+).
Método 16: 9-(4-cloro-6-((f?)-3-met¡lmorfol¡no)-1,3,5-triaz¡n-2-¡l)-3,7-d¡oxa-9-azab¡c¡clo[3.3.1]nonano(¡36)
Figure imgf000055_0001
A una solución de 3,7-dioxa-9-azabiciclo[3.3.1]nonano (173 mg, 1.27 mmol, 1,05 eq.) y WW-diisopropiletilamina (0,50 mL, 2,52 mmol, 2,1 eq.) en tetrahidrofurano (5 mL) se añade una solución de i33 (300 mg, 2,52 mmol, 2,1 eq.) en 1,4-dioxano (2,0 mL). La mezcla resultante se calienta durante 2 horas (70 °C). Después, se añaden acetato de etilo (20 mL) y bisulfato de sodio acuoso saturado (20 mL). Las fases se separan y la capa orgánica se lava con bisulfato de sodio acuoso saturado (2 x 20 mL). La capa orgánica se seca sobre sulfato de sodio anhidro y el disolvente se elimina a presión reducida. La mezcla en bruto se purifica mediante cromatografía rápida automatizada (SO 2, ciclohexano/acetato de etilo 2:1 a 0:1) para proporcionar el compuesto del título i36 como un sólido incoloro (316 mg, 76 %). 1H NMR (400 MHz, (CDa^SO): 84,55-4,53 (m, 1 H), 4,42 (m, 1 H), 4,32 (m, 1 H), 4,25-4,16 (m, 1 H), 4,01-3,97 (m, 4 H), 3,87 (dd, 3Jh h = 3,8 Hz, 2Jh h = 11,2 Hz, 1 H), 3,73-3,65 (m, 5 H), 3,53 (dd, 3Jh,h = 3,0 Hz, 2Jh h = 11,6 Hz, 1 H), 3,38 (m, 1 H), 3,15 (m, 1 H), 1,20 (d, 3Jh, h =6,9 Hz, 3 H).
El método 16 también se usa para la preparación de los siguientes compuestos intermedios i37 a i53, intermedio i82 e intermedios i85, i86, i92, i93, i94.
Figure imgf000055_0002
Figure imgf000056_0001
(continuación)
Figure imgf000057_0002
Método 17: 9-(4-doro-6-(3,3-dimetilmorfolino)-1,3,5-triazin-2-il)-3,7-dioxa-9-azabicido[3.3.1]nonano (i54)
Figure imgf000057_0001
c r '
5 mg, 1,20 mmol, 1,05 eq.) ) en 1,4-dioxano (5 mL) por mL) se añade. El resultado es de 2 horas (70 °C). Después, se añade etilo (20 mL) y bisulfato de sodio acuoso saturado (20 mL). Las fases se separan y la capa orgánica se lava con bisulfato de sodio acuoso saturado (2 x 20 mL). La capa orgánica se seca sobre sulfato de sodio anhidro y el disolvente se elimina a presión reducida. La mezcla en bruto se purifica mediante cromatografía rápida automatizada (SÍO2 ciclohexano/acetato de etilo 2:1 a 0:1) para proporcionar el compuesto del título i54 como un sólido incoloro (178 mg, 44 %). 1H NMR (400 MHz, (CD3)2SO): 84,32 (m, 2 H), 4,05-3,98 (m, 4 H), 3,77 (m, 4 H), 3,71 (m, 4 H), 3,44 (m, 2 H), 1,41 (s, 6 H). MS (MALDI): m/z = 356,3 ([M+H]+).
El método 17 también se usa para la preparación de los siguientes compuestos intermedios i55 a i64.
Figure imgf000058_0001
Método 18: 4-(difluorometil)piridin-2-amina (i65)
Figure imgf000059_0001
Se disuelven acetato de paladio (275 mg, 1,22 mmol, 0,05 eq.) y 2-dicidohexilfosfino-2',4',6'-triisopropilbifenilo (Sigma-Aldrich, número de producto 638064, 1,17 g, 2,45 mmol, 0,10 eq.) en 1,4-dioxano (10 mL) en atmósfera de nitrógeno y la mezcla resultante se deja agitar a temperatura ambiente durante 45 minutos. Esta solución se añade después a una mezcla de carbamato de ferc-butilo (Sigma, número de producto 167398, 4,30 g, 36,7 mmol, 1,5 eq.), Cs2CO3 (15,9 g, 48,8 mmol, 2,0 eq.) y 2-cloro-4-difluorometil-piridina (Manchester Organics, número de producto U15343, 4,00 g, 24,5 mmol, 1,0 eq.) en 1,4-dioxano (80 mL) en atmósfera de nitrógeno. La mezcla de reacción resultante se calienta después a 90 °C durante 3 horas, durante las cuales se vuelve marrón. Pasado este tiempo, se deja enfriar la mezcla a temperatura ambiente. Después se diluye con acetato de etilo, se lava con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio (2 x 30 mL) y agua desionizada. La capa orgánica se seca sobre sulfato de sodio anhidro, se filtra y el disolvente se evapora a presión reducida. El residuo pardusco se mezcla con HCl 4 M en dioxano (50 mL, exceso) y metanol (20 mL) y después se calienta a 80 °C durante 45 minutos. Se añade agua desionizada y la capa acuosa se lava con acetato de etilo (3 x). Después, la capa acuosa se alcaliniza a pH = 9, con hidróxido de sodio sólido. La capa acuosa se extrae con acetato de etilo (3 x). La capa orgánica combinada se seca sobre sulfato de sodio anhidro, se filtra y se concentra hasta sequedad a presión reducida. El producto deseado i65 se obtiene como un sólido incoloro, que se usa en el siguiente paso sin purificación adicional (rendimiento de 98 %). 1H NMR (400 MHz, CDCh): 88,16 (d, 2Jhh = 5,2 Hz, 1 H), 6,74 (d, 2Jhh = 4,8 Hz, 1 H), 6,59 (s, 1 H), 6,51 (t, 2Jhf = 56 Hz, 1 H), 4,61 (br s, 2 H); 19F NMR (376 MHz, CDCla): 8 -116,0 (s, 2 F).
Método 19: 5-bromo-4-(difluorometil)piridin-2-amina (i66)
Figure imgf000059_0002
A una solución del compuesto i65 (3,00 g, 20,8 mmol, 1,0 eq.) en tetrahidrofurano (60 mL) se le añade N-bromosuccinimida (3,89 g, 21,9 mmol, 1,05 eq.) a 0 °C en un baño de hielo. La mezcla resultante se agita durante toda la noche, mientras se deja calentar a temperatura ambiente. Se añade acetato de etilo y la capa orgánica se lava con carbonato de sodio acuoso (8 %). Después, la capa orgánica se separa y se acidifica con una solución acuosa de HCl 3 M. La capa acuosa se lava con acetato de etilo (3 x 50 mL) y después se alcaliniza a pH = 10, con hidróxido de sodio sólido. La capa acuosa se extrae con acetato de etilo (3 x 50 mL). La capa orgánica combinada se seca sobre sulfato de sodio anhidro, se filtra y se concentra hasta sequedad a presión reducida. El producto deseado i66 se obtiene como un sólido pardusco, que se usa en el siguiente paso sin purificación adicional (rendimiento de 79 %). 1H NMR (400 MHz, CDCla): 88,20 (s, 1 H), 6,75 (s, 1 H), 6,71 (t, 2Jh,f = 54 Hz, 1 H); 4,62 (br s, 2 H); 19F NMR (376 MHz, CDCl3): 8-118,9 (s, 2 F).
Método 20: N’-(5-bromo-4-(difluorometil)piridin-2-N, N-dimetilformimidamida (i67)
Figure imgf000059_0003
A una solución del compuesto i66 (3,68 g, 16,5 mmol, 1,0 eq.) en tetrahidrofurano (50 mL) se le añade N,N-dimetilformamida dimetil acetal (Manchester Organics, número de producto 005030, 3,30 ml, 24,8 mmol, 1,5 eq.) y la mezcla resultante se agita a 60 °C durante 3 horas. Se deja enfriar la mezcla a temperatura ambiente y se evapora el disolvente a presión reducida. El producto bruto se purifica mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice (ciclohexano/acetato de etilo 1:1) para proporcionar el producto deseado i67 en forma de un sólido amarillento (rendimiento de 82 %). 1H NMR (400 MHz, CDCh): 88,43 (s, 1 H), 8,34 (br s, 1 H), 7,17 (s, 1 H), 6,73 (t, 2Jh,f = 54 Hz, 1 H), 3,12 (s, 3 H), 3,10 (s, 3 H); 19F NMR (376 MHz, CDCh): 8 -118,6 (s, 2 F); MS (MALDI): m/z = 278,5 ([M+H]+).
Método 21: W-(4-(difluorometil)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridin-2-il)-W,W-dimetilformimidamida (i68)
Figure imgf000060_0001
A una solución 2 M de cloruro de isopropilmagnesio (Sigma, número de producto 230111, 3,10 ml, 6,20 mmol, 1,15 eq.) en tetrahidrofurano (6 mL) se le añade lentamente una solución del compuesto ¡67 (1,50 g, 5,39 mmol, 1,0 eq.) en tetrahidrofurano (5 ml) a 0 °C. La mezcla pardusca resultante se agita a 0 °C durante 45 minutos y después a temperatura ambiente durante 15 minutos. Después de este tiempo, la monitorización por TLC (ciclohexano/acetato de etilo 1:1) mostró un consumo completo del material de partida. Se añade 2-isopropoxi-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolano (Manchester Organics, número de producto W23343, 1,43 mL, 7,00 mmol, 1,3 eq.) y la mezcla se calienta a 60 °C durante 3 horas. Después, la mezcla se coloca en un matraz Erlenmeyer, se enfría a 0 °C con un baño de hielo y se apaga con una solución acuosa al 15 % de cloruro de amonio. Las capas se separan y la capa acuosa se extrae con acetato de etilo (3 x 40 mL). Las capas orgánicas combinadas se secan sobre sulfato de sodio anhidro, se filtran y el disolvente se evapora a presión reducida. Se añade heptano y la capa orgánica se lava con una solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio, se seca sobre sulfato de sodio anhidro, se filtra y después se concentra hasta sequedad bajo presión reducida. El producto deseado ¡68 se obtiene como un aceite pardusco, que se usa en el siguiente paso sin purificación adicional (rendimiento de 94 %). 1H NMR (400 MHz, CDCla): 88,66 (s, 1 H), 8,51 (s, 1 H), 7,34-7,04 (m, 2 H), 3,12 (s, 3 H), 3,12 (s, 3 H), 1,34 (s, 12 H); 19F NMR (376 MHz, CDCh): 8-115,6 (s, 2 F); MS (MALDI): m/z = 326,0 ([M+H]+).
Método 22: 4-(difluorometil)pirimidin-2-amina (¡69)
Figure imgf000060_0002
A una solución de etil vinil éter (4,00 mL, 41,8 mmol, 1,0 eq.) en una mezcla de piridina (4,10 mL, 50,7 mmol, 1,2 eq.) y diclorometano (40 mL), se añade gota a gota una solución de anhídrido 2,2- difluoroacético (Manchester Organics, (número de producto L24754, 5,90 mL, 50,1 mmol, 1,2 eq.) en diclorometano (5 mL) a -70 °C en un baño de hielo seco/isopropanol. Se deja calentar la solución resultante a temperatura ambiente durante toda la noche. Después, la mezcla se lava con agua desionizada, se seca sobre sulfato de sodio anhidro, se filtra y el disolvente se evapora a presión reducida para producir un aceite naranja.
Al mismo tiempo, se agita una suspensión de guanidina HCl (Sigma, número de producto 50940, 4,80 g, 50,2 mmol, 1,2 eq.) en etanol (20 mL) a temperatura ambiente durante 1 hora. A esta solución se le añaden gránulos de hidróxido de sodio (2,00 g, 50,0 mmol, 1,2 eq.) en una porción. La suspensión resultante se agita a temperatura ambiente durante toda la noche.
El aceite naranja se diluye con diclorometano (20 mL) y se añade gota a gota durante 1 hora a la suspensión de etanol. La suspensión resultante se agita a temperatura ambiente durante 2 horas. El diclorometano se evapora a presión reducida. Se añade agua desionizada (25 mL) al residuo. La mezcla resultante se agita vigorosamente durante 2 horas y después se deja reposar a temperatura ambiente durante toda la noche. El sólido formado se filtra, se lava con agua desionizada (2 x) y heptano (1 x) y después se seca al vacío. El producto deseado ¡69 se obtiene como un sólido incoloro (rendimiento de 65 %). 1H NMR (400 MHz, CDCh): 88,43 (d, 2Jh,h = 4,8 Hz, 1 H), 7,02 (br s, 2 H), 6,76 (d, 2Jh h = 5,2 Hz, 1 H), 6,67 (t, 2Jh,f = 55 Hz, 1 H); 19F NMR (376 MHz, CDCh): 8 -120,5 (s, 2 F).
Método 23: 5-bromo-4-(difluorometil)pirimidin-2-amina (i70)
Figure imgf000061_0001
A una solución del compuesto i69 (3,00 g, 20,7 mmol, 1,0 eq.) en tetrahidrofurano (90 ml) se le añade N-bromosuccinimida (3,86 g, 21,7 mmol, 1,0 eq.) en porciones a 0 °C. Se deja calentar la mezcla de reacción a temperatura ambiente durante toda la noche. Pasado este tiempo, se evapora el disolvente a presión reducida. El residuo se recoge en acetato de etilo (200 mL), se lava con una solución acuosa saturada de carbonato de sodio (4 x), se seca sobre sulfato de sodio anhidro, se filtra y después se concentra hasta sequedad a presión reducida. El producto deseado i70 se obtiene como un sólido amarillento, que se usa en el siguiente paso sin purificación adicional (rendimiento de 98 %). 1H NMR (400 MHz, (CDa^SO): 88,50 (s, 1 H), 7,30 (br s, 2 H), 6,87 (t, 2Jh,f = 53 Hz, 1 H); 19F NMR (376 MHz, (CDa^SO): 8 - 121,4 (s, 2 F).
Método 24: Carboxilato-N-(5-bromo-4-(difluorometil)pirimidin-2-il)-carbamato de N-ferc-butilo (i71)
Figure imgf000061_0002
El compuesto i70 (4,35 g, 19,4 mmol, 1,0 eq.) y 4-(dimetilamino)piridina (480 mg, 3,92 mmol, 0,20 eq.) se disuelven en tetrahidrofurano (50 mL). Después, se añaden N,N-diisopropiletilamina (7,50 ml, 42,1 mmol, 2,2 eq.) y dicarbonato de di-ferc-butilo (9,33 g, 42,7 mmol, 2,2 eq.) a 0 °C y se deja calentar la solución resultante. a temperatura ambiente durante toda la noche. El disolvente se evapora a presión reducida. El producto bruto se purifica mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice (ciclohexano/acetato de etilo 9:1 84:1) para proporcionar el producto deseado i71 como un sólido incoloro (rendimiento de 85 %).
1H NMR (400 MHz, CDCl3): 88,92 (s, 1 H), 6,73 (t, 2Jh,f = 53 Hz, 1 H), 1,47 (s, 18 H); 19F NMR (376 MHz, CDCl3): 8 -120,4 (s, 2 F).
Procedimiento general 1:
Figure imgf000061_0003
¡68 (I)
Monocloro-triazina sustituida o monocloro-pirimidina sustituida (1,0 eq.), compuesto i68 (1,1 eq.), fosfato de potasio tribásico (2,0 eq.) y cloro (2-diciclohexil-fosfino-2',4',6'-triisopropilo-1,1-bifenil)[2-(2-amino-1,1-bifenil)]-paladio (II) (Sigma-Aldrich, número de producto 741825, 0,05 eq.) se cargan en un matraz. En atmósfera de nitrógeno, se añaden 1,4-dioxano (30 volúmenes) y agua desionizada (1,5 volúmenes) y la mezcla resultante se coloca después directamente en un baño de aceite precalentado a 95 °C. La mezcla de reacción se agita a esta temperatura durante 2 horas. Se añade una solución acuosa de HCl 5 M (20 eq.). La mezcla resultante se calienta a 60 °C durante toda la noche. El pH de la mezcla resultante se ajusta a 8-9 mediante la adición de una solución acuosa 2 M de hidróxido de sodio, después la mezcla se extrae con acetato de etilo (3 x 20 volúmenes). Las capas orgánicas combinadas se secan sobre sulfato de sodio anhidro, se filtran y el disolvente se evapora a presión reducida. La purificación por cromatografía rápida proporciona los productos deseados de estructura (I).
Procedimiento general 2:
Figure imgf000062_0001
Compuesto i71 (1.0 eq.), 4,4,4',4',5,5,5',5'-octametil-2,2'-bi(1,3,2-dioxaborolano) (Manchester Organics, producto número M23170, 1,5 eq.), acetato de potasio (3,0 eq.) y [1,1'-bis(difenilfosfino)-ferroceno]-dicloropaladio (II) (Sigma-Aldrich, número de producto 697230, 0,099 eq.) 1,4-dioxano (12,5 volúmenes) en atmósfera de nitrógeno. La mezcla resultante se calienta a 100 °C durante 15 minutos (la solución se vuelve negra). La monitorización por TLC (ciclohexano/acetato de etilo 3:1) se usa para mostrar el consumo completo del material de partida.
A la mezcla resultante, se añaden cloro-triazina sustituida o cloropirimidina sustituida (1,1 eq.), una solución acuosa de carbonato de potasio (2 M, 3,0 eq.) y una solución previamente mezclada de trifenilfosfina (0,12 eq.) y acetato de paladio (0,04 eq.) en tetrahidrofurano (100 volúmenes). La mezcla resultante se calienta a 60 °C durante 2 horas y posteriormente se deja enfriar a temperatura ambiente.
Se añade una solución acuosa de HCl 5 M (20 eq.). La mezcla resultante se calienta a 60 °C durante toda la noche. El pH de la mezcla resultante se ajusta a 8-9 mediante la adición de una solución acuosa 2 M de hidróxido de sodio, después la mezcla se extrae con acetato de etilo (3 x 20 volúmenes). Las capas orgánicas combinadas se secan sobre sulfato de sodio anhidro, se filtran y el disolvente se evapora a presión reducida. La purificación por cromatografía rápida proporciona los productos deseados.
Método 27 N-terc -butoxicarbonil-W-(5-(4-cloro-6-morfolino-1,3,5-triazin-2-il)-4-(difluorometil)pirimidin-2-il)carbamato de terc butilo (i74)
Figure imgf000062_0002
Intermedio ¡71 (2,00 g, 4,71 mmol, 1,0 eq.), bis(pinacolato)diboro (1,80 g, 7,09 mmol, 1,5 eq.), KOAc (1,60 g, 16,3 mmol, 3,4 eq.) y [1,1'- bis(difenilfosfino)ferroceno]-dicloropaladio (II) (350 mg, 478 pmol, 0,10 eq.) en 1,4-dioxano bajo atmósfera de nitrógeno y se calienta a 95 °C durante 45 minutos. Una solución precatalizador de acetato de paladio (II) (43,0 mg, 192 pmol, 0,04 eq.) y trifenilfosfina 148 mg, 564 pmol, 0,12 eq.) en tetrahidrofurano (2 mL) también se prepara y se agita a temperatura ambiente durante 1 hora. Esta solución se añade después a la solución enfriada anterior a temperatura ambiente, seguido de la adición de 4-(4,6-dicloro-1,3,5-triazin-2-il)morfolina ¡11 (1,65 g, 7,05 mmol, 1,5 eq.) y solución acuosa de K2CO3 (2,4 M, 5,90 mL, 14,2 mmol, 3,0 eq.). La mezcla resultante se calienta a 55 °C durante toda la noche. Después de este tiempo, la mezcla se vierte sobre una solución acuosa de NH4Cl (15 %) y se extrae con acetato de etilo (3 x). La capa orgánica combinada se seca sobre sulfato de sodio anhidro, se filtra y se concentra a presión reducida. La purificación por cromatografía en columna sobre gel de sílice (ciclohexano/acetato de etilo 1:0 a 4:1) da el producto ¡74 como un sólido incoloro (rendimiento de 36 %).1
1H NMR (400 MHz, CDCla): 8957 (s, 1 H), 7,55 (t, 2Jh,f = 54 Hz, 1 H), 3,99-3,91 (m, 4 H), 3,84-3,76 (m, 4 H), 1,49 (s, 18 H); 19F NMR (376 MHz, CDCla): 8 - 121,0 (s, 2 F).
Método 32: (E)-4-etoxi-1,1-difluoro-but-3-en-2-ona (i83)
Figure imgf000063_0001
i83
A una solución enfriada (-70 °C) de piridina (61,5 mL, 760,5 mmol, 1,2 eq) en diclorometano (500 mL) se añade etilvinil éter (60 mL, 626,5 mmol, 1 eq), seguido de una solución de anhídrido difluoroacético (88,5 ml, 760,5 mmol, 1,2 eq) en diclorometano (75 mL). Después, la mezcla se calienta lentamente a temperatura ambiente durante toda la noche. La mezcla se transfiere a un embudo de decantación y la capa orgánica se lava con agua (6 x 800 mL) hasta que el pH de la capa acuosa se vuelve neutro. La capa orgánica se seca sobre sulfato de sodio y el disolvente se elimina a presión reducida para proporcionar el producto deseado i83 como un aceite naranja (76,7 g, 81 %). 1H NMR (400 MHz, (CDs)2SO): 87,92 (d, 3Jhh = 12,5 Hz, 1H), 6,34 (t, 2Jh f = 53,6 Hz, 1H), 5,87 (d, 3Jhh = 12,5 Hz, 1H), 4,14 (q, 3Jhh = 7,1 Hz, 2H), 1,28 (t, 3Jh,h = 7,1 Hz, 3H); 19F NMR (400 MHz, (CD3)2SO): 8 -127,39 (s, 2F).
Método 33: (E)-3-(difluorometil)-5-etoxi-3-hidroxi-pent-4-enenitrilo (i84)
Figure imgf000063_0002
183 i84
A una solución enfriada (-70 °C) de n-butil litio 2,5 M (102,9 ml, 256,7 mmol, 1 eq) en tetrahidrofurano (435 mL) se le añade acetonitrilo (13,4 mL, 256,7 mmol, 1 eq). Se forma una suspensión blanca y se agita a -70 °C durante 1,5 horas. Se añade una solución de (E)-4-etoxi-1,1-difluoro-but-3-en-2-ona (i83) (38,5 g, 256,7 mmol, 1 eq) en tetrahidrofurano (65 mL) a la suspensión de fondo blanco (la mezcla se convierte en una solución naranja). La mezcla se agita a -70 °C durante 1 hora y se calienta lentamente a temperatura ambiente. Se añade agua (400 mL). Después se añade acetato de etilo (600 mL). Las capas se separan y la capa acuosa se extrae con acetato de etilo (3x600 mL). Las capas orgánicas combinadas se secan sobre sulfato de sodio y el disolvente se evapora a presión reducida. La filtración sobre una almohadilla corta de gel de sílice, con el uso de una mezcla de ciclohexano/acetato de etilo (3:1) como eluyente, da el producto deseado i84 como un aceite naranja oscuro (43,4 g, 88 %). 1H NMR (400 MHz, (CD3)2SO): 8 6,66 (d, 3Jhh = 12,8 Hz, 1H), 6,20 (s, 1H), 5,79 (t, 2Jh f = 55,8 Hz, 1H), 4,75 (d, 3Jhh = 12,8 Hz, 1H), 3,74 (q, 3Jhh = 7,0 Hz, 2H), 2,88 (d, 3Jhh = 16,8 Hz, 1H), 2,81 (d, 3Jhh = 16,8 Hz, 1H), 1,21 (t, 3Jh h =7,0 Hz, 3H); 19F NMR (400 MHz, (CDa)2SO): 8 -129,32 (d, 2Jf,f = 311,2 Hz, IF), -130,05 (d, 2Jf,f = 311,2 Hz, IF).
Método 34: 4-(difluorometil)piridin-2-amina (i65)
Figure imgf000063_0003
A una solución de (E)-3-(difluorometil)-5-etoxi-3-hidroxi-pent-4-enenitrilo (i84) (8,1 g, 42,4 mmol, 1 eq) en ácido acético (80 mL) se le añade clorhidrato de O-metilhidroxilamina (Fluorochem, número de producto 078603) (10,6 g, 127,2 mmol, 3 eq). La mezcla se agita a 50 °C durante 7 horas. Después, la mezcla de reacción se enfría a temperatura ambiente y se añade ácido bromhídrico en ácido acético (33 %) (14,2 mL, 84,8 mmol, 2 eq). La mezcla de reacción se agita a 90 °C durante toda la noche. La mezcla de reacción se desgasifica y se coloca bajo nitrógeno. La mezcla de reacción se mantiene a temperatura ambiente con un baño de agua con hielo mientras se añade en porciones polvo de zinc (8,12 g, 127,2 mmol, 3 eq). La mezcla de reacción se agita 3 horas a temperatura ambiente. La mezcla se filtra sobre un lecho corto de celite y la torta se lava con acetato de etilo. Después, la mayor parte del disolvente se elimina a presión reducida. Se añaden 60 mL de hidróxido de amonio acuoso (28 %). La capa acuosa se extrae con diclorometano (3 x 150 mL). Las capas orgánicas combinadas se secan sobre sulfato de sodio. El compuesto i65 se recristaliza en diclorometano y heptano como antidisolvente (cambio de disolvente en el rotavapor). El compuesto i65 se recoge, como un sólido de color amarillo claro, mediante filtración (5,12 g, 84 %).
Método 35: 9-[4-cloro-6-(3-oxa-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-9-il)-1,3,5-triazin-2-il]-3,7-dioxa-9-azabiciclo[3.3.1]nonano (i89)
Figure imgf000064_0001
A una solución de clorhidrato de 3-oxa-9-azabiciclo[3.3.1]nonano (176 mg, 1,20 mmol, 1,05 eq.) y N,N-diisopropiletilamina (0,42 ml, 2,40 mmol, 2,1 eq.) en 1,4-dioxano (5 mL) se añade una solución de i88 (300 mg, 1,14 mmol, 1 eq.) en 1,4-dioxano (1 mL). La mezcla resultante se calienta durante 3 horas (75 °C). Después, se añaden acetato de etilo (20 mL) y bisulfato de sodio acuoso saturado (20 mL). Las fases se separan y la capa orgánica se lava con bisulfato de sodio acuoso saturado (2 x 20 mL). La capa orgánica se seca sobre sulfato de sodio anhidro y el disolvente se elimina a presión reducida. La mezcla en bruto se purifica mediante cromatografía rápida automatizada (SiO2, ciclohexano/acetato de etilo 2:1 a 0:1) para proporcionar el compuesto del título i89 como un sólido incoloro (297 mg, 75 %). 1H NMR (400 MHz, (CDa^SO): 84,58 (m, 1 H), 4,44 (m, 1 H), 4,40 (m, 1 H), 4,32 (m, 1 H), 4,00-3,97 (m, 4 H), 3,94 - 3,90 (m, 2 H), 3,72 - 3,64 (m, 6 H), 2,46 (m, 1 H), 1,90 - 1,70 (m, 4 H), 1,53 (m, 1 H). MS (MALDI): m/z = 368,0 ([M+H]+).
Preparación de compuestos de la invención.
Compuesto 1: 4-(difluorometil)-5-(4,6-dimorfolino-1,3,5-triazin-2-il)piridin-2-amina (1)
Figure imgf000064_0002
De acuerdo con el procedimiento general 1, el compuesto 1 se obtiene a partir de los materiales de partida i2 e i68 con un rendimiento de 73 % como un sólido incoloro. 1H NMR (400 MHz, CDCh): 89,02 (s, 1 H), 7,65 (t, 2Jh,f = 55 Hz, 1 H), 6,83 (s, 1 H), 4,85 (br s, 2 H), 3,89-3,79 (m, 8 H), 3,77-3,72 (m, 8 H); 19F NMR (376 MHz, CDCl3): 8-115,9 (s, 2 F); MS (MALDI): m/z = 393,9 ([M+H]+).
Compuesto 2: 4-(difluorometil)-5-(4,6-dimorfolino-1,3,5-triazin-2-il)pirimidin-2-amina (2)
Figure imgf000065_0001
^
¡71 i2 2
De acuerdo con el procedimiento general 2, el compuesto 2 se obtiene a partir de los materiales de partida i2 e i71 con un rendimiento de 74 % como un sólido incoloro. 1H NMR (400 MHz, CDCh): 89,20 (s, 1 H), 7,62 (t, 2Jh,f = 54 Hz, 1 H), 5,97 (br s, 2 H), 3,91-3,68 (m, 16 H); 19F NMR (376 MHz, CDCh): 8 - 121,5 (s, 2 F); MS (MALDI): m/z = 395,2 ([M+H]+).
Compuesto 3: 5-(4-(3-oxa-8-azabiciclo[3.2.1]octan-8-il)-6-(3-oxa-8-azabiciclo[3.2.1]octan-8-il)-1,3,5-triazin-2-il)-4-(difluorometil)piridin-2-amina (3)
Figure imgf000065_0002
De acuerdo con el procedimiento general 1, el compuesto 3 se obtiene a partir de los materiales de partida i1 e i68 con un rendimiento de 75 % como un sólido incoloro. 1H NMR (400 MHz, CDCh): 89,04 (s, 1 H), 7,71 (t, 2Jh,f = 55 Hz, 1 H), 6,83 (s, 1 H), 4,89 (br s, 2 H), 4,71-4,64 (m, 4 H), 3,79-3,76 (m, 4 H), 3,67-3,62 (m, 4 H), 2,09-1,98 (m, 8 H); 19F NMR (376 MHz, CDCh): 8 - 115,4-(-117,3) (m, 2 F); MS (MALDI): m/z = 446,3 ([M+H]+).
Compuesto 4: 5-(4-(3-oxa-8-azabiciclo[3.2.1]octan-8-il)-6-morfolino-1,3,5-triazin-2-il)-4-(difluorometil)piridin-2-amina (4)
Figure imgf000065_0003
De acuerdo con el procedimiento general 1, el compuesto 4 se obtiene a partir de los materiales de partida i12 e i68 con un rendimiento de 57 % como un sólido incoloro. 1H NMR (400 MHz, CDCla): 89,03 (s, 1 H), 7,68 (m, 1 H), 6,83 (s, 1 H), 4,94 (br s, 2 H), 4,70-4,65 (m, 2 H), 3,93-3,57 (m, 12 H), 2,14-1,92 (m, 4 H); 19F NMR (376 MHz, CDCh): 8 -116,0-(- 116,2) (m, 2 F); MS (MALDI): m/z = 420,6 ([M+H]+).
Compuesto 5: 5-(4-(3-oxa-8-azabiciclo[3.2.1]octan-8-il)-6-morfolino-1,3,5-triazin-2-il)-4-(difluorometil)pirimidin-2-amina (5)
Figure imgf000066_0001
De acuerdo con el procedimiento general 2, el compuesto 5 se obtiene a partir de materiales de partida i71 y i12 en un rendimiento de 50 % como un sólido incoloro. 1H NMR (400 MHz, CDCh): 89,23 (s, 1 H), 7,65 (t, 2Jh,f = 54 Hz, 1 H), 5,66 (brs, 2 H), 4,68 (m, 2 H), 3,90-3,61 (m, 12 H), 2,13-1,92 (4 H); 19F NMR (376 MHz, CDCh): 8 - 120,4-(-121.5) (m, 2 F); MS (MALDI): m/z = 420,9 ([M+H]+).
Compuesto 6: 5-(4,6-bis((S)-3-metilmorfolino)-1,3,5-triazin-2-il)-4-(difluorometil)piridin-2-amina (6)
Figure imgf000066_0002
De acuerdo con el procedimiento general 1, el compuesto 6 se obtiene a partir de los materiales de partida i3 e i68 con un rendimiento de 79 % como un sólido incoloro. 1H NMR (400 MHz, CDCh): 88,87 (s, 1 H), 7,70 (t, 2Jh,f = 55 Hz, 1 H), 6,86 (s, 1 H), 5,48 (br s, 2 H), 4,73-4,72 (m, 2 H), 4,41-4,38 (m, 2 H), 3,98 (dd, Jh,h =11,6, 3,8 Hz, 2 H), 3,78 (d, Jh h = 12 Hz, 2 H), 3,67 (dd, Jh h = 12, 3,2 Hz, 2 H), 3,52 (td, Jh h = 12, 3,0 Hz, 2 H), 3,27 (td, Jh h = 13, 3,8 Hz, 2 H), 1,33 (d, 3Jh,h = 6,8 Hz, 6 H); 19F NMR (376 MHz, CDCh): 8 - 115,4-(-116.2) (m, 2 F); MS (MALDI): m/z = 421,9 ([M+H]+).
Compuesto 7: 5-(4,6-bis((S)-3-metilmorfolino)-1,3,5-triazin-2-il)-4-(difluorometil)pirimidin-2-amina (7)
Figure imgf000066_0003
De acuerdo con el procedimiento general 2, el compuesto 7 se obtiene a partir de las materias primas i71 e i3 con un rendimiento de 52 % como un sólido incoloro. 1H NMR (400 MHz, CDCla): 89.24 (s, 1 H), 7,66 (t, 2Jh.f = 54 Hz, 1 H), 5,77 (br s, 2 H), 4,73 (br s, 2 H), 4,45-4,32 (m, 2 H), 3,98 (dd, Jh, h = 12, 3,6 Hz, 2 H), 3,78 (d, Jh, h = 12 Hz, 2 H), 3,67 (dd, Jh h = 11, 2,8 Hz, 2 H), 3,52 (td, Jh h = 12, 2,8 Hz, 2 H), 3,27 (td, Jh h = 13, 3,2 Hz, 2 H), 1,33 (d, 3Jh h = 6,8 Hz, 6 H); 19F NMR (376 MHz, CDCta): 8 - 120,5-(- 122,7) (m, 2 F); MS (MALDI): m/z = 423,3 ([M+H]+).
Compuesto 8: (S)-4-(difluorometil)-5-(4-(3-metilmorfolino)-6-morfolino-1,3,5-triazin-2-il)piridin-2-amina (8)
Figure imgf000066_0004
De acuerdo con el procedimiento general 1, el compuesto 8 se obtiene a partir de los materiales de partida i13 e i68 con un rendimiento de 47 % como un sólido incoloro. 1H NMR (400 MHz, CDCh): 89,03 (s, 1 H), 7,70 (t, 2Jh,f = 55 Hz, 1 H), 6,84 (s, 1 H), 4,78 (br s, 2 H), 4,75 (m, 1 H), 4,42-4,38 (m, 1 H), 4,00-3,96 (m, 1 H), 3,84-3-66 (m, 10 H), 3,55­ 3,50 (m, 1 H), 3,30-3,25 (m, 1 H), 1,33 (d, 3Jh h = 6,8 Hz, 3 H); 19F NMR (376 MHz, CDCh): 8 - 116,1-(-115,9) (m, 2 F); MS (MALDI): m/z = 408,9 ([M+H]+).
Compuesto 9: (S)-4-(difluorometil)-5-(4-(3-metilmorfolino)-6-morfolino-1,3,5-triazin-2-il)pirimidin-2-amina (9)
Figure imgf000067_0001
NH;;
i71 il3 9
De acuerdo con el procedimiento general 2, el compuesto 9 se obtiene a partir de los materiales de partida i71 e i13 con un rendimiento de 60 % como un sólido incoloro. 1H NMR (400 MHz, CDCh): 89,24 (s, 1 H), 7,66 (t, 2Jh,f = 54 Hz, 1 H), 5,67 (br s, 2 H), 4,74 (m, 1 H), 4,41-4,38 (m, 1 H), 4,00-3,97 (m, 1 H), 3,90-3,72 (m, 9 H), 3,68-3,36 (m, 1 H), 3,56-3,49 (m, 1 H), 3,32-3,25 (m, 1 H), 1,33 (d, 3Jh h = 6,9 Hz, 3 H); 19F NMR (376 MHz, CDCh): 8 - 121,3-(-121,6) (m, 2 F); MS (MALDI): m/z = 409,4 ([M+H]+).
Compuesto 10: 5-(4-(3-oxa-8-azabiciclo[3.2.1]octan-8-il)-6-((S)-3-metilmorfolino)-1,3,5-triazin-2-il)-4-(difluorometil)piridin-2-amina (10)
Figure imgf000067_0002
De acuerdo con el procedimiento general 1, el compuesto 10 se obtiene a partir de los materiales de partida i18 e i68 con un rendimiento de 42 % como un sólido incoloro. 1H NMR (400 MHz, CDCla): 89,04 (s, 1 H), 7,69 (t, 2Jh,f = 55 Hz, 1 H), 6,84 (s, 1 H), 4,85 (br s, 2 H), 4,71-4,65 (m, 3 H), 4,42-4,39 (m, 1 H), 3,98-3,95 (m, 1 H), 3,79-3,76 (m, 3 H), 3,70­ 3,65 (m, 3 H), 3,56-3,53 (m, 1 H), 3,30-3,27 (m, 1 H), 2,10-1,99 (m, 4 H), 1,33 (m, 3 H); 19F NMR (376 MHz, CDCta): 8 - 115,9-(-116.2) (m, 2 F); MS (MALDI): m/z = 434,2 ([M+H]+).
Compuesto 11: 5-(4-(3-oxa-8-azabiciclo[3.2.1]octan-8-il)-6-((S)-3-metilmorfolino)-1,3,5-triazin-2-il)-4-(difluorometil)pirimidin-2-amina (11)
Figure imgf000067_0003
171 ¡18 11
De acuerdo con el procedimiento general 2, el compuesto 11 se obtiene a partir de los materiales de partida i71 e i18 con un rendimiento de 46 % como un sólido incoloro. 1H NMR (400 MHz, CDCh): 89,25 (s, 1 H), 7,68 (t, 2Jh,f = 55 Hz, 1 H), 5,81 (br s, 2 H), 4,71-4,65 (m, 3 H), 4,42-4,38 (m, 1 H), 4,00-3,96 (m, 1 H), 3,81-3,60 (m, 6 H), 3,55-3,50 (m, 1 H), 3,31-3,24 (m, 1 H), 2,11-2,00 (m, 4 H), 1,37-1,28 (m, 3 H); 19F NMR (376 MHz, CDCI3): 5 - 121,5-(-121,7) (m, 2 F); MS (MALDI): m/z = 434,6 ([M+H]+).
Compuesto 12: 4-(difluorometil)-5-(4-morfolino-6-(piperazin-1-il)-1,3,5-triazin-2-il) piridin-2-amina (12)
Figure imgf000068_0001
De acuerdo con el procedimiento general 1, el compuesto 12 se obtiene a partir de los materiales de partida i68 e i14 con un rendimiento de 86 % como un sólido incoloro. 1H NMR (400 MHz, (Cd 3)2SO): 58,85 (s, 1 H), 7,74 (t, 2Jh,f = 55 Hz, 1 H), 6,84 (s, 2 H), 6,75 (s, 1 H), 3,82-3,70 (m, 8 H), 3,69-3,60 (m, 4 H), 2,88-2,80 (m, 4 H); 19F NMR (376 MHz, (CD3)2SO): 5-115,4 (s, 2 F); MS (MALDI): m/z = 393,8 ([M+H]+).
Compuesto 13: 4-(difluorometil)-5-(4-morfolino-6-(piperazin-1-il)-1,3,5-triazin-2-il)pirimidin-2-amina (13)
Figure imgf000068_0002
De acuerdo con el procedimiento general 2, el compuesto 13 se obtiene a partir de los materiales de partida i71 e i14 con un rendimiento de 55 % como un sólido incoloro. 1H NMR (400 MHz, CDCh): 59,23 (s, 1 H), 7,64 (t, 2Jh,f = 55 Hz, 1 H), 5,60 (br s, 2 H), 3,83-3,75 (m, 12 H), 2,94-2,88 (m, 4 H); 19F NMR (376 MHz, CDCh): 5 -111,4 (s, 2 F); MS (MALDI): m/z = 394,1 ([M+H]+).
Compuesto 14: (S)-4-(difluorometil)-5-(4-(3-metilmorfolino)-6-(piperazin-1-il)-1,3,5-triazin-2-il)piridin-2-amina (14)
Figure imgf000068_0003
De acuerdo con el procedimiento general 1, el compuesto 14 se obtiene a partir de los materiales de partida i21 e i68 con un rendimiento de 47 % como un sólido incoloro. 1H NMR (400 MHz, CDCh): 59,02 (s, 1 H), 7,67 (t, 2Jh,f = 56 Hz, 1 H), 6,84 (s, 1 H), 4,90 (br s, 2 H), 4,74 (s, 1 H), 4,40 (d, Jh h = 16 Hz, 1 H), 3,98 (dd, Jh h = 4,0 Hz, 12 Hz, 1 H), 3,91 (m, 4 H), 3.78 (d, Jh, h = 12 Hz, 1 H), 3,68 (dd, Jh, h = 4,0, 12 Hz, 1 H), 3,56 (t, Jh, h = 4,0 Hz, 1 H), 3,26 (dt, Jh, h = 4,0, 12 Hz, 1 H), 2,99 (t, Jh h = 4,0 Hz, 4 H), 1,32 (d, Jh h = 8,0 Hz, 3 H); 19F NMR (376 MHz, CDCh): 5 -115 ,9 (s, 2 F); MS (MALDI): m/z = 407,2 ([M+H]+).
Compuesto 15: (S)-4-(difluorometil)-5-(4-(3-metilmorfolino)-6-(piperazin-1-il)-1,3,5-triazin-2-il)pirimidin-2-amina (15)
Figure imgf000069_0001
De acuerdo con el procedimiento general 2, el compuesto 15 se obtiene a partir de los materiales de partida i71 e i21 con un rendimiento del 30 % como un sólido incoloro. 1H NMR (400 MHz, CDCh): 89,24 (s, 1 H), 7,66 (t, 2Jh,f = 56 Hz, 1 H), 5,69 (br s, 2 H), 4,74 (s, 1 H), 4,40 (d, Jh h = 16 Hz, 1 H), 4,38 (dd, Jh h = 4,0, 12 Hz, 1 H), 3,83 (m, 4 H), 3,78 (d, Jh,h =12 Hz, 1 H), 3,68 (dd, Jh,h = 4,0, 12 Hz, 1 H), 3,54 (dt, Jh,h = 4,0, 12 Hz, 1 H), 3,28 (dt, Jh,h = 4,0, 12 Hz, 1 H), 2,92 (t, Jh h = 8,0 Hz, 4 H), 1,33 (t, Jh h = 8,0 Hz, 3 H); 19F NMR (376 MHz, CDCh): 8-121,4 (s, 2 F); MS (MALDI): m/z = 408,7 ([M+H]+).
Compuesto 16: 4-(difluorometil)-5-(2,6-dimorfolinopirimidin-4-il)piridin-2-amina (16)
Figure imgf000069_0002
De acuerdo con el procedimiento general 1, el compuesto 16 se obtiene a partir de los materiales de partida i22 e i68 con un rendimiento del 73 % como un sólido incoloro. 1H NMR (400 MHz, CDCla): 88,31 (s, 1 H), 7,30 (t, 2Jh,f = 55 Hz, 1 H), 6,85 (s, 1 H), 6,04 (s, 1 H), 4,73 (br s, 2 H), 3,81-3,72 (m, 12 H), 3,65-3,59 (m, 4 H); 19F NMR (376 MHz, CDCh): 8-115,1 (s, 2 F); MS (MALDI): m/z = 393,3 ([M+H]+).
Compuesto 17: 4'-(difluorometil)-2,6-dimorfolino-[4,5'-bipirimidin]-2'-amina (17)
Figure imgf000069_0003
De acuerdo con el procedimiento general 2, el compuesto 17 se obtiene a partir de los materiales de partida i71 e i22 con un rendimiento del 7 % como un sólido incoloro. 1H NMR (400 MHz, CDCh): 88.60 (s, 1 H), 7,11 (t, 2Jh,f = 55 Hz, 1 H), 6,02 (s, 1 H), 5,46 (br s, 2 H), 3,80-3,74 (m, 12 H), 3,64-3,60 (m, 4 H); 19F NMR (376 MHz, CDCh): 8 -119,5 (s, 2 F); MS (MALDI): m/z = 394,3 ([M+H]+).
Compuesto 18: 4-(difluorometil)-5-(4,6-dimorfolinopirimidin-2-il)piridin-2-amina (18)
Figure imgf000070_0001
De acuerdo con el procedimiento general 1, el compuesto 18 se obtiene a partir de los materiales de partida i23 e i68 con un rendimiento del 89 % como un sólido incoloro. 1H NMR (400 MHz, CDCh): 88,94 (s, 1 H), 7,61 (t, 2Jh,f = 55 Hz, 1 H), 6,83 (s, 1 H), 5,50 (s, 1 H), 4,74 (br s, 2 H), 3,82-3,78 (m, 8 H), 3,61-3,57 (m, 8 H); 19F NMR (376 MHz, CDCla): 8 -115,4 (s, 2 F); MS (MALDI): m/z = 393,3 ([M+H]+).
Compuesto 19: 4'-(difluorometil)-4,6-dimorfolino-[2,5'-bipirimidin]-2'-amina (19)
Figure imgf000070_0002
De acuerdo con el procedimiento general 2, el compuesto 19 se obtiene a partir de materiales de partida i71 y i23 en un rendimiento del 7 % como un sólido incoloro. 1H NMR (400 MHz, CDCla): 89,16 (s, 1 H), 7,58 (t, 2Jh,f = 55 Hz, 1 H), 5,75 (br s, 2 H), 5,50 (s, 1 H), 3,82-3,79 (m, 8 H), 3,61-3,58 (m, 8 H); 19F NMR (376 MHz, CDCh): 8-1211 (s, 2 F); MS (MALDI): m/z = 395,3 ([M+H]+).
Compuesto 20: 4-(difluorometil)-5-(4-morfolino-6-tiomorfolino-1,3,5-triazin-2-il)piridin-2-amina (20)
Figure imgf000070_0003
De acuerdo con el procedimiento general 1, el compuesto 20 se obtiene a partir de los materiales de partida i15 e i68 con un rendimiento del 77 como un sólido incoloro. 1H NMR (400 MHz, c Dc ^): 89,02 (s, 1 H), 7,65 (t, 2Jh,f = 55 Hz, 1 H), 6,84 (s, 1 H), 4,83 (br s, 2 H), 4,23-4,07 (m, 4 H), 3,90-3,79 (m, 4 H), 3,79-3,71 (m, 4 H), 2,71-2,62 (m, 4 H); 19F NMR (376 MHz, CDCta): 8-116,0 (s, 2 F); MS (MALDI): m/z = 410,3 ([M+H]+).
Compuesto 21: 4-(difluorometil)-5-(4-morfolino-6-tiomorfolino-1,3,5-triazin-2-il)pirimidin-2-amina (21)
Figure imgf000071_0001
NH2
i71 115 21
De acuerdo con el procedimiento general 2, el compuesto 21 se obtiene a partir de los materiales de partida i71 e i15 con un rendimiento del 70 % como un sólido incoloro. 1H NMR (400 MHz, CDCl3): 89.21 (s, 1 H), 7,60 (t, 2Jh,f = 54 Hz, 1 H), 5,90 (br s, 2 H), 4,22-4,06 (m, 4 H), 3,91-3,78 (m, 4 H), 3,78-3,71 (m, 4 H), 2,71-2,62 (m, 4 H); 19F NMR (376 MHz, CDCla): 8 - 120,5-(-121,5) (m, 2 F); MS (MALDI): m/z = 411,2 ([M+H]+).
Compuesto 22: 5-(6-(3-oxa-8-azabiciclo[3.2.1]octan-8-il)-2-(3-oxa-8-azabiciclo[3.2.1]octan-8-il)pirimidin-4-il)-4-(difluorometil)piridin-2-amina (22)
Figure imgf000071_0002
De acuerdo con el procedimiento general 1, el compuesto 22 se obtiene a partir de los materiales de partida i24 e i68 con un rendimiento del 61 % como un sólido incoloro. 1H NMR (400 MHz, (Cd 3)2SO): 88,34 (s, 1 H), 7,55 (t, 2Jh,f = 55 Hz, 1 H), 6,76 (s, 1 H), 6,60 (br s, 2 H), 6,36 (s, 1 H), 4,64-4,47 (m, 4 H), 3,67-3,49 (m, 4 H), 3,56-3,49 (m, 4 H), 1,98­ 1,79 (m, 8 H); 19F NMR (376 MHz, (CDa^SO): 8 - 114,9-(-115.2) (m, 2 F); MS (MALDI): m/z = 445,3 ([M+H]+).
Compuesto 23: 5-(2-(3-oxa-8-azabiciclo[3.2.1]octan-8-il)-6-morfolinopirimidin-4-il)-4-(difluorometil)piridin-2-amina (23)
Figure imgf000071_0003
De acuerdo con el procedimiento general 1, el compuesto 23 se obtiene a partir de los materiales de partida i29 e i68 con un rendimiento del 54 % como un sólido incoloro. 1H NMR (400 MHz, CDCl3): 88,30 (s, 1 H), 7,30 (t, 2Jh,f = 55 Hz, 1 H), 6,84 (s, 1 H), 6,04 (s, 1 H), 4,85 (br s, 2 H), 4,62 (br s, 2 H), 3,82-3,74 (m, 6 H), 3,65-3,56 (m, 6 H), 2,09-2,00 (m, 2 H), 2,00-1,91 (m, 2 H); 19F NMR (376 MHz, CDCl3): 8 - 115,2 -(-116,2) (m, 2 F); MS (MALDI): m/z = 419,0 ([M+H]+).
Compuesto 24: 2-(3-oxa-8-azabicido[3.2.1]octan-8-il)-4'-(difluorometil)-6-morfolino-[4,5'-bipirimidin]-2'-amina (24)
Figure imgf000072_0001
De acuerdo con el procedimiento general 2, el compuesto 24 se obtiene a partir de los materiales de partida i29 e i71 con un rendimiento del 72 % como un sólido incoloro. 1H NMR (400 MHz, (CD3)2SO): 88,71 (s, 1 H), 7,35 (s, 2 H), 7,32 (t, 2Jh,f = 54 Hz, 1 H), 6,45 (s, 1 H), 4,54 (br s, 2 H), 3,71-3,50 (m, 12 H), 1,95-1,78 (m, 4 H); 19F NMR (376 MHz, (CD3)2SO): 8-119,2 (s, 2 F); MS (MALDI): m/z = 420,6 ([M+H]+).
Compuesto 25: 5-(2,6-bis((S)-3-metilmorfolino)pirimidin-4-il)-4-(difluorometil)piridin-2-amina (25)
Figure imgf000072_0002
De acuerdo con el procedimiento general 1, el compuesto 25 se obtiene a partir de los materiales de partida i25 e i68 con un rendimiento del 57 % como un sólido incoloro. 1H NMR (400 MHz, (Cd 3)2SO): 88.31 (s, 1 H), 7,52 (t, 2Jh,f = 55 Hz, 1 H), 6,76 (s, 1 H), 6,59 (br s, 2 H), 6,30 (s, 1 H), 4,60-4,50 (m, 1 H), 4,44-4,33 (m, 1 H), 4,24-4,15 (m, 1 H), 4,12­ 4,04 (m, 1 H), 3,94-3,83 (m, 2 H), 3,74-3,64 (m, 2 H), 3,59-3,51 (m, 2 H), 3,45-3,35 (m, 2 H), 3,14-3,02 (m, 2 H), 1,18 (t, 3Jh h = 7,2 Hz, 6 H); 19F NMR (376 MHz, (CD3)2SO): 8 - 113,7-(-115,9) (m, 2 F); MS (MALDI): m/z = 421,1 ([M+H]+).
Compuesto 26: 4'-(difluorometil)-2,6-bis((S)-3-metilmorfolino)-[4,5'-bipirimidin]-2'-amina (26)
Figure imgf000072_0003
¡71 ¡25 26
De acuerdo con el procedimiento general 2, el compuesto 26 se obtiene a partir de los materiales de partida i25 e i71 con un rendimiento del 56 % como un sólido incoloro. 1H NMR (400 MHz, CDCh): 88,60 (s, 1 H), 7,14 (t, 2Jh,f = 54 Hz, 1 H), 5,98 (s, 1 H), 5,48 (br s, 2 H), 4,71-4,62 (m, 1 H), 4,34-4,23 (m, 2 H), 4,08-3,92 (m, 3 H), 3,83-3,65 (m, 4 H), 3,61-3,49 (m, 2 H), 3,25 (dt, 2Jh,h = 13 Hz, 3Jh,h = 3,6 Hz, 2 H), 1,33-1,27 (m, 6 H); 19F NMR (376 MHz, CDCh): 8 -119,5 (s, 1 F), 119,7 (m, 1 F); MS (MALDI): m/z = 422,2 ([M+H]+).
Compuesto 27: (S)-4-(difluorometil)-5-(6-(3-metilmorfolino)-2-morfolinopirimidin-4-il)piridin-2-amina (27 )
Figure imgf000073_0001
i30 i68 27
De acuerdo con el procedimiento general 1, el compuesto 27 se obtiene a partir de los materiales de partida i30 e i68 con un rendimiento del 74 % como un sólido incoloro. 1H NMR (400 MHz, CDCh): 88,31 (s, 1 H), 7,30 (t, 2Jh,f = 55 Hz, 1 H), 6,85 (s, 1 H), 6,02 (s, 1 H), 4,75 (br s, 2 H), 4,35-4,25 (m, 1 H), 4,06-3,96 (m, 2 H), 3,83-3,69 (m, 10 H), 3,58 (dt, 2Jh h = 12 Hz, 3Jh h = 3,2 Hz, 1 H), 3,25 (dt, 2Jh h = 13 Hz, 3Jh h = 3,8 Hz, 1 H), 1,31 (d, 3Jh h = 6,8 Hz, 3 H); 19F NMR (376 MHz, CDCla): 8 - 114,9-(-115,0) (m, 2 F); MS (MALDI): m/z = 407,1 ([M+H]+).
Compuesto 28: (S)-4'-(difluorometil)-6-(3-metilmorfolino)-2-morfolino-[4,5'-bipirimidin]-2'-amina (28)
Figure imgf000073_0002
NHj
i71 i30 28
De acuerdo con el procedimiento general 2, el compuesto 28 se obtiene a partir de los materiales de partida i30 e i71 con un rendimiento del 53 % como un sólido incoloro. 1H NMR (400 MHz, CDCla): 88,60 (s, 1 H), 7,13 (t, 2Jh,f = 54 Hz, 1 H), 6,01 (s, 1 H), 5,47 (br s, 2 H), 4,71-4,63 (m, 1 H), 4,31 (dd, 2Jh, h = 14 Hz, 3Jh, h = 2,4 Hz, 1 H), 3,97 (dd, 2Jh, h = 11 Hz, 3Jh h = 3,4 Hz, 1 H), 3,79 (t, 3Jh h = 4,6 Hz, 4 H), 3,72-3,66 (m, 2 H), 3,65-3,58 (m, 3 H), 3,58-3,50 (m, 2 H), 3,30-3,21 (m, 1 H), 1,30 (d, 3Jh h = 6,8 Hz, 3 H); 19F NMR (376 MHz, CDCh): 8 -119,7 (br s, 2 F); MS (MALDI): m/z = 408,9 ([M+H]+).
Compuesto 29: 5-(4-(8-Oxa-3-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)-6-(8-oxa-3-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)-1,3,5-triazin-2-il)-4-(difluorometil)piridin-2-amina (29)
Figure imgf000073_0003
De acuerdo con el procedimiento general 1, el compuesto 29 se obtiene a partir de los materiales de partida i68 e i81 con un rendimiento del 89 % como un sólido incoloro. 1H NMR (400 MHz, CDCh): 89,03 (s, 1 H), 7,69 (t, 2Jh,f = 55 Hz, 1 H), 6,83 (s, 1 H), 4,85 (br s, 2 H), 4,50-4,24 (m, 8 H), 3,28-3,12 (m, 4 H), 1,94 (br s, 4 H), 1,86-1,71 (m,4 H); 19F NMR (376 MHz, CDCta): 8 - 115,1-(-117,2) (m, 2 F); MS (MALDI): m/z = 446,3 ([M+H]+).
Compuesto 30: 5-[4,6-bis(2,2-dimetilmorfolin-4-il)-1,3,5-triazin-2-il]-4-(difluorometil)piridin-2-amina (30)
Figure imgf000074_0001
De acuerdo con el procedimiento general 1, el compuesto 30 se obtiene a partir de los materiales de partida i68 e i80 con un rendimiento del 63 % como un sólido incoloro. 1H NMR (400 MHz, (Cd 3)2SO): 88,86 (s, 1 H), 7,71 (t, 2Jh,f = 55 Hz, 1 H), 6,84 (br s, 2 H), 6,76 (s, 1 H), 3,81-3,56 (m, 12 H), 1,14 (s, 12 H); MS (MALDI): m/z = 450,0 ([M+H]+).
Compuesto 31: (S)-4-(difluorometil)-5-(2-(3-metilmorfolino)-6-morfolinopirimidin-4-il)piridin-2-amina (31)
Figure imgf000074_0002
De acuerdo con el procedimiento general 1, el compuesto 31 se obtiene a partir de los materiales de partida i28 e i68 con un rendimiento del 58 % como un sólido incoloro. 1H NMR (400 MHz, (Cd 3)2SO): 88,31 (s, 1 H), 7,52 (t, 2Jh,f = 55 Hz, 1 H), 6,74 (s, 1 H), 6,59 (br s, 2 H), 6,35 (s, 1 H), 4,59-4.51 (m, 1 H), 4,22-4,14 (m, 1 H), 3,91-3,84 (m, 1 H), 3,72­ 3,50 (m, 10 H), 3,44-3,35 (m, 1 H), 3,14-3,03 (m, 1 H), 1,16 (d, 3Jh h = 6,7 Hz, 3 H); 19F NMR (376 MHz, (CD3)2SO): 8 - 113,7-(-115,3) (m, 2 F); MS (MALDI): m/z = 407,1 ([M+H]+).
Compuesto 32: (S)-4'-(difluorometil)-2-(3-metilmorfolino)-6-morfolino-[4,5'-bipirimidin]-2'-amina (32)
Figure imgf000074_0003
De acuerdo con el procedimiento general 2, el compuesto 32 se obtiene a partir de los materiales de partida i28 e i71 con un rendimiento del 63 % como un sólido incoloro. 1H NMR (400 MHz, CDCh): 88,60 (s, 1 H), 7,13 (t, 2Jh,f = 54 Hz, 1 H), 5,99 (s, 1 H), 5,46 (br s, 2 H), 4,34-4,25 (m, 1 H), 4,06-3,97 (m, 2 H), 3,82-3,68 (m, 10 H), 3,58 (dt, 2Jh h = 12 Hz, 3Jh, h = 3,2 Hz, 1 H), 3,26 (dt, 2Jh, h = 13 Hz, 3Jh, h = 3,7 Hz, 1 H), 1,31 (d, 3Jh, h = 6,8 Hz, 3 H); 19F NMR (376 MHz, (CD3)2SO): 8-119,5 (s, 2 F); MS (MALDI): m/z = 408,7 ([M+H]+).
Compuesto 33: 4-(difluorometil)-5-[4-[(2S,6R)-2,6-dimetilmorfolin-4-il]-6-[(3R)-3-metilmorfolin-4-il]-1,3,5-triazin-2-il]piridin-2-amina (33)
Figure imgf000075_0001
De acuerdo con el procedimiento general 1, el compuesto 33 se obtiene a partir de los materiales de partida i68 e i82 con un rendimiento del 71 % como un sólido incoloro. 1H NMR (400 MHz, (Cd 3)2SO): 88,87 (s, 1 H), 7,74 (t, 2Jh,f = 55 Hz, 1 H), 6,83 (br s, 2 H), 6,76 (s, 1 H), 4,71-4,62 (m, 1 H), 4,45-4,34 (m, 2 H), 4,31-4,09 (m, 1 H), 3,90 (m, 1 H), 3,71 (m, 1 H), 3,55 (m, 3 H), 3,38 (m, 1 H), 3,13 (m, 1 H), 2,55 (m, 2 H), 1,20 (d, 3Jh h = 6,9 Hz, 3 H), 1,19 (d, 3Jh h = 6,9 Hz, 6 H); MS (MALDI): m/z = 436,1 ([M+H]+).
Compuesto 34: 5-[4,6-bis[(2R,6S)-2,6-dimetilmorfolin-4-il]-1,3,5-triazin-2-il]-4-(difluorometil)piridina-2-amina (34)
Figure imgf000075_0002
De acuerdo con el procedimiento general 1, el compuesto 34 se obtiene a partir de los materiales de partida ¡68 e ¡79 con un rendimiento del 75 % como un sólido incoloro. 1H NMR (400 MHz, (Cd 3)2SO): 88,86 (s, 1 H), 7,71 (t, 2Jh,f = 55 Hz, 1 H), 6,83 (br s, 2 H), 6,76 (s, 1 H), 4,64-4,46 (m, 4 H), 3,60-3,48 (m, 4 H), 2,63 (m, 4H), 1,14 (m, 12 H); MS (MALDI): m/z = 450,0 ([M+H]+).
Compuesto 37: 5-[4,6-bis(3,7-dioxa-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-9-il)-1,3,5-triazin-2-il]-4-(difluorometil)piridin-2-amina (37)
Figure imgf000075_0003
De acuerdo con el procedimiento general 1, el compuesto 37 se obtiene a partir de los materiales de partida ¡7 e ¡68 con un rendimiento del 39 % como un sólido incoloro. 1H NMR (400 MHz, (CD3)2SO): 88,85 (s, 1 H), 7,68 (t, 3Jh,f = 55 Hz, 1 H), 6,87 (br s, 2 H), 6,74 (s, 1 H), 4,51 (br s, 2 H), 4,45 (br s, 2 H), 4,07-3,93 (m, 8 H), 3,79-3,67 (m, 8 H); 19F NMR (376 MHz, (CD3)2SO): 8 -115,8 (s, 2 F); MS (MALDI): m/z = 478,1 ([M+H]+).
Compuesto 38: 4-(difluorometil)-5-[4-(3,7-dioxa-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-9-il)-6-(3-oxa-8-azabiciclo[3.2.1]octan-8-il)-1,3,5-triazin-2-il]piridin-2-amina (38)
Figure imgf000076_0001
De acuerdo con el procedimiento general 1, el compuesto 38 se obtiene a partir de los materiales de partida i35 e i68 con un rendimiento del 67 % como un sólido incoloro. 1H NMR (400 MHz, (Cd 3)2SO): 88,87 (s, 1 H), 7,73 (t, 3Jh,f = 55 Hz, 1 H), 6,87 (br s, 2 H), 6,75 (s, 1 H), 4,70-4,54 (m, 2 H), 4,53-4,43 (m, 2 H), 4,05-3,97 (m, 4 H), 3,79-3,67 (m, 4 H), 3,63-3,55 (m, 4 H) 2,00-1,83 (m, 4 H); 19F NMR (376 MHz, (CDa^SO): 8-115,8 (s, 1 F), -115,9 (s, 1 F); MS (MALDI): m/z = 462,1 ([M+H]+).
Compuesto 39: 5-[4,6-bis(3,3-dimetilmorfolin-4-il)-1,3,5-triazin-2-il]-4-(difluorometil)piridin-2-amina (39)
Figure imgf000076_0002
De acuerdo con el procedimiento general 1, el compuesto 39 se obtiene a partir de los materiales de partida i4 e i68 con un rendimiento del 28 % como un sólido incoloro. 1H NMR (400 MHz, (CD3)2SO): 88,78 (s, 1 H), 7,70 (t, 2Jh,f = 55 Hz, 1 H), 6,82 (br s, 2 H), 6,77 (s, 1 H), 3,87-3,75 (m, 8 H), 3,45 (br s, 4 H), 1,49 (s, 12 H); 19F NMR (376 MHz, (CDa)2SO): 8 - 114,9-(-115,1) (m, 2 F); MS (MALDI): m/z = 450,1 ([M+H]+).
Compuesto 40: 5-[4,6-bis [(3R,5S)-3,5-dimetilmorfolin-4-il]-1,3,5-triazin-2-il]-4-(difluorometil)piridina-2-amina (40)
Figure imgf000076_0003
De acuerdo con el procedimiento general 1, el compuesto 40 se obtiene a partir de los materiales de partida i6 e i68 con un rendimiento del 42 % como un sólido incoloro. 1H NMR (400 MHz, (CD3)2SO): 88,90 (s, 1 H), 7,82 (t, 2Jh,f = 55 Hz, 1 H), 6,84 (br s, 2 H), 6,77 (s, 1 H), 4,59-4,43 (m, 4 H), 3,82-3,73 (m, 4 H), 3,60-3,51 (m, 4 H), 1,29 (d, 2Jh.h = 6,9 Hz, 12 H); 19F NMR (376 MHz, (CDa^SO): 8 - 114,9-(- 115,0) (m, 2 F); MS (MALDI): m/z = 450,2 ([M+H]+).
Compuesto 41: 5-[4,6-b¡s[(3R)-3-met¡lmorfol¡n-4-¡l]-1,3,5-tr¡az¡n-2-¡l]-4-(d¡fluoromet¡l)p¡r¡d¡n-2-am¡na (41)
Figure imgf000077_0001
De acuerdo con el proced¡m¡ento general 1, el compuesto 41 se obt¡ene a part¡r de los mater¡ales de part¡da ¡5 e ¡68 con un rend¡m¡ento del 98 % como un sól¡do ¡ncoloro. 1H NMR (400 MHz, CDCh): 89,04 (s, 1 H), 7,70 (t, 2Jh,f = 52,0 Hz, 1 H), 6,84 (s, 1 H), 4,88 (brs, 2 H), 4,77-4,72 (m, 2 H), 4,41 (d, 2Jh h = 12,0 Hz, 2 H), 3,98 (dd, 2Jh h = 12,0 Hz, 3Jh,h = 4,0 Hz, 2 H), 3,78 (d, 2Jh,h = 12,0 Hz, 2 H), 3,68 (dd, 2Jh,h = 12,0 Hz, 3Jh,h = 4,0 Hz, 2 H), 3,53 (dt, 2Jh,h = 12,0 Hz, 3Jh h = 4,0 Hz, 2 H), 3,28 (dt, 2Jh,h = 12,0 Hz, 3Jh,h = 4,0 Hz, 2 H), 1,33 (d, 2Jh,h = 8,0 Hz, 6 H); 19F NMR (376 MHz, CDCla): 8 -115,9 (s, 1 F), -116,0 (s, 1 F); MS (MALDI): m/z = 421,7 ([M+H]+).
Compuesto 42: 4-(d¡fluoromet¡l)-5-[4-(3,3-d¡met¡lmorfol¡n-4-¡l)-6-morfol¡no-1,3,5-tr¡az¡n-2-¡l]p¡r¡d¡n-2-am¡na (42)
Figure imgf000077_0002
De acuerdo con el proced¡m¡ento general 1, el compuesto 42 se obt¡ene a part¡r de los mater¡ales de part¡da ¡16 e ¡68 con un rend¡m¡ento del 35 % como un sól¡do ¡ncoloro. 1H NMR (400 MHz, (Cd 3)2SO): 88,83 (s, 1 H), 7,73 (t, 2Jh,f = 55 Hz, 1 H), 6,84 (br s, 2 H), 6,76 (s, 1 H), 3,85-3,76 (m, 4 H), 3,76-3,63 (m, 8 H), 3,45 (br s, 2 H), 1,49 (s, 6 H); 19F NMR (376 MHz, (CDa)2SO): 8 -116 (s, 2 F); MS (MALDI): m/z = 422,1 ([M+H]+).
Compuesto 44: 4-(d¡fluoromet¡l)-5-[4-[(3R,5S)-3,5-d¡met¡lmorfol¡n-4-¡l]-6-[(3R)-3-met¡lmorfol¡n-4-¡l]-1,3,5-tr¡az¡n-2-¡l]p¡r¡d¡n-2-am¡na (44)
Figure imgf000077_0003
De acuerdo con el proced¡m¡ento general 1, el compuesto 44 se obt¡ene a part¡r de los mater¡ales de part¡da ¡37 e ¡68 con un rend¡m¡ento del 75 % como un sól¡do ¡ncoloro. 1H NMR (400 MHz, (Cd 3)2SO): 88,89 (s, 1 H), 7,79 (t, 2Jh,f = 55 Hz, 1 H), 6,83 (br s, 2 H), 6,76 (s, 1 H), 4,65 (br s, 1 H), 4,50 (br s, 2 H), 4,37-4,25 (m, 1 H), 3,93 (dd, 3Jh h = 11 Hz, 3Jh h = 3,2 Hz, 1 H), 3,79-3,67 (m, 3 H), 3,59-3,51 (m, 3 H), 3,45-3,36 (m, 1 H), 3,22-3,11 (m, 1 H), 1,30 (d, 3Jh h = 6,7 Hz, 6 H), 1,24 (d, 3Jh h = 6,7 Hz, 3 H); 19F NMR (376 MHz, (CDa^SO): 8 -115 ,0 (br s, 2 F); MS (MALDI): m/z = 436,1 ([M+H]+).
Compuesto 45: 4-(d¡fluoromet¡l)-5-[4-(3,3-d¡met¡lmorfol¡n-4-¡l)-6-[(3R)-3-met¡lmorfol¡n-4-¡l]-1,3,5-tr¡az¡na-2-¡l]p¡r¡d¡n-2-am¡na (45)
Figure imgf000078_0001
De acuerdo con el procedimiento general 1, el compuesto 45 se obtiene a partir de los materiales de partida i38 e i68 con un rendimiento del 71 % como un sólido incoloro. 1H NMR (400 MHz, (Cd 3)2SO): 88,84 (s, 1 H), 7,74 (t, 2Jh,f = 55 Hz, 1 H), 6,83 (br s, 2 H), 6,76 (s, 1 H), 4,58 (br s, 1 H), 4,31-4,19 (m, 1 H), 3,93 (dd, 2Jhh = 12 Hz, 3Jh h = 3,9 Hz, 1 H), 3,84-3,81 (m, 4 H), 3,76-3,69 (m, 1 H), 3,58 (dd, 2Jh h = 11 Hz, 3Jh h = 3,2 Hz, 1 H), 3,46-3,38 (m, 3 H), 3,23-3,13 (m, 1 H), 1,50 (br s, 6 H), 1,23 (d, 3Jh,h = 6,7 Hz, 3 H); 19F NMR (376 MHz, (CDa^SO): 8 - 114,8-(- 115,5) (m, 2 F); MS (MALDI): m/z = 436,0 ([M+H]+).
Compuesto 46: 4-(difluorometil)-5-[4-[(3R)-3-(metoximetil)morfolin-4-il]-6-[(3R)-3-metilmorfolin-4-il]-1,3,5-triazin-2-il]piridin-2-amina (46)
Figure imgf000078_0002
De acuerdo con el procedimiento general 1, el compuesto 46 se obtiene a partir de los materiales de partida ¡39 e ¡68 con un rendimiento del 67 % como un sólido incoloro. 1H NMR (400 MHz, (Cd 3)2SO): 88,87 (s, 1 H), 7,77 (t, 2Jh,f = 55 Hz, 1 H), 6,84 (br s, 2 H), 6,76 (s, 1 H), 4,67 (br s, 2 H), 4,44-4,24 (m, 2 H), 3,96-3,83 (m, 3 H), 3,75-3,63 (m, 2 H), 3,60-3,36 (m, 5 H), 3,31 (s, 3 H), 3,21-3,04 (m, 2 H), 1,23 (d, 3Jh h = 6,7 Hz, 3 H); 19F NMR (376 MHz, (CDa^SO): 8 -115,0 (br s, 2 F); MS (MALDI): m/z = 452,3 ([M+H]+).
Compuesto 47: 4-(difluorometil)-5-[4-(3,7-dioxa-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-9-il)-6-[(3R)-3-metilmorfolin-4-il]-1,3,5-triazin-2-il]piridin-2-amina (47)
Figure imgf000078_0003
De acuerdo con el procedimiento general 1, el compuesto 47 se obtiene a partir de los materiales de partida ¡36 e ¡68 con un rendimiento del 85 % como un sólido incoloro. 1H NMR (400 MHz, (Cd 3)2SO): 88,86 (s, 1 H), 7,72 (t, 2Jh,f = 55 Hz, 1 H), 6,84 (br s, 2 H), 6,75 (s, 1 H), 4,64 (br s, 1 H), 4,53-4,42 (m, 2 H), 4,37-4,25 (m, 1 H), 4,05-3,96 (m, 4 H), 3,92-3,84 (m, 1 H), 3,77-3,66 (m, 5 H), 3,60-3,52 (m, 1 H), 3,44-3,35 (m, 1 H), 3,22-3,10 (m, 1 H), 1,23 (d, 3Jh h = 6,7 Hz, 3 H); 19F NMR (376 MHz, (CDa^SO): 8 - 114,9-(-117,1) (m, 2 F); MS (MALDI): m/z = 450,0 ([M+H]+).
Compuesto 50: 4-(difluorometil)-5-[4-[(3R)-3-metilmorfolin-4-il]-6-(3-oxa-6-azabiciclo[3.1.1]heptan-6-il)-1,3,5-triazin-2-il]piridin-2-amina (50)
Figure imgf000079_0001
De acuerdo con el procedimiento general 1, el compuesto 50 se obtiene a partir de los materiales de partida i40 e i68 con un rendimiento del 52 % como un sólido incoloro. 1H NMR (400 MHz, (Cd 3)2SO): 88,90 (s, 1 H), 7,82 (t, 2Jh,f = 55 Hz, 1 H), 6,87 (br s, 2 H), 6,76 (s, 1 H), 4,55-4,51 (m, 1 H), 4,34-4,14 (m, 3 H), 4,12-4,25 (m, 2 H), 3,92-3,80 (m, 1 H), 3,76-3,68 (m, 3 H), 3,55-3,51 (m, 1 H), 3,38 (m, 1 H), 3,20-3,13 (m, 1 H), 2,68 (m, 1 H), 1,78 (m, 1 H), 1,20 (d, 3Jh h = 6,9 Hz, 3 H); 19F NMR (376 MHz, (CDa^SO): 8 -115,0 (br s, 2 F); MS (MALDI): m/z = 420,6 ([M+H]+).
Compuesto 51: 4-(difluorometil)-5-[4-[(3R)-3-metilmorfolin-4-il]-6-(6-oxa-3-azabiciclo[3.1.1]heptan-3-il)-1,3,5-triazin-2-il]piridin-2-amina (51)
Figure imgf000079_0002
De acuerdo con el procedimiento general 1, el compuesto 51 se obtiene a partir de los materiales de partida i41 e i68 con un rendimiento del 36 % como un sólido incoloro. 1H NMR (400 MHz, (Cd 3)2SO): 88,99 (s, 1 H), 7,89 (t, 2Jh,f = 55 Hz, 1 H), 6,84 (br s, 2 H), 6,77 (s, 1 H), 4,69 (m, 3 H), 4,37 (m, 1 H), 3,91-3,85 (m, 3 H), 3,75-3,53 (m, 4 H), 3,42-3,35 (m, 1 H), 3,22-3,15 (m, 1 H), 3,12-3,08 (m, 1 H), 1,85 (m, 1 H), 1,24 (d, 3Jh,h = 6,9 Hz, 3 H); 19F NMR (376 MHz, (CDa)2SO): 8 -116,0 (br s, 2 F); MS (MALDI): m/z = 420,6 ([M+H]+).
Compuesto 52: 4-(difluorometil)-5-[4-[(3R)-3-metilmorfolin-4-il]-6-[('/R,4R)-2-oxa-5-azabiciclo[2.2.1]heptan-5-il]-1,3,5-triazin-2-il]piridin-2-amina (52)
Figure imgf000079_0003
De acuerdo con el procedimiento general 1, el compuesto 52 se obtiene a partir de los materiales de partida ¡42 e ¡68 con un rendimiento del 44 % como un sólido incoloro (mezcla 1:1 de rotámeros). 1H NMR (400 MHz, (CD3)2SO): 88,89 (m, 1 H), 7,77 (m, 1 H), 6,84 (br s, 2 H), 6,76 (s, 1 H), 5,02-4,97 (m, 1 H), 4,68-4,66 (m, 2 H), 4,31 (m, 1 H), 3,89-3,85 (m, 1 H), 3,79-3,57 (m, 3 H), 3,57-3,44 (m, 4 H), 3,22 (m, 1 H), 1,90-1,83 (m, 2 H), 1,21 (d, 3Jh,h = 6,9 Hz, 3 H); 19F NMR (376 MHz, (CDa^SO): 8 -115,5 (br s, 2 F); MS (MALDI): m/z = 420,2 ([M+H]+).
Compuesto 53: 4-(difluorometil)-5-[4-[(3R)-3-metilmorfolin-4-il]-6-[(1S,4S)-2-oxa-5-azabiciclo[2.2.1]heptan-5-il]-1,3,5-triazin-2-il]piridin-2-amina (53)
Figure imgf000080_0001
De acuerdo con el procedimiento general 1, el compuesto 53 se obtiene a partir de los materiales de partida i43 e i68 con un rendimiento del 53 % como un sólido incoloro (mezcla 1:1 de rotámeros). 1H NMR (400 MHz, (CD3)2SO): 88,90 (m, 1 H), 7.77 (m, 1 H), 6,84 (br s, 2 H), 6,76 (s, 1 H), 5,02-4,96 (m, 1 H), 4,68-4,62 (m, 2 H), 3,90 (m, 1 H), 3,80 (m, 1 H), 3,70 (m, 2 H), 3,57 (m, 2 H), 3,45 (m, 3 H), 3,20 (m, 1 H), 1,90-1,83 (m, 2 H), 1,21 (d, 3Jhh = 6,9 Hz, 3 H); 19F NMR (376 MHz, (CDa)2SO): 8-115,0 (br s, 2 F); MS (MALDI): m/z = 420,2 ([M+H]+).
Compuesto 54: 5-[-4,6-bis[(3R)-3-etilmorfolin-4-il]-1,3,5-triazin-2-il]-4(difluorometil)piridin-2-amina (54)
Figure imgf000080_0002
De acuerdo con el procedimiento general 1, el compuesto 54 se obtiene a partir de los materiales de partida ¡8 e ¡68 con un rendimiento del 61 % como un sólido incoloro. 1H NMR (400 MHz, (CD3)2SO): 88.87 (s, 1 H), 7,77 (t, 2Jh,f = 55 Hz, 1 H), 6,83 (br s, 2 H), 6,76 (s, 1 H), 4,47 (m, 4 H), 3,89-3,81 (m, 4 H), 3,51-3,34 (m, 4 H), 3,12 (m, 2 H), 1,71 (m, 4 H), 0,86 (m, 6 H). 19F NMR (376 MHz, (CD3)2SO): 8-115,0 (br s, 2 F); MS (MALDI): m/z = 450,3 ([M+H]+).
Compuesto 55: 5-[4,6-bis(8-oxa-5-azaespiro[3.5]nonan-5-il)-1,3,5-triazin-2-il]-4-(difluorometil)piridin-2-amina (55)
Figure imgf000080_0003
De acuerdo con el procedimiento general 1, el compuesto 55 se obtiene a partir de los materiales de partida ¡9 e ¡68 con un rendimiento del 59 % como un sólido incoloro. 1H NMR (400 MHz, (CD3)2SO): 88,74 (s, 1 H), 7,65 (t, 2Jh,f = 55 Hz, 1 H), 6,81 (br s, 2 H), 6,75 (s, 1 H), 3,68 (m, 8 H), 3,49 (m, 4 H), 2,46-2,38 (m, 4 H), 2,25-2,16 (m, 4 H), 1,72-1,66 (m, 4 H); 19F NMR (376 MHz, (CD3)2SO): 8-115,5 (br s, 2 F); MS (MALDI): m/z = 474,3 ([M+H]+).
Compuesto 56: 5-[4,6-bis[(3R)-3-isopropilmorfolin-4-il]-1,3,5-triazin-2-il]-4-(difluorometil)piridin-2-amina (56)
Figure imgf000081_0001
De acuerdo con el procedimiento general 1, el compuesto 56 se obtiene a partir de los materiales de partida i10 e i68 con un rendimiento del 59 % como un sólido incoloro. 1H NMR (400 MHz, (Cd 3)2SO): 88,87 (s, 1 H), 7,76 (t, 2Jh,f = 55 Hz, 1 H), 6,82 (br s, 2 H), 6,76 (s, 1 H), 4,50 (m, 2 H), 4,29 (m, 2 H), 4,02-3,84 (m, 4 H), 3,40 (m, 4 H), 3,08 (m, 2 H), 2,34 (m, 2 H), 1,02 (m, 6 H), 0,77 (m, 6 H); 19F NMR (376 MHz, (CD3)2SO): 8 - 115,0 (br s, 2 F); MS (MALDI): m/z = 478,4 ([M+H]+).
Compuesto 66: 4-(difluorometil)-5-[4-(3,3-dimetilmorfolin-4-il)-6-V('3R,5SJ-3,5-dimetilmorfolin-4-il]-1,3,5-tri-azin-2-il]piridin-2-amina (66)
Figure imgf000081_0002
De acuerdo con el procedimiento general 1, el compuesto 66 se obtiene a partir de los materiales de partida ¡55 e ¡68 con un rendimiento del 61 % como un sólido incoloro. 1H NMR (400 MHz, (Cd 3)2SO): 88,87 (s, 1 H), 7,77 (t, 2Jh,f = 55 Hz, 1 H), 6,83 (br s, 2 H), 6,76 (s, 1 H), 4,46 (m, 2 H), 3,81-3,77 (m, 6 H), 3,55 (m, 2 H), 3,44 (m, 2 H), 1,49 (s, 6 H), 1,28 (d, 3Jh h = 6,9 Hz, 6 H); 19F NMR (376 MHz, (CD3)2SO): 8 -115,0 (br s, 2 F); MS (MALDI): m/z = 450,4 ([M+H]+).
Compuesto 67: 4-(difluorometil)-5-[4-(3,3-dimetilmorfolin-4-il)-6-[(3R)-3-(metoximetil)morfolin-4-il]-1,3,5-triazin-2-il]piridin-2-amina (67)
Figure imgf000081_0003
De acuerdo con el procedimiento general 1, el compuesto 67 se obtiene a partir de los materiales de partida i56 e i68 con un rendimiento del 37 % como un sólido incoloro. 1H NMR (400 MHz, (Cd 3)2SO): 88,84 (s, 1 H), 7,89 (t, 2Jh,f = 55 Hz, 1 H), 6,85 (br s, 2 H), 6,76 (s, 1 H), 4,60 (m, 1 H), 4,31 (m, 1 H), 3,92 (m, 2 H), 3,83 (m, 4 H), 3,65 (m, 1 H), 3,51­ 3,41 (m, 5 H), 3,28 (s, 3 H), 3,12 (m, 1 H), 1,49 (s, 3 H), 1,48 (s, 3 H); 19F NMR (376 MHz, (CD3)2SO): 8 -115,5 (br s, 2 F); MS (MALDI): m/z = 466,4 ([M+H]+).
Compuesto 68: [(3R)-4-[4-[6-amino-4- (difluorometil)-3-piridil]-6-(3,3-dimetilmorfolin-4-il)-1,3,5-triazin-2-il]morfolin-3-il]metanol (68)
Figure imgf000082_0001
De acuerdo con el procedimiento general 1, el compuesto 68 se obtiene a partir de los materiales de partida i57 e i68 con un rendimiento del 58 % como un sólido incoloro. 1H NMR (400 MHz, (CD3)2SO): 88,83 (s, 1 H), 7,77 (m, 1 H), 6,84 (br s, 2 H), 6,76 (s, 1 H), 4,91 (m, 1 H), 4,35 (m, 2 H), 4,05 (m, 1 H), 3,97-3,70 (m, 6 H), 3,54-3,38 (m, 5 H), 3,12 (m, 1 H), 1,49 (s, 3 H), 1,48 (s, 3 H); 19F NMR (376 MHz, (CDa^SO): 8 - 115,5 (br s, 2 F); MS (MALDI): m/z = 452,2 ([M+H]+).
Compuesto 69: 4-(difluorometil)-5-[4-(3,3-dimetilmorfolin-4-il)-6-(3,7-dioxa-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-9-il)-1,3,5-triazin-2-il]piridin-2-amina (69)
Figure imgf000082_0002
De acuerdo con el procedimiento general 1, el compuesto 69 se obtiene a partir de los materiales de partida i54 e i68 con un rendimiento del 57 % como un sólido incoloro. 1H NMR (400 MHz, (Cd 3)2SO): 88,83 (s, 1 H), 7,69 (t, 2Jh,f = 55 Hz, 1 H), 6,85 (br s, 2 H), 6,76 (s, 1 H), 4,47-4,37 (m, 2 H), 4,01 (m, 4 H), 3,80-3,71 (m, 8 H), 3,45 (m, 2 H), 1,48 (s, 6 H); 19F NMR (376 MHz, (CDa^SO): 8-115,7 (br s, 2 F); MS (MALDI): m/z = 464,3 ([M+H]+).
Compuesto 70: 5-[4-(4-ciclopropilpiperazin-1-il)-6-(3,3-dimetilmorfolin-4-il)-1,3,5-triazin-2-il]-4-(difluorometil)piridin-2-amina (70)
Figure imgf000082_0003
De acuerdo con el procedimiento general 1, el compuesto 70 se obtiene a partir de los materiales de partida i58 e i68 con un rendimiento del 12 % como un sólido incoloro. 1H NMR (400 MHz, (Cd 3)2SO): 88,82 (s, 1 H), 7,72 (t, 2Jh,f = 55 Hz, 1 H), 6,83 (br s, 2 H), 6,76 (s, 1 H), 3,82 (m, 4 H), 3,71 (m, 4 H), 3,44 (m, 2 H), 2,58 (m, 4 H), 1,64 (m, 1 H), 1,44 (s, 6 H), 0,45 (m, 2 H), 0,36 (m, 2 H); 19F NMR (376 MHz, (CDa^SO): 8 - 115,4 (br s, 2 F); MS (MALDI): m/z = 460,4 ([M]+).
Compuesto 71: 4-(difluorometil)-5-[4-(3,3-dimetilmorfolin-4-il)-6-[4-(2-metoxietil)piperazin-1-il]-1,3,5-triazina-2-il]piridin-2-amina (71)
Figure imgf000083_0001
De acuerdo con el procedimiento general 1, el compuesto 71 se obtiene a partir de los materiales de partida i59 e i68 con un rendimiento del 42 % como un sólido incoloro. 1H NMR (400 MHz, (Cd 3)2SO): 88,82 (s, 1 H), 7,73 (t, 2Jh,f = 55 Hz, 1 H), 6,83 (br s, 2 H), 6,76 (s, 1 H), 3,88-3,69 (m, 10 H), 3,47-3,44 (m, 4 H), 3,24 (m, 3 H), 2,52-2,45 (m, 4 H), 1,44 (s, 6 H); 19F NMR (376 MHz, (CDa^SO): 8-115,4 (br s, 2 F); MS (MALDI): m/z = 478,4 ([M]+).
Compuesto 77: [(3R)-4-[4-[6-amino-4-(difluorometil)-3-piridil]-6-[(3R)-3-metilmorfolin-4-il]-1,3,5-triazin-2-il]morfolin-3-il]metanol (77)
Figure imgf000083_0002
i53 168 77
De acuerdo con el procedimiento general 1, el compuesto 77 se obtiene a partir de los materiales de partida i53 e i68 con un rendimiento del 31 % como un sólido incoloro. 1H NMR (400 MHz, (Cd 3)2SO): 88,88 (s, 1 H), 7,78 (t, 2Jh,f = 55 Hz, 1 H), 6,84 (br s, 2 H), 6,76 (s, 1 H), 4,96 (m, 1 H), 4,73 (m, 1 H), 4,58-4,24 (m, 3 H), 4,05 (m, 1 H), 3,90 (m, 2 H), 3,72 (m, 2 H), 3,59 (m, 1 H), 3,51-3,36 (m, 4 H), 3,23-3,02 (m, 2 H), 1,23 (d, 3Jh h = 6,9 Hz, 3 H); MS (MALDI): m/z = 438,3 ([M+H]+).
Compuesto 78: 4-(difluorometil)-5-[4-[(3R,5R)-3,5-dimetilmorfolin-4-il]-6-[(3R)-3-metilmorfolin-4-il]-1,3,5-triazin-2-il]piridin-2-amina (78)
Figure imgf000083_0003
De acuerdo con el procedimiento general 1, el compuesto 78 se obtiene a partir de los materiales de partida i85 e i68 con un rendimiento del 71 % como un sólido incoloro. 1H NMR (400 MHz, (Cd 3)2SO): 88,90 (s, 1 H), 7,82 (t, 2Jh,f = 55 Hz, 1 H), 6,84 (br s, 2 H), 6,76 (s, 1 H), 4,66 (m, 1 H), 4,32 (m, 3 H), 4,15 -4 ,11 (m, 2 H), 3,92 (m, 1 H), 3,70 (m, 3 H), 3,57 (m, 1 H), 3,40 (m, 1 H), 3,18 (m, 1 H), 1,37 (m, 6 H), 1,24 (d, 3Jh h = 6,9 Hz, 3 H); 19F NMR (376 MHz, (CDa^SO): 8 -114,9 (br s, 2 F); MS (MALDI): m/z = 435,4 ([M]+).
Compuesto 79: 4-(difluorometil)-5-[4-[(3S,5S)-3,5-dimetilmorfolin-4-il]-6-[(3R)-3-metilmorfolin-4-il]-1,3,5-triazin-2-il]piridin-2-amina (79)
Figure imgf000084_0003
De acuerdo con el procedimiento general 1, el compuesto 79 se obtiene a partir de los materiales de partida i86 e i68 con un rendimiento del 65 % como un sólido incoloro. 1H NMR (400 MHz, (Cd 3)2SO): 88,91 (s, 1 H), 7,82 (t, 2Jh,f = 55 Hz, 1 H), 6,85 (br s, 2 H), 6,76 (s, 1 H), 4,66 (m, 1 H), 4,32 (m, 3 H), 4,15 -4 ,11 (m, 2 H), 3,92 (m, 1 H), 3,70 (m, 3 H), 3,57 (m, 1 H), 3,40 (m, 1 H), 3,19 (m, 1 H), 1,37 (m, 6 H), 1,24 (d, 3Jh h = 6,9 Hz, 3 H); 19F NMR (376 MHz, (CDa^SO): 8 -114,9 (br s, 2 F); MS (MALDI): m/z = 434,3 ([M]+).
Compuesto 80: 4-(difluorometil)-5-[4-morfolino-6-(3-oxa-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-9-il)-1,3,5-triazin-2-il]piridin-2-amina (80)
Figure imgf000084_0001
De acuerdo con el procedimiento general 1, el compuesto 80 se obtiene a partir de los materiales de partida i87 e i68 con un rendimiento del 57 % como un sólido incoloro. 1H NMR (400 MHz, (Cd 3)2SO): 88,85 (s, 1 H), 7,73 (t, 2Jh,f = 55 Hz, 1 H), 6,84 (br s, 2 H), 6,75 (s, 1 H), 4,61 -4 ,57 (m, 2 H), 3,95 (m, 2 H), 3,75 -3 ,65 (m, 10 H), 2,48 (m, 1 H), 1,88 -1 ,72 (m, 4 H), 1,57 (m, 1 H); 19F NMR (376 MHz, (CDa^SO): 8-115,4 (m, 2 F); MS (MALDI): m/z = 434,3 ([M+H]+).
Compuesto 82: 4-(difluorometil)-5-[4-(3,7-dioxa-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-9-il)-6-(3-oxa-9-azabiciclo[3.3.1)]nonan-9-il)-1,3,5-triazin-2-il]piridin-2-amina (82)
Figure imgf000084_0002
De acuerdo con el procedimiento general 1, el compuesto 82 se obtiene a partir de los materiales de partida i89 e i68 con un rendimiento del 51 % como un sólido incoloro. 1H NMR (400 MHz, (Cd 3)2SO): 88,84 (s, 1 H), 7,70 (t, 2Jh,f = 55 Hz, 1 H), 6,85 (br s, 2 H), 6,75 (s, 1 H), 4,62 (m, 1 H), 4,54 (m, 1 H), 4,52 (m, 1 H), 4,44 (m, 1H), 4,04 - 3,92 (m, 6 H), 3,75 -3 ,62 (m, 6 H), 2,45 (m, 1 H), 1,89 - 1,75 (m, 4 H), 1,57 (m, 1 H); 19F NMR (376 MHz, (CDa^SO): 8 -115,7 (m, 2 F); MS (MALDI): m/z = 476,2 ([M+H]+).
Compuesto 83: 5-[4,6-bis[(3S,5S)-3,5-dimetilmorfolin-4-il]-1,3,5-triazin-2-il]-4-(difluorometil)piridina-2-amina (83)
Figure imgf000085_0001
De acuerdo con el procedimiento general 1, el compuesto 83 se obtiene a partir de los materiales de partida i90 e i68 con un rendimiento del 56 % como un sólido incoloro. 1H NMR (400 MHz, (Cd 3)2SO): 88,92 (s, 1 H), 7,87 (t, 2Jh,f = 55 Hz, 1 H), 6,84 (br s, 2 H), 6,77 (s, 1 H), 4,32 (m, 4 H), 4,14 (m, 4 H), 3,70 (m, 4 H), 1,39 (d, 3Jh h = 6,9 Hz, 12 H); 19F NMR (376 MHz, (CDa^SO): 8 - 115,5 (br s, 2 F); MS (MALDI): m/z = 448,3 ([M]+).
Compuesto 84: 4-(difluorometil)-5-[4-(3,7-dioxa-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-9-il)-6-morfolino-1,3,5-triazin-2-il]piridin-2-amina (84)
Figure imgf000085_0002
De acuerdo con el procedimiento general 1, el compuesto 84 se obtiene a partir de los materiales de partida i91 e i68 con un rendimiento del 63 % como un sólido incoloro. 1H NMR (400 MHz, (Cd 3)2SO): 88,86 (s, 1 H), 7,71 (t, 2Jh,f = 55 Hz, 1 H), 6,87 (br s, 2 H), 6,75 (s, 1 H), 4,49 (m, 2 H), 4,02 (m, 4 H), 3,74 - 3,65 (m, 12 H); 19F NMR (376 MHz, (CDs)2SO): 8-115,6 (br s, 2 F); MS (MALDI): m/z = 436,4 ([M+H]+).
Compuesto 85: 4-(difluorometil)-5-[4-[(3S)-3-etilmorfolin-4-il]-6-[(3R)-3-metilmorfolin-4-il]-1,3,5-triazin-2-il]piridin-2-amina (85)
Figure imgf000085_0003
De acuerdo con el procedimiento general 1, el compuesto 85 se obtiene a partir de los materiales de partida i92 e i68 con un rendimiento del 52 % como un sólido incoloro. 1H NMR (400 MHz, (Cd 3)2SO): 88,88 (s, 1 H), 7,77 (t, 2Jh,f = 55 Hz, 1 H), 6,85 (br s, 2 H), 6,76 (s, 1 H), 4,70 - 4,25 (m, 4 H), 3,90 (m, 3 H), 3,72 (m, 1 H), 3,60 - 3,45 (m, 4 H), 3,16 (m, 2 H), 1,73 (m, 2 H), 1,22 (d, 3Jh h = 6,9 Hz, 3 H), 0,86 (m, 3 H); 19F NMR (376 MHz, (CDa^SO): 8 - 114,9 (br s, 2 F); MS (MALDI): m/z = 436,9 ([M+H]+).
Compuesto 86: 4-(difluorometil)-5-[4-[(3RJ-3-etilmorfolin-4-il]-6-[(3R)-3-metilmorfolin-4-il]1,3,5-triazin-2-il]piridin-2-amina (86)
Figure imgf000086_0001
De acuerdo con el procedimiento general 1, el compuesto 86 se obtiene a partir de las materias primas i93 e i68 con un rendimiento del 47 % como un sólido incoloro. 1H NMR (400 MHz, (CDa^SO): 88,88 (s, 1 H), 7,77 (t, 2Jh,f = 55 Hz, 1 H), 6,85 (br s, 2 H), 6,76 (s, 1 H), 4,65 (m, 1 H), 4,49 - 4,30 (m, 3 H), 3,93 - 3,82 (m, 3 H), 3,72 (m, 1 H), 3,57 (m, 1 H), 3,50 (m, 1 H), 3,43 -3 ,37 (m, 2 H), 3,19 -3 ,14 (m, 2 H), 1,73 (m, 2 H), 1,22 (d, 3Jh, h = 6,9 Hz, 3 H), 0,86 (m, 3 H); 19F NMR (376 MHz, (CDa^SO): 8-115,3 (br s, 2 F); MS (MALDI): m/z = 436,9 ([M+H]+).
Compuesto 88: 4-(difluorometil)-5-[4-[(3R)-3-metilmorfolin-4-il]-6-(8-oxa-5-azaespiro[3.5]nonan-5-il)-1,3,5-triazin-2-il]piridin-2-amina (88)
Figure imgf000086_0002
De acuerdo con el procedimiento general 1, el compuesto 88 se obtiene a partir de los materiales de partida i94 e i68 con un rendimiento del 50 % como un sólido incoloro. 1H NMR (400 MHz, (Cd 3)2SO): 88,82 (s, 1 H), 7,71 (t, 2Jh,f = 55 Hz, 1 H), 6,84 (br s, 2 H), 6,75 (s, 1 H), 4,55 (m, 1 H), 4,23 (m, 1 H), 3,91 (m, 1 H), 3,78 (m, 2 H), 3,69 (m, 3 H), 3,56 (m, 1 H), 3,50 (m, 2 H), 3,41 (m, 1 H), 3,16 (m, 1 H), 2,50 (m, 2 H), 2,26 (m, 2 H), 1,73 (m, 2 H), 1,21 (d, 3Jh h = 6,9 Hz, 3 H); 19F NMR (376 MHz, (CDs^SO): 8 -114,9 (br s, 2 F); MS (MALDI): m/z = 446,8 ([M+H]+).
Ejemplo 2
Ensayo de unión de mTOR in vitro y membrana de Western en la célula
Ensayo de unión de mTOR in vitro
mTOR etiquetado con GST N-terminal (Cat. núm. PR8683B; 0,45 mg/ml; versión truncada: aminoácidos 1360-2549), trazador de quinasa marcado con Alexa Fluor® 647 (Cat. núm. PV6087), Anticuerpo anti-Tag GST-LanthaScreen Eu (Cat. núm. PV5594) se adquirieron de Life Technologies. El tampón de quinasa mTOR 1x consta de HEPES 50 mM pH 7,5, MgCl25 mM, EGTA 1 mM y Pluronic F-127 al 0,01 % (Sigma Cat. núm. P2443-250G).
Una dilución en serie de 10 puntos 4 veces (concentración más alta a 10pmol/L y la concentración más baja a 40 pmol/L) de cada compuesto se ensayó para la unión de mTOR por duplicado en una placa de 384 pocillos. Para realizar el ensayo de unión de quinasa LanthaScreen 5pl de los compuestos de prueba concentrados 3x la concentración final, 5pl de mezcla de anticuerpos GST-mTOR 9 nM/Eu-anti-GST 6 nM y 5pl de solución de Tracer 314 30 nM se mezclaron dando como resultado una concentración final de GST-mTOR 3 nM, anticuerpo Eu-anti-GST 2 nM y Tracer 314 10 nM por pocillo. Después de 30 min de incubación a temperatura ambiente, se midió FRET en tiempo resuelto con un lector de microplacas multimodo Synergy 4 (Biotek Instruments) con el uso de las siguientes configuraciones: retraso de 100 microsegundos antes de la recolección de datos, tiempo de 200 microsegundos para la recolección de datos, 10 mediciones por punto de datos. Filtro de emisión: 665 nm/8 nm con sensibilidad establecida en 190 y 620 nm/10 nm con sensibilidad establecida en 130; Filtro de excitación: 340 nm/30 nm; Espejo dicroico 400 nm.
Para el análisis de datos, se restó el fondo promedio (pocilios con solo tampón de quinasa mTOR) y se calculó la relación de emisión dividiendo la señal emitida a 665 nm del aceptor (Alexa Fluor® 647 etiquetado como Tracer 314) por la señal emitida a 620 nm a partir del donante (anticuerpo marcado con Eu). Los valores de IC50 de cada compuesto se determinaron trazando la relación de emisión frente a las concentraciones de compuesto (en escala logarítmica) y luego ajustando una curva dosis-respuesta sigmoidal con pendiente variable a los datos con el uso de GraphPad Prism™.
Membrana de Western en la célula
Las células A2058 se cultivan en placa a 20000 células/pocillo en una placa de 96 pocillos (Perkin Elmer, Cat. núm.
6005558) y 24 horas después tratados con diferentes compuestos durante 1 hora. Para cada compuesto se aplican 7 concentraciones diferentes en las células (5|j M, 1,25|j M, 0,625|j M, 0,3125|j M, 0,155|j M, 0,08|j M y 0,04|j M). Las células se fijan con paraformaldehído al 4 % durante 30 minutos a temperatura ambiente, se lavan 2 veces con BSA al 1% en PBS, se permeabilizan con Tritón X-100 al 0,1 % en PBS/BSA al 1 % durante 30 minutos a temperatura ambiente y se bloquean con suero de cabra al 5 % en PBS/BSA al 1 %/Tritón X-100 al 0,1 % durante 30 minutos a temperatura ambiente. Las células se tiñen con anticuerpo primario ya sea con anti-pPKB S473 de conejo (1:500; Cell Signaling Technology, Cat. núm. 4058) combinado con anti-a-tubulina de ratón (1:2000; usado para normalización; Sigma, Cat. núm. T9026) o con anti-pS6 S235/S236 de conejo (1:500; Cell Signaling Technology, Cat. núm. 4856) combinado con anti-a-tubulina de ratón (1:2000; usada para la normalización) durante toda la noche a 4 °C. Después de 3 lavados de 5 minutos con PBS/BSA al 1 %/Tritón al 0,1 %, las células se tratan con los anticuerpos secundarios anti-IRDye680 ratón de cabra (LICOR, Cat. núm. 926-68070) e anti-IRDye800 conejo de cabra (LICOR, 926-32211) (cada uno diluido 1:500 en PBS/BSA al 1 %/Tritón al 0,1 %) durante 1 hora mientras se agita en la oscuridad. Las células se lavan 3 veces durante 5 minutos con PBS/BSA al 1 %/Tritón al 0,1 % y se escanea la placa con el sistema Odyssey Infrared Scanning mediante el uso de canales de 700 y 800 nm. Como control para el 0% de inhibición, se añade vehículo (DMSO al 0,2 %) a las células. Para corregir la tinción de fondo en el análisis de datos, los pocillos se tratan solo con anticuerpos secundarios.
Para el análisis de datos, se resta de cada señal en el canal 700 nm y 800 nm la señal de fondo promedio del canal 700 nm y 800 nm, respectivamente. Las señales en cada canal se normalizan al 0 % de inhibición y luego se realiza una relación de la señal de 800 nm sobre 700 nm para obtener los valores de pPKB S473 o pS6 S235/S236 normalizados a a-Tubulina.
Los valores IC50 de cada compuesto se determinan trazando las señales de pPBK S473 y pS6 S235/S236 normalizadas, respectivamente, frente a las concentraciones del compuesto (en escala logarítmica) y luego ajustando una curva de dosis-respuesta sigmoidea con pendiente variable a los datos con el uso de GraphPad™ Prism.
Tabla 1: Actividades biológicas comparativas
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Tabla 5: Actividades biológicas comparativas
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Tabla 6: Actividades biológicas comparativas
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Tabla 7: Actividades biológicas comparativas
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Tabla 9: Actividades biológicas comparativas
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Tabla 12: Resultados de membrana de Western en la célula y unión de mTOR
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(continuación)
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Ejemplo 3
Tolerabilidad del compuesto 3 y del compuesto 8 en ratones
Dosis máxima tolerada (MTD) de cpd. 3 y cpd. 8 en ratones desnudos BALB/c
Para encontrar una dosis que pudiera usarse en experimentos adicionales y para mostrar la tolerabilidad de los compuestos de la presente invención, se trataron ratones hembra desnudos BALB/c con Cpd. 3 y Cpd. 8 por sonda oral (p.o.) dos veces durante cinco días con un descanso de la dosis de dos días inter medio. Los compuestos se administraron en el siguiente vehículo: hidroxipropil-p-ciclodextrina (HPBCD) al 20 %, DMSO al 10 % y agua al 70 %. El criterio de valoración principal fue evaluar la pérdida de peso corporal y la supervivencia de los animales. Los pesos corporales se registraron diariamente durante los días de dosificación y al menos dos veces por semana a partir de entonces. La muerte del animal se chequeó diariamente para comprobar su supervivencia. Los animales debían evaluarse durante 7 días después de la dosis final. La dosis tolerada se definió como la dosis que da como resultado una pérdida de peso corporal media inferior al 20 % y ninguna muerte relacionada con el tratamiento durante el estudio. Se usó el diseño de bloques al azar para asignar los animales de experimentación a los grupos. Primero, los animales de experimentación se dividieron en bloques homogéneos de acuerdo con su peso corporal inicial. En segundo lugar, dentro de cada bloque, se llevó a cabo la aleatorización de los animales de experimentación a los tratamientos.
Proveedor de animales: Shanghai Lingchang Bio-Technology Co.Ltd (LC, Shanghai, China). Núm. de certificado animal: 2013001803305. Los ratones se mantuvieron en sistemas de jaulas ventiladas individuales (IVC) a temperatura y humedad constantes con 5 animales en cada jaula.
Dieta: Dieta para ratones, alimento granulado seco esterilizado por irradiación con C060. Los animales tuvieron acceso libre durante todo el período de estudio. Agua: agua RO, esterilizada en autoclave antes de usar. Los animales tuvieron acceso libre a agua potable esterilizada.
Se trataron con Cpd ratones desnudos BALB/c con tumores OVCAR-3 y SUDHL/6. 3, mediante p.o. a 100 mg/kg durante 21 o 15 días consecutivos, respectivamente, bajo las mismas condiciones. El peso corporal de los ratones se mantuvo estable.
Se determinaron las siguientes MTD en los ratones BALB/c: Cpd. 3: 100 mg/kg, Cpd. 8: 25 mg/kg. En conclusión, tanto Cpd. 3 como Cpd. 8 se toleran bien a dosis terapéuticamente eficaces (ver el Ejemplo 4).
Ejemplo 4
Farmacocinética (PK) de cpd. 3 y cpd. 8
Para determinar la distribución de compuestos en el cuerpo, se determinó la PK de los compuestos en ratas y ratones. Para el tratamiento de los trastornos neurológicos es fundamental emplear compuestos que atraviesen la barrera hematoencefálica y alcancen concentraciones eficaces en el cerebro.
A. PK en ratas Sprague Dawley (SD)
Una única administración oral de cpd. 3, 10 mg/kg se administró a ratas SD hembra en un vehículo que consistía en DMSO/HPBCD al 20 % (10/90). Los animales se alojaron en un ambiente controlado y los recintos proporcionaron un espacio estéril y adecuado con material de cama, comida y agua, enriquecimiento ambiental y social (alojamiento grupal). Las ratas se distribuyeron al azar de acuerdo con su peso corporal individual, se trataron y se recogieron sangre, cerebro e hígado y congelaron instantáneamente en los siguientes intervalos de tiempo: 0,5, 2, 4 y 8 horas. La sangre (aproximadamente 500-700 pl, recogida mediante punción cardíaca bajo anestesia) se transfirió inmediatamente a tubos que contenían heparina de litio como anticoagulante (Ref: T MLH, Venoject®, Terumo). Los tubos se centrifugaron a 1300 g durante 10 minutos a 4 °C. El plasma resultante se recogió y se congeló rápidamente en nitrógeno líquido y se almacenó a -80 °C hasta el análisis.
Las concentraciones de compuestos se detectaron mediante HPLC-MS/MS. Las curvas de calibración se trazaron con el uso de patrones de concentraciones conocidas.
Los resultados se muestran en la figura 1A. Cpd. 3 muestra una buena biodisponibilidad oral y una excelente penetración en el cerebro. Una Cmáx de 1,4 ng/ml en plasma y 1,3 ng/ml en el cerebro indican exposiciones que son lo suficientemente altas para el acoplamiento del objetivo (tabla 1).
B. PK en ratones B57BL/6J
Se administró una única administración oral de Cpd. 3 y Cpd. 8, 50 mg/kg a ratones B57BL/6J por sonda. Los animales se alojaron en habitaciones con temperatura controlada con libre acceso a alimentos y agua. Los artículos de prueba se pesaron en un vial de vidrio y se disolvieron primero en DMSO. Posteriormente se añadió Tween 80 y finalmente se completó la formulación con HPpCD al 20 %. Las formulaciones se administraron mediante sonda en t = 0 h, y en cada uno de los 8 intervalos de tiempo, se anestesiaron tres ratones de cada grupo de tratamiento con isoflurano para la toma de muestras de sangre mediante punción del plexo venoso retrobulbar. La sangre se recogió en tubos que contenían K3-EDTA y se almacenó en hielo hasta su centrifugación a 3000xg (10 min, 4 °C). El sobrenadante de plasma se separó y se mantuvo a -20 °C hasta su análisis. El músculo del muslo y el cerebro de los ratones se congelaron rápidamente. Las muestras de cerebro y músculo se homogeneizaron en PBS con el uso del homogeneizador Precellys 24/Dual.
Las muestras se analizaron por LC-MS. Los estándares de calibración se prepararon añadiendo 20 pl de plasma en blanco sin fármaco con solución de calibración. Después, se añadió un volumen de 40 pl de acetonitrilo que contenía el estándar interno (150 ng/ml de diazepam para las muestras 2015PQR002 y 300 ng/ml de griseofulvina para las muestras 2015PQR004) a 20 pl de homogeneizado de cerebro o músculo, estándar de calibración de cerebro/músculo y muestra de control de calidad de cerebro/músculo. Las muestras se agitaron vigorosamente y se centrifugaron durante 10 minutos a 6000 g y 20 °C. El sobrenadante libre de partículas se diluyó con 1 volumen de agua. Se transfirió una alícuota a los viales de muestreo de 200 pl y posteriormente se sometió a LC-MS con un volumen de inyección de 1,5 pl.
Ambos, Cpd. 3 y Cpd. 8 tienen buena biodisponibilidad oral en ratones (Figura 1B). La distribución entre el plasma y el cerebro indica una penetración a través de la barrera hematoencefálica. Se ha estimado que la vida media de los compuestos en ratones es de aproximadamente 4,7-4,8 horas. Los parámetros farmacológicos se muestran en la tabla 1.
Tabla 1
Parámetros PK de Cpd. 3 y Cpd. 8 después de una única aplicación oral a ratas o ratones.
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Ruta de administración po po
Dosis (mg/kg) 10 50
Cmáx de plasma (jg/m l) 1,4 4,8
Cmáx de cerebro (jg/g) 1,3 7,7
T máx de plasma (hora) 0,5 0,5
T máx de cerebro (hora) 0,5 0,5
t-i/2 de plasma (hora) 5,3
t-i/2 de cerebro (hora) 5,0
AUC plasmática (h*jg/ml) 0,4 20,5
AUC cerebral (h*jg/ml) 2,5 30,6
Ejemplo 5
Acoplamiento del objetivo de Cpd. 3 y Cpd. 8 en cerebro y músculo
Se tomaron muestras de músculo del cerebro y del muslo de ratones B57BL/6J usados para el análisis de PK (EJEMPLO 4). El tejido se congeló instantáneamente en nitrógeno líquido y se almacenó a -80 °C. El tejido se descongeló y se lisó en tampón RIPA 1 ml/medio cerebro. Se añadió inhibidor de proteasa completo e inhibidor de fosfatasa PhosStop (Roche) al tampón antes de la lisis. El tejido se homogeneizó manualmente y se centrifugó dos veces a 16 000 rpm, 4 °C durante 20 minutos. El sobrenadante se congeló con glicerol al 10 % a -80 °C. La concentración de proteínas se realizó con el uso de reactivo de Bradford. Para el análisis de membrana de Western de la fosforilación de AKT y S6rP, se desnaturalizó 30 |jg de proteína con p-mercaptoetanol a 95 °C y se separaron en geles de SDS page a 100 V. Después, las proteínas se transfirieron a una membrana de nitrocelulosa (Bio-Rad, EE. UU.) a 80 V. Se bloqueó la unión no específica con albúmina de suero bovino (BSA) al 5 % (Sigma-Aldrich, EE. UU.). Las membranas se incubaron durante la noche con anticuerpo primario disuelto en TBST, BSA al 5 % a 4 °C y con anticuerpo secundario acoplado a peroxidasa de rábano picante (GE Healthcare, Reino Unido) durante 1 hora a temperatura ambiente y se lavaron. La formación de imágenes de las bandas de proteínas se realizó con el uso de Luminol (Biozym, Hamburgo, Alemania. En un lector Li-Cor Odyssey FC. La cuantificación de la fosforilación de S6 se determinó con el mismo sistema de formación de imágenes.
Se usaron los siguientes anticuerpos:
AKT, P-AKT (S473), S6rP, P-S6rP(S235/236): Cell Signaling (Reino Unido)
p-actina: Sigma Aldrich, EE. UU.
El acoplamiento del objetivo de Cpd. 3 y Cpd. 8 podrían mostrarse en el músculo del cerebro y del muslo después de una única administración oral a ratones (Figura 2). Los compuestos atraviesan la barrera hematoencefálica e inhiben la cascada de señalización de mTOR, como muestra la fosforilación significativamente reducida de S6rP y AKT. La señalización se alteró a los 30 minutos después de la administración y duró al menos 8 horas.
Ejemplo 6
Activación de la vía mTOR en ratones epilépticos
Para evaluar si la señalización de mTOR se activó en el modelo epiléptico utilizado para este estudio, se indujo la epilepsia crónica mediante la administración de pilocarpina, un agonista de los receptores muscarínicos de acetilcolina. Las inyecciones sistémicas de pilocarpina en ratas o ratones resultan en un estado epiléptico (SE) convulsivo generalizado con el desarrollo posterior de convulsiones epilépticas espontáneas en las siguientes dos semanas. Seis semanas después de la inducción de SE con pilocarpina, casi el 100 % de los ratones han desarrollado epilepsia crónica.
Se usó un protocolo de dosificación gradual que tiene la ventaja de que la pilocarpina puede aplicarse individualmente de acuerdo con la susceptibilidad de cada ratón. Se administró pilocarpina (Sigma-Aldrich, Alemania) a ratones NMRI hembra por vía intraperitoneal a una dosis de 100 mg/kg (grupo Pilo-SE). Si los ratones no mostraron SE, se realizaron inyecciones adicionales de 100 mg/kg de pilocarpina cada 20 minutos hasta que se desarrolló SE. Tan pronto como un ratón mostró una actividad convulsiva generalizada, se interrumpieron las inyecciones de pilocarpina. Para reducir los efectos secundarios periféricos de la pilocarpina, se administró metilescopolamina (Sigma-Aldrich, Alemania) 30 minutos antes de la primera inyección de pilocarpina. Los animales se monitorearon continuamente y se registró la duración de la SE convulsiva[referida a la escala de Racine. El inicio de la SE se definió como una actividad convulsiva continua en curso después de la aparición de una o dos convulsiones tónico-clónicas generalizadas [estadio 4 o 5 en la escala de Racine]. Se se caracterizó por asentir con la cabeza en una posición del cuerpo erguido (sentado), cola de Straub y convulsiones leves a moderadas de las extremidades anteriores, a veces interrumpidas por convulsiones tónico-clónicas generalizadas adicionales. Para reducir la mortalidad, se interrumpió la SE con diazepam (10 mg/kg vía intraperitoneal; diazepam-ratiofarm 10, solución inyectable) 90 min después del inicio de la SE. A los 2-5 días siguientes, se inyectaron a los ratones una solución de cloruro de sodio al 0,9 % dos veces al día y se les alimentó con papilla para bebés porque la mayoría de los ratones no comen ni beben por sí mismos durante los primeros días después de la SE. En el grupo de simulación-SE, los ratones se trataron con el mismo esquema de tratamiento que el grupo pilo-SE, pero la pilocarpina se reemplazó por una solución de cloruro de sodio al 0,9 %. La mortalidad en el modelo pilo-SE en ratones es relativamente alta (en general alrededor del 50 %) y puede variar marcadamente entre grupos experimentales/días. Por lo tanto, tuvimos que comenzar con una gran cantidad de ratones para la inducción de SE con el fin de obtener de manera confiable un tamaño de grupo de 20-22 animales para el Me St .
A. Señalización mTOR en muestras cerebrales
Las muestras de cerebro de ratones tratados con pilocarpina y de ratones no tratados se congelaron rápidamente y el tejido se lisó en tampón que contenía Tris-HCl 25 mM, pH 8, NaCl 50 mM, desoxicolato de sodio (DOC) al 0,5 % (p/v) y Triton X-100 al 0,5 % (p/v) y suplementado con inhibidor de proteasa completo (Roche, Mannheim, Alemania) y Phosphostop (NEB, EE. UU.). La ruptura de los lisados celulares se realizó extrayendo la suspensión celular veinte veces en una jeringa con una aguja de pequeño calibre (21G) en hielo. Las concentraciones de proteína en los lisados se determinaron mediante el uso del kit de ensayo de proteínas Pierce BCA (Thermo Scientific, Bonn, Alemania) de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Se separaron cantidades iguales de proteína total en geles SDS-PAGE al 4-20 % y se transfirieron a membranas de PVDF que se bloquearon durante la noche en leche al 5 % en solución salina tamponada con fosfato suplementada con Tween-20 (p Bs T: NaCl 137 mM, KCl 2,7 mM, Na2HPO4 4,3 mM, KH2PO4 1,4 mM, pH 7,3, Tween-20 al 0,05 % (p/v)) a 4 °C. Las membranas se incubaron con anticuerpos primarios anti S61: 1000, anti S6 Phospho Serin (240/244) 1:1000, anti S6 Phospho Serin (235/236) 1:2000 (NEB) y anti-Actina 1:100 (Sigma-Aldrich) durante 1 h en leche al 2 % en PBST a temperatura ambiente (TA) y se lavó tres veces durante 10 min en PBS-T. Se incubaron anticuerpos secundarios anti-HRP de conejo 1:1000 (Dako, Hamburgo, Alemania) durante 1 h en leche al 2 % en PBST a TA y se lavaron tres veces durante 10 min en PBST. Las proteínas se detectaron mediante quimioluminiscencia mejorada con el uso del sustrato quimioluminiscente SuperSignal West Femto (Thermo Scientific) y el sistema ChemiDoc (Bio-Rad, Munich, Alemania) con el software QuantityOne (Bio-Rad) de acuerdo con el protocolo del fabricante. Las expresiones de proteínas relativas se cuantificaron densitométricamente con el software QuantityOne (Bio-Rad) y se calcularon por normalización a las señales de referencia de actina con el software GraphPad Prism (GraphPad, San Diego, CA, EE. UU.).
Los ratones inducidos por epilepsia mostraron niveles significativamente elevados de proteína S6 total, así como de P-S6rP (Ser 240/244) (Figura 3) en muestras de cerebro. Como la fosforilación de S6rP es un evento posterior a la activación de mTOR, la señalización de mTOR se hiperactivó en ratones que se trataron previamente con pilocarpina para inducir ataques epilépticos. En conclusión, los datos indican que la sobreactivación de mTOR está involucrada en la epileptogénesis del modelo de pilocarpina.
B. Señalización de mTOR en muestras de cerebro después de la administración de Cpd. 3, Cpd. 8 y everolimus
Se trataron ratones vírgenes y con tratamiento previo con pilocarpina con una única dosis oral de Cpd. 3 (40 mg/kg), Cpd. 8 (25 mg/kg), everolimus (5 mg/kg) o vehículo. Se utilizaron 5 ratones por grupo y se sacrificaron después de 3 horas. Los lisados de cerebro se generaron y analizaron mediante transferencia de membranas por Western como se describe en el EJEMPLO 6 A. Se cuantificó la fosforilación de S6 (S235/236) con el software QuantityOne (Bio-Rad) de acuerdo con el protocolo del fabricante.
Tanto en ratones vírgenes como en ratones epilépticos, la fosforilación de S6 (S235/236) disminuyó significativamente frente al control por Cpd. 3 (4,6 veces; 4,3 veces, respectivamente) Cpd. 8 (10,9 veces; 2,8 veces, respectivamente) (Figura 3B). No se observaron cambios significativos en la señalización de mTOR en ratones tratados con everolimus, lo que indica que tanto Cpd. 3 y Cpd. 8 penetran en el cerebro en dosis efectivas e inhiben la señalización de mTOR en el tejido cerebral en ratones vírgenes así como en epilépticos. Everolimus no parece alcanzar concentraciones eficaces en el cerebro en las condiciones utilizadas, ya que el compuesto no inhibe la señalización de mTOR.
Ejemplo 7
Cpd. 3 y Cpd. 8 inhiben las convulsiones en la prueba de umbral de convulsiones por electrochoque máximo (MEST) El efecto antiepiléptico de Cpd. 3 y Cpd. 8 se probó con el uso de la prueba de umbral de convulsión por electrochoque máximo (MEST), un modelo de epilepsia en ratón. Se ha demostrado anteriormente que la rapamicina aumenta el umbral de convulsiones en este modelo (Macias, M., y otros, PLoS One, 2013. 8(5): pág. e64455.).
Se usaron un total de 166 ratones NMRI hembras adultas obtenidas de Charles River (Sulzfeld, Alemania) en un intervalo de peso de 21-25 g (ratones). Los animales se mantuvieron en las siguientes condiciones: Alojamiento: Los animales se alojaron en grupos de 8 ratones máximo en condiciones controladas (temperatura: 22 ±1 °C; Humedad: 50 % 60 %), en un ciclo de luz-oscuridad de 12 horas (encendido a las 6:00 am). Alimentación: Se proporcionó comida de laboratorio estándar (dieta estándar Altromin 1324, Altromin Spezialfutter GmbH, Lage, Alemania) libremente. Agua potable: Se proporcionó agua del grifo libremente.
Se indujo epilepsia en la mitad de los animales mediante la administración de pilocarpina (ver EJEMPLO 4). El MEST determina un umbral de convulsión poblacional en grupos de ~20 animales y no el umbral para un animal individual. En el presente estudio, el MEST se determinó mediante un procedimiento de escalera como se describió anteriormente. Se usó un estimulador (BMT Medizintechnik, Berlín, Alemania) que entregó una corriente constante (ajustable de 1 a 200 mA independientemente de la impedancia del animal) con pulsos sinusoidales (50/s) durante 0,2 s.
La administración actual se realizó mediante estimulación transcorneal bilateral (con el uso de electrodos de cobre). Antes de la estimulación transcorneal, se administró una gota de solución de tetracaína (2 %) a los ojos del ratón para la anestesia local. Dos minutos más tarde, el ratón se inmovilizó con la mano para presionar los electrodos de cobre en ambas córneas mientras se aplicaba el estímulo al pisar un interruptor de pedal conectado con el estimulador. Los electrodos se cubrieron con cuero suave y se empaparon con solución salina antes de cada aplicación actual. Inmediatamente después de la estimulación, se liberó al ratón de la sujeción para permitir la observación de las convulsiones mostradas. La intensidad del estímulo se varió mediante un método ascendente y descendente en el que la corriente se redujo o aumentó en intervalos logarítmicos de 0,06 mA de acuerdo si el ratón anterior ejercía o no una extensión tónica de las patas traseras. La primera estimulación se inició con una corriente cercana al umbral de control.
Las soluciones de fármacos se prepararon recién antes de cada experimento:
Fenobarbital (sal de sodio): 15 mg en 10 ml de agua destilada
Levetiracetam: 50 mg en 10 ml de agua destilada
Rapamicina: 5 mg en 10 ml de vehículo (etanol al 4 % (100 %), luego PEG 400 al 5 % y Tween 80 al 5 %) Everolimus: 5/10 mg en 10 ml de vehículo (etanol al 8 %, PEG400 al 10 % y Tween 80 al 10 %) Cpd. 3 (HCl): 40/100 mg en 10 ml (suspensión; PEG 400 al 5 % y Tween 80 al 2 %, HPBCD (10 %)) Cpd. 8 (HCl): 12,5/25 mg en 10 ml (PEG 400 al 5 % y Tween 80 al 2 %, HPBCD (10 %))
Los datos generados a partir de grupos de 20-22 controles no epilépticos (simulado-SE) y 20-25 ratones epilépticos (pilo-SE) se usaron para calcular la CC50 (corriente convulsiva que induce una convulsión tónica de las patas traseras en el 50 % de los ratones por grupo con límites de confianza para una probabilidad del 95 %). El análisis estadístico se calculó con el uso de la prueba t de Student. Todas las pruebas se usaron de dos caras; se consideró significativo un P<0,05.
Los experimentos se realizaron en grupos de 20-25 ratones. Los valores de control de CC50 promedio (sin inyección de vehículo) fueron 15,8 ±0,36 mA en ratones no epilépticos (media ±SEM de 5 determinaciones de umbral en 3 grupos diferentes de ratones) y 15,6 ±0,45 mA en ratones epilépticos (media ±SEM de 5 determinaciones de umbral en 3 grupos diferentes de ratones). El fenobarbital produjo el efecto anticonvulsivo más pronunciado de los compuestos probados en este estudio. La CC50 fue de 25,7 mA en ratones no epilépticos y 26,56 mA en ratones epilépticos, lo que representa un aumento de umbral del 69 % y 66 %, respectivamente. No hubo diferencia significativa entre ratones epilépticos y no epilépticos (Figura 4). Levetiracetam (50 mg/kg) aumentó significativamente la CC50 en ratones no epilépticos en un 21 % mientras que no hubo efecto en ratones epilépticos (Tabla 2, Figura 4).
5 mg/kg de rapamicina aumentaron significativamente el umbral de convulsiones en MEST en un 13 % en ratones no epilépticos y solo en un 5 % en ratones epilépticos (Figura 4) como se mostró anteriormente por Hartman y otros, [25]. Después de las inyecciones intraperitoneales, la rapamicina aumentó el umbral solo en ratones no epilépticos en un 20 %, mientras que no hubo efecto en ratones epilépticos (Figura 4). 10 mg/kg y 5 mg/kg de everolimus aumentaron significativamente la CC50 en un 10 % y un 13 % en ratones no epilépticos, respectivamente. En ratones epilépticos, solo la dosis más baja aumentó la CC50 en un 16 %, mientras que 10 mg/kg no fue eficaz (Tabla 3 y Figura 4). Cuando 40 mg/kg Cpd. 3 se aplicó solo 1 hora antes de la determinación del umbral, CC50 disminuyó significativamente tanto en ratones epilépticos como no epilépticos. Cuando el tiempo de pretratamiento se prolongó a 3 horas, CC50 aumentó significativamente en un 6 % solo en ratones no epilépticos, mientras que CC50 en ratones epilépticos ya no disminuyó sino que permaneció en el nivel de control. La aplicación de una dosis más alta (100 mg/kg) condujo a un aumento significativo del CC50 en un 9 % en ratones epilépticos pero no en ratones no epilépticos (Tabla 2 y Figura 4).
En general, Cpd. 3 exhibió un efecto anticonvulsivo leve pero inconsistente con los parámetros probados en este estudio. Parece que la prolongación del tiempo de pretratamiento tiene un efecto favorable. El uso de una suspensión podría explicar el efecto marginal y la aparente inconsistencia de los datos.
Cpd. 8 exhibió en ratones no epilépticos un pronunciado efecto anticonvulsivo dependiente de la dosis. La CC50 se incrementó en un 30 % (25 mg/kg) y un 8 % (12,5 mg/kg). Esto es comparable al efecto anticonvulsivo del levetiracetam. La reducción del tiempo de pretratamiento a 1 hora redujo el efecto anticonvulsivo. Cuando se aumentó el tiempo de pretratamiento a 24 horas, el efecto anticonvulsivo desapareció (Tabla 3 y Figura 4). En ratones epilépticos el Cpd. 8 no ejerció un efecto anticonvulsivo con ninguna dosis o tiempo de pretratamiento probado. Cuando el tiempo de pretratamiento se redujo a 1 hora, el Cpd. 8 disminuyó el CC50 en un 9 % similar al Cpd. 3 (Tabla 3 y Figura 4 A-D).
No realizamos pruebas especiales para la determinación de efectos adversos. Se observó a los ratones aproximadamente 30 minutos después de la inyección en sus jaulas domésticas en busca de sedación obvia o reducción del bienestar. Cinco minutos antes de la estimulación eléctrica se observaron de nuevo ratones en sus jaulas domésticas y dos minutos antes de la estimulación durante el procedimiento de manipulación para el tratamiento con anestesia local. Se notaron todas las variaciones obvias del comportamiento normal. Solo el fenobarbital indujo una sedación notable que duró más de 60 min. Todos los demás fármacos de prueba (incluidas las soluciones de vehículo) se toleraron sin ningún efecto adverso obvio.
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Ejemplo 8
Viabilidad y síntesis de proteínas de las células STHdh tratadas con inhibidores de mTOR
Las células STHdh son células estriatales inmortalizadas derivadas de un modelo de ratón con activación de genes que expresa HTT de longitud completa con 111 repeticiones CAG (STHdhQ111/Q111). Las células control STHdhQ7/Q7[ se generaron a partir de embriones de ratón de tipo silvestre. Las células pueden diferenciarse en células neuronales con un cóctel que contiene dopamina.
A. Ensayo de LDH
La LDH es una enzima citoplasmática que se excreta tras daño a la membrana plasmática, por ejemplo, durante la apoptosis. La citotoxicidad de los compuestos de prueba se midió con el uso del ensayo de lactato deshidrogenasa (LDH) de Roche, Suiza, de acuerdo con las instrucciones del fabricante.
STHdhQ111/Q111 y STHdhQ7/Q7 (Coriell Institute for Medical Research, EE. UU.) se cultivaron en DMEM (Invitrogen, EE. UU.) suplementado con FBS (Invitrogen, EE. UU.) al 10 %, Geniticina (G418, Biochrom, Alemania)) al 1 % y antibiótico antimicótico (Invitrogen, EE. UU.) al 1 % en incubadora humidificada a 37 °C y CO2 al 5 %. Para todos los ejemplos descritos para esta invención, las células STHdh se diferenciaron en el momento de la adición del compuesto con el uso de una concentración final de forskolina 50 pM, IBMX 750 pM, TPA 200 nM, dopamina 10 pM, 10 pg/pl de a-FGF en medio de cultivo. 104 células de STHdhQ7/Q7 y STHdhQ111/Q111 por pocillo se sembraron en una placa de 96 pocillos se incubaron con Cpd. 3 (130 nM, 1230 nM), Cpd. 8 (400 nM y 1230 nM), INK128 (100 nM) y rapamicina (400 nM) y la LDH se midió después de 8 horas, 24 horas, 34 horas, 48 horas y 72 horas (Figura 5 A, B).
Ninguno de los compuestos ensayados indujo una mayor actividad de LDH en el medio, lo que indica que los inhibidores de mTOR no indujeron citotoxicidad. A concentraciones más altas de Cpd. 3 y Cpd. 8, la actividad de LDH disminuyó en comparación con el control. Los inhibidores de mTOR fueron bien tolerados por las células STHdh y el número de células apoptóticas no aumentó con el tratamiento celular de hasta 72 horas. En conclusión, los compuestos de esta invención son adecuados para la evaluación en estas líneas celulares y, además, los compuestos no parecen tener un efecto directo sobre la actividad metabólica general de las células neuronales en general.
B. Ensayo PrestoBlue
La viabilidad celular/actividad metabólica se detectó con el uso del reactivo de viabilidad PrestoBlue (Invitrogen, EE. UU.) de acuerdo con las instrucciones del fabricante. 104células de STHdhQ7/Q7 y STHdh Q111/Q111por pocillo se sembraron en una placa de 96 pocillos incubada con Cpd. 3 (130 nM, 1230 nM), Cpd. 8 (400 nM y 1230 nM), INK128 (100 nM) y rapamicina (400 nM) y PrestoBlue se midieron después de 8 horas, 24 horas, 34 horas, 48 horas y 72 horas. Las concentraciones no tóxicas determinadas se transfirieron a neuronas primarias usadas más adelante en este estudio. Las células no mostraron cambios en la actividad metabólica a las 8 horas, 24 horas, 34 horas y 48 horas para cada uno de los compuestos probados (Figura 5 C, D). A menor concentración de Cpd. 3 y Cpd. 8 incluso se pudo detectar un ligero aumento de la actividad mitocondrial. A las 72 horas se detectó una disminución de la actividad metabólica después del tratamiento con 1230 nM de Cpd. 3 y (no significativamente) también Cpd. 8 en STHdhQ111/Q111. Este efecto no se observó en las células STHdhQ7/Q7que indican 1. Las células de tipo silvestre son menos sensibles a la inhibición de mTOR y 2. Los compuestos se toleran bien y, por lo tanto, son adecuados para ensayar como inductores de la autofagia en estas líneas celulares.
Ejemplo 9
Cpd. 3 y Cpd. 8 inhiben la señalización de mTOR en las célulasSTHdhQ7/Q7 y STHdhQ111/Q111
Para probar si Cpd. 3 y Cpd. 8 inhiben la señalización de mTOR e inducen la autofagia en modelos de células neuronales de EH, se empleó el tratamiento de las células STHdhQ111/Q111 y STHdhQ7/Q7. Las células STHdhQ111/Q111 y STHdhQ7/Q7 se mantuvieron como se describe en el EJEMPLO 6. Las células se sembraron en placas de 10 cm. Cuando las células tenían aproximadamente un 80 % de confluencia, las células se diferenciaron y se trataron con los compuestos al mismo tiempo. Las células se trataron con Cpd. 3 (200 nM, 400 nM, 1230 nM), Cpd. 8 (130 nM, 1230 nM), INK128 (100 nM), rapamicina (400 nM) o control de DMSO durante 4 horas. Al final del tiempo de incubación, las células se lavaron con tampón PBS frío y se lisaron con 200 pl de tampón RIPA suplementado con inhibidor de proteasa completo al 4 % (Roche, Suiza) y PhosStop al 10 % (Roche, Suiza). Después de 30 min de incubación en hielo, los lisados se agitaron con vórtex, se centrifugaron (20 min, 4 °C, 16000 rpm) y se recogieron los sobrenadantes. La concentración de proteína se determinó como se describió anteriormente. Se analizaron 30 pg de proteína por muestra mediante transferencia Western como se describe anteriormente con el uso de los siguientes anticuerpos primarios:
4E-PB1 (1:1000), P-4E-BP1 (T37/46) (1:1000), mTOR (1:1000), P-mTOR Cell Signaling, Reino Unido (S2448) (1:1000), S6rP (1:1000) , P-S6rP (S235/236) (1:1000)
beta-actina (1:50000) Sigma-Aldrich, EE. UU.
LC3 (1:200) Nanotools, Alemania
Cpd. 3 inhibió la señalización de mTOR según lo indicado por la fosforilación reducida de S6rP y la fosforilación de 4E-BP en las células STHdhQ111/Q111 y STHdhQ7/Q7 de una manera dependiente de la concentración. Los compuestos de referencia/controles positivos INK128 y rapamicina mostraron un grado similar de inhibición de la ruta (Figura 6A). Cpd. 8 también inhibió la señalización de mTOR. Ya se pudo observar un efecto a una concentración baja de 130 nM en células STHdhQ7/Q7 (Figura 6B).
Para detectar los niveles de LC3-II, un marcador de autofagia en los autofagosomas, se realizó un tratamiento celular en presencia y ausencia de Bafilomicina A, un inhibidor de la degradación de los autofagosomas. Por tanto, los compuestos conducen a la acumulación de niveles de LC3-II cuando se induce la autofagia. Cpd. 3 (Figura 6C) y Cpd.
8 (Figura 6D) indujo autofagia en células estriatales. Para Cpd. 3 se observó un efecto más fuerte sobre la autofagia en las células STHdhQ111/Q111. La inducción de autofagia no fue significativa en la contraparte no-mutHTT, pero también se observaron signos de elevación de LC3II en estas células. Cpd. 8 también indujo autofagia en líneas de células estriatales en un nivel comparable a INK 128.
Los datos indican que Cpd. 3 y Cpd. 8 inhiben la señalización de mTOR en líneas de células estriatales que portan mutHTT o huntingtina extendida Q7 sin mutar. La inhibición de la vía mTOR conduce a la inducción de autofagia. El mecanismo básico para el aclaramiento del agregado de huntingtina a través de la macroautofagia se indujo por el inhibidor de mTOR o PI3K/mTOR de Cpd. 3 y Cpd. 8 en un entorno neuronal.
Ejemplo 10
Cpd. 3 y Cpd. 8 inhiben la formación de agregados en las células HEK que expresan Exón l de mutHTT
Las células HEK (DSMZ, Alemania) se mantuvieron en DMEM/Glutamax (Invitrogen, EE. UU.), Antibiótico/Antimicótico al 1 % (Invitrogen, EE. UU.), FBS al 10 % en una incubadora humidificada a 37 °C y CO2 al 5 %. Las células HEK se transfectaron transitoriamente con el vector pcDNA3.1/V5-His de Clontech (Mountain View, EE. UU.) que contiene la secuencia de expresión para Exon1 de HTT con una extensión 19Q (sin agregación) o 51Q y etiqueta de proteína de fluorescencia verde mejorada (eGFP) con el uso del Reactivo de transfección de Attractene (Qiagen, Países Bajos). Se sembraron 1x106 células en una placa de 6 pocillos. Al día siguiente, se mezclaron 2 |jg de ADN con 95,5 j l de medio de transfección y 4,5 j l de reactivo de transfección. Después de un tiempo de incubación de 15 min, se añadió la mezcla a las células. Después de 72 horas, las células se recolectaron o fijaron para su análisis.
A. Cpd. 3 y Cpd. 8 reducen la formación de agregados en las células HEK transfectadas que se muestran en un ensayo de trampa de filtro
Las células HEK transfectadas con 19Q- o 51Q-HTT-Exon1-eGFP se trataron con DMSO control. Las células HEK 51Q-HTT-Exon1-eGFP forman agregados. Estas células se trataron con Cpd. 3 (400, 1230 nM), Cpd. 8 (130, 1230 nM), INK128 (100 nM) o rapamicina (400 nM) durante 8 horas y después se lisó con tampón RIPA. Después de 30 min de incubación en hielo, las células se homogeneizaron (Dounce Homogeneizer, Thermo Fisher, EE. UU.). Se suplementaron 50 jg de solución de proteína en PBS con SDS al 2 % (Roth, Alemania). Las muestras se succionaron a través de una membrana de nitrocelulosa (0,45 jm ) y se lavaron dos veces con tampón PBS. Las proteínas agregadas no se disuelven en la solución de SDS y se unen a la membrana. mutHTT se detectó en la membrana con el uso de un anticuerpo ployQ (1C2, Millipore, Alemania) diluido 1:1000 en TBST suplementado con leche en polvo al 5 % y un anticuerpo anti-ratón secundario conjugado con HRP (Figura 7A, B) Las bandas se cuantificaron con el Sistema Odyssey Ll-CORE (Li-Core, EE. UU.) (Figura 7B).
Los datos demuestran que el tratamiento de células HEK 51Q-HTT-Exon1 con inhibidores de mTOR (Cpd. 3, Cpd.8, INK128 y rapamicina) conduce a una reducción significativa de los agregados citotóxicos de mutHTT en estas células.
130 nM de Cpd. 8 no fue suficiente para inducir una reducción agregada significativa. El aclaramiento agregado condujo a una reducción de los agregados que no alcanzaron el aclaramiento total (en comparación con 19Q-HTT). Como se ha demostrado antes la inducción de la autofagia, puede suponerse que el aclaramiento agregado se realiza mediante macroautofagia.
B. Cpd. 3 y Cpd. 8 reducen la formación de agregados en las células HEK transfectadas demostrado por citoquímica inmune
Las células HEK se sembraron en cubreobjetos recubiertos con poli-L-lisina (Sigma-Aldrich, EE.UU.) en placas de 24 pocillos a 104 células por pocillo y se transfectaron transitoriamente con 19Q- o 51Q-HTT-exón 1-eGFP. Las células se trataron con los compuestos descritos en A durante 8 o 24 horas. Esta incubación terminó 72 horas después de la transfección. Las células se fijaron con PFA (para-formaldehído) al 4 %. Los cubreobjetos eran portaobjetos de vidrio fijados con el uso de medios de montaje que contenían 4',6-diamidin-2-fenilindol (DAPI) (Figura 7C). Los núcleos y agregados que contienen HTT-Exon1-eGFP se contaron manualmente. Se contaron 10 000 células por muestra (Figura 7D).
Dado que la fluorescencia de HTT marcado con eGFP es muy brillante, las muestras tratadas con DMSO parecen más oscuras en general. El inhibidor de mTOR redujo el número de agregados de mutHTT en las células HEK mediante macroautofagia, lo que indica que este mecanismo también podría eliminar los agregados de huntingtina en las neuronas de los modelos animales o pacientes. El efecto fue más pronunciado después de 24 horas de tratamiento (reducción del 77 %, Cpd. 8, 130 nM; reducción del 73 %, Cpd. 3, 400 nM) en comparación con 8 horas (55 % de reducción de Cpd. 8, 130 nM; reducción del 66 % Cpd. 3, 400 nM). En términos de búsqueda de dosis, concentraciones más bajas de Cpd. 3 (400 nM) y Cpd. 8 (130 nM) parecen ser al menos tan eficaces como concentraciones elevadas. Por lo tanto, podría ser posible tratar a los pacientes con dosis más bajas y no tóxicas.
Ejemplo 11
Cpd. 3 y Cpd. 8 inducen autofagia en el cerebro de ratones de tipo silvestre
Para investigar si la inhibición de mTOR por Cpd. 3 y Cpd. 8 induce la autofagia, el mecanismo esencial para la eliminación del agregado de huntingtina en el cerebro, se trataron ratones desnudos BALB/c con Cpd. 3 y Cpd. 8 como se describe en la muestra 5. Los lisados cerebrales se analizaron por transferencia de membranas por Western como se describe en el ejemplo 5 con el uso de un anticuerpo LC3 (1:20, Nanotools, Alemania) y un anticuerpo p62 (SQTS1/p62 1: 1000, Cell Signalling, EE. UU.) y los correspondientes anticuerpos secundarios acoplados a HRP. (Figura 8 A, B).
La inducción de autofagia se demostró por el aumento dependiente del tiempo en el marcador autofágico LC3II (banda superior) y la disminución en el marcador autofágico p62 después de una única administración oral de ambos, Cpd. 3 y Cpd. 8 Los datos indican que la concentración de compuestos en el cerebro es suficiente para inducir la autofagia en las células neuronales. Como se ha demostrado que la inducción de autofagia conduce a la eliminación de agregados de huntingtina en modelos celulares, Cpd. 3 y Cpd. 3, así como otros inhibidores de mTOR, es probable que induzcan la reducción autofágica de los agregados de mutHTT en animales o seres humanos.
Ejemplo 12
Efecto del tratamiento crónico de Cpd. 3 y Cpd.8 sobre las convulsiones electrográficas en ratones inactivados para TSC1GFAP
Este estudio se realizó para probar el efecto de Cpd. 3, Cpd. 8 y un compuesto de referencia (Cpd. R, CAS-núm.
1225037-39-7) sobre convulsiones espontáneas y mortalidad en comparación con el tratamiento con vehículo en ratones con inactivación de genes TsclGFAP. Tsc1 (Tsc1flox/flox-GFAP-Cre (Tsc1GFAP inactivación de genes condicional) es un modelo de ratón de TSC con inactivación condicional del gen Tsc1 en células positivas para GFAP (ratones Tsc1GFAPCKO), que desarrollan epilepsia progresiva, encefalopatía y muerte prematura, así como anomalías cerebrales celulares y moleculares que probablemente contribuyan a la epileptogénesis.
A: animales y tratamiento
Los ratones Tsc1 pertenecientes a ambos sexos se aclimataron al medio ambiente, se examinaron, manipularon y pesaron antes del inicio del estudio para asegurar una salud e idoneidad adecuadas y minimizar el estrés no específico asociado con la manipulación humana. Durante el curso del estudio, se mantuvieron 12/12 ciclos de luz/oscuridad. La temperatura ambiente se mantuvo entre 20 y 23 °C con una humedad relativa mantenida alrededor del 50 %. Se proporcionaron alimentos y agua libremente para la duración del estudio. Cada ratón se asignó aleatoriamente a grupos de tratamiento designados. La dosificación se realizó durante la fase del ciclo de luz de los animales.
Se usó una técnica aséptica en todos los procedimientos quirúrgicos que se describen a continuación. Los ratones se anestesiaron con isoflurano (3 % para inducción y 1-2 % para mantenimiento con oxígeno como gas portador; flujo aproximado, 1 litro por minuto) y se colocaron sobre una almohadilla térmica homeostática para mantener la temperatura central a 37±1 °C. El plano adecuado de la anestesia se aseguró por la falta de una respuesta de retracción al pellizco del dedo del pie y un cambio visible en la frecuencia respiratoria. La cabeza del ratón se inmovilizó en un marco estereotáxico con una pieza nasal que suministró el anestésico de forma continua. Se aplicó un ungüento oftálmico en los ojos para evitar el secado de la córnea. Se identificó el área de la incisión quirúrgica y se lavó con clorhexidina seguido de un lavado con alcohol. Se hizo una incisión dorsal en la piel de la cabeza en dirección rostrocaudal y se reflejó la piel para revelar el cráneo. Los tejidos subcutáneos se separaron por disección roma con un aplicador con punta de algodón estéril y solución salina. Se limpió el cráneo para revelar la bregma. Con un taladro dental o una aguja de calibre 20-23, se hizo un pequeño orificio para permitir la implantación del alambre del electrodo permanente o los tornillos craneales. Se utilizó una montura de cabeza 8201-EEG (Pinnacle Technology, Inc., Lawrence, Kansas) con cables bihemisféricos en las cortezas frontal y parietal y un electrodo de potencial de campo local permanente dirigido a la región por encima del CA1. La fijación inicial de este soporte al cráneo se realizó mediante superpegamento. A continuación, se cementó el cabezal sobre el cráneo con acrílico dental. El cabezal y los tornillos se cubrieron con cemento dental. La aplicación del cemento dental también sirve para cerrar la herida. Típicamente, se tira de la piel alrededor del implante/cabezal y solo el caudal cutáneo para el implante permanece sin oposición. Una vez curado el acrílico dental, se apagó el isoflurano y se retiró al animal del aparato estereotáxico.
Después de la cirugía, el animal se colocó en una jaula de recuperación limpia colocada sobre una almohadilla térmica de circulación de agua caliente calentada debajo de la mitad de la jaula hasta que pudo caminar. Antes, durante y después de la cirugía, a los animales se les administraron líquidos, nutrición, antibióticos y analgésicos según lo requerido/recomendado por el equipo del Programa de Atención Veterinaria (PVC) y el IACUC, en conjunto con el veterinario a cargo y/o de acuerdo con las Directrices de IACUC. Los animales se controlaron diariamente por el personal de Cuidado Animal y durante el período postoperatorio de 7 días. En los experimentos solo se utilizaron animales que se recuperaron por completo de la cirugía (de aspecto saludable y comportamientos normales como comer, acicalarse, explorar y anidar). Después de la cirugía, los ratones se alojaron en un solo alojamiento. Los animales se alojaron individualmente para evitar que otros animales contaminen el lugar de la cirugía o dañen el implante. A los ratones se le implantaron electrodos a la edad de P22 a P27 y se les permitió recuperarse hasta las 4 semanas de edad (P35). Se implantaron un total de 56 ratones para producir cuatro grupos de ~10 ratones para el estudio.
El EEG se registró continuamente con el uso del sistema de adquisición y acondicionamiento de datos (DCAS) Pinnacle Technology 8206, que realiza una amplificación y un filtrado secundarios antes de enviar los datos al software Sirenia® Acquisition de Pinnacle para su recopilación a través de una conexión USB. El EEG se registró con el uso de preamplificadores de ganancia de 10x o 100x. Para la actividad convulsiva, que provoca grandes picos de amplitud, la ganancia de 10x es típicamente óptima. La correa preamplificada se conectó a un conmutador de bajo torque montado sobre la jaula y permite una libertad de movimiento sin obstáculos y artefactos de movimiento reducidos. Se observó la visualización en tiempo real de todos los canales de EEG de todos los ratones con el uso del software Sirenia o PAL-8400. Se recopilaron grabaciones de vídeo sincronizadas durante la duración de las grabaciones de EEG.
Los compuestos se disolvieron en un vehículo que consistía en Dexolve-7 al 20 % (Davos Pharma, Liberty, MO, EE.UU.) en agua, pH 3. Los ratones del estudio se asignaron aleatoriamente a uno de los siguientes grupos de tratamiento: vehículo 10 ml/kg (grupo D; día posnatal (DPN) 21-53; p.o.q.d.), Cpd. R 50 mg/kg (grupo C; PND21-53; p.o.q.d.), Cpd. 825 mg/kg (grupo A; PND21-53; p.o.q.d.), Cpd. 3100 mg/kg (grupo B; PND21-53; p.o.q.d.).
B: Registro y análisis electroencefalográfico.
Una vez completada la recuperación postoperatoria, los ratones se ataron al sistema de registro de pináculo individualmente en sus jaulas domésticas y se registró un EEG espontáneo durante las siguientes dos semanas (PND 35-48; semanas 6 y 7). Simultáneamente, se realizó una grabación videográfica durante este período para proporcionar un flujo de datos para la evaluación del comportamiento de los ratones según fuera necesario. Una vez que se completó el período de registro, se evaluaron las trazas de EEG individuales para determinar la actividad de EEG aberrante. Las convulsiones electrográficas se identificaron por su patrón característico de períodos discretos de descargas de picos rítmicos que evolucionaron en frecuencia y amplitud que duraron al menos 10 segundos, y que por lo general terminaron con descargas de ráfagas repetitivas y supresión de voltaje. Estos se definieron por tener un comienzo, un final y una evolución muy estereotipados en el medio, comenzando con una actividad rápida de baja amplitud y picos de alta frecuencia (tónicos), que gradualmente evolucionaron hacia una fase de explosión (clónica) más lenta seguida de una supresión de voltaje severa frecuentemente con el artefacto rítmico superpuesto, que representa respiraciones y se capta claramente porque el EEG en sí está suprimido. La mayoría de las convulsiones típicas en los ratones TS duran al menos entre 30 y 40 segundos. Tenga en cuenta que estos ratones tienen patrones de EEG anormales que a menudo presentan carreras frecuentes de picos interictales, que también se pueden llamar colas de picos, pero no se consideraron convulsiones basado en los criterios anteriores (generalmente no hay una evolución estereotipada). La incidencia de convulsiones se tabuló para cada ratón y se resumió para cada grupo de tratamiento para la semana 6 (PND36), semana 7 y semana 8 (PND55).
Los datos se analizaron mediante análisis de varianza (ANOVA). Si uno o más de estos factores eran significativos (P<0,05), se realizaron más pruebas posteriores (Dunnet o Wilcoxon) para identificar qué contrastes específicos (es decir, vehículo v. Cpd. R para la semana 6) fueron significativas. Los valores de p se ajustaron para comparaciones múltiples y una p <0,05 se consideró significativa. Los datos resumidos se informan como media del grupo ± error estándar de la media (SEM).
Peso corporal
El peso corporal de los sujetos individuales asignados a diferentes grupos de tratamiento antes de cualquier tratamiento se muestra en la Figura 9A. Un ANOVA de una vía no reveló diferencias estadísticas entre los grupos. El peso corporal de los animales tratados con Cpd. 3 y Cpd. 8 fue mayor hacia el final del estudio. En este momento, la esperanza de vida normal de los ratones TSC es cercana al final. Ellos perderán más peso y morirán. A medida que los animales tratados muestran un mayor peso, parecen tener un mejor estado de salud y, por lo tanto, pueden tener una vida útil más prolongada.
Convulsiones electrográficas y mortalidad
Mientras que los ratones de genotipo Tsc1 tratados diariamente con vehículo de PND21-55 sufrieron fuertes ataques electrográficos (n=150), los ratones tratados con 25 mg/kg de Cpd. 8 de PND21-53 mostraron un número significativamente menor de convulsiones (n=8) y ratones tratados con 100 mg/kg de Cpd. 3 de PND21-53 mostraron un número significativamente menor de convulsiones (n=2) durante el mismo período. Un grupo de referencia que recibió Cpd. R de PND21-55 mostró una reducción modesta en el número de convulsiones (n=76) que fue significativamente diferente del vehículo en todos los intervalos de tiempo. Se realizaron pruebas de Wilcoxon por pares para identificar qué contrastes específicos eran significativos (Figura 9B). La incidencia de convulsiones fue significativamente diferente entre el vehículo y el Cpd. 8/Cpd. 8 en la semana 6 (PND35-42; p=0,0009 y p=0, 0005 respetuosamente), en las semanas 7 (PND43-48; p=0,0427 y p=0,0023), y en las semanas 8 (PND49-55; p=0,0017 y p=0,0002) (Figura 9B).
El efecto protector de Cpd. 3 y Cpd. 8 contra las convulsiones en los ratones con inactivación de genes condicional Tsc1 GFAP podría mostrarse. Cpd. R tiene un efecto supresor de las convulsiones más débil que los nuevos compuestos probados. Probablemente, esto se puede explicar por la vida media más corta de Cpd. R (1 hora) en comparación con Cpd. 3 (5 horas) y Cpd. 8 (5 horas).
Ejemplo 13
Tratamiento de ratones R6/2 y ratones zQ175
Los ratones R6/2 son un modelo de ratón B6CBA-Tg (HDexon1)62Gbp/1J que expresa el exón 1 del gen de la huntingtina humana con una extensión de 160 ± 5 repeticiones de CAG. Los ratones tienen un fenotipo severo que se desarrolla entre las 4 y 12 semanas. Se está realizando un estudio PK/PD en ratones R6/2 para determinar una dosis que sea lo más baja posible y que aún involucre al objetivo en diferentes regiones del cerebro (cuerpo estriado, corteza, cerebelo). Los ratones R6/2 y sus contrapartes de tipo silvestre se tratan en los siguientes grupos de tratamiento que constan de 19 animales: 1. Silvestre, vehículo; 2. Vehículo R6/2; 3. R6/2 Cpd. 3; 4. R6/2 Cpd.8. La dosificación por vía oral se realiza durante 5 días con un período de descanso de 2 días durante un total de 8 semanas. Después de 4 y 8 semanas, los animales se prueban en dos pruebas fenotípicas: LabMaster y Rotarod. Consecutivamente, los ratones se sacrifican y los cerebros se analizan para la señalización de mTOR y la inducción de autofagia con el uso del análisis de transferencia de membranas Western, así como para los niveles de mHTT soluble y agregada con el uso de los ensayos TR-FRET.
Los ratones con activación de genes (KI) zQ175 exhiben fenotipos conductuales, histopatológicos y moleculares extensos que recuerdan a las enfermedades humanas. Estos ratones exhiben un aumento asociado con la edad en las inclusiones de mHTT desde los 2 a los 12 meses de edad en el cuerpo estriado y la corteza. Se tratarán 10 ratones por grupo con 1. Vehículo; 2. Cpd. 3; 3. Cpd. 8 de 3 meses a 5 meses de edad. A los ratones se les administrará una dosis oral de compuestos o vehículo durante 5 días consecutivos seguidos de 2 días de descanso del fármaco. Las lecturas clave son 1) Determinar la formación de agregados de mHTT en el homogeneizado del cuerpo estriado y del músculo cuádriceps con el uso de Singulex (efectos centrales versus periféricos).
Niveles de compuestos en plasma, cerebro y músculo cuádriceps en el último día de administración (2 horas después de la dosis) de los animales de experimentación. Los animales satélites se usarán el primer día del estudio para determinar los niveles de PK y HTT basal.
Ejemplo 14
Tratamiento de ratones R6/2 en un modelo in vivo de la enfermedad de Huntington
Se usó un modelo in vivo de la enfermedad de Huntington para evaluar la eficacia de Cpd. 3 y cpd. 8 para reducir la formación de agregados mutHTT en el cuerpo estriado. Los ratones R6/2 son un modelo de ratón con enfermedad de Huntington B6CBA-Tg(HDexon1)62Gbp/3J que expresa el exón 1 del gen de la huntingtina humana con una extensión de 160 ± 5 repeticiones de CAG. Los ratones tienen un fenotipo severo que se desarrolla entre las 4 y 12 semanas. Como los animales son extremadamente frágiles, las dosis tuvieron que reducirse al 65 % de las dosis usadas en modelos animales más robustos.
Se obtuvieron ratones B6CBA-Tg(HDexon1)62Gbp/3J (R6/2) de 40 parejas reproductoras de machos silvestres con hembras de trasplante de ovario adquiridas en Charles River (Charles River Laboratories, Sulzfeld, Alemania). Las crías eran transgénicas para el fragmento N-terminal humano del gen HTT. Para este estudio se usaron ratones machos que se mantuvieron en jaulas separadas para reducir el estrés de las peleas jerárquicas desde el destete. Se usaron jaulas estándar con un ciclo de luz/oscuridad de 12 horas. La comida estándar y el agua se suministraron libremente.
Farmacocinética de R6/2
Para probar la exposición de áreas del cerebro, los ratones R6/2 se trataron con una sola dosis oral de Cpd. 3 (75 mg/kg, 50 mg/kg, 25 mg/kg) o Cpd. 8 (25 mg/kg, 16 mg/kg, 8 mg/kg), 3 animales por grupo. Después de una hora, se recogió el plasma y se sacrificaron los animales. El cuerpo estriado, el cerebelo y la corteza se congelaron rápidamente por separado y se analizaron para determinar la concentración del compuesto con el uso de LC/MS/MS.
Las concentraciones tisulares alcanzadas estuvieron en el intervalo de eficacia para todas las concentraciones de Cpd. 3. Para Cpd. 8 se alcanzaron niveles suficientes en todas las concentraciones, aunque 8 mg/kg podría dar una cobertura objetivo ligeramente muy corta (Figura 10A).
Tratamiento compuesto a largo plazo de ratones R6/2
Los grupos de tratamiento se establecieron a partir del genotipo y la medición del peso, el rendimiento en el rotarod y la camada. Se distribuyeron equitativamente en los cuatro grupos, cada grupo contenía 12 animales. Se dosificaron ratones R6/2 y sus contrapartes silvestres en los siguientes grupos de tratamiento: 1. Silvestre, vehículo (SBECD al 20 % en agua, pH 3); 2. Vehículo R6/2 (SBECD al 20 % en agua, pH 3); 3. R6/2 Cpd. 3 (65 mg/kg); 4. R6/2 Cpd.8 (16,25 mg/kg). La dosificación por vía oral se realizó durante 6 días con un período de descanso de 1 día durante un total de 11,5 semanas.
Inmunohistoquímica
Para detectar agregados de mutHTT, se realizó inmunotinción de los estriados. Los cerebros se fijaron en paraformaldehído al 4 % (SAV LP GmbH, Flintsbach am Inn, Alemania). Antes de la inclusión en OCT (Sakura Finetek Germany GmbH, Staufen im Breisgau, Alemania)), se remojaron los cerebros enteros en una solución de sacarosa (30 % p/v) durante 3 días y se cortaron en serie en secciones coronales de 25 pm en un criostato (Leica CM-3050-S, Leica Biosystems Nussloch GmbH, Alemania). Las secciones se almacenaron en PBS, suplementado con acetato de sodio al 0,03 % a 4°C. Para la tinción de flotación libre, las secciones estriadas se colocaron en PBS preparado fresco. Todas las etapas se realizaron a temperatura ambiente. El bloqueo se realizó en borohidruro de sodio al 0,5 % en PBS durante 30 minutos y seguido del lavado. La incubación del anticuerpo primario con EM48 (MAB5374; Merck Chemicals GmbH, Darmstadt, Alemania) diluido 1:1000 se realizó durante la noche. Al día siguiente, las secciones se lavaron con TBST y se incubaron con IgG anti-ratón de cabra biotinilada (Vecta BA9200, Vector Laboratories, Burlingame, California) a una dilución de 1:1000 durante 2 horas. Se usó el complejo de avidina-biotina (Vectastain® Elite ABC Kit, Vector Laboratories, Burlingame, California) a una dilución de 1:400. El tiempo de incubación fue de 1 hora. Para mejorar aún más la señal, se repitió la incubación ABC después de administrar la tiramina biotinilada, suplementada con H2O2 al 0,001 % durante 8 minutos. Para el desarrollo del color, las secciones se incubaron durante 4 minutos en un tampón que contenía níquel-DAB-H202 (níquel al 0,6 %, DAB al 0,01 % y H2O2 al 0,001 % en Tris 0,05 M, imidazol 0,05 M). La reacción se detuvo colocando las secciones en tampón TI (Tris 0,05 M, imidazol 0,05 M) y se montaron en agua, flotando libremente. Las secciones se deshidrataron mediante en fila de dilución de etanol y xilol y se sellaron bajo cubreobjetos con medio de montaje (CV, Leica).
Las imágenes se adquirieron con el uso de un microscopio Zeiss Axioplan (Plan-NEOFLUAR objetivo x40/0,75, AxioCam MRc) y software Axiovision 4.8 (Carl Zeiss Microscopy GmbH, Jena, Alemania). Posteriormente, se analizaron tres secciones del cuerpo estriado por animal, se analizaron 4 animales Las estructuras positivas de EM48 se analizaron con el análisis de partículas integrado ImageJ, con un umbral fijo para todas las imágenes (ImageJ 1,47v; NIH, Bethesda, MD, EE. Uu .). El análisis estadístico se realizó con GraphPad Prism 6 (GraphPad Software Inc., La Jolla, CA, EE. UU.). Se realizó un ANOVA de una vía con múltiples comparaciones con el grupo de placebo y el método de corrección de Dunnet.
El análisis de imágenes de los estriados teñidos mostró especificidad de la tinción ya que no se detectaron agregados en los animales de tipo silvestre (Figura 10B). Además, el número de agregados contados no se modificó ratones R6/2 tratados en Cpd. 3 o Cpd. 8 frente a los controles con vehículo. Pero la convulsión de agregados mutHTT se redujo levemente (aunque no significativamente) en animales tratados con Cpd. 8 y disminuyó en un 40 % en animales tratados con Cpd. 3 (Figura 10B). Esta reducción de agregados podría influir en la progresión de la enfermedad en pacientes en HD.

Claims (1)

  1. REIVINDICACIONES
    Un compuesto de Fórmula (I),
    Figure imgf000111_0001
    en donde
    X1, X2 y X3 son independientemente entre sí, N o CH; con la condición de que al menos dos de X1, X2 y X3 sean N;
    Y es N o CH;
    R1 y R2 son independientemente entre sí
    (i) un morfolinilo de Fórmula (II)
    Figure imgf000111_0002
    en donde la flecha indica el enlace en la Fórmula (I); y
    en donde R3 y R4 son independientemente entre sí H, Ci-C3alquilo opcionalmente sustituido con uno o dos OH, Ci-C2fluoroalquilo, Ci-C2alcoxi, Ci-C2alcoxiCi-C3alquilo, Cn , o C(O)O-Ci-C2alquilo; o R3 y R4 forman juntos un residuo bivalente -R5R6- seleccionado de Ci-C3alquileno opcionalmente sustituido con 1 a 4 F, -CH2-O-CH2-, -CH2-NH-CH2- o cualquiera de las estructuras
    Figure imgf000111_0004
    Figure imgf000111_0003
    en donde las flechas indican los enlaces en la Fórmula (II); o
    (ii) un anillo heterocíclico saturado de 6 miembros Z seleccionado de tiomorfolinilo y piperazinilo, opcionalmente sustituido con 1 a 3 R7; en donde R7 es independientemente en cada aparición C1-C3alquilo opcionalmente sustituido con uno o dos OH, C1-C2fluoroalquilo, C1-C2alcoxiC1-C3alquilo, C3-Cacicloalquilo; o dos sustituyentes R7 forman juntos un residuo bivalente -R8R9-seleccionado de C1-C3alquileno opcionalmente sustituido con 1 a 4 F, -CH2-O-CH2- o -O-CH2CH2-O-;
    con la condición de que al menos uno de R1 y R2 sea un morfolinilo de Fórmula II;
    y tautómeros, solvatos y sus sales farmacéuticamente aceptables, para su uso en la prevención o tratamiento de un trastorno neurológico en un sujeto.
    El compuesto de Fórmula (I) para su uso de acuerdo con la reivindicación 1, en donde dicho R1 y dicho R2 se seleccionan independientemente entre sí de
    Figure imgf000112_0001
    Figure imgf000113_0001
    3. El compuesto de Fórmula (I) para su uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 2, en donde R1 y R2 se seleccionan independientemente entre sí de
    Figure imgf000113_0002
    4. El compuesto de Fórmula (I) para su uso de acuerdo con la reivindicación 1, en donde dicho compuesto se selecciona de
    4-(difluorometil)-5-(4,6-dimorfolino-1,3,5-triazin-2-il)piridin-2-amina;
    4- (difluorometil)-5-(4,6-dimorfolino-1,3,5-triazin-2-il)pirimidin-2-amina;
    5- (4-(3-oxa-8-azabiciclo[3.2.1]octan-8-il)-6-(3-oxa-8-azabiciclo[3.2.1]octan-8-il)-1,3,5-triazin-2-il)-4-(difluorometil)piridin-2-amina;
    5-(4-(3-oxa-8-azabiciclo[3.2.1]octan-8-il)-6-morfolino-1,3,5-triazin-2-il)-4-(difluorometil)piridin-2-amina; 5-(4-(3-oxa-8-azabiciclo[3.2.1]octan-8-il)-6-morfolino-1,3,5-triazin-2-il)-4-(difluorometil)pirimidin-2-amina; 5-(4,6-bis((S)-3-metilmorfolino)-1,3,5-triazin-2-il)-4-(difluorometil)piridin-2-amina;
    5-(4,6-bis((S)-3-metilmorfolino)-1,3,5-triazin-2-il)-4-(difluorometil)pirimidin-2-amina;
    (S)-4-(difluorometil)-5-(4-(3-metilmorfolino)-6-morfolino-1,3,5-triazin-2-il)piridin-2-amina;
    (S)-4-(difluorometil)-5-(4-(3-metilmorfolino)-6-morfolino-1,3,5-triazin-2-il)pirimidin-2-amina;
    5-(4-(3-oxa-8-azabiciclo[3.2.1]octan-8-il)-6-((S)-3-metilmorfolino)-1,3,5-triazin-2-il)-4-(difluorometil)piridin-2-amina;
    5-(4-(3-oxa-8-azabiciclo[3.2.1]octan-8-il)-6-((S)-3-metilmorfolino)-1,3,5-triazin-2-il)-4-(difluorometil)pirimidin-2-amina;
    4-(difluorometil)-5-(4-morfolino-6-(piperazin-1-il)-1,3,5-triazin-2-il)piridin-2-amina;
    4-(difluorometil)-5-(4-morfolino-6-(piperazin-1-il)-1,3,5-triazin-2-il)pirimidin-2-amina;
    (S)-4-(difluorometil)-5-(4-(3-metilmorfolino)-6-(piperazin-1-il)-1,3,5-triazin-2-il)piridin-2-amina;
    (S)-4-(difluorometil)-5-(4-(3-metilmorfolino)-6-(piperazin-1-il)-1,3,5-triazin-2-il)pirimidin-2-amina;
    4-(difluorometil)-5-(2,6-dimorfolinopirimidin-4-il)piridin-2-amina;
    4'-(difluorometil)-2,6-dimorfolino-[4,5'-bipirimidin]-2'-amina;
    4-(difluorometil)-5-(4,6-dimorfolinopirimidin-2-il)piridin-2-amina; 4'-(difluorometil)-4,6-dimorfolino-[2,5'-bipirimidin]-2'-amina;
    4-(difluorometil)-5-(4-morfolino-6-tiomorfolino-1,3,5-triazin-2-il)piridin-2-amina;
    4- (difluorometil)-5-(4-morfolino-6-tiomorfolino-1,3,5-triazin-2-il)pirimidin-2-amina;
    5- (6-(3-oxa-8-azabiciclo[3.2.1]octan-8-il)-2-(3-oxa-8-azabiciclo[3.2.1]octan-8-il)pirimidin-4-il)-4-(difluorometil)piridin-2-amina;
    5-(2-(3-oxa-8-azabiciclo[3.2.1]octan-8-il)-6-morfolinopirimidin-4-il)-4-(difluorometil)piridin-2-amina;
    2-(3-oxa-8-azabiciclo[3.2.1]octan-8-il)-4'-(difluorometil)-6-morfolino-[4,5'-bipirimidin]-2'-amina;
    5-(2,6-bis((S)-3-metilmorfolino)pirimidin-4-il)-4-(difluorometil)piridin-2-amina;
    4'-(difluorometil)-2,6-bis((S)-3-metilmorfolino)-[4,5'-bipirimidin]-2'-amina;
    (S)-4-(difluorometil)-5-(6-(3-metilmorfolino)-2-morfolinopirimidin-4-il)piridin-2-amina;
    (S)-4'-(difluorometil)-6-(3-metilmorfolino)-2-morfolino-[4,5'-bipirimidin]-2'-amina;
    5-(4-(8-oxa-3-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)-6-(8-oxa-3-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)-1,3,5-triazin-2-il)-4-(difluorometil)piridin-2-amina;
    5-[4,6-bis(2,2-dimetilmorfolin-4-il)-1,3,5-triazin-2-il]-4-(difluorometil)piridin-2-amina;
    (S)-4-(difluorometil)-5-(2-(3-metilmorfolino)-6-morfolinopirimidin-4-il)piridin-2-amina;
    (S)-4'-(difluorometil)-2-(3-metilmorfolino)-6-morfolino-[4,5'-bipirimidin]-2'-amina;
    4- (difluorometil)-5-[4-[(2s,6R)-2,6-dimetilmorfolin-4-il]-6-[(3R)-3-metilmorfolin-4-il]-1,3,5-triazin-2-il]piridin-2-amina;
    5- [4,6-bis[(2R,6S)-2,6-dimetilmorfolin-4-il]-1,3,5-triazin-2-il]-4-(difluorometil)piridin-2-amina;
    5-[4,6-bis(3,7-dioxa-9-azabicido[3.3.1]nonan-9-il)-1,3,5-triazin-2-il]-4-(difluorometil)piridin-2-amina;
    4- (difluorometil)-5-[4-(3,7-dioxa-9-azabicido[3.3.1]nonan-9-il)-6-(3-oxa-8-azabicido[3.2.1]octan-8-il)-1,3,5-triazin-2-il]piridin-2-amina;
    5- [4,6-bis(3,3-dimetilmorfolin-4-il)-1,3,5-triazin-2-il]-4-(difluorometil)piridin-2-amina;
    5-[4,6-bis[(3R,5S)-3,5-dimetilmorfolin-4-il]-1,3,5-triazin-2-il]-4-(difluorometil)piridin-2-amina;
    5-[4,6-bis[(3R)-3-metilmorfolin-4-il]-1,3,5-triazin-2-il]-4-(difluorometil)piridin-2-amina;
    4-(difluorometil)-5-[4-(3,3-dimetilmorfolin-4-il)-6-morfolino-1,3,5-triazin-2-il]piridin-2-amina;
    4-(difluorometil)-5-[4-[(3R,5S)-3,5-dimetilmorfolin-4-il]-6-[(3R)-3-metilmorfolin-4-il]-1,3,5-triazin-2-il]piridin-2-amina;
    4-(difluorometil)-5-[4-(3,3-dimetilmorfolin-4-il)-6-[(3R)-3-metilmorfolin-4-il]-1,3,5-triazin-2-il]piridin-2-amina; 4-(difluorometil)-5-[4-[(3R)-3-(metoximetil)morfolin-4-il]-6-[(3R)-3-metilmorfolin-4-il]-1,3,5-triazin-2-il]piridin-2-amina;
    4-(difluorometil)-5-[4-(3,7-dioxa-9-azabiciclo[3.3.1]nonan-9-il)-6-[(3R)-3-metilmorfolin-4-il]-1,3,5-triazin-2-il]piridin-2-amina;
    4-(difluorometil)-5-[4-[(3R)-3-metilmorfolin-4-il]-6-(3-oxa-6-azabiciclo[3.1.1]heptan-6-il)-1,3,5-triazin-2-il]piridin-2-amina;
    4-(difluorometil)-5-[4-[(3R)-3-metilmorfolin-4-il]-6-(6-oxa-3-azabiciclo[3.1.1]heptan-3-il)-1,3,5-triazin-2-il]piridin-2-amina;
    4-(difluorometil)-5-[4-[(3R)-3-metilmorfolin-4-il]-6-[(1R,4R)-2-oxa-5-azabiciclo[2.2.1]heptan-5-il]-1,3,5-triazin-2-il]piridin-2-amina;
    4- (difluorometil)-5-[4-[(3R)-3-metilmorfolin-4-il]-6-[(1S,4S)-2-oxa-5-azabiciclo[2.2.1]heptan-5-il]-1,3,5-triazin-2-il]piridin-2-amina;
    5- [4,6-bis[(3R)-3-etilmorfolin-4-il]-1,3,5-triazin-2-il]-4-(difluorometil)piridin-2-amina;
    5-[4,6-bis(8-oxa-5-azaspiro[3.5]nonan-5-il)-1,3,5-triazin-2-il]-4-(difluorometil)piridin-2-amina;
    5-[4,6-bis[(3R)-3-isopropilmorfolin-4-il]-1,3,5-triazin-2-il]-4-(difluorometil)piridin-2-amina
    4-(difluorometil)-5-[4-(3,3-dimetilmorfolin-4-il)-6-[(3R,5S)-3,5-dimetilmorfolin-4-il]-1,3,5-triazin-2-il]piridin-2-amina;
    4-(difluorometil)-5-[4-(3,3-dimetilmorfolin-4-il)-6-[(3R)-3-(metoximetil)morfolin-4-il]-1,3,5-triazin-2-il]piridin-2-amina;
    [(3R)-4-[4-[6-amino-4-(difluorometil)-3-piridil]-6-(3,3-dimetilmorfolin-4-il)-1,3,5-triazin-2-il]morfolin-3-il]metanol;
    4- (difluorometil)-5-[4-(3,3-dimetilmorfolin-4-il)-6-(3,7-dioxa-9-azabicido[3.3.1]nonan-9-il)-1,3,5-triazin-2-il]piridin-2-amina;
    5- [4-(4-cidopropilpiperazin-1-il)-6-(3,3-dimetilmorfolin-4-il)-1,3,5-triazin-2-il]-4-(difluorometil)piridin-2-amina; 4-(difluorometil)-5-[4-(3,3-dimetilmorfolin-4-il)-6-[4-(2-metoxietil)piperazin-1-il]-1,3,5-triazin-2-il]piridin-2-amina;
    [(3R)-4-[4-[6-amino-4-(difluorometil)-3-piridil]-6-[(3R)-3-metilmorfolin-4-il]-1,3,5-triazin-2-il]morfolin-3-il]metanol;
    4-(difluorometil)-5-[4-[(3R,5R)-3,5-dimetilmorfolin-4-il]-6-[(3R)-3-metilmorfolin-4-il]-1,3,5-triazin-2-il]piridin-2-amina;
    4-(difluorometil)-5-[4-[(3S,5S)-3,5-dimetilmorfolin-4-il]-6-[(3R)-3-metilmorfolin-4-il]-1,3,5-triazin-2-il]piridin-2-amina;
    4-(difluorometil)-5-[4-morfolino-6-(3-oxa-9-azabicido[3.3.1]nonan-9-il)-1,3,5-triazin-2-il]piridin-2-amina; 4-(difluorometil)-5-[4-(3,7-dioxa-9-azabicido[3.3.1]nonan-9-il)-6-(3-oxa-9-azabicido[3.3.1]nonan-9-il)-1,3,5-triazin-2-il]piridin-2-amina;
    5- [4,6-bis[(3S,5S)-3,5-dimetilmorfolin-4-il]-1,3,5-triazin-2-il]-4-(difluorometil)piridin-2-amina;
    4-(difluorometil)-5-[4-(3,7-dioxa-9-azabicido[3.3.1]nonan-9-il)-6-morfolino-1,3,5-triazin-2-il]piridin-2-amina; 4-(difluorometil)-5-[4-[(3S)-3-etilmorfolin-4-il]-6-[(3R)-3-metilmorfolin-4-il]-1,3,5-triazin-2-il]piridin-2-amina; 4-(difluorometil)-5-[4-[(3R)-3-etilmorfolin-4-il]-6-[(3R)-3-metilmorfolin-4-il]-1,3,5-triazin-2-il]piridin-2-amina; 4-(difluorometil)-5-[4-[(3R)-3-metilmorfolin-4-il]-6-(8-oxa-5-azaspiro[3.5]nonan-5-il)-1,3,5-triazin-2-il]piridin-2-amina;
    y tautómeros, solvatos y sus sales farmacéuticamente aceptables.
    El compuesto de Fórmula (I) para su uso de acuerdo con la reivindicación 1, en donde dicho compuesto se selecciona del grupo que consiste en
    4- (difluorometil)-5-(4,6-dimorfolino-1,3,5-triazin-2-il)pirimidin-2-amina;
    5- (4-(3-oxa-8-azabiciclo[3.2.1]octan-8-il)-6-(3-oxa-8-azabiciclo[3.2.1]octan-8-il)-1,3,5-triazin-2-il)-4-(difluorometil)piridin-2-amina;
    5-(4-(3-oxa-8-azabiciclo[3.2.1]octan-8-il)-6-morfolino-1,3,5-triazin-2-il)-4-(difluorometil)piridin-2-amina;
    5-(4,6-bis((S)-3-metilmorfolino)-1,3,5-triazin-2-il)-4-(difluorometil)pirimidin-2-amina;
    (S)-4-(difluorometil)-5-(4-(3-metilmorfolin)-6-morfolino-1,3,5-triazin-2-il)piridin-2-amina;
    4-(difluorometil)-5-(4-morfolino-6-(piperazin-1-il)-1,3,5-triazin-2-il)pirimidin-2-amina;
    4- (difluorometil)-5-(4,6-dimorfolino-1,3,5-triazin-2-il)piridin-2-amina; y
    (S)-4-(difluorometil)-5-(4-(3-metilmorfolino)-6-morfolin-1,3,5-triazin-2-il)pirimidin-2-amina;
    5- [4,6-bis(3,7-dioxa-9-azabicido[3.3.1]nonan-9-il)-1,3,5-triazin-2-il]-4-(difluorometil)piridin-2-amina;
    4- (difluorometil)-5-[4-(3,7-dioxa-9-azabicido[3.3.1]nonan-9-il)-6-(3-oxa-8-azabicido[3.2.1]octan-8-il)-1,3,5-triazin-2-il]piridin-2-amina;
    5- [4,6-bis(3,3-dimetilmorfolin-4-il)-1,3,5-triazin-2-il]-4-(difluorometil)piridin-2-amina;
    5-[4,6-b¡s[(3R,5S)-3,5-d¡met¡lmorfol¡n-4-¡l]-1,3,5-tr¡az¡n-2-¡l]-4-(d¡fluoromet¡l)p¡r¡d¡n-2-am¡na;
    5-[4,6-b¡s[(3R)-3-met¡lmorfol¡n-4-¡l]-1,3,5-tr¡az¡n-2-¡l]-4-(d¡fluoromet¡l)p¡r¡d¡n-2-am¡na;
    4-(difluorometil)-5-[4-(3,3-dimetilmorfolin-4-il)-6-morfolino-1,3,5-triazin-2-il]piridin-2-amina;
    4-(d¡fluoromet¡l)-5-[4-[(3R,5S)-3,5-d¡met¡lmorfol¡n-4-¡l]-6-[(3R)-3-met¡lmorfol¡n-4-¡l]-1,3,5-tr¡az¡n-2-¡l]p¡r¡d¡n-2-amina;
    4-(d¡fluoromet¡l)-5-[4-(3,3-d¡met¡lmorfol¡n-4-¡l)-6-[(3R)-3-met¡lmorfol¡n-4-¡l]-1,3,5-tr¡az¡n-2-¡l]p¡r¡d¡n-2-am¡na; 4-(d¡fluoromet¡l)-5-[4-[(3R)-3-(metox¡met¡l)morfol¡n-4-¡l]-6-[(3R)-3-met¡lmorfol¡n-4-¡l]-1,3,5-tr¡az¡n-2-¡l]p¡r¡d¡n-2-am¡na;
    4-(d¡fluoromet¡l)-5-[4-(3,7-d¡oxa-9-azab¡c¡clo[3.3.1]nonan-9-¡l)-6-[(3R)-3-met¡lmorfol¡n-4-¡l]-1,3,5-tr¡az¡n-2-¡l]p¡r¡d¡n-2-am¡na;
    4- (d¡fluoromet¡l)-5-[4-(3,7-d¡oxa-9-azab¡c¡clo[3.3.1]nonan-9-¡l)-6-(3-oxa-9-azab¡c¡do[3.3.1]nonan-9-¡l)-1,3,5-tr¡az¡n-2-¡l]p¡r¡d¡n-2-am¡na;
    5- [4,6-b¡s[(3S,5S)-3,5-d¡met¡lmorfol¡n-4-¡l]-1,3,5-tr¡az¡n-2-¡l]-4-(d¡fluoromet¡l)p¡r¡d¡n-2-am¡na;
    4-(d¡fluoromet¡l)-5-[4-(3,7-d¡oxa-9-azab¡c¡do[3.3.1]nonan-9-¡l)-6-morfol¡no-1,3,5-tr¡az¡n-2-¡l]p¡r¡d¡n-2-am¡na; 4-(d¡fluoromet¡l)-5-[4-[(3S)-3-et¡lmorfol¡n-4-¡l]-6-[(3R)-3-met¡lmorfol¡n-4-¡l]-1,3,5-tr¡az¡n-2-¡l]p¡r¡d¡n-2-am¡na; 4-(d¡fluoromet¡l)-5-[4-[(3R)-3-et¡lmorfol¡n-4-¡l]-6-[(3R)-3-met¡lmorfol¡n-4-¡l]-1,3,5-tr¡az¡n-2-¡l]p¡r¡d¡n-2-am¡na; 4- (d¡fluoromet¡l)-5-[4-[(3R)-3-met¡lmorfol¡n-4-¡l]-6-(8-oxa-5-azasp¡ro[3.5]nonan-5-¡l)-1,3,5-tr¡az¡n-2-¡l]p¡r¡d¡n-2-am¡na
    y tautómeros, solvatos y sus sales farmacéut¡camente aceptables.
    6. El compuesto de Fórmula (I) para su uso de acuerdo con la re¡v¡nd¡cac¡ón 1, en donde d¡cho compuesto se selecc¡ona de
    5- (4-(3-oxa-8-azab¡ddo[3.2.1]octan-8-¡l)-6-(3-oxa-8-azab¡ddo[3.2.1]octan-8-¡l)-1,3,5-tr¡az¡n-2-¡l)-4-(d¡fluoromet¡l)p¡r¡d¡n-2-am¡na; y
    (S)-4-(d¡fluoromet¡l)-5-(4-(3-met¡lmorfol¡no)-6-morfol¡no-1,3,5-tr¡az¡n-2-¡l)p¡r¡d¡n-2-am¡na;
    y tautómeros, solvatos y sus sales farmacéut¡camente aceptables.
    7. El compuesto de Fórmula (I) para su uso de acuerdo con cualqu¡era de las re¡v¡nd¡cac¡ones 1 a 6, en donde R1 y R2 son ¡ndepend¡entemente entre sí un morfol¡n¡lo de Fórmula (II).
    8. El compuesto de Fórmula (I) para su uso de acuerdo con la re¡v¡nd¡cac¡ón 7, en donde R1 es ¡gual a R2.
    9. El compuesto de Fórmula (I) para su uso de acuerdo con la re¡v¡nd¡cac¡ón 7, en donde R1 no es ¡gual a R2.
    10. Un compuesto para su uso de acuerdo con cualqu¡era de las re¡v¡nd¡cac¡ones 1 a 9, en donde el trastorno neurológ¡co es ep¡leps¡a o una enfermedad neurodegenerativa.
    11. Un compuesto para su uso de acuerdo con cualqu¡era de las re¡v¡nd¡cac¡ones 1 a 10, en donde el trastorno neurológ¡co es una enfermedad neurodegenerativa, y en donde la enfermedad neurodegenerativa se selecc¡ona del grupo que cons¡ste en enfermedad de Hunt¡ngton, atax¡as esp¡nocerebelosas, enfermedad de Park¡nson, enfermedad de Alzhe¡mer, escleros¡s lateral am¡otróf¡ca (ALS), f¡bros¡s quíst¡ca, pol¡neuropatía am¡lo¡dót¡ca fam¡l¡ar, encefalopatías espong¡formes, demenc¡a con cuerpos de Lewy, demenc¡a frontotemporal con park¡nson¡smo, atax¡as esp¡nocerebelosas, atrof¡a muscular esp¡nal y bulbar, atrof¡a dentato-rubro-pál¡dolu¡s¡ana hered¡tar¡a, demenc¡a fam¡l¡ar br¡tán¡ca, demenc¡a fam¡l¡ar danesa y enfermedad pr¡ón¡ca.
    12. Un compuesto para su uso de acuerdo con la re¡v¡nd¡cac¡ón 11, en donde la enfermedad neurodegenerativa es la enfermedad de Hunt¡ngton.
    13. Un compuesto para su uso de acuerdo con cualqu¡era de las re¡v¡nd¡cac¡ones 1 a 10, en donde el trastorno neurológ¡co es la ep¡leps¡a.
    14. Un compuesto para su uso de acuerdo con la re¡v¡nd¡cac¡ón 13, en donde la ep¡leps¡a es ep¡leps¡a s¡ntomát¡ca y en donde d¡cha ep¡leps¡a s¡ntomát¡ca está causada por les¡ón cerebral, tumor cerebral, ¡nfecc¡ón cerebral, adrenoleucod¡strof¡a, síndrome de Rasmussen, síndrome de Sturge-Weber, megalencefal¡a, pol¡h¡dramn¡os, complejo de escleros¡s tuberosa (TSC), síndrome de ep¡leps¡a s¡ntomát¡ca, PMSE, mutac¡ones de PTEN o d¡splas¡a cort¡cal focal (FCD).
    15. Un compuesto compuesto para su uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 13 a 14, en donde la epilepsia es epilepsia sintomática, en donde dicha epilepsia sintomática se debe a una enfermedad caracterizada por la regulación positiva de mTOR ("TORopatía").
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Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR102483630B1 (ko) 2016-05-18 2023-01-02 토르쿠르 아게 피부 병변의 치료
RU2020115351A (ru) * 2017-11-23 2021-12-23 Пикур Терапьютикс Аг Лечение кожных заболеваний
BR112023020804A2 (pt) * 2021-04-09 2023-12-19 Univ Basel Derivado de triazina como inibidores covalentes reversíveis e irreversíveis de pi3k

Family Cites Families (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JO2660B1 (en) * 2006-01-20 2012-06-17 نوفارتيس ايه جي Pi-3 inhibitors and methods of use
CA2838399C (en) * 2006-02-09 2017-03-07 Alba Therapeutics Corporation Formulations for a tight junction effector
JP5546240B2 (ja) * 2006-04-26 2014-07-09 ジェネンテック， インコーポレイテッド 医薬化合物
PL2050749T3 (pl) 2006-08-08 2018-03-30 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Pochodna pirymidyny jako inhibitor pi3k i jej zastosowanie
JP2010518107A (ja) * 2007-02-06 2010-05-27 ノバルティス アーゲー Ｐｉ３−キナーゼ阻害剤およびその使用方法
NZ588526A (en) 2008-05-23 2012-08-31 Wyeth Llc Triazine compounds as pi3 kinase and mtor inhibitors
GB2465405A (en) * 2008-11-10 2010-05-19 Univ Basel Triazine, pyrimidine and pyridine analogues and their use in therapy
SG11201602602RA (en) 2013-10-04 2016-04-28 Univ Basel Conformationally restricted pi3k and mtor inhibitors
MA40933A (fr) * 2014-11-11 2017-09-19 Piqur Therapeutics Ag Difluorométhyl-aminopyridines et difluorométhyl-aminopyrimidines
WO2017198347A1 (en) 2016-05-18 2017-11-23 Piqur Therapeutics Ag Treatment of skin lesions
KR102483630B1 (ko) * 2016-05-18 2023-01-02 토르쿠르 아게 피부 병변의 치료

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