CN109154615A

CN109154615A - 检测肺癌的方法和检测用试剂盒

Info

Publication number: CN109154615A
Application number: CN201780030653.6A
Authority: CN
Inventors: 仲田大辅
Original assignee: Tosoh Corp
Current assignee: Tosoh Corp
Priority date: 2016-05-18
Filing date: 2017-05-10
Publication date: 2019-01-04
Anticipated expiration: 2037-05-10
Also published as: JP2017211373A; WO2017199817A1; CN109154615B; EP3467503A1; EP3467503A4; JP6834747B2; US11137405B2; US20190277853A1

Abstract

本发明通过测定胰脏核糖核酸酶1(也简记为RNase1)的N型糖链可修饰位点，来检测出肺癌。对于以下记载的A、B，测定A和B并求出其比值，由此检测肺癌。A＝作为胰脏核糖核酸酶1的N型糖链可修饰位点的、N型糖链已结合的位点或未结合的位点的量B＝胰脏核糖核酸酶1的N型糖链可修饰位点的量。

Description

检测肺癌的方法和检测用试剂盒

技术领域

本发明涉及肺癌的检测方法和检测用试剂盒。更详细而言，涉及基于测定胰脏核糖核酸酶1(以下将胰脏核糖核酸酶1称为“RNase1”)的N型糖链可修饰位点的糖链结合的有无来进行的肺癌的检测方法及其检测用试剂盒。

背景技术

肺癌是患病人数较多的癌症。根据非专利文献1和非专利文献2，2011年日本国内的患病人数约为11万人，仅次于胃癌排第2位，死亡人数约7万人居首位。对于肺癌，利用以X光等为代表的图像诊断方法进行检测/诊断的情况较多，但检测极限、灵敏度等依赖于解读图像人的技术、图像摄影装置，一直以来认为难以检测出早期癌症那样较小的肿瘤组织。在肺癌的诊疗中所利用的血液肿瘤标记物的阳性率低，因此不用于检测肺癌这样的目的，而专门用于疗效的监测中。

血液中的RNase1被认为是主要在胰脏中产生并被分泌到血流中的蛋白质，有报道表明在除胰脏以外的组织中有表达。然而，一直以来未对肺组织中的RNase1的表达进行详细地研究。专利文献1中公开了一种能检测胰腺癌的方法，其示出对于由胰腺癌患者得到的血液中的RNase1的特定的天冬酰胺残基，在健康的人中未被发现的糖链修饰有所增加。专利文献2中记载了用于准确测定前述RNase1的第88位的天冬酰胺残基(以下有时也称为“Asn88”)中的糖链附加量的测定方法，记载了在胰腺癌、胃癌、胆管癌中的测定结果。然而，这些专利文献中没有记载在肺癌中的RNase1的表达、进而没有记载在肺癌中的RNase1的Asn88中的糖链附加的检测。

根据以上情况，一直以来尚未出于检测肺癌的目的而测定血液中的RNase1、测定特定的天冬酰胺残基中的糖链附加变化的情况。

另外，发生在肺部的癌症按组织型分为4种癌症(腺癌、非小细胞癌、小细胞癌、鳞状细胞癌)。用于检测肺癌的低侵袭性的血液检查具有用于不同组织型的标记物。然而，这些标记物的阳性率低而无法用于筛选等，日本肺癌学会的“肺癌诊疗指南2016年度”中也不建议“出于检测肺癌的目的来首先进行”肿瘤标记物的测定。被推荐作为“出于检测肺癌的目的首先进行的检查”的是胸部X射线照片，在日本国内虽然已是普及的检测方法，但存在暴露于辐射线的风险，与血液检查等相比是侵袭性高的检查方法。为了克服肺癌，需要能够没有组织型偏重地检测的标记物。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：国际公开第2013/187371号小册子

专利文献2：日本特开2016-042083号公报

非专利文献

非专利文献1：《人口動態統計(厚生労働省大臣官房統計情報部編)》(人口动态统计(厚生劳动省大臣官房统计信息部编))平成24年9月6日发行

非专利文献2：Japanese Journal of Clinical Oncology，44(4):388-396，2013、国立癌症研究中心癌症信息服务《がん登録·統計》(癌症注册·统计)

发明内容

发明要解决的问题

本发明目的在于提供着眼于RNase1的N型糖链可修饰位点来检测肺癌的方法。

用于解决问题的方案

本发明人为了解决上述课题而进行了深入研究，结果发现肺癌患者中RNase1的N型糖链可修饰位点中糖链已结合的情况与健康的人相比有所增加，以至完成了本发明。即本发明如下。

