CN109180801A - 一种合成索玛鲁肽的方法 - Google Patents

一种合成索玛鲁肽的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN109180801A
CN109180801A CN201811292613.1A CN201811292613A CN109180801A CN 109180801 A CN109180801 A CN 109180801A CN 201811292613 A CN201811292613 A CN 201811292613A CN 109180801 A CN109180801 A CN 109180801A
Authority
CN
China
Prior art keywords
fmoc
gly
otbu
glu
tbu
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201811292613.1A
Other languages
English (en)
Other versions
CN109180801B (zh
Inventor
李同金
赵传海
孟岩
周勇
翟涛
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Sinopeptide biomedical Group Co.,Ltd.
Original Assignee
Shandong Hantai Biotechnology Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Shandong Hantai Biotechnology Co Ltd filed Critical Shandong Hantai Biotechnology Co Ltd
Priority to CN201811292613.1A priority Critical patent/CN109180801B/zh
Publication of CN109180801A publication Critical patent/CN109180801A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN109180801B publication Critical patent/CN109180801B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/575—Hormones
    • C07K14/605—Glucagons
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
    • Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
    • Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
    • Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

本发明采用固相化学的方法制备索玛鲁肽，能够很好的避免杂质肽的产生，提高粗肽纯度，降低生产成本。该方法首次采用Fmoc‑Lys(N‑ε‑ADO‑ADO‑(γ‑Glu(N‑α‑X)‑OtBu)‑OH参与固相合成索玛鲁肽(其中谷氨酸α氨基保护基X为Alloc、Mmt、Mtt、Dde或ivDde),然后脱掉保护基，在固相上脂肪酸化；同时针对索玛鲁肽工艺产生的缺1个Ala杂质肽；接18位和19位时采用Fmoc‑Ala‑Ala‑OH,避免这一纯化过程中难以除去杂质的生成；为避免产生±Gly的工艺杂质，引入Fmoc‑Glu(OtBu)‑Gly‑OH和Fmoc‑Arg(Pbf)‑Gly–OH两个二肽作为单体参与合成；通过引入这四个个片段肽参与索玛鲁肽的固相合成，提高了粗肽纯度，降低了纯化难度，降低了生产成本。

