CN109258467B - 一种预防叶子花组培苗黄化的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种预防叶子花组培苗黄化的方法。包括以下步骤：(1)外植体选择；(2)消毒处理；(3)接种；(4)初代培养；(5)增殖培养。本发明诱导率达95％以上，增值系数为3‑5，最重要是能够预防叶子花组培苗黄化，使组培苗正常分化和生长，从而确保叶子花的规模化生产顺利开展。

Description

一种预防叶子花组培苗黄化的方法
技术领域
本发明涉及植物组培技术领域，具体是一种预防叶子花组培苗黄化的方法。
背景技术
叶子花(Bougainvillea spectabilia Willa)系紫茉莉科叶子花属常绿攀援或披散灌木，原产巴西，又名三角梅、勒杜鹃、宝巾花等，叶子花品种丰富，全世界叶子花的原种、栽培种、变种、杂交种数量有300种之多。叶子花适应性强，且花色多、花期长，是热带与南亚热带重要的园林绿化树种。叶子花繁殖方式主要为无性繁殖，其中扦插和嫁接是最常用的方法，但有些市场前景广阔、观赏价值很高的品种长势弱、抽枝萌芽力不强，扦插和嫁接成活率均不高，其繁殖速度远远跟不上市场需求。
植物组织培养繁殖速度快、周期短，可人为控制环境因素，不受外界气候和基质等因子变化的影响，通过组培方式可以解决因扦插、嫁接等其他繁殖困难的问题，为规模化生产提供技术支撑。目前，已有关于叶子花组织培养的报道，但针对叶子花组培苗黄化这一问题还未见报道。本发明对外植体选择、消毒处理、初代培养和继代培养共4个环节进行反复摸索和筛选，获得阻止叶子花组培苗黄化的方法，该方法可确保组培苗正常生长，加快组培苗的分化速度，从而推进叶子花的规模化生产。
发明内容
本发明的目的是提供一种预防叶子花组培苗黄化的方法，对各个组培环节进行严格把关，尤其是通过对大量元素进行调整，获得了理想的配方，与其他叶子花组培方法相比，此种方法的分化系数更高、长势更好。
本发明通过以下技术方案达到上述目的，一种预防叶子花组培苗黄化的方法，包括如下步骤：
(1)外植体选择：于晴朗的天气上午9:30～10:00，在健壮、无病虫害的母株上采集当年生嫩梢；
(2)消毒处理：将采集的嫩梢剪成6-7cm长的段，高锰酸钾浸泡5min，多菌灵浸泡8min后放在烧杯里，用干净纱布盖住烧杯口，放在自来水下冲洗2-3h，然后将浸泡冲洗过的嫩梢带入超净工作台，首先用75％酒精消毒30s后，用无菌水冲洗4-5次；再用0.1％升汞+0.05％吐温消毒8min，最后用无菌水冲洗5-6次；
(3)接种：将消毒好的外植体放在铺有无菌滤纸的培养皿上，用解剖刀将每段外植体切成2-3cm长的小段，每段带一个芽眼，然后将带芽眼的外植体接入初代培养基，每瓶接一个外植体；
(4)初代培养：初代培养培养温度为25±1℃，光照强度为1500-3000Lx，光照波长为350～750nm，光照时数为16～18h/d；
(5)增殖培养：将茎段初代培养得到的芽接种于增殖培养培养基，置于温度温度25±1℃，光照强度1500-3000LX，光照10～14h/d的环境中进行增殖培养。
优选的，步骤(2)中，还包括预处理：用抹布轻轻擦掉嫩梢的表皮茸毛，然后用自来水冲洗干净。
优选的，步骤(2)中，酒精及升汞+吐温消毒过程中，需不停摇晃瓶子，使每段外植体都能与液体充分接触。
优选的，步骤(3)中，培养皿需经高温灭菌，解剖刀需经干热灭菌器和酒精灯消毒。
优选的，步骤(4)中，初代培养基各组分与含量分别为：改良MS+BA2.0mg/L+蔗糖30g/L。
优选的，所述改良MS培养基包含NH4NO3 1.65g/L、KH2PO4 0.17g/L、KNO3 1.9g/L、CaCl2·2H2O 0.088g/L、FeSO4·7H2O 0.0417g/L、Na2EDTA 0.0373g/L和其余成分。
优选的，步骤(5)中，增殖培养基为MS+BA2.0mg/L+NAA0.1mg/L+蔗糖30g/L。
本发明与现有技术相比，具有以下突出的实质性特点和显著进步：
用该方法能更快更多的诱导出组培苗，并且能阻止组培苗的黄化现象发生；同时发现，在进行外植体消毒时，多种消毒剂合理配合使用灭菌效果更好。本发明诱导率达95％以上，增值系数为3-5，最重要是能够预防叶子花组培苗黄化，使组培苗正常分化和生长，从而确保叶子花的规模化生产顺利开展。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明进一步说明。
实施例1
本发明所述的叶子花花粉活力测定方法，包括如下步骤：
1、外植体选择：于晴朗的天气上午10a.m.，在健壮、无病虫害的母株上采集当年生嫩梢。
