CN109374776A - 采用液相色谱鉴别枸杞多糖品质的方法 - Google Patents

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邸多隆
刘建飞
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Abstract

本发明提供一种鉴别枸杞多糖品质的方法，是将相同质量的枸杞多糖与掺入黄糊精的枸杞多糖在相同条件下水解衍生后，掺入黄糊精的枸杞多糖样品中葡萄糖的含量远大于枸杞多糖中葡萄糖的含量；利用高效液相色谱法对样品进行分析，根据各单糖浓度与峰面积的标准曲线及两份样品中各单糖的峰面积，得到样品各单糖摩尔比；若葡萄糖与其他各单糖摩尔比越大，说明枸杞多糖中掺入黄糊精的量越大，枸杞多糖的品质越差；相反，若葡萄糖与其他各单糖摩尔比越小，说明枸杞多糖中掺入黄糊精的量越少，枸杞多糖的品质越好。本发明具有灵敏度高、操作简单、专属性强等特点，能够有效的检测枸杞多糖中掺杂糊精量的多少，对于枸杞多糖品质的鉴别具有重要的意义。

Description

采用液相色谱鉴别枸杞多糖品质的方法
技术领域
本发明涉及一种鉴别枸杞多糖品质的方法，尤其涉及一种采用液相色谱鉴别枸杞多糖品质的方法，属于食品安全检测技术领域。
背景技术
枸杞多糖，是由阿拉伯糖、葡萄糖、半乳糖等单糖组成的多糖，具有良好的药用价值，广泛应用于食品、药品领域。目前在生产枸杞多糖的过程中，由于枸杞中果胶类成分较多，提取物黏度较大，生产厂家一般采用喷雾干燥的方法制备干燥粉时，常常加入一定比例的糊精类物质。这在一定程度上解决了黏度大的问题，但是随着不断增加糊精的比例，出现了产品说明上多糖含量远高于真实含量的现象，这严重影响了枸杞多糖的质量，使枸杞多糖的药用效果不断下降，损害了消费者的权益，扰乱了市场秩序。
无论是中国药典，还是国家标准，亦或是保健食品检测与评价技术规范中，对多糖含量的检测无一不是应用硫酸苯酚法。此方法的原理是：多糖类成分在硫酸作用下，先水解成单糖，并迅速脱水生成糖醛衍生物，然后和苯酚缩合成有色化合物，用分光光度法于适当波长处测定其多糖含量。因此，只要加入的辅料中含有单糖类物质，通过此方法检测，所得结果多糖含量势必升高。因此，建立一种能够有效的检测枸杞多糖中掺杂糊精量的多少，对于枸杞多糖品质的鉴别具有重要的意义。
发明内容
本发明的目的在于针对在枸杞多糖中添加糊精，导致枸杞多糖含量增高的现象，提供一种鉴别枸杞多糖品质的方法。
枸杞多糖由半乳糖、甘露糖、鼠李糖、葡萄糖、阿拉伯糖、木糖组成，而黄糊精由葡萄糖组成，采用液相色谱鉴别枸杞多糖品质的方法，其特征在于：将相同质量的枸杞多糖与掺入黄糊精的枸杞多糖在相同条件下水解衍生后，掺入黄糊精的枸杞多糖样品中葡萄糖的含量远大于枸杞多糖中葡萄糖的含量；利用高效液相色谱法对样品进行分析，根据各单糖浓度与峰面积的标准曲线及两份样品中各单糖的峰面积，得到样品各单糖摩尔比；若葡萄糖与其他各单糖摩尔比越大，则说明枸杞多糖样品中掺入黄糊精的量越大，枸杞多糖的品质越差；相反，若葡萄糖与其他各单糖摩尔比越小，则说明枸杞多糖样品中掺入黄糊精的量越少，枸杞多糖的品质越好。
所述液相色谱分离条件为：Venusil XBP C18 色谱柱为固定相，检测波长为250nm，柱温35℃，进样量20µl，流速1.0ml/min；流动相A为0.08mol/L磷酸缓冲液（KH2PO4-NaOH，pH6.6），流动相B为乙腈，梯度洗脱：0~15min，流动相A：100%~85%，流动相B：0~15%；15~35min，流动相A：85%~50%，流动相B：15%~50%。
本发明鉴别枸杞多糖品质的方法，具有灵敏度高、操作简单、专属性强等特点，能够有效的检测枸杞多糖中掺杂糊精量的多少，对于枸杞多糖品质的鉴别具有重要的意义。
附图说明
图1为枸杞多糖样品液相色谱图。
图2 掺假枸杞多糖液相色谱图。
具体实施方式
下面通过具体实施例对本发明枸杞多糖品质的鉴别做进一步说明。
1、样品前处理过程
待测样品水解：精密称取枸杞多糖，掺入黄糊精的枸杞多糖样品置于洁净、干燥的试管中，加入2mol/L硫酸溶液，待两份样品溶解后，封口膜封口，水解。水解温度为105℃，水解时间为5h。
待测样品衍生：样品水解后放置室温，用浓氢氧化钠调节pH为7。分别取600µl样品于具塞离心试管中，加入0.3mol/L的NaOH溶液600µl和0.5mol/L的1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮甲醇溶液700µl，混匀后置于70℃水浴中反应30min，取出，冷却至室温，加入0.3mol/L的盐酸600µl，然后加入2ml氯仿涡旋萃取，离心分层，弃去下层有机层，上层为水层，重复氯仿萃取步骤一次。
单糖标准品的衍生：分别配置各单糖标准品溶液，溶解后分别取一定量于同一离心管中，加入NaOH溶液和1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮甲醇溶液，混匀后置于水浴中反应，取出，冷却至室温，加入盐酸，然后加入氯仿涡旋萃取，离心分层，弃去下层有机层，上层为水层，重复氯仿萃取步骤一次。此过程的优选条件和待测样品衍生的优选条件一致。
2、液相色谱条件
优选的液相色谱条件：即Venusil XBP C18 色谱柱（5μm, 250×4.6 mm）为固定相，检测波长250nm，柱温35℃，进样量20µl，流速1.0ml/min。流动相A为0.08mol/L磷酸缓冲液（KH2PO4-NaOH，pH6.6），流动相B为乙腈，梯度洗脱条件如表1所示：
。
3、各单糖标准曲线的建立及样品检测
将上述衍生后的单糖混合溶液稀释成166.7、83.3、41.6、20.3、10.1µg/mL，液相色谱分析，根据结果得到各单糖浓度与峰面积的标准曲线如表2所示：
。
4、枸杞多糖及掺黄糊精多糖样品的鉴别
将衍生后的枸杞多糖及掺假样品稀释相同倍数后液相色谱分析，得到色谱图如图1、2所示。图1、2中，色谱峰1为半乳糖，色谱峰2为甘露糖，色谱峰3为鼠李糖，色谱峰4为葡萄糖，色谱峰5为阿拉伯糖，色谱峰6为木糖。比较两个色谱图可以得知，图2中葡萄糖单糖的峰高，峰面积均大于图1中葡萄糖单糖的峰高，峰面积。根据色谱图我们可以初步对枸杞多糖和掺黄糊精样品进行鉴别。
通过液相色谱可以得知，枸杞多糖及掺黄糊精样品中各单糖峰面积；将各单糖峰面积分别带入对应的单糖标准曲线中得到各单糖浓度，根据浓度，体积，质量及相对分子质量之间的关系，计算得到枸杞多糖中各单糖摩尔比为半乳糖:甘露糖:鼠李糖:葡萄糖:阿拉伯糖:木糖=1:1.78:1.03:9.9:8.15:11.75，掺假样品中各单糖摩尔比为半乳糖:甘露糖:鼠李糖:葡萄糖:阿拉伯糖:木糖=1:1.58:1.09:21.98:3.69:9.06。根据各单糖峰面积可以得到各单糖摩尔比，掺黄糊精样品各单糖摩尔比相对于枸杞多糖各单糖摩尔比发生显著变化，其中葡萄糖与其他各单糖之间的摩尔比变化明显。根据摩尔比的变化，我们可以对枸杞多糖及掺黄糊精样品进一步进行鉴别。从而确定枸杞多糖的品质明显优于掺黄糊精样品的品质。

Claims (2)

1.采用液相色谱鉴别枸杞多糖品质的方法，其特征在于：将相同质量的枸杞多糖与掺入黄糊精的枸杞多糖在相同条件下水解衍生后，掺入黄糊精的枸杞多糖样品中葡萄糖的含量远大于枸杞多糖中葡萄糖的含量；利用高效液相色谱法对样品进行分析，根据各单糖浓度与峰面积的标准曲线及两份样品中各单糖的峰面积，得到样品各单糖摩尔比；若葡萄糖与其他各单糖摩尔比越大，则说明枸杞多糖样品中掺入黄糊精的量越大，枸杞多糖的品质越差；相反，若葡萄糖与其他各单糖摩尔比越小，则说明枸杞多糖样品中掺入黄糊精的量越少，枸杞多糖的品质越好。
2.如权利要求1所述采用液相色谱鉴别枸杞多糖品质的方法，其特征在于：所述液相色谱分离条件为：Venusil XBP C18 色谱柱为固定相，检测波长为250nm，柱温35℃，进样量20µl，流速1.0ml/min；流动相A为0.08mol/L磷酸缓冲液，流动相B为乙腈，梯度洗脱：0~15min，流动相A：100%~85%，流动相B：0~15%；15~35min，流动相A：85%~50%，流动相B：15%~50%。
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