RU2788607C1 - Способ получения питательной среды для селективного выявления Candida auris - Google Patents

Способ получения питательной среды для селективного выявления Candida auris Download PDF

Info

Publication number
RU2788607C1
RU2788607C1 RU2022114795A RU2022114795A RU2788607C1 RU 2788607 C1 RU2788607 C1 RU 2788607C1 RU 2022114795 A RU2022114795 A RU 2022114795A RU 2022114795 A RU2022114795 A RU 2022114795A RU 2788607 C1 RU2788607 C1 RU 2788607C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
candida
agar
maltose
nutrient medium
medium
Prior art date
Application number
RU2022114795A
Other languages
English (en)
Inventor
Михаил Владимирович Храмов
Ирина Петровна Мицевич
Original Assignee
Федеральное бюджетное учреждение науки "Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (ФБУН ГНЦ ПМБ)
Filing date
Publication date
Application filed by Федеральное бюджетное учреждение науки "Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (ФБУН ГНЦ ПМБ) filed Critical Федеральное бюджетное учреждение науки "Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (ФБУН ГНЦ ПМБ)
Application granted granted Critical
Publication of RU2788607C1 publication Critical patent/RU2788607C1/ru

Links

Images

Abstract

Изобретение относится к области биотехнологии. Сущность изобретения заключается в том, что в отечественную среду «Питательная среда для культивирования легионелл (Легионелбакагар)» вносят дрожжевой экстракт, глюкозу, железа пирофосфат растворимого и после автоклавирования и охлаждения эмульсию яичного желтка, а визуальную идентификацию культуры осуществляют по наличию зоны фосфолипазной активности вокруг колонии Candida auris и отсутствию данной зоны у других дрожжеподобных грибов вида Candida, что позволяет упростить и исключить ложную идентификацию возбудителя, сократить время исследования. 18 ил., 1 табл., 1 пр.

