CN109385381B - 一种泌尿生殖道支原体双相培养基 - Google Patents

一种泌尿生殖道支原体双相培养基 Download PDF

Info

Publication number
CN109385381B
CN109385381B CN201811371972.6A CN201811371972A CN109385381B CN 109385381 B CN109385381 B CN 109385381B CN 201811371972 A CN201811371972 A CN 201811371972A CN 109385381 B CN109385381 B CN 109385381B
Authority
CN
China
Prior art keywords
medium
container
fluid nutrient
nutrient medium
culture
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201811371972.6A
Other languages
English (en)
Other versions
CN109385381A (zh
Inventor
廖爱美
范立飞
张金蓬
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Shandong Heng Chen Biotechnology Co Ltd
Original Assignee
Shandong Heng Chen Biotechnology Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Shandong Heng Chen Biotechnology Co Ltd filed Critical Shandong Heng Chen Biotechnology Co Ltd
Priority to CN201811371972.6A priority Critical patent/CN109385381B/zh
Publication of CN109385381A publication Critical patent/CN109385381A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN109385381B publication Critical patent/CN109385381B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/02—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
    • C12Q1/04—Determining presence or kind of microorganism; Use of selective media for testing antibiotics or bacteriocides; Compositions containing a chemical indicator therefor
    • C12Q1/045—Culture media therefor
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/195—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from bacteria
    • G01N2333/30—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from bacteria from Mycoplasmatales, e.g. Pleuropneumonia-like organisms [PPLO]

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

本发明公开一种泌尿生殖道支原体双相培养基，属于微生物检测领域。本发明培养基包括液体培养基和固体培养基两部分，固体培养基置于容器中，形成一个斜面，同时所述斜面的1/4‑1/2浸没在液体培养基中；培养基成分主要有酵母浸粉、牛心浸粉、大豆蛋白胨、氯化钠、磷酸氢二钾、硫酸锰、半胱氨酸盐酸盐、尿素、精氨酸、谷氨酰胺、马血清、DMEM液体培养基、丙酮酸钠、酚红指示剂、制霉素、青霉素以及琼脂；所述容器还包括一个可密封所述容器的内部空间的密封部件以及一个滤网，滤网内放置有二氧化碳发生片，在培养过程中可以吸收水汽从而释放二氧化碳，因此不再需要二氧化碳培养箱，整个过程操作简单，特异性高，易于实验室操作。

