CN109310714A - 用于治疗和预防胃肠炎症的普氏粪杆菌菌株cncm i-4573 - Google Patents
用于治疗和预防胃肠炎症的普氏粪杆菌菌株cncm i-4573 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及一种保藏在CNCM的保藏号为CNCM I‑4573的物种普氏粪杆菌的细菌菌株,其用于治疗和/或预防个体的炎性胃肠疾病。
Description
技术领域
本发明涉及一种普氏粪杆菌(Faecalibacterium prausnitzii)菌株,其用于治疗和预防个体的炎性胃肠疾病(IBD),特别是炎性肠病(IBD)。
背景技术
炎症是一种天然的生物过程,它构成了对病变或感染的响应的正常部分,并且有助于保护机体免受内部或外部的攻击。
然而,炎症机制的功能障碍,特别是持续的或过度丰富的炎症,可能引起疼痛疾病并危及患者的生命。这些疾病包括例如皮肤病、肠病、神经障碍、关节炎和自身免疫疾病。这些炎性疾病中的一些仍然无法治疗或没有恰当的治疗。
因此,研究和寻找新的抗炎治疗策略构成了医学和生物医学研究的主要课题。
炎性肠病是一组以胃肠道的慢性和复发性炎症为特征的病症。该组病症中最常见的形式是克罗恩病(Crohn’s disease)。发病机制涉及由遗传易感患者中肠道微生物群的存在引起的粘膜免疫系统的不恰当的连续的激活。
一直需要用于治疗和/或预防个体的炎性胃肠疾病,特别是炎性肠病的新物质,特别是益生菌,或组合物。
发明内容
本发明的目的是描述用于治疗和/或预防个体的炎性胃肠疾病,特别是个体的炎性肠病的新物质,特别是益生菌,和组合物。
在本发明的背景中,术语“预防”表示将发生给定现象(也就是说,在本发明中,是胃肠炎症,特别是肠炎)的风险或可能性降低至较低程度。
本发明基于本发明人发现的由CNCM保藏的保藏号为CNCM I-4573的普氏粪杆菌菌株的抗炎特性。
根据本发明人的实验结果,于2012年1月21日由CNCM保藏的保藏号为CNCM I-4573的普氏粪杆菌(F.prausnitzii)的特定菌株具有如下意想不到的能力,其能够在体外和体内降低个体的胃肠道炎症,特别是肠炎。如实施例中所示和下文所述,另一方面,发明人已经证明,普氏粪杆菌菌株I-4575不具有这种有利的性质。
根据本发明的菌株更特别地能够减少促炎分子例如白细胞介素8(IL-8)、白细胞介素2(IL-2)、白细胞介素4(IL-4)、白细胞介素6(IL-6)和γ-干扰素(INFγ)的产生,以及增加抗炎分子例如白细胞介素10(IL-10)的产生。
根据第一个主题,本发明涉及由CNCM保藏的保藏号为CNCM I-4573的物种普氏粪杆菌的细菌菌株,其用于治疗和/或预防个体的炎性胃肠疾病,特别是个体的炎性肠病,更特别是个体的结肠炎性肠病。
因此,本发明人鉴定的该菌株是益生菌菌株,其可用于上述应用。
根据本发明的个体优选是包括非人哺乳动物在内的哺乳动物,并且特别是人类。
炎性胃肠疾病特别是炎性肠病(IBD),更特别是结肠炎性肠病。
所述结肠炎性肠病特别可以选自由克罗恩病、溃疡性结肠炎和结肠袋炎(pouchitis)组成的组,特别是克罗恩病和溃疡性结肠炎。
根据另一个实施方案,根据本发明的用于其用途的细菌菌株被包含在含有生理学上可接受的介质的组合物中,优选在口服组合物中,更特别地优选在食品补充剂中。
术语“生理学上可接受的介质”旨在表示与必须施用所述组合物的个体的身体兼容的介质。例如,它是无毒溶剂,例如水。特别地,所述介质与口服施用兼容。
本发明的组合物优选用于口服施用。
用于口服施用的本发明组合物可选自由食品、饮料、药品、营养品、食品添加剂、食品补充剂和乳制品组成的组,并且特别是食品补充剂的形式。
附图说明
