CN109342583A - 一种小香勾中补骨脂素和黄酮含量的检测方法 - Google Patents

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    • G01N21/17—Systems in which incident light is modified in accordance with the properties of the material investigated
    • G01N21/25—Colour; Spectral properties, i.e. comparison of effect of material on the light at two or more different wavelengths or wavelength bands
    • G01N21/31—Investigating relative effect of material at wavelengths characteristic of specific elements or molecules, e.g. atomic absorption spectrometry

Abstract

本发明是提供一种小香勾中补骨脂素和黄酮的含量测定方法，利用高效液相色谱法，三乙胺显色剂条件下紫外‑可见分光光度法对其有效成分补骨脂素和黄酮进行测定，使检测方法具有良好的专属性和准确性，操作简单易行，准确度高。能够为有效控制与评价小香勾的质量提供科学依据。

Description

一种小香勾中补骨脂素和黄酮含量的检测方法
技术领域
本发明属于分析化学领域，具体涉及一种小香勾中补骨脂素和黄酮含量的检测方法。
背景技术
小香勾为桑科植物条叶榕，富有丰富的补骨脂素和黄酮。现代研究表明补骨脂素具有抗菌、抗病毒、抗凝血、抑制肿瘤、免疫调节等作用。黄酮是一种很强的抗氧剂，可有效清除体内的氧自由基，这种抗氧化作用可以阻止细胞的退化、衰老，也可阻止癌症的发生。黄酮还可以改善血液循环，可以降低胆固醇。黄酮还可以抑制炎性生物酶的渗出，可以增进伤口愈合和止痛，栎素由于具有强抗组织胺性，可以用于各类敏感症。
补骨脂素和黄酮是小香勾中两种重要的主要营养物质，建立一套对小香勾补骨脂素和黄酮含量具有良好的专属性和准确性，操作简单易行的检测方法非常重要。
发明内容
本发明提供了一种小香勾中补骨脂素和黄酮含量的检测方法，其能够快速、高效、准确地确定小香勾中补骨脂素和黄酮含量。为了实现上述发明目的，本发明的技术方案通过以下方式来实现：
(1)补骨脂素对照品溶液的制备
称取补骨脂素对照品适量，加甲醇制成溶液，作为对照品贮备液，吸取对照品贮备液适量，加甲醇制成溶液，即得对照品溶液；
(2)补骨脂素供试品溶液的制备
取小香勾适量，粉碎，过筛，取适量，称定，置于具塞锥形瓶中，加入甲醇，密塞，称定质量，超声提取，放冷至室温，再次称定，加甲醇补足减失的质量，摇匀，经微孔滤膜滤过，取滤液，即得供试品溶液；
(3)补骨脂素线性关系考察
吸取(1)中的对照品贮备液适量，甲醇制成系列对照品溶液，按一定色谱条件进样测定，记录峰面积，以峰面积为纵坐标、补骨脂素的质量浓度为横坐标，进行线性回归，得回归方程；
(4)样品补骨脂素含量测定
吸取(2)中的对照品贮备液适量，加甲醇制成一定浓度溶液，按一定色谱条件进样测定，记录峰面积，与(3)中的回归方程得出补骨脂素含量；
(5)黄酮对照品溶液的制备
取芹菜素-6-C-葡萄糖-8-C-葡萄糖苷对照品适量，称定，加50％乙醇溶解定容，制成对照品溶液。
(6)黄酮供试品溶液的制备
称取烘干至恒重的小香勾粉末，称定，加50％乙醇溶液，称重，超声处理后取出，补足减失质量，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。
(7)标准曲线制备
量取(5)中对照品溶液若干份，每个各2份，分别置10mL量瓶中，一份用50％乙醇直接定容至刻度，摇匀，作为显色前溶液，另一份加三乙胺乙醇溶液显色，用50％乙醇定容至刻度，摇匀，作为显色后溶液，以50％乙醇为空白，于一定波长处分别测定显色前后的吸光度，以显色前后的吸光度差值为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线，计算得回归方程；
(8)样品黄酮含量测定
取(6)中黄酮供试品溶液按(7)中方法测定得到吸光度差值，根据回归方程得出样品黄酮含量。
进一步地，所述步骤(1)中，步骤(1)中第一次加甲醇制成溶液浓度为18～23ug/mL，第二次加甲醇制成溶液浓度为3～7ug/mL。
进一步地，步骤(2)中取适量为取0.2～0.7g，加入甲醇量为30～70mL，超声提取时间为1～1.5h，微孔滤膜为0.3～0.6um。。
进一步地，步骤(3)中所述制成系列对照品溶液的浓度为0.5～25ug/mL。
进一步地，步骤(3)中所述一定色谱条件为色谱柱：Agilent Zorbax XDB-C18，150mm×4.6mm,5um；流动相:甲醇：水＝55～60:40～45；流速：0.8～1.0mL/min；柱温：20～30℃；检测波长：235～246nm；进样量：8～10uL。
进一步地，步骤(5)中所述自称对照品溶液的浓度为0.3～25g/L。
进一步的，步骤(7)中所述三乙胺乙醇溶液的浓度为1～5％，加入量为1～3mL。
进一步的，步骤(6)中称取烘干至恒重的小香勾粉末的重量为0.3～0.5g，加入50％乙醇溶液体积为80～130mL，超声处理时间为30～60min。
进一步的，步骤(7)中所述对照品溶液若干份的每一份的体积为0.01～3mL，波长为300～700nm。
有益效果：本发明的检测对于小香勾补骨脂素和黄酮含量测定具有良好的专属性和准确性，操作简单易行，准确度高。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
需要说明的是，在不冲突的情况下，本发明中的实施例及实施例中的特征可以相互组合。
本发明的多花黄精中的农药残留检测方法可以包括以下步骤：
补骨脂素含量测定：精密称取补骨脂素对照品适量，加甲醇制成21.56ug/mL的溶液，作为对照品贮备液。精密吸取对照品贮备液适量，加甲醇制成溶液，即得对照品溶液；取小香勾适量，粉碎，过2号筛，取0.5g，精密称定，置于具塞锥形瓶中，精密加入甲醇，密塞，称定质量，超声提取1h，放冷至室温，再次精密称定，加甲醇补足减失的质量，摇匀，经0.45um微孔滤膜滤过，取滤液，即得供试品溶液；精密吸取对照品贮备液适量，加甲醇制成0.6456，2.5878，6.3462，12.9734，21.5287ug/uL的溶液，色谱条件为Agilent Zorbax XDB-C18(150mm×4.6mm,5um；流动相:甲醇：水(55:45)；流速：1.0mL/min；柱温：30℃；检测波长：246nm；进样量：10uL。进样测定，记录峰面积。补骨脂素对照品与供试品的高效液相色谱图如图1-补骨脂素的高效液相色谱图所示。以峰面积为纵坐标、补骨脂素的质量浓度为横坐标，进行线性回归，得回归方程y＝79.977x+7.565(R2＝0.999)，如图2-补骨脂素标准曲线所示。精密对照品贮备液适量，加甲醇制成一定浓度溶液，按一定色谱条件进样测定，记录峰面积，与回归方程得出补骨脂素含量；
黄酮含量测定：取芹菜素-6-C-葡萄糖-8-C-葡萄糖苷对照品适量，精密称定，加50％乙醇溶解定容，制成0.508g/L对照品溶液。称取烘干至恒重的小香勾粉末0.3g，精密称定，加50％乙醇溶液100mL，称重，超声处理30min后取出，补足减失质量，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。精密量取对照品溶液0.010，0.025，0.050，0.10，0.50，1.0，2.0mL若干份，每个各2份，分别置10mL量瓶中，一份用50％乙醇直接定容至刻度，摇匀，作为显色前溶液，另一份加1％三乙胺的乙醇溶液1mL显色，用50％乙醇定容至刻度，摇匀，作为显色后溶液。以50％乙醇为空白，于400nm处分别测定显色前后的吸光度。以显色前后的吸光度差值为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线，计算得回归方程y＝23.474x+0.1598(R2＝0.9998)，如附图3-黄酮标准曲线所示。黄酮供试品溶液测定得到吸光度差值，根据回归方程得出样品黄酮含量。
以上仅为本发明较佳的实施例，并非因此限制本发明的实施方式及保护范围，对于本领域技术人员而言，应当能够意识到凡运用本发明说明书及图示内容所作出的等同替换和显而易见的变化所得到的方案，均应当包含在本发明的保护范围内。

