CN109406679A - 一种高效液相色谱法测定沉香质量的检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于沉香质量检测技术领域,具体公开了一种高效液相色谱法测定沉香质量的检测方法,其包括色谱条件设置、对照品母液的制备、样品分析以及分析结果计算的操作步骤,采用本发明的检测方法能够一次性对沉香中的沉香四醇、6‑羟基‑2‑[2‑(4'‑甲氧基)苯乙基]色酮、6‑羟基‑2‑(2‑苯乙基)色酮、6,7‑二甲氧基‑2‑[2‑(4'‑甲氧基)苯乙基]色酮和6,7‑二甲氧基‑2‑(2‑苯乙基)色酮这五个色酮加以测定,有效增加了沉香质量检测的全面性,提高沉香质量测定的准确度,同时兼具操作简便、检测效率高的特点。
Description
技术领域
本发明属于沉香质量检测技术领域,特别涉及一种高效液相色谱法测定沉香质量的检测方法。
背景技术
沉香为瑞香科植物白木香Aquilariasinensis(Lour.)Gilg含有树脂的木材,主要分布在中国、日本、印度、中东、东南亚等国家。目前发现的瑞香科中有19种沉香属树种,但能产沉香的只有4中,分布为马来西亚沉香(Aquilaria malaccensis)、奇楠沉香(Aquilaria crassna)、土沉香(Aquilaria sinensis)和菲律宾沉香(Aquilariafilaria)。
沉香作为传统中药在我国使用悠久,临床上主要用于治疗肺心病、冠心病、脑溢血、胃寒、哮喘等疾病。沉香中的化学成分主要包括挥发油、2-(2-苯乙基)色酮类和三萜类;其中,2-(2-苯乙基)色酮类包括有沉香四醇、6-羟基-2-[2-(4′-甲氧基)苯乙基]色酮、6-羟基-2-(2-苯乙基)色酮、6,7-二甲氧基-2-[2-(4′-甲氧基)苯乙基]色酮、6,7-二甲氧基-2-(2-苯乙基)色酮等,是沉香中具有不同程度的抗菌、抗肿瘤、抗过敏等方面药理活性的化学成分。然而,近年来由于受到自然灾害和人为滥采滥伐的影响,沉香资源越来越匮乏,导致沉香价格节节攀升,同时劣质沉香和掺假沉香充斥市场,严重损害了消费者的利益。
随着科学技术的发展,现代化的分取检测方法同样被用来定性和定量检测沉香的质量,如基于色泽分取的图像梳理系统、基于化学成分分取的薄层色谱、红外光谱、气相色谱-质谱联用、高效液相色谱、x射线衍射光谱、傅里叶变换红外光谱等。其中,高效液相色谱由于其操作方便、分析速度快等特点,被人们广泛使用,2015年版《中国药典》更是首次将沉香四醇的含量测定作为质控指标,并用高效液相测色谱仪加以含量测定,以此判定沉香的质量。
然而,药典中仅采用沉香四醇这一质控指标就实现沉香质量的测定,以此使得沉香药材的质量评定较为片面,其所得的检测结果的精确度较低。
发明内容
针对现有技术存在的不足,本发明的目的在于提供一种高效液相色谱法测定沉香质量的检测方法,其将沉香中的沉香四醇、2-(2-苯乙基)色酮类包括有沉香四醇、6-羟基-2-[2-(4′-甲氧基)苯乙基]色酮、6-羟基-2-(2-苯乙基)色酮、6,7-二甲氧基-2-[2-(4′-甲氧基)苯乙基]色酮、6,7-二甲氧基-2-(2-苯乙基)色酮作为质控指标,并采用高效液相色谱法一步测定上述质控指标,有效增加了沉香质量检测的全面性,提高沉香质量测定的准确度,同时具有操作简便的特点。
为实现上述第一个目的,本发明提供了如下技术方案:
一种高效液相色谱法测定沉香质量的检测方法,包括以下步骤:
