CN109125405A - 一种具有抗肿瘤作用的丁香提取物的制备方法及其应用 - Google Patents

一种具有抗肿瘤作用的丁香提取物的制备方法及其应用 Download PDF

Info

Publication number
CN109125405A
CN109125405A CN201811208388.9A CN201811208388A CN109125405A CN 109125405 A CN109125405 A CN 109125405A CN 201811208388 A CN201811208388 A CN 201811208388A CN 109125405 A CN109125405 A CN 109125405A
Authority
CN
China
Prior art keywords
preparation
flos caryophylli
cell
extract
antitumor action
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201811208388.9A
Other languages
English (en)
Inventor
林秀坤
李聪
许焕丽
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
ZIBO LIDE MEDICAL TECHNOLOGY Co Ltd
Original Assignee
ZIBO LIDE MEDICAL TECHNOLOGY Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by ZIBO LIDE MEDICAL TECHNOLOGY Co Ltd filed Critical ZIBO LIDE MEDICAL TECHNOLOGY Co Ltd
Priority to CN201811208388.9A priority Critical patent/CN109125405A/zh
Publication of CN109125405A publication Critical patent/CN109125405A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/61—Myrtaceae (Myrtle family), e.g. teatree or eucalyptus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
    • A61K2236/30—Extraction of the material
    • A61K2236/33—Extraction of the material involving extraction with hydrophilic solvents, e.g. lower alcohols, esters or ketones
    • A61K2236/331—Extraction of the material involving extraction with hydrophilic solvents, e.g. lower alcohols, esters or ketones using water, e.g. cold water, infusion, tea, steam distillation, decoction
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
    • A61K2236/50—Methods involving additional extraction steps
    • A61K2236/51—Concentration or drying of the extract, e.g. Lyophilisation, freeze-drying or spray-drying
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
    • A61K2236/50—Methods involving additional extraction steps
    • A61K2236/55—Liquid-liquid separation; Phase separation

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Alternative & Traditional Medicine (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)

Abstract

本发明公开了一种具有抗肿瘤作用的丁香水提取物的制备方法及其应用。本发明公开的丁香水提取物具有良好的抗肿瘤作用，对人多种肿瘤细胞具有明显的抑制作用；体内裸鼠移植瘤模型结果显示丁香水提取物对人结肠癌细胞HT‑29和人胰腺癌细胞ASPC‑1有显著的抑瘤活性。由于本发明公开的活性组分是中药提取物，相对临床常用的化疗药物而言具有更小的毒副作用。因此，本发明公开的丁香水提取物具有成为新型抗癌剂或癌症化学疗法佐剂的开发潜力和应用前景。