Description

一种泌尿生殖道支原体双相培养基
技术领域
本发明属于微生物检测领域，具体涉及一种泌尿生殖道支原体培养基。
背景技术
支原体，又名霉形体，是目前发现的一类大小介于病毒与细菌之间、无细胞壁、呈高度多形性、能通过滤菌器的最简单的原核生物之一。目前已发现的寄居于人体的支原体至少16种，其中7种为条件致病菌，而又以这7种中的人型支原体(Mh)和解脲支原体(Uu)最为常见，能在约70％的性活跃人群的泌尿生殖系统中检测到。泌尿生殖道支原体作为导致非淋菌性尿道炎及宫颈炎的第二大致病菌，约有20-30％的非淋菌性尿道炎是由Mh及Uu感染引起。该细菌感染甚至还可以引起宫颈炎、产后感染、自发性流产乃至不孕不育等严重后果。故快速准确地诊断泌尿生殖道支原体感染，并对其进行针对性抗感染治疗有很高实用价值和临床意义
常规的支原体诊断方法如下：
(1)分子生物学方法：核酸杂交、PCR、LCR等方法，快速、敏感、特异性高，但是，对操作要求较高，成本高，且易出现污染；
(2)液体培养法；
(3)固体培养法。
Uu和Mh主要通过体外培养进行检测，在临床应用比较广泛。生殖支原体营养要求高,在一般支原体培养基不生长。由于培养难度大，临床主要通过聚合酶链反应(PCR)技术来检测生殖支原体。支原体培养是目前国内医疗机构进行Uu和Mh检测的重要手段，主要是使用液体培养基直接检测并同时进行支原体药敏试验，以达到尽早为临床治疗用药提供依据的目的。但液体培养法有时候会受到细菌或真菌的污染导致假阳性，给临床带来误诊。固体培养是经24-48h小时后用显微镜直接观察培养基上支原体属典型的菌落形态，是诊断支原体感染的“金标准”。但固体培养法报告检测时间太长，不利于临床的快速诊断。因此，本领域目前亟需检测特异性高同时又能够达到快速检测目的的泌尿生殖道支原体检测方法。
发明内容
为解决目前泌尿生殖道检测中，液体培养法存在假阳性，而采用固体培养基检测又太耗费时间的缺陷，且需要专业的设备二氧化碳培养箱和显微镜观察，整个检测过程费时费力且准确度不高的问题。本发明为解决这一问题，针对泌尿生殖道支原体提供一种固液双相培养基，该培养基检测过程不需要另外配制二氧化碳培养箱，简化检测流程，提高检测效率，同时对泌尿生殖道支原体具备针对性，培养效果好，有利于临床的快速诊断，提高检测特异性。本发明所采用的技术方案是：
一种泌尿生殖道支原体双相培养基，包括液体培养基和固体培养基两部分，固体培养基置于容器中，形成一个斜面，同时所述斜面的1/4-1/2浸没在液体培养基中；所述容器还包括一个可密封所述容器的内部空间的密封部件；其中液体培养基的成分包括：2～10g/L酵母浸粉、2～10g/L牛心浸粉、2～10g/L大豆蛋白胨、1～10g/L氯化钠、1～10g/L磷酸氢二钾、0.05～1.5g/L硫酸锰、0.01～8g/L半胱氨酸盐酸盐、0.5～8g/L尿素、0.5～8g/L精氨酸、0.1～4.0g/L谷氨酰胺、300～500mL/L马血清、5～50mL/L DMEM液体培养基、0.05～15g/L丙酮酸钠、1～10mL/L质量体积百分数为0.1～0.5％酚红指示剂、0.001～0.050g/L制霉素和300～8000IU/L青霉素；固体培养基的成分除包括10～30g/L琼脂外，其余组分与所述的液体培养基的组分相同。
所述密封部件与所述容器之间还有一个滤网，该滤网内放置二氧化碳发生片。二氧化碳发生片是由酒石酸和碳酸氢钠所制备的片剂。当将所述的二氧化碳发生片放到滤网中，放入培养箱后的培养瓶下方的液体培养基会挥发产生水蒸气，二氧化碳发生片会受潮，受潮后其中的酒石酸和碳酸氢钠反应会缓慢释放二氧化碳。
所述滤网是金属材质、塑料材质或者尼龙材质中的任意一种。
优选的可以选择的容器的直径为3-7cm，长度为6-15cm。
所述密封部件为与所述容器可以紧密贴合的盖子或者是用于封口的塑料封口膜。
一种泌尿生殖道支原体双相培养基的制备方法，包括以下步骤：
(1)固体培养基制备：将所述固体培养基各组分混合均匀，用1000ml蒸馏水溶解，调节pH后，以0.22μm的滤菌膜进行过滤除菌，然后加热至60-80℃溶化后，转到所述的容器中冷却形成斜面；
(2)液体培养基配制：将所述的液体培养基的各组分简单混合，用1000ml蒸馏水溶解，调节pH后，以0.22μm的滤菌膜进行过滤除菌，然后加热至60-80℃溶化后，转到所述容器中，并覆盖所述固体培养基形成的斜面的1/4-1/2。
其中，步骤(1)中pH的调节范围为5.8-7.3。
一种泌尿生殖道支原体双相培养基的使用方法，包括以下步骤：
(1)将待测样本接种于所述的液体培养基中，轻摇混匀后倾斜容器，使一部分混有待测样本的液体培养基平铺于所述的固体培养基上，即完成接种，然后于滤网内放入一片二氧化碳发生片，将容器密封；
(2)将步骤(1)完成接种的培养容器置于培养箱中培养，培养温度为36-38℃；
(3)培养18-36小时判断初步检测结果，对阳性样本继续培养3-7天，得到最终检测结果；所述的判断初步检测结果的标准为：若液体培养基变红且清晰透明，可以初步报告阳性；所述的最终检测结果的判断标准为：若固体斜面上有油煎蛋样菌落生长，且符合泌尿生殖道支原体生化特征，最终报告泌尿生殖道支原体阳性。
本发明所用的试剂和原料均市售可得。
与现有技术相比，本发明具有以下优点和有益效果：
1、本发明配方科学配比固液两相培养基中各组分配比，营养成分丰富，满足Uu以及Mh生长繁殖的需求；本发明的培养基含尿素适合Uu需要、精氨酸适合Mh需要，而且pH调节至5.8-7.3，基本符合二者生长要求，可得到单克隆菌落，方便基于检测结果作下游的进一步研究工作；
2、本发明打破传统的培养模式，将固体培养基形成斜面后浸润于液体培养基中，该方法结合液相培养快速、敏感、结果易观察和固体培养准确、特异、抗污染强等特点，提高了鉴定结果的特异度和敏感度；双相培养基使液相和固相培养同步进行，优于先液体培养，后根据颜色变化再转种固体培养，既可避免液体培养假阳性造成的鉴定错误，又能节省时间，尽早出报告；
3、本发明设置滤网，滤网内设置有二氧化碳发生片，在培养过程中可以吸收水气从而释放二氧化碳，因此不再需要二氧化碳培养箱；且只需要对一份标本进行一次接种，整个过程操作简单，特异性高，易于实验室操作。
附图说明
图1为本发明泌尿生殖道支原体双相培养基的示意图；
图2为镜检人型支原体阳性结果镜检图；
图3为镜检解脲支原体阳性结果镜检图。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明的技术方案做进一步说明，但不限于此。
实施例1
一种泌尿生殖道支原体双相培养基，包括液体培养基和固体培养基两部分，固体培养基置于容器中，形成一个斜面，同时所述斜面的1/4浸没在液体培养基中；所述容器还包括一个可密封所述容器的内部空间的密封部件；其中液体培养基的成分包括：2g/L酵母浸粉、2g/L牛心浸粉、2g/L大豆蛋白胨、1g/L氯化钠、1g/L磷酸氢二钾、0.05g/L硫酸锰、0.01g/L半胱氨酸盐酸盐、0.5g/L尿素、0.5g/L精氨酸、0.1g/L谷氨酰胺、300mL/L马血清、5mL/L DMEM液体培养基、0.05g/L丙酮酸钠、1mL/L质量体积百分数为0.1％酚红指示剂、0.001g/L制霉素和300IU/L青霉素；固体培养基的成分除包括10g/L琼脂外，其余组分与所述的液体培养基的组分相同。
所述密封部件与所述容器之间还有一个滤网，该滤网内放置二氧化碳发生片。二氧化碳发生片是由酒石酸和碳酸氢钠所制备的片剂。当将所述的二氧化碳发生片放到滤网中，放入培养箱后的培养瓶下方的液体培养基会挥发产生水蒸气，二氧化碳发生片会受潮，受潮后其中的酒石酸和碳酸氢钠反应会缓慢释放二氧化碳。
所述滤网是金属材质。
所述的容器的直径为3cm，所述的容器的长度为6cm。
所述密封部件为与所述容器可以紧密贴合的盖子。
一种泌尿生殖道支原体双相培养基的制备方法，包括以下步骤：
(1)固体培养基制备：将所述固体培养基各组分混合均匀，用1000ml蒸馏水溶解，调节pH后，以0.22μm的滤菌膜进行过滤除菌，然后加热至60℃溶化后，转到所述的容器中冷却形成斜面；
(2)液体培养基配制：将所述的液体培养基的各组分简单混合，用1000ml蒸馏水溶解，调节pH后以0.22μm的滤菌膜再进行过滤除菌，然后加热至60℃溶化后，转到所述容器中，并覆盖所述固体培养基形成的斜面的1/4。
其中，步骤(1)中pH的调节范围为5.8-7.3。
一种泌尿生殖道支原体双相培养基的使用方法，包括以下步骤：
(1)将待测样本接种于所述的液体培养基中，轻摇混匀后倾斜容器，使一部分混有待测样本的液体培养基平铺于所述的固体培养基上，即完成接种，然后于滤网内放入一片二氧化碳发生片，将容器密封；
(2)将步骤(1)完成接种的培养容器置于培养箱中培养，培养温度为36℃；
(3)培养18-36小时判断初步检测结果，对阳性样本继续培养3-7天，得到最终检测结果；所述的判断初步检测结果的标准为：若液体培养基变红且清晰透明，可以初步报告阳性；所述的最终检测结果的判断标准为：若固体斜面上有油煎蛋样菌落生长，且符合泌尿生殖道支原体生化特征，最终报告泌尿生殖道支原体阳性。
本发明所用的试剂和原料均市售可得。
实施例2
一种泌尿生殖道支原体双相培养基，包括液体培养基和固体培养基两部分，固体培养基置于容器中，形成一个斜面，同时所述斜面的1/3浸没在液体培养基中；所述容器还包括一个可密封所述容器的内部空间的密封部件；其中液体培养基的成分包括：4.5g/L酵母浸粉、4.5g/L牛心浸粉、4.5g/L大豆蛋白胨、4g/L氯化钠、4g/L磷酸氢二钾、0.4g/L硫酸锰、2g/L半胱氨酸盐酸盐、3g/L尿素、3g/L精氨酸、1.5g/L谷氨酰胺、400mL/L马血清、22mL/LDMEM液体培养基、5g/L丙酮酸钠、4mL/L质量体积百分数为0.1～0.5％酚红指示剂、0.01g/L制霉素和3000IU/L青霉素；固体培养基的成分除包括10～30g/L琼脂外，其余组分与所述的液体培养基的组分相同。
所述密封部件与所述容器之间还有一个滤网，该滤网内放置二氧化碳发生片。二氧化碳发生片是由酒石酸和碳酸氢钠所制备的片剂。当将所述的二氧化碳发生片放到滤网中，放入培养箱后的培养瓶下方的液体培养基会挥发产生水蒸气，二氧化碳发生片会受潮，受潮后其中的酒石酸和碳酸氢钠反应会缓慢释放二氧化碳。
所述滤网是塑料材质。
所述的容器的直径为5cm，所述的容器的长度为10cm。
所述密封部件为用于封口的塑料封口膜。
一种泌尿生殖道支原体双相培养基的制备方法，包括以下步骤：