Description

一种合成索玛鲁肽的方法
技术领域
本发明属多肽合成领域，特别涉及一种固相制备索玛鲁肽的方法。
技术背景
索玛鲁肽(Semeglutide)，商品名Ozempic，由丹麦诺和诺德公司研发，于2017年12月05日在美国上市，现正在中国进行临床试验，很快将进入中国市场。Ozempic被指定为饮食和运动的辅助手段，以改善2型糖尿病患者的血糖控制。
索玛鲁肽也是一种GLP-1类似物，与人GLP-1具有94％的序列同源性，是诺和诺德开发的第二代脂肪链修饰GLP-1类似物，与第一代脂肪链修饰GLP-1类似物利拉鲁肽相比，其半衰期更长，剂量更低。索玛鲁肽保持了利拉鲁肽良好的安全性和降糖有效性，且减轻体重效果优于前两者。
利拉鲁肽为脂肪酸链修饰技术的第一代GLP-1类似物，修饰位点为26位赖氨酸：采用了γ谷氨酸连接子，16碳脂肪酸链，序列34位突变为精氨酸(同源性97％)。索玛鲁肽在此基础上进行了系统优化，修饰位点仍为26位赖氨酸：采用谷氨酸-2PEG为连接子，18碳二羧酸脂肪酸链，序列上34位突变为赖氨酸，8位丙氨酸突变为非天然氨基酸Aib，避免被DPP-IV酶切失活。
索玛鲁肽化学表述为Aib8,Arg34Lys26-[N-ε-ODA-ODA-(γ-Glu(N-α-18-十八烷酸-1-酰基))]-GLP-1(7-37)分子式为C187H291N45O59，相对分子质量为4113.58，CAS号为910463-68-2，序列信息如下：
目前，诺和诺德公司主要通过基因重组技术，利用酵母生产索玛鲁肽主链Arg34-GLP-19-37，然后连接上His-Aib；但由于采用基因重组技术只能生产主链Arg34-GLP-19-37，还需要利用化学手段和His-Aib反应，生成索玛鲁肽主链Aib8,Arg34-GLP-17-37；然后在Lys26的侧链氨基上接上长效修饰基团。由于Aib8,Arg34-GLP-17-37的侧链及N端氨基均未保护，存在多个活性位点，所以此过程会产生较多杂质，损失较大。
现有技术中，提供了合成索玛鲁肽(Semeglutide)的Fmoc化学固相合成方法。US8129343和US8536122中采用Mmt、Mtt、ivDde和Dde保护Lys26的侧链氨基，在主链完成偶联后，再脱掉侧链保护基，顺序偶联侧链长效修饰基团；CN106928344采用Alloc保护Lys26的侧链氨基，在主链完成偶联后，再利用Pd(PPh3)4脱掉保护基，顺序偶联侧链长效修饰基团；而CN106478806则采用Dde-Lys(Fmoc)-OH为合成单体，先顺序偶联完成Lys26的侧链长效修饰基团，然后再脱掉Lys26的α氨基保护基Dde，完成主链的偶联；在上述合成方法中均存在侧链修饰步骤繁多，工艺复杂，粗品的纯化难度较大等困难。
专利CN108059666则采用Alloc-Lys(Fmoc)-OH为合成单体，以CTC树脂为固相载体，用固相法合成得到单体Alloc-Lys(PEG-PEG-γ-Glu(OtBu)-Monobutyloctadecanate)-OH,然后再作为单体固相合成得到索玛鲁肽，此办法单体的合成费用较高，导致总体合成难度增加，生产成本高。
本发明人用现有的合成方法，制备索玛鲁肽，发现纯度和收率均不高，不适于工业规模生产。为此，本发明人对索玛鲁肽的合成方法进行了研究，从而得到本发明的技术方案。
发明内容
本发明的目的是提供一种索玛鲁肽的固相合成方法。本发明降低了合成难度，提高了粗肽纯度，从而降低了纯化难度，提高了收率，降低了生产成本，有利于规模化工业生产。
为实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
一种固相制备索玛鲁肽的方法，其特征在于，包括如下步骤：
(a)采用Wang树脂或CTC树脂为固相载体，用Fmoc-Arg(Pbf)-Gly-OH与之偶联反应制备Fmoc-Arg(Pbf)-Gly-Wang树脂或Fmoc-Arg(Pbf)-Gly-CTC树脂，再按序列依次偶联连接保护氨基酸，得到侧链全保护的索玛鲁肽(未脂肪酸化)肽树脂：
Boc-His(Trt)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Val-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-Leu-Glu(OtBu)-Gly-Gln(Trt)-Ala-Ala-Lys(N-ε-ADO-ADO-(γ-Glu(N-α-X)-OtBu)-Glu(OtBu)-Phe-Ile-Ala-Trp(Boc)-Leu-Val-Arg(Pbf)-Gly-Arg(Pbf)-Gly-树脂；
(b)采用脱保护试剂脱掉20位Lys(N-ε-ADO-ADO-(γ-Glu(N-α-X)-OtBu侧链谷氨酸α氨基保护基X；
(c)通过固相合成法，在谷氨酸α氨基偶联十八烷二酸(Octadecanedioic Acid),得到侧链保护的索玛鲁肽肽树脂：
Boc-His(Boc)-Ala-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Val-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-Leu-Glu(OtBu)-Gly-Gln(Trt)-Ala-Ala-Lys(N-ε-ADO-ADO-(γ-Glu(N-α-OctadecanedioicAcid)-OtBu)-Glu(OtBu)-Phe-Ile-Ala-Trp(Boc)-Leu-Val-Arg(Pbf)-Gly-Arg(Pbf)-Gly-树脂；
(d)索玛鲁肽肽树脂经裂解、纯化、冻干得索玛鲁肽精肽。
优选的，步骤(a)的具体操作步骤为：所述固相载体为替代度为0.1-0.6mmol/g的Wang树脂或CTC树脂；所述Fmoc-Arg(Pbf)-Gly-Wang树脂或Fmoc-Arg(Pbf)-Gly-CTC树脂脱除Fmoc保护后，以2-5倍的投料比加入相应的Fmoc保护氨基酸进行偶联反应，每一个偶联反应均是在缩合剂的存在下进行的固相接肽反应，每一步偶联反应均以Kaiser试剂检测反应终点，反应完毕后用脱保护试剂脱除Fmoc，再与下一个Fmoc保护氨基酸进行偶联反应；重复操作直至合成得到侧链全保护的利拉鲁肽(未脂肪酸化)肽树脂：Boc-His(Boc)-Ala-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Val-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-Leu-Glu(OtBu)-Gly-Gln(Trt)-Ala-Ala-Lys(N-ε-ADO-ADO-(γ-Glu(N-α-X)-OtBu)-Glu(OtBu)-Phe-Ile-Ala-Trp(Boc)-Leu-Val-Arg(Pbf)-Gly-Arg(Pbf)-Gly-树脂。更进一步优选的，步骤(a)中，所述制备的Fmoc-Arg(Pbf)-Gly-Wang树脂或Fmoc-Arg(Pbf)-Gly-CTC树脂替代度为0.1-0.6mmol/g，优选0.1-0.3mmol/g；所述脱保护试剂优选为20％哌啶的DMF溶液(体积比)；偶联反应中所用的缩合剂为以下组合DIC/HOBT、DIC/HOAT、TBTU/HOBT/DIPEA、HBTU/HOBT/DIPEA、HATU/HOAT/DIPEA的一种。
优选的，所述步骤(a)中，偶联Lys(N-ε-ODA-ODA-(γ-Glu(N-α-X)-OtBu)所采用的单体为Fmoc-Lys(N-ε-ADO-ADO-(γ-Glu(N-α-X)-OtBu)-OH；其中谷氨酸α氨基保护基X为Alloc、Mmt、Mtt、Dde或ivDde中的一种；步骤(a)中所述接7位His和8位Aib，采用保护氨基酸单体是Boc-His(Trt)-Aib-OH；步骤(a)中所述接9位Glu和10位Gly，采用保护氨基酸单体是Fmoc-Glu(OtBu)-Gly-OH，同法接21位Glu和22位Gly；步骤(a)中所述接24位Ala和25位Ala所采用保护氨基酸是Fmoc-Ala-Ala-OH；步骤(a)中所述接34位Arg和35位Gly,采用保护氨基酸单体是Fmoc-Arg(Pbf)-Gly-OH。
优选的，所述步骤(b)中，若谷氨酸α氨基保护基X为Alloc，则脱除保护基Alloc的试剂采用0.1-0.4倍合成规模用量的Pd(PPh3)4和10-30倍合成规模用量的苯基硅烷(或吗啡啉),在固相条件下脱除10-90分钟；若谷氨酸α氨基保护基X为Mmt或Mtt，则脱除保护基Mmt或Mtt的试剂为1％TFA/5％TIS/DCM；若谷氨酸α氨基保护基X为ivDde或Dde，则脱除保护基ivDde或Dde的试剂为水合肼的DMF溶液，水合肼溶液用量为3-4倍树脂体积，水合肼溶液体积配比为水合肼/DMF＝1/15-20。
优选的，所述步骤(c)中,所用的缩合剂为以下组合DIC/HOBT、DIC/HOAT、TBTU/HOBT/DIPEA、HBTU/HOBT/DIPEA、HATU/HOAT/DIPEA的一种。
优选的，所述步骤(d)中,裂解试剂为加入体积比1-5％清除剂的TFA溶液，所述清除剂为苯甲醚、苯甲硫醚、乙二硫醇、巯基乙醇、苯酚、水和TIS中的一种或几种；更为优选的裂解试剂配比为：TFA/苯甲硫醚/水/TIS＝90/2.5/5.0/2.5。