Description

一种具有抗肿瘤作用的丁香提取物的制备方法及其应用
技术领域
本发明涉及丁香提取物在制备抗肿瘤药物中的应用及其药物制剂，属于中药领域。
背景技术
肿瘤是指机体在各种致瘤因子作用下，局部组织细胞增生所形成的新生物。肿瘤在本质上是基因病。各种环境的和遗传的致癌因素以协同或序贯的方式引起DNA损害，从而激活原癌基因和(或)灭活肿瘤抑制基因，加上凋亡调节基因和(或)DNA修复基因的改变，继而引起表达水平的异常，使靶细胞发生转化。被转化的细胞先多呈克隆性的增生，经过一个漫长的多阶段的演进过程，其中一个克隆相对无限制的扩增，通过附加突变，选择性地形成具有不同特点的亚克隆(异质化)，从而获得浸润和转移的能力(恶性转化)，形成恶性肿瘤。恶性肿瘤是严重威胁人类健康的常见病症，高居人类疾病死亡原因之首。目前临床常用癌症治疗药多为化疗药物，但其本身存在毒副作用较强，易产生耐药性等缺点，因此发展新型高效低毒的抗肿瘤药成为目前研究重点。
丁香(Syzygium aromaticum)是桃金娘科蒲桃属植物，有公丁香和母丁香之分，公丁香指未开花时采摘，除去花柄的干燥丁香花蕾；母丁香指成熟的丁香果实。《药性论》记载丁香味辛，性温。归脾、胃、肾经。功效温中止痛，降逆，补肾助阳。丁香中的丁香酚具有抗氧化、麻醉的功效；丁香精油具有抑菌作用。
发明内容
本发明的目的是提供一种具有抗肿瘤作用的丁香提取物，能够抑制肿瘤细胞和实体瘤的生长。
本发明采用以下技术方案：
一种具有抗肿瘤作用的丁香提取物的制备方法包括以下步骤：
(1)丁香干燥花蕾用蒸馏水浸泡40-50h；
(2)50-100℃提取2小时，收集上清液、过滤，获得粗提液；
(3)粗提物经大孔吸附树脂吸附，用0.05M-0.3M的氯化钠水溶液洗涤；
(4)用0.4M-0.6M的氯化钠洗脱，获得洗脱液；
(5)洗脱产物再次经真空旋转蒸发仪70-90℃高温浓缩，脱盐，干燥，即得。
优选的，前述步骤(1)中用蒸馏水浸泡48h，蒸馏水的质量为药材质量6-20倍。
优选的，前述步骤(2)中提取温度为80度，提取1-3次。
优选的，前述步骤(3)中用0.2M的氯化钠水溶液洗涤。
优选的，前述步骤(3)中大孔吸附树脂为聚苯乙烯型XDA-8、LSA-1、XDA-1、LSA-7、LX-17极性大孔吸附树脂。
优选的，前述步骤(4)中0.5M的氯化钠水溶液洗脱。
优选的，前述步骤(5)中温度为40-80℃。
前述的一种具有抗肿瘤作用的丁香提取物在制备抗肿瘤药物中的应用。
优选的所述肿瘤细胞包括肝癌细胞(BEL-7402、HePG2)、人鳞状细胞癌(A431)、人宫颈癌上皮细胞(Hela)、人肺癌细胞(A549)、人乳腺癌细胞(MDA-MB-468)、人结肠癌细胞(HT-29、HCT-116)和人胰腺癌细胞(PANC-28、ASPC-1、Mia-Paca-2以及上述细胞的裸鼠异种移植性肿瘤。
更优选的所述肿瘤细胞主要为人结肠癌HT-29和人胰腺癌ASPC-1细胞。
本发明的有益效果是：该抗肿瘤作用的丁香提取物对体外和体内肿瘤细胞均具有明显的抑制作用，且无明显毒副作用，表明丁香提取物是一种很有前景的抗肿瘤药物。
附图说明
图1A为人胰腺癌细胞ASPC-1移植到裸鼠的肿瘤模型在不同药物组处理下的相对肿瘤增长率图；
图1B为人胰腺癌细胞ASPC-1移植到裸鼠的肿瘤模型在不同药物组处理下的裸鼠平均体重变化图；
图2A为人胰腺癌细胞HT-29移植到裸鼠的肿瘤模型在不同药物组处理下的相对肿瘤增长率图；
图2B为人胰腺癌细胞HT-29移植到裸鼠的肿瘤模型在不同药物组处理下的裸鼠平均体重变化图。
具体实施方式
下面通过具体实施方式对本发明的目的，技术方案进行详细说明。
实施例1
丁香干燥花蕾100g用蒸馏水浸泡40h,然后在50℃提取2小时，收集上清液、过滤，获得粗提液。粗提物经XDA-8大孔吸附树脂吸附，用10mL0.1M的氯化钠水溶液洗涤三次,然后用20mL0.4M的氯化钠溶液洗脱，获得洗脱液。洗脱产物再次经真空旋转蒸发仪50℃浓缩，脱盐，得到丁香水提取物1克。
实施例2
丁香干燥花蕾100g用蒸馏水浸泡50h,然后在100℃提取3小时，收集上清液、过滤，获得粗提液。粗提物经LSA-1大孔吸附树脂吸附，用10mL0.3M的氯化钠水溶液洗涤三次,然后用20mL0.6M的氯化钠溶液洗脱，获得洗脱液。洗脱产物再次经真空旋转蒸发仪70℃浓缩，脱盐，得到丁香水提取物1.2克。
实施例3
测定丁香水提取物体外对肿瘤细胞的抑制作用。