图1说明了用TNFα刺激的Ht-29细胞中白细胞介素8(IL-8)的浓度(以pg的IL-8/mg的蛋白质表示):(a)仅在YBHI培养基中(对照)的;(b)用普氏粪杆菌菌株A2-165处理的;(c)用根据本发明的普氏粪杆菌菌株I-4573处理的;或(d)用普氏粪杆菌菌株I-4575处理的。测试一式三份进行。使用用PBS(作为阴性对照)共诱导后产生的IL-8作为参考值来对结果进行标准化。*p<0.05。
图2说明了外周血单核细胞(PBMC)中白细胞介素10(IL-10)的浓度(以pg的IL-10/ml的蛋白质表示):(a)仅在YBHI培养基中(对照)的;(b)用普氏粪杆菌菌株A2-165处理的;(c)用根据本发明的普氏粪杆菌菌株I-4573处理的;或(d)用普氏粪杆菌菌株I-4575处理的。测试一式三份进行。***p<0.001。
图3说明了用于小鼠慢性结肠炎模型(DNBS)的实验方案。
图4说明了以下小鼠的结肠和小肠的宏观评分:(a)仅接受EtOH的对照小鼠(无结肠炎);(b)具有DNBS结肠炎并用PBS处理的对照小鼠;(c)具有DNBS结肠炎并用普氏粪杆菌菌株A2-165处理的小鼠;(d)具有DNBS结肠炎并用普氏粪杆菌菌株I-4573处理的小鼠;和(e)具有DNBS结肠炎并用普氏粪杆菌菌株I-4575处理的小鼠。宏观标准(按0(无损伤)至9级进行评估)包括粘膜的宏观损伤(例如溃疡、结肠壁增厚、结肠与其他腹腔内器官之间存在粘连)、粪便物质粘稠度(作为腹泻的指标)和充血的存在。n=8。**p<0.01。
图5说明了以下小鼠的远端结肠的髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)活性(U/mg):(a)仅接受EtOH的对照小鼠(无结肠炎);(b)具有DNBS结肠炎并用PBS处理的对照小鼠;(c)具有DNBS结肠炎并用普氏粪杆菌菌株A2-165处理的小鼠;(d)具有DNBS结肠炎并用普氏粪杆菌菌株I-4573处理的小鼠;和(e)具有DNBS结肠炎并用普氏粪杆菌菌株I-4575处理的小鼠。n=8。*p<0.05。
图6说明了以下小鼠的结肠细胞因子((图6A)IL-2,(图6B)IL-4,(图6C)IL-6和(图6D)IFNg)的浓度(以pg/ml表示):(a)仅接受EtOH的对照小鼠(无结肠炎);(b)具有DNBS结肠炎并用PBS处理的对照小鼠;(c)具有DNBS结肠炎并用普氏粪杆菌菌株A2-165处理的小鼠;(d)具有DNBS结肠炎并用普氏粪杆菌菌株I-4573处理的小鼠;和(e)具有DNBS结肠炎并用普氏粪杆菌菌株I-4575处理的小鼠。
具体实施方式
为了鉴定普氏粪杆菌的特定菌株治疗和/或预防个体的炎性胃肠疾病,特别是个体的炎性肠病的能力,本发明人进行了彻底的研究。
实际上,本发明人意外地确定了普氏粪杆菌菌株I-4573具有减轻个体的胃肠道炎症,特别是肠炎的能力。
本文描述了本发明的细菌菌株可以,特别地,降低促炎分子例如白细胞介素8(IL-8)、白细胞介素2(IL-2)、白细胞介素4(IL-4)和白细胞介素6(IL-6)的浓度。
本文还证明了本发明的细菌菌株,特别地,能够增加抗炎分子例如白细胞介素10(IL-10)的浓度。
本发明的普氏粪杆菌菌株
普氏粪杆菌是厚壁菌门(Firmicutes)的主要成员,是健康人类大肠微生物群中含量最高的共生细菌的一部分。
普氏粪杆菌是一种对氧极端敏感的(extremely oxygen-sensitive,EOS)细菌,因此即使在缺氧条件下也难以培养(Duncan等人2002,Int.J.Syst.Evol.Microbiol.52(Pt6):2141-6和Lopez-Siles等人Appl.Environ Microbiol.January 2012;78(2):420-8)。已知普氏粪杆菌特别地是人体消化道中最多的丁酸盐生产细菌之一,丁酸盐短链脂肪酸在肠道生理学、全身功能和对人体健康有益作用中非常重要(Macfarlane and Macfarlane(2011),J.Clin.Gastroenterol.45Suppl:S120-7)。