相对于现有技术，本发明的有益效果是：
本发明首次采用单体Fmoc-Lys(N-ε-ADO-ADO-(γ-Glu(N-α-X)-OtBu)-OH(其中谷氨酸α氨基保护基X为Alloc、Mmt、Mtt、Dde或ivDde中的一种)、Boc-His(Trt)-Aib-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-Gly-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-Gly-OH、Fmoc-Ala-Ala-OH参与固相合成利拉鲁肽，简化了固相合成索玛鲁肽的步骤，提高了粗肽纯度和收率，简化了纯化过程，降低了生产成本。
具体实施方式
下面用具体实施例对本发明进行详细说明，但不限定本专利；根据本发明改变原料的投料比、或是反应溶剂或及缩合剂等，均在本发明的保护范围内。
说明书和权利要求书中所使用的缩写含义如下：
Fmoc 9-芴甲氧羰基
CTC树脂 2-氯三苯甲基氯树脂
Wang Resins 王树脂
tBu 叔丁基
Pbf 2,2,4,6,7-五甲基苯并呋喃-5-磺酰基
Trt 三苯甲基
Mmt 4-甲氧基三苯基
Mtt 甲基三苯甲基
Alloc (2-丙烯氧基)羰基
ivDde (4,4-二甲基-2,6-二氧代环己基亚甲基)-3-甲基丁基
Dde 1-(4,4-二甲基-2,6-二氧化环已亚基)乙基
ADO 8-氨基-3,6-二氧杂辛酸
DCM 二氯甲烷
DMF N,N-二甲基甲酰胺
DMAP 4-二甲氨基吡啶
DIPEA N,N-二异丙基乙胺
DIC N,N-二异丙基碳二亚胺
HBTU 苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐
HATU 2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯
TBTU O-苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲四氟硼酸
HOBT 1-羟基苯并三唑
HOAT 1-羟基-7-偶氮苯并三氮唑
TFA 三氟乙酸
TIS 三异丙基硅烷
实施例1：Fmoc-Arg(Pbf)-Gly-Wang Resins的合成
将载体Wang树脂500.0g(sub＝0.42mmol/g)置于合成柱中，用2400mL DMF洗涤两次，加入2400mL DCM溶胀30min；抽滤掉DCM后，加入Fmoc-Arg(Pbf)-Gly-OH/DIC/HOBT的混合DCM溶液[称取282.4g(400mmol)Fmoc-Arg(Pbf)-Gly-OH和64.8g(480mmol)HOBT置于氨基酸活化瓶，加入2000mL体积比例为1∶1的DMF和DCM混合溶液搅拌溶解，低温(0℃)下加入76.4ml(480mmol)DIC,活化5分钟，反应10min后加入4.8g(4mmol)DMAP；反应2h，抽掉反应液，用2400mL DMF洗涤两次，加入封端试剂2400mL(480ml乙酸酐和408ml吡啶溶解于1512mLDMF中)反应2h，抽滤掉反应液，分别用DMF、DCM、甲醇洗涤2次，真空干燥后得Fmoc-Arg(Pbf)-Gly-Wang Resins 609.9g；取样测替代度为0.26mmol/g。
实施例2：Fmoc-Arg(Pbf)-Gly-CTC Resins的合成
称取CTC树脂50.0g(sub＝0.40mmol/g)置于合成柱中，用240mL DMF洗涤两次,加入240mL DCM溶胀30min；抽滤掉DCM后，加入溶有14.10g(20mmol)Fmoc-Arg(Pbf)-Gly-OH的DCM/DMF(3/1,体积比)溶液150ml，搅拌后加入DIPEA 6.6ml(40mmol)，鼓N2反应60min，抽掉反应液，加入DCM/CH3OH/DIPEA(体积比17：2：1)混合溶液300ml封端3次，每次10min；然后用DMF、DCM、甲醇分别洗涤2次，真空干燥得Fmoc-Gly-CTC Resins 62.06g。测替代度为0.29mmol/g.
实施例3：索玛鲁肽肽树脂的制备
准确称取实施例1替代度为0.26mmol/g的Fmoc-Arg(Pbf)-Gly-Wang Resins69.23g(合成规模18mmol)置于合成柱中，加入1000ml DCM溶胀30min；抽滤掉DCM后，800mlDMF洗涤2次，加入20％哌啶/DMF溶液1000ml脱保护2次，分别反应10min和10min；然后用800ml DMF、DCM、DMF分别洗涤2次；加入Fmoc-Arg(Pbf)-Gly-OH25.41g(36mmol)、HOBT5.35g(39.6mmol)和DIC 6.3ml(39.6mmol)的DMF溶液500ml，鼓N2搅拌反应2h，反应终点以Kaiser试剂检测结果为准，反应达终点后，抽掉反应液，用800ml DMF、DCM、DMF分别洗涤2次；随后再脱保护。如此反复循环操作，按照利拉鲁肽肽序，逐一和保护氨基酸偶联；依次连接的保护氨基酸为：Fmoc-Arg(Pbf)-Gly-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Trp(Boc)-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Lys(N-ε-ADO-ADO-(γ-Glu(N-α-ivDde)-OtBu)-OH、Fmoc-Ala-Ala-OH、Fmoc-Gln(Trt)-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-Gly-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-Gly-OH、Boc-His(Trt)-Aib-OH，得到侧链未脂肪酸化的索玛鲁肽肽树脂：Boc-His(Trt)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Val-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-Leu-Glu(OtBu)-Gly-Gln(Trt)-Ala-Ala-Lys(N-ε-ADO-ADO(γ-Glu(N-α-ivDde)-OtBu)-Glu(OtBu)-Phe-Ile-Ala-Trp(Boc)-Leu-Val-Arg(Pbf)-Gly-Arg(Pbf)-Gly-Wang resins；
脱侧链保护基：分别加入1000ml水合肼/DMF(1/15)混合溶液处理上述树脂3次，每次脱保护时间为5min；脱保护后，用1000ml DMF洗涤树脂6次，取样进行Kaiser试剂检测，树脂显蓝色。
脂肪酸化：称取16.96g(54mmol)1,18-octadecanedioic acid和8.02g(59.4mmol)HOBT于溶解瓶中，加入500mlDMF溶解，待完全溶解后放入冰水浴下静置10min,加入9.2ml(59.4mmol)DIC,混合均匀后，冰水浴下活化10min；将活化后溶液加入上述反应柱中，均匀搅拌反应；Kaiser试剂检测反应进程，树脂检测无色后，终止偶联反应；肽树脂制备完后，用1000ml DMF、DCM和甲醇分别洗涤2次，真空干燥得肽树脂162.6g。
实施例4：利拉鲁肽肽树脂的制备
准确称取实施例1替代度为0.26mmol/g的Fmoc-Arg(Pbf)-Gly-Wang Resins69.23g(合成规模18mmol)置于合成柱中，加入1000ml DCM溶胀30min；抽滤掉DCM后，800mlDMF洗涤2次，加入20％哌啶/DMF溶液1000ml脱保护2次，分别反应10min和10min；然后用800ml DMF、DCM、DMF分别洗涤2次；加入Fmoc-Arg(Pbf)-Gly-OH25.41g(36mmol)、HOBT5.35g(39.6mmol)和DIC 6.3ml(39.6mmol)的DMF溶液500ml，鼓N2搅拌反应2h，反应终点以Kaiser试剂检测结果为准，反应达终点后，抽掉反应液，用800ml DMF、DCM、DMF分别洗涤2次；随后再脱保护。如此反复循环操作，按照利拉鲁肽肽序，逐一和保护氨基酸偶联；依次连接的保护氨基酸为：Fmoc-Arg(Pbf)-Gly-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Trp(Boc)-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Lys(N-ε-ADO-ADO-(γ-Glu(N-α-Alloc)-OtBu)-OH、Fmoc-Ala-Ala-OH、Fmoc-Gln(Trt)-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-Gly-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-Gly-OH、Boc-His(Trt)-Aib-OH，得到侧链未脂肪酸化的索玛鲁肽肽树脂：Boc-His(Trt)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Val-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-Leu-Glu(OtBu)-Gly-Gln(Trt)-Ala-Ala-Lys(N-ε-ADO-ADO(γ-Glu(N-α-Alloc)-OtBu)-Glu(OtBu)-Phe-Ile-Ala-Trp(Boc)-Leu-Val-Arg(Pbf)-Gly-Arg(Pbf)-Gly-Wang resins；
脱侧链保护基：上述肽树脂分别加入1000ml DCM洗涤4次，然后加入1000ml DCM,均匀搅拌树脂下缓慢加入27ml苯基硅烷，反应3min后，加入5.64g Pd(PPh3)4,室温下反应50min，抽干反应液，水合肼/DMF(1/15)混合溶液处理上述树脂3次，每次脱保护时间为5min；脱保护后，1000ml DCM洗涤6次；取样进行Kaiser试剂检测，树脂显蓝色。
脂肪酸化：称取16.96g(54mmol)1,18-octadecanedioic acid和8.02g(59.4mmol)HOBT于溶解瓶中，加入500mlDMF溶解，待完全溶解后放入冰水浴下静置10min,加入9.2ml(59.4mmol)DIC,混合均匀后，冰水浴下活化10min；将活化后溶液加入上述反应柱中，均匀搅拌反应；Kaiser试剂检测反应进程，树脂检测无色后，终止偶联反应；肽树脂制备完后，用1000ml DMF、DCM和甲醇分别洗涤2次，真空干燥得肽树脂163.2g。
实施例5：利拉鲁肽肽树脂的制备
准确称取实施例1替代度为0.26mmol/g的Fmoc-Arg(Pbf)-Gly-Wang Resins69.23g(合成规模18mmol)置于合成柱中，加入1000ml DCM溶胀30min；抽滤掉DCM后，800mlDMF洗涤2次，加入20％哌啶/DMF溶液1000ml脱保护2次，分别反应10min和10min；然后用800ml DMF、DCM、DMF分别洗涤2次；加入Fmoc-Arg(Pbf)-Gly-OH25.41g(36mmol)、HOBT5.35g(39.6mmol)和DIC 6.3ml(39.6mmol)的DMF溶液500ml，鼓N2搅拌反应2h，反应终点以Kaiser试剂检测结果为准，反应达终点后，抽掉反应液，用800ml DMF、DCM、DMF分别洗涤2次；随后再脱保护。如此反复循环操作，按照利拉鲁肽肽序，逐一和保护氨基酸偶联；依次连接的保护氨基酸为：Fmoc-Arg(Pbf)-Gly-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Trp(Boc)-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Lys(N-ε-ADO-ADO-(γ-Glu(N-α-Mmt)-OtBu)-OH、Fmoc-Ala-Ala-OH、Fmoc-Gln(Trt)-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-Gly-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-Gly-OH、Boc-His(Trt)-Aib-OH，得到侧链未脂肪酸化的索玛鲁肽肽树脂：Boc-His(Trt)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Val-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-Leu-Glu(OtBu)-Gly-Gln(Trt)-Ala-Ala-Lys(N-ε-ADO-ADO(γ-Glu(N-α-Mmt)-OtBu)-Glu(OtBu)-Phe-Ile-Ala-Trp(Boc)-Leu-Val-Arg(Pbf)-Gly-Arg(Pbf)-Gly-Wang resins；
脱侧链保护基：上述肽树脂分别加入1000ml DCM洗涤4次，然后加入1000ml TFA/TIS/DCM(5/5/90)混合溶液处理上述树脂3次,每次20min；脱保护后，1000ml DCM洗涤6次；取样进行Kaiser试剂检测，树脂显蓝色。
脂肪酸化：称取16.96g(54mmol)1,18-octadecanedioic acid和8.02g(59.4mmol)HOBT于溶解瓶中，加入500mlDMF溶解，待完全溶解后放入冰水浴下静置10min,加入9.2ml(59.4mmol)DIC,混合均匀后，冰水浴下活化10min；将活化后溶液加入上述反应柱中，均匀搅拌反应；Kaiser试剂检测反应进程，树脂检测无色后，终止偶联反应；肽树脂制备完后，用1000ml DMF、DCM和甲醇分别洗涤2次，真空干燥得肽树脂160.6g。
实施例6：利拉鲁肽肽树脂的制备
准确称取实施例1替代度为0.25mmol/g的Fmoc-Arg(Pbf)-Gly-CTC Resins69.23g(合成规模18mmol)置于合成柱中，加入1000ml DCM溶胀30min；抽滤掉DCM后，800mlDMF洗涤2次，加入20％哌啶/DMF溶液1000ml脱保护2次，分别反应10min和10min；然后用800ml DMF、DCM、DMF分别洗涤2次；加入Fmoc-Arg(Pbf)-Gly-OH25.41g(36mmol)、HOBT5.35g(39.6mmol)和DIC 6.3ml(39.6mmol)的DMF溶液500ml，鼓N2搅拌反应2h，反应终点以Kaiser试剂检测结果为准，反应达终点后，抽掉反应液，用800ml DMF、DCM、DMF分别洗涤2次；随后再脱保护。如此反复循环操作，按照利拉鲁肽肽序，逐一和保护氨基酸偶联；依次连接的保护氨基酸为：Fmoc-Arg(Pbf)-Gly-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Trp(Boc)-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Lys(N-ε-ADO-ADO-(γ-Glu(N-α-Mtt)-OtBu)-OH、Fmoc-Ala-Ala-OH、Fmoc-Gln(Trt)-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-Gly-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-Gly-OH、Boc-His(Trt)-Aib-OH，得到侧链未脂肪酸化的索玛鲁肽肽树脂：Boc-His(Trt)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Val-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-Leu-Glu(OtBu)-Gly-Gln(Trt)-Ala-Ala-Lys(N-ε-ADO-ADO(γ-Glu(N-α-Mtt)-OtBu)-Glu(OtBu)-Phe-Ile-Ala-Trp(Boc)-Leu-Val-Arg(Pbf)-Gly-Arg(Pbf)-Gly-Wang resins；
脱侧链保护基：上述肽树脂分别加入1000ml DCM洗涤4次，然后加入1000ml TFA/TIS/DCM(5/5/90)混合溶液处理上述树脂3次,每次20min；脱保护后，1000ml DCM洗涤6次；取样进行Kaiser试剂检测，树脂显蓝色。
脂肪酸化：称取16.96g(54mmol)1,18-octadecanedioic acid和8.02g(59.4mmol)HOBT于溶解瓶中，加入500mlDMF溶解，待完全溶解后放入冰水浴下静置10min,加入9.2ml(59.4mmol)DIC,混合均匀后，冰水浴下活化10min；将活化后溶液加入上述反应柱中，均匀搅拌反应；Kaiser试剂检测反应进程，树脂检测无色后，终止偶联反应；肽树脂制备完后，用1000ml DMF、DCM和甲醇分别洗涤2次，真空干燥得肽树脂161.8g。
实施例7：利拉鲁肽肽树脂的制备
准确称取实施例1替代度为0.26mmol/g的Fmoc-Arg(Pbf)-Gly-Wang Resins69.23g(合成规模18mmol)置于合成柱中，加入1000ml DCM溶胀30min；抽滤掉DCM后，800mlDMF洗涤2次，加入20％哌啶/DMF溶液1000ml脱保护2次，分别反应10min和10min；然后用800ml DMF、DCM、DMF分别洗涤2次；加入Fmoc-Arg(Pbf)-Gly-OH25.41g(36mmol)、HOBT5.35g(39.6mmol)和DIC 6.3ml(39.6mmol)的DMF溶液500ml，鼓N2搅拌反应2h，反应终点以Kaiser试剂检测结果为准，反应达终点后，抽掉反应液，用800ml DMF、DCM、DMF分别洗涤2次；随后再脱保护。如此反复循环操作，按照利拉鲁肽肽序，逐一和保护氨基酸偶联；依次连接的保护氨基酸为：Fmoc-Arg(Pbf)-Gly-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Trp(Boc)-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Lys(N-ε-ADO-ADO-(γ-Glu(N-α-Dde)-OtBu)-OH、Fmoc-Ala-Ala-OH、Fmoc-Gln(Trt)-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-Gly-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-Gly-OH、Boc-His(Trt)-Aib-OH，得到侧链未脂肪酸化的索玛鲁肽肽树脂：Boc-His(Trt)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Val-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-Leu-Glu(OtBu)-Gly-Gln(Trt)-Ala-Ala-Lys(N-ε-ADO-ADO(γ-Glu(N-α-Dde)-OtBu)-Glu(OtBu)-Phe-Ile-Ala-Trp(Boc)-Leu-Val-Arg(Pbf)-Gly-Arg(Pbf)-Gly-Wang resins；
脱侧链保护基：分别加入1000ml水合肼/DMF(1/15)混合溶液处理上述树脂3次，每次脱保护时间为5min；脱保护后，用500ml DMF洗涤树脂6次，取样进行Kaiser试剂检测，树脂显蓝色。
脂肪酸化：称取16.96g(54mmol)1,18-octadecanedioic acid和8.02g(59.4mmol)HOBT于溶解瓶中，加入500mlDMF溶解，待完全溶解后放入冰水浴下静置10min,加入9.2ml(59.4mmol)DIC,混合均匀后，冰水浴下活化10min；将活化后溶液加入上述反应柱中，均匀搅拌反应；Kaiser试剂检测反应进程，树脂检测无色后，终止偶联反应；肽树脂制备完后，用1000ml DMF、DCM和甲醇分别洗涤2次，真空干燥得肽树脂161.8g。
实施例8：准确称取实施例1替代度为0.29mmol/g的Fmoc-Arg(Pbf)-Gly-CTCResins 62.02g(合成规模18mmol)置于合成柱中，加入600ml DCM溶胀30min；抽滤掉DCM后，600ml DMF洗涤2次，加入20％哌啶/DMF溶液600ml脱保护2次，分别反应10min和10min；然后用600ml DMF、DCM、DMF分别洗涤2次；加入Fmoc-Arg(Pbf)-Gly-OH 25.41g(36mmol)、HOBT5.35g(39.6mmol)和DIC 6.3ml(39.6mmol)的DMF溶液500ml，鼓N2搅拌反应2h，反应终点以Kaiser试剂检测结果为准，反应达终点后，抽掉反应液，用800ml DMF、DCM、DMF分别洗涤2次；随后再脱保护。如此反复循环操作，按照利拉鲁肽肽序，逐一和保护氨基酸偶联；依次连接的保护氨基酸为：Fmoc-Arg(Pbf)-Gly-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Trp(Boc)-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Lys(N-ε-ADO-ADO-(γ-Glu(N-α-Dde)-OtBu)-OH、Fmoc-Ala-Ala-OH、Fmoc-Gln(Trt)-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-Gly-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-Gly-OH、Boc-His(Trt)-Aib-OH，得到侧链未脂肪酸化的索玛鲁肽肽树脂：Boc-His(Trt)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Val-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-Leu-Glu(OtBu)-Gly-Gln(Trt)-Ala-Ala-Lys(N-ε-ADO-ADO(γ-Glu(N-α-Dde)-OtBu)-Glu(OtBu)-Phe-Ile-Ala-Trp(Boc)-Leu-Val-Arg(Pbf)-Gly-Arg(Pbf)-Gly-Wang resins；
脱侧链保护基：分别加入1000ml水合肼/DMF(1/15)混合溶液处理上述树脂3次，每次脱保护时间为5min；脱保护后，用1000ml DMF洗涤树脂6次，取样进行Kaiser试剂检测，树脂显蓝色。
脂肪酸化：称取16.96g(54mmol)1,18-octadecanedioic acid和8.02g(59.4mmol)HOBT于溶解瓶中，加入500mlDMF溶解，待完全溶解后放入冰水浴下静置10min,加入9.2ml(59.4mmol)DIC,混合均匀后，冰水浴下活化10min；将活化后溶液加入上述反应柱中，均匀搅拌反应；Kaiser试剂检测反应进程，树脂检测无色后，终止偶联反应；肽树脂制备完后，用1000ml DMF、DCM和甲醇分别洗涤2次，真空干燥得肽树脂156.8g。
实施例9：索玛鲁肽肽树脂的裂解
将实施例3得到的索玛鲁肽肽树脂，加入到冷冻的1600ml裂解液(体积配比为TFA/TIS/H20＝95/2.5/2.5)中，室温下搅拌反应4h；裂解反应结束，过滤树脂，100mlTFA洗涤树脂2次，合并滤液和洗液，旋蒸浓缩至1000ml,倒入10L冷冻甲叔醚中，析出白色沉淀；静置30min后，过滤，甲叔醚洗涤6次，真空干燥得粗肽72.5g,粗肽收率97.7％，纯度71.6％。
实施例10：索玛鲁肽肽树脂的裂解
将实施例4得到的索玛鲁肽肽树脂，加入到冷冻的1600ml裂解液(体积配比为TFA/苯甲硫醚/TIS/H20＝92.5/2.5/2.5/2.5)中，室温下搅拌反应4h；裂解反应结束，过滤树脂，100mlTFA洗涤树脂2次，合并滤液和洗液，旋蒸浓缩至1000ml,倒入10L冷冻甲叔醚中，析出白色沉淀；静置30min后，过滤，甲叔醚洗涤6次，真空干燥得粗肽71.8g,粗肽收率96.8％，纯度70.2％。
实施例11：索玛鲁肽肽树脂的裂解
将实施例5得到的索玛鲁肽肽树脂，加入到冷冻的1800ml裂解液(体积配比为TFA/苯甲硫醚/TIS/EDT/H20＝90/2.5/2.5/2.5/2.5)中，室温下搅拌反应3h；裂解反应结束，过滤树脂，100mlTFA洗涤树脂2次，合并滤液和洗液，旋蒸浓缩至1000ml,倒入10L冷冻甲叔醚中，析出白色沉淀；静置30min后，过滤，甲叔醚洗涤6次，真空干燥得粗肽72.6g,粗肽收率97.8％，纯度70.8％。
实施例12：索玛鲁肽肽树脂的裂解
将实施例6得到的索玛鲁肽肽树脂，加入到冷冻的1600ml裂解液(体积配比为TFA/苯甲硫醚/TIS/H20＝90/2.5/2.5/5)中，室温下搅拌反应4h；裂解反应结束，过滤树脂，100mlTFA洗涤树脂2次，合并滤液和洗液，旋蒸浓缩至1000ml,倒入10L冷冻甲叔醚中，析出白色沉淀；静置30min后，过滤，甲叔醚洗涤6次，真空干燥得粗肽71.3g,粗肽收率96.1％，纯度69.8％。
实施例13：索玛鲁肽肽树脂的裂解
将实施例7得到的索玛鲁肽肽树脂，加入到冷冻的1600ml裂解液(体积配比为TFA/苯甲硫醚/TIS/H20＝90/2.5/2.5/5)中，室温下搅拌反应4h；裂解反应结束，过滤树脂，50mlTFA洗涤树脂2次，合并滤液和洗液，旋蒸浓缩至500ml,倒入5L冷冻甲叔醚中，析出白色沉淀；静置30min后，过滤，甲叔醚洗涤6次，真空干燥得粗肽73.4g,粗肽收率98.9％，纯度72.3％。
实施例14：索玛鲁肽肽树脂的裂解
将实施例8得到的索玛鲁肽肽树脂，加入到冷冻的1600ml裂解液(体积配比为TFA/苯甲硫醚/TIS/H20＝90/2.5/2.5/5)中，室温下搅拌反应4h；裂解反应结束，过滤树脂，50mlTFA洗涤树脂2次，合并滤液和洗液，旋蒸浓缩至500ml,倒入5L冷冻甲叔醚中，析出白色沉淀；静置30min后，过滤，甲叔醚洗涤6次，真空干燥得粗肽63.4g,粗肽收率85.4％，纯度72.6％。
实施例15：索玛鲁肽粗肽的纯化
将实施例9所得粗肽50.0g用200ml醋酸溶解,待完全溶解后，加水稀释至4000ml；溶液用0.45um滤膜过滤备用。
内径为150mm C18制备柱，流动相为0.1％醋酸/水-0.1％醋酸/乙腈体系，上样量为25g/次，流速300ml/min，梯度洗脱；峰前和峰后循环进样，得到中控分析纯度合格的精肽溶液，脱盐后冻干得精肽23.9g，总收率46.7％，纯度99.1％以上，单杂均小于0.1％.
实施例16：索玛鲁肽粗肽的纯化
将实施例10所得粗肽50.0g用200ml醋酸溶解,待完全溶解后，加水稀释至4000ml；溶液用0.45um滤膜过滤备用。
内径为150mm C8制备柱，流动相为0.1％醋酸/水-0.1％醋酸/乙腈体系，上样量为25g/次，流速300ml/min，梯度洗脱；峰前和峰后循环进样，得到中控分析纯度合格的精肽溶液，脱盐后冻干得精肽24.6g，总收率47.6％，纯度99.0％以上，单杂均小于0.1％。

Claims (9)

1.一种固相化学制备索玛鲁肽的方法，其特征在于，包括如下步骤：
(a)采用Wang树脂或CTC树脂为固相载体，用Fmoc-Arg(Pbf)-Gly-OH与之偶联反应制备Fmoc-Arg(Pbf)-Gly-Wang树脂或Fmoc-Arg(Pbf)-Gly-CTC树脂，再按序列依次偶联连接保护氨基酸，得到侧链全保护的索玛鲁肽(未脂肪酸化)肽树脂：
Boc-His(Trt)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Val-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-Leu-Glu(OtBu)-Gly-Gln(Trt)-Ala-Ala-Lys(N-ε-ADO-ADO-(γ-Glu(N-α-X)-OtBu)-Glu(OtBu)-Phe-Ile-Ala-Trp(Boc)-Leu-Val-Arg(Pbf)-Gly-Arg(Pbf)-Gly-树脂；
(b)采用脱保护试剂脱掉20位Lys(N-ε-ADO-ADO-(γ-Glu(N-α-X)-OtBu侧链谷氨酸α氨基保护基X；
(c)通过固相合成法，在谷氨酸α氨基偶联十八烷二酸(OctadecanedioicAcid),得到侧链保护的索玛鲁肽肽树脂：
Boc-His(Boc)-Ala-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Val-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-Leu-Glu(OtBu)-Gly-Gln(Trt)-Ala-Ala-Lys(N-ε-ADO-ADO-(γ-Glu(N-α-OctadecanedioicAcid)-OtBu)-Glu(OtBu)-Phe-Ile-Ala-Trp(Boc)-Leu-Val-Arg(Pbf)-Gly-Arg(Pbf)-Gly-树脂；
(d)索玛鲁肽肽树脂经裂解、纯化、冻干得索玛鲁肽精肽。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：
步骤(a)中所述固相载体Fmoc-Arg(Pbf)-Gly-Wang树脂或Fmoc-Arg(Pbf)-Gly-CTC树脂的替代度为0.1-0.4mmol/g。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：
步骤(a)中所述接20位赖氨酸所采用保护氨基酸为Fmoc-Lys(N-ε-ADO-ADO-(γ-Glu(N-α-X)-OtBu)-OH，其中谷氨酸α氨基保护基X为Alloc、Mmt、Mtt、Dde或ivDde中的一种。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：
步骤(a)中所述接7位His和8位Aib，采用保护氨基酸单体是Boc-His(Trt)-Aib-OH；步骤(a)中所述接24位Ala和25位Ala所采用保护氨基酸单体是Fmoc-Ala-Ala-OH；骤(a)中所述接9位Glu和10位Gly，采用保护氨基酸单体是Fmoc-Glu(OtBu)-Gly-OH，同法接21位Glu和22位Gly；步骤(a)中所述接34位Arg和35位Gly,采用保护氨基酸单体是Fmoc-Arg(Pbf)-Gly-OH。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：
步骤(b)中所述：若谷氨酸α氨基保护基X为Alloc，则脱除保护基Alloc的试剂采用0.1-0.4倍合成规模用量的Pd(PPh3)4和10-30倍合成规模用量的苯基硅烷或吗啡啉，在固相条件下脱除10-90分钟。
6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：
步骤(b)中所述：若谷氨酸α氨基保护基为Mmt或Mtt，则脱除保护基Mmt或Mtt的试剂为1％TFA/5％TIS/DCM。
7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：
步骤(b)中所述：若谷氨酸α氨基保护基X为Dde或ivDde，则脱除保护基Dde或ivDde的试剂为水合肼的DMF溶液，水合肼溶液用量为3-4倍树脂体积，水合肼溶液体积配比为水合肼/DMF＝1/15-20。
8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：
步骤(d)中裂解试剂为加入1-5％清除剂的TFA溶液，所述清除剂为苯甲醚、苯甲硫醚、乙二硫醇、巯基乙醇、苯酚、水和TIS中的一种或几种。
9.根据权利要求9所述的制备方法，其特征在于：
步骤(d)中所述裂解试剂配比为TFA/苯甲硫醚/水/TIS＝90/2.5/5.0/2.5。
CN201811292613.1A 2018-11-01 2018-11-01 一种合成索玛鲁肽的方法 Active CN109180801B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201811292613.1A CN109180801B (zh) 2018-11-01 2018-11-01 一种合成索玛鲁肽的方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201811292613.1A CN109180801B (zh) 2018-11-01 2018-11-01 一种合成索玛鲁肽的方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN109180801A true CN109180801A (zh) 2019-01-11
CN109180801B CN109180801B (zh) 2021-08-13

Family

ID=64941394

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201811292613.1A Active CN109180801B (zh) 2018-11-01 2018-11-01 一种合成索玛鲁肽的方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN109180801B (zh)

Cited By (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110759990A (zh) * 2019-10-31 2020-02-07 成都圣诺生物制药有限公司 一种利那鲁肽的制备方法
WO2020199461A1 (zh) * 2019-03-29 2020-10-08 深圳翰宇药业股份有限公司 一种多肽衍生化合物的合成方法
CN111944038A (zh) * 2019-04-30 2020-11-17 深圳市健元医药科技有限公司 一种索玛鲁肽的合成方法
CN111944037A (zh) * 2019-04-30 2020-11-17 深圳市健元医药科技有限公司 一种索玛鲁肽的合成方法
WO2020188510A3 (en) * 2019-03-19 2021-01-07 Enzene Biosciences Limited Process of preparation of glucagon-like peptide-1 (glp-1) receptor agonists and their analogs
CN112679602A (zh) * 2019-10-18 2021-04-20 苏州特瑞药业有限公司 索马鲁肽的固相合成方法
CN113423723A (zh) * 2020-01-19 2021-09-21 深圳市健元医药科技有限公司 一种索玛鲁肽的制备方法
CN113637064A (zh) * 2020-05-11 2021-11-12 深圳市健翔生物制药有限公司 一种索玛鲁肽的合成方法
CN114031680A (zh) * 2021-09-01 2022-02-11 浙江湃肽生物有限公司 一种索玛鲁肽钠盐及其制备方法与应用
CN114262358A (zh) * 2021-12-08 2022-04-01 苏州天马医药集团天吉生物制药有限公司 一种谷甘二肽的制备方法
CN114685645A (zh) * 2020-12-30 2022-07-01 深圳翰宇药业股份有限公司 一种索玛鲁肽的合成方法
WO2023012709A1 (en) 2021-08-05 2023-02-09 Usv Private Limited An improved process for fmoc synthesis of semaglutide

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20120295847A1 (en) * 2005-03-18 2012-11-22 Novo Nordisk A/S Acylated GLP-1 Compounds
CN103848910A (zh) * 2012-11-30 2014-06-11 深圳翰宇药业股份有限公司 一种萨摩鲁泰的固相合成方法
CN106478806A (zh) * 2016-10-24 2017-03-08 合肥国肽生物科技有限公司 一种索玛鲁肽的固相合成方法
CN108059666A (zh) * 2018-02-10 2018-05-22 润辉生物技术（威海）有限公司 一种固液结合制备索玛鲁肽的方法
CN108359006A (zh) * 2018-05-25 2018-08-03 扬子江药业集团四川海蓉药业有限公司 一种索玛鲁肽的制备方法

