CN109431849A - 一种具有皮肤活性的多肽冻干组合物及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开一种具有皮肤活性的多肽冻干组合物及其制备方法，属于美容多肽技术领域，该组合物包含具有皮肤活性的多肽、赋形剂、增溶剂、pH缓冲剂。本发明所述组合物制备方法包括：将上述各组分溶解、混合、过滤除菌、灌装，然后按冻干曲线的设置冷冻干燥，获得具有皮肤活性的多肽冻干组合物。该制备方法操作简单，工艺成熟可控，而且在18h之内完成冻干，在确保产品质量的同时，生产能耗下降，降低了生产成本。经上述方法制得的具有皮肤活性的多肽冻干组合物稳定性好、易储存、不用添加防腐剂。本发明所述的组合物主要用于祛皱抗衰、美白祛斑、舒缓抗敏、祛除眼袋、生发固发，从而改善多种皮肤问题。

Description

一种具有皮肤活性的多肽冻干组合物及其制备方法

技术领域

本发明属于美容多肽技术领域，提供了一种具有皮肤活性的多肽冻干组合物及其制备方法。

背景技术

多肽是由氨基酸通过肽键连接在一起形成的化合物，在体内多种生理活动中发挥着重要的调节作用。由于多肽与机体物质同源，对人体无毒无刺激，同时具有多种生物活性，容易透皮吸收，能显著改善各种皮肤问题而受到美容保健行业的广泛关注。

目前，美容化妆品市场上使用的多肽主要是液体的形式，然而多肽在溶液当中并不稳定，易水解、易氧化，因此液体形式的产品对多肽的使用是不利的。此外，在溶液环境下容易滋生微生物，微生物会降解多肽，而且微生物的存在会对产品使用者造成潜在危害。因此，为了防止微生物生长，在溶液当中一般会加入大量的防腐剂，如尼泊金酯类、苯氧基乙醇等，尼泊金酯类会造成肌肤过敏，苯氧基乙醇可能会抑制中枢神经系统。因此，为了得到稳定安全的多肽产品，最大程度保持多肽的活性，延长货架期，同时减少甚至不添加防腐剂，急需一种新的安全性更高的药妆应用形式，确切有效地解决人们皮肤所面临的问题。

冷冻干燥技术通过将含水物料冷冻至其共晶点以下，使液态水冻结成冰，产品冻实后在较高真空度条件下，加热经升华干燥将冰直接转变为水蒸气而除去，再经解析干燥除去结晶水，从而得到较低含水量的产品的干燥方法。由于冷冻干燥技术可以在低温条件下除去水分，干燥后的物料能够保持原来的理化性质及活性，特别适用于对热敏感、易氧化的物料的干燥处理，广泛应用于药品、食品行业。考虑到冷冻干燥技术的特点，对具有皮肤活性的多肽产品进行冻干处理，以冻干粉的形式存储备用，可解决上述多肽溶液遇到的问题。然而，在传统的化妆品行业，冷冻干燥技术的应用却相对较少，跟该行业的快速发展并不匹配，这与冷冻干燥工艺能耗大，生产成本高有很大关系。因此，加强冻干基础理论研究，优化冷冻干燥工艺，在确保产品质量符合质量标准要求的同时，缩短冻干时间，降低能耗，减少生产成本，是当前面临的最主要问题。

发明内容

针对现有技术的缺陷，本发明人通过优化冻干曲线，缩短冻干时间，把多肽复配技术和冷冻干燥技术相结合，提供了一种具有皮肤活性的多肽冻干组合物及其制备方法。通过冻干曲线的优化，降低了能耗，减少了生产成本，同时产品成型性好，复溶时间短，质量符合要求。通过多肽复配技术，在冻干组合物处方中，将不同作用机制的多肽进行组合，在不同作用靶点发挥功效，以达到更好的效果。通过利用冷冻干燥技术，将多肽组合物制备成冻干粉的形式可大大提高储存和使用期间的多肽的稳定性，在使用时仍保持高度的活性，发挥其最大的功效，并且在冻干之前通过无菌过滤，达到不用添加防腐剂也能防止产品滋生微生物的目的，保证产品的使用安全性。

为实现上述目的，根据冷冻干燥的基础理论，皮肤生理生化特性，针对各类皮肤问题，结合冷冻干燥技术的应用，本发明人提供了一种具有皮肤活性的多肽冻干组合物及其制备方法，包含具有皮肤活性的多肽、赋形剂、增溶剂、pH缓冲剂，其中具有皮肤活性的多肽的质量百分浓度为0.0001％-5％，赋形剂的质量百分浓度为1％-10％，增溶剂的质量百分浓度为0.001％-5％，pH缓冲剂的质量百分浓度为0.001％-1％。