还已知普氏粪杆菌菌株A2-165在急性和慢性结肠炎的鼠模型中,也就是说,在炎性疾病中,有抗炎和保护作用(Martin等人,Inflamm Bowel Dis.2014年三月;20(3):417-30和Sokol等人,Proc Natl Acad Sci USA.2008年十月28日;105(43):16731-6)。
A2-165菌株的抗炎特性通常不能归因于普氏粪杆菌物种,因为对于给定的普氏粪杆菌菌株,抗炎特性的存在是不可预测的。实际上,在实施例中说明了这种特异性抗炎活性,其中使用不是本发明的一部分的普氏粪杆菌菌株,即CNCM I-4575菌株,进行了对比试验,该菌株不具有本发明菌株的抗炎活性。
根据本发明的细菌菌株的合适的日剂量是107至1011个菌落形成单位(cfu)作为药物,例如以相当于109cfu的日剂量的形式。
本发明的普氏粪杆菌菌株用于治疗和/或预防个体的胃肠道炎症,特别是个体的肠道炎症。
本发明的菌株是益生菌,其活性位于肠道中。根据本发明的益生菌表示这样一种细菌,当其以足够量活体摄入时,可以对人类健康产生有益效果。
因此,该菌株必须在肠内活体施用。
本发明的细菌菌株可以以各种方式施用于待治疗个体的肠,即口服施用或直肠施用。根据本发明的细菌优选口服施用。
根据一个优选的实施方案,本发明的细菌菌株被包含在含有生理学上可接受的介质的组合物中。这种组合物优选用于口服施用,特别是以食品补充剂的形式。
组合物
本发明还涉及一种组合物,所述组合物包含在生理学上可接受的介质中的至少本发明的普氏粪杆菌细菌菌株I-4573。
根据本发明的组合物旨在用于消化道,特别是肠。
因此,根据本发明的组合物选自口服组合物或直肠组合物。本发明的组合物优选是口服组合物或直肠组合物,更优选口服组合物。
根据一个实施方案,本发明的组合物是口服组合物,也就是说它旨在用于对受试者口服施用。
这种组合物可以是悬浮液、片剂、丸剂、胶囊、颗粒或粉末的形式。
根据本发明的用于口服施用的组合物可以选自由食品、饮料、药品、营养品、食品添加剂、食品补充剂或乳制品组成的组,并且特别是食品补充剂。
根据一个优选的实施方案,根据本发明的组合物是食品补充剂。
用于口服施用的食品补充剂可以存在于胶囊、凝胶胶囊、软胶囊、片剂、糖包衣片剂、丸剂、糊剂、锭剂、口香糖、口服溶液或乳液、糖浆或凝胶中。
有利地,旨在用于口服施用的根据本发明的组合物可以提供抗胃液包衣,以确保包含在所述组合物中的本发明的细菌菌株可以通过受损的胃。因此,细菌菌株的释放可以首次发生在上肠道中。
根据本发明的食品补充剂还可以包含甜味剂、稳定剂、抗氧化剂、添加剂、调味剂和/或染料。
其制剂通过用于制备糖包衣片剂、凝胶胶囊、凝胶、控释水凝胶、乳液、片剂或胶囊的常规方法进行。
根据本发明的组合物还可以是营养组合物的形式。
根据本发明的营养组合物是酸奶、谷物棒、早餐谷物、甜点、冷冻食品、汤、宠物食品、液体悬浮液、粉末、片剂、口香糖或糖果的形式。
在本发明的另一个实施方案中,含有本发明的细菌菌株的组合物在直肠内施用。
优选地,以栓剂、灌肠剂或泡沫剂的形式进行直肠施用。
特别地,本发明的组合物适合于施用代表107至1011个菌落形成单位(cfu)的日剂量作为药物,优选相当于109cfu的日剂量。
例如,根据本发明的组合物可以以1g的单次日剂量施用给需要它的个体,所述1g的单次日剂量含有本发明的I-4573细菌菌株,其量相当于107至1011cfu,优选109cfu的剂量。
在另一个实施例中,根据本发明的组合物可以以0.2g的单次日剂量施用给需要它的个体,所述0.2g的单次日剂量含有本发明的I-4573细菌菌株,其量相当于107至1011cfu,优选109cfu的量。
在另一个实施例中,根据本发明的组合物可以基于两个1g的剂量一天两次施用给需要它的个体,每个剂量独立地含有本发明的I-4573细菌菌株,其量相当于5×106至5×1010cfu(基于干重),优选5×108cfu,因此向个体施用的本发明的I-4573细菌菌株的总日剂量如上所述。
