CN110150384A

CN110150384A - 乳铁蛋白粉及其制备方法

Info

Publication number: CN110150384A
Application number: CN201910454952.3A
Authority: CN
Inventors: 唐晓峰; 夏嫔娜
Original assignee: Shandong Yifeng Economic And Trade Co Ltd
Current assignee: Shandong Yifeng Economic And Trade Co Ltd
Priority date: 2019-05-29
Filing date: 2019-05-29
Publication date: 2019-08-23

Abstract

本发明属于食品技术领域，具体涉及一种乳铁蛋白粉，还涉及上述蛋白粉的制备方法。该蛋白粉中主料至少包含：浓缩乳清蛋白2～15份、牛初乳15～25份、N‑乙酰神经氨酸0.02～0.2份、牛磺酸0.01～0.04份、乳铁蛋白2～8份、酵母β‑葡聚糖4～8份、水解乳清蛋白粉40～60份。本发明中，浓缩乳清蛋白、燕窝酸、酵母β‑葡聚糖的加入，增强了细胞的免疫功能，酵母β‑葡聚糖持续刺激免疫系统处于高度活性状态，从而行使免疫功能；酵母β‑葡聚糖与燕窝酸及浓缩乳清蛋白具有协同作用，三者联合使用时，其刺激巨噬细胞的作用能够增加对细菌及病毒的抵抗作用；同时酵母β‑葡聚糖的加入，尤其是结合燕窝酸共同降低了乳清蛋白的致敏性。

Description

乳铁蛋白粉及其制备方法

技术领域

本发明属于食品技术领域，具体涉及一种乳铁蛋白粉，还涉及上述蛋白粉的制备方法。

背景技术

CN106072670A披露了一种盐藻复合牛乳铁蛋白粉，其特征在于，包括以下质量份数的原料：30-60份牛乳铁蛋白粉、30-60份盐藻粉、0.01-0.5份维生素E。将所述牛乳铁蛋白、盐藻粉、维生素E进行混合；将所述混合进行干燥，得产物；所述牛乳铁蛋白为经纯化处理的纯化牛乳铁蛋白；所述纯化牛乳铁蛋白通过以下步骤制备：取100％纯度牛乳干粉，加入重量比为1:20～ 50的蒸馏水，胶体磨研磨至状均匀，用50～150目滤网进行过滤，加热至60～100℃，保温30 ～60分钟进行去腥处理，冷却至30～60℃，调节pH在6.0～11.0，再添加牛乳干品重量3～ 10％的蛋白酶，在40～60℃下酶解2～8小时，升温至80～90℃，保温15～30分钟灭酶杀菌，冷却至10～40℃，即得牛乳多肽酶解液；将牛乳多肽酶解液经强阳离子交换层析SP Sepharose Big Bead进行纯化，纯化过程中，预先用缓冲溶液A平衡3-4倍柱体积直至基线平衡，然后采用两段式分步洗脱；采用含有 15-30vo1.％缓冲溶液B的混合溶液洗脱3-7倍柱体积，再用10vo1.％缓冲溶液B洗脱2-5倍柱体积，洗脱流速2-5mL/min；上步骤得到的洗脱液进行超滤浓缩，经0.22μm膜过滤并采用Superdex200进一步纯化；凝胶柱用缓冲液10-20mmol/L、pH值为7.0-8.0的磷酸盐缓冲溶液进行平衡至基线稳定后进行洗脱，流速为0.2-1mL/min，得到纯化牛乳铁蛋白。

上述的方法所获得的一种盐藻复合牛乳铁蛋白粉，其具有提高免疫力、抗疲劳，降低胆固醇的盐藻复合牛乳铁蛋白粉及其制备方法。其所未涉及到的问题是：牛乳过敏的问题。而牛乳是引起食物过敏的八大类食物之一。据报道，有8%的婴儿和2%的成年人对牛乳过敏。

