RU2125610C1 - Плотная питательная среда для выявления возбудителя сибирской язвы - Google Patents
Плотная питательная среда для выявления возбудителя сибирской язвы Download PDFInfo
- Publication number
- RU2125610C1 RU2125610C1 SU4516362A RU2125610C1 RU 2125610 C1 RU2125610 C1 RU 2125610C1 SU 4516362 A SU4516362 A SU 4516362A RU 2125610 C1 RU2125610 C1 RU 2125610C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- medium
- anthrax
- agar
- strains
- sorbitol
- Prior art date
Links
Images
Abstract
Среда предназначена для выделения и дифференциации возбудителя сибирской язвы от близкородственных споровых сапрофитов. В состав среды входит питательная основа, pH-индикатор, агар-агар, D-сорбит и дистиллированная вода. В качестве pH-индикатора используют бромтимоловый синий. Среда позволяет не только выделить возбудителя сибирской язвы, но и дифференцировать вирулентные капсулообразующие и авирулентные бескапсульные штаммы. 1 табл.
Description
Изобретение относится к микробиологии и касается питательных сред для возбудителя сибирской язвы.
Известна яично-желточная питательная среда для дифференциации B. anthracis от близкородственных сапрофитов /1, 3/. Недостатками среды являются непостоянство проявления признака лецитиназообразования как у сибиреязвенных штаммов, так и у близкородственных бацилл, а также невозможность проведения дифференциации капсулообразующих и бескапсульных штаммов B. anthracis. Среда не позволяет одновременно проводить выделение возбудителя сибирской язвы и дифференциацию его от близкородственных сапрофитов, так как высев на яично-желточный агар является одним из этапов идентификации B. anthracis /6/.
Известна среда с кровяным агаром, используемая для дифференциации возбудителя сибирской язвы от споровых сапрофитов /3, 5/. Эта среда имеет те же недостатки, что и яично-желточная /4, 8/.
Наиболее близкой к изобретению является плотная питательная среда, содержащая питательную основу, pH-индикатор - фенолфталеинфосфат натрия, агар. Среда позволяет дифференцировать B. anthracis от близкородственных сапрофитов по признаку фосфатазообразования. Недостатки среды заключаются в следующем;
1) Нестабильности синтеза на ней щелочной фосфатазы;
2) невозможности проведения дифференциации между капсулообразующими и бескапсульными штаммами;
3) среда не позволяет одновременно проводить выделение и окончательную дифференциацию B. anthracis от споровых сапрофитов /2, 7/.
1) Нестабильности синтеза на ней щелочной фосфатазы;
2) невозможности проведения дифференциации между капсулообразующими и бескапсульными штаммами;
3) среда не позволяет одновременно проводить выделение и окончательную дифференциацию B. anthracis от споровых сапрофитов /2, 7/.
Следовательно, в настоящее время вопрос о создании дифференциальной среды для диагностики B. anthracis остается актуальным.
Цель изобретения - повышение дифференцирующих свойств среды.
Поставленная цель достигается тем, что плотная питательная среда для выявления возбудителя сибирской язвы, содержащая питательную основу, pH-индикатор, агар и воду дополнительно содержит D-сорбит, а в качестве pH-индикатора - бромтимоловый синий, при следующем соотношении компонентов (мас. %):
Питательная основа - 1,5 - 2
D-сорбит - 1 - 2
Бромтимоловый синий - 0,025 - 0,003
Агар-агар - 1,5 - 2
Вода - остальное
В качестве питательной основы может быть использовано питательное сырье, на котором бактерии B. anthracis дают рост и размножение, например гидролизат кильки, дрожжевой экстракт, ферментативный гидролизат мяса или рыбы и др.
Питательная основа - 1,5 - 2
D-сорбит - 1 - 2
Бромтимоловый синий - 0,025 - 0,003
Агар-агар - 1,5 - 2
Вода - остальное
В качестве питательной основы может быть использовано питательное сырье, на котором бактерии B. anthracis дают рост и размножение, например гидролизат кильки, дрожжевой экстракт, ферментативный гидролизат мяса или рыбы и др.
Только при вышеперечисленных концентрациях компонентов питательной среды достигается поставленная цель. Бромтимоловый синий в концентрациях 0,001% и 0,005% не позволяет достичь поставленной цели, так как в первом случае слабо окрашивает колонии бактерий, во втором - оказывает ингибирующее действие, проявляющееся в уменьшении размеров колоний, а также в снижении биологической концентрации (БК) на 30 - 50% по сравнению с контрольной средой (контрольная среда - агар Хоттингера).
Среда ингибирующими свойствами не обладает: БК на контрольной среде = 100%, на среде с D-сорбитом = 95 ± 5%.
Пример 1. Плотную питательную среду готовят следующим образом:
Для приготовления питательной среды отдельно готовят следующие компоненты:
1. 20%-ный раствор D-сорбита. Для этого 20 г D-сорбита растворяют в 80 мл дистиллированной воды. Стерилизуют, нагревая до кипения.
Для приготовления питательной среды отдельно готовят следующие компоненты:
1. 20%-ный раствор D-сорбита. Для этого 20 г D-сорбита растворяют в 80 мл дистиллированной воды. Стерилизуют, нагревая до кипения.
2. 1,6%-ный спиртовый раствор бромтимолового синего. Для этого 1,6 г pH-индикатора растворяют в 100 мл 96o этилового спирта.
3) в дистиллированную воду добавляют агар-агар и гидролизат кильки до рабочей концентрации 1,5% (каждого из компонентов), нагревают до 50 - 60oC для растворения гидролизата кильки.
Устанавливают pH 7,3 - 7,4. Стерилизуют в автоклаве при 112oC в течение 15 - 20 минут.
После охлаждения агаризованной питательной основы до 45o - 50oC в нее добавляют стерильной 20%-ный раствор D-сорбита и 1,6%-ный спиртовый раствор бромтимолового синего до рабочей концентрации 1% и 0,025% соответственно. Значение pH среды после смешивания компонентов должно составлять 7,2 - 7,3. При этом среда имеет сине-зеленое окрашивание. Среду разливают в чашки Петри. Посев бактерий производят на застывшие агаровые поверхности.
Пример 2. Исходные растворы компонентов питательной среды готовят и стерилизуют, как в примере N 1, используя 2% дрожжевой экстракт, агаризуя среду до рабочей концентрации, равной 2%.
Смешивание стерильных компонентов среды проводят, как в примере N 1, доводя концентрации D-сорбита до бромтимолового синего в среде до 2% и 0,003% соответственно. Среду сине-зеленого цвета разливают в чашки Петри, посев бактерий производят на застывшие агаровые поверхности.
Пример 3. Использование среды для выявления B. anthracis и одновременной его дифференциации от близкородственных сапрофитов, а также дифференциации капсулообразующих и бескапсульных штаммов возбудителя сибирской язвы.
Посевной материал вирулентного штамма 836 (капсулообразующий), авирулентного штамма СТИ-1 (бескапсульный), а также близкородственных сапрофитов B. cereus шт. 1408, B. thuringiensis шт. 1415 наносят на чашки с плотной средой с D-сорбитом, растирая шпателем до получения единичных колоний, используя при этом не менее пяти чашек. В качестве контрольных сред используют агар Хоттингера и среду с фенолфталеинфосфатом натрия (прототип). На каждую из вышеперечисленных сред высевают как монокультуры исследуемых штаммов бактерий, так и их смеси.
Получение посевного материала. В качестве посевного материала могут быть использованы как вегетативные, так и споровые клетки бактерий, выращенные на скошенном в пробирке агаре при температуре 36 ± 1oC. Смыв микроорганизмов с поверхности агара проводят стерильным физиологическим раствором. Полученные суспензии бактерий используют для высева на чашки. Инкубирование посевов проводят при температуре 36 ± 1oC в течение 2 - 3 часов. Результаты высева представлены в таблице.
Из таблицы следует, что при выращивании штаммов 836, СТИ-1, B. cereus 1408, B. thuringiensis 1415 на агар Хоттингера отличить колонии друг от друга не представляется возможным. При посеве этих же штаммов на среду с фенолфталеинфосфатом натрия (прототип) является возможность дифференциации сибиреязвенных штаммов (836 и СТИ-1) от близкородственных сапрофитов - шт. 1415 B. thuringiensis и шт. 1408 B. cereus по цвету образуемых ими колоний. Однако дифференцировать штамм 836 от шт. СТИ-1 невозможно, т.к. они имеют одинаковое окрашивание колоний, которые не отличаются по морфологии. Кроме того, шт. N 5 "Тула" (вирулентный) на данной среде дал слабо-розовое окрашивание, что не характерно для сибиреязвенных штаммов.
Выращивание вышеперечисленных штаммов на среде D-сорбитом позволяет провести дифференциацию колоний штаммов вирулентных (шт. 836) и авирулентных (СТИ-1) как друг от друга, так и от близкородственных сапрофитов (шт. B. cereus 1408, шт. B. thuringiensis 1415), как по цвету, так и по морфологии колоний. Сибиреязвенные вирулентные и авирулентные штаммы (шт. 836, шт. СТИ-1), утилизируя D-сорбит, закисляют среду, в результате чего рH-индикатор приобретает желто-зеленое или зеленое окрашивание. Штамма близкородственных сапрофитов (шт. B. cereus 1408, B. thuringiensis 1415) защелачивают среду с D-сорбитом, pH- индикатор окрашивается в сине-зеленый цвет.
На средах, представленных в табл., апробированы 29 штаммов бактерий. Из них 7 штаммов сибиреязвенных вирулентных, 9 штаммов авирулентных и вакцинных и 13 штаммов близкородственных споровых сапрофитов (B. cereus, B. thuringiensis, B. mesentericus, B. subtilis). Все исследованные штаммы на среде с D-сорбитом окрашивались в характерный для данного вида цвет (сибиреязвенные вирулентные - в желто-зеленый; сибиреязвенные авирулентные - в зеленый; штаммы B. cereus, B. thuringiensis, B. mesentericus, B. subtilis - в сине-зеленый) и приобретали типичную для него морфологию.
Предлагаемая плотная питательная среда с D-сорбитом для выявления возбудителя сибирской язвы характеризуется перед ранее известными средами следующими преимуществами:
- позволяет стабильно и эффективно проводить одновременно выделение и дифференциацию B. anthracis;
- среда может быть использована для диагностики возбудителя сибирской язвы;
- время выделения и дифференциации возбудителя сибирской язвы сокращается с 3 суток до 28 - 36 часов;
- среда позволяет проводить не только межвидовую дифференциацию бактерий (вид anthracis от видов cereus, thuringiensis, mesentericus, subtilis), но и внутривидовую - вирулентных и авирулентных сибиреязвенных штаммов по цвету и по морфологии их колоний;
- на среде возможно определение диссоциации в культуре сибиреязвенных штаммов. Например, культура II вакцины Ценковского (штамм 71/12) образует колонии двух типов, характерные по цвету и по морфологии как для вирулентных, так и для авирулентных бацилл B. anthracis;
- использование среды с D-сорбитом предполагает удешевление процедуры выделения и дифференциации B. anthracis, так как в этом случае исчезнет необходимость использования целого ряда методов - проба со специфическим сибиреязвенным бактериофагом, определение гемолитической, лецитиназной, фосфатазной активностей.
- позволяет стабильно и эффективно проводить одновременно выделение и дифференциацию B. anthracis;
- среда может быть использована для диагностики возбудителя сибирской язвы;
- время выделения и дифференциации возбудителя сибирской язвы сокращается с 3 суток до 28 - 36 часов;
- среда позволяет проводить не только межвидовую дифференциацию бактерий (вид anthracis от видов cereus, thuringiensis, mesentericus, subtilis), но и внутривидовую - вирулентных и авирулентных сибиреязвенных штаммов по цвету и по морфологии их колоний;
- на среде возможно определение диссоциации в культуре сибиреязвенных штаммов. Например, культура II вакцины Ценковского (штамм 71/12) образует колонии двух типов, характерные по цвету и по морфологии как для вирулентных, так и для авирулентных бацилл B. anthracis;
- использование среды с D-сорбитом предполагает удешевление процедуры выделения и дифференциации B. anthracis, так как в этом случае исчезнет необходимость использования целого ряда методов - проба со специфическим сибиреязвенным бактериофагом, определение гемолитической, лецитиназной, фосфатазной активностей.