根据本发明的组合物还可包含以下至少一种:抗氧化剂、鱼油、DHA、EPA、维生素、矿物质、植物营养素、蛋白质、脂质、益生菌及其组合。
下面通过以下实施例更详细地描述本发明,所述实施例仅以举例说明的方式给出。
除非另有说明,否则所有提及的百分比均为重量百分比。
实施例
关于其在体外和体内调节免疫反应和对肠炎具有直接作用的能力方面,对根据本发明的普氏粪杆菌菌株(由CNCM保藏,保藏号为CNCM I-4573)进行了测试,并将其与另外两种普氏粪杆菌菌株A2-165和CNCM I-4575进行了比较。
在体外试验中,使用了两种不同的细胞模型:HT-29和PBMC。
在体内试验中,使用了鼠结肠炎模型。
体外试验
I.细菌菌株和培养条件
测试的普氏粪杆菌菌株的分离株在补充有1mg/ml纤维二糖(Sigma-AldrichChemie Gmbh,Buchs,Switzerland)、1mg/ml麦芽糖(Sigma-Aldrich)和0.5mg/ml半胱氨酸(Sigma-Aldrich)的YBHI培养基(补充有0.5%酵母提取物的脑心灌注培养基)(Difco,Detroit,United States)中,在37℃下,在填充有N2=85%、CO2=10%和H2=5%的厌氧室中培养。
从健康患者中分离菌株:
-来自40岁男性的CNCM-I4573和CNCM-I4575菌株;和
-由Duncan SH等人IJSEM,2002,52(Pt 6):2141-2146提供的、来自34岁女性的A2-165(DSMZ 17677)菌株。
II.通过HT-29细胞的免疫调节特性
A.细胞培养
HT-29细胞系(ATCC HTB-38)(LGC-Standars)在补充有10%(w/v)的热灭活胎牛血清(FBS)(GibcoBRL,Eragny,France)和青霉素G/链霉素(5000IU/ml,5000μg/ml)(Sigma-Aldrich)的杜氏最低必需改良伊格尔培养基(Dulbecco’s minimum essential ModifiedEagle Medium,DMEM)(Sigma-Aldrich)中培养。将培养物在25cm2组织培养瓶(Nunc,Roskilde,Denmark)中,在37℃下,在含有5%(v/v)CO2的气氛中孵育直至汇合。
B.抗炎试验
按照Kechaou等人(Applied and environmental microbiology 2012,79(5):1491-1499)描述的方法使用HT-29进行抗炎试验。
简而言之,按每孔50 000个HT-29细胞接种在24孔培养板(Nunc)中。在细菌刺激前24小时,将培养基替换为含有5%FBS的培养基。
试验在接种后第7天开始,此时细胞处于汇合状态(1.83×106个细胞/孔)。在细菌共培养前24小时(第6天),将培养基替换为含有5%热灭活FBS和1%谷氨酰胺的培养基。
在共培养的当天,以500μl的总体积将10%的细菌上清加入到DMEM中。用人TNF-α(5ng/ml;Peprotech,NJ)在37℃、10%CO2中同时刺激细胞6小时。
所有样品一式三份进行分析。
共培养后,收集细胞上清液并保存在-80℃直至随后通过ELISA(Biolegend,SanDiego,CA)分析白细胞介素8(IL-8)的浓度。
通过Bradford试剂试验(Sigma-Aldrich)测定总蛋白质。试验至少一式三份进行。
结果表示为IL-8/蛋白质(pg/mg),并使用用PBS(作为阴性对照)共孵育后产生的IL-8作为参考值来标准化。
C.统计学分析
通过GraphPad软件(GraphPad Software,La Jolla,CA,United States)进行统计学分析。所有数据均表示为平均值+/-SEM的形式。
比较采用非参数Kruskal-Wallis检验进行,然后进行Dunn多重比较检验。
相关检验通过Spearman检验进行。
值p小于0.05被认为是显著的。
D.结果
所获得的结果示于图1中。
从这些试验中可以看出,CNCM I-4573菌株能够显著降低HT-29上皮细胞中TNF-α刺激所诱导的促炎细胞因子IL-8的产生。
如所预期的,普氏粪杆菌菌株A2-165也造成这种IL-8产生的减少。
相反,普氏粪杆菌菌株I-4575不诱导IL-8的统计学显著降低。
III.通过PBMC的免疫调节特性
A.细胞培养
使用来自五名健康供体的商业PBMC(StemCell Technologies,France)。
供体具有以下特征:男性,小于65岁,体重指数<30,非吸烟者,在选择前15天内没有服用具有已知抗炎作用的药物,对HIV、甲型肝炎和乙型肝炎病毒检测呈阴性。
接收后,将细胞储存在液氮中直至使用。
B.抗炎试验
为了制备PBMC用于与普氏粪杆菌细菌进行共培养试验,将烧瓶在37℃水浴中解冻,然后转移到含有RPMI-1640培养基的培养基中,所述RPMI-1640培养基补充有10%热灭活FCS、1%L-谷氨酰胺和0.1%青霉素/链霉亲和素(培养基的组分购自瑞士Lonza)。将DNase(100μg/ml,Roche Applied Science,France)加入到培养基中以防止细胞聚集。
然后将细胞以200g离心15分钟,使用台盼蓝计数并以1×106个细胞/孔在24孔板上铺板。将上清液以10%、一式三份加入(每个供体三个孔),总体积为1ml。将板在37℃下用10%CO2孵育24小时。
收集培养物上清液,根据制造商的说明书与抗蛋白酶混合物(EDTA-完全蛋白酶抑制剂,Roche Applied Bioscience)混合并储存于-80℃直至随后通过ELISA(Mabtech,Sweden)分析白细胞介素10(IL-10)浓度。
C.统计分析
通过GraphPad软件(GraphPad Software,La Jolla,CA,United States)进行统计学分析。所有数据均表示为平均值+/-SEM的形式。
比较采用非参数Kruskal-Wallis检验,然后进行Dunn多重比较检验。
相关检验通过Spearman检验进行。
值p小于0.05被认为是显著的。
D.结果
所获得的结果示于图2中。
这些试验显示,CNCM I-4573菌株能够显著增加PBMC中抗炎细胞因子IL-10的产生。
如所预期的,普氏粪杆菌菌株A2-165也造成这种IL-10产生的增加。
相反,普氏粪杆菌菌株I-4575不诱导IL-10的统计学显著增加。
体内试验
A.DNBS结肠炎的诱导和细菌的施用
DNBS诱导的结肠炎方案如前所述(Martín R,et al.Inflamm Bowel Dis.March2014;20(3):417-30)。
简而言之,用安氟醚(Abbott,Abbott Park,IL)麻醉小鼠,将一段10cm长的PE-90管(ClayAdam,Parsippany,NJ)连接到结核菌素注射器上,并向结肠中插入3.5cm。
通过该管直肠内(i.r.)注射200mg/kg二硝基苯磺酸(DNBS)(ICN,Biomedical公司)在30%乙醇(EtOH)中的溶液来诱导结肠炎。
对照小鼠(无结肠炎)仅接受EtOH。
在DNBS注射后的前三天,小鼠喂食在饮用水中的6%蔗糖,以防止脱水(DNBS期)。DNBS期后10天,每天灌胃施用含有1×109CFU的一种细菌菌株的200μl,持续10天(灌胃期)(见图3)。
研究组如下:非结肠炎对照组(EtOH+PBS),结肠炎对照组(DNBS+PBS),普氏粪杆菌菌株A2-165组(DNBS+A2-165),普氏粪杆菌菌株CNCM-I4573组(DNBS+CNCM-I4573)和普氏粪杆菌菌株CNCM-I4575组(DNBS+CNCM-I4575)。
第一次注射DNBS(恢复期)后21天第二次注射100mg/kg的DNBS溶液再次激活结肠炎。