(1)固体培养基制备：将所述固体培养基各组分混合均匀，用1000ml蒸馏水溶解，调节pH后，以0.22μm的滤菌膜进行过滤除菌，然后加热至70℃溶化后，转到所述的容器中冷却形成斜面；
(2)液体培养基配制：将所述的液体培养基的各组分简单混合，用1000ml蒸馏水溶解，调节pH后，以0.22μm的滤菌膜再进行过滤除菌，然后加热至70℃溶化后，转到所述容器中，并覆盖所述固体培养基形成的斜面的1/3。
其中，步骤(1)中pH的调节范围为5.8-7.3。
一种泌尿生殖道支原体双相培养基的使用方法，包括以下步骤：
(1)将待测样本接种于所述的液体培养基中，轻摇混匀后倾斜容器，使一部分混有待测样本的液体培养基平铺于所述的固体培养基上，即完成接种，然后于滤网内放入一片二氧化碳发生片，将容器密封；
(2)将步骤(1)完成接种的培养容器置于培养箱中培养，培养温度为37℃；
(3)培养18-36小时判断初步检测结果，对阳性样本继续培养3-7天，得到最终检测结果；所述的判断初步检测结果的标准为：若液体培养基变红且清晰透明，可以初步报告阳性；所述的最终检测结果的判断标准为：若固体斜面上有油煎蛋样菌落生长，且符合泌尿生殖道支原体生化特征，最终报告泌尿生殖道支原体阳性。
本发明所用的试剂和原料均市售可得。
实施例3
一种泌尿生殖道支原体双相培养基，包括液体培养基和固体培养基两部分，固体培养基置于容器中，形成一个斜面，同时所述斜面的1/2浸没在液体培养基中；所述容器还包括一个可密封所述容器的内部空间的密封部件；其中液体培养基的成分包括：10g/L酵母浸粉、10g/L牛心浸粉、10g/L大豆蛋白胨、10g/L氯化钠、10g/L磷酸氢二钾、1.5g/L硫酸锰、8g/L半胱氨酸盐酸盐、8g/L尿素、8g/L精氨酸、4.0g/L谷氨酰胺、500mL/L马血清、50mL/LDMEM液体培养基、15g/L丙酮酸钠、10mL/L质量体积百分数为0.5％酚红指示剂、0.050g/L制霉素和8000IU/L青霉素；固体培养基的成分除包括30g/L琼脂外，其余组分与所述的液体培养基的组分相同。
所述密封部件与所述容器之间还有一个滤网，该滤网内放置二氧化碳发生片。二氧化碳发生片是由酒石酸和碳酸氢钠所制备的片剂。当将所述的二氧化碳发生片放到滤网中，放入培养箱后的培养瓶下方的液体培养基会挥发产生水蒸气，二氧化碳发生片会受潮，受潮后其中的酒石酸和碳酸氢钠反应会缓慢释放二氧化碳。
所述滤网是尼龙材质。
所述的容器的直径为7cm，所述的容器的长度为15cm。
所述密封部件为与所述容器可以紧密贴合的盖子。
一种泌尿生殖道支原体双相培养基的制备方法，包括以下步骤：
(1)固体培养基制备：将所述固体培养基各组分混合均匀，用1000ml蒸馏水溶解，调节pH后，以0.22μm的滤菌膜进行过滤除菌，然后加热至80℃溶化后，转到所述的容器中冷却形成斜面；
(2)液体培养基配制：将所述的液体培养基的各组分简单混合，用1000ml蒸馏水溶解，调节pH后，以0.22μm的滤菌膜再进行过滤除菌，然后加热至80℃溶化后，转到所述容器中，并覆盖所述固体培养基形成的斜面的1/2。
其中，步骤(1)中pH的调节范围为5.8-7.3。
一种泌尿生殖道支原体双相培养基的使用方法，包括以下步骤：
(1)将待测样本接种于所述的液体培养基中，轻摇混匀后倾斜容器，使一部分混有待测样本的液体培养基平铺于所述的固体培养基上，即完成接种，然后于滤网内放入一片二氧化碳发生片，将容器密封；
(2)将步骤(1)完成接种的培养容器置于培养箱中培养，培养温度为38℃；
(3)培养18-36小时判断初步检测结果，对阳性样本继续培养3-7天，得到最终检测结果；所述的判断初步检测结果的标准为：若液体培养基变红且清晰透明，可以初步报告阳性；所述的最终检测结果的判断标准为：若固体斜面上有油煎蛋样菌落生长，且符合泌尿生殖道支原体生化特征，最终报告泌尿生殖道支原体阳性。
本发明所用的试剂和原料均市售可得。
实施例4
按照实施例3的方法制备并应用其检测人型支原体(Mh)和解脲支原体(Uu)，检测的过程具体包括如下步骤：
(1)以无菌一次性拭子采集标本后，将其接种至双相培养基的液体培养基中(将拭子在液相部分对应容器壁上研磨数次)，然后混匀，并倾斜液相数次，以淹没固体培养基斜面，完成接种。将完成接种的培养基放置到温箱内培养；
(2)结果的观察；
(a)判断标准：在18～36h内若液体培养基变红且清晰透明，可以初步报告阳性；报告阳性的样品继续培养3～7天，使用放大镜镜对固体培养基上的菌落进行观察，如图2所示，人型支原体(Mh)，如图3所示，解脲支原体(Uu)；如果超过48h液体培养基仍不变色，可报告泌尿生殖道支原体阴性。
以实施例3所制得的培养基对待测样本进行检测，并对结果进行分析：
100份样本进行检测，阳性57例，分别于18～35h液体培养基变红且清晰透明，且在培养3～4天时最终报告阳性，并得到单克隆菌落；阴性43例。具体检测结果如表1所示。
表1检测结果
由表1的数据可以看出，本发明的双相培养基在实际应用中很方便，在培养18～35h时可以初步报告检测结果，而在培养3～5天时可报告最终检测结果。
需要说明的是，上述实施例仅仅是实现本发明的优选方式的部分实施例，而非全部实施例。显然，基于本发明的上述实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得的其他所有实施例，都应当属于本发明保护的范围。

