CN109197591A - 一种优良白芨组培方法 - Google Patents

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黄春晓
赵莉
王伟
李战旗
李好胜
阙莎莎
周毅
冯慧娜
杨丙亮
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    • A01H4/001—Culture apparatus for tissue culture

Abstract

本发明涉及一种优良白芨组培方法，具体包括以下步骤：(1)优良白芨选种、(2)消毒处理、(3)芽生芽繁殖、4)壮苗培养、(5)生根培养、(6)驯化炼苗、(7)移栽。本发明优点在于：提供了一种优良白芨组培方法，保证后代整齐统一变异率小，能保持优良植株的优良特性，性状一致，能有效提高白芨的产量，有较好的经济价值和推广意义。

Description

一种优良白芨组培方法
技术领域
本发明涉及白芨种植技术领域，具体是指一种优良白芨组培方法。
背景技术
白芨是兰科白芨属植物，又称小白芨、莲及草、雪如末等，为国家二级濒危植物，白芨原产我国，广布于长江流域各省。朝鲜、日本也有分布，野生山谷林下阴湿处。千百年来一直作为传统中药使用，其主要功能是敛疮止血、补肺、消肿生肌等。白芨为兰科多年生植物，以根入药，有止血，消肿，生肌等功效。主治:肺结核，支气管扩张，胃出血，胃溃疡；具有快速凝血作用，可代血浆多用于外科手术。多年来靠野生资源治病和保健，资源枯竭，急需人工发展此品种。白芨繁殖目前采用主要方法是组培室白芨种子无菌播种法与白芨种子温室直播方法，这都是采用种子繁殖，不能取得与亲本一致的植株，变异率高，后代性状不一等，不能把白芨优良特性遗传下去。白芨分株法也可以保证白芨优良特性，但是繁殖速度慢，得到数量有限。
发明内容
本发明的目的在于提供一种优良白芨组培方法，以解决上述背景技术中提出的问题。
为解决上述技术问题，本发明提供的技术方案为：一种优良白芨组培方法，具体包括以下步骤：
(1)优良白芨选种：从种植的同龄优良白芨品种中选出一批植株健壮，紫花纯正，球茎大，长势快、叶片宽大，叶色浓绿无斑点，株型挺拔紧凑的白芨苗子；
(2)消毒处理：采用优良白芨带芽球茎在超净工作台上，切取带一点球茎的白芨幼芽，用75％的酒精消毒10秒钟，使用无菌水清洗，用0.1％氯化汞灭菌12-15分钟，无菌水冲洗4-5次，再用消毒后的滤纸吸干芽上的水分，将切取的白芨幼芽种植到MS、BA含量1mg/L、NAA含量0.1mg/L、香蕉泥含量50g/L的白芨芽培养基上，送入培养间，温度25-30℃，每天12h、2000～3000勒克斯的光照下培养，接种白芨芽培养基里没有污染，白芨芽长出苗子，建立无菌系统后，进入繁殖阶段；
(3)芽生芽繁殖：一个月后，白芨苗球茎周围长出3-5个白芨小芽，在超净工作台上把白芨小芽切下来，转接到MS、BA含量2mg/L、KT含量2mg/L、NAA含量0.2mg/L、香蕉泥含量50g/L的芽生芽培养基上，每瓶放10个芽，送入培养间，温度25-30℃，每天12h、2000～3000勒克斯的光照下培养，建立无菌系统后，进入繁殖阶段；
(4)壮苗培养：当白芨繁殖7-8代后，白芨瓶苗接入壮苗培养基，一个月左右茎尖长出芽丛，待白芨芽苗长至3厘米大小时将白芨芽逐个切下分成单株，切去上部叶片，接种到1/2MS、BA含量0.5mg/L、NAA含量0.05mg/L、香蕉泥含量50g/L的增殖培养基，每瓶放15个芽，小芽不用和大芽分开；
(5)生根培养：一个月后白芨芽长大，接到1/2MS、NAA含量0.5mg/L、活性炭含量0.5g/L、香蕉泥含量50g/L的生根培养基中，温度28-30度条件下进行光照4000勒克斯左右，培养30天，白芨球茎逐渐长大；