然后通过监测第二次注射后3天的体重减轻(结果未显示)来确定结肠炎的严重性。
B.宏观评分
通过颈椎脱位处死小鼠并打开腹腔。取出结肠和小肠并纵向打开;立即评估宏观损伤。
通过先前描述的用于DNBS结肠炎的系统来记录宏观评分。
简而言之,宏观标准(按0(无损伤)至9级进行评估)包括粘膜的宏观损伤(例如溃疡、结肠壁增厚、结肠与其他腹腔内器官之间存在粘连)、粪便物质粘稠度(作为腹泻的指标)和充血的存在。
所得结果示于图4中。
C.髓过氧化物酶(MPO)活性
髓过氧化物酶(MPO)活性被用作中性粒细胞浸润标记物,使用Bradley等人(J.Invest.Dermatol.1982,78(3):206-209)描述的方法的改良版本对其进行测定。
回收1厘米长的远端结肠,并在含有5%十六烷基三甲基溴化铵(Sigma-Aldrich)和过氧化氢(H2O2)的冰冷的50mM磷酸钾缓冲液(pH 6)中均质化(50mg/ml)。
通过用分光光度计测量吸光度来监测比色反应。
所得结果示于图5中。
D.细胞因子测定
回收1厘米长的远端结肠,并在组织裂解器中在含有蛋白酶抑制剂(Sigma-Aldrich)的400μl Tris-HCl缓冲液中均质化。
将样品离心20分钟,将上清液冷冻在-80℃直到后续分析。
在处死前,从眶后静脉丛获取血液样品并离心,然后将血清储存在-80℃直至分析。
至少由流式细胞术微球阵列系统(BD,NJ,United States)测定促炎细胞因子(IL-6、IL-4、IFN-γ和IL-2)。
所得结果示于图6a(IL-2)、6b(IL-4)、6c(IFN-γ)和6d(IL-6)中。
E.统计分析
使用GraphPad软件(GraphPad Software,La Jolla,CA,United States)进行统计学分析。
所有数据均表示为条状图+/-SEM的形式。
比较采用非参数Kruskal-Wallis检验进行,然后进行Dunn多重比较检验。相关检验通过Spearman检验进行。
值p小于0.05被认为是显著的。
F.结果
1.图4的宏观评分表明,在用I-4573菌株处理的DNBS小鼠中获得了非常好的评分,相当于在没有结肠炎的对照小鼠中获得的评分。
相反,使用A2-165菌株或I-4575菌株处理的DNBS小鼠获得的评分在宏观标准的级别上高于没有结肠炎的对照小鼠和用I-4573菌株处理的DNBS小鼠所获得的评分。
2.关于测量的髓过氧化物酶活性,用I-4573菌株或用A2-165菌株处理的DNBS小鼠获得的活性实际上与没有结肠炎的对照小鼠获得的活性相似。
相反,用I-4575菌株处理的DNBS小鼠获得的活性与未处理的对照DBNS小鼠获得的活性相似。
3.最后,用I-4573菌株处理的DNBS小鼠和用A2-165菌株处理的DNBS小鼠获得的促炎细胞因子谱清楚地证明了这两种菌株的抗炎作用。
事实上,特别是对于用I-4573菌株处理的DNBS小鼠,IL-2和IL-4表达水平与没有结肠炎的对照小鼠获得的表达水平相似。IFN-γ和IL-6表达水平与未处理的对照DNBS小鼠获得的相比,更加降低。
相反,I-4575菌株没有显示出抗炎特性。其IL-2、IL-4、IL-6和IFN-γ表达水平与未处理的对照DNBS小鼠观察到的表达水平相似,或甚至更大。
因此,本实施例证明普氏粪杆菌菌株I-7573有利地具有抗炎特性,并且并非所有普氏粪杆菌菌株都具有这样的特性,如用I-4575菌株所证明的。
仅供受理局使用
仅供国际局使用
Claims (13)
1.一种由CNCM保藏的保藏号为CNCM I-4573的物种普氏粪杆菌的细菌菌株,其用于治疗和/或预防个体的炎性胃肠疾病。
2.如权利要求1所述的用于其用途的细菌菌株,其特征在于所述个体是哺乳动物。
3.如权利要求1或2所述的用于其用途的细菌菌株,其特征在于所述个体是人类。
4.如权利要求1至3中任一项所述的用于其用途的细菌菌株,其特征在于所述炎性胃肠疾病是炎性肠病。
