RU2648160C2 - Питательная среда для выделения бактерий yersinia enterocolitica - Google Patents

Питательная среда для выделения бактерий yersinia enterocolitica Download PDF

Info

Publication number
RU2648160C2
RU2648160C2 RU2016125839A RU2016125839A RU2648160C2 RU 2648160 C2 RU2648160 C2 RU 2648160C2 RU 2016125839 A RU2016125839 A RU 2016125839A RU 2016125839 A RU2016125839 A RU 2016125839A RU 2648160 C2 RU2648160 C2 RU 2648160C2
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
sodium
agar
nutrient medium
bacteria
enterocolitica
Prior art date
Application number
RU2016125839A
Other languages
English (en)
Inventor
Антон Валерьевич Моторыгин
Екатерина Михайловна Ленченко
Инна Борисовна Павлова
Алина Николаевна Антонова
Василий Иванович Дорожкин
Original Assignee
Федеральное государственное бюджетное научное учреждение"Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной санитарии, гигиены и экологии" (ФГБНУ "ВНИИВСГЭ")
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Федеральное государственное бюджетное научное учреждение"Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной санитарии, гигиены и экологии" (ФГБНУ "ВНИИВСГЭ") filed Critical Федеральное государственное бюджетное научное учреждение"Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной санитарии, гигиены и экологии" (ФГБНУ "ВНИИВСГЭ")
Priority to RU2016125839A priority Critical patent/RU2648160C2/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2648160C2 publication Critical patent/RU2648160C2/ru

Links

Classifications

    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20Bacteria; Culture media therefor
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205Bacterial isolates
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12QMEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/02Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
    • C12Q1/04Determining presence or kind of microorganism; Use of selective media for testing antibiotics or bacteriocides; Compositions containing a chemical indicator therefor
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12RINDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

Изобретение относится к ветеринарной микробиологии. Питательная среда для выделения бактерий Yersinia enterocolitica содержит пептон, дрожжевой экстракт, маннит, натрия пируват, натрия хлорид, магния сульфат, натрия дезоксихолат, нейтральный красный, кристаллический фиолетовый, агар-агар, иргасан, дополнительно содержит гидролизат панкреатический мяса с содержанием аминного азота 0,15%, «Монаспор», новобиоцина натриевую соль, аспарагин, глицерин и дистиллированную воду при заданном соотношении компонентов. Изобретение позволяет упростить и повысить точность способа идентификации S- и R-форм Yersinia. 2 табл., 5 пр.

Description

Изобретение относится к ветеринарной микробиологии и может быть использовано при индикации и количественном учете S-, R-форм бактерий Yersinia enterocolitica.
Бактерии Yersinia enterocolitica при инфицировании восприимчивых видов реализуют факторы вирулентности, детерминированные хромосомами и плазмидой вирулентности иерсиний - «plasmid asociated with Yersinia virulence» (pYV), характеризуются психрофильностью, метаболической пластичностью, ростом на обедненных средах, являясь убиквитарными, выделены из объектов внешней среды, обнаружены в воде, почве (Поздеев O.К., Федоров Р.В., 2007). Наличие перекрестных серологических реакций между бактериями Y. enterocolitica 09 и Brucella abortus обусловливает получение ложноположительных результатов при исследовании сыворотки крови животных из благополучных по бруцеллезу хозяйств. При бессимптомной персистенции иерсиний в организме бактерионосителей может происходить контаминация пищевого сырья, что обусловливает социальную значимость профилактических мероприятий в начале «пищевой цепи» (Санитарные правила. 3.1.094-96; Ветеринарные правила 13.3.1318-96). При воздействии физических и химических факторов наблюдается внутрипопуляционная изменчивость иерсиний, выражающаяся диссоциацией на S-R-формы, снижением процессов метаболизма и переходом популяции в «некультивируемое состояние», что обусловливает длительность и ретроспективность бактериологических исследований (Е.М. Ленченко и соавт., 2014). Для оптимизации индикации и идентификации иерсиний приоритетным направлением представляется разработка способа культивирования, позволяющего проводить учет количества S-, R-форм бактерий Y. enterocolitica.
Известна питательная среда для выделения бактерий Y. enterocolitica (Патент РФ №2251570, питательная среда для выделения возбудителей кишечного иерсиниоза и псевдотуберкулеза, МПК C12N 1/20, C12Q 1/10, C12Q 1/10, C12R 1:01, Бюл. №13, 10.05.2005), содержащая пептон, дрожжевой экстракт, маннит, натрия пируват, натрия хлорид, магния сульфат, натрия дезоксихолат, нейтральный красный, кристаллический фиолетовый, агар-агар, иргасан и дистиллированную воду при следующем содержании компонентов, г/л:
Пептон 19,0-21,0
Дрожжевой экстракт 1,9-2,1
Манит 19,0-21,0
Натрия пируват 1,9-2,1
Натрия хлорид 0,95-1,05
Магния сульфат 0,009-0,011
Натрия дезоксихолат 0,48-0,53
Нейтральный красный 0,028-0,032
Кристаллический фиолетовый 0,009-0,0011
Агар-агар 11,9-13,1
Иргасан 0,0039-0,0041
Дистиллированная вода остальное
Известная питательная среда не позволяет выделить в быстрые сроки из патологического материала S-, R-формы иерсиний, необходимые для опытов по изучению особенностей вызываемого инфекционного процесса. Недостатком указанной среды также является сложность приготовления вследствие необходимости раздельного автоклавирования компонентов.
Задачей изобретения является повышение качества идентификации S-, R-форм иерсиний в исследуемом материале, кроме того, позволяющей упростить и ускорить способ идентификации S- и R-форм иерсиний.
Поставленная задача решается тем, что питательная среда для идентификации Yersinia enterocolitica, содержащая пептон, дрожжевой экстракт, маннит, натрия пируват, натрия хлорид, магния сульфат, натрия дезоксихолат, нейтральный красный, кристаллический фиолетовый, агар-агар, иргасан и дистиллированную воду, согласно изобретению дополнительно содержит панкреатический гидролизат мяса с содержанием 0,15% аминного азота, «Монаспор», новобиоцина натриевую соль, аспарагин и глицерин, при следующем содержании компонентов, г/л:
Пептон 19,0-21,0
Дрожжевой экстракт 1,9-2,4
Маннит 20,0-21,3
Натрия пируват 2,0-2,15
Натрия хлорид 0,95-1,05
Магния сульфат 0,001-0,003
Натрия дезоксихолат 0,5-4,8
Нейтральный красный 0,03-0,06
Кристаллический фиолетовый 0,001-0,003
Агар-агар 11,9-13,1
Иргасан 0,0039-0,0041
Панкреатический гидролизат мяса
с содержанием 0,15% аминного азота 10,0-11,2
Монаспор 0,015-0,020
Новобиоцина натриевая соль 0,0025-0,0029
Аспарагин 0,41-0,56
Глицерин 7,44-9,28
Вода дистиллированная до 1 л
Известен панкреатический гидролизат мяса с содержанием 0,15% аминного азота (ГОСТ 29311-92), который используется для питательных сред.
Панкреатический гидролизат мяса получают при продолжительной варке мясного фарша в автоклаве с последующей выпаркой мясного бульона в вакуум-аппарате до образования пастообразного продукта. Содержит воды 18,0%, органических веществ - 61,0%, минеральных - 21,0% (http://mspolyak.narod.ru/books/culture_medium_2002.pdf).
«Монаспор» (Цефсулодин натрия) относится к полусинтетическим антибиотикам из группы цефалоспоринов III поколения (http://www.medmoon.ru/rebenok/), предназначен для парентерального введения и обладает бактерицидным действием с выраженной активностью в отношении бактерий Pseudomonas aeruginosa (http://polyntrava.ru/lekarstva/arhiv/monaspor.html).