2、消毒处理：①将采集的嫩梢带回实验室，用抹布轻轻擦掉表皮茸毛，自来水冲洗干净；②剪成6-7cm长的段，放在烧杯里，用干净纱布盖住烧杯口，放在自来水下冲洗2-3h；③将浸泡冲洗过的嫩梢带入超净工作台，首先用75％酒精消毒30s，不停摇晃瓶子，使外植体与酒精充分接触，无菌水冲洗4-5次；④然后用0.1％升汞消毒8min，期间不停摇晃瓶子，保证每段外植体都能被充分消毒，无菌水冲洗5-6次。
3、接种：①将消毒好的外植体放在经过高温灭菌过的铺有无菌滤纸的培养皿上；②用经干热灭菌器和酒精灯消毒好的解剖刀将每段外植体切成2-3cm长的小段，每段带一个芽眼；③将每段带芽眼的外植体接入初代培养基，每瓶接一个外植体。
4、初代培养：初代培养基各组分与含量分别为：MS、BA2.0mg/L、蔗糖30g/L。初代培养培养温度为25±1℃，光照强度为1500-3000Lx，光照波长为350～750nm，光照时数为16～18h/d。
5、增殖培养：MS、BA2.0mg/L、NAA0.05mg/L、蔗糖30g/L。培养温度为25±1℃，光照强度为1500-3000LX，光照10～14h/d。
实施例2
1、外植体选择：于晴朗的天气上午10a.m.，在健壮、无病虫害的母株上采集当年生嫩梢。
2、消毒处理：①将采集的嫩梢带回实验室，用抹布轻轻擦掉表皮茸毛，自来水冲洗干净；②剪成6-7cm长的段，高锰酸钾浸泡5min，多菌灵浸泡8min，然后放在烧杯里，用干净纱布盖住烧杯口，放在自来水下冲洗2-3h；③将浸泡冲洗过的嫩梢带入超净工作台，首先用75％酒精消毒30s，不停摇晃瓶子，使外植体与酒精充分接触，无菌水冲洗4-5次；④然后用0.1％升汞+0.05％吐温80消毒8min，期间不停摇晃瓶子，保证每段外植体都能被充分消毒，无菌水冲洗5-6次。
3、接种：①将消毒好的外植体放在经过高温灭菌过的铺有无菌滤纸的培养皿上；②用经干热灭菌器和酒精灯消毒好的解剖刀将每段外植体切成2-3cm长的小段，每段带一个芽眼；③将每段带芽眼的外植体接入初代培养基，每瓶接一个外植体。
4、初代培养：初代培养基各组分与含量分别为：MS(NH4NO3、KH2PO4、KNO3、CaCl2·2H2O、FeSO4·7H2O和Na2EDTA的量分别为1.65g/L、0.17g/L、1.9g/L、0.088g/L、0.0417g/L和0.0373g/L，MnSO4·2H2O 0.0223g/L、KI 0.00083g/L、CoCl2·6H2O 0.000025g/L、ZnSO4·7H2O 0.0086g/L、CuSO4·5H2O 000025g/L、H3BO3 0.0062g/L、Na2MoO4·2H2O 0.0025g/L、肌醇0.1g/L、烟酸0.0005g/L、VB10.0001g/L、VB60.0005g/L、甘氨酸0.002g/L、BA2.0mg/L、蔗糖30g/L。
5、增殖培养：MS、BA2.0mg/L、NAA0.1mg/L、蔗糖30g/L。
实施例3
1、外植体选择：于阴雨天气，在健壮、无病虫害的母株上采集当年生嫩梢。
2、消毒处理：①将采集的嫩梢带回实验室，用抹布轻轻擦掉表皮茸毛，自来水冲洗干净；②剪成6-7cm长的段，然后放在烧杯里，用干净纱布盖住烧杯口，放在自来水下冲洗2-3h；③将浸泡冲洗过的嫩梢带入超净工作台，首先用75％酒精消毒30s，不停摇晃瓶子，使外植体与酒精充分接触，无菌水冲洗4-5次；④然后用0.1％升汞+吐温消毒8min，期间不停摇晃瓶子，保证每段外植体都能被充分消毒，无菌水冲洗5-6次。
3、接种：①将消毒好的外植体放在经过高温灭菌过的铺有无菌滤纸的培养皿上；②用经干热灭菌器和酒精灯消毒好的解剖刀将每段外植体切成2-3cm长的小段，每段带一个芽眼；③将每段带芽眼的外植体接入初代培养基，每瓶接一个外植体。
4、初代培养：初代培养基各组分与含量分别为：MS、BA2.0mg/L、蔗糖30g/L。
5、增殖培养：MS、BA2.0mg/L、NAA0.1mg/L、蔗糖30g/L。
各实施例培养结果对照如下：
表1组培苗生长情况
Figure BDA0001830330540000051
由上表可见，采用本方法能更快更多的诱导出组培苗，并且能阻止组培苗的黄化现象发生，使诱导率达95％以上，使组培苗正常分化和生长，从而确保叶子花的规模化生产顺利开展。
以上内容是结合具体的优选实施方式对本发明所作的进一步详细说明，不能认定本发明的具体实施只局限于这些说明。对于本发明所属技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干简单推演或替换，都应当视为属于本发明的保护范围。

