CN105331671A - 解脲脲原体快速培养方法及其培养基 - Google Patents

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刘慧�
陈艳萍
代玉龙
辛克盛
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Abstract

本发明公开了一种解脲脲原体快速培养方法及其培养基。所述的培养基与现有技术的培养基相比添加了多种的组分，该组分具有快速的提高培养效率能够有效的鉴定解脲脲原体。具有培养时间短，易于鉴定的优点。

Description

解脲脲原体快速培养方法及其培养基
技术领域
本发明涉及一种解脲脲原体快速培养方法及其培养基，属于生物培养领域。
背景技术
脲原体(Ureaplasma)是从人体中分离的能自身繁埴的13种支原体之一，属硬壁菌门柔膜体纲支原体目支原体科脲原体属。脲原体介于病毒和细菌之间，是在人工培养基上能繁殖的最小的原核细胞型微生物，无细胞壁，能自我复制，呈球杆状，大小为125～250nm，分子量为4.5XIO8，具高度多形性。脲原体根据分子生物学特征分为两个生物群和14个血清型，两个生物群包括微小脲原体(Ureaplasmaparvum，Up)和解脲脲原体(Ureaplasmaurealyticum，Uu)，14个血清型中，基因组较小的血清型1、3、6、14属于微小脲原体，占脲原体感染的90％～92％；基因组较大的血清型2、4、5、8～13属于解脲脲原体，占脲原体感染的8％～10％。
检测解脲脲原体和人型支原体的方法有特异性抗体检测法、PCR法、SouthernBlot法和分离培养法等。免疫学检测方法容易出现交叉反应，PCR法容易出现假阴性和假阳性，而SouthernBlot法对实验技术要求较高，不适合在医院内使用。临床上常用的检测方法是分离培养法。国内有关泌尿生殖道支原体培养的实际应用和研究显示，支原体的鉴定主要采用液体培养法。虽然液体培养法使用方便、快捷、容易判断，但是这种方法只能从液体颜色的改变来推断支原体是否存在，假阳性率高，准确性不高。而固体培养法则可以通过显微镜观察到人型支原体和解脲脲原体的菌落，从而确证支原体的存在，较好地解决临床标本假阳性率高的问题。但是固体培养法判读结果的时间较长，因而需要时间较长才能对UU和MH引起的泌尿道生殖道感染进行确诊，不利于疾病的诊断和治疗。
基于现有技术的缺陷，寻找一种能够快速培养解脲脲原体固体培养基是现在迫切需要解决的技术问题。
发明内容
本发明的目的在于提供一种快速检测支原体的固体培养基及其制备方法。
本发明所采用的技术方案是：
一种快速培养解脲脲原体的固体培养基，其配方如下：
琼脂粉12g，新鲜牛肉提取纯粉10g，HEPES缓冲剂3g，L-半胱氨酸0.5g，磷酸二氢钾5g，脲1.5g，硫酸锰0.2g，葡萄糖1g～3g，马血清300ml，抗生素700,000IU，磺胺甲基异恶唑3g，甲氧苄氨嘧啶5mg，多粘菌素6mg，RPMI1640细胞培养基5g，蒸馏水定容至1000ml。
本发明所得解脲脲原体培养基具有检出可靠、支原体分离率高的特点，同时去除精氨酸，不利于人型支原体生长，从而使得解脲脲原体的鉴定结果更加准确。
本发明的有益效果是：
使用本发明的固体培养基可选择性地培养解脲脲原体，通过菌落的形成确证支原体的存在，并能从菌落形态判断支原体的类型，因此，相对于液体培养基常出现假阳性的情况，本发明的固体培养基在诊断泌尿生殖道感染方面的准确性大大提高。除此以外，在支原体菌落形成时间上，目前固体培养基的结果判读时间为24小时，而使用本发明的支原体培养基判读结果只需要10小时，大大缩短了检测时间，实现了解脲脲原体的快速检测，并且所形成的菌落比在市售培养基上形成的菌落要大得多，为医生制订合理的治疗方案提供了快速可靠的检验结果。
具体实施方式
实施例1培养基的配置
培养基制备：共设5组，分别为培养基1-4四组和对照1组。对照1组为支原体肉汤固体培养基。
其中培养基1为按照琼脂粉12g，新鲜牛肉提取纯粉10g，HEPES缓冲剂3g，L-半胱氨酸0.5g，磷酸二氢钾5g，脲1.5g，硫酸锰0.2g，葡萄糖1g～3g，马血清300ml，抗生素700,000IU，磺胺甲基异恶唑3g，甲氧苄氨嘧啶5mg，多粘菌素6mg，RPMI1640细胞培养基5g的配方配置，蒸馏水定容1000ml。
培养基2为按照琼脂粉12g，新鲜牛肉提取纯粉10g，HEPES缓冲剂3g，L-半胱氨酸0.5g，磷酸二氢钾5g，脲1.5g，硫酸锰0.2g，葡萄糖1g～3g，马血清300ml，精氨酸2g，抗生素700,000IU，甲氧苄氨嘧啶5mg，多粘菌素6mg，RPMI1640细胞培养基5g的配方配置，蒸馏水定容1000ml。
培养基3为按照琼脂粉12g，新鲜牛肉提取纯粉10g，HEPES缓冲剂3g，L-半胱氨酸0.5g，磷酸二氢钾5g，脲1.5g，硫酸锰0.2g，葡萄糖1g～3g，马血清300ml，抗生素700,000IU，磺胺甲基异恶唑3g，多粘菌素6mg，RPMI1640细胞培养基5g的配方配置，蒸馏水定容1000ml。
其中培养基4为按照琼脂粉12g，新鲜牛肉提取纯粉10g，HEPES缓冲剂3g，L-半胱氨酸0.5g，磷酸二氢钾5g，脲1.5g，硫酸锰0.2g，葡萄糖1g～3g，马血清300ml，抗生素700,000IU，甲氧苄氨嘧啶5mg，多粘菌素6mg，RPMI1640细胞培养基5g的配方配置，蒸馏水定容1000ml。
实施例2培养基培养效果验证
标本采集培养方法：
妇科患者的泌尿生殖道标本拭子10例，均为解脲脲原体阳性，通过扩培，分为5组，每组3个平行样。人型支原体标本作为对照。分别用拭子接种固体培养基，然后36℃培养，10小时后检验培养结果。
结果判定(颜色)
实施例3培养基培养准确性验证
取临床标本10例，接种固体培养基1，然后36℃培养，10小时后检验培养结果。通过检验发现，有4例为解脲脲原体阳性。
通过CN102409098A中的解脲脲原体PCR检测试剂盒进行准确性鉴定，发现4例均为解脲脲原体阳性，结果准确。其余6例没有检测到解脲脲原体。
结论：培养基1可以有效的提高解脲脲原体标本检验的准确率，减少假阴性和假阳性的发生，使妇科患者的临床诊断正确率进一步加强。

Claims (3)

1.一种培养基，其特征在于：能快速培养解脲脲原体。
2.如权利要求1所述的培养基，其特征在于：其包括琼脂粉12g，新鲜牛肉提取纯粉10g，HEPES缓冲剂3g，L-半胱氨酸0.5g，磷酸二氢钾5g，脲1.5g，硫酸锰0.2g，葡萄糖1g～3g，马血清300ml，抗生素700,000IU，磺胺甲基异恶唑3g，甲氧苄氨嘧啶5mg，多粘菌素6mg，RPMI1640细胞培养基5g，蒸馏水定容1000ml。
3.一种鉴别解脲脲原体的方法，其特征在于使用权利要求1-2所述的培养基。
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