虽然乳清蛋白粉中所含的乳清蛋白相对于牛乳已经具有较明显的低致敏性，但是南昌大学的熊鼎在硕士论文中披露：采用HPLC-MS/MS鉴定出酶解产物残留10个致敏表位，它们分别是乳白蛋白中的3个肽，由此提示，乳清蛋白水解后的水解产物依然具有一定的致敏性。而且乳铁蛋白粉中不可避免要使用牛乳或牛初乳，也是一个过敏源。

因此，需要对上述的技术问题进行改进，发明一种既具有良好的提高免疫且给人体提供丰富营养的蛋白粉，又能使该蛋白粉具有非常低的致敏性。

发明内容

为了解决上述的技术问题，本发明提供了一种既具有良好的提高免疫且给人体提供丰富营养又能使该蛋白粉具有非常低的致敏性的含乳铁蛋白的蛋白粉；

本发明还提供了上述的乳铁蛋白粉的制备方法。

本发明所提供的乳铁蛋白粉，主料至少包含：浓缩乳清蛋白，浓缩乳清蛋白中至少含有浓缩乳清蛋白中含乳铁蛋白、免疫球蛋白和乳脂球膜。

具体的，该蛋白粉中，乳铁蛋白含量为2～8%、免疫球蛋白含量为2～7%，乳脂球膜含量为3～9%，以上含量为重量百分比。

还包括牛初乳。

牛初乳具有重量百分比大于25%的免疫球蛋白。

还包括N-乙酰神经氨酸、牛磺酸、乳铁蛋白、酵母β-葡聚糖、水解乳清蛋白粉中的至少一种。

上述的乳铁蛋白粉，包括：浓缩乳清蛋白、牛初乳、N-乙酰神经氨酸、牛磺酸、乳铁蛋白、酵母β-葡聚糖、水解乳清蛋白粉；乳铁蛋白含量为2～8%、免疫球蛋白含量为2～7%，乳脂球膜含量为3～9%，以上含量为重量百分比。

上述的乳铁蛋白粉，各原料的重量份数如下：

浓缩乳清蛋白2～15份、牛初乳15～25份、N-乙酰神经氨酸0.02～0.2份、牛磺酸 0.01～0.04份、外加乳铁蛋白 2～8份、酵母β-葡聚糖4～8份、水解乳清蛋白粉40～60份。

上述的乳铁蛋白粉的制备方法，包括以下的步骤：

（1）取2～15份的浓缩乳清蛋白、40～60份的水解乳清蛋白粉、2～8份外加乳铁蛋白充分混合，于20～30℃下以20～40r/min的转速搅拌20～40min；

（2）将（1）中的物料置于80~90℃下灭菌5～10min；

（3）取0.01～0.04份牛磺酸、0.02～0.2份N-乙酰神经氨酸，混合均匀，于80~90℃下灭菌5～10min；

（4）在（2）中搅拌匀的的料中加入（3）中的物料，混合，再加入牛初乳15～25份，以以20～40r/min的转速搅拌20～40min；

（5）浓缩：将（4）中的物料浓缩至其蛋白含量为30～50 mg /mL；

（6）喷雾干燥：其条件是：进风温度150 ～170℃，进料速率600～700 mL /h ，获得乳铁蛋白粉。

优选的，上述的乳铁蛋白粉的制备方法，包括以下的步骤：

（1）取10份的浓缩乳清蛋白、50份的水解乳清蛋白粉、6份外加乳铁蛋白充分混合，于25℃下以30r/min的转速搅拌30min；

（2）将（1）中的物料置于85℃下灭菌8min；

（3）取0.03份牛磺酸、0.15份N-乙酰神经氨酸，混合均匀，于85℃下灭菌8min；

（4）在（2）中搅拌匀的的料中加入（3）中的物料，混合，再加入牛初乳20份，以以35r/min的转速搅拌30min；

（5）浓缩：将（4）中的物料浓缩至其蛋白含量为40 mg /mL；

（6）喷雾干燥：其条件是：进风温度160℃，进料速率650 mL /h ，获得乳铁蛋白粉。

内源性乳铁蛋白和外加乳铁蛋白均为乳铁蛋白，但是两者的来源不同，内源性乳铁蛋白为浓缩乳清蛋白中的乳铁蛋白，而外加乳铁蛋白为补充到蛋白粉中的乳铁蛋白，为了便于区分，所以以上述的方式来命名。

本发明的有益效果在于：

（1）本发明的产品采用了浓缩乳清蛋白，其本身含有内源性乳铁蛋白、免疫球蛋白、乳脂球膜，可增强人体的免疫力；进而本发明还补充有外源性的外加乳铁蛋白，更进一步的增加了乳铁蛋白的含量；而在口服乳蛋白临床应用中，乳铁蛋白具有抗感染的作用，还对皮肤感染口腔念珠菌病及流感病毒肺炎具有抗感染的作用；

（2）本发明还采用了燕窝酸（N-乙酰神经氨酸），其本身的作用是提供人体所需的可促进婴幼儿大脑和神经组织的发育，提升记忆力和智力，燕窝酸不會被消化道的酶降解，它所形成的糖蛋白可阻断病原体（病毒，细菌及细菌毒素）对上皮细胞的附着，能夠提高细胞辨别能力、霍乱毒素解毒、预防病理性大肠杠菌的感染、调控血液蛋白质的半衰期，从而有效提高人体免疫机能；同时燕窝可以提高肠道对于维生素及矿物质的吸收能力；

（3）酵母β-葡聚糖的加入，增强了细胞的免疫功能，酵母β-葡聚糖持续刺激免疫系统处于高度活性状态，从而行使免疫功能；酵母β-葡聚糖与燕窝酸及浓缩乳清蛋白具有协同作用，三者联合使用时，其刺激巨噬细胞的作用能够增加对细菌及病毒的抵抗作用；

（4）本发明中，酵母β-葡聚糖的加入，尤其是结合燕窝酸共同降低了乳清蛋白的致敏性。

具体实施方式

为了能使本领域技术人员更好的理解本发明，现结合具体实施方式对本发明进行更进一步的阐述。

实施例1

（1）取10份的浓缩乳清蛋白、50份的水解乳清蛋白粉、6份外加乳铁蛋白充分混合，于25℃下以30r/min的转速搅拌30min；其中，浓缩乳清蛋白中的内源性乳铁蛋白含量为成品蛋白粉总重量的4%、免疫球蛋白含量为3%，乳脂球膜含量为3%，以上含量为重量百分比；

（2）将（1）中的物料置于85℃下灭菌8min；

（4）在（2）中搅拌匀的的料中加入（3）中的物料，混合，再加入牛初乳20份，以以35r/min的转速搅拌30min；牛初乳具有重量百分比大于25%重量百分含量的免疫球蛋白；

（5）浓缩：将（4）中的物料浓缩至其蛋白含量为40 mg /mL；

实施例2

（1）取12份的浓缩乳清蛋白、55份的水解乳清蛋白粉、8份外加乳铁蛋白充分混合，于25℃下以40r/min的转速搅拌20min；

（2）将（1）中的物料置于80℃下灭菌5min；

（5）浓缩：将（4）中的物料浓缩至其蛋白含量为50 mg /mL；

实施例3

（1）取15份的浓缩乳清蛋白、60份的水解乳清蛋白粉、5份外加乳铁蛋白充分混合，于25℃下以30r/min的转速搅拌30min；

（2）将（1）中的物料置于90℃下灭菌5min；

（4）在（2）中搅拌匀的的料中加入（3）中的物料，混合，再加入牛初乳15份，以以30r/min的转速搅拌30min；

（5）浓缩：将（4）中的物料浓缩至其蛋白含量为40 mg /mL；

实施例4

（1）取8份的浓缩乳清蛋白、45份的水解乳清蛋白粉、5份外加乳铁蛋白充分混合，于25℃下以35r/min的转速搅拌30min；

（2）将（1）中的物料置于80℃下灭菌6min；

（3）取0.04份牛磺酸、0.12份N-乙酰神经氨酸，混合均匀，于85℃下灭菌6min；

（4）在（2）中搅拌匀的的料中加入（3）中的物料，混合，再加入牛初乳25份，以以35r/min的转速搅拌30min；

（5）浓缩：将（4）中的物料浓缩至其蛋白含量为35 mg /mL；

实施例5

本发明产品乳铁蛋白粉对大肠杆菌的抑制性测定：

采用牛津杯法测定：在培养皿中加入20毫升肉汤琼脂培养基，待凝固且灭菌之后，用灭菌吸管吸取0.4mL（10^-5-10^-6）大肠杆菌菌液涂布于培养皿上，在每个培养皿内等距离放置2个或者是3个牛津杯，每个牛津杯中加入50微升的实施例1 产品不同稀释浓度的蛋白粉溶液，室温扩散5-8小时，然后在37℃恒温培养24小时，观察牛津周围是否有明显的抑菌圈并测定抑菌圈的直径；

结果发现，牛津周围有较明显的抑菌圈，该抑菌圈的直径达到了3mm左右。

实施例6

关于免疫方面的测定：

以5周龄的昆明大鼠为实验动物，建立大鼠免疫低下模型，每天以不同剂量的实施例1组产品灌胃，同时设立正常组和空白灌胃生理盐水的对照组，连续用药 14天后注射环磷酰胺，继续灌胃至环磷酰胺（80．kg^-1）注射后第28天进行实验。末次给药后次日，检测蛋白粉对免疫功能低下小鼠外周血CD³⁺ 、CD⁴⁺的影响，以及小鼠外周血TNF-α及IFN-γ含量；

表1 乳铁蛋白粉对免疫功能低下小鼠外周血CD³⁺ 、CD⁴⁺的影响

表2本发明的乳铁蛋白粉对免疫功能低下小鼠外周血TNF-α及IFN-γ含量的影响

注：与模型组比较，P＜0.01

结果表明，本发明的蛋白粉能提高环磷酰胺致免疫功能低下模型小鼠外周血CD3+、CD4+等细胞因子的数量以及外周血TNF-α及IFN-γ的含量，促进脾脏组织TNF-α蛋白的表达，其作用具有明显的剂量依赖性，因此，其对于小鼠免疫效果显著。

CD³⁺是外周血中代表成熟T淋巴细胞最好的标志物之一，在对蛋白抗原的免疫反应中，CD⁴⁺细胞可起到促进、抑制或调节作用，CD⁴⁺细胞通过靶细胞接触释放信号给靶细胞和分泌细胞因子而执行多种免疫调节作用。因此，本发明采用了环磷酰胺连续注射，再以一定周期适时强化的方法，建立了免疫功能低下模型。结果发现，本发明的乳铁蛋白粉比较能明显的提高外周血CD³⁺ 、CD⁴⁺细胞因子的数量，且高、中剂量组更明显。

实施例7

本发明的产品乳铁蛋白粉致敏性研究：

选择24只昆明小鼠，周龄为20g左右，随机分成3组：

1组为：对照组 8只；2组为：牛初乳组8只；3组为实施例1实验组，8只；

小鼠适应环境7天后开始免疫，每组小鼠均灌胃注射致敏，每只灌胃0.5mL；1组中灌胃（10μg霍乱毒素加入0.5 mLPBS中），2组和3组分别灌胃0.5 mL的牛初乳和实施例1实验组的产品，两者的浓度分别是50mg/L；与10μg霍乱毒素混合。初次免疫7天后每隔1周免疫1次，共免疫3次，在4周后，进行激发实验，灌胃80 mg/mL的实施例1组中的产品，激发30分钟后采取摘眼球采血，-80℃保存备用；

表 3 小鼠灌胃激发后过敏症状评分表

小鼠过敏症状评分表：试验小鼠激发后，各实验组评分结果如下，其中空白组8只小鼠并无症状；1中出现4只小鼠出现搔抓鼻子周围和摩擦头部的症状，2只活动明显减少，剩下两只喘息；这说明，牛初乳过敏症状较明显；