Claims (4)

1.一种预防叶子花组培苗黄化的方法，其特征在于，包括如下步骤：
（1）外植体选择：于晴朗的天气上午9:30~10:00，在健壮、无病虫害的母株上采集当年生嫩梢；
（2）消毒处理：用抹布轻轻擦掉嫩梢的表皮茸毛，然后用自来水冲洗干净后，将采集的嫩梢剪成6-7cm长的段，高锰酸钾浸泡5min，多菌灵浸泡8min后放在烧杯里，用干净纱布盖住烧杯口，放在自来水下冲洗2-3h，然后将浸泡冲洗过的嫩梢带入超净工作台，首先用75%酒精消毒30s后，用无菌水冲洗4-5次；再用0.1%升汞+0.05%吐温消毒8min，最后用无菌水冲洗5-6次；
（3）接种：将消毒好的外植体放在铺有无菌滤纸的培养皿上，用解剖刀将每段外植体切成2-3cm长的小段，每段带一个芽眼，然后将带芽眼的外植体接入初代培养基，每瓶接一个外植体；
（4）初代培养：初代培养培养温度为25±1℃，光照强度为1500-3000Lx，光照波长为350～750nm，光照时数为16～18h/d；其中，所述初代培养基各组分与含量分别为：改良MS+BA2.0mg/L+蔗糖30g/L，所述改良MS培养基包含NH4NO31.65g/L、 KH2PO40.17g/L、KNO31.9g/L、CaCl2·2H2O0.088g/L、FeSO4·7H2O0.0417g/L、Na2EDTA0.0373g/L和MS其余成分；
（5）增殖培养：将茎段初代培养得到的芽接种于增殖培养基，置于温度25±1℃，光照强度1500-3000LX，光照10~14h/d的环境中进行增殖培养。
2.根据权利要求1所述的预防叶子花组培苗黄化的方法，其特征在于，步骤（2）中，酒精及升汞+吐温消毒过程中，需不停摇晃瓶子，使每段外植体都能与液体充分接触。
3.根据权利要求1所述的预防叶子花组培苗黄化的方法，其特征在于，步骤（3）中，培养皿需经高温灭菌，解剖刀需经干热灭菌器和酒精灯消毒。
4.根据权利要求1所述的预防叶子花组培苗黄化的方法，其特征在于，步骤（5）中，增殖培养基为MS+BA2.0mg/L+NAA0.1mg/L+蔗糖30g/L。
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Denomination of invention: A Method to Prevent Yellowing of Tissue Cultured Seedlings of Leaf Flowers

Granted publication date: 20220712

License type: Common License

Record date: 20221226

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