(6)驯化炼苗：20天时白芨瓶苗已全部生根，把生根后的白芨分生苗移放温室大棚里炼苗30-40天，温度20-30℃，光照不超过1万勒克斯，30天后开瓶后再炼苗3～4天，用镊子把组培苗从培养瓶中取出，用清水洗净苗子根系上的培养基，放在800倍稀释的百菌清消毒水中浸泡10秒钟捞出放框里；
(7)移栽：将药渣、珍珠岩、草炭、蛭石按照1:1:1:1比例混合均匀，直接栽在苗床上中，浇透水，再用杀菌剂消毒后，栽种白芨分生苗，养护温度21-30度，湿度60-90％，刚开始两周光照不高过6000勒克斯，两周后增加到9000-12000勒克斯。
作为一种优选方案，所述的白芨芽培养基、芽生芽培养基、增殖培养基和生根培养基均为固体培养基。
本发明优点在于：提供了一种优良白芨组培方法，保证后代整齐统一变异率小，能保持优良植株的优良特性，性状一致，能有效提高白芨的产量，有较好的经济价值和推广意义。
具体实施方式
下面用具体实施例说明本发明，并不是对本发明的限制。
实施例1
一种优良白芨组培方法，具体包括以下步骤：
(1)优良白芨选种：从种植的同龄优良白芨品种中选出一批植株健壮，紫花纯正，球茎大，长势快、叶片宽大，叶色浓绿无斑点，株型挺拔紧凑的白芨苗子；
(2)消毒处理：采用优良白芨带芽球茎在超净工作台上，切取带一点球茎的白芨幼芽，用75％的酒精消毒10秒钟，使用无菌水清洗，用0.1％氯化汞灭菌12分钟，无菌水冲洗4次，再用消毒后的滤纸吸干芽上的水分，将切取的白芨幼芽种植到MS、BA含量1mg/L、NAA含量0.1mg/L、香蕉泥含量50g/L的白芨芽培养基上，送入培养间，温度25℃，每天12h、2000勒克斯的光照下培养，接种白芨芽培养基里没有污染，白芨芽长出苗子，建立无菌系统后，进入繁殖阶段；
(3)芽生芽繁殖：一个月后，白芨苗球茎周围长出3-5个白芨小芽，在超净工作台上把白芨小芽切下来，转接到MS、BA含量2mg/L、KT含量2mg/L、NAA含量0.2mg/L、香蕉泥含量50g/L的芽生芽培养基上，每瓶放10个芽，送入培养间，温度25℃，每天12h、2000勒克斯的光照下培养，建立无菌系统后，进入繁殖阶段；
(4)壮苗培养：当白芨繁殖7代后，白芨瓶苗接入壮苗培养基，一个月左右茎尖长出芽丛，待白芨芽苗长至3厘米大小时将白芨芽逐个切下分成单株，切去上部叶片，接种到1/2MS、BA含量0.5mg/L、NAA含量0.05mg/L、香蕉泥含量50g/L的增殖培养基，每瓶放15个芽，小芽不用和大芽分开；
(5)生根培养：一个月后白芨芽长大，接到1/2MS、NAA含量0.5mg/L、活性炭含量0.5g/L、香蕉泥含量50g/L的生根培养基中，温度28度条件下进行光照4000勒克斯左右，培养30天，白芨球茎逐渐长大；
(6)驯化炼苗：20天时白芨瓶苗已全部生根，把生根后的白芨分生苗移放温室大棚里炼苗30天，温度20℃，光照不超过1万勒克斯，30天后开瓶后再炼苗3天，用镊子把组培苗从培养瓶中取出，用清水洗净苗子根系上的培养基，放在800倍稀释的百菌清消毒水中浸泡10秒钟捞出放框里；
(7)移栽：将药渣、珍珠岩、草炭、蛭石按照1:1:1:1比例混合均匀，直接栽在苗床上中，浇透水，再用杀菌剂消毒后，栽种白芨分生苗，养护温度21度，湿度60％，刚开始两周光照不高过6000勒克斯，两周后增加到9000勒克斯。
实施例2
一种优良白芨组培方法，具体包括以下步骤：
(1)优良白芨选种：从种植的同龄优良白芨品种中选出一批植株健壮，紫花纯正，球茎大，长势快、叶片宽大，叶色浓绿无斑点，株型挺拔紧凑的白芨苗子；
(2)消毒处理：采用优良白芨带芽球茎在超净工作台上，切取带一点球茎的白芨幼芽，用75％的酒精消毒10秒钟，使用无菌水清洗，用0.1％氯化汞灭菌15分钟，无菌水冲洗5次，再用消毒后的滤纸吸干芽上的水分，将切取的白芨幼芽种植到MS、BA含量1mg/L、NAA含量0.1mg/L、香蕉泥含量50g/L的白芨芽培养基上，送入培养间，温度25-30℃，每天12h、3000勒克斯的光照下培养，接种白芨芽培养基里没有污染，白芨芽长出苗子，建立无菌系统后，进入繁殖阶段；
