RU2791911C1 - Способ идентификации дрожжеподобного гриба Candida auris - Google Patents

Способ идентификации дрожжеподобного гриба Candida auris Download PDF

Info

Publication number
RU2791911C1
RU2791911C1 RU2022114798A RU2022114798A RU2791911C1 RU 2791911 C1 RU2791911 C1 RU 2791911C1 RU 2022114798 A RU2022114798 A RU 2022114798A RU 2022114798 A RU2022114798 A RU 2022114798A RU 2791911 C1 RU2791911 C1 RU 2791911C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
candida
medium
zone
yeast
auris
Prior art date
Application number
RU2022114798A
Other languages
English (en)
Inventor
Михаил Владимирович Храмов
Ирина Петровна Мицевич
Original Assignee
Федеральное бюджетное учреждение науки "Государственный центр прикладной микробиологии и биотехнологии" Федеральной службы по надзору в сфере прав потребителей и благополучия человека
Filing date
Publication date
Application filed by Федеральное бюджетное учреждение науки "Государственный центр прикладной микробиологии и биотехнологии" Федеральной службы по надзору в сфере прав потребителей и благополучия человека filed Critical Федеральное бюджетное учреждение науки "Государственный центр прикладной микробиологии и биотехнологии" Федеральной службы по надзору в сфере прав потребителей и благополучия человека
Application granted granted Critical
Publication of RU2791911C1 publication Critical patent/RU2791911C1/ru

Links

Images

Abstract

Изобретение относится к биотехнологии и микробиологии. Предложен способ идентификации дрожжеподобного гриба Candida auris, предусматривающий посев культуры на питательную среду и инкубацию при 37°C. Питательная среда содержит Легионелбакагар, включающий 10,0 г/л гидролизата сернокислотного рыбной муки марки ФК, 10,0 г/л стимулятора роста гемофильных микроорганизмов, 12±2,0 г/л бактериологического агара, и дополнительно 9,0 г/л дрожжевого экстракта, 40 г/л глюкозы, 0,25 г/л железа пирофосфата и 100 мл эмульсии яичного желтка; причем эмульсию яичного желтка вносят после автоклавирования питательной среды в течение 15 мин при 121°С и охлаждения до 50 – 45°С. Визуальную идентификацию культуры осуществляют по наличию зоны фосфолипазной активности в виде беловатой зоны преципитации вокруг колонии Candida auris и отсутствию данной зоны у других дрожжеподобных грибов вида Candida. Изобретение обеспечивает расширения арсенала способов селективного обнаружения Candida auris. 8 ил., 1 табл., 1 пр.