Вышеперечисленные преимущества плотной питательной среды с D-сорбитом позволяют использовать ее для выделения возбудителя сибирской язвы и одновременной дифференциации его от близкородственных споровых бацилл, а также дает возможность проведения внутривидовой дифференциации (между вирулентными капсулообразующими и авирулентными бескапсульными штаммами B. anthracis).
Источники информации
1. Груз Е.В. Диагностическая ценность некоторых морфологических, культуральных и биохимических признаков палочки антракса. - В кн.: "Антракс, Кишинев" Карта Молдавеняскэ,1964, с. 124 - 138.
1. Груз Е.В. Диагностическая ценность некоторых морфологических, культуральных и биохимических признаков палочки антракса. - В кн.: "Антракс, Кишинев" Карта Молдавеняскэ,1964, с. 124 - 138.
2. Еременко Е. И. , Буравцева Н.П., Бобрышев В.И. и др. Использование дифференциального теста на щелочную фосфатазу в селективных средах для сибиреязвенного микроба. - В сб.: Современные аспекты профилактики зоонозных инфекций. Иркутск, 1984, ч. 3, с. 11 - 13.
3. Инструкция и методические указания по лабораторной, клинической диагностике, профилактике и лечению сибирской язвы у людей. М., 1980, 63 с.
4. Мелихов А. Д. Об использовании кровяного агара при дифференциации сибиреязвенной палочки и некоторых почвенных аэробных бацилл. -Труды МВА . - М., 1957, т. 19, в 2 ч, ч.1, с. 86 - 88.
5. Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования. Под ред. М.О.Биргера. - М.: Медицина, 1973, с.80.
6. Шляхов Э. Н., Груз, Присакарь В.И. Сибирская язва (очерки эпидемиологии, лабораторной диагностики и профилактики). - Кишинев: Штиинца, 1975, 162 с.
7. Dobozy A., Hammer H. Some properties of alkaline phosphatase in Bacillus species. - Acta microbiol, Acad Sci hung, 1969, 16, p. 181 - 187.
8. Scidel Y., Strassinon K. Inzbacteriologischen und serologischen diagnose des Milzbrandes. - Arch. exp. Vet. Med., 1956, Bd10, N3, s. 325 - 327.
Claims (1)
- Плотная питательная среда для выявления возбудителя сибирской язвы, содержащая питательную основу, pH-индикатор, агар и воду, отличающаяся тем, что, с целью повышения дифференцирующих свойств среды, дополнительно содержит D-сорбит, а в качестве pH-индикатора - бромтимоловый синий, при следующих соотношениях компонентов, мас.%:
Питательная основа - 1,5 - 2
D-Сорбит - 1 - 2
Бромтимоловый синий - 0,015 - 0,003
Агар-агар - 1,5 - 2
Вода - Остальноеt
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SU4516362 RU2125610C1 (ru) | 1989-06-21 | 1989-06-21 | Плотная питательная среда для выявления возбудителя сибирской язвы |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SU4516362 RU2125610C1 (ru) | 1989-06-21 | 1989-06-21 | Плотная питательная среда для выявления возбудителя сибирской язвы |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2125610C1 true RU2125610C1 (ru) | 1999-01-27 |
Family
ID=21406808
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
SU4516362 RU2125610C1 (ru) | 1989-06-21 | 1989-06-21 | Плотная питательная среда для выявления возбудителя сибирской язвы |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2125610C1 (ru) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2654669C1 (ru) * | 2016-07-01 | 2018-05-21 | Федеральное бюджетное учреждение науки Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии (ФБУН ГНЦ ПМБ) | Диагностическая питательная среда для дифференциации возбудителя сибирской язвы по капсуло- и токсинообразованию |
RU2678804C1 (ru) * | 2018-01-10 | 2019-02-01 | федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Федеральный центр токсикологической, радиационной и биологической безопасности" (ФГБНУ "ФЦТРБ-ВНИВИ") | Питательная среда для дифференциации Bacillus anthracis |