本发明所述具有皮肤活性的多肽冻干组合物，其中，具有皮肤活性的多肽选自具有祛皱抗衰作用的多肽、具有美白祛斑作用的多肽、具有舒缓抗敏作用的多肽、具有祛除眼袋作用的多肽、具有生发固发作用的多肽，各多肽质量百分浓度为0.0001％-5％。

本发明所述具有皮肤活性的多肽冻干组合物，其中所述具有祛皱抗衰作用的多肽包括三肽-1、乙酰基六肽-8、乙酰基八肽-3、β-丙氨酰羟脯氨酰二氨基丁酰苄基酰胺、棕榈酰五肽-4、棕榈酰四肽-7、肌肽、三肽-1铜、棕榈酰三肽-1、棕榈酰三肽-5、棕榈酰寡肽、六肽-9、六肽-11、或其组合，各成分质量百分浓度为0.0001％-5％。

本发明所述具有皮肤活性的多肽冻干组合物，其中所述具有美白祛斑作用的多肽包括九肽-1、四肽-27、十肽-12、六肽-2、肌肽、或其组合，各成分质量百分浓度为0.0001％-5％。

本发明所述具有皮肤活性的多肽冻干组合物，，其中所述具有舒缓抗敏作用的多肽包括棕榈酰三肽-8、乙酰基四肽-15、乙酰基四肽-40、乙酰基二肽-1鲸蜡酯、乙酰基六肽-49、或其组合，各成分质量百分浓度为0.0001％-5％。

本发明所述具有皮肤活性的多肽冻干组合物，其中所述具有祛除眼袋作用的多肽包括乙酰基四肽-5、棕榈酰四肽-7、二肽-2、棕榈酰三肽-1、棕榈酰五肽-4、或其组合，各成分质量百分浓度为0.0001％-5％。

本发明所述具有皮肤活性的多肽冻干组合物，其中所述具有生发固发作用的多肽包括三肽-1铜、乙酰基四肽-3、生物素三肽-1、肉豆蔻酰五肽-17、肉豆蔻酰六肽-16、或其组合，各成分质量百分浓度为0.0001％-5％。

本发明所述赋形剂是甘露醇、海藻糖、乳糖、或其组合，各成分质量百分浓度范围为1％-10％。

本发明所述增溶剂选自吐温20、吐温40、吐温60、吐温80，各成分质量百分浓度范围为0.001％-5％。

本发明所述pH缓冲剂是磷酸氢二钠和磷酸二氢钠，质量百分浓度范围为0.001％-1％。

上述具有皮肤活性的多肽、赋形剂、增溶剂、pH缓冲剂经溶解混合以形成液体混合物，液体混合物经0.22μm过滤器除菌过滤，将滤过物灌装、冻干，得到具有皮肤活性的多肽冻干组合物。

本发明所述具有皮肤活性的多肽冻干组合物的制备方法，该方法包括：将具有皮肤活性的多肽、赋形剂、增溶剂、pH缓冲剂溶解混合以形成液体混合物，液体混合物经0.22μm过滤器除菌过滤，将滤过物灌装、按冻干曲线的设置冷冻干燥，获得具有皮肤活性的多肽冻干组合物。

本发明所述具有皮肤活性的多肽冻干组合物的制备方法，所述冻干曲线包括：

(1)预冻至-40℃，把产品放入干燥箱，维持3h；

(2)将温度由-40℃升高至-5℃，升温时长30min，在-5℃维持8h；

(3)将温度由-5℃升高至15℃，升温时长30min，在15℃维持1h；

(4)将温度由15℃升高至30℃，升温时长30min，在30℃维持2h；

(5)将温度由30℃升高至35℃，升温时长30min，在35℃维持2h出箱，全程18h。

本发明所述具有皮肤活性的多肽冻干组合物，其中具有祛皱抗衰作用的多肽包括三肽-1、乙酰基六肽-8、乙酰基八肽-3、β-丙氨酰羟脯氨酰二氨基丁酰苄基酰胺、棕榈酰五肽-4、棕榈酰四肽-7、肌肽、三肽-1铜、棕榈酰三肽-1、棕榈酰三肽-5、棕榈酰寡肽、六肽-9、六肽-11。通过上述多肽的复配，结合冷冻干燥技术，制备得到具有显著祛皱抗衰效果的多肽冻干组合物。为了更有利于理解本发明，上述具有祛皱抗衰作用的多肽的作用机制如下所述：