Description

Изобретение относится к санитарной и клинической микробиологии и может быть использовано для селективного выявления и идентификации дрожжеподобных грибов Candida auris в лабораторной диагностике, микологии.
Колонизация и инфицирование Candida auris среди госпитализированных пациентов и лиц, находящихся на длительном лечении, стала глобальной проблемой, Candida auris является распространенным оппортунистическим патогеном, представляющим серьезную угрозу здоровью. Данный микроорганизм трудно идентифицировать стандартными лабораторными методами. Возбудитель легко распространяется в медицинских учреждениях. По этой причине важно быстро идентифицировать Candida auris у госпитализированного пациента, чтобы принять меры для предотвращения распространения и возникновения вспышечной заболеваемости. Уязвимыми являются иммунокомпроментированные лица - пожилые, ослабленные хроническими и острыми заболеваниями (онкозаболевания, политравма, сахарный диабет, сепсис, пневмонии, почечная недостаточность и т.п.), новорожденные, люди после пересадки органов и косного мозга, ВИЧ-инфицированные. Особая опасность представляется для отделений интенсивной терапии (ОИТ) и пациентов с тяжелой формой COVID-19. Симптомы некоторых грибковых заболеваний могут быть аналогичны симптомам симптомам COVID-19, включая лихорадку, кашель и одышку. Лабораторное тестирование необходимо для определения того, есть ли у человека грибковая инфекция или COVID-19. У некоторых пациентов может быть COVID-19 и грибковая инфекция одновременно. Сочетанные инфекции ведут к тяжести заболевания и смерти пациентов.
В методических рекомендациях «Грибы рода CANDIDA (Методы выделения, идентификации на видовом уровне и определение чувствительности к противогрибковым препаратам)» (НИИЭиМ им. Н.Ф. Гамалеи РАМН), М. 2009, описаны методы выделения и идентификации грибов рода Candida, определению чувствительности их к антигрибковым препаратам (антимикотикам), однако Candida auris была впервые выделен в 2010 году.
Лабораторная диагностика инфекции Candida auris с использованием доступных тест-систем затруднительна ввиду частых ошибок идентификации. Наиболее высокой степенью точности обладает метод, основанный на матрично-активированной лазерной десорбции/ионизации (MALDI-TOF) и способен отличить Candida auris от других видов Candida. Такая услуга доступна крупным бактериологическим лабораториям, но не доступна для обычных клинических и бактериологических лабораторий. Для бактериологического контроля Candida spp. (Candida albicans и других видов грибов рода Candida) рекомендовано использование питательных сред: «Питательная среда для контроля микробной загрязненности» (Питательная среда (ГРМ №2 (Сабуро)», «Питательная среда для выделения и культивирования дрожжеподобных и плесневых грибов (Сабуро - мальтоза агар)», триптикоза - соевого агара по ОФС.1.2.4.0003.15 (ГФ РФ Государственная Фармокопея Российской Федерации XIV издание), МУК 4.2.2942-11 (Методы санитарно-бактериологических исcледований объектов окружающей среды, воздуха и контроля стерильности в лечебных организациях), регламентирующим перечень питательных сред для выявления Candida albicans.
Ведущими зарубежными фирмами MERCK, HiMedia выпускаются сухие питательные среды для обнаружения Candida spp.): Соево-казеиновый агар (Casein Soya Bean Digest agar) HiMedia, Агар Сабуро с глюкозой (Sabouraud 4% Glucose Agar) HiMedi, Бульон Сабуро (Sabouraud Broth), Агар Сабуро с глюкозой (Sabouraud 4% Glucose Agar) HiMedia, Декстрозный агар Сабуро с4% Glucose Agar) HiMedi, Бульон Сабуро (Sabouraud Broth), Агар Сабуро с глюкозой (Sabouraud 4% Glucose Agar) HiMedia, Декстрозный агар Сабуро с соевым лецитином и Твин 80 HiMedia (ФСЗ 2009/03709.
Недостатком вышеперечисленных сред является одинаковый рост колоний Candida spp. что не позволяет провести идентификацию до вида.
Для идентификации используют хромогенную среду, предназначенную для дифференциации C. albicans и других видов Candida в клинических и неклинических образцах: «HiCrome Candida Differential agar» M1297A состоящий из следующих компонентов г/л: пептон особый - 15,0 г/л, дрожжевой экстракт - 4,0 г/л, дикалий гидрофосфат - 1,0 г/л, хромогенная смесь - 7,22 г/л, хлорамфеникол - 0,500 г/л, агар микробиологический - 15 г/л
«HiCrome Candida Differential agar» является альтернативой традиционным средам для выделения и идентификации Candida spp. Хромогенные субстраты, содержащиеся в данной среде, позволяют быстро идентифицировать и дифференцировать различные виды кандид по цвету колоний. Колонии Candida albicans - зеленые, Candida krusei - фиолетово-розовые, Candida tropicalis - синие, Candida glabrata и Candida parapsilosis - бледно-фиолетовый. Candida auris может иметь на данной среде розовый, красный, кремовый или фиолетовый цвет, а также иметь сочетание этих цветов на одной чашке.
Слабовыраженное окрашивание колоний Candida auris, приводит к сомнительным дифференцирующим свойствам.
Рекомендованной и наиболее используемой служит «Питательная среда для выращивания дрожжевых и плесневых грибов (агар Сабуро)». Состав питательной среды (агар Сабуро): панкреатический гидролизат рыбной муки - 10 г/л, панкреатический гидролизат казеина - 10 г/л, дрожжевой экстракт - 2,0 г/л, натрий фосфорнокислый однозамещенный - 2 г/л, глюкоза моногидрат - 40 г/л, агар микробиологический - 10,0 +/- 3,0, вода очищенная - 1 л, мл, рН 6,0. Навеску, соответственно прописи, растворить в 1 л дистиллированной воды, автоклавировать 15 мин при 121°С, после охлаждения до 50 - 45°С разлить в стерильные чашки Петри.
Высев до единичных колоний провести общепринятым микробиологическим методом, посевы инкубировать при температуре 20-25°С в течение 24±72ч,
Данная среда традиционно используется для микробиологической практики. На агаре Сабуро рост Candida spp. в виде белых колоний среднего размера, рост Candida auris в виде более мелких белых колоний.
Однако эта среда не позволяет провести идентификацию Candida spp. до вида.
Наиболее близким техническим решением к заявляемому является способ идентификации гриба Candida albicans,( RU, патент № 2386693) предусматривающий посев гриба на среде с индикаторами, инкубацию при 37°С и выделение культуры гриба по изменению цвета колоний на среде, посев осуществляют на агар Сабуро, содержащий среду Гисса с глюкозой и среду Гисса с мальтозой, и на агар Сабуро, содержащий среду Гисса с сахарозой, инкубацию проводят в течение 24-48 ч. Выделение дрожжеподобных грибов Candida albicans осуществляют по изменению цвета колоний: при этом на агаре Сабуро, содержащем среду Гисса с глюкозой и среду Гисса с мальтозой, - колонии синего цвета, на агаре Сабуро, содержащем среду Гисса с сахарозой, - бледно-голубого цвета.
Однако опытным путем установлено, что Candida albicans и Candida auris на агаре Сабуро, содержащем среду Гисса с глюкозой, среду Гисса с сахарозой, среду Гисса с мальтозой, по цвету не отличаются.
Задачей данного изобретения является модификация метода идентификации дрожжеподобного гриба Candida auris.
Техническим результатом изобретения является, достижение стабильности результатов по ростовым и дифференцирующим свойствам, позволяющей упростить и исключить ложную идентификацию возбудителя.
Технический результат достигается тем что предложен способ идентификации дрожжеподобного гриба Candida auris, предусматривающий посев культуры на питательную среду с добавками, инкубацию при температуре 37°C и визуальную идентификацию культуры, причем посев осуществляют на питательную среду Легионелбакагар, в которую дополнительно вносят дрожжевой экстракт 9,0 г/л, глюкозу- 40 г/л, железа пирофосфат 0,25 г/л, автоклавируют 15 мин. при 121°С, после охлаждения до 50 - 45°С в среду вносят 100 мл эмульсии яичного желтка, а визуальную идентификацию осуществляют по наличию зоны фосфолипазной активности вокруг колонии Candida auris и отсутствию данной зоны у других дрожжеподобных грибов вида Candida.
Изобретение осуществляется следующим образом:
Готовят навеску «Питательной среды для культивирования легионелл (Легионелбакагар)» состава: сернокислотный гидролизат рыбной муки (марки ФК) - 10,0 г/л, стимулятор роста гемофильных микроорганизмов - 10,0 г/л, агар бактериологический - 12,0±2,0 г/л, растворяютв 900 мл дистилированной воды, перемешивают дополнительно вносят дрожжевой экстракт 9,0 г/л, глюкозу- 40 г/л, железа пирофосфат 0,25 г/л, автоклавируют 15 мин. при 121°С. После охлаждения до 50 - 45°С в среду вносят 100 мл эмульсии яичного желтка, тщательно перемешивают и разливают в стерильные чашки Петри. После застывания чашки используют для засева. Высев до единичных колоний проводят общепринятым микробиологическим методом, культивируют при температуре 37°C в течение 24 - 48 часов. Рост C. auris в виде средних желтоватых колонии с четкой зоной фосфолипазной активности (появление беловатой зоны преципитации вокруг колонии дрожжей), рост Candida albicans и Candida spp. в виде крупных желтых колоний с отсутствием зоны фосфолипазной активности.
Графические материалы, иллюстрирующие предлагаемое изобретение:
Фиг.1 - фото среды «Легионелбакагар».
Фиг.2 - фото среды «Легионелбакагар с эмульсией яичного желтка».
Фиг.3 - фото среды «Сабуро агар».
Фиг.4 - фото Рост культуры Candida auris на питательной среде «Легионелбакагар с эмульсией яичного желтка».
Фиг.5 - Рост культуры Candida albicans на питательной среде «Легионелбакагар с эмульсией яичного желтка».
Фиг.6 - Рост культуры Candida auris - колонии с зоной фосфолиполиза, Candida albicans (крупные белые колонии) и Staphylococcus aureus (ярко - желтые крупные колонии) на питательной среде Легионелбакагар с эмульсией яичного желтка.
Фиг.7 - фото Рост культуры Candida auris на питательной среде «Легионелбакагар».
Фиг.8 - Рост культуры Candida albicans на питательной среде «Легионелбакагар».
Пример 1
Навеску 33 г, содержащую сернокислотный гидролизат рыбной муки (марки ФК) - 10,0 г/л, стимулятор роста гемофильных микроорганизмов - 10,0 г/л, агар бактериологический - 12,0±2,0 г/л, растворяют в 900 мл дистилированной воды, дополнительно вносят дрожжевой экстракт 9,0 г/л, глюкозу - 40 г/л, железа пирофосфат 0,25 г/л, автоклавируют 15 мин при 121°С. После охлаждения до 50 - 45°С в среду вносят 100 мл эмульсии яичного желтка, тщательно перемешивают и разливают в стерильные чашки Петри, охлаждают, подсушивают и используют для высева.
Для контроля посев осуществляют на питательную среду для выращивания дрожжевых и плесневых грибов (агар Сабуро) и на питательную среду для культивирования легионелл (Легионелбакагар)».
Высев на данные питательные среды штаммов C. auris CBS 10913, C. auris 48/20, C. albicans ATCC 90028, C. lusitania AV85, C. glаbrata, C. dubliensis KM19, C. parapsilosis OR16, C. kefir до единичных колоний проводят общепринятым микробиологическим методом, посевы культивируют при температуре 37°C в течение 24 - 48 часов. Результаты характерных признаков роста колоний Candida spp., выращенных при температуре 37°C в течение 24 - 48 часов, представлены в таблице№1.
Таблица №1
№ п/п Наименование исследуемых штаммов Сабуро агар Легионелбакагар Легионелбакагар с эмульсией яичного желтка
1 C. auris CBS 10913 Более мелкие белые колонии Средние желтоватые колонии Средние желтоватые колонии с четкой зоной фосфолипазной активности (появление беловатой зоны преципитации вокруг колонии дрожжей)
2 C. auris 48/20 Более мелкие белые колонии Средние желтоватые колонии Средние желтоватые колонии с четкой зоной фосфолипазной активности (появление беловатой зоны преципитации вокруг колонии дрожжей)
3 C. albicans ATCC 90028 Мелкие белые колонии Крупные желтые колонии Крупные белые колонии
4 C. lusitania AV85 Мелкие белые колонии Крупные белые колонии Крупные белые колонии
5 C. glаbrata ТМ Мелкие белые колонии Крупные белые колонии Крупные белые колонии
6 C. dubliensis KM19 Мелкие белые колонии Крупные белые колонии Крупные белые колонии
7 C. parapsilosis OR16 Мелкие белые колонии Средние белые колонии Средние белые колонии
8 Staphylococcus aureus Очень мелкие белые колонии Мелкие белые колонии Крупные ярко - желтые колонии
На агаре Сабуро - Candida spp. в виде белых колоний среднего размера, рост Candida auris в виде более мелких белых колоний.
В предлагаемом способе рост Candida albicans в виде крупных желтых колоний, рост Candida lusitania, Candida glabrata, Candida dubliensis в виде крупных белых колоний, Candida parapsilosis - средние белые колонии, а Candida auris - средние желтоватые колонии с четкой зоной фосфолипазной активности (появление беловатой зоны преципитации вокруг колонии дрожжей).
Данный способ позволяет визуально идентифицировать наличие продукции фосфолипазы у C. auris и отсутствие продукции фосфолипазы у C. albicans, C. tropicalis, C. krusei, C. glabrata и C. parapsilosis.
Таким образом, из фото № 4 - № 6 видно, что предлагаемый способ по сравнению с прототипом позволяет исключить ложную идентификацию Candida auris, Candida albicans, Candida tropicalis, Candida krusei, Candida glabrata и Candida parapsilosis.
Внесение до стерилизации дрожжевого экстракта, глюкозы, железа пирофосфата и после стерилизации - эмульсии яичного желтка, дает возможность не проводить трудоемких затрат для разработки питательных сред и одновременно получить четкий результат идентификации до вида.

Claims (1)

  1. Способ идентификации дрожжеподобного гриба Candida auris, предусматривающий посев культуры на питательную среду с добавками, инкубацию при температуре 37°C и визуальную идентификацию культуры, отличающийся тем, что посев осуществляют на питательную среду Легионелбакагар следующего состава, г/л: гидролизат сернокислотный рыбной муки марки ФК - 10,0, стимулятор роста гемофильных микроорганизмов - 10,0, бактериологический агар - 12±2,0, дополнительно содержащую дрожжевой экстракт 9,0 г/л, глюкозу - 40 г/л, железа пирофосфат - 0,25 г/л, после автоклавирования среды в течение 15 мин при 121°С и охлаждения до 50 - 45°С в среду вносят 100 мл эмульсии яичного желтка, а визуальную идентификацию культуры осуществляют по наличию зоны фосфолипазной активности в виде беловатой зоны преципитации вокруг колонии Candida auris и отсутствию данной зоны у других дрожжеподобных грибов вида Candida.
RU2022114798A 2022-06-01 Способ идентификации дрожжеподобного гриба Candida auris RU2791911C1 (ru)

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2791911C1 true RU2791911C1 (ru) 2023-03-14

Family

ID=

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2386693C2 (ru) * 2007-10-29 2010-04-20 Федеральное агентство по высокотехнологичной медицинской помощи Федеральное государственное учреждение "Уральский научно-исследовательский институт дерматовенерологии и иммунопатологии" (ФГУ УрНИИДВиИ Росмедтехнологий) Способ идентификации дрожжеподобных грибов candida albicans
US20190338241A1 (en) * 2018-05-06 2019-11-07 Santa Fe BioLabs LLC Novel Technology to Identify Candida Auris

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2386693C2 (ru) * 2007-10-29 2010-04-20 Федеральное агентство по высокотехнологичной медицинской помощи Федеральное государственное учреждение "Уральский научно-исследовательский институт дерматовенерологии и иммунопатологии" (ФГУ УрНИИДВиИ Росмедтехнологий) Способ идентификации дрожжеподобных грибов candida albicans
US20190338241A1 (en) * 2018-05-06 2019-11-07 Santa Fe BioLabs LLC Novel Technology to Identify Candida Auris
US10870829B2 (en) * 2018-05-06 2020-12-22 Santa Fe BioLabs LLC Technology to identify Candida auris

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ОГАНЕСЯН Э.Г. и др. "Изоляты Candida auris от пациентов с COVID-19: идентификация, резистентность к противогрибковым препаратам"; Проблемы медицинской микологии, 2021, т.23, N 3, с.72-77. Методические указания МУК 4.2.2217-07. Выявление бактерий Legionella pneumophila в объектах окружающей среды; М., 2007, с.13-14. *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN103282513B (zh) 用于检测靶微生物的制品和方法
Acharya et al. Sabouraud agar and other fungal growth media
RU2342435C2 (ru) Селективная культуральная среда для выделения и выявления видов рода streptococcus
US8404460B2 (en) Method for detecting and/or identifying Clostridium difficile
RU2791911C1 (ru) Способ идентификации дрожжеподобного гриба Candida auris
US20100297692A1 (en) Reaction medium for detecting and/or identtifying staphyloccous aureus
RU2791966C1 (ru) Идентификация дрожжеподобного гриба Candida auris
Al-Abedi Comparative study for candida spp isolated and identification from goats milk with mastitis between API Candida kit Test, Candida chromogenic agar and VITEK 2 system
Milanda et al. Antibacterial activity of red yeast rice extract against Propionibacterium acnes ATCC 11827 and methicilin-resistant Staphylococcus aureus ATCC BAA-1683
RU2296163C2 (ru) Способ оценки специфической активности бактериофагов
RU2788607C1 (ru) Способ получения питательной среды для селективного выявления Candida auris
EP3732300B1 (en) A novel medium for growth and antibiotic susceptibility test of mycobacteria
Ali et al. Comparison between different cultural medium on the growth of five Aspergillus species
RU2416635C2 (ru) Хромогенная питательная среда для выявления и идентификации клебсиелл
McCue et al. Microbiology: Microbial Culture
TWI627277B (zh) Medium, including the set of the group, and its application
RU2745159C1 (ru) Селективная питательная среда для выделения возбудителей дерматофитозов
Lima et al. Phenotypic Characteristics of Yeasts of the Genus Candida and Cryptococcus in Differential Culture Media
RU2827845C1 (ru) Элективная питательная среда для выделения Pseudomonas aeruginosa
AL-Rubaie et al. Detection of Some Virulence Factors in Candida albicans Obtained from Different Clinical Specimens of Iraqi Patients
Hussein et al. Evaluation of haemolytic activity of some Candida species
RU2756696C1 (ru) СЕЛЕКТИВНАЯ ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ВЫДЕЛЕНИЯ ГРИБОВ ВИДА Malassezia furfur
Zaman et al. Prevalence and virulence factors of vaginal candidiasis among females collected in tertiary care hospital, Khyber Pakhtunkhwa
RU2266956C2 (ru) Питательная среда для выделения бруцелл
US20110275114A1 (en) Method and medium for detecting the presence or absence of methicillin resistant staphylococcus aureus (mrsa) in a test sample