-
1989
- 1989-06-21 RU SU4516362 patent/RU2125610C1/ru active
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
Современные аспекты профилактики зоонозных инфекций. - Иркутск, 194, ч. 3, с.11 - 13. * |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2654669C1 (ru) * | 2016-07-01 | 2018-05-21 | Федеральное бюджетное учреждение науки Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии (ФБУН ГНЦ ПМБ) | Диагностическая питательная среда для дифференциации возбудителя сибирской язвы по капсуло- и токсинообразованию |
RU2678804C1 (ru) * | 2018-01-10 | 2019-02-01 | федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Федеральный центр токсикологической, радиационной и биологической безопасности" (ФГБНУ "ФЦТРБ-ВНИВИ") | Питательная среда для дифференциации Bacillus anthracis |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Wilson et al. | Use of sodium taurocholate to enhance spore recovery on a medium selective for Clostridium difficile | |
EP2245179B1 (en) | Method and medium for detecting the presence or absence of staphylococcus aureus in a test sample | |
EP0081078B1 (en) | Method, test strain and test kit for the laboratory diagnosis of neisseria gonorrhoeae | |
US8524468B2 (en) | Method for detecting the presence or absence of methicillin resistant staphylococcus aureus (MRSA) in a test sample | |
RU2125610C1 (ru) | Плотная питательная среда для выявления возбудителя сибирской язвы | |
Magalhães et al. | Traditional methods for isolation of Listeria monocytogenes | |
Magalhães et al. | Traditional methods of analysis for Listeria monocytogenes | |
Domermuth et al. | A medium for isolation and tentative identification of fecal streptococci, and their role as avian pathogens | |
RU2289622C2 (ru) | Диагностическая питательная среда для идентификации возбудителя сибирской язвы сухая | |
SU1751199A1 (ru) | Питательна среда дл выделени патогенных стафилококков | |
RU2788607C1 (ru) | Способ получения питательной среды для селективного выявления Candida auris | |
RU2180916C1 (ru) | Штамм bacillus anthracis km92-продуцент сибиреязвенных антигенов | |
Maroff | Determination of the inhibitory activity of some biological extracts agaiast multi rrsistans antibiotic Staphylococcus specis which and isolated from different sources of infechtion | |
RU2203317C2 (ru) | Спрособ обнаружения bacillus anthracis в молоке | |
Fatima | Isolation of antibiotic producing bacteria from soil and identification by 16S rRNA gene sequencing | |
RU2678804C1 (ru) | Питательная среда для дифференциации Bacillus anthracis | |
US20110275114A1 (en) | Method and medium for detecting the presence or absence of methicillin resistant staphylococcus aureus (mrsa) in a test sample | |
RU2307160C2 (ru) | Способ выявления легионелл в вегетативном и некультивируемом состояниях | |
RU2238316C2 (ru) | Способ определения гемолитической активности и ее типа у b.anthracis | |
Verma et al. | Isolation and biochemical characterization of methicillin resistant Staphylococcus aureus (MRSA) in cattle. | |
RU2103368C1 (ru) | Питательная среда для выделения и культивирования менингококков (менингоагар) | |
RU2292398C2 (ru) | Способ индикации госпитальных штаммов стафилококков | |
Chelab et al. | Molecular Identification of Locally Isolated Bacteria from Soil in Thiqar Governorate and Ability to Produced Antibiotics | |
Sufa et al. | Efficient Techniques for Identifying Gram-Positive Clinical Bacteria | |
RU2086653C1 (ru) | Индикаторная система дифференциально-диагностической питательной среды для возбудителей кишечных и урологических инфекций |