Новобиоцина натриевая соль (международное название - новобиоцин (Novobiocin)) - мононатриевая соль антибиотика новобиоцина, продуцируемого микроорганизмами Streptomyces spheroides или Streptomyces niveus. Новобиоцина натриевая соль применяется при пневмонии, септицемии, энтероколитах, инфекциях мочевых путей, флегмонах, раневых инфекциях, абсцессах и инфекционных заболеваниях, вызванных стафилококками, устойчивыми к другим антибиотикам. Химическое название: 7-[4-(карбамоил-окси)-тетрагидро-3-окси-5-метокси-6,6-диметилпиранил-2-окси]-4-окси-3-(3-метил-2-бутенил)-бензамидо-8-метилкумарат натрия - гигроскопический порошок белого цвета, горького вкуса, хорошо растворимый в воде (http://www.etolen.com/index.php?option=com_content&view=article&id=2936& Itemid=101).
Аспарагин - H2NOCCH2CHNH2COOH, амид аспарагиновой кислоты. Молекулярная масса 132,12. Кристаллизуется в виде ромбических призм, растворимых в горячей воде. Входит в состав многих белков. Содержится в свободном состоянии в жидкостях и тканях растений и животных. В больших количествах накапливается в проростках бобовых. Играет важную роль в жизни растений, являясь резервом азота и соединением, обезвреживающим аммиак, образующийся в процессе превращения белков (Большая советская энциклопедия. - М.: Советская энциклопедия, 1969-1978, с. 84).
Среда позволяет избирательно выделять и дифференцировать S-, R-формы Y. enterocolitica. Способ является оригинальным в решении, простым в осуществлении, информативным, дает статистически достоверные результаты, позволяет значительно сократить расход питательных сред, стерильной бактериологической посуды и времени проведения анализа. Анализ известной литературы свидетельствует о соответствии заявленного технического решения критерию «новизна». Сравнение заявленного способа с известными показывает, что эффективность питательной среды не зависит от уровня технического оснащения, что свидетельствует о соответствии заявленного технического решения критерию «изобретательский уровень».
Изобретение иллюстрируется на следующих примерах.
Пример 1. Получают составы 1-2, согласно прописи таблицы 1.
Способ приготовления: Растворение навесок проводят последовательно согласно прописи питательной среды в таблице, доводя конечный объем питательной среды дистиллированной водой до 1 л. Каждую последующую навеску растворяют только после полного растворения предыдущей; L-аспарагин растворяют отдельно в небольшом количестве дистиллированной воды при нагревании до кипения с добавлением по каплям концентрированной соляной кислоты до полного просветления раствора. Нагревают до кипения и кипятят в течение 5 мин на медленном огне. Фильтруют через ватно-марлевый фильтр, вновь кипятят 1-2 мин, охлаждают до 45-50°С и разливают в чашки Петри. Хранят среду в течение 7-10 суток при 4-7°С.
Применение разработанной среды (см. табл. 2) позволяет снизить диссоциацию S-, R- форм колоний бактерий, избирательно выделять и дифференцировать S-, R-формы Y. enterocolitica, изучать внутрипопуляционные процессы изменчивости бактерий.
Пример 2. Учет количества S-, R- форм бактерий Y. enterocolitica, выделенных при вторичной контаминации мяса птицы. Отбор проб производили в соответствии с ГОСТ Р 50396.0-2013 «Мясо птицы, субпродукты и полуфабрикаты из мяса птицы. Методы отбора проб и подготовка к микробиологическим исследованиям». При проведении анализа применяли два способа.
Способ 1. Исследуемые пробы помещали в известную среду обогащения (прототип) в соотношении 1:9 (масса/объем) и культивировали при 37°С 18-24 ч, из основного разведения готовили ряд серийных разведения в 0,85% NaCl. Из среды обогащения делали высев на дифференциально-диагностические питательные среды в чашки Петри, при культивировании бактерий при 22-28°С через 18-48 ч выявлено формирование S-, R- форм колоний Y. enterocolitica; S-формы колоний имели округлую форму, были прозрачными, с ровными краями; R-формы - плоские неправильной формы, складчатые, непрозрачные, с шероховатыми краями.
Способ 2 (использовали состав 1, полученный по примеру 1) включает подготовку препарата следующим образом: на предметное стекло наносили стерильной нагретой пипеткой 0,2-0,3 мл горячей питательной среды («Селективный агар для иерсиний» и разработанная питательная среду для определения S-, R-форм бактерий Y. enterocolitica), распределяли по всей поверхности стекла. Затем на поверхность тонкой агаровой пленки стерильной препаровальной иглой наносили суспензию клеток микроорганизмов. Полученные препараты помещали во влажную камеру-чашка Петри с влажной фильтровальной бумагой. Посев производили параллельно на два стекла, одно из которых культивировали при 37°С, другое - при 22-28°С в течение 48 ч. Для иерсиний характерным является полиморфизм колоний как по размеру, форме, так и по цвету, особенно при культивировании при 37°С. В этом случае наряду с колониями S-формы (колонии круглые умеренно выпуклые, прозрачные в виде росинок) можно наблюдать образование R-форм колоний, имеющих бугристую форму с изрезанными краями, коричнево-желтоватого цвета. При росте в жидкой питательной среде диссоциированные культуры бактерий Y. enterocolitica образуют хлопьевидный осадок, гладкие вызывают равномерное помутнение среды. При исследовании колоний при малом увеличении микроскопа дифференцировали округлой формы колонии: светлые с ровными краями - S-форма, фиолетовые с изрезанными краями - R-форма.
Пример 3. Учет количества S-, R- форм бактерий Y. enterocolitica, выделенных при вторичной контаминации фарша из мяса птицы. Пробы отбирали в соответствии с ГОСТ Р 50396.0-2013 «Мясо птицы, субпродукты и полуфабрикаты из мяса птицы. Методы отбора проб и подготовка к микробиологическим исследованиям». При проведении анализа применяли два способа.
Способ 1. Исследуемые пробы помещали в известную среду обогащения (прототип) в соотношении 1:9 (масса/объем) и культивировали при 37°С 18-24 ч, из основного разведения готовили ряд серийных разведения в 0,85% NaCl. Из среды обогащения делали высев на дифференциально-диагностические питательные среды в чашки Петри, при культивировании бактерий при 22-28°С через 18-48 ч выявлено формирование S-, R- форм колоний Y. enterocolitica; S-формы колоний имели округлую форму, были прозрачными, с ровными краями; R-формы -плоские неправильной формы, складчатые, непрозрачные, с шероховатыми краями.
Способ 2 (использовали состав 2, полученный по примеру 1) включает подготовку препарата следующим образом: на предметное стекло наносили стерильной нагретой пипеткой 0,2-0,3 мл горячей питательной среды («Селективный агар для иерсиний» и разработанная питательная среда для определения S-, R-форм бактерий Y. enterocolitica), распределяли по всей поверхности стекла. Затем на поверхность тонкой агаровой пленки стерильной препаровальной иглой наносили суспензию клеток микроорганизмов. Полученные препараты помещали во влажную камеру - чашка Петри с влажной фильтровальной бумагой. Посев производили параллельно на два стекла, одно из которых культивировали при 37°С, другое - при 22-28°С в течение 48 ч. Для иерсиний характерным является полиморфизм колоний как по размеру, форме, так и по цвету, особенно при культивировании при 37°С. В этом случае наряду с колониями S-формы (колоний круглые умеренно выпуклые, прозрачные в виде росинок) можно наблюдать образование R-форм колоний, имеющих бугристую форму с изрезанными краями, коричнево-желтоватого цвета. При росте в жидкой питательной среде диссоциированные культуры бактерий Y. enterocolitica образуют хлопьевидный осадок, гладкие вызывают равномерное помутнение среды. При исследовании колоний при малом увеличении микроскопа дифференцировали округлой формы колонии: светлые с ровными краями - S-форма, фиолетовые с изрезанными краями - R-форма.
Пример 4. Учет количества S-, R- форм бактерий Y. enterocolitica, выделенных при вторичной контаминации субпродуктов птицы. Пробы отбирали в соответствии с ГОСТ Р 50396.0-2013 «Мясо птицы, субпродукты и полуфабрикаты из мяса птицы. Методы отбора проб и подготовка к микробиологическим исследованиям». При проведении анализа применяли два способа.
Способ 1. Исследуемые пробы помещали в известную среду обогащения (прототип) в соотношении 1:9 (масса/объем) и культивировали при 37°С 18-24 ч, из основного разведения готовили ряд серийных разведения в 0,85% NaCl. Из среды обогащения делали высев на дифференциально-диагностические питательные среды в чашки Петри, при культивировании бактерий при 22-28°С через 18-48 ч выявлено формирование S-, R- форм колоний Y. enterocolitica; S-формы колоний имели округлую форму, были прозрачными, с ровными краями; R-формы -плоские неправильной формы, складчатые, непрозрачные, с шероховатыми краями.
Способ 2 (использовали состав 1, полученный по примеру 1) включает подготовку препарата следующим образом: на предметное стекло наносили стерильной нагретой пипеткой 0,2-0,3 мл горячей питательной среды («Селективный агар для иерсиний» и разработанная питательная среда для определения S-, R-форм бактерий Y. enterocolitica), распределяли по всей поверхности стекла. Затем на поверхность тонкой агаровой пленки стерильной препаровальной иглой наносили суспензию клеток микроорганизмов. Полученные препараты помещали во влажную камеру - чашка Петри с влажной фильтровальной бумагой. Посев производили параллельно на два стекла, одно из которых культивировали при 37°С, другое - при 22-28°С в течение 48 ч. Для иерсиний характерным является полиморфизм колоний как по размеру, форме, так и по цвету, особенно при культивировании при 37°С. В этом случае наряду с колониями S-формы (колоний круглые умеренно выпуклые, прозрачные в виде росинок) можно наблюдать образование R-форм колоний, имеющих бугристую форму с изрезанными краями, коричнево-желтоватого цвета. При росте в жидкой питательной среде диссоциированные культуры бактерий Y. enterocolitica образуют хлопьевидный осадок, гладкие вызывают равномерное помутнение среды. При исследовании колоний при малом увеличении микроскопа дифференцировали округлой формы колонии: светлые с ровными краями - S-форма, фиолетовые с изрезанными краями - R-форма.
Пример 5. Учет количества S-, R- форм бактерий Y. enterocolitica, выделенных при вторичной контаминации свинины. Пробы отбирали в соответствии с ГОСТ Р 51448-99 «Мясо и мясные продукты. Методы подготовки проб для микробиологических исследований». При проведении анализа применяли два способа.
Способ 1. Исследуемые пробы помещали в известную среду обогащения (прототип) в соотношении 1:9 (масса/объем) и культивировали при 37°С 18-24 ч, из основного разведения готовили ряд серийных разведения в 0,85% NaCl. Из среды обогащения делали высев на дифференциально-диагностические питательные среды в чашки Петри, при культивировании бактерий при 22-28°С через 18-48 ч выявлено формирование S-, R- форм колоний Y. enterocolitica; S-формы колоний имели округлую форму, были прозрачными, с ровными краями; R-формы - плоские неправильной формы, складчатые, непрозрачные, с шероховатыми краями.
Способ 2 (использовали состав 2, полученный по примеру 1) включает подготовку препарата следующим образом: на предметное стекло наносили стерильной нагретой пипеткой 0,2-0,3 мл горячей питательной среды («Селективный агар для иерсиний» и разработанная питательная среда для определения S-, R-форм бактерий Y. enterocolitica), распределяли по всей поверхности стекла. Затем на поверхность тонкой агаровой пленки стерильной препаровальной иглой наносили суспензию клеток микроорганизмов. Полученные препараты помещали во влажную камеру - чашка Петри с влажной фильтровальной бумагой. Посев производили параллельно на два стекла, одно из которых культивировали при 37°С, другое - при 22-28°С в течение 48 ч. Для иерсиний характерным является полиморфизм колоний как по размеру, форме, так и по цвету, особенно при культивировании при 37°С. В этом случае наряду с колониями S-формы (колоний круглые умеренно выпуклые, прозрачные в виде росинок) можно наблюдать образование R-форм колоний, имеющих бугристую форму с изрезанными краями, коричнево - желтоватого цвета. При росте в жидкой питательной среде диссоциированные культуры бактерий Y. enterocolitica образуют хлопьевидный осадок, гладкие вызывают равномерное помутнение среды. При исследовании колоний при малом увеличении микроскопа дифференцировали округлой формы колонии: светлые с ровными краями - S-форма, фиолетовые с изрезанными краями - R-форма.
Пример 6. Учет количества S-, R- форм бактерий Y. enterocolitica, выделенных при вторичной контаминации говядины. Пробы отбирали в соответствии с ГОСТ Р 51448-99 «Мясо и мясные продукты. Методы подготовки проб для микробиологических исследований».
Способ 1. Исследуемые пробы помещали в известную среду обогащения (прототип) в соотношении 1:9 (масса/объем) и культивировали при 37°С 18-24 ч, из основного разведения готовили ряд серийных разведения в 0,85% NaCl. Из среды обогащения делали высев на дифференциально-диагностические питательные среды в чашки Петри, при культивировании бактерий при 22-28°С через 18-48 ч выявлено формирование S-, R- форм колоний Y. enterocolitica; S-формы колоний имели округлую форму, были прозрачными, с ровными краями; R-формы - плоские неправильной формы, складчатые, непрозрачные, с шероховатыми краями.
Способ 2 (использовали состав 1, полученный по примеру 1) включает подготовку препарата «агаровая пленка» или «микрокультура» следующим образом: на предметное стекло наносили стерильной нагретой пипеткой 0,2-0,3 мл горячей питательной среды, распределяли по всей поверхности стекла. Затем на поверхность тонкой агаровой пленки стерильной препаровальной иглой наносили суспензию клеток микроорганизмов. Полученные препараты помещали во влажную камеру - чашка Петри с влажной фильтровальной бумагой. Посев производили параллельно на два стекла, одно из которых культивировали при 37°С, другое - при 22-28°С в течение 48 ч. Для иерсиний характерным является полиморфизм колоний как по размеру, форме, так и по цвету, особенно при культивировании при 37°С. В этом случае наряду с колониями S-формы (колоний круглые умеренно выпуклые, прозрачные в виде росинок) можно наблюдать образование R-форм колоний, имеющих бугристую форму с изрезанными краями, коричнево-желтоватого цвета. При росте в жидкой питательной среде диссоциированные культуры бактерий Y. enterocolitica образуют хлопьевидный осадок, гладкие вызывают равномерное помутнение среды. При исследовании колоний при малом увеличении микроскопа дифференцировали округлой формы колонии: светлые с ровными краями - S-форма, фиолетовые с изрезанными краями - R-форма.
Предлагаемый способ позволяет в три раза уменьшить количество используемой питательной среды и затрат рабочего времени, а также за счет применения разработанной среды снизить диссоциацию S-, R- форм колоний бактерий, избирательно выделять и дифференцировать S-, R-формы Y. enterocolitica (т.е. повысить чувствительность идентификации S- (на 10-20%), R-формы (на 15,3-22,3%) Y. enterocolitica), изучать внутрипопуляционные процессы с использованием световой микроскопии.
Figure 00000001
Figure 00000002

Claims (2)

  1. Питательная среда для идентификации Yersinia enterocolitica, содержащая пептон, дрожжевой экстракт, маннит, натрия пируват, натрия хлорид, магния сульфат, натрия дезоксихолат, нейтральный красный, кристаллический фиолетовый, агар-агар, иргасан и дистиллированную воду, отличающаяся тем, что дополнительно содержит панкреатический гидролизат мяса с содержанием 0,15% аминного азота, «Монаспор», новобиоцина натриевую соль, аспарагин и глицерин, при следующем содержании компонентов, г/л:
  2. Пептон 19,0-21,0 Дрожжевой экстракт 1,9-2,4 Маннит 20,0-21,3 Натрия пируват 2,0-2,15 Натрия хлорид 0,95-1,05 Магния сульфат 0,001-0,003 Натрия дезоксихолат 0,5-4,8 Нейтральный красный 0,03-0,06 Кристаллический фиолетовый 0,001-0,003 Агар-агар 11,9-13,1 Иргасан 0,0039-0,0041 Панкреатический гидролизат мяса с содержанием 0,15% аминного азота 10,0-11,2 Монаспор 0,015-0,020 Новобиоцина натриевая соль 0,0025-0,0029 Аспарагин 0,41-0,56 Глицерин 7,44-9,28 Вода дистиллированная до 1 л
RU2016125839A 2016-06-29 2016-06-29 Питательная среда для выделения бактерий yersinia enterocolitica RU2648160C2 (ru)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2016125839A RU2648160C2 (ru) 2016-06-29 2016-06-29 Питательная среда для выделения бактерий yersinia enterocolitica

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2016125839A RU2648160C2 (ru) 2016-06-29 2016-06-29 Питательная среда для выделения бактерий yersinia enterocolitica

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2648160C2 true RU2648160C2 (ru) 2018-03-22

Family

ID=61707882

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2016125839A RU2648160C2 (ru) 2016-06-29 2016-06-29 Питательная среда для выделения бактерий yersinia enterocolitica

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2648160C2 (ru)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2019206764A1 (en) * 2018-04-23 2019-10-31 Unilever N.V. An antiperspirant composition

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2101342C1 (ru) * 1995-11-23 1998-01-10 Государственное федеральное предприятие "Государственный научный центр прикладной микробиологии" Дифференциально-диагностическая питательная среда для выделения возбудителей кишечного иерсиниоза и псевдотуберкулеза
RU2251570C2 (ru) * 2002-10-07 2005-05-10 Смирнов Игорь Владимирович Питательная среда для выделения возбудителей кишечного иерсиниоза и псевдотуберкулеза
RU2264455C2 (ru) * 2004-01-28 2005-11-20 Смирнов Игорь Владимирович Питательная среда для селективного накопления yersinia enterocolitica и yersinia pseudotuberculosis
RU2300560C2 (ru) * 2005-03-22 2007-06-10 Омский государственный аграрный университет Способ получения питательной среды для культивирования yersinia enterocolitica

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2101342C1 (ru) * 1995-11-23 1998-01-10 Государственное федеральное предприятие "Государственный научный центр прикладной микробиологии" Дифференциально-диагностическая питательная среда для выделения возбудителей кишечного иерсиниоза и псевдотуберкулеза
RU2251570C2 (ru) * 2002-10-07 2005-05-10 Смирнов Игорь Владимирович Питательная среда для выделения возбудителей кишечного иерсиниоза и псевдотуберкулеза
RU2264455C2 (ru) * 2004-01-28 2005-11-20 Смирнов Игорь Владимирович Питательная среда для селективного накопления yersinia enterocolitica и yersinia pseudotuberculosis
RU2300560C2 (ru) * 2005-03-22 2007-06-10 Омский государственный аграрный университет Способ получения питательной среды для культивирования yersinia enterocolitica

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2019206764A1 (en) * 2018-04-23 2019-10-31 Unilever N.V. An antiperspirant composition

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Collard et al. The development of microbiology
Fairbrother et al. A Text-book of Bacteriology
CN105462884A (zh) 鸭支原体培养基及鸭支原体的分离纯化方法
RU2648160C2 (ru) Питательная среда для выделения бактерий yersinia enterocolitica
CN113717905B (zh) 菌株rd4及其应用
RU2435842C1 (ru) Питательная среда транспортная (жидкая) для культивирования бруцеллезного микроба
RU2388489C1 (ru) Способ изготовления вакцины ассоциированной против псевдомоноза и энтерококковой инфекции нутрий
RU2299238C2 (ru) Питательная среда для культивирования бруцелл
CN103141425A (zh) 无菌斑马鱼的生产方法
RU2538158C1 (ru) Способ изготовления вакцины, ассоциированной против эшерихиоза, стрептококкоза и стафилококкоза крупного рогатого скота
RU2542481C2 (ru) Способ получения бактериологически чистых культур морских сине- зеленых микроводорослей
CN112831539A (zh) 一种需氧微生物的体外检测试剂盒
Bbockelman et al. Rhabditis maupasi: occurrence in food snails and cultivation
Asami et al. Cultivation of Trichomonas vaginalis on solid medium
RU2247775C1 (ru) Транспортная жидкая питательная среда для сбора, культивирования и транспортировки крови больных, подозреваемых на заболевание бруцеллезом
RU2268748C2 (ru) Способ получения диагностической сыворотки против бруцелл в l-форме
CN109463402A (zh) 一种香樟精油细菌群体感应抑制剂的制备方法及应用
SU1265215A1 (ru) Способ выделени кишечных иерсиний
RU2767782C1 (ru) Питательная среда для получения биомассы листерий
RU2710160C1 (ru) Питательная среда для выделения Pseudomonas aeruginosa из водных объектов
RU2681116C2 (ru) Питательная среда плотная для хранения микроба чумы
RU2333948C2 (ru) Питательная среда для выращивания возбудителя туляремии
RU2264455C2 (ru) Питательная среда для селективного накопления yersinia enterocolitica и yersinia pseudotuberculosis
RU2788607C1 (ru) Способ получения питательной среды для селективного выявления Candida auris
RU2820701C1 (ru) Питательная среда для культивирования сульфатредуцирующих бактерий рода Desulfovibrio spp. и способ ее получения

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A The patent is invalid due to non-payment of fees

Effective date: 20180630