(1)一种检测肺癌的方法，其特征在于，其测定作为RNase1的N型糖链可修饰位点的、N型糖链已结合的位点或未结合的位点的量。

(2)根据(1)所述的方法，其中，与健康的人相比N型糖链已结合的位点的量增加。

(3)一种检测肺癌的方法，其特征在于，对于下述A、B求出A与B之比。

A＝作为RNase1的N型糖链可修饰位点的、N型糖链已结合的位点或未结合的位点的量。

B＝RNase1的N型糖链可修饰位点的量

(4)根据(3)所述的方法，其中，A＝N型糖链未结合的位点的量，与健康的人相比A/B的值减小。

(5)根据(3)所述的方法，其中，A＝N型糖链已结合的位点的量，与健康的人相比A/B的值增大。

(6)根据(3)～(5)中任一项所述的方法，其中，求出RNase1的量，对该值进行换算并作为B的值。

(7)根据(1)～(6)中任一项所述的方法，其中，N型糖链可修饰位点是序列号1所示的序列的第88位的天冬酰胺残基。

(8)一种肺癌的检测用试剂盒，其特征在于，其含有单克隆抗体或其片段，所述单克隆抗体将RNase1的N型糖链可修饰位点作为抗原识别位点的一部分。

以下对本发明进行进一步详细地说明。本发明通过测定作为RNase1的N型糖链可修饰位点的、N型糖链已结合的位点或未结合的位点的量，来检测出肺癌。此时，是测定作为RNase1的N型糖链可修饰位点的、N型糖链已结合的“位点”的量或N型糖链未结合的“位点”的量，而不是测定已结合在N型糖链可修饰位点上的“糖链”的量。

作为测定对象的RNase1优选为人活体试样来源。通过将它们作为测定对象而能够检测出人的肺癌。此时，为肺癌患者的情况下，与健康的人相比，N型糖链可修饰位点上N型糖链已结合的情况较多，在N型糖链可修饰位点中N型糖链已结合的位点增加，因此可以将其作为指标来检测出肺癌。

另外，本发明为一种肺癌的检测方法，其特征在于，对于下述A、B求出A与B之比。

A＝作为RNase1的N型糖链可修饰位点的、N型糖链已结合的位点或未结合的位点的量

B＝RNase1的N型糖链可修饰位点的量

另外，优选为如下方法：A＝N型糖链未结合的位点的量，与健康的人相比A/B的值减小。另外，还优选为如下方法：A＝N型糖链已结合的位点的量，与健康的人相比A/B的值增大。

关于B＝RNase1的N型糖链可修饰位点的量，对于其计算方法没有特别限定，例如可以求出RNase1的量，对该值进行换算并作为B的值。具体而言，RNase1具有3个N型糖链可修饰位点(序列号1的第34位、第76位、第88位的天冬酰胺残基)，因此在将其中任一个位点、或2个位点、或全部位点的量作为测定对象时，B＝RNase1的N型糖链可修饰位点的量也与其对应地可以分别换算为RNase1的量的1倍、2倍或3倍。需要说明的是，RNase1的量可以通过例如免疫学测定法、利用质谱分析的方法求出。

需要说明的是，RNase1如前所述具有3个N型糖链可修饰位点(序列号1的第34位、第76位、第88位的天冬酰胺残基)。特别是作为N型糖链可修饰位点，若对于序列号1的第88位的天冬酰胺残基测定上述量，肺癌的患者和健康的人在该值上存在显著的差异，因此作为肺癌的检测方法是适宜的。

另外，基于本发明的方法、试剂盒如后述的实施例所示，能够检测出肺癌中全部4种组织型(腺癌、非小细胞癌、小细胞癌、鳞状细胞癌)，能够不依赖于组织型而广泛地检测肺癌。

在利用本发明检测出肺癌时，优选适宜地对其进行治疗。作为治疗方法没有特别限定，从肺癌的治疗方法中适宜选择进行即可。

发明的效果

根据本发明，能够检测出肺癌，进而能够检测出全部4种组织型的肺癌。

附图说明

图1是绘制健康的人和肺癌患者的G3/t比的分布的图表。图中的虚线表示临界值(cutoff value)0.184。

图2是示出测定正常人组织提取物中的总RNase1量的结果的图。

图3是示出按肺癌组织型类别的G3/t比的分布的图。图中的虚线表示临界值0.184。

具体实施方式

实施例1源自肺癌患者的血清检测体的、附加有N型糖链的Asn88的量、Asn88的量及其比例

将测定对象的N型糖链可修饰位点设为Asn88，利用专利文献2的实施例3和4中记载的免疫学测定试剂和方法实施了附加有N型糖链的Asn88量(G3)的测定和Asn88量(t)的测定。使用上述免疫学测定试剂，对于由健康的人得到的血清35例待检体和由肺癌患者得到的血清40例待检体进行测定。需要说明的是，在本实施例中，作为N型糖链可修饰位点的Asn88量可以换算为总RNase1量的1倍。将结果示于表1、图1。

[表1]

如表1、图1所示，可知与健康的人群相比肺癌患者血清的G3和G3/t比显著增高(均为p＜0.05)。由以上的结果显示出：通过测定G3或G3/t比而能够检测出肺癌。

实施例2正常人肺组织中的RNase1表达的确认

从BioChain公司获得正常人肺组织的匀浆、及正常人胰脏组织的组织提取物、正常人胃组织的组织提取物，利用前述免疫学测定法测定了这些提取物中的总RNase1量。如图2所示，确认了在正常人肺组织中也表达了RNase1。因此，作为血流中的RNase1的Asn88中的N型糖链的附加程度因肺组织的癌性变化而发生变化的原因，可认为是，在肺癌细胞中表达的RNase1的新的生物合成过程中、Asn88中的N型糖链的附加亢进所致。

实施例3按肺癌组织型类别的G3/t比分布的解析

使用实施例1中记载的免疫学测定试剂和方法，测定由肺癌患者得到的血清40例待检体(进行了组织学诊断的样品)，按组织型类别进行绘制。将结果示于图3。如由图3可知的那样，4个组织型均显示出超过临界值0.184的值。该结果以及图1的结果表明：基于上述免疫学测定试剂和方法进行肺癌的检测能够对4个组织型没有偏重地检测出全部组织型的肺癌，在能够广泛地检测出肺癌的意义上表明，这是一种优异的肺癌检测试剂和方法。

需要说明的是，将2016年5月18日申请的日本专利申请2016-099312号的说明书、序列表、权利要求书、附图和说明书摘要的全部内容援用至此，作为本发明的说明书的公开内容组入其中。

序列表

<110> 东曹株式会社（TOSOH corporation）

<120> 检测肺癌的方法和检测用试剂盒

<130> 216-0024WO

<150> JP2016-099312

<151> 2016-05-18

<160> 1

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 128

<212> PRT

<213> 智人(Homo Sapiens)

<400> 1

Lys Glu Ser Arg Ala Lys Lys Phe Gln Arg Gln His Met Asp Ser Asp

1 5 10 15

Ser Ser Pro Ser Ser Ser Ser Thr Tyr Cys Asn Gln Met Met Arg Arg

20 25 30

Arg Asn Met Thr Gln Gly Arg Cys Lys Pro Val Asn Thr Phe Val His

35 40 45

Glu Pro Leu Val Asp Val Gln Asn Val Cys Phe Gln Glu Lys Val Thr

50 55 60

Cys Lys Asn Gly Gln Gly Asn Cys Tyr Lys Ser Asn Ser Ser Met His

65 70 75 80

Ile Thr Asp Cys Arg Leu Thr Asn Gly Ser Arg Tyr Pro Asn Cys Ala

85 90 95

Tyr Arg Thr Ser Pro Lys Glu Arg His Ile Ile Val Ala Cys Glu Gly

100 105 110

Ser Pro Tyr Val Pro Val His Phe Asp Ala Ser Val Glu Asp Ser Thr

115 120 125

Claims

1.一种检测肺癌的方法，其特征在于，其测定作为胰脏核糖核酸酶1的N型糖链可修饰位点的、N型糖链已结合的位点或未结合的位点的量。

2.根据权利要求1所述的方法，其中，与健康的人相比N型糖链已结合的位点的量增加。

3.一种检测肺癌的方法，其特征在于，对于下述A、B求出A与B之比，

A＝作为胰脏核糖核酸酶1的N型糖链可修饰位点的、N型糖链已结合的位点或未结合的位点的量

B＝胰脏核糖核酸酶1的N型糖链可修饰位点的量。

4.根据权利要求3所述的方法，其中，A＝N型糖链未结合的位点的量，与健康的人相比A/B的值减小。

5.根据权利要求3所述的方法，其中，A＝N型糖链已结合的位点的量，与健康的人相比A/B的值增大。

6.根据权利要求3～5中任一项所述的方法，其中，求出胰脏核糖核酸酶1的量，对该值进行换算并作为B的值。

7.根据权利要求1～6所述的方法，其中，N型糖链可修饰位点是序列号1所示的序列的第88位的天冬酰胺残基。

8.一种肺癌的检测用试剂盒，其特征在于，其含有单克隆抗体或其片段，所述单克隆抗体将胰脏核糖核酸酶1的N型糖链可修饰位点作为抗原识别位点的一部分。