(3)芽生芽繁殖：一个月后，白芨苗球茎周围长出3-5个白芨小芽，在超净工作台上把白芨小芽切下来，转接到MS、BA含量2mg/L、KT含量2mg/L、NAA含量0.2mg/L、香蕉泥含量50g/L的芽生芽培养基上，每瓶放10个芽，送入培养间，温度30℃，每天12h、3000勒克斯的光照下培养，建立无菌系统后，进入繁殖阶段；
(4)壮苗培养：当白芨繁殖7-8代后，白芨瓶苗接入壮苗培养基，一个月左右茎尖长出芽丛，待白芨芽苗长至3厘米大小时将白芨芽逐个切下分成单株，切去上部叶片，接种到1/2MS、BA含量0.5mg/L、NAA含量0.05mg/L、香蕉泥含量50g/L的增殖培养基，每瓶放15个芽，小芽不用和大芽分开；
(5)生根培养：一个月后白芨芽长大，接到1/2MS、NAA含量0.5mg/L、活性炭含量0.5g/L、香蕉泥含量50g/L的生根培养基中，温度30度条件下进行光照4000勒克斯左右，培养30天，白芨球茎逐渐长大；
(6)驯化炼苗：20天时白芨瓶苗已全部生根，把生根后的白芨分生苗移放温室大棚里炼苗40天，温度30℃，光照不超过1万勒克斯，30天后开瓶后再炼苗4天，用镊子把组培苗从培养瓶中取出，用清水洗净苗子根系上的培养基，放在800倍稀释的百菌清消毒水中浸泡10秒钟捞出放框里；
(7)移栽：将药渣、珍珠岩、草炭、蛭石按照1:1:1:1比例混合均匀，直接栽在苗床上中，浇透水，再用杀菌剂消毒后，栽种白芨分生苗，养护温度30度，湿度90％，刚开始两周光照不高过6000勒克斯，两周后增加到12000勒克斯。
实施例3
一种优良白芨组培方法，具体包括以下步骤：
(1)优良白芨选种：从种植的同龄优良白芨品种中选出一批植株健壮，紫花纯正，球茎大，长势快、叶片宽大，叶色浓绿无斑点，株型挺拔紧凑的白芨苗子；
(2)消毒处理：采用优良白芨带芽球茎在超净工作台上，切取带一点球茎的白芨幼芽，用75％的酒精消毒10秒钟，使用无菌水清洗，用0.1％氯化汞灭菌13分钟，无菌水冲洗4次，再用消毒后的滤纸吸干芽上的水分，将切取的白芨幼芽种植到MS、BA含量1mg/L、NAA含量0.1mg/L、香蕉泥含量50g/L的白芨芽培养基上，送入培养间，温度28℃，每天12h、2500勒克斯的光照下培养，接种白芨芽培养基里没有污染，白芨芽长出苗子，建立无菌系统后，进入繁殖阶段；
(3)芽生芽繁殖：一个月后，白芨苗球茎周围长出3-5个白芨小芽，在超净工作台上把白芨小芽切下来，转接到MS、BA含量2mg/L、KT含量2mg/L、NAA含量0.2mg/L、香蕉泥含量50g/L的芽生芽培养基上，每瓶放10个芽，送入培养间，温度28℃，每天12h、2500勒克斯的光照下培养，建立无菌系统后，进入繁殖阶段；
(4)壮苗培养：当白芨繁殖7-8代后，白芨瓶苗接入壮苗培养基，一个月左右茎尖长出芽丛，待白芨芽苗长至3厘米大小时将白芨芽逐个切下分成单株，切去上部叶片，接种到1/2MS、BA含量0.5mg/L、NAA含量0.05mg/L、香蕉泥含量50g/L的增殖培养基，每瓶放15个芽，小芽不用和大芽分开；
(5)生根培养：一个月后白芨芽长大，接到1/2MS、NAA含量0.5mg/L、活性炭含量0.5g/L、香蕉泥含量50g/L的生根培养基中，温度29度条件下进行光照4000勒克斯左右，培养30天，白芨球茎逐渐长大；
(6)驯化炼苗：20天时白芨瓶苗已全部生根，把生根后的白芨分生苗移放温室大棚里炼苗35天，温度25℃，光照不超过1万勒克斯，30天后开瓶后再炼苗3天，用镊子把组培苗从培养瓶中取出，用清水洗净苗子根系上的培养基，放在800倍稀释的百菌清消毒水中浸泡10秒钟捞出放框里；
(7)移栽：将药渣、珍珠岩、草炭、蛭石按照1:1:1:1比例混合均匀，直接栽在苗床上中，浇透水，再用杀菌剂消毒后，栽种白芨分生苗，养护温度26度，湿度70％，刚开始两周光照不高过6000勒克斯，两周后增加到10000勒克斯。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。