①、色谱条件设置
①-1、色谱柱:以十八烷基硅氧烷键合硅胶为填充剂;
①-2、柱温:30-38℃;
①-3、流动相:以水为流动相A相,以乙腈为流动相B;
①-4、流动相流速:0.5-1.0ml/min;
①-5、数据处理:外标法峰高定量;
①-6、线性梯度:
0-15min:85%-80%的A相+15%-20%的B相;
16-30min:80%-65%的A相+20%-35%的B相;
31-80min:65%-60%的A相+35%-40%的B相;
81-90min:10%的A相+90%的B相;
且0-30min时的检测波长为252nm,31-90min时的检测波长为231nm;
②、对照品母液的制备分别精密称取沉香四醇、6-羟基-2-[2-(4′-甲氧基)苯乙基]色酮、6-羟基-2-(2-苯乙基)色酮、6,7-二甲氧基-2-[2-(4′-甲氧基)苯乙基]色酮和6,7-二甲氧基-2-(2-苯乙基)色酮这五个色酮适量,用提取液溶解并定容,分别取适量混合,经滤膜过滤后得对照品母液;
③、样品分析
③-1、样品前处理:取沉香粉末适量,精密称定,按沉香粉末与提取液的料液重量比为1∶(30-60)加入提取液,超声提取0.8-1.2h,用称重法补偿溶剂损失,抽取溶液适量,经滤膜过滤后得供试品溶液;
③-2、测定:在步骤a的色谱条件下,精密吸取供试品溶液和对照品溶液,依次分别注入高效液相色谱仪中测定,按外标法-直接比较法以二者的峰高比计算沉香中五个色酮的含量;
④、分析结果计算沉香中五个色酮的含量皆按式(1)计算,
式中:
x-沉香中色酮含量,单位为%;
A1-供试品溶液测得的峰面积;
A2-对照品溶液测得的峰面积;
c-对照品溶液浓度,单位为mg/ml;
V-供试品定容体积,单位为mL;
r-色酮对照品的纯度,单位为%;
m-称取供试品的量,单位为mg。
本发明采用高效液相色谱法能够一次性对沉香中的沉香四醇、6-羟基-2-[2-(4′-甲氧基)苯乙基]色酮、6-羟基-2-(2-苯乙基)色酮、6,7-二甲氧基-2-[2-(4′-甲氧基)苯乙基]色酮和6,7-二甲氧基-2-(2-苯乙基)色酮这五个色酮加以测定,相对于药典中单一的对沉香四醇含量加以测定,本法能够有效增加沉香质量检测的全面性,提高沉香质量测定的准确度。
甲酸在洗脱除沉香四醇外的其他四个色酮时,甲酸会与该四个色酮发生反应,生成相应的色酮甲酸,进而影响色酮的检测结果,本发明采用水替代甲酸,能够有效避免色酮与甲酸之间的反应,而色酮本身能够较好的相容于乙腈的水溶液中,因此乙腈的水溶液足以将沉香中的五个色酮加以逐步洗脱,同时还能在一定程度上降低沉香质量检测中在流动相试剂方面的投入成本;
在洗脱沉香时,0-15min主要是对色谱柱加以清洗,以免上一次检测中的物质存在残留,从而减少其他因素的干扰,保证沉香洗脱的精确度;沉香四醇在16-30min被洗脱,其能有效吸收252nm的波长,随后由高效液相色谱仪获得相应的吸收峰值;
另外,6-羟基-2-[2-(4′-甲氧基)苯乙基]色酮、6-羟基-2-(2-苯乙基)色酮、6,7-二甲氧基-2-[2-(4′-甲氧基)苯乙基]色酮和6,7-二甲氧基-2-(2-苯乙基)色酮逐步在31-80min这个阶段被洗脱,而这四个色酮均能有效吸收231nm的波长,故将此时的检测波长更换为231nm,使得高效液相色谱仪能够准确的对四个色酮的吸收峰值加以测定;
由此,采用上述线性梯度的洗脱方式,能够精确的将上述提及的五个色酮含量逐一测定,相对于对单个色酮加以测定的方式,有效提高了沉香的质量检测效率。
本发明在检测沉香质量时,同时设置有对照品母液,有助于检测人员能够快速获知该检测方法对沉香中五个色酮的提取效果,从而保证其检测结果的准确性;
综上,采用本发明的检测方法能够有效增加沉香质量检测的全面性,使得沉香的质量测定具有良好的准确度,同时兼具操作简便、检测效率高的特点。
进一步地,步骤②和③中的提取液为甲醇。
通过采用上述技术方案,相较于乙醇等其他提取液,本发明优选甲醇作为提取液,其能够同时将沉香中的沉香四醇、6-羟基-2-[2-(4′-甲氧基)苯乙基]色酮、6-羟基-2-(2-苯乙基)色酮、6,7-二甲氧基-2-[2-(4′-甲氧基)苯乙基]色酮和6,7-二甲氧基-2-(2-苯乙基)色酮进行提取,且能够保证其良好的提取效果,同时对色酮具有一定的稳定效果。
进一步地,步骤③中,所述沉香粉末与甲醇的料液重量比为1∶50。
进一步地,步骤③中,所述甲醇的超声提取时间为1.0h。
进一步地,步骤③中,所述沉香粉末需过40目的筛网。
通过采用上述技术方案,过40目筛网的沉香粉末其粒度适中,以此在保证沉香中较低的色酮损耗率,同时又能使得沉香中的色酮能够被快速提取;当沉香粉末与甲醇的料液重量比为1∶50、超声提取时间为1.0h时,采用上述高效液相色谱法检测所得的色酮含量几乎无差异,由此可以验证得出沉香粉末在上述条件中能够被有效提取,提高了本发明的检测准确度。
进一步地,步骤①中,色谱柱的规格为4.6mm×250mm,5μm。
进一步地,步骤①中,所述柱温为35℃。
进一步地,步骤①中,所述流动相流速为0.8ml/min。
通过采用上述技术方案,规格为4.6mm×250mm、5μm的色谱柱在35℃、0.8ml/min的条件下洗脱本发明中的五个色酮时,色酮能够在该色谱柱中较好的进行分离,使得不同色酮的吸收峰之间的界限分明,有助于更好的对每个色酮的含量加以测定,进而使得本发明的检测结果更为准确可靠。
进一步地,步骤②中,五个色酮分别经提取液溶解并定容后,密封保存于4℃的冰箱中备用。
通过采用上述技术方案,在实际操作过程中,五个色酮存在提前配制的情况,将其密封保存于4℃的冰箱中能够有效减缓色酮的挥发或者变质,同时以免色酮因温度过度而出现结晶析出或结冰的可能性,从而在保证色酮良好的性能的同时,延长了色酮的保存时间,为检测人员争取更多的检测准备时间,减少检测结果在人工操作上的误差。
进一步地,步骤②中的甲醇以及步骤③中的提取液在使用前均需经0.22μm的微孔滤膜过滤并脱气处理。
通过采用上述技术方案,0.22μm的微孔滤膜能够有效过滤掉提取液中的微生物和颗粒,其除菌率达到99.99%,以此保证提取液的纯净度,减少微生物和颗粒对色酮的干扰或破坏;脱气处理则能够减少提取液中的含氧量,从而有效减缓色酮的氧化,保证提取液对色酮良好的提取效果。
综上所述,本发明具有以下有益效果:
1、本发明中流动相使用水替换甲酸,同时结合相应的线性梯度,沉香中的五个色酮由此被依次洗脱,有效增加了沉香质量检测的全面性,使得沉香的质量测定具有良好的准确度,同时兼具操作简便、检测效率高的特点;
2、本发明中使用甲醇作为提取液,同时沉香粉末需经40目筛网、沉香粉末与甲醇的料液重量比为1∶50、超声提取时间为0.8-1.2h,以此对沉香中的色酮加以有效提取,同时增加了色酮的稳定性;
3、本发明通过设置色谱柱的规格、柱温以及洗脱速度,以此有助于色酮在洗脱时能够较好的进行分离,使得不同色酮的吸收峰之间的界限分明;
4、本发明中色酮经过提取液溶解定容后保存于4℃的冰箱中,能够较好的延长其使用时间;此外,提取液使用0.22μm的微孔滤膜加以过滤后进行脱气处理,从而保证提取液对色酮良好的提取效果。
附图说明
图1为实施例1中对照品母液的色谱图;
图2为实施例1中供试品溶液的色谱图;
图3为对比例1中对照品母液的色谱图;
图4为对比例1中供试品溶液的色谱图。
具体实施方式
以下结合附图对本发明作进一步详细说明。
1、仪器和试剂
1.1、高效液相色谱仪购自北京科益恒达科技有限公司的安捷伦1260型号;天平为Sartorius电子天平,型号为QUINTIX125D-1CN,精度为0.01mg/0.1mg;
1.2、乙腈、甲醇、甲酸均为分析纯;水为重蒸水;沉香四醇、6-羟基-2-[2-(4′-甲氧基)苯乙基]色酮、6-羟基-2-(2-苯乙基)色酮、6,7-二甲氧基-2-[2-(4′-甲氧基)苯乙基]色酮、6,7-二甲氧基-2-(2-苯乙基)色酮均购自成都普思生物科技股份有限公司,其纯度≥99%;
沉香由广州中医药大学中药资源教研室徐鸿华教授鉴定为瑞香科植物白木香Aquilariasinensis(Lour.)Gilg含有树脂的木材;该沉香中沉香四醇的含量采用2015版《中国药典》第一部中记载的检测方法测定,其含量为2.31μg/mg;6-羟基-2-[2-(4′-甲氧基)苯乙基]色酮和6-羟基-2-(2-苯乙基)色酮的含量采用陈亚等,时珍国医国药,2007(7):1697-1698中记载的检测方法测定,其含量分别为1.10μg/mg和1.32μg/mg;6,7-二甲氧基-2-[2-(4′-甲氧基)苯乙基]色酮和6,7-二甲氧基-2-(2-苯乙基)色酮的含量采用杨林等,中草药,第47卷第23期2016(12):4137-4140中记载的检测方法测定,其含量分别为0.82μg/mg和1.90μg/mg。
2、实施例
2.1、实施例1
一种高效液相色谱法测定沉香质量的检测方法,包括以下步骤:
①、色谱条件设置
①-1、色谱柱:以十八烷基硅氧烷键合硅胶为填充剂,具体为Agilent TC-C18(2)柱,其规格为4.6mm×250mm,5μm;
①-2、柱温:35℃;
①-3、流动相:以水为流动相A相,以乙腈为流动相B;
①-4、流动相流速:0.8ml/min;
①-5、数据处理:外标法峰高定量;
①-6、线性梯度:
0-15min:85%的A相+15%的B相;
16-30min:80%的A相+20%的B相;
31-80min:65%的A相+35%的B相;
81-90min:10%的A相+90%的B相;
且0-30min时的检测波长为252nm,31-90min时的检测波长为231nm;
②、对照品母液的制备分别精密称取0.30mg的沉香四醇、0.30mg的6-羟基-2-[2-(4′-甲氧基)苯乙基]色酮、0.30mg的6-羟基-2-(2-苯乙基)色酮、0.30mg的6,7-二甲氧基-2-[2-(4′-甲氧基)苯乙基]色酮和0.30mg的6,7-二甲氧基-2-(2-苯乙基)色酮这五个色酮,用经0.22μm微孔滤膜过滤并脱气处理后的甲醇溶解并定容至5ml,密封保存于4℃的冰箱中备用,随后分别取1ml混合,形成1ml含60μg色酮的混合溶液,经0.22μm的微孔滤膜过滤后得对照品母液;
③、样品分析
③-1、样品前处理:将沉香加以研磨,取研磨所得的过40目筛网的沉香粉末适量,精密称定1.00mg,加入50ml的经0.22μm微孔滤膜过滤并脱气处理的甲醇,超声提取1h,用称重法补偿溶剂损失,抽取溶液适量,经0.22μm的微孔滤膜过滤后得供试品溶液;
③-2、测定:在步骤a的色谱条件下,精密吸取供试品溶液和对照品溶液各10μl,依次分别注入高效液相色谱仪中测定,按外标法-直接比较法以二者的峰高比计算沉香中五个色酮的含量;
④、分析结果计算沉香中五个色酮的含量皆按式(1)计算,
式中:x-沉香中色酮含量,单位为%;
A1-供试品溶液测得的峰面积;
A2-对照品溶液测得的峰面积;
c-对照品溶液浓度,单位为mg/ml;
V-供试品定容体积,单位为mL;
r-色酮对照品的纯度,单位为%;
m一称取供试品的量,单位为mg。
上述检测方法的色谱图参见图1和图2,由图1和与2可以看出,供试品色谱中在与对照品相应的位置上,有清晰、独立的吸收峰,由此可得,本实施例中的提取液对沉香中五个色酮的提取效果优良。
对上述检测方法进行如下性能试验,其试验结果参见下表一,其中沉香四醇、6-羟基-2-[2-(4′-甲氧基)苯乙基]色酮、6-羟基-2-(2-苯乙基)色酮、6,7-二甲氧基-2-[2-(4′-甲氧基)苯乙基]色酮、6,7-二甲氧基-2-(2-苯乙基)色酮依次记为色酮A、色酮N、色酮K、色酮M和色酮E,另外,下文中出现的色酮A、色酮N、色酮K、色酮M和色酮E同上所述。
表一
参见上表一,本实施例中,色酮A、色酮N、色酮K、色酮M和色酮E的线性回归方程的R2>0.999、日间精密度RSD%≤1.54、日内精密度RSD%≤1.58、稳定性RSD%≤0.60、重现性RSD%≤2.48、回收率RSD%≤1.97,由此可以验证本实施在检测供试品溶液时具有优良的精密度、稳定性、重现性以及较高的回收率,以此能够一次性对沉香中的沉香四醇、6-羟基-2-[2-(4′-甲氧基)苯乙基]色酮、6-羟基-2-(2-苯乙基)色酮、6,7-二甲氧基-2-[2-(4′-甲氧基)苯乙基]色酮和6,7-二甲氧基-2-(2-苯乙基)色酮这五个色酮加以测定,有效增加了沉香质量检测的全面性,使得沉香的质量测定具有良好的准确度。
2.2、实施例2
与实施例1的不同之处在于,本实施例的步骤①中,柱温为30℃;流动相流速为0.5ml/min;线性梯度为:
0-15min:80%的A相+20%的B相;
16-30min:65%的A相+35%的B相;
31-80min:60%的A相+40%的B相;
81-90min:10%的A相+90%的B相;
本实施例的步骤③中,甲醇的添加量为30ml,且甲醇对沉香粉末的提取时间为0.8h。
2.3、实施例3
与实施例1的不同之处在于,本实施例中,步骤①的色谱条件中,柱温为38℃;流动相流速为1.0ml/min;线性梯度为:
0-15min:82%的A相+18%的B相;
16-30min:70%的A相+30%的B相;
31-80min:65%的A相+35%的B相;
81-90min:10%的A相+90%的B相;
本实施例的步骤③中,甲醇的添加量为60ml,且甲醇对沉香粉末的提取时间为1.2h。
2.4、实施例4
与实施例1的不同之处在于,本实施例中,步骤①的色谱条件中,柱温为35℃;流动相流速为0.8ml/min;线性梯度为:
0-15min:85%的A相+15%的B相;
16-30min:65%的A相+35%的B相;