Claims (4)

1. 一种泌尿生殖道支原体双相培养基，其特征在于，包括液体培养基和固体培养基两部分，固体培养基置于容器中，形成一个斜面，同时所述斜面的1/4-1/2浸没在液体培养基中；所述容器还包括一个可密封所述容器的内部空间的密封部件以及一个滤网；其中液体培养基的成分包括：2～10g/L酵母浸粉、2～10g/L牛心浸粉、2～10g/L大豆蛋白胨、1～10g/L氯化钠、1～10g/L磷酸氢二钾、0 .05～1 .5g/L硫酸锰、0 .01～8g/L半胱氨酸盐酸盐、0.5～8g/L尿素、0 .5～8g/L精氨酸、0 .1～4 .0g/L谷氨酰胺、300～500mL/L马血清、5～50mL/LDMEM液体培养基、0 .05～15g/L丙酮酸钠、1～10mL/L质量体积百分数为0 .1～0.5％酚红指示剂、0 .001～0 .050g/L制霉素和300～8000IU/L青霉素；固体培养基的成分除包括10～30g/L琼脂外，其余组分与所述的液体培养基的组分相同；所述密封部件与所述容器之间还有一个滤网，该滤网内放置二氧化碳发生片；所述二氧化碳发生片为由酒石酸和碳酸氢钠等比例混合所得的片剂。
2.根据权利要求1所述泌尿生殖道支原体双相培养基，其特征在于，所述滤网是金属材质、塑料材质中的一种。
3.根据权利要求1所述泌尿生殖道支原体双相培养基，其特征在于，所述密封部件为与所述容器可以紧密贴合的盖子或者是用于封口的塑料封口膜。
4.一种如权利要求1所述泌尿生殖道支原体双相培养基的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)固体培养基制备：将所述固体培养基各组分混合均匀，用蒸馏水溶解，调节pH后进行过滤除菌，然后加热至60-80℃溶化后，转到所述的容器中冷却形成斜面；其中pH的调节范围为5.8-7.3；所述固体培养基成分除包括10～30g/L琼脂外，其余组分与液体培养基的组分相同；
(2)液体培养基配制：将所述的液体培养基的各组分简单混合，以水溶解，调节pH后再进行过滤除菌，然后加热至60-80℃溶化后，转到所述容器中，并覆盖所述固体培养基形成的斜面的1/4-1/2；所述液体培养基的成分包括：2～10g/L酵母浸粉、2～10g/L牛心浸粉、2～10g/L大豆蛋白胨、1～10g/L氯化钠、1～10g/L磷酸氢二钾、0 .05～1 .5g/L硫酸锰、0.01～8g/L半胱氨酸盐酸盐、0 .5～8g/L尿素、0 .5～8g/L精氨酸、0 .1～4 .0g/L谷氨酰胺、300～500mL/L马血清、5～50mL/LDMEM液体培养基、0 .05～15g/L丙酮酸钠、1～10mL/L质量体积百分数为0 .1～0 .5％酚红指示剂、0 .001～0 .050g/L制霉素和300～8000IU/L青霉素。
CN201811371972.6A 2018-11-16 2018-11-16 一种泌尿生殖道支原体双相培养基 Active CN109385381B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201811371972.6A CN109385381B (zh) 2018-11-16 2018-11-16 一种泌尿生殖道支原体双相培养基