细胞：人肝癌细胞(BEL-7402、HePG2)、人鳞状细胞癌(A431)、人宫颈癌上皮细胞(Hela)、人肺癌细胞(A549)、人乳腺癌细胞(MDA-MB-468)、人结肠癌细胞(HT-29、HCT-116)和人胰腺癌细胞(PANC-28、ASPC-1、Mia-Paca-2)人结肠癌HT-29细胞，人胰腺癌ASPC-1细胞，购于美国ATCC细胞库。
药品及试剂：本发明实施例3的丁香水提取物，RPMI1640(Gibco,CA,USA)；DMEM(Gibco,CA,USA)；胎牛血清(Gibco,CA,USA)；MTS细胞力测定试剂盒(Promega,WI,USA)。
仪器：超净台(HDL型北京东联哈尔仪器制造有限公司)；CO2培养箱(HERACELL150i，美国Thermo公司)；离心机(Centrifuge 5430R，美国effdort公司)；倒置显微镜(Nikon eclipse Ti，北京恒三江仪器销售有限公司)；移液枪。
MTS测定方法：常规方法培养传代各种肿瘤细胞，收集对数生长期细胞。4×103个/孔的浓度接种于96培养板中，37℃恒温培养箱中培养24h后，设置实验组每孔加入200μl丁香水提取(浓度梯度为50,100,150,200,250,300,350和400μg/ml)，每组各设6个平行孔，并设置不含药的空白对照组。培养48h，移液枪弃去全部培养液，每孔加入100μl完全培养基+20μlMTS混合溶液于细胞培养箱中孵育1h后，用酶标仪在490nm下测定OD值，利用SPSS统计软件，计算细胞死亡率，求取IC50值。
实验结果表明，丁香水提取物对用于试验的11种肿瘤细胞均呈现不同程度的抑制作用，并且呈一定的剂量依赖关系。其中对人结肠癌HT-29和人胰腺癌ASPC-1细胞最为敏感，细胞毒性最强。
不同浓度的丁香提取物对人肝癌细胞(BEL-7402、HePG2)、人鳞状细胞癌(A431)、人宫颈癌上皮细胞(Hela)、人肺癌细胞(A549)、人乳腺癌细胞(MDA-MB-468)、人结肠癌细胞(HT-29、HCT-116)和人胰腺癌细胞(PANC-28、ASPC-1、Mia-Paca-2)IC50值详见下表1。
表1.丁香水提取物对不同肿瘤细胞的细胞毒性分析。
结果表明，丁香水提取对人结肠癌HT-29和人胰腺癌ASPC-1细胞毒性较强，IC50值分别为146.5±10.3和115.1±8.3μg/ml。
实施例4
丁香水提取物体内对裸鼠移植瘤的抑制作用。
实验动物：BALB/c裸鼠4-6周龄，体重18-20g，均为雌鼠，动物饲养及实验为无特殊病原菌级屏障系统，饲养于首都医科大学动物实验中心。
药品及器具：丁香水提取物，DMSO，生理盐水，环磷酰胺(CTX，Mcklin，C849559)，手术器具，注射器，游标卡尺和电子天平。
裸鼠异种移植瘤模型建立：分别取对数生长期的人胰腺癌细胞(ASPC-1)和人结肠癌细胞(HT-29)制成瘤细胞悬液(1×107个/ml)，分别植入BALB/c雌性裸鼠腋部皮下(500μl/只)，接种后定期观察小鼠精神、饮食及排便等情况。10天后肉眼可观察到裸鼠右侧腋窝皮下有一凸起，此即F0代移植肿瘤。每3天用游标卡尺测量皮下肿瘤直径，待肿瘤长至直径1-2cm时，断颈处死裸鼠，将瘤块传代。消毒操作部位皮肤，剥离瘤块，并将其置于平皿上，平皿放于冰上，内置少许灭菌生理盐水。剔除非肿瘤组织和坏死组织，选取淡红色、鱼肉状瘤组织，剪成2mm3的小块，用套管针抽吸瘤块，接种于受体动物右侧腋窝皮下，两种细胞皮下移植瘤裸鼠各需3只。在F1代移植瘤生长旺盛时，以上述方式继续传代，传至F3代时，肿瘤活性较好，可进行大规模实验。
分组及给药：当平均肿瘤体积达到约100mm3时，挑选肿瘤一致的裸鼠随机分为3组：空白对照组(溶剂对照，含15％DMSO和85％生理盐水)、阳性对照组(CTX50mg/kg)和丁香提取物实验组(50mg/kg)，每组5只裸鼠。于分组当天给药，每只裸鼠灌胃给药0.2ml，阳性对照组每两天给药一次，其余组别每天给药一次，实验持续给药9天。每天记录裸鼠体重并用游标卡尺测量记录肿瘤长径和短径，计算肿瘤体积：肿瘤体积(mm3)＝长径(mm)×短径2(mm2)/2。
结果如图所示：丁香水提取物对人胰腺癌ASPC-1实体瘤(图1A、B)和人结肠癌HT-29实体瘤(图2A、B)具有明显的抑制作用，且并不影响裸鼠体重，裸鼠生活状况良好。图1A为人胰腺癌ASPC-1肿瘤体积增长曲线图。和空白对照组相比，丁香水提取实验组明显抑制裸鼠肿瘤的生长，且抑制作用优于阳性药物环磷酰胺。同样的情况也发生在人结肠癌HT-29实体瘤中，如图2A所示。
上述离体试验和整体试验表明，丁香提取物对体外和体内肿瘤细胞均具有明显的抑制作用，且无明显毒副作用，提示丁香提取物是一种很有前景的抗肿瘤药物。