31-80min:65%的A相+35%的B相;
81-90min:10%的A相+90%的B相;
本实施例的步骤③中,甲醇对沉香粉末的提取时间为1.2h。
2.5、实施例5
与实施例1的不同之处在于,本实施例中,提取液选用乙醇,即使用乙醇溶解沉香四醇、6-羟基-2-[2-(4′-甲氧基)苯乙基]色酮、6-羟基-2-(2-苯乙基)色酮、6,7-二甲氧基-2-[2-(4′-甲氧基)苯乙基]色酮和6,7-二甲氧基-2-(2-苯乙基)色酮,同样使用乙醇对沉香粉末超声提取1h。
3、实施例1-实施例5的比较采用实施例1-实施例5的检测方法测定沉香粉末中5个色酮含量,其检测结果以及该沉香中各色酮的实际含量参见表二。
表二
参见上表二,实施例1检测所得的各色酮含量与该对应色酮的实际含量最为接近,因此实施例1为优选实施例。
而实施例2-实施例5检测所得的色酮含量均在检测拨动范围内,由上可以得到,当色谱柱的柱温在30-38℃,流动相流速为0.8-1.2ml/min,线性梯度为0-15min:85%-80%的A相+15%-20%的B相、16-30min:80%-65%的A相+20%-35%的B相、31-80min:65%-60%的A相+35%-40%的B相、81-90min:10%的A相+90%的B相,沉香粉末与提取液的料液重量比为1∶(30-60)、提取时间为0.8-1.2h时,均能准确的一次性检测出沉香中的五个色酮含量,有效增加了沉香质量检测的全面性,同时还能在五个色酮都需进行含量测定的前提上有效提高了沉香的检测效率。另外,实施例5检测所得的各色酮含量与该对应色酮的实际含量差值明显大于实施例1的含量差值,由此可以得出,甲醇作为提取液在本发明中的提取效果明显优于乙醇,因此本发明中优选甲醇作为提取液。
4、对比例
4.1、对比例1
与实施例1的不同之处在于,本对比例使用0.1%的甲酸溶液作为流动相A。
上述检测方法的色谱图参见图3和图4,由图3和图4可以看出,供试品色谱中在与对照品相应的位置上,本对比例的吸收峰存在粘连的状况,由此可得,本对比例中的甲酸对沉香中五个色酮的分离效果较差。
对上述检测方法进行如下性能试验,其试验结果参见下表三。
表三
参见上表三,将实施例1与对比例1的性能试验结果进行比较,对比例1中,色酮A、色酮N、色酮K、色酮M和色酮E的线性回归方程的R2>0.992,明显低于实施例1中的R2>0.998;其日间精密度RSD%≤3.63、日内精密度RSD%≤3.06,明显高于实施例1中的日间精密度RSD%≤1.54、日内精密度RSD%≤1.58;其稳定性RSD%≤2.01、重现性RSD%≤3.60、回收率RSD%≤3.26,同样明显高于实施例1中的稳定性RSD%≤0.60、重现性RSD%≤2.48、回收率RSD%≤1.97。
由此可以得到,本发明采用水作为流动相A比对比例采用甲酸作为流动相A具有更好的检测稳定性、精确性以及重现性,同时还能保证沉香中的色酮含量具有较高的回收率,使得沉香的质量测定具有良好的准确度。
综上,本发明有效增加了沉香质量检测的全面性,使得沉香的质量测定具有良好的准确度,同时兼具操作简便、检测效率高的特点。
本具体实施例仅仅是对本发明的解释,其并不是对本发明的限制,本领域技术人员在阅读完本说明书后可以根据需要对本实施例做出没有创造性贡献的修改,但只要在本发明的权利要求范围内都受到专利法的保护。
Claims (10)
1.一种高效液相色谱法测定沉香质量的检测方法,其特征在于,包括以下步骤:
①、色谱条件设置
①-1、色谱柱:以十八烷基硅氧烷键合硅胶为填充剂;
①-2、柱温:30-38℃;
①-3、流动相:以水为流动相A相,以乙腈为流动相B;
①-4、流动相流速:0.5-1.0ml/min;
①-5、数据处理:外标法峰高定量;
①-6、线性梯度:
0-15min:85%-80%的A相+15%-20%的B相;
16-30min:80%-65%的A相+20%-35%的B相;
31-80min:65%-60%的A相+35%-40%的B相;
81-90min:10%的A相+90%的B相;
且0-30min时的检测波长为252nm,31-90min时的检测波长为231nm;
②、对照品母液的制备
分别精密称取沉香四醇、6-羟基-2-[2-(4′-甲氧基)苯乙基]色酮、6-羟基-2-(2-苯乙基)色酮、6,7-二甲氧基-2-[2-(4′-甲氧基)苯乙基]色酮和6,7-二甲氧基-2-(2-苯乙基)色酮这五个色酮适量,用提取液溶解并定容,分别取适量混合,经滤膜过滤后得对照品母液;
③、样品分析
③-1、样品前处理:取沉香粉末适量,精密称定,按沉香粉末与提取液的料液重量比为1∶(30-60)加入提取液,超声提取0.8-1.2h,用称重法补偿溶剂损失,抽取溶液适量,经滤膜过滤后得供试品溶液;
③-2、测定:在步骤a的色谱条件下,精密吸取供试品溶液和对照品溶液,依次分别注入高效液相色谱仪中测定,按外标法-直接比较法以二者的峰高比计算沉香中五个色酮的含量;
④、分析结果计算
沉香中五个色酮的含量皆按式(1)计算,
式中:
x-沉香中色酮含量,单位为%;
A1-供试品溶液测得的峰面积;
A2-对照品溶液测得的峰面积;
c-对照品溶液浓度,单位为mg/ml;
V-供试品定容体积,单位为mL;
r-色酮对照品的纯度,单位为%;
m-称取供试品的量,单位为mg。
2.根据权利要求1所述的一种高效液相色谱法测定沉香质量的检测方法,其特征在于,步骤②和③中的提取液为甲醇。
3.根据权利要求2所述的一种高效液相色谱法测定沉香质量的检测方法,其特征在于,步骤③中,所述沉香粉末与甲醇的料液重量比为1∶50。
4.根据权利要求2或3所述的一种高效液相色谱法测定沉香质量的检测方法,其特征在于,步骤③中,所述甲醇的超声提取时间为1.0h。
5.根据权利要求1所述的一种高效液相色谱法测定沉香质量的检测方法,其特征在于,步骤③中,所述沉香粉末需过40目的筛网。
6.根据权利要求1所述的一种高效液相色谱法测定沉香质量的检测方法,其特征在于,步骤①中,色谱柱的规格为4.6mm×250mm,5μm。
7.根据权利要求1所述的一种高效液相色谱法测定沉香质量的检测方法,其特征在于,步骤①中,所述柱温为35℃。
8.根据权利要求1所述的一种高效液相色谱法测定沉香质量的检测方法,其特征在于,步骤①中,所述流动相流速为0.8ml/min。
9.根据权利要求1所述的一种高效液相色谱法测定沉香质量的检测方法,其特征在于,步骤②中,五个色酮分别经提取液溶解并定容后,密封保存于4℃的冰箱中备用。
10.根据权利要求1所述的一种高效液相色谱法测定沉香质量的检测方法,其特征在于,步骤②中的甲醇以及步骤③中的提取液在使用前均需经0.22μm的微孔滤膜过滤并脱气处理。
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