三肽-1(Tripeptide-1，CAS号：823202-99-9)，具有类肉毒作用，通过干扰乙酰胆碱的释放，阻断神经信号传导，使肌肉不能收缩而松弛，从而达到祛除皱纹的目的。

乙酰基六肽-8(Acetyl Hexapeptide-8，CAS号：616204-22-9)，是一种神经递质抑制类多肽，参与竞争突触相关蛋白25(SyNaptosomal Associated Protein 25，SNAP-25)在融泡复合体的位点，从而影响复合体的形成，使囊泡不能有效释放神经递质乙酰胆碱，从而使肌肉收缩减弱，防止皱纹的形成，可以显著祛除鱼尾纹、抬头纹、法令纹等动态纹路。

乙酰基八肽-3(Acetyl Octapeptide-3，CAS号：868844-74-0)，通过模拟SNAP-25的肽链N端末端序列而设计得到，是乙酰基六肽-8的延长类似物，通过与融泡复合体相关位点结合，从而阻止SNAP-25与位点的结合，进而影响复合体的形成，干扰乙酰胆碱的释放，阻断神经信号传导，使肌肉收缩减弱，从而发挥抗皱的作用。

β-丙氨酰羟脯氨酰二氨基丁酰苄基酰胺，发明人自主研发的新型多肽原料，类肉毒作用，是肌肉烟碱乙酰胆碱受体拮抗剂，通过与肌肉烟碱乙酰胆碱受体的牢固结合，从而阻断神经递质乙酰胆碱与受体结合，使兴奋传递减弱，肌肉松弛而具有显著的祛皱效果。

棕榈酰五肽-4(Palmitoyl Pentapeptide-4)，可以激发胶原蛋白、糖胺聚糖(GAGs)的合成，增加皮肤厚度，从而有效逆转衰老，减少皱纹。

棕榈酰四肽-7(Palmitoyl Tetrapeptide-7，CAS号：221227-05-0)，是免疫球蛋白IgG的片段，可以调控白细胞介素-6(IL-6)的分泌。IL-6参与皮肤慢性炎症反应，IL-6的增加会加速皮肤衰老，棕榈酰四肽-7可以降低皮肤老化过程中IL-6的水平，从而重新维持皮肤中细胞因子的平衡，显著消除皮肤炎症，减少糖基化损伤，以此达到延缓皮肤衰老，增加皮肤弹性及紧致度的目的。

肌肽(L-Carnosine，CAS号：305-84-0)是一种由β-丙氨酸和L-组氨酸两种氨基酸组成的二肽，对人体具有多种保健作用。肌肽具有强大的抗氧化能力，可以清除自由基，螯合金属，抗衰修复。

三肽-1铜(铜肽，Copper Peptide)，可以促进胶原蛋白、弹力蛋白、蛋白聚糖和糖胺聚糖(GAGs)大量生成，增加皮肤弹性，紧致皮肤，从而抚平皱纹；抗氧化，清除自由基，延缓皮肤老化；促进表皮细胞增生，修复皮肤屏障。

棕榈酰三肽-1(Palmitoyl Tripeptide-1，Pal-GHK，CAS号：147732-56-7)，在GHK的肽链N端经棕榈酸修饰而得，具有更好的透皮性能，可以促进皮肤大量合成胶原蛋白、多聚糖，能紧致皮肤，锁水保湿，淡化皱纹，深层修复肌肤。

棕榈酰三肽-5(Palmitoyl Tripeptide-5)，通过激活转化生长因子-β(TGF-β)，刺激成纤维细胞分裂增殖，强力促进胶原蛋白的生成，补充细胞外基质蛋白，强化结缔组织，还能抑制基质金属蛋白酶的活性，防止胶原蛋白分解，从而让皮肤富有弹性，有效祛除皱纹。

棕榈酰寡肽(Palmitoyl Oligopeptide)，可以促进皮肤弹性蛋白的合成，改善皮肤弹性，提升紧致度，增加皮肤柔软性。

六肽-9(Hexapeptide-9)，可以增加真皮层胶原蛋白的合成，增加层粘蛋白-V、整粘蛋白的数量，促进真皮表皮连接(DEJ)区结构组织的再生和加固，促进角质细胞分化，角蛋白合成，从而修复伤口，重组完整表皮层，促进皮肤再生，使皮肤更具有弹性，减少皱纹。

六肽-11(Hexapeptide-11)，促进皮肤细胞外基质的相关基因表达，促进成纤维细胞合成胶原蛋白、弹性蛋白，提高皮肤弹性与紧致度，改善静态皱纹，对抗衰老。

本发明所述具有皮肤活性的多肽冻干组合物，其中具有美白祛斑作用的多肽包括九肽-1、四肽-27、十肽-12、六肽-2、肌肽。通过上述多肽的复配，结合冷冻干燥技术，制备得到具有显著美白祛斑效果的多肽冻干组合物。为了更有利于理解本发明，上述具有美白祛斑作用的多肽的作用机制如下所述：

九肽-1(Nonapeptide-1，CAS号：158563-45-2)是一种仿生肽，通过竞争性地与黑素皮质激素受体-1(MC1R)结合，从而干扰α-黑素细胞刺激素(α-MSH)与MC1R结合，阻止酪氨酸酶进一步激活，以减少黑色素形成，达到美白祛斑的效果。

四肽-27(Tetrapeptide-27)，可以从源头抑制黑色素产生，用于美白、淡斑、提亮肤色及均匀度，另外还可预防激光术后返黑。

十肽-12(Decapeptide-12)，通过抑制酪氨酸酶的合成及其活性，从而减少黑色素的生成，减少色素沉积，淡化色斑，以此发挥美白祛斑的功效。

六肽-2(Hexapeptide-2)，通过抑制酪氨酸酶活性而减少黑色素生成，达到美白祛斑的效果。

肌肽(L-Carnosine，CAS号：305-84-0)是一种由β-丙氨酸和L-组氨酸两种氨基酸组成的二肽，对人体具有多种保健作用。除了上述抗衰修复作用之外，肌肽还能抑制蛋白质的糖基化，其结构与蛋白质糖基化位点类似，可以通过与糖基化位点结合而阻止蛋白质与糖类的糖基化反应，避免蛋白质交联变性、皮肤变黄。肌肽不仅能抑制蛋白质的糖基化，还能与糖基化蛋白质形成复合物，促进糖化暗黄蛋白的排出、降解，从而提亮肤色。

本发明所述具有皮肤活性的多肽冻干组合物，其中具有舒缓抗敏作用的多肽包括棕榈酰三肽-8、乙酰基四肽-15、乙酰基四肽-40、乙酰基二肽-1鲸蜡酯、乙酰基六肽-49。通过上述多肽的复配，结合冷冻干燥技术，制备得到具有显著舒缓抗敏效果的多肽冻干组合物。为了更有利于理解本发明，上述具有舒缓抗敏作用的多肽的作用机制如下所述：

棕榈酰三肽-8(Palmitoyl Tripeptide-8)，能有效抑制UVB诱导的促炎因子白细胞介素-8(IL-8)的释放，可以抑制炎症级联反应的前期步骤，有效地预防和减缓由化学刺激引发的炎症及症状，也可以干扰肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的生成，阻止水肿和红血丝等神经性皮炎症状，具有抗炎舒缓的作用。

乙酰基四肽-15(Acetyl Tetrapeptide-15)，能减少人体产生的促炎介质降钙素基因相关肽(CGPR)的数量，降低神经对外界刺激的过度敏感。

乙酰基四肽-40(Acetyl Tetrapeptide-40)，能够抑制由抗菌肽LL-37所引起的炎症反应，能减少白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-8(IL-8)释放，减少细胞损伤及皮肤炎症损伤，减少炎症引起的面部红肿和毛细血管扩张。

乙酰基二肽-1鲸蜡酯(Acetyl Dipeptide-1 Cetyl Ester，CAS号：196604-48-5)，可显著减少前列腺素E2(PGE2)的分泌和核转录因子kappaB(NF-κB)信号。PGE2能诱发炎症，促进局部血管扩张，引起红肿热痛等炎症症状；NF-κB是细胞中重要的转录调节因子，被活化后诱导多种基因的表达，产生多种细胞因子参与炎症反应。乙酰基二肽-1鲸蜡酯通过影响PGE2的分泌和NF-κB信号，从而具有抗炎抗敏的作用。

乙酰基六肽-49(Acetyl Hexapeptide-49)，可以抑制蛋白酶激活受体2(ProteaseActivated Receptor 2,PAR-2)的活性。PAR-2是肥大细胞参与皮肤炎症和超敏反应的重要分子，乙酰基六肽-49通过抑制PAR-2活性来减轻皮肤炎症和舒缓皮肤瘙痒。

本发明所述具有皮肤活性的多肽冻干组合物，其中具有祛除眼袋作用的多肽包括乙酰基四肽-5、棕榈酰四肽-7、二肽-2、棕榈酰三肽-1、棕榈酰五肽-4。通过上述多肽的复配，结合冷冻干燥技术，制备得到具有显著祛除眼袋效果的多肽冻干组合物。为了更有利于理解本发明，上述具有祛除眼袋作用的多肽的作用机制如下所述：

乙酰基四肽-5(Acetyl Tetrapeptide-5，CAS号：820959-17-9)，一种具有抗水肿功能并广泛用于祛除眼袋的强力活性肽，作用机制在于通过抑制血管紧张素Ⅰ转换酶，改善眼部肌肤的微循环，同时增加超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,SOD)的活性，抑制其糖基化，阻止蛋白交联，改善皮肤弹性，还可以降低血管通透性，减少水分渗出，对抗水肿，从而祛除眼袋及黑眼圈。

棕榈酰四肽-7(Palmitoyl Tetrapeptide-7，CAS号：221227-05-0)，通过调控白细胞介素-6(IL-6)的分泌，显著消除皮肤炎症，增加皮肤弹性、紧致度。此外，棕榈酰四肽-7还可以促进皮肤多余水分的排出，具有有很强的排水功效，可以用于消除水肿，收紧眼部肌肤，还能够活化眼部周围肌肤细胞，使眼周肌肤平滑紧致，更富弹性，从而祛除眼袋，淡化黑眼圈。

二肽-2(Dipeptide-2，CAS号：24587-37-9)，能够抑制血管紧张素转化酶(ACE)活性。ACE是一种外肽酶，能够催化血管紧张素I转化为血管紧张素II，也可使缓激肽失活，从而导致高血压。二肽-2通过抑制ACE的活性，抗高血压而改善血液循环，促进眼部细胞排水，消除眼部水肿，从而祛除眼袋。

棕榈酰三肽-1(Palmitoyl Tripeptide-1，Pal-GHK，CAS号：147732-56-7)，在GHK的肽链N端经棕榈酸修饰而得，具有更好的透皮性能，可以促进皮肤大量合成胶原蛋白、多聚糖，从而紧致皮肤，用于眼周肌肤可以达到祛除眼袋的作用。

棕榈酰五肽-4(Palmitoyl Pentapeptide-4)，可以激发胶原蛋白、糖胺聚糖(GAGs)的合成，增加皮肤厚度，从而有效逆转衰老，减少皱纹。用于眼周肌肤可以达到祛除眼袋的作用。

本发明所述具有皮肤活性的多肽冻干组合物，其中具有生发固发作用的多肽包括三肽-1铜、乙酰基四肽-3、生物素三肽-1、肉豆蔻酰五肽-17、肉豆蔻酰六肽-16。通过上述多肽的复配，结合冷冻干燥技术，制备得到具有显著生发固发效果的多肽冻干组合物。为了更有利于理解本发明，上述具有生发固发作用的多肽的作用机制如下所述：

三肽-1铜(铜肽，Copper Peptide)，除了上述抗皱抗衰的作用外，还可以扩大毛囊加速毛发生长，抑制落发，具有防脱发、促进毛发生长的作用。

乙酰基四肽-3(Acetyl Tetrapeptide-3，CAS号：827306-88-7)，刺激真皮毛乳或毛囊周围成纤维细胞生成Ⅲ型胶原蛋白、层粘连蛋白等基质蛋白和Ⅶ型胶原蛋白，使毛囊更加饱满健康，有助于毛发生长。

生物素三肽-1(Biotinoyl Tripeptide-1，CAS号：299157-54-3)，可以促进胶原蛋白IV和层粘连蛋白5的合成，延缓毛囊衰老，改善毛囊结构，将头发固着在真皮毛囊内，防止脱发。

肉豆蔻酰五肽-17(Myristoyl Pentapeptide-17)，刺激角蛋白基因的表达，促进角质蛋白生成，从而促进毛发生长。

肉豆蔻酰六肽-16(Myristoyl Hexapeptide-16)，作用机理同肉豆蔻酰五肽-17，都是刺激角蛋白基因的表达，从而达到促进毛发生长的目的。

发明相对于现有技术所取得的有益效果包括：利用优化的冻干曲线，缩短冻干时间，冻干全程仅18h，在确保产品质量的同时，降低了能耗，减少了生产成本，有利于工业化生产；利用冷冻干燥技术解决化妆品中活性多肽的稳定性问题，延长货架期，保持多肽的活性以发挥其最大功效；通过除菌过滤，多肽冻干组合物中不用添加防腐剂也可以防止产品的微生物生长，从而杜绝化妆品中防腐剂对皮肤的刺激；通过不同活性多肽的复配，作用于不同靶点，发挥协同增效作用，解决一系列的皮肤问题，如祛皱抗衰、美白祛斑、舒缓抗敏、祛除眼袋、生发固发等。

附图说明

图1冻干曲线。预冻至-40℃，把产品放入干燥箱，维持3h；将温度由-40℃升高至-5℃，升温时长30min，在-5℃维持8h；将温度由-5℃升高至15℃，升温时长30min，在15℃维持1h；将温度由15℃升高至30℃，升温时长30min，在30℃维持2h；将温度由30℃升高至35℃，升温时长30min，在35℃维持2h出箱。冻干时长18h。

具体实施方式

为了更好地理解本发明，下面结合实施例和附图对发明作详细的说明，但并不只限于以下的实施例。

实施例1具有祛皱抗衰作用的多肽冻干组合物制备方法

处方

制备方法：

1、准确称量A相中的甘露醇、海藻糖、磷酸氢二钠，磷酸二氢钠，加入处方量的注射用水中，手动搅拌5-10min至溶液澄清透明，备用；

2、准确称量的B相中的各多肽粉末和吐温20，加入温水(20℃-35℃)，手动一边搅拌一边超声5-10min，至B相液体澄清透明，备用；

3、A相保持搅拌，将B相加入A相中，继续搅拌3-5min至溶液澄清透明；

4、用0.22μm过滤器对步骤3中的溶液除菌过滤，得半成品；

5、将合格半成品进行灌装，按本发明所述冻干曲线(见图1)操作，即得具有祛皱抗衰作用的多肽冻干组合物。

实施例2具有美白祛斑作用的多肽冻干组合物制备方法

处方

制备方法：

1、准确称量A相中的甘露醇、海藻糖、磷酸氢二钠，磷酸二氢钠，加入处方量的注射用水中，手动搅拌5-10min至溶液澄清透明，备用；

2、准确称量的B相中的各多肽粉末和吐温20，加入温水(20℃-35℃)，手动一边搅拌一边超声5-10min，至B相液体澄清透明，备用；

3、A相保持搅拌，将B相加入A相中，继续搅拌3-5min至溶液澄清透明；

4、用0.22μm过滤器对步骤3中的溶液除菌过滤，得半成品；

5、将合格半成品进行灌装，按本发明所述冻干曲线(见图1)操作，即得具有美白祛斑作用的多肽冻干组合物。

实施例3具有舒缓抗敏作用的多肽冻干组合物制备方法

处方

制备方法：

1、准确称量A相中的甘露醇、海藻糖、磷酸氢二钠，磷酸二氢钠，加入处方量的注射用水中，手动搅拌5-10min至溶液澄清透明，备用；

2、准确称量的B相中的各多肽粉末和吐温20，加入温水(20℃-35℃)，手动一边搅拌一边超声5-10min，至B相液体澄清透明，备用；

3、A相保持搅拌，将B相加入A相中，继续搅拌3-5min至溶液澄清透明；

4、用0.22μm过滤器对步骤3中的溶液除菌过滤，得半成品；

5、将合格半成品进行灌装，按本发明所述冻干曲线(见图1)操作，即得具有舒缓抗敏作用的多肽冻干组合物。

实施例4具有祛除眼袋作用的多肽冻干组合物制备方法

处方

制备方法：

1、准确称量A相中的甘露醇、海藻糖、磷酸氢二钠，磷酸二氢钠，加入处方量的注射用水中，手动搅拌5-10min至溶液澄清透明，备用；

2、准确称量的B相中的各多肽粉末和吐温20，加入温水(20℃-35℃)，手动一边搅拌一边超声5-10min，至B相液体澄清透明，备用；

3、A相保持搅拌，将B相加入A相中，继续搅拌3-5min至溶液澄清透明；

4、用0.22μm过滤器对步骤3中的溶液除菌过滤，得半成品；

5、将合格半成品进行灌装，按本发明所述冻干曲线(见图1)操作，即得具有祛除眼袋作用的多肽冻干组合物。

实施例5具有生发固发作用的多肽冻干组合物制备方法

处方

制备方法：

1、准确称量A相中的甘露醇、海藻糖、磷酸氢二钠，磷酸二氢钠，加入处方量的注射用水中，手动搅拌5-10min至溶液澄清透明，备用；

2、准确称量的B相中的各多肽粉末和吐温20，加入温水(20℃-35℃)，手动一边搅拌一边超声5-10min，至B相液体澄清透明，备用；

3、A相保持搅拌，将B相加入A相中，继续搅拌3-5min至溶液澄清透明；

4、用0.22μm过滤器对步骤3中的溶液除菌过滤，得半成品；

5、将合格半成品进行灌装，按本发明所述冻干曲线(见图1)操作，即得具有生发固发作用的多肽冻干组合物。

实施例6多肽冻干组合物的外观及复溶时间检查

通过观察实施例1、实施例2、实施例3、实施例4、实施例5多肽冻干组合物的外观，检查其成型性，加入注射用水检查复溶时间，结果见下表1：

表1多肽冻干组合物的外观及复溶时间

由表中结果可知，采用本发明所述冻干曲线制备的多肽冻干组合物，其成型性好，复溶时间短，符合质量标准要求，而且该制备方法冻干时长仅18h，在保证多肽冻干组合物产品质量的同时，可以降低能耗，减少生产成本，有利于工业化生产。

实施例7多肽冻干组合物的稳定性试验

7.1仪器

恒温恒湿箱、高效液相色谱仪(HPLC)

7.2试验依据

《中国药典》2015年版四部通则9001原料药与制剂稳定性试验指导原则

7.3试验条件与检验项目

加速试验：恒温恒湿箱40℃±2℃，RH75％±5％，分别于第1、2、3、6个月通过HPLC检测多肽冻干组合物中各多肽的含量，以评价其稳定性。

长期试验：恒温恒湿箱25℃±2℃，RH60％±10％，分别于第3、6、9、12、18、24、36个月通过HPLC检测多肽冻干组合物中各多肽的含量，以评价其稳定性。

7.4稳定性试验结果

实施例1、实施例2、实施例3、实施例4、实施例5的样品在加速试验条件下放置6个月后，稳定性数据分别见下表2-6：

表2实施例1加速6个月的稳定性试验数据

表3实施例2加速6个月的稳定性试验数据

表4实施例3加速6个月的稳定性试验数据

表5实施例4加速6个月的稳定性试验数据

表6实施例5加速6个月的稳定性试验数据

实施例1、实施例2、实施例3、实施例4、实施例5的样品在长期试验条件下放置12个月后，稳定性数据分别见下表7-11：

表7实施例1长期12个月的稳定性试验数据

表8实施例2长期12个月的稳定性试验数据

表9实施例3长期12个月的稳定性试验数据

表10实施例4长期12个月的稳定性试验数据

表11实施例5长期12个月的稳定性试验数据

由表2-6中数据可知，在加速稳定性试验条件下放置6个月，实施例1、实施例2、实施例3、实施例4、实施例5的样品中各多肽的含量没有出现显著变化，表明各实施例的多肽冻干组合物稳定性符合质量标准要求。

由表7-11中数据可知，在长期稳定性试验条件下放置12个月，实施例1、实施例2、实施例3、实施例4、实施例5的样品中各多肽的含量没有出现显著变化，表明各实施例的多肽冻干组合物稳定性符合质量标准要求。

实施例8多肽冻干组合物无菌检查

8.1试验用菌

金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)(ATCC 6538)

8.2试验依据

《中国药典》2015年版四部通则1101无菌检查法

8.3试验方法

根据《中国药典》2015年版四部1101无菌检查法的规定，采用薄膜过滤法分别对实施例1、实施例2、实施例3、实施例4、实施例5制备过程中经除菌过滤后的半成品、冻干产品、加速稳定性试验条件下放置6个月的样品、长期稳定性试验条件下放置12个月的样品进行无菌检查，以金黄色葡萄球菌为阳性对照菌，以相应的溶剂和稀释液、冲洗液作为阴性对照。

8.4结果判断

阳性对照管应生长良好，阴性对照管不得有菌生长。否则，试验无效。

若供试品管均澄清，或虽显浑浊但经确证无菌生长，判供试品符合规定；若供试品管中任何一管显浑浊并确证有菌生长，判供试品不符合规定，除非能充分证明试验结果无效，即生长的微生物非供试品所含。

8.5试验结果

实施例1、实施例2、实施例3、实施例4、实施例5各样品的无菌检查结果分别见下表12-16：

表12实施例1各样品的无菌检查结果

表13实施例2各样品的无菌检查结果

表14实施例3各样品的无菌检查结果

表15实施例4各样品的无菌检查结果

表16实施例5各样品的无菌检查结果

由试验结果可知，阳性对照管中的金黄色葡萄球菌生长良好，而阴性对照和实施例1、实施例2、实施例3、实施例4、实施例5各样品均无菌生长，培养基澄清，因此判断实施例1、实施例2、实施例3、实施例4、实施例5各多肽冻干组合物经无菌检查，均符合规定。

以上内容是结合具体的优选实施方式对本发明所做的进一步详细的说明，但是不表示本发明的具体实施是局限于这些说明。对于本发明所属领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干简单推演或是替换，都应视为属于本发明的保护范围。

Claims (12)

1.一种具有皮肤活性的多肽冻干组合物，其特征在于，包含：具有皮肤活性的多肽、赋形剂、增溶剂、pH缓冲剂，其中具有皮肤活性的多肽的质量百分浓度为0.0001％-5％，赋形剂的质量百分浓度为1％-10％，增溶剂的质量百分浓度为0.001％-5％，pH缓冲剂的质量百分浓度为0.001％-1％。

2.根据权利要求1所述的具有皮肤活性的多肽冻干组合物，其特征在于，所述具有皮肤活性的多肽选自具有祛皱抗衰作用的多肽、具有美白祛斑作用的多肽、具有舒缓抗敏作用的多肽、具有祛除眼袋作用的多肽、具有生发固发作用的多肽，各多肽质量百分浓度为0.0001％-5％。

3.根据权利要求2所述的具有皮肤活性的多肽冻干组合物，其特征在于，其中所述具有祛皱抗衰作用的多肽包括三肽-1、乙酰基六肽-8、乙酰基八肽-3、β-丙氨酰羟脯氨酰二氨基丁酰苄基酰胺、棕榈酰五肽-4、棕榈酰四肽-7、肌肽、三肽-1铜、棕榈酰三肽-1、棕榈酰三肽-5、棕榈酰寡肽、六肽-9、六肽-11、或其组合，各成分质量百分浓度为0.0001％-5％。

4.根据权利要求2所述的具有皮肤活性的多肽冻干组合物，其特征在于，其中所述具有美白祛斑作用的多肽包括九肽-1、四肽-27、十肽-12、六肽-2、肌肽、或其组合，各成分质量百分浓度为0.0001％-5％。

5.根据权利要求2所述的具有皮肤活性的多肽冻干组合物，其特征在于，其中所述具有舒缓抗敏作用的多肽包括棕榈酰三肽-8、乙酰基四肽-15、乙酰基四肽-40、乙酰基二肽-1鲸蜡酯、乙酰基六肽-49、或其组合，各成分质量百分浓度为0.0001％-5％。

6.根据权利要求2所述的具有皮肤活性的多肽冻干组合物，其特征在于，其中所述具有祛除眼袋作用的多肽包括乙酰基四肽-5、棕榈酰四肽-7、二肽-2、棕榈酰三肽-1、棕榈酰五肽-4、或其组合，各成分质量百分浓度为0.0001％-5％。

7.根据权利要求2所述的具有皮肤活性的多肽冻干组合物，其特征在于，其中所述具有生发固发作用的多肽包括三肽-1铜、乙酰基四肽-3、生物素三肽-1、肉豆蔻酰五肽-17、肉豆蔻酰六肽-16、或其组合，各成分质量百分浓度为0.0001％-5％。

8.根据权利要求1所述的具有皮肤活性的多肽冻干组合物，其特征在于，所述赋形剂是甘露醇、海藻糖、乳糖、或其组合，各成分质量百分浓度范围为1％-10％。

9.根据权利要求1所述的具有皮肤活性的多肽冻干组合物，其特征在于，所述增溶剂选自吐温20、吐温40、吐温60、吐温80，各成分质量百分浓度范围为0.001％-5％。

10.根据权利要求1所述的具有皮肤活性的多肽冻干组合物，其特征在于，所述pH缓冲剂是磷酸氢二钠和磷酸二氢钠，质量百分浓度范围为0.001％-1％。

11.一种具有皮肤活性的多肽冻干组合物的制备方法，其特征在于，该方法包括：将具有皮肤活性的多肽、赋形剂、增溶剂、pH缓冲剂溶解混合以形成液体混合物，液体混合物经0.22μm过滤器除菌过滤，将滤过物灌装、按冻干曲线的设置冷冻干燥，获得具有皮肤活性的多肽冻干组合物。

12.根据权利要求11所述的具有皮肤活性的多肽冻干组合物的制备方法，其特征在于，所述冻干曲线包括：

(1)预冻至-40℃，把产品放入干燥箱，维持3h；

(2)将温度由-40℃升高至-5℃，升温时长30min，在-5℃维持8h；

(3)将温度由-5℃升高至15℃，升温时长30min，在15℃维持1h；

(4)将温度由15℃升高至30℃，升温时长30min，在30℃维持2h；

(5)将温度由30℃升高至35℃，升温时长30min，在35℃维持2h出箱，全程18h。