Claims (2)

1.一种优良白芨组培方法，其特征在于，具体包括以下步骤：
(1)优良白芨选种：从种植的同龄优良白芨品种中选出一批植株健壮，紫花纯正，球茎大，长势快、叶片宽大，叶色浓绿无斑点，株型挺拔紧凑的白芨苗子；
(2)消毒处理：采用优良白芨带芽球茎在超净工作台上，切取带一点球茎的白芨幼芽，用75％的酒精消毒10秒钟，使用无菌水清洗，用0.1％氯化汞灭菌12-15分钟，无菌水冲洗4-5次，再用消毒后的滤纸吸干芽上的水分，将切取的白芨幼芽种植到MS、BA含量1mg/L、NAA含量0.1mg/L、香蕉泥含量50g/L的白芨芽培养基上，送入培养间，温度25-30℃，每天12h、2000～3000勒克斯的光照下培养，接种白芨芽培养基里没有污染，白芨芽长出苗子，建立无菌系统后，进入繁殖阶段；
(3)芽生芽繁殖：一个月后，白芨苗球茎周围长出3-5个白芨小芽，在超净工作台上把白芨小芽切下来，转接到MS、BA含量2mg/L、KT含量2mg/L、NAA含量0.2mg/L、香蕉泥含量50g/L的芽生芽培养基上，每瓶放10个芽，送入培养间，温度25-30℃，每天12h、2000～3000勒克斯的光照下培养，建立无菌系统后，进入繁殖阶段；
(4)壮苗培养：当白芨繁殖7-8代后，白芨瓶苗接入壮苗培养基，一个月左右茎尖长出芽丛，待白芨芽苗长至3厘米大小时将白芨芽逐个切下分成单株，切去上部叶片，接种到1/2MS、BA含量0.5mg/L、NAA含量0.05mg/L、香蕉泥含量50g/L的增殖培养基，每瓶放15个芽，小芽不用和大芽分开；
(5)生根培养：一个月后白芨芽长大，接到1/2MS、NAA含量0.5mg/L、活性炭含量0.5g/L、香蕉泥含量50g/L的生根培养基中，温度28-30度条件下进行光照4000勒克斯左右，培养30天，白芨球茎逐渐长大；
(6)驯化炼苗：20天时白芨瓶苗已全部生根，把生根后的白芨分生苗移放温室大棚里炼苗30-40天，温度20-30℃，光照不超过1万勒克斯，30天后开瓶后再炼苗3～4天，用镊子把组培苗从培养瓶中取出，用清水洗净苗子根系上的培养基，放在800倍稀释的百菌清消毒水中浸泡10秒钟捞出放框里；
(7)移栽：将药渣、珍珠岩、草炭、蛭石按照1:1:1:1比例混合均匀，直接栽在苗床上中，浇透水，再用杀菌剂消毒后，栽种白芨分生苗，养护温度21-30度，湿度60-90％，刚开始两周光照不高过6000勒克斯，两周后增加到9000-12000勒克斯。
2.根据权利要求1所述的一种优良白芨组培方法，其特征在于：所述的白芨芽培养基、芽生芽培养基、增殖培养基和生根培养基均为固体培养基。
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