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20120295847A1 (en) * 2005-03-18 2012-11-22 Novo Nordisk A/S Acylated GLP-1 Compounds
CN103848910A (zh) * 2012-11-30 2014-06-11 深圳翰宇药业股份有限公司 一种萨摩鲁泰的固相合成方法
CN106478806A (zh) * 2016-10-24 2017-03-08 合肥国肽生物科技有限公司 一种索玛鲁肽的固相合成方法
CN108059666A (zh) * 2018-02-10 2018-05-22 润辉生物技术（威海）有限公司 一种固液结合制备索玛鲁肽的方法
CN108359006A (zh) * 2018-05-25 2018-08-03 扬子江药业集团四川海蓉药业有限公司 一种索玛鲁肽的制备方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
东圆珍: "索玛鲁肽的制备", 《中国医药工业杂志》 *

Cited By (18)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113748125A (zh) * 2019-03-19 2021-12-03 恩泽生物科学有限公司 胰高血糖素样肽-1(glp-1)受体激动剂及其类似物的制备方法
WO2020188510A3 (en) * 2019-03-19 2021-01-07 Enzene Biosciences Limited Process of preparation of glucagon-like peptide-1 (glp-1) receptor agonists and their analogs
WO2020199461A1 (zh) * 2019-03-29 2020-10-08 深圳翰宇药业股份有限公司 一种多肽衍生化合物的合成方法
CN111944037A (zh) * 2019-04-30 2020-11-17 深圳市健元医药科技有限公司 一种索玛鲁肽的合成方法
CN111944038A (zh) * 2019-04-30 2020-11-17 深圳市健元医药科技有限公司 一种索玛鲁肽的合成方法
CN112679602A (zh) * 2019-10-18 2021-04-20 苏州特瑞药业有限公司 索马鲁肽的固相合成方法
CN112679602B (zh) * 2019-10-18 2023-09-22 苏州特瑞药业股份有限公司 索马鲁肽的固相合成方法
CN110759990A (zh) * 2019-10-31 2020-02-07 成都圣诺生物制药有限公司 一种利那鲁肽的制备方法
CN113423723A (zh) * 2020-01-19 2021-09-21 深圳市健元医药科技有限公司 一种索玛鲁肽的制备方法
CN113423723B (zh) * 2020-01-19 2023-06-13 深圳市健元医药科技有限公司 一种索玛鲁肽的制备方法
CN113637064A (zh) * 2020-05-11 2021-11-12 深圳市健翔生物制药有限公司 一种索玛鲁肽的合成方法
CN113637064B (zh) * 2020-05-11 2023-11-28 深圳市健翔生物制药有限公司 一种索玛鲁肽的合成方法
CN114685645A (zh) * 2020-12-30 2022-07-01 深圳翰宇药业股份有限公司 一种索玛鲁肽的合成方法
WO2023012709A1 (en) 2021-08-05 2023-02-09 Usv Private Limited An improved process for fmoc synthesis of semaglutide
CN114031680B (zh) * 2021-09-01 2024-03-26 浙江湃肽生物有限公司 一种索玛鲁肽钠盐及其制备方法与应用
CN114031680A (zh) * 2021-09-01 2022-02-11 浙江湃肽生物有限公司 一种索玛鲁肽钠盐及其制备方法与应用
CN114262358A (zh) * 2021-12-08 2022-04-01 苏州天马医药集团天吉生物制药有限公司 一种谷甘二肽的制备方法
CN114262358B (zh) * 2021-12-08 2023-07-21 苏州天马医药集团天吉生物制药有限公司 一种谷甘二肽的制备方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN109180801B (zh) 2021-08-13

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN109180801A (zh) 一种合成索玛鲁肽的方法
CN109311961B (zh) 一种索马鲁肽的合成方法
CN102875665B (zh) 一种合成利拉鲁肽的方法
CN104650219B (zh) 片段缩合制备利拉鲁肽的方法
AU2017372048B2 (en) Synthesis of liraglutide
CN105111303B (zh) 一种固液结合制备利拉鲁肽的方法
CN104004083B (zh) 一种合成利拉鲁肽的方法
WO2014199397A2 (en) Process for the preparation of liraglutide
CN106928343A (zh) 索玛鲁肽的制备方法
CN103864918A (zh) 一种利拉鲁肽的固相合成方法
CN109627317A (zh) 片段缩合制备索马鲁肽的方法
CN111732651B (zh) 一种连续流固相反应制备索马鲁肽的方法
CN110372785A (zh) 一种索马鲁肽的合成方法
CN107880111B (zh) 一种制备利拉鲁肽的方法
CN113880936B (zh) 一种阿巴帕肽的固相合成方法
CN112010961A (zh) 一种索玛鲁肽的固液合成方法
CN106478805B (zh) 一种glp-1衍生物的制备方法
CN107022021A (zh) 一种利拉鲁肽的固相合成法
WO2020252883A1 (zh) 胸腺肽Tα-1的合成方法
CN111732649B (zh) 连续流固相反应制备利拉鲁肽
CN106243214A (zh) 一种美拉诺坦ⅰ的制备方法
CN110922453B (zh) 一种戈舍瑞林的合成方法
US20200024305A1 (en) Method for producing peptide
CN112125971B (zh) 一种超声波快速合成司美格鲁肽的方法
CN111892650A (zh) 一种利拉鲁肽固相合成方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
TA01 Transfer of patent application right

Effective date of registration: 20200116

Address after: 1502, scientific research center building, biomedical park, No.1, Lutai Avenue, high tech Zone, Zibo, Shandong Province

Applicant after: Shandong Han peptide biomedical Co., Ltd

Address before: 255086 No. 1 Lutai Avenue, Zhangdian District, Zibo City, Shandong Province

Applicant before: Shandong Hantai Biotechnology Co., Ltd.

TA01 Transfer of patent application right
TA01 Transfer of patent application right

Effective date of registration: 20210701

Address after: No.287 Weigao Road, Gaoqing Economic Development Zone, Zibo City, Shandong Province, 256300

Applicant after: Sinopeptide biomedical Group Co.,Ltd.

Address before: 255000 1502, scientific research center building, biomedical park, No.1 Lutai Avenue, high tech Zone, Zibo City, Shandong Province

Applicant before: Shandong Han peptide biomedical Co.,Ltd.

TA01 Transfer of patent application right
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant