CN109430413A - 一种增强免疫力的组合物、功能性食品及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明属于食品领域，具体涉及一种增强免疫力的组合物、功能性食品及其制备方法。所述组合物按重量份计，包括奶粉40‑70份、乳铁蛋白0.05‑2份、牛初乳1‑10份、酵母β‑葡聚糖0.1‑5份、浓缩乳清蛋白5‑20份和焦磷酸铁0.1‑4份，所述的功能性食品包括上述增强免疫力的组合物、调味物质和助流剂，所述功能性食品的制备方法为分步过筛和预混。本发明所提供的组合物的各成分之间不存在稳定性冲突，且在特定的比例下能够发挥相对最好效果，可用于增强免疫力，解决现有人群免疫力低、抵抗力差的这一普遍性问题。

Description

一种增强免疫力的组合物、功能性食品及其制备方法
技术领域
本发明属于食品领域，具体涉及一种增强免疫力的组合物、功能性食品及其制备方法。
背景技术
免疫力是人体自身的防御机制，是人体识别和消灭外来侵入的任何异物(病毒、细菌等)，处理衰老、损伤、死亡、变性的自身细胞以及识别和处理体内突变细胞和病毒感染细胞的能力。
现代人工作学习繁忙、生活压力大，环境污染严重，导致免疫力下降的因素越来越多，免疫力低下的人根本无法抵御病毒的侵袭。现代免疫学机理揭示了随着人们年龄的增长(40岁以后)，免疫功能也随着下降和紊乱，这就加速了机体的衰弱过程和降低了对疾病的抵抗能力，由此而产生的中老年人的医疗、保健问题，成为了人口老龄化社会不得不面对以及需要解决的重要问题。
增强人体免疫力能预防病毒性的疾病发生，也能控制和减少细菌性疾病的产生和发展，还能提高人体素质，也能直接或间接加速大多数疾病的治愈。使用相应补剂是增强免疫力的常用途径，例如一种有增强免疫力效果的软胶囊(申请号为201410755392.2)、一种药物组合物玉屏风滴丸(申请号为201310138940.2)以及一种增强人体免疫力的药酒(申请号为201410514332.1)。但是其组成成分均包含中药成分，一方面中药成分复杂，在含有活性成分的同时，也可能含有大量致敏原以及对人体影响或功能疗效未知的成分，因此其制成品存在质量不稳定，或副作用不明确的问题；再一方面，由于药材的来源不同，因而产品功能疗效可能会有差异，其质量不能达到完全控制。且因人们受“是药三分毒”的传统观念的影响，所以更倾向于成分明确的且更绿色天然的原料所制成的具有增强免疫力的功能性食品。
乳铁蛋白是目前公认的具有多效免疫调节活性的蛋白质，与免疫细胞表面的受体结合，促进T细胞、B细胞、巨噬细胞的增殖和分化，激活自然杀伤细胞，从而提高机体免疫力，另外乳铁蛋白可以参与铁代谢，促进铁吸收和平衡，并能根据机体对铁的需求，通过调节肠黏膜细胞对铁的吸收，保持体内铁的平衡状态。
牛初乳是母牛产犊后3天内的乳汁，其营养成分与普通牛奶相比，蛋白质含量较高，而脂肪和糖含量则较低。牛初乳亦含有大量的免疫和生长因子，如免疫球蛋白、乳铁蛋白、溶菌酶、类胰岛素生长因子、表皮生长因子等，被誉为“21世纪的保健食品”。而免疫球蛋白是一类具有抗菌、增强免疫功能的活性蛋白质，是人类特别是婴儿健康所需的生理活性物质。免疫球蛋白分为IgG、IgA、IgM、IgD和IgE五大类。免疫球蛋白具有多种生物活性功能，IgG通过与细菌、病毒等抗原进行特异性结合而使之丧失繁殖能力，同时促进巨噬细胞的吞噬作用。同时IgG也是唯一能够从母体通过胎盘转移到胎儿体内的免疫球蛋白，是胎儿和新生婴儿抗感染免疫作用的主要来源。
酵母β-葡聚糖，由β-(1-3)、β-(1-6)葡聚糖组成，以酿酒酵母为原料，经提取、酸碱处理、喷雾干燥等步骤生产而成，2010年被批为食品原料。酵母β-葡聚糖具有的独特三重超微螺旋型分子构型，是免疫活性最强且最易被人体吸收的形式。当酵母β-葡聚糖进入人体后，其螺旋结构使其不被胃肠道水解，而是通过胞吞作用(或胞饮作用)穿过肠上皮而进入淋巴系统，选择性的与人体或动物免疫细胞(包括单细胞、巨噬细胞、中性粒细胞和自然杀伤细胞)发生特异性结合，通过刺激淋巴细胞、活化巨噬细胞，从而产生抑制细菌和病毒的抗体，从而达到增强人体免疫力的功效。
叶酸类化合物是人体所需的重要维生素，参与核酸、蛋白质和磷脂的代射，同细胞的分化、增殖密切相关。它能改善细胞内抗氧化防御系统，减少同型半胱氨酸的产生；并有直接的抗自由基作用，在保护细胞功能、提高免疫力等方面起着重要作用。
申请号为CN200810013722.5公开了一种抗疲劳及增强免疫力的保健药品及其制备方法，该申请中添加了叶酸用于增强免疫力。该申请中的功效成分为辅酶Q10、维生素E、维生素C、叶酸，其中辅酶Q10、维生素C、维生素E，均为抗氧剂，能清除自由基，提高免疫力，叶酸起到清除自由基、保护细胞膜的功能，各种成分相互配合，通过控制自由基，保护人体免疫系统，便可以缓解人们心理和生理的压力，从而达到缓解体力疲劳，增强免疫力的保健功能。该产品组方中，以辅酶Q10为主，包括叶酸在内的其他成分发挥协同作用。但是众所周知的是维生素和叶酸本身就不稳定，而且在酸性条件下维生素C较为稳定，而叶酸则在酸性条件下最不稳定，易被破坏。
申请号为201510232443.8公开了一种富锌配方羊奶粉及其制备方法，该申请中添加了酵母β-葡聚糖和乳铁蛋白，该申请与普通奶粉相比，配方奶粉去除了部分酪蛋白，增加了乳清蛋白，去除了大部分饱和脂肪酸，加入了植物油，加入乳糖，含糖量接近母乳；降低了钙等矿物质的含量以减轻儿童肾脏负担；添加了微量元素、维生素以及某些氨基酸等，使之更接近母乳。该申请中的功能性成分不够全面，对于婴幼儿等特殊人群，叶酸是必不可少的。缺乏叶酸，极易导致细胞贫血、舌炎、消化功能紊乱、免疫力下降等问题。
基于以上背景技术，本发明提供了一种增强免疫力的组合物及其制备方法，将奶粉、乳铁蛋白、牛初乳、酵母β-葡聚糖、浓缩乳清蛋白和焦磷酸铁进行组合，优选可以进一步添加叶酸类化合物。酵母β-葡聚糖通过胞吞作用(或胞饮作用)穿过肠上皮而进入淋巴系统，选择性的与人体或动物免疫细胞(包括单细胞、巨噬细胞、中性粒细胞和自然杀伤细胞)发生特异性结合，通过刺激淋巴细胞、活化巨噬细胞，从而产生抑制细菌和病毒的抗体；牛初乳含有大量的免疫和生长因子，如免疫球蛋白、乳铁蛋白等，而免疫球蛋白是一类具有抗菌、增强免疫功能的活性蛋白质，通过与细菌、病毒等抗原进行特异性结合而使之丧失繁殖能力，同时促进巨噬细胞的吞噬作用；而乳铁蛋白与免疫细胞表面的受体结合，促进T细胞、B细胞、巨噬细胞的增殖和分化，激活自然杀伤细胞。同时，乳铁蛋白与焦磷酸铁相互作用，参与铁代谢，促进铁吸收和平衡，并可对肠中的铁离子进行增溶；通过螯合铁，减少铁离子对胃肠道的刺激；并能根据机体对铁的需求，通过调节肠黏膜细胞对铁的吸收，保持体内铁的平衡状态。叶酸类化合物参与核酸、蛋白质和磷脂的代射，能促进巨噬细胞和免疫细胞的增殖与分化，起到提高免疫力的作用，在实验中发现，其与焦磷酸铁在特定比例下对于小鼠NK细胞活性有较为明显的有益效果。这些成分不存在相互之间的稳定性冲突，且在特定的没有规律性的比例下能够发挥相对最好效果，用于增强免疫力。
发明内容
为解决现有人群免疫力低下、抵抗力差的问题，本发明提供一种增强免疫力的组合物、功能性食品及其制备方法。为了实现上述目的，本发明采用以下的技术方案：
本发明提供了一种增强免疫力的组合物，包括：奶粉、乳铁蛋白、牛初乳、酵母β-葡聚糖、浓缩乳清蛋白和焦磷酸铁。
优选地，所述的组合物还包括叶酸类化合物。
进一步优选地，所述叶酸类化合物为叶酸、甲酰四氢叶酸、(6S)-5-甲基四氢叶酸、L-甲基叶酸、叶酸可药用盐、叶酸或叶酸可药用盐的活性代谢产物和可在体内代谢和/或生成叶酸的物质中的至少一种。
优选地，所述的奶粉为全脂奶粉或脱脂奶粉；进一步优选为全脂奶粉。
所述组合物按重量份计，奶粉的用量为40-70份；优选为45-65份；进一步优选为50-60份；更进一步优选为54-60份；最优选为60份。
所述的组合物按重量份计，乳铁蛋白的用量为0.05-2份；优选为0.08-1.5份；进一步优选为0.09-1.0份；最优选为0.1份。
所述的组合物按重量份计，牛初乳的用量为1-10份；优选为4-10份；进一步优选为5-10份；更进一步优选为5-8份；最优选为8份。
所述组合物按重量份计，酵母β-葡聚糖的用量为0.1-5份；优选为0.1-4份；进一步优选为1-3份；最优选为2份。
所述组合物按重量份计，浓缩乳清蛋白用量为5-20份；优选为6-19份；进一步优选为7-18份；更进一步优选为6-17份；最优选为15份。
所述组合物按重量份计，焦磷酸铁的用量为0.1-4份；优选为0.1-3份；进一步优选为0.4-2份；最优选为0.4份。
所述组合物按重量份计，叶酸类化合物的用量为0.003-0.05份；优选为0.003-0.02份；进一步优选为0.004-0.01份；最优选为0.004份。
以上技术方案均能够实现本发明所述的技术效果，但在一些优选的实施方案中，所达到的技术效果优于其他方案。
例如：
乳铁蛋白与酵母β-葡聚糖的重量比例为1：1，其中一个优选的组合物其具体组分按重量份计包括：奶粉60份、乳铁蛋白2份、牛初乳5份、酵母β-葡聚糖2份、浓缩乳清蛋白8份和焦磷酸铁2份。
牛初乳与焦磷酸铁的比例为20：1，其中一个优选的组合物其具体组分按重量份计包括：奶粉60份、乳铁蛋白0.1份、牛初乳8份、酵母β-葡聚糖4份、浓缩乳清蛋白19份和焦磷酸铁0.4份。
焦磷酸铁与叶酸的比例为100：1，其中一个优选的组合物其具体组分按重量份计包括：奶粉50份、乳铁蛋白1份、牛初乳4份、酵母β-葡聚糖3份、浓缩乳清蛋白6份、焦磷酸铁2份和叶酸0.02份。
最优选地，所述的组合物其具体组分按重量份包括：奶粉60份、乳铁蛋白0.1份、牛初乳8份、酵母β-葡聚糖2份、浓缩乳清蛋白15份、焦磷酸铁0.4份和叶酸0.004份。
本发明还提供了所述的增强免疫力的组合物在增强免疫力功能性食品中的应用，该组合物适用于成人，包括孕妇、产妇、中老年人等各类人群的日常保健食用。
本发明还提供了一种增强免疫力的功能性食品，包括上述技术方案所述的组合物、调味物质和助流剂。
优选地，按重量份计，所述调味物质的用量为10-30份。
优选地，按重量份计，所述助流剂的用量为0.1-1.5份。
优选地，所述的调味物质为甜味剂、酸味剂、果粉、燕麦、植物油粉和香精中的至少一种。
优选地，所述甜味剂为葡萄糖、木糖醇、果糖、麦芽糖醇和赤藓糖醇中的至少一种。
优选地，所述酸味剂为柠檬酸、柠檬酸钠、苹果酸和乳酸中的至少一种。
优选地，所述果粉为草莓粉、苹果粉、葡萄粉、柠檬粉、水蜜桃粉和椰子粉中的至少一种。
优选地，所述助流剂为二氧化硅、硅酸钙和磷酸三钙中的至少一种。
优选地，按重量份计，所述助流剂为0.5份的硅酸钙。
优选地，按重量份计，所述调味物质为15份的木糖醇。
本发明还提供了所述功能性食品的制备方法，包括以下步骤：
(1)将奶粉、浓缩乳清蛋白和调味物质分别过24目筛，制得奶粉A、浓缩乳清蛋白B和调味物质C，备用；
(2)将乳铁蛋白、酵母β-葡聚糖、焦磷酸铁、叶酸类化合物和助流剂预混，过24目筛，得预混粉1；
(3)将预混粉1和牛初乳预混，过24目筛，得预混粉2；
(4)依次向三维混合机中加入(1-3)/4配方量的奶粉A、浓缩乳清蛋白B、预混粉2、调味物质C和(1-3)/4配方量的奶粉A，混合30min，得所述的食品。
本发明与现有技术相比，具有以下优点和效果：
(1)本发明针对市面上提高免疫力的各类含中药成分的保健品，由于中药材成分复杂，还存在某些功效成分不明确、不能随意的将其用于日常保健的缺点，提出了一种天然成分的提高免疫力的组合物。酵母β-葡聚糖能够与人体或动物免疫细胞(包括单细胞、巨噬细胞、中性粒细胞和自然杀伤细胞)发生特异性结合，通过刺激淋巴细胞、活化巨噬细胞，从而产生抑制细菌和病毒的抗体；牛初乳含有大量免疫球蛋白、乳铁蛋白等，免疫球蛋白通过与细菌、病毒等抗原进行特异性结合而使之丧失繁殖能力，同时促进巨噬细胞的吞噬作用；而乳铁蛋白与免疫细胞表面的受体结合，促进T细胞、B细胞、巨噬细胞的增殖和分化，激活自然杀伤细胞。同时，乳铁蛋白与焦磷酸铁相互作用，参与铁代谢，促进铁吸收和平衡，减少铁离子对胃肠道的刺激。叶酸类化合物能促进巨噬细胞和免疫细胞的增殖与分化，起到提高免疫力的作用，在实验中发现，其与焦磷酸铁在特定比例下对于小鼠NK细胞活性有较为明显的有益效果。这些成分不存在相互之间的稳定性冲突，且在特定的没有规律性的比例下能够发挥相对最好效果，能在长期、有针对性的营养物质的补充过程中，更好地增强人体免疫力。
(2)本发明提供的一种具有增强免疫力作用的食品，通过添加调味物质，适口性好，在胃肠液中分散快、吸收好、生物利用度高；同时通过添加果粉，口味独特多变，满足不同人群的需求，增加人群的认可度，提高产品的经济价值。
(3)本发明提供的一种具有增强免疫力作用的食品的制备方法，工艺简单，该方法通过特定的原料的投加顺序，使原料可以在短时间内更快的混合均匀，有效的避免了原料混合过程的结块现象的发生，提高了产率，降低了生产成本，适合大规模的推广应用。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面对本发明的技术方案做进一步详述。
当实施例给出数值范围时，应理解，除非本发明另有说明，每个数值范围的两个端点以及两个端点之间任何一个数值均可选用。除非另外定义，本文中使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同意义。
如无特殊说明，本发明所采用的原料均为普通市售产品。
实施例1-6
实施例1-6的一种增强免疫力的组合物及其功能性食品的原料组成如表1所示。
表1一种增强免疫力的组合物及其功能性食品的原料组成
实施例1-6的增强免疫力功能性食品的制备方法，包括以下步骤：
(1)将全脂奶粉、浓缩乳清蛋白和木糖醇分别过24目筛，制得全脂奶粉A、浓缩乳清蛋白B和木糖醇C，备用；
(2)将乳铁蛋白、酵母β-葡聚糖、焦磷酸铁和硅酸钙预混，过24目筛，得预混粉1；
(3)将预混粉1和牛初乳预混，过24目筛，得预混粉2；
(4)依次向三维混合机中加入(1-3)/4配方量的全脂奶粉A、浓缩乳清蛋白B、预混粉2、木糖醇C和(1-3)/4配方量的全脂奶粉A，混合30min，即得实施例1-6所述的功能性食品。
实施例7-10
实施例7-10的一种增强免疫力的组合物及其功能性食品的原料组成如表2所示。
表2一种增强免疫力的组合物及其功能性食品的原料组成
组分 实施例7/份 实施例8/份 实施例9/份 实施例10
全脂奶粉 50 54 65 60
乳铁蛋白 1.0 1.7 2 0.1
牛初乳 4 8 6 8
酵母β-葡聚糖 3 5 2 2
浓缩乳清蛋白 6 20 12 15
焦磷酸铁 2 0.4 3.5 0.4
叶酸 0.02 0.003 0.05 0.004
木糖醇 15 15 15 15
硅酸钙 0.5 0.5 0.5 0.5
实施例7-10的增强免疫力功能性食品的制备方法，包括以下步骤：
(1)将全脂奶粉、浓缩乳清蛋白和木糖醇分别过24目筛，制得全脂奶粉A、浓缩乳清蛋白B和木糖醇C，备用；
(2)将乳铁蛋白、酵母β-葡聚糖、焦磷酸铁、叶酸和硅酸钙预混，过24目筛，得预混粉1；
(3)将预混粉1和牛初乳预混，过24目筛，得预混粉2；
(4)依次向三维混合机中加入(1-3)/4配方量的全脂奶粉A、浓缩乳清蛋白B、预混粉2、木糖醇C和(1-3)/4配方量的全脂奶粉A，混合30min，即得实施例7-10所述的功能性食品。
实施例11
本实施例与实施例10的不同之处在于，所述功能性食品的制备过程中，步骤(4)中原料的投加顺序依次为全部配方量的全脂奶粉A、浓缩乳清蛋白B、预混粉2和木糖醇C。
增强免疫力功能评价
检测依据：卫生部《保健食品检验与评价技术规范》(2003年版)。
1、实验动物
免疫实验用清洁级ICR小鼠，雄性，体重18-22g。实验动物生产许可证号：SCXK(粤)2008-0002。动物室温度：22-25℃，相对湿度：55-70％。实验动物使用许可证号：SYXK(桂)2011-0005。
2、剂量分组及受试样品给予时间
本组合物人体推荐量为每人每日10g(0.17g/kg)，温水冲调后服用。小鼠实验用剂量设置低、正常、高3个剂量水平，即每日0.85、1.7和5.1g/kg(分别相当于人体推荐量的5、10、30倍)，同时设置阴性对照组，将实验小鼠按照体重随机分成11批，每批4组，每组10只。
各称取4.25g、8.5g和25.5g上述实施例1-11所得的组合物，分别加纯水至100ml，分别配成42.5mg/ml、85mg/ml和255mg/ml的溶液，灌胃体积为0.2ml/10g体重，每天灌胃1次，阴性对照组给予等体积的纯水，连续30d。
3、免疫力功能评价
3.1细胞免疫功能
(1)ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化实验(MTT法)
无菌取脾，制成细胞悬液。将每一份脾细胞悬液分两孔加入24孔培养板中，每孔1mL，一孔加75μL ConA液(相当于7.5μg/mL)，另一孔作为对照，置5％CO2，37℃CO2孵箱中培养72h。培养结束前4h，每孔轻轻吸去上清液0.7mL，加入0.7mL不含小牛血清的RPMI1640培养液，同时加入MTT(5mg/mL)50μL/孔，继续培养4h。培养结束后，每孔加入1mL酸性异丙醇，超声震荡(2秒)，使紫色结晶完全溶解。然后分装到96孔培养板中，每个孔分装3孔作为平行样，用酶联免疫检测仪，以570nm波长测定光密度值。用加ConA孔的光密度值减去不加ConA孔的光密度值代表淋巴细胞的增殖能力，受试样品组的光密度差值显著高于对照组的光密度差值，可判定该项实验结果阳性。
(2)迟发型变态反应(DTH)
灌胃第26天，给小鼠腹腔注射2％绵羊红细胞(SRBC)0.2mL用于致敏，于免疫后第4天，右耳均匀涂抹1％DNFB溶液20μL攻击，左耳作对照，注射后于24h处死小鼠，取左右相同大小耳片称重，其重量之差作为肿胀度。以肿胀度来表示DTH的程度。受试样品组的差值显著高于对照组的差值，可判定该项实验结果阳性。同时取小鼠的胸腺及脾脏称重，计算脏器/体重比值。
3.2体液免疫功能
(1)抗体生成细胞检测(Jerne改良玻片法)
于灌胃的第26天给每只小鼠腹腔注射0.2mL的2％(v/v)压积SRBC，将SRBC免疫4-5天后的小鼠颈椎脱臼处死，无菌取脾脏，以完全培养基RPMI1640制备成5×106个细胞/mL的脾细胞悬液。并制作琼脂糖玻片，将其放入37℃、5％的CO2培养箱中孵育1h，然后每孔加入500μl以完全培养基稀释的补体(v/v，1：10)，继续孵育2h，计数每张琼脂薄层玻片上形成的溶血空斑数，用空斑数/106脾细胞来表示抗体生成细胞数。
(2)半数溶血值(HC50)的测定
将压积SRBC用生理盐水配成2％(v/v)的细胞悬液，每只鼠腹腔注射0.2mL进行免疫。4d后，摘除眼球取血于离心管内，放置约1h，将凝固血与管壁剥离，使血清充分析出，2000r/min离心10min，收集血清。取血清用SA缓冲液稀释200倍。将稀释后的血清1mL置试管内，依次加入0.5mL的10％(v/v)SRBC，补体1mL(用SA液按1:8稀释)。另设不加血清的对照管(以SA缓冲液代替)。置37℃恒温水浴中保温20min后，冰浴终止反应。2000r/min离心10min。取上清液1mL，加都氏试剂3mL，同时取0.25mL的10％(v/v)SRBC加都氏试剂至4mL，充分混匀，放置10min后，于540nm处以对照管作空白，分别测定各管光密度值。
溶血素的量以半数溶血值(HC50)表示，按下列公式计算：
受试样品组的HC50显著高于对照组的HC50，可判定该项实验结果阳性。
3.3单核—巨噬细胞功能
(1)小鼠碳廓清实验
从小鼠尾静脉注入稀释的印度墨汁，按每10g体重0.1mL计算。待墨汁注入，立即计时。注入墨汁后2、10min，分别从内眦静脉丛取血20μL，并立即将其加到2mL的1％Na2CO3溶液中，测OD600nm。处死小鼠并取肝脏及脾脏，用滤纸吸干脏器表面血污，分别称重。以吞噬指数表示小鼠碳廓清的能力。
K＝(lgOD2min-lgOD10min)/(10min-2min)
受试样品组的吞噬指数显著高于对照组的吞噬指数，可判定该项实验结果阳性。
(2)小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验(滴片法)
给每只小鼠腹腔注射2％(v/v)压积SRBC0.2mL激活腹腔巨噬细胞，5d后处死小鼠，腹腔注射加小牛血清Hank’s液4mL/鼠，轻轻按揉腹部20次，吸取腹腔洗液与等量的1％鸡红细胞混匀。吸取1mL混合液，滴片，37℃孵育20min，孵育结束后用生理盐水冲洗，于甲醇液中固定，Giemsa液染色，镜检，计数吞噬率和吞噬指数(吞噬率为每100个巨噬细胞中吞噬鸡红细胞的巨噬细胞所占的百分率；吞噬指数为平均每个巨噬细胞吞噬鸡红细胞的个数)。
3.4 NK细胞活性测定
采用乳酸脱氢酶(LDH)测定法。
无菌取脾，制成单个细胞悬液作为效应细胞。取靶细胞和效应细胞各100μL(效靶比50:1)，加入U型96孔培养板中；靶细胞自然释放孔加靶细胞和培养液各100μL，靶细胞最大释放孔加靶细胞和2.5％Triton各100μL；上述各项均设三个复孔，于37℃、5％CO2培养箱中培养4h，然后将96孔培养板以1500r/min离心5min，每孔吸取上清100μL置平底96孔培养板中，同时加入LDH基质液100μL，反应3min，每孔加入1mol/L的HCl30μL，在酶标仪490nm处测定光密度值(OD)。
受试样品组的NK细胞活性显著高于对照组的NK细胞活性，即可判定该项实验结果阳性。
4、实验结果
实施例1的免疫功能评价实验结果如表3.1和表3.2所示。
表3.1小鼠细胞免疫功能、体液免疫功能各项试验检测结果
注：*P<0.05，表示与对照组相比具有显著性差异。
由表3.1可见，各剂量组小鼠的脾脏/体重比值和胸腺/体重比值与对照组比，无显著性差异(p＞0.05)，而高剂量组的淋巴细胞增殖能力高于对照组，具有显著性差异(P<0.05)，中剂量组和高剂量组的耳廓肿胀度增重高于对照组，具有显著性差异(P<0.05)。
表3.2样品对小鼠单核—巨噬细胞与NK细胞活性测定结果
注：*P<0.05，表示与对照组相比具有显著性差异；**P<0.01，表示与对照组相比具有极显著性差异。
由表3.2可见，中剂量组的NK细胞活性高于对照组，具有显著性差异(P<0.05)，高剂量组的NK细胞活性高于对照组，具有极显著性差异(P<0.01)。
实施例2的免疫功能评价实验结果如表4.1和表4.2所示。
表4.1小鼠细胞免疫功能、体液免疫功能各项试验检测结果
注：*P<0.05，表示与对照组相比具有显著性差异。
由表4.1可见，高剂量组的淋巴细胞增殖能力和耳廓肿胀度增重高于对照组，具有显著性差异(P<0.05)。
表4.2样品对小鼠单核—巨噬细胞与NK细胞活性测定结果
注：*P<0.05，表示与对照组相比具有显著性差异。
由表4.2可见，中剂量组和高剂量组的NK细胞活性高于对照组，具有显著性差异(P<0.05)。
实施例3的免疫功能评价实验结果如表5.1和表5.2所示。
表5.1小鼠细胞免疫功能、体液免疫功能各项试验检测结果
注：*P<0.05，表示与对照组相比具有显著性差异。
由表5.1可见，高剂量组的淋巴细胞增殖能力和耳廓肿胀度增重高于对照组，具有显著性差异(P<0.05)。
表5.2样品对小鼠单核—巨噬细胞与NK细胞活性测定结果
注：*P<0.05，表示与对照组相比具有显著性差异。
由表5.2可见，中剂量组和高剂量组的NK细胞活性高于对照组，具有显著性差异(P<0.05)。
实施例4的免疫功能评价实验结果如表6.1和表6.2所示。
表6.1小鼠细胞免疫功能、体液免疫功能各项试验检测结果
注：*P<0.05，表示与对照组相比具有显著性差异。
由表6.1可见，高剂量组的淋巴细胞增殖能力和耳廓肿胀度增重高于对照组，具有显著性差异(P<0.05)。
表6.2样品对小鼠单核—巨噬细胞与NK细胞活性测定结果
注：*P<0.05，表示与对照组相比具有显著性差异。
由表6.2可见，中剂量组和高剂量组的NK细胞活性高于对照组，具有显著性差异(P<0.05)。
实施例5的免疫功能评价实验结果如表7.1和表7.2所示。
表7.1小鼠细胞免疫功能、体液免疫功能各项试验检测结果
注：*P<0.05，表示与对照组相比具有显著性差异。
由表7.1可见，高剂量组的淋巴细胞增殖能力和耳廓肿胀度增重高于对照组，具有显著性差异(P<0.05)。
表7.2样品对小鼠单核—巨噬细胞与NK细胞活性测定结果
注：*P<0.05，表示与对照组相比具有显著性差异。
由表7.2可见，中剂量组和高剂量组的NK细胞活性高于对照组，具有显著性差异(P<0.05)。
实施例6的免疫功能评价实验结果如表8.1和表8.2所示。
表8.1小鼠细胞免疫功能、体液免疫功能各项试验检测结果
注：*P<0.05，表示与对照组相比具有显著性差异；**P<0.01，表示与对照组相比具有极显著性差异。
由表8.1可见，各剂量组小鼠的脾脏/体重比值和胸腺/体重比值与对照组比，无显著性差异(p＞0.05)，而高剂量组的淋巴细胞增殖能力高于对照组，具有显著性差异(P<0.05)，中剂量组的耳廓肿胀度增重高于对照组，具有显著性差异(P<0.05)，高剂量组的耳廓肿胀度增重高于对照组，具有极显著性差异(P<0.01)。
表8.2样品对小鼠单核—巨噬细胞与NK细胞活性测定结果
注：*P<0.05，表示与对照组相比具有显著性差异；**P<0.01，表示与对照组相比具有极显著性差异。
由表8.2可见，中剂量组的NK细胞活性高于对照组，具有显著性差异(P<0.05)，高剂量组的NK细胞活性高于对照组，具有极显著性差异(P<0.01)。
实施例7的免疫功能评价实验结果如表9.1和表9.2所示。
表9.1小鼠细胞免疫功能、体液免疫功能各项试验检测结果
注：*P<0.05，表示与对照组相比具有显著性差异。
由表9.1可见，各剂量组小鼠的脾脏/体重比值和胸腺/体重比值与对照组比，无显著性差异(p＞0.05)，而高剂量组的淋巴细胞增殖能力高于对照组，具有显著性差异(P<0.05)，中剂量组和高剂量组的耳廓肿胀度增重高于对照组，具有显著性差异(P<0.05)。
表9.2样品对小鼠单核—巨噬细胞与NK细胞活性测定结果
注：*P<0.05，表示与对照组相比具有显著性差异；**P<0.01，表示与对照组相比具有极显著性差异。
由表9.2可见，低剂量组的NK细胞活性高对照组，具有显著性差异(P<0.01)，中剂量组和高剂量组的NK细胞活性高于对照组，具有极显著性差异(P<0.01)，高剂量组的吞噬指数高于对照组，具有显著性差异(P<0.05)。
实施例8的免疫功能评价实验结果如表10.1和表10.2所示。
表10.1小鼠细胞免疫功能、体液免疫功能各项试验检测结果
注：*P<0.05，表示与对照组相比具有显著性差异。
由表10.1可见，各剂量组小鼠的脾脏/体重比值和胸腺/体重比值与对照组比，无显著性差异(p＞0.05)，而高剂量组的淋巴细胞增殖能力高于对照组，具有显著性差异(P<0.05)，中剂量组和高剂量组的耳廓肿胀度增重高于对照组，具有显著性差异(P<0.05)。
表10.2样品对小鼠单核—巨噬细胞与NK细胞活性测定结果
注：*P<0.05，表示与对照组相比具有显著性差异。
由表10.2可见，高剂量组的吞噬指数高于对照组，具有显著性差异(P<0.05)，中剂量组和高剂量组的NK细胞活性高于对照组，具有显著性差异(P<0.05)。
实施例9的免疫功能评价实验结果如表11.1和表11.2所示。
表11.1小鼠细胞免疫功能、体液免疫功能各项试验检测结果
注：*P<0.05，表示与对照组相比具有显著性差异。
由表11.1可见，各剂量组小鼠的脾脏/体重比值和胸腺/体重比值与对照组比，无显著性差异(p＞0.05)，而高剂量组的淋巴细胞增殖能力高于对照组，具有显著性差异(P<0.05)，中剂量组和高剂量组的耳廓肿胀度增重高于对照组，具有显著性差异(P<0.05)。
表11.2样品对小鼠单核—巨噬细胞与NK细胞活性测定结果
注：*P<0.05，表示与对照组相比具有显著性差异。
由表11.2可见，高剂量组的吞噬指数高于对照组，具有显著性差异(P<0.05)，中剂量组和高剂量组的NK细胞活性高于对照组，具有显著性差异(P<0.05)。
实施例10的免疫功能评价实验结果如表12.1和表12.2所示。
表12.1小鼠细胞免疫功能、体液免疫功能各项试验检测结果
注：*P<0.05，表示与对照组相比具有显著性差异；**P<0.01，表示与对照组相比具有极显著性差异。
由表12.1可见，各剂量组小鼠的脾脏/体重比值和胸腺/体重比值与对照组比，无显著性差异(p＞0.05)，而高剂量组的淋巴细胞增殖能力高于对照组，具有极显著性差异(P<0.01)，低剂量组、中剂量组和高剂量组的耳廓肿胀度增重高于对照组，具有显著性差异(P<0.05)。
表12.2样品对小鼠单核—巨噬细胞与NK细胞活性测定结果
注：*P<0.05，表示与对照组相比具有显著性差异；**P<0.01，表示与对照组相比具有极显著性差异。
由表12.2可见，中剂量组和高剂量组的吞噬指数高于对照组，具有显著性差异(P<0.05)，低剂量组的NK细胞活性高于对照组，具有显著性差异(P<0.05)，中剂量组和高剂量组的NK细胞活性高于对照组，具有极显著性差异(P<0.01)。5、结果判定
本申请中均采用正常动物实验。在细胞免疫功能、体液免疫功能、单核－巨噬细胞功能及NK细胞活性四个方面测定中，任两个方面试验结果为阳性，可以判定该受试样品具有增强免疫力作用。其中细胞免疫功能测定项目中两个实验的结果均为阳性，或任一实验的两个剂量组结果为阳性，判定细胞免疫功能试验结果阳性。体液免疫功能测定项目中两个实验的结果均为阳性，或任一实验的两个剂量组结果为阳性，判定体液免疫功能试验结果阳性。单核—巨噬细胞功能测定项目中两个实验的结果均为阳性，或任一实验的两个剂量组结果为阳性，判定单核—巨噬细胞功能试验结果阳性。NK细胞活性测定实验的一个以上剂量结果阳性，判定NK细胞活性结果阳性。