5.如前述权利要求中任一项所述的用于其用途的细菌菌株,其特征在于,所述炎性胃肠疾病是结肠炎性肠病。
6.如权利要求5所述的用于其用途的细菌菌株,其特征在于所述结肠炎性肠病选自由克罗恩病、溃疡性结肠炎和结肠袋炎组成的组。
7.如权利要求5或6所述的用于其用途的细菌菌株,其特征在于所述结肠炎性肠病选自由克罗恩病和溃疡性结肠炎组成的组。
8.如前述权利要求中任一项所述的用于其用途的细菌菌株,其特征在于所述细菌菌株被包含在含有生理学上可接受的介质的组合物中。
9.如前述权利要求中任一项所述的用于其用途的细菌菌株,其特征在于所述细菌菌株被包含在口服组合物中。
10.如前述权利要求中任一项所述的用于其用途的细菌菌株,其特征在于所述细菌菌株被包含在食品补充剂中。
11.如权利要求8-10中任一项所述的用于其用途的细菌菌株,其特征在于所述组合物适于施用代表107至1011个菌落形成单位(cfu)的日剂量作为药物,优选以相当于109cfu的日剂量的形式。
12.如权利要求8-11中任一项所述的用于其用途的细菌菌株,其特征在于所述组合物用于口服施用,并且选自由食品、饮料、药品、营养品、食品添加剂、食品补充剂和乳制品组成的组。
13.如权利要求12所述的用于其用途的细菌菌株,其特征在于所述组合物用于口服施用并且是食品补充剂。
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Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
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Non-Patent Citations (1)
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HARRY SOKOL ET AL.: "Faecalibacterium prausnitzii is an anti-inflammatory commensal bacterium identified by gut microbiota analysis of Crohn disease patients", 《PNAS》 * |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
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SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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CB02 | Change of applicant information |
Address after: Fa Guobali Applicant after: National Academy of agrifood and environment Applicant after: SORBONNE UNIVERSITE Applicant after: ASSISTANCE PUBLIQUE - HOPITAUX DE PARIS Address before: Fa Guobali Applicant before: INSTITUT NATIONAL DE LA RECHERCHE AGRONOMIQUE Applicant before: SORBONNE UNIVERSITE Applicant before: ASSISTANCE PUBLIQUE - HOPITAUX DE PARIS |
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CB02 | Change of applicant information |