Description

Изобретение относится к санитарной и клинической микробиологии и может быть использовано для селективного выявления Candida auris в клиническом материале и других объектах. Колонизация и инфицирование Candida auris среди госпитализированных пациентов и лиц, находящихся на длительном лечении, стала глобальной проблемой,
Кандидоз, наиболее распространенная дрожжевая инфекция, чаще вызывается видом Candida albicans. Открытый недавно патоген - Candida auris становится значимым этиологическим агентом инвазивного кандидоза наряду с Candida albicans, Candida tropicalis, Candida parapsilosis, Candida glabrata. Реальная распространенность Candida auris как в мире, так и в России неизвестна. Патоген Candida albicans обычно чувствителен к азольным группам антигрибковых препаратов. Однако Candida glabrata, Candida tropicalis и Candida krusei толерантны к азолу. Candida auris обладает множественной устойчивостью к противогрибковым лекарственным средствам и единственный представитель грибов рода Candida, который легко передается от человека к человеку. Лабораторная диагностика инфекции Candida auris с использованием доступных тест-систем затруднительна ввиду частых ошибок идентификации. Быстрая идентификация видов кандид является необходимой для установления правильного диагноза и назначения лечения.
Наиболее высокой степенью точности идентификации обладает метод, основанный на матрично-активированной лазерной десорбции/ионизации (MALDI-TOF) и способен отличить Candida auris от других видов Candida. Такая услуга доступна крупным бактериологическим лабораториям, но не доступна для обычных клинических и бактериологических лабораторий.
Для бактериологического контроля Candida spp. (Candida albicans и других видов грибов рода Candida) рекомендовано использование питательных сред: «Питательная среда для контроля микробной загрязненности» Питательная среда (ГРМ №2 (Сабуро)», «Питательная среда для выделения и культивирования дрожжеподобных и плесневых грибов Сабуро - мальтоза агар», триптикоза - соевого агара по ОФС.1.2.4.0003.15 ГФ РФ Государственная фармокопея Российской Федерации XIV издание, МУК 4.2.2942-11 (Методы санитарно-бактериологических исcледований объектов окружающей среды, воздуха и контроля стерильности в лечебных организациях), регламентирующим перечень питательных сред для выявления Candida albicans.
Ведущими зарубежными фирмами выпускаются среды для обнаружения Candida spp.: Соево-казеиновый агар (Casein Soya Bean Digest MERCK), HiMedia выпускаются сухие питательные agar HiMedia, Агар Сабуро с глюкозой (Sabouraud 4% Glucose Agar) HiMedi, Бульон Сабуро (Sabouraud Broth) HiMedia, Декстрозный агар Сабуро с соевым лецитином и Твин 80 HiMedia (ФСЗ 2009/03709).
Недостатком вышеперечисленных сред является одинаковый рост колоний Candida spp.
Известна «Питательная среда для выращивания дрожжевых и плесневых грибов (агар Сабуро)». Состав питательной среды (агар Сабуро): панкреатический гидролизат рыбной муки - 10 г/л, панкреатический гидролизат казеина - 10 г/л, дрожжевой экстракт - 2,0 г/л, натрий фосфорнокислый однозамещенный - 2 г/л, глюкоза моногидрат - 40 г/л, агар микробиологический - 10,0 +/- 3,0, вода очищенная - 1000 мл, рН 6,0. Данная среда традиционно используется для микробиологической практики. На агаре Сабуро рост Candida spp. в виде белых колоний среднего размера, рост Candida auris в виде более мелких белых колоний.
Однако эта среда не позволяет провести идентификацию до вида.
Для идентификации используют хромогенную среду, предназначенную для дифференциации C. albicans и других видов Candida в клинических и неклинических образцах: «HiCrome Candida Differential agar» M1297A состоящий из следующих компонентов г/л: пептон особый - 15,0 г/л, дрожжевой экстракт - 4,0г/л, дикалий гидрофосфат - 1,0 г/л, хромогенная смесь - 7,22 г/л, хлорамфеникол - 0,500 г/л, агар микробиологический - 15 г/л.
«HiCrome Candida Differential agar» является альтернативой традиционным средам для выделения и идентификации Candida spp. Хромогенные субстраты, содержащиеся в данной среде, позволяют быстро идентифицировать и дифференцировать различные виды кандид по цвету колоний. Колонии Candida albicans - зеленые, Candida krusei - фиолетово-розовые, Candida tropicalis - синие, Candida glabrata и Candida parapsilosis - бледно-фиолетовый. Candida auris может иметь на данной среде розовый, красный, кремовый или фиолетовый цвет, а также иметь сочетание этих цветов на одной чашке.
Слабовыраженное окрашивание колоний Candida auris, приводящее к сомнительным дифференцирующим свойствам, и высокая стоимость являются недостатками этой среды.
Наиболее близкой к предлагаемой является «Питательная среда для выращивания дрожжеподобных и плесневых грибов (Сабуро - мальтоза - агар)». Состав питательной среды (Сабуро - мальтоза - агар): пептон ферментативный 10,0 г/л, дрожжевой экстракт 2,0 г/л, лимонная кислота 0,15 г/л, мальтоза 40,0 г/л, агар 10,0 г/л, дистиллированная вода - 1,0 л, рН 5,7 - 6,3. Навеску, соответственно прописи, растворяют в 1000 мл дистиллированной воды, автоклавируют 15 мин. при 121°С, после охлаждения до 50 - 45°С вносят в среду 2%-ный раствор теллурита калия в расчете 5,0 мл/л, разливают в стерильные чашки Петри.
На традиционной среде «Сабуро - мальтоза - агар» для всех исследуемых штаммов, были одинаково мелкие черные колонии, что приводит к ложной идентификации возбудителя.
Техническим результатом изобретения является создание отечественной питательной среды, позволяющей достичь стабильности результатов по ростовым и дифференцирующим свойствам, упростить и исключить ложную идентификацию возбудителя, сократить время исследования.
Технический результат достигается тем, что что навеску питательной среды следующего состава: пептон ферментативный 10,0 г/л, дрожжевой экстракт 2,0 г/л, лимонную кислоту 0,15 г/л, мальтозу 40,0 г/л, агар 10,0 г/л, соответственно прописи, растворяют в 1,0 л дистилированной воды, вносят 10,0 мл/л 2%-ного раствора теллурита калия до стерилизации среды, автоклавируют 15 мин. при 121°С, охлаждают до 50 - 45°С, разливают в стерильные чашки Петри, подсушивают и используют для высева.
Графические материалы иллюстрирующие предлагаемое изобретение:
Фиг.1 фото среды по прототипу «Сабуро - мальтоза - агар».
Фиг.2 фото среды «Сабуро - мальтоза - агар» с теллуритом калия (внесен до стерилизации)
Фиг.3 фото среды «Сабуро - мальтоза - агар» с теллуритом калия (внесен после стерилизации)
Фиг.4 Рост культуры Candida albicans ATCC 90028 на питательной среде «Сабуро - мальтоза - агар» с теллуритом калия (внесен до стерилизации)
Фиг.5 Рост культуры Candida albicans ATCC 90028 на питательной среде «Сабуро - мальтоза - агар» с теллуритом калия (внесен после стерилизации)
Фиг.6 Рост культуры Candida auris СBS 10913 на питательной среде «Сабуро - мальтоза - агар» с теллуритом калия (внесен до стерилизации)
Фиг.7 Рост культуры Candida auris СBS 10913 на питательной среде «Сабуро - мальтоза - агар» с теллуритом калия (внесен после стерилизации)
Фиг.8 Рост культуры Candida auris 42/80 на питательной среде «Сабуро - мальтоза - агар» с теллуритом калия (внесен до стерилизации)
Фиг.9 Рост культуры Candida auris 42/80 на питательной среде «Сабуро - мальтоза - агар» с теллуритом калия (внесен после стерилизации)
Фиг.10 Рост культуры Candida lusitania на питательной среде «Сабуро - мальтоза - агар» с теллуритом калия (внесен до стерилизации)
Фиг.11 Рост культуры Candida lusitania на питательной среде «Сабуро - мальтоза - агар» с теллуритом калия (внесен после стерилизации)
Фиг.12 Рост культуры Candida glаbrata на питательной среде «Сабуро - мальтоза - агар» с теллуритом калия (внесен до стерилизации)
Фиг.13 Рост культуры Candida glаbrata на питательной среде «Сабуро - мальтоза - агар» с теллуритом калия (внесен после стерилизации)
Фиг.14 Рост культуры Candida dubliensis на питательной среде «Сабуро - мальтоза - агар» с теллуритом калия (внесен до стерилизации)
Фиг.15 Рост культуры Candida dubliensis на питательной среде «Сабуро - мальтоза - агар» с теллуритом калия (внесен после стерилизации
Фиг.16 Рост культуры Candida parapsilosis на питательной среде «Сабуро - мальтоза - агар» с теллуритом калия (внесен после стерилизации)
Фиг.17 Рост культуры Candida parapsilosis на питательной среде «Сабуро - мальтоза - агар» с теллуритом калия (внесен до стерилизации)
Фиг.18 Рост культуры Staphylococcus aureus (верхний сектор), Candida auris (нижний левый сектор), Candida albicans (нижний правый сектор), на питательной среде «Сабуро - мальтоза - агар» с теллуритом калия (внесен до стерилизации)
Пример 1.
Навеску 62,5г, содержащей пептон ферментативный 10,0 г/л, дрожжевой экстракт 2,0 г/л, лимонную кислоту 0,15 г/л, мальтозу 40,0 г/л, агар 10,0 г/л, и 10,0 мл/л 2%-ного раствора теллурита калия, растворяют в 1,0 л дистилированной воды, тщательно перемешивают, автоклавируют при температуре 121°С, охладают до 50 - 45°С, разливают в стерильные чашки Петри, подсушивают и используют для высева.
Контроль: «Сабуро - мальтоза - агар» с теллуритом калия (внесен после стерилизации) и питательная среда Сабуро.
Высев на данные питательные среды штаммов C. auris CBS 10913, C. auris 48/20, C. albicans ATCC 90028, C. lusitania AV85, C. glаbrata, C. dubliensis KM19, C. parapsilosisOR16, C. kefir до единичных колоний проводят общепринятым микробиологическим методом. Результаты характерных признаков роста колоний Candida spp., выращенных при температуре 37°C в течение 24 - 48 часов, представлены в таблице№1.
Таблица №1.

п/п
Наименование исследуемых штаммов Исследуемые среды
Сабуро - мальтоза агар Сабуро - мальтоза
агар с теллуритом калия (внесен после стерилизации)
Сабуро - мальтоза агар с теллуритом калия (внесен до стерилизации
1 C. auris CBS 10913 Более мелкие белые колонии Черные мелкие колонии Средние серые колонии с четким серым центром
2 C. auris 48/20 Более мелкие белые колонии Черные мелкие колонии Средние серые колонии с четким серым центром
3 C. albicans ATCC 90028 Мелкие белые колонии Черные мелкие колонии Крупные бело- серые с более серым центром
4 C. lusitania AV85 Мелкие белые колонии Черные мелкие колонии Крупные темно- серые с более серым центром и светлой каймой вокруг колонии
5 C. glаbrata Мелкие белые колонии Черные мелкие колонии Крупные серые с более серым центром
6 C. dubliensis KM19 Мелкие белые колонии Черные мелкие колонии Крупные белые с черной каймой вокруг колонии
7 C. parapsilosis OR16 Мелкие белые колонии Черные мелкие колонии Средние белые колонии
8 Staphylococcus aureus Мелкие белые колонии Рост подавлен Средние четкие черные колонии
На Сабуро - мальтоза - агар рост Candida spp. в виде черных колоний среднего размера, рост Candida auris в виде более мелких колоний.
Предлагаемый способ получения питательной среды обеспечивает рост Candida albicans - крупные бело- серые с более серым центром, Candida lusitania - крупные темно - серые с более серым центром и светлой каймой вокруг колонии, Candida glabrata - крупные серые с более серым центром, Candida dubliensis - крупные белые с черной каймой вокруг колонии, Candida parapsilosis - средние белые колонии, Candida auris., на среде полученной предлагаемым способом, - средние серые колонии с четким серым центром.
Таким образом, из фото № 4 - № 18 видно, что предлагаемый способ получения питательной среды по сравнению со средой прототипом позволяет визуально идентифицировать Candida auris, Candida albicans, Candida tropicalis, Candida krusei, Candida glabrata, Candida parapsilosis и Staphylococcus aureus.
Внесение до стерилизации 10,0 мл/л 2%-ного раствора теллурита калия в традиционную среду для культивирования Candida spp. дает возможность не проводить трудоемких затрат для разработки питательных сред и одновременнно и получить четкий результат идентификации до вида, что позволяет исключить ложную идентификацию Candida auris.

Claims (1)

  1. Способ получения питательной среды для селективного выявления Candida auris, заключающийся в том, что навеску питательной среды следующего состава: пептон ферментативный 10,0 г/л, дрожжевой экстракт 2,0 г/л, лимонная кислота 0,15 г/л, мальтоза 40,0 г/л, агар 10,0 г/л растворяют в 1,0 л дистиллированной воды, отличающийся тем, что 10,0 мл/л 2%-ного раствора теллурита калия вносят до стерилизации среды Сабуро – мальтоза-агар, автоклавируют 15 мин при 121°С, охлаждают до 50-45°С, разливают в стерильные чашки Петри, после охлаждения чашки подсушивают и используют для высева.
RU2022114795A 2022-06-29 Способ получения питательной среды для селективного выявления Candida auris RU2788607C1 (ru)

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2788607C1 true RU2788607C1 (ru) 2023-01-23

Family

ID=

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2386693C2 (ru) * 2007-10-29 2010-04-20 Федеральное агентство по высокотехнологичной медицинской помощи Федеральное государственное учреждение "Уральский научно-исследовательский институт дерматовенерологии и иммунопатологии" (ФГУ УрНИИДВиИ Росмедтехнологий) Способ идентификации дрожжеподобных грибов candida albicans

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2386693C2 (ru) * 2007-10-29 2010-04-20 Федеральное агентство по высокотехнологичной медицинской помощи Федеральное государственное учреждение "Уральский научно-исследовательский институт дерматовенерологии и иммунопатологии" (ФГУ УрНИИДВиИ Росмедтехнологий) Способ идентификации дрожжеподобных грибов candida albicans

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
JEFFERY-SMITH A., et al. Candida auris: a review of the literature. Clin. Microbiol. Rev. 2017; 61: doi: 10.1128/CMR.00029-17. *
ШЕПЕЛИН А.П., Сравнительная оценка качества среды Сабуро отечественного и импортного производства, Научные ведомости, Серия Медицина, Фармация, 2013, N18 (161), выпуск 23. *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US7018828B1 (en) Microbial culture medium containing agar and iota carrageenan
Acharya et al. Sabouraud agar and other fungal growth media
CN106868094A (zh) 一种原料乳中抗生素残留的快速检测方法
RU2788607C1 (ru) Способ получения питательной среды для селективного выявления Candida auris
CN107743519A (zh) 用于分离包括传统培养基中无法培养的如支原体的物种的临床样本的培养基
RU2296163C2 (ru) Способ оценки специфической активности бактериофагов
RU2791911C1 (ru) Способ идентификации дрожжеподобного гриба Candida auris
Mahesh et al. Isolation and characterization of bacteria isolated from municipal sewage water of Nandyal, Kurnool, AP, India
RU2791966C1 (ru) Идентификация дрожжеподобного гриба Candida auris
EP3732300B1 (en) A novel medium for growth and antibiotic susceptibility test of mycobacteria
RU2580227C1 (ru) Питательная среда для выделения legionella pneumophila
RU2648160C2 (ru) Питательная среда для выделения бактерий yersinia enterocolitica
Gupta et al. Isolation, identification, speciation, and antibiogram of enterococcus species by conventional methods and assessment of the prevalence of vana genotype among VRE
RU2722071C1 (ru) Питательная среда для культивирования Bacillus subtilis ВКПМ В-12079
CN109706214A (zh) 一种耐喹诺酮类抗生素沙门氏菌菌株的识别及分离方法
RU2710160C1 (ru) Питательная среда для выделения Pseudomonas aeruginosa из водных объектов
RU2786394C1 (ru) СПОСОБ СНИЖЕНИЯ УРОВНЯ КОНТАМИНАЦИИ КЛИНИЧЕСКОГО МАТЕРИАЛА ПРИ ПОСЕВЕ НА ПЛОТНЫЕ ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ ДЛЯ ВЫДЕЛЕНИЯ Mycobacterium tuberculosis complex
RU2715329C1 (ru) Питательная среда для выделения и идентификации неферментирующих бактерий
Maroff Determination of the inhibitory activity of some biological extracts agaiast multi rrsistans antibiotic Staphylococcus specis which and isolated from different sources of infechtion
Lima et al. Phenotypic Characteristics of Yeasts of the Genus Candida and Cryptococcus in Differential Culture Media
Shah et al. Isolation, ıdentification, speciation, and antibiogram of enterococcus species by conventional methods and assessment of the prevalence of vana genotype among VRE
AL-Fatlawi et al. Production Pyocyanin from Pseudomonas Aeruginosa and the Inhibitory Effect of the against a Number of Pathogenic Bacteria
Sawarkar et al. Morphological and Biochemical Characterization of Endophytic Bacteria from Leaves of Tamarind (Tamarindus indica)
RU2654669C1 (ru) Диагностическая питательная среда для дифференциации возбудителя сибирской язвы по капсуло- и токсинообразованию
RU2125610C1 (ru) Плотная питательная среда для выявления возбудителя сибирской язвы