RU2262533C2

RU2262533C2 - Способ определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам при лечении гнойно-воспалительного заболевания

Info

Publication number: RU2262533C2
Application number: RU2003114456/13A
Authority: RU
Inventors: А.И. Яременко (RU); А.И. Яременко; И.В. Шумаков (RU); И.В. Шумаков; Т.Ю. Шувалова (RU); Т.Ю. Шувалова
Original assignee: Санкт-Петербургский государственный медицинский университет имени академика И.П. Павлова
Priority date: 2003-05-20
Filing date: 2003-05-20
Publication date: 2005-10-20

Abstract

Изобретение относится к биотехнологии и используется для определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам при лечении гнойно-воспалительных заболеваний. Способ включает забор гнойного отделяемого из очага гнойного воспаления челюстно-лицевой области, культивирование в сахарном бульоне не менее двух часов, введение стандартных дисков с исследуемыми антибиотиками и инкубирование в течение не менее двух часов. Результат оценивают по степени мутности содержимого в пробе, считая, что чем меньше мутность, тем выше чувствительность. Способ позволяет определить чувствительность микроорганизма к антибиотикам без выделения чистой культуры, то есть с меньшей затратной времени. 2 табл.

Description

Изобретение относится к медицине, а именно к хирургии, и может быть использовано для определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам при лечении гнойно-воспалительных заболеваний.

Существующие способы определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам основаны на выделении чистой культуры микроорганизмов и их видовой идентификации, на что тратится в среднем не менее двух суток.

Известны ускоренные способы определения чувствительности, которые можно разделить на три вида: способы, основанные на изменении ферментативной активности микроорганизмов при воздействии антибиотиков; способы, основанные на изменении редокс-индикаторов при изменении окислительно-восстановительного потенциала среды в процессе роста микробов с антибиотиками; способы, основанные на цитологической оценке изменений морфологии бактериальных клеток в присутствии антибиотиков (Навашин С.М., Фомина И.П. Рациональная антибиотикотерапия. М., 1982, с.47-49).

Недостатком всех этих способов является необходимость дополнительного времени для выделения чистой культуры.

Задачей изобретения является определение чувствительности микроорганизмов к антибиотикам без выделения чистой культуры с меньшей затратой времени.

Поставленная задача решается тем, что в известном способе определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам при лечении гнойно-воспалительного заболевания, включающем забор гнойного отделяемого, культивирование его на питательной среде в присутствии антибиотика с последующей оценкой результата, согласно изобретению забор гнойного отделяемого осуществляют из очага гнойного воспаления челюстно-лицевой области, культивируют в сахарном бульоне не менее двух часов, после чего вводят стандартные диски с исследуемыми антибиотиками и инкубируют в течение не менее двух часов, результат оценивают по степени мутности содержимого в пробе, считая, что чем меньше мутность, тем выше чувствительность.

Показателем для определения чувствительности микроорганизмов к антибиотику выбрана степень мутности содержимого в пробе. Для объективной оценки степени мутности содержимого в пробе были проведены исследования с помощью фотоэлектроколориметра и компьютерной программы Adobe PhotoShop 5,0. С помощью фотоэлектроколориметра определяли оптическую плотность и коэффициент пропускания растворов в каждой пробе. Использовались кюветы с толщиной раствора 0,5 см. В табл.1 приведены результаты исследований по 3 опытам, которые показывают, что в контрольных пробах (Р1, К1 и Ф1) с максимальной мутностью, помеченных как (++++), коэффициент пропускания наименьший, а оптическая плотность наибольшая. Из табл.1 видно, что оптическая плотность уменьшается пропорционально уменьшению мутности и становится минимальной при наименьшей мутности (++). Соответственно, коэффициент пропускания увеличивается пропорционально уменьшению мутности и становится максимальным при наименьшей мутности.

Таблица 1

Пробирка	Фотоэлектроколориметр
Пробирка	Коэффициент пропускания, К_п	Оптическая плотность, O_П	Мутность
Р1	81,22*	0,09*	++++
Р2	86,23	0,069	+++
Р3	87,23	0,053	+++/-
Р4	88,66*	0,048*	++
К1	58,52*	0,245	++++
К2	62,97	0,242	+++
К3	65,70	0,239	+++/-
К4	71,03*	0,235*	++
Ф1	35,44*	0,408*	++++
Ф2	37,85	0,391	++++/-
ФЗ	40,93	0,37	+++/-
Ф4	43,77*	0,359	++
* р<0,01

Для оценки результатов в компьютерной программе Adobe PhotoShop 5,0 производили съемку проб на цифровой фотоаппарат, изображение переводилось в черно-белый вариант и оценивалось в двух моделях цветов - черно-белого (учитывался коэффициент К% - % черного цвета) и Lab цвета (учитывался коэфициент L% - % яркости цвета). Измерение проводилось в двух точках, и бралось среднее арифметическое значение. Первая точка образована средней линией пробирки, содержащей пробу, по вертикали и перпендикуляром к ней, проведенным на границе между верхней и средней третями пробирки. Вторая точка образована средней линией пробирки по вертикали и перпендикуляром к ней, проведенным на границе между средней и нижней третями пробирки. В табл. 2 приведены примеры значений К% и L% для трех опытов.

Таблица 2
Пробирка	Fotoshop		Мутность
Пробирка	К%	L%	Мутность
Р1	64*	39	++++
Р2	62	41*	+++
Р3	57	47	+++/-
Р4	57*	48*	++
К1	75*	28*	++++
К2	66	35	+++
К3	63	38	+++/-
К4	62*	42*	++
Ф1	69*	34*	++++
Ф2	68	35	++++/-
ФЗ	66	36	+++/-
Ф4	65*	40*	++
* р<0,05

Из табл.2 видно, что с уменьшением мутности коэффициент К% - % черного цвета уменьшается, а коэффициент L% - % яркости цвета соответственно увеличивается.

Бактериоскопические исследования показали, что в мазках, сделанных из проб с большей мутностью, обнаруживается большее количество микробных тел, чем в мазках, сделанных из проб с меньшей мутностью. Это подтверждается и бактериологическими исследованиями. После 24 часов инкубации в посевах на кровяной агар, сделанных из непосредственно гнойного отделяемого, обнаружено большое количество полиморфных колоний микроорганизмов. В высевах из проб с антибиотиками наблюдалось меньшее число колоний, причем в пробе с наименьшей мутностью, практически в 100% случаев выросших колоний не было.

Способ осуществляют следующим образом.

В пробирки с сахарным бульоном стандартной разливки по 5 мл помещают не менее 3 капель гнойного отделяемого из очага гнойной инфекции. Количество пробирок соответствует количеству исследуемых антибиотиков. Забор гнойного отделяемого осуществляют с помощью стерильного одноразового шприца во время оперативных вмешательств по вскрытию и дренированию очагов гнойной инфекции или пунктированием инфильтрата стерильным одноразовым шприцем после обработки места вкола иглы 70% этиловым спиртом. После пунктирования место вкола иглы дополнительно обрабатывают 3% раствором перекиси водорода и раствором бриллиантового зеленого. Пробирки устанавливают в термостат не менее чем на 2 часа при температуре 37±0,5°С. Через 2 часа пробирки достают из термостата. В каждую из пробирок добавляют по одному стандартному диску с одним из исследуемых антибиотиков. Затем все пробирки повторно инкубируют при температуре 37±0,5°С не менее двух часов. По истечении двух часов пробирки достают из термостата, визуально оценивают степень мутности содержимого в каждой пробирке и определяют чувствительность микроорганизмов к соответствующему антибиотику, считая, что чем меньше мутность, тем выше чувствительность.

Способ может быть проиллюстрирован следующим примером.

Пример. Больной К. с диагнозом: острый остеомиелит нижней челюсти от 46 зуба. Во время оперативного вмешательства по вскрытию и дренированию очага воспаления произведен забор гнойного отделяемого для определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам у данного больного по предлагаемому способу. В результате проведенного исследования было выяснено, что у больного наибольшая чувствительность обнаружена к оксациллину. Больному была назначена комплексная терапия с применением оксациллина по 1 грамму 3 раза в день внутривенно. Микробиологическое исследованием в бактериологической лаборатории показало, что возбудителем является стафилококк. На третьи сутки воспалительные явления стихли, на пятые сутки рана начала гранулировать. На седьмые сутки больной был выписан на амбулаторное долечивание.

Предлагаемый способ позволяет за 4 часа получить предварительные данные о спектре чувствительности микроорганизмов к антибиотикам в каждом конкретном случае без выделения чистой культуры микроорганизмов и их видовой идентификации.

Claims

Способ определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам при лечении гнойно-воспалительного заболевания, включающий забор гнойного отделяемого, культивирование его на питательной среде в присутствии антибиотика с последующей оценкой результата, отличающийся тем, что забор гнойного отделяемого осуществляют из очага гнойного воспаления челюстно-лицевой области, культивируют в сахарном бульоне не менее двух часов, после чего вводят стандартные диски с исследуемыми антибиотиками и инкубируют в течение не менее двух часов, результат оценивают по степени мутности содержимого в пробе, считая, что чем меньше мутность, тем выше чувствительность.