Claims (9)

1.一种小香勾中补骨脂素和黄酮含量的检测方法，包括下列步骤：
(1)补骨脂素对照品溶液的制备
称取补骨脂素对照品适量，加甲醇制成溶液，作为对照品贮备液，吸取对照品贮备液适量，加甲醇制成溶液，即得对照品溶液；
(2)补骨脂素供试品溶液的制备
取小香勾适量，粉碎，过筛，取适量，称定，置于具塞锥形瓶中，加入甲醇，密塞，称定质量，超声提取，放冷至室温，再次称定，加甲醇补足减失的质量，摇匀，经微孔滤膜滤过，取滤液，即得供试品溶液；
(3)补骨脂素线性关系考察
吸取(1)中的对照品贮备液适量，甲醇制成系列对照品溶液，按一定色谱条件进样测定，记录峰面积，以峰面积为纵坐标、补骨脂素的质量浓度为横坐标，进行线性回归，得回归方程；
(4)样品补骨脂素含量测定
吸取(2)中的对照品贮备液适量，加甲醇制成一定浓度溶液，按一定色谱条件进样测定，记录峰面积，与(3)中的回归方程得出补骨脂素含量；
(5)黄酮对照品溶液的制备
取芹菜素-6-C-葡萄糖-8-C-葡萄糖苷对照品适量，称定，加50％乙醇溶解定容，制成对照品溶液。
(6)黄酮供试品溶液的制备
称取烘干至恒重的小香勾粉末，称定，加50％乙醇溶液，称重，超声处理后取出，补足减失质量，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。
(7)标准曲线制备
量取(5)中对照品溶液若干份，每个各2份，分别置10mL量瓶中，一份用50％乙醇直接定容至刻度，摇匀，作为显色前溶液，另一份加三乙胺乙醇溶液显色，用50％乙醇定容至刻度，摇匀，作为显色后溶液，以50％乙醇为空白，于一定波长处分别测定显色前后的吸光度，以显色前后的吸光度差值为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线，计算得回归方程；
(8)样品黄酮含量测定
取(6)中黄酮供试品溶液按(7)中方法测定得到吸光度差值，根据回归方程得出样品黄酮含量。
2.根据权利要求1所述的检测方法，步骤(1)中第一次加甲醇制成溶液浓度为18～23ug/mL，第二次加甲醇制成溶液浓度为3～7ug/mL。
3.根据权利要求1所述的检测方法，步骤(2)中取适量为取0.2～0.7g，加入甲醇量为30～70mL，超声提取时间为1～1.5h，微孔滤膜为0.3～0.6um。
4.根据权利要求1所述的检测方法，步骤(3)中所述制成系列对照品溶液的浓度为0.5～25ug/mL。
5.根据权利要求1所述的检测方法，步骤(3)中所述一定色谱条件为色谱柱：AgilentZorbax XDB-C18，150mm×4.6mm,5um；流动相:甲醇：水＝55～60:40～45；流速：0.8～1.0mL/min；柱温：20～30℃；检测波长：235～246nm；进样量：8～10uL。
6.根据权利要求1所述的检测方法，步骤(5)中所述自称对照品溶液的浓度为0.3～25g/L。
7.根据权利要求1所述的检测方法，步骤(7)中所述三乙胺乙醇溶液的浓度为1～5％，加入量为1～3mL。
8.根据权利要求1所述的检测方法，步骤(6)中称取烘干至恒重的小香勾粉末的重量为0.3～0.5g，加入50％乙醇溶液体积为80～130mL，超声处理时间为30～60min。
9.根据权利要求1所述的检测方法，步骤(7)中所述对照品溶液若干份的每一份的体积为0.01～3mL，波长为300～700nm。
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