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201811371972.6A CN109385381B (zh) 2018-11-16 2018-11-16 一种泌尿生殖道支原体双相培养基

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN109385381A CN109385381A (zh) 2019-02-26
CN109385381B true CN109385381B (zh) 2019-10-08

Family

ID=65429578

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201811371972.6A Active CN109385381B (zh) 2018-11-16 2018-11-16 一种泌尿生殖道支原体双相培养基

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN109385381B (zh)

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109913396B (zh) * 2019-04-22 2023-01-06 华中农业大学 一种液体培养基及利用其分离培养鸡毒支原体的方法
CN110468076B (zh) * 2019-08-21 2021-09-24 郑州安图生物工程股份有限公司 一种富集脲原体的培养基、冻干保存脲原体的保护剂及其制备方法与冻干保存脲原体的方法

Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN2795215Y (zh) * 2005-03-15 2006-07-12 上海恩康生物科技有限公司 密封性生物培养组件
CN1834225A (zh) * 2005-03-15 2006-09-20 上海恩康生物科技有限公司 一种同时分离培养致病性奈瑟菌和支原体的方法
CN101270382A (zh) * 2008-05-15 2008-09-24 叶鹰 念珠菌、嗜血菌和支原体组合培养试剂盒及其应用
CN101555457A (zh) * 2008-04-08 2009-10-14 上海市皮肤病性病医院 泌尿生殖道支原体培养基及检测方法
CN102409076A (zh) * 2011-12-16 2012-04-11 江门市凯林贸易有限公司 一种快速检测支原体的固体培养基及其制备方法
CN104450860A (zh) * 2013-09-17 2015-03-25 上海市肺科医院 一种肺炎支原体培养基
CN104694425A (zh) * 2015-02-12 2015-06-10 众爱生河北生物科技有限公司 泌尿生殖道支原体Uu、Mh分离培养基及其应用

Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN2795215Y (zh) * 2005-03-15 2006-07-12 上海恩康生物科技有限公司 密封性生物培养组件
CN1834225A (zh) * 2005-03-15 2006-09-20 上海恩康生物科技有限公司 一种同时分离培养致病性奈瑟菌和支原体的方法
CN101555457A (zh) * 2008-04-08 2009-10-14 上海市皮肤病性病医院 泌尿生殖道支原体培养基及检测方法
CN101270382A (zh) * 2008-05-15 2008-09-24 叶鹰 念珠菌、嗜血菌和支原体组合培养试剂盒及其应用
CN102409076A (zh) * 2011-12-16 2012-04-11 江门市凯林贸易有限公司 一种快速检测支原体的固体培养基及其制备方法
CN104450860A (zh) * 2013-09-17 2015-03-25 上海市肺科医院 一种肺炎支原体培养基
CN104694425A (zh) * 2015-02-12 2015-06-10 众爱生河北生物科技有限公司 泌尿生殖道支原体Uu、Mh分离培养基及其应用

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
双相培养基检测泌尿生殖道支原体方法及评价;张银旺 等;《现代检验医学杂志》;20081130;第23卷(第6期);第77-79页，尤其是1.2.1培养基制备 *
液体 － 固体联合培养法检测泌尿生殖道支原体的临床研究;贾忠兰 等;《山东大学学报（医学版）》;20181030;第56卷(第10期);第110-113页 *
溶脲脲原体双相一步培养与PCR技术的临床引用;吴茵茹 等;《上海铁道大学学报（医学版）》;19961231;第10卷(第4期);第273-277页 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN109385381A (zh) 2019-02-26

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP6920212B2 (ja) 嫌気性微生物用培養デバイス
CN109385381B (zh) 一种泌尿生殖道支原体双相培养基
CN104450860B (zh) 一种肺炎支原体培养基
CN101130808B (zh) 分枝杆菌快速培养药敏及鉴定微量检测法及装置
CN110205355A (zh) 一种微生物高灵敏检测培养基及其制备方法和应用
CN101413872B (zh) 一种微生物活菌数快速检测方法
CN102978282B (zh) 伤寒、甲型副伤寒沙门菌荧光定量pcr检测试剂盒及其应用
CN112608973A (zh) 一种饮用天然矿泉水中产气荚膜梭菌的检验方法
CN106834104A (zh) 一种快速检测细菌菌落总数的测试皿及其制备方法
CN112680499B (zh) 一种厌氧微生物的体外检测试剂盒
CN106086159B (zh) 一种能够同时检测两种粪便污染指示菌的酶底物培养基及其应用
CN105331671A (zh) 解脲脲原体快速培养方法及其培养基
CN107446986A (zh) 一种检测人体血液中微生物的培养基及其制备方法
RU2262533C2 (ru) Способ определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам при лечении гнойно-воспалительного заболевания
CN103614453A (zh) 医学微生物学实验胃肠道细菌检测方法
CN104178550A (zh) 结核分枝杆菌药敏指示剂的使用方法
CN102816715B (zh) 小肠结肠耶尔森菌分离、鉴定的试剂盒、制备和应用
CN105177109B (zh) 检测金黄色葡萄球菌的方法及试剂盒
CN109355226A (zh) 用于军团菌的增菌培养和分离培养的双相培养基及其制备方法
CN109517915A (zh) 溶藻弧菌干粉化lamp快速检测试剂盒
CN108333132A (zh) 一种煤化工废水的生物毒性检测方法
ES2966679T3 (es) Métodos y composiciones para mejorar la detección de microorganismos
CN211051257U (zh) 一种无菌检查薄膜过滤装置
CN207877751U (zh) 一种新型用于检测大肠埃希菌的定量计数鉴定培养皿
CN101851661B (zh) 非诊断目的的在a-peg-b列阵下加快检测支原体时间的方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant