CN109463761A - 一种含有唾液酸的pufa油悬液及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于食品添加剂及其制备方法领域,具体涉及一种含有唾液酸的PUFA油悬液及其制备方法。将唾液酸加入PUFA油中,经分散至均匀不分层,且所得油悬液中,各不同位置的唾液酸含量差值低于5%,即得。本发明所提出的制备方法,能够简单可行的制备得到油悬液,并且能够保证制得的产品质地稳定,不易分解。极大的填补了现今SA/PUFA领域的空白。所得产品有利于孕婴的营养补充物质,且制备简便、材料易得,成本适中,易于保存,适宜推广使用。
Description
技术领域
本发明涉及一种含有唾液酸的PUFA油悬液及其制备方法,属于食品添加剂及其制备方法领域。
背景技术
唾液酸又称神经氨酸,广泛存在于动物组织及微生物中,通常位于细胞膜最外层的糖类部分和分泌的糖复合物(糖脂、糖蛋白和脂多糖)的关键位置,是糖复合物结构和功能多样化的重要物质基础。唾液酸具有提高婴儿智力和记忆力、抗老年痴呆、抗识别、抗病毒和提高肠道对维生素及矿物质的吸收等生理作用。随着人们对唾液酸生物学活性和应用的进一步研究和了解,由唾液酸生产的产品应运而生,对唾液酸的需求也随之增加。唾液酸在自然界的分布非常广泛,从天然原料中提取为生产唾液酸的方法之一。
多不饱和脂肪酸(Polyunsaturated fatty acids,PUFA)是指含有两个或两个以上双键且碳链长为18~22个碳原子的直链脂肪酸,是研究和开发功能性脂肪酸的主体和核心,主要包括亚油酸(LA)、γ-亚麻酸(GLA)、花生四烯酸(AA)、二十碳五烯酸(EPA)、二十二碳六烯酸(DHA)等。多不饱和脂肪酸是所有细胞膜的重要成分,对机体的激素代谢和许多酶的活性起调控作用。
多不饱和脂肪酸中的重要成员DHA,对人体有多种特殊生理功能。DHA是人脑的重要组成部分,能够维持脑的功能、延缓脑的衰老。补充DHA在一定程度上可以起到预防、治疗老年性痴呆的目的。此外,DHA还具有降血脂、预防和治疗动脉硬化、抗癌、抗炎、保护视力等作用。人体中合成的DHA极其有限,必须通过食物摄取来提供。
多不饱和脂肪酸中的另一重要成员ARA,在幼儿时期ARA属于必需脂肪酸,但是在婴幼儿期,婴孩体内合成ARA的能力较低,因此对于正处于体格发育黄金期的婴孩来说,在食物中提供一定的ARA,会更有利于其体格的发育。ARA的缺乏对于人体组织器官的发育,尤其是大脑和神经系统发育可能产生严重不良影响。
在婴儿期唾液酸和DHA及ARA被认为是有利于大脑发育不可缺少的营养物,但婴儿自身合成的唾液酸和DHA并不足够,婴幼儿体内唾液酸和DHA含量状态依赖于外源食物中唾液酸和DHA的含量。因此孕妇应注意在孕期和妊娠期多摄入唾液酸和DHA,以促进胎儿大脑发育。
随着人们对唾液酸和各种PUFA生理学功能的了解和认识得越来越多,唾液酸和PUFA在食品和保健品上的应用有着更为广阔的发展前景。但由于PUFA含多个不饱和双键,极易被氧化,氧化后的PUFA不仅失去原有的生理功能,而且不宜于人体健康。
中国发明专利CN104041827披露的是一种含有唾液酸的DHA的微胶囊及其制备方法,唾液酸从燕窝中提取所得,唾液酸溶解于水相中,进而制备含唾液酸的DHA微胶囊。
市面上有ARA微胶囊粉、DHA微胶囊粉、DHA软胶囊和唾液酸粉,但未见含有唾液酸的ARA或DHA油悬液。由于唾液酸油溶性极低,配比或工艺不恰当的时候,油中容易分层导致不均匀,或者唾液酸和PUFA形成膏状物质,严重影响油悬液的质量及后续应用。
发明内容
唾液酸和PUFA都是有利于孕婴的营养补充物质,但由于唾液酸并不是油溶性,在油中容易分层不均匀;PUFA中ARA为w-6脂肪酸,含有3个双键,DHA为w-3脂肪酸,含有6个双键,都极易氧化,通常工艺中都是加入抗氧化剂进行以提高稳定性,但婴配产品中不允许加入抗氧化剂,使得产品货架期变短。为了提升唾液酸在油剂中分散地均匀性及提升PUFA油的稳定性延长货架期,特此提出了此方案。本发明采用剪切以及高速研磨的方法将难溶于油的唾液酸均匀分散于PUFA油中,得到具备不分层且具有良好氧化稳定性以及感官良好的含有唾液酸的PUFA油悬液。
本发明提供一种含有唾液酸的PUFA油悬液的制备方法,将唾液酸加入PUFA油中,经分散达取油悬液不同部位测定唾液酸的含量,含量差值控制在5%以内即得。
所述分散方式采用先剪切、再研磨;
剪切时,条件为10000rpm-20000rpm的剪切速度下进行10-35min,优选地条件为15000rpm-18000rpm的剪切速度下进行10-20mins。
研磨时的条件为:研磨时的条件为在转数为1000r/min-4000r/min,0.2-0.9mm滤网下循环研磨10-50min;优选地,在转数为2000r/min-3000r/min,在0.4-0.6mm滤网下循环研磨20-30mins。
进一步优选地,剪切时,条件为17000rpm的剪切速度下进行20min;和/或,研磨时的条件为2000r/min,滤网为0.4mm,循环研磨30min。
本发明所述的制备方法中,所述唾液酸选用唾液酸含量为98%以上的唾液酸产品;所述唾液酸可以通过制备或市售得到,可来自于天然燕窝的水解产物、大肠杆菌的发酵产物、枯草芽孢杆菌的发酵产物。
在此提供一种以大肠杆菌作为发酵菌体以制备得到唾液酸的优选方法:
以大肠杆菌为发酵菌体,将种子液按1-2%的接种量,加入到含有灭菌发酵培养基的发酵罐中,所述发酵培养基的配方为:蛋白胨10-15g/L,酵母浸膏粉5-10g/L,氯化钠10-15g/L,pH7.0,在37℃的条件下发酵,通过流加补料的方式,以2.5-3g/(L*h)的速率进行补充葡萄糖,连续发酵70-75h后放罐,得到含有唾液酸的发酵液,发酵料液以膜过滤的方式分离出菌渣,过滤得到的液体再经过灭菌、脱色、过滤、浓缩、结晶、分离、喷雾干燥、过筛后得到唾液酸粉末;优选所述大肠杆菌为保藏编号CCTCC NO:M 201810的大肠杆菌。
本发明所述的PUFA油,可包含DHA、ARA、亚麻酸、亚油酸等本领域可以接受的活性成分的油脂;
进一步地,包括DHA油或ARA油中的至少一种所述的PUFA油。
其中,所述DHA油可以来自于藻类、真菌、酵母所产的产物或鱼油提炼产物等富含DHA的油脂,优选地,DHA油中DHA的含量≥35%;,进一步优选为藻油;所述DHA油可通过制备或市购获得,仅需满足上述DHA含量要求。本领域技术人员可以理解,所述DHA油中,除DHA成分外,仍存在部分本领域可接受的成分。
作为DHA油的优选制备方法:以裂殖壶藻为发酵菌体,将种子液加入到含有蒸汽灭菌后的发酵培养基的发酵罐中,其发酵基质包括葡萄糖、酵母浸膏、谷氨酸钠、镁离子和钙离子;发酵过程中控制所述种子液与发酵培养基的比例3-5%以及溶氧比例小于10%,25-28℃发酵100-120h后放罐,离心或过滤,收集菌体,再加入0.2%纤维素酶和0.2%复合蛋白酶进行细胞破壁、离心分离得到DHA毛油,再经过脱胶、碱炼、脱色、脱溶、脱臭等得到二十二碳六烯酸含量40%以上的DHA油。
优选地,以重量份计,所述发酵基质包括葡萄糖40-120g/L,酵母浸膏4-6g/L,谷氨酸钠20-40g/L,氯化钠1-5g/L,磷酸二氢钾1-5g/L,硫酸镁5-10g/L,氯化钙0.5-1g/L,碳酸氢钠0.5-1g/L,硫酸钠5-10g/L,硫酸铵5-20g/L,氯化钾0.5-1g/L,pH自然。选用上述特定DHA油,能够有效地与唾液酸配伍,达到协同的作用。
所述ARA油富含ARA(二十碳四烯酸),以来自于mortiella菌属所产的产物提供为宜,进一步优选地,所述ARA油中,ARA的含量≥40%;所述ARA油可通过制备或市购获得,仅需满足上述ARA含量要求。本领域技术人员可以理解,所述ARA油中,除ARA成分外,仍存在部分本领域可接受的成分。
更优选,所ARA油以如下方法制备得到:以高山被孢霉为发酵菌体(优选选用保藏号为CCTCC NO:M2013419的高山被孢霉),将种子液加入到含有蒸汽灭菌后的发酵培养基的发酵罐中,发酵基质包括葡萄糖、酵母浸膏、谷氨酸钠、镁离子和钙离子;发酵过程中控制种子液与发酵培养基的比例5%以及溶氧比例小于10%,28℃发酵100h后放罐,离心或过滤,收集菌体,再加入0.2%纤维素酶和0.2%复合蛋白酶进行细胞破壁、离心分离得到ARA毛油,再经过脱胶、碱炼、脱色、脱溶、脱臭等即得ARA油。
优选地,以重量份计,所述发酵基质包括葡萄糖40-120g/L,酵母浸膏4-6g/L,谷氨酸钠20-40g/L,氯化钠1-5g/L,磷酸二氢钾1-5g/L,硫酸镁5-10g/L,氯化钙0.5-1g/L,碳酸氢钠0.5-1g/L,硫酸钠5-10g/L,硫酸铵5-20g/L,氯化钾0.5-1g/L,pH自然。
优选地,将种子培养液接种到装有发酵培养基的发酵瓶中发酵培养后,还包括逐级扩大培养;
所述逐级扩大培养过程中用的种子培养基为:碳源20-50g/l;氮源10-20g/l;pH5.5-8.5,并在菌浓达到15-30%(体积浓度)时进行下一步扩大培养;每级培养时间为24-50h,培养温度为25-30℃,通气量为1-2vvm(L/L.min)即每升发酵液中每分钟所需要的空气通入量为1-2L,罐压0.05-0.15MPa,搅拌速度为150-300转/min;然后将上述获得的种子扩大培养液接种到最终发酵罐中进行发酵培养,接种量10-20%(体积比),发酵罐温度25-30℃,搅拌速度200-300转/分钟,通气量1-2vvm(L/L.min)即每升发酵液中每分钟所需要的空气通入量为1-2L,罐压0.05-0.15Mpa,培养150-180h,并在发酵过程中通过流加碳源来控制发酵液中碳源浓度在5-20g/L,所述发酵罐中的发酵培养基为:碳源30-50g/l;氮源10-20g/l;pH5.5-8.5。破壁后再脱胶、碱炼、脱色、脱溶、脱臭等得到二十碳四烯酸含量40%以上的ARA的油脂。
作为优选,所述PUFA油中,还可进一步包含含有亚麻酸、亚油酸等本领域可以接受的活性成分的油脂;其他PUFA油如亚麻酸、亚油酸可来自于亚麻籽油、葵花籽油等本领域可接受的其他PUFA油。
优选地,所述PUFA油中,DHA油和ARA油的含量比为(2-3):1,且DHA油和ARA油的总含量占所述PUFA油的至少80%。
本发明所述的制备方法中,优选地,剪切时,条件为17000rpm的剪切速度下进行20mins。
本发明所述的制备方法中,优选地,研磨时的条件为2000r/min,滤网为0.4mm,循环研磨30mins。
本发明所述的制备方法中,优选地,所述唾液酸和PUFA油的质量比为1:(1.5-20),优选1:(4-8)。
作为优选,优选地本发明所述的制备方法中,将唾液酸加入PUFA油分散时,还加入稳定剂。
优选地,所述稳定剂选自松香甘油酯、硬脂酸铝、中链脂肪酸甘油酯(MCT)、蜂蜡、大豆卵磷脂、司盘、吐温、单硬脂酸甘油酯、双硬脂酸甘油酯中一种或多种复配;
更优选地,中链脂肪酸甘油酯(MCT)、蜂蜡、司盘、大豆卵磷脂中的一种或两种复配;稳定剂的添加量为占所述油悬液总质量的0.1~1%。
作为优选,优选地本发明所述的制备方法中,将唾液酸和类胡萝卜素一并加入PUFA油中,再进行分散;
优选地,所述类胡萝卜素的添加量为不超过所述PUFA油重量份的20%。
进一步优选地,所述类胡萝卜素为β胡萝卜素。β胡萝卜素可以有效地提升抗氧化能力,并且其本身具有一定的油溶性可使得体系稳定性提升。
本发明所述的制备方法,得到的油悬液粒径为≤34μm,进一步优选地,油悬液的粒径为≤25.5μm。
本发明所提出的制备方法,能够简单可行地制备得到油悬液,并且能够保证制得的产品质地稳定,不易分解,PUFA油不易氧化败坏。极大的填补了现今SA/PUFA领域的空白。
本发明一并提供一种含有唾液酸的PUFA油悬液;所述含有唾液酸的PUFA油悬液的活性成分包括质量比为1:(1.5-20)的唾液酸和PUFA(所述质量比以1:(4-8)为更优);
所述活性成分还可进一步包括类胡萝卜素;所述类胡萝卜素的含量不超过所述PUFA油重量份的20%;更优选所述类胡萝卜素为β胡萝卜素。
所述油悬液中还可包括功能助剂,如稳定剂;所述稳定剂占所述油悬液总质量的0.1~1%;更优选所述稳定剂为中链脂肪酸甘油酯(MCT)、蜂蜡、司盘、大豆卵磷脂、硬脂酸铝中的一种或两种复配。
优选地,是采用上述任意一项制备方法所制备得到的含有唾液酸的PUFA油悬液。
所述含有唾液酸的PUFA油悬液有利于孕婴的营养补充物质,且制备简便、材料易得,成本适中,产品便携,易于保存,适宜推广使用。
本发明一并提供上述任意一项技术方案所制备得到的含有唾液酸的PUFA油悬液用于制备保健品、食品、药品中的应用。
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明,但不用来限制本发明的范围。
以下实施例中如不特殊说明,则试剂来源于市售购买。
实施例1
本实施例提供一种含有唾液酸的PUFA油悬液及其制备方法,所述PUFA油为DHA油;具体步骤如下:
1)取唾液酸粉末20g,与160g的DHA油混合,在17000rpm条件下进行剪切至充分分散;
2)取步骤1)分散后的唾液酸和DHA油混合物进行高速研磨,在充氮保护下,以2000r/min的速度,滤网为0.4mm,循环研磨30mins时间即得。
本实施例中所述唾液酸粉末、DHA油均来源于市售;所述唾液酸粉末中唾液酸含量>98%,所述DHA油中DHA的含量≥35%。
实施例2
本实施例提供一种含有唾液酸的PUFA油悬液及其制备方法,所述PUFA油为DHA油;与实施例1的区别仅在于:
本实施例中所采用的唾液酸粉末由如下方法制备得到:
以大肠杆菌为发酵菌体,保藏编号CCTCC NO:M 201810,将种子液按1%的接种量,加入到含有灭菌发酵培养基的发酵罐中,LB培养基含有:蛋白胨10g/L,酵母浸膏粉5g/L,氯化钠10g/L,pH7.0,在37℃的条件下发酵,通过流加补料的方式,以2.5g/(L*h)的速率进行补充葡萄糖,连续发酵75h后放罐,得到含有唾液酸的发酵液,发酵料液以膜过滤的方式分离出菌渣,过滤得到的液体再经过灭菌、脱色、过滤、浓缩、结晶、分离、喷雾干燥、过筛后得到唾液酸粉末。
以上步骤中的灭菌、脱色、过滤、浓缩、结晶、分离、喷雾干燥等步骤均按照本领域常规方式操作即可。
本实施例中所述DHA油来源于市售;所述DHA油中DHA的含量≥35%。
实施例3
本实施例提供一种含有唾液酸的PUFA油悬液及其制备方法,所述PUFA油为DHA油;与实施例2的区别仅在于:
本实施例中所采用的DHA油由如下方法制备得到:
以裂殖壶藻为发酵菌体,将种子液加入到含有蒸汽灭菌后的发酵培养基的发酵罐中,发酵培养基的配方如下:葡萄糖100g/L,酵母浸膏6g/L,谷氨酸钠20g/L,氯化钠3g/L,磷酸二氢钾2g/L,硫酸镁5g/L,氯化钙1g/L,碳酸氢钠0.5g/L,硫酸钠7g/L,硫酸铵8g/L,氯化钾0.6g/L,pH自然;发酵过程中控制种子液与发酵培养基的比例5%以及溶氧比例为8%,28℃发酵100h后放罐,离心或过滤,收集菌体,再加入0.1%纤维素酶和0.2%复合蛋白酶进行细胞破壁、离心分离得到DHA毛油,再经过脱胶、碱炼、脱色、脱溶、脱臭等得到二十二碳六烯酸含量40%以上的DHA的油脂。
以上步骤中所述的脱胶、碱炼、脱色、脱溶、脱臭等步骤均采用本领域常规的发酵、分离操作即可。
实施例4
本实施例提供一种含有唾液酸的PUFA油悬液及其制备方法,所述PUFA油为DHA油;具体步骤如下:
1)制备唾液酸
以大肠杆菌为发酵菌体,保藏编号CCTCC NO:M 201810,将种子液按1%的接种量,加入到含有灭菌发酵培养基的发酵罐中,LB培养基含有:蛋白胨10g/L,酵母浸膏粉5g/L,氯化钠10g/L,pH7.0,在37℃的条件下发酵,通过流加补料的方式,以2.5g/(L*h)的速率进行补充葡萄糖,连续发酵75h后放罐,得到含有唾液酸的发酵液,发酵料液以膜过滤的方式分离出菌渣,过滤得到的液体再经过灭菌、脱色、过滤、浓缩、结晶、分离、喷雾干燥、过筛后得到唾液酸粉末。
以上步骤中的灭菌、脱色、过滤、浓缩、结晶、分离、喷雾干燥等步骤均按照本领域常规方式操作即可。
2)制备DHA油
以裂殖壶藻为发酵菌体,将种子液加入到含有蒸汽灭菌后的发酵培养基的发酵罐中,发酵培养基的配方如下:葡萄糖100g/L,酵母浸膏6g/L,谷氨酸钠20g/L,氯化钠3g/L,磷酸二氢钾2g/L,硫酸镁5g/L,氯化钙1g/L,碳酸氢钠0.5g/L,硫酸钠7g/L,硫酸铵8g/L,氯化钾0.6g/L,pH自然;发酵过程中控制种子液与发酵培养基的比例5%以及溶氧比例为8%,28℃发酵100h后放罐,离心或过滤,收集菌体,再加入0.1%纤维素酶和0.2%复合蛋白酶进行细胞破壁、离心分离得到DHA毛油,再经过脱胶、碱炼、脱色、脱溶、脱臭等得到二十二碳六烯酸含量40%以上的DHA的油脂。
3)取步骤1)制备得到的唾液酸粉末20g,与步骤2)制备得到的100g的DHA油混合,在17000rpm条件下进行剪切至充分分散;
4)取步骤3)分散后的唾液酸和DHA油混合物进行高速研磨,在充氮保护下,以2000r/min的速度,滤网为0.4mm,循环研磨30mins时间即得。
以上步骤中所述的脱胶、碱炼、脱色、脱溶、脱臭等步骤均采用本领域常规的发酵、分离操作即可。
实施例5
本实施例提供一种含有唾液酸的PUFA油悬液及其制备方法,所述PUFA油为DHA油;具体步骤如下:
1)制备唾液酸
以大肠杆菌为发酵菌体,保藏编号CCTCC NO:M 201810,将种子液按1%的接种量,加入到含有灭菌发酵培养基的发酵罐中,LB培养基含有:蛋白胨10g/L,酵母浸膏粉5g/L,氯化钠10g/L,pH7.0,在37℃的条件下发酵,通过流加补料的方式,以2.5g/(L*h)的速率进行补充葡萄糖,连续发酵75h后放罐,得到含有唾液酸的发酵液,发酵料液以膜过滤的方式分离出菌渣,过滤得到的液体再经过灭菌、脱色、过滤、浓缩、结晶、分离、喷雾干燥、过筛后得到唾液酸粉末。
以上步骤中的灭菌、脱色、过滤、浓缩、结晶、分离、喷雾干燥等步骤均按照本领域常规方式操作即可。
2)制备DHA油
以裂殖壶藻为发酵菌体,将种子液加入到含有蒸汽灭菌后的发酵培养基的发酵罐中,葡萄糖100g/L,酵母浸膏6g/L,谷氨酸钠20g/L,氯化钠3g/L,磷酸二氢钾2g/L,硫酸镁5g/L,氯化钙1g/L,碳酸氢钠0.5g/L,硫酸钠7g/L,硫酸铵8g/L,氯化钾0.6g/L,pH自然;发酵过程中控制种子液与发酵培养基的比例5%以及溶氧比例为8%,28℃发酵100h后放罐,离心或过滤,收集菌体,再加入0.1%纤维素酶和0.2%复合蛋白酶进行细胞破壁、离心分离得到DHA毛油,再经过脱胶、碱炼、脱色、脱溶、脱臭等得到二十二碳六烯酸含量40%以上的DHA的油脂。
3)取步骤1)制备得到的唾液酸粉末40g,与步骤2)制备得到的120g的DHA油混合,在18000rpm条件下进行剪切至充分分散;
4)取步骤3)分散后的唾液酸和DHA油混合物进行高速研磨,在充氮保护下,以2500r/min的速度,滤网为0.35mm,循环研磨25mins时间即得。
以上步骤中所述的脱胶、碱炼、脱色、脱溶、脱臭等步骤均采用本领域常规的发酵、分离操作即可。
实施例6
本实施例提供一种含有唾液酸的PUFA油悬液及其制备方法,所述PUFA油为DHA油;具体步骤如下:
1)制备唾液酸
以大肠杆菌为发酵菌体,保藏编号CCTCC NO:M 201810,将种子液按1%的接种量,加入到含有灭菌发酵培养基的发酵罐中,LB培养基含有:蛋白胨10g/L,酵母浸膏粉5g/L,氯化钠10g/L,pH7.0,在37℃的条件下发酵,通过流加补料的方式,以2.5g/(L*h)的速率进行补充葡萄糖,连续发酵75h后放罐,得到含有唾液酸的发酵液,发酵料液以膜过滤的方式分离出菌渣,过滤得到的液体再经过灭菌、脱色、过滤、浓缩、结晶、分离、喷雾干燥、过筛后得到唾液酸粉末。
2)制备DHA油
以裂殖壶藻为发酵菌体,将种子液加入到含有蒸汽灭菌后的发酵培养基的发酵罐中,葡萄糖100g/L,酵母浸膏6g/L,谷氨酸钠20g/L,氯化钠3g/L,磷酸二氢钾2g/L,硫酸镁5g/L,氯化钙1g/L,碳酸氢钠0.5g/L,硫酸钠7g/L,硫酸铵8g/L,氯化钾0.6g/L,pH自然;发酵过程中控制种子液与发酵培养基的比例5%以及溶氧比例为8%,28℃发酵100h后放罐,离心或过滤,收集菌体,再加入0.1%纤维素酶和0.2%复合蛋白酶进行细胞破壁、离心分离得到DHA毛油,再经过脱胶、碱炼、脱色、脱溶、脱臭等得到二十二碳六烯酸含量40%以上的DHA的油脂。
3)取步骤1)制备得到的唾液酸粉末40g,与步骤2)制备得到的80g的DHA油混合,在18000rpm条件下进行剪切至充分分散;
4)取步骤3)分散后的唾液酸和DHA油混合物进行高速研磨,在充氮保护下,以2500r/min的速度,滤网为0.35mm,循环研磨30mins时间即得。
实施例7
本实施例提供一种含有唾液酸的PUFA油悬液及其制备方法,所述PUFA油为DHA油和ARA油的混合油;具体步骤如下:
1)制备唾液酸
以大肠杆菌为发酵菌体,保藏编号CCTCC NO:M 201810,将种子液按1%的接种量,加入到含有灭菌发酵培养基的发酵罐中,LB培养基含有:蛋白胨10g/L,酵母浸膏粉5g/L,氯化钠10g/L,pH7.0,在37℃的条件下发酵,通过流加补料的方式,以2.5g/(L*h)的速率进行补充葡萄糖,连续发酵75h后放罐,得到含有唾液酸的发酵液,发酵料液以膜过滤的方式分离出菌渣,过滤得到的液体再经过灭菌、脱色、过滤、浓缩、结晶、分离、喷雾干燥、过筛后得到唾液酸粉末。
2)制备DHA油
以裂殖壶藻为发酵菌体,将种子液加入到含有蒸汽灭菌后的发酵培养基的发酵罐中,所述发酵培养基的配方如下:葡萄糖100g/L,酵母浸膏6g/L,谷氨酸钠20g/L,氯化钠3g/L,磷酸二氢钾2g/L,硫酸镁5g/L,氯化钙1g/L,碳酸氢钠0.5g/L,硫酸钠7g/L,硫酸铵8g/L,氯化钾0.6g/L,pH自然;发酵过程中控制种子液与发酵培养基的比例5%以及溶氧比例为8%,28℃发酵100h后放罐,离心或过滤,收集菌体,调节pH值至11.5,加入0.1%g碱性蛋白酶,10%的磷脂,控温40℃,酶解5h,得到细胞裂解后的混合物、细胞裂解后的混合物加入膜过滤设备,循环过滤,分离出含有水分的乳化油脂;
向含有水分的乳化油脂中加入3.0%乳油重量的氯化钠,搅拌混匀后沉降取上清液得到二十二碳六烯酸含量40%以上的DHA的油脂。
3)制备ARA油
待50m3种子罐中的菌浓达到30%(体积比)后,通过移种管道接入到装有130m3发酵培养基的200m3发酵罐中进行培养,接种量20%(体积比),发酵罐控制温度30℃,搅拌速度300转/分钟,通气量1.5vvm(L/L.min),罐压0.15Mpa,培养180h。发酵过程中通过流加碳源来控制发酵液中碳源浓度在20g/L,所述发酵罐培养基为:碳源淀粉50g/l;氮源酵母浸膏20g/l;pH 8.5。发酵培养得到的发酵液分离,得到湿菌体,烘干得到干菌体50g。向干菌体中加入萃取剂正己烷进行萃取,萃取后分离得到的固相物转入萃取容器中进行重复萃取,如此,直至萃取液中无油时结束萃取过程,第一次萃取时加入200毫升正己烷,之后每次加入150毫升正己烷,将每次萃取充后过滤分离得到的混合油,脱溶,得到ARA油脂。
4)取步骤1)制备得到的唾液酸粉末30g,与步骤2)制备得到的160g的DHA油与步骤3)制得到的80gARA混合,在18000rpm条件下进行剪切至充分分散;
5)取步骤4)分散后的唾液酸和DHA/ARA油混合物进行高速研磨,在充氮保护下,以2500r/min的速度,滤网为0.35mm,循环研磨30mins时间即得。
实施例8
本实施例油悬液中唾液酸(SA)与DHA的来源及制备方法同实施例3,不同之处在于,将唾液酸和DHA油在分散时添加0.18g(相当于所述油悬液总原料的0.1wt%)的蜂蜡。
实施例9
本实施例油悬液中SA与DHA的来源及制备方法同实施例3,不同之处在于,将唾液酸和DHA油在分散时添加1.8g(相当于所述油悬液总原料的1wt%)的硬脂酸铝。
实施例10
本实施例油悬液中SA与DHA的来源同实施例3,不同之处在于,油悬液成分配比,将20gSA与80gDHA进行混合,并且在分散时添加1.8g中链脂肪酸甘油酯(MCT)。
实施例11
本实施例油悬液中SA与DHA的来源及制备方法同实施例3,不同之处在于,将唾液酸和DHA油和2.7g的β-胡萝卜素同时添加至DHA油中再进行分散。
实施例12
本实施例油悬液中SA、DHA油、ARA油的来源及制备方法同
实施例7,不同之处在于,将唾液酸和18g的β-胡萝卜素同时添加至PUFA油中,分散时再加入2.7g的司盘。
上述实施例1-12所制备而得的油悬液放置24h后,经测量各不同位置的唾液酸含量差值均低于5%。
对比例1
本对比例提供一种含有唾液酸的DHA油悬液及其制备方法,与实施例1相比较,区别仅在于,唾液酸粉末使用量为80g,DHA油使用量为40g。
对比例2
本对比例提供一种含有唾液酸的DHA油悬液及其制备方法,与实施例1相比较,区别仅在于,步骤2)替换为使用超声方式进行分散,超声条件为25kHz,进行20分钟。
对比例3
本对比例提供一种DHA油,采用实施例2中的DHA油制备方法。试验例1
本试验例提供实施例1-11所提供的油悬液的稳定性试验,包含高温试验、强光试验和长期试验。
1、高温试验
1.1将本发明实施例1-12、对比例1-2所提供的油悬液进行检测得到的油悬液中唾液酸的含量,并且将制备的油悬液分别在60℃与40℃温度下进行高温试验,分别于第5天和第10天取样检验,从样品的中间层取样,进行检测,分别考察其质量变化情况,含量与有关物质检测以甲醇∶水(3∶1)为流动相,检测波长为240nm,用高效色相色谱法进行检查。
1.2结果见表1、2。
表1油悬液中唾液酸的含量(常温保存)
表2高温60℃试验结果
上述结果表明,本发明实施例1-11制备的油悬液样品经60℃高温下放置10天,与0天相比,各项质量指标变化不大,药物安全稳定。
2、强光试验
2.1将本发明实施例1-12、对比例1-2制备的油悬液在4500±500Lux条件下,进行强光试验,分别于第5天和第10天取样检验,按重点质量指标进行检测,分别考察其质量变化情况。
2.2结果见表3。
表3强光(4500±500Lux)试验结果
上述结果表明,本发明实施例1-12制备的油悬液样品经强光(4500±500Lux)下放置10天,与0天相比,各项质量指标变化不大,药物相对稳定。
3、长期稳定性试验
3.1将本发明实施例1-12、对比例1-3所制备的油悬液在温度25℃±2℃,相对湿度60%±10%条件下长期放置,分别于第3、6周取样检验,按重点质量指标进行检测,分别考察其质量变化情况,
3.2结果见表4。
表4长期稳定性试验结果
表4结果显示,本发明实施例1-12制备的油悬液样品经温度25℃±2℃,相对湿度60%±10%条件下长期放置6周,与0天相比,各项质量指标变化不大,较为稳定。
虽然,上文中已经用一般性说明、具体实施方式及试验,对本发明作了详尽的描述,但在本发明基础上,可以对之作一些修改或改进,这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此,在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进,均属于本发明要求保护的范围。
Claims (10)
1.一种含有唾液酸的PUFA油悬液的制备方法,其特征在于,将唾液酸加入PUFA油中,经分散至均匀不分层,且所得油悬液中,各不同位置的唾液酸含量差值低于5%,即得。
2.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,所述分散方式采用先剪切、再研磨;剪切时,条件为10000rpm-20000rpm的剪切速度下进行10-35min;研磨时的条件为在转数为1000r/min-4000r/min,0.2-0.9mm滤网下循环研磨10-50min;
优选地,条件为15000rpm-18000rpm的剪切速度下进行10-20min;研磨时的条件为在转数为2000r/min-3000r/min,0.4-0.6mm滤网下循环研磨20-30min;
进一步优选地,剪切时,条件为17000rpm的剪切速度下进行20min;和/或,研磨时的条件为2000r/min,滤网为0.4mm,循环研磨30min。
3.根据权利要求1或2所述的制备方法,其特征在于,所述唾液酸和PUFA油的质量比为1:(1.5-20),优选1:(4-8)。
4.根据权利要求1-3任一项所述的制备方法,其特征在于,所述的PUFA油,包含DHA、ARA、亚麻酸、亚油酸;
优选地,包括DHA油或ARA油中的至少一种;
进一步优选地,所述PUFA油中,所述DHA油和ARA油的含量比为(2-3):1,且DHA油和ARA油的总含量占所述PUFA油的至少80%。
5.根据权利要求1-4任一项所述的制备方法,其特征在于,将所述唾液酸和类胡萝卜素一并加入所述PUFA油中,再进行分散;
优选地,所述类胡萝卜素的用量不超过所述PUFA油重量份的20%;
更优选地,所述类胡萝卜素为β胡萝卜素。
6.根据权利要求1-5任一项所述的制备方法,其特征在于,所述分散时,加入稳定剂;
优选地,所述稳定剂选自松香甘油酯、硬脂酸铝、中链脂肪酸甘油酯、蜂蜡、大豆卵磷脂、司盘、吐温、单硬脂酸甘油酯、双硬脂酸甘油酯中一种或多种复配;
更优选中链脂肪酸甘油酯、蜂蜡、司盘、大豆卵磷脂中的一种或两种复配;和/或,稳定剂的用量占所述油悬液总质量的0.1~1%。
7.根据权利要求4-6任一项所述的制备方法,其特征在于,所述DHA油中,DHA的含量≥35%;
和/或,所述ARA油中,ARA的含量≥40%。
8.一种含唾液酸的PUFA油悬液,其特征在于,活性成分包括质量比为1:(1.5-20)的唾液酸和PUFA油;所述PUFA油可包含DHA、ARA、亚麻酸、亚油酸等本领域可以接受的活性成分的油脂;
优选地包含DHA油或ARA油中的至少一种;
进一步优选地,所述活性成分包括类胡萝卜素;更优选所述类胡萝卜素的含量不超过所述PUFA油重量份的20%;
和/或,
优选地,所述油悬液中包括稳定剂;更优选所述稳定剂占所述油悬液总质量的0.1~1%,和/或,所述稳定剂选自中链脂肪酸甘油酯、蜂蜡、司盘、大豆卵磷脂、硬脂酸铝中的一种或两种复配。
9.根据权利要求8所述的PUFA油悬液,其特征在于,由权利要求1-7任一项所述的制备方法制备得到;
优选地,所述油悬液粒径≤34μm。
10.权利要求8或9所述的油悬液用于制备保健品、食品、药品中的应用。
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