实施例1-10均能起到增强免疫力的效果，但实施例1、6、7和10中组合物的免疫力的效果更优。其中，实施例10的组合物的免疫效果最好。通过实施例7-10可以发现，组合物中添加叶酸类化合物可以增强单核-巨噬细胞的功能，从而提高免疫效果；通过实施例7可以发现，当焦磷酸铁与叶酸的比例为100：1时，可以显著提高组合物NK细胞活性，从而发挥更好的免疫作用。
同时，本发明提供的增强免疫力的功能性食品，通过调味物质，适口性好，在胃肠液中分散快、吸收好、生物利用度高；同时通过添加调味物质，口味独特多变，满足不同人群的需求，增加人群的认可度，提高产品的经济价值。
通过比较实施例10和11可以发现，实施例10，搅拌过程中无结块现象的发生，物料混合均匀。而实施例11在搅拌过程中物料容易结块，搅拌30min后，物料的均一性较差，继续搅拌30-45min后，才可以达到实施例10的混合程度，因此，本发明通过特定的原料的投加顺序，使原料可以在短时间内更快的混合均匀，有效的避免了原料混合过程的结块现象的发生，提高了产率，降低了生产成本，适合大规模的推广应用。
需要强调的是，本发明所述的实施例是说明性的，而不是限定性的，因此本发明包括并不限于具体实施方式中所述的实施例，凡是由本领域技术人员根据本发明的技术方案得出的其他实施方式，同样属于本发明保护的范围。

Claims (10)

1.一种增强免疫力的组合物，其特征在于，所述组合物按重量份计，包括：奶粉40-70份、乳铁蛋白0.05-2份、牛初乳1-10份、酵母β-葡聚糖0.1-5份、浓缩乳清蛋白5-20份和焦磷酸铁0.1-4份。
2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述组合物按重量份计，包括：奶粉60份、乳铁蛋白0.1份、牛初乳8份、酵母β-葡聚糖2份、浓缩乳清蛋白15份和焦磷酸铁0.4份。
3.根据权利要求2所述的组合物，其特征在于，所述组合物按重量份计，还包括叶酸类化合物0.003-0.05份；
所述叶酸类化合物为叶酸、甲酰四氢叶酸、(6S)-5-甲基四氢叶酸、L-甲基叶酸、叶酸可药用盐、叶酸或叶酸可药用盐的活性代谢产物和可在体内代谢和/或生成叶酸的物质中的至少一种。
4.根据权利要求3所述的组合物，其特征在于，所述组合物按重量份计，包括：奶粉60份、乳铁蛋白0.1份、牛初乳8份、酵母β-葡聚糖2份、浓缩乳清蛋白15份、焦磷酸铁0.4份和叶酸类化合物0.004份。
5.一种增强免疫力的功能性食品，包括权利要求1-4任意一项所述的组合物、调味物质和助流剂。
6.根据权利要求5所述的功能性食品，其特征在于，所述调味物质为甜味剂、酸味剂、果粉、燕麦、植物油粉和香精中的至少一种。
7.根据权利要求6所述的功能性食品，其特征在于，所述甜味剂为葡萄糖、木糖醇、果糖、麦芽糖醇和赤藓糖醇中的至少一种；所述酸味剂为柠檬酸、柠檬酸钠、苹果酸和乳酸中的至少一种；所述果粉为草莓粉、苹果粉、葡萄粉、柠檬粉、水蜜桃粉和椰子粉中的至少一种。
8.根据权利要求5所述的功能性食品，其特征在于，所述助流剂为二氧化硅、硅酸钙和磷酸三钙中的至少一种。
9.一种权利要求1-4任意一项所述的组合物在增强免疫力功能性食品中的应用。
10.一种制备权利要求5-8任意一项所述的功能性食品的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将奶粉、浓缩乳清蛋白和调味物质分别过24目筛，制得奶粉A、浓缩乳清蛋白B和调味物质C，备用；
(2)将乳铁蛋白、酵母β-葡聚糖、焦磷酸铁、叶酸类化合物和助流剂预混，过24目筛，得预混粉1；
(3)将预混粉1和牛初乳预混，过24目筛，得预混粉2；
(4)依次向三维混合机中加入(1-3)/4配方量的奶粉A、浓缩乳清蛋白B、预混粉2、调味物质C和(1-3)/4配方量的奶粉A，混合30min，得所述的功能性食品。
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