2组中8只小鼠均无明显的症状；

表4 小鼠得分表

小鼠血浆中组胺水平检测

利用试剂盒测定小鼠血浆组胺水平，结果发现，1组相对于空白组和2组，其有显著性增加，p＜0.05，而空白组与1组对比，其无显著性差异；

2组中组胺释放水平比1组显著降低，这表明本发明的产品能有效的降低过敏反应，同时以上的实验也证实了1组中的牛乳过敏是引起过敏反应的主要原因。

从以上的实验可以看出，本发明的产品对于牛初乳的致敏性有良好的抑制作用。本发明的产品协同作用，使得乳铁蛋白粉具有了抗过敏这一功效。

Claims

1.乳铁蛋白粉，其特征在于，该蛋白粉中主料至少包含：浓缩乳清蛋白、牛初乳、N-乙酰神经氨酸、牛磺酸、乳铁蛋白、酵母β-葡聚糖、水解乳清蛋白粉。

2.如权利要求1所述的乳铁蛋白粉，其特征在于，各原料的重量份数如下：浓缩乳清蛋白2～15份、牛初乳15～25份、N-乙酰神经氨酸0.02～0.2份、牛磺酸 0.01～0.04份、乳铁蛋白 2～8份、酵母β-葡聚糖4～8份、水解乳清蛋白粉80～100份。

3.如权利要求1所述的乳铁蛋白粉，其特征在于，乳铁蛋白粉中所含的总的乳铁蛋白重量百分比为2～5%，所含的总的免疫球蛋白的重量百分比为2～5%。

4.如权利要求1所述的乳铁蛋白粉，其特征在于，乳铁蛋白粉具有20%重量百分比的粒径为0.1～0.2mm的颗粒，具有重量百分比为40%的粒径为0.25～0.4mm的颗粒。

5.如权利要求1所述的乳铁蛋白粉，其特征在于，浓缩乳清蛋白中含有乳铁蛋白、免疫球蛋白和乳脂球膜，三者的重量比例为：乳铁蛋白：免疫球蛋白：乳脂球膜=1～2：1～2：3～6。

6.如权利要求1所述的乳铁蛋白粉，其特征在于，浓缩乳清蛋白中含有乳铁蛋白、免疫球蛋白和乳脂球膜，三者的重量比例为：乳铁蛋白：免疫球蛋白：乳脂球膜=1：1：4。

7.如权利要求2所述的乳铁蛋白粉，其特征在于，牛初乳中具有重量百分比大于25%的免疫球蛋白。

8.如权利要求1所述的乳铁蛋白粉的制备方法，包括以下的步骤：

（1）取2～15份的浓缩乳清蛋白、80～100份的水解乳清蛋白粉、2～8份乳铁蛋白充分混合，于20～30℃下以20～40r/min的转速搅拌20～40min；

（2）将（1）中的物料置于80~90℃下灭菌5～10min；

（4）在（2）中搅拌匀的物料中加入（3）中的物料，混合，再加入牛初乳15～25份，以20～40r/min的转速搅拌20～40min；

（5）浓缩：将（4）中混合均匀的物料浓缩至其蛋白含量为30～50 mg /mL；

（6）喷雾干燥：其条件是：进风温度150～170℃，进料速率600～700 mL /h ，获得乳铁蛋白粉。

9.如权利要求1所述的乳铁蛋白粉的制备方法，包括以下的步骤：

（1）取10份的浓缩乳清蛋白、90份的水解乳清蛋白粉、3份乳铁蛋白充分混合，于25℃下以30r/min的转速搅拌30min；

浓缩乳清蛋白中，各原料的重量比为，乳铁蛋白：免疫球蛋白：乳脂球膜=1：1：4；

（2）将（1）中的物料置于85℃下灭菌8min；

（4）在（2）中搅拌匀的物料中加入（3）中的物料，混合，再加入牛初乳20份，以35r/min的转速搅拌30min；牛初乳中免疫球蛋白的重量百分比为25%左右；

（5）浓缩：将（4）中的物料浓缩至其蛋白含量为40 mg /mL；