Claims (10)

1.一种具有抗肿瘤作用的丁香提取物的制备方法，其特征在于,该提取物的制备方法为：
(1)丁香干燥花蕾用蒸馏水浸泡40-50小时；
(2)50-100℃提取2-3小时，收集上清液、过滤，获得粗提液；
(3)粗提液经大孔吸附树脂吸附，用0.1M-0.3M的氯化钠水溶液洗涤；
(4)用0.4M-0.6M的氯化钠溶液洗脱，获得洗脱液；
(5)洗脱产物再次经真空旋转蒸发仪40-80℃浓缩，脱盐，干燥，即得。
2.根据权利要求1所述的一种具有抗肿瘤作用的丁香提取物的制备方法，其特征在于：所述步骤(1)中用蒸馏水浸泡48h，蒸馏水的质量为药材质量6-20倍。
3.根据权利要求1所述的一种具有抗肿瘤作用的丁香提取物的制备方法，其特征在于：所述步骤(2)中80℃提取2小时，提取1-3次。
4.根据权利要求1所述的一种具有抗肿瘤作用的丁香提取物的制备方法，其特征在于：所述步骤(3)中用0.2M的氯化钠水溶液洗涤。
5.根据权利要求1所述的一种具有抗肿瘤作用的丁香提取物的制备方法，其特征在于：所述步骤(3)中大孔吸附树脂为聚苯乙烯型极性大孔吸附树脂，其型号包括XDA-8、LSA-1、XDA-1、LSA-7、LX-17。
6.根据权利要求1所述的一种具有抗肿瘤作用的丁香提取物的制备方法，其特征在于：所述步骤(4)中0.5M的氯化钠水溶液洗脱。
7.根据权利要求1所述的一种具有抗肿瘤作用的丁香提取物的制备方法，其特征在于：所述步骤(5)中温度为40-80℃。
8.一种权利要求1～7中任一所述的具有抗肿瘤作用的丁香提取物在制备抗肿瘤药物中的应用。
9.根据权利要求8所述的丁香提取物的制备及其在制备抗肿瘤药物中的应用：其特征在于，所述丁香提取物可以作用于肝癌细胞(BEL-7402、HePG2)、人鳞状细胞癌(A431)、人宫颈癌上皮细胞(Hela)、人肺癌细胞(A549)、人乳腺癌细胞(MDA-MB-468)、人结肠癌细胞(HT-29、HCT-116)和人胰腺癌细胞(PANC-28、ASPC-1、Mia-Paca-2以及上述细胞的裸鼠异种移植性肿瘤。
10.根据权利要求8所述的丁香提取物在制备抗肿瘤药物中的应用，其特征在于，所述的肿瘤细胞主要为人结肠癌HT-29和人胰腺癌ASPC-1细胞。
CN201811208388.9A 2018-10-17 2018-10-17 一种具有抗肿瘤作用的丁香提取物的制备方法及其应用 Pending CN109125405A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201811208388.9A CN109125405A (zh) 2018-10-17 2018-10-17 一种具有抗肿瘤作用的丁香提取物的制备方法及其应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201811208388.9A CN109125405A (zh) 2018-10-17 2018-10-17 一种具有抗肿瘤作用的丁香提取物的制备方法及其应用

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN109125405A true CN109125405A (zh) 2019-01-04

Family

ID=64808358

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201811208388.9A Pending CN109125405A (zh) 2018-10-17 2018-10-17 一种具有抗肿瘤作用的丁香提取物的制备方法及其应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN109125405A (zh)

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102166260A (zh) * 2010-11-07 2011-08-31 林秀坤 具有抗肿瘤作用的丁香提取物及其药物制剂

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102166260A (zh) * 2010-11-07 2011-08-31 林秀坤 具有抗肿瘤作用的丁香提取物及其药物制剂

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
BANERJEE ET AL: "Clove (Syzygiumaromaticum L.)，a potential chemopreventive agent for lung cancer", 《CARCINOGENESIS》 *
乔延江: "《中药制剂学》", 30 June 2017, 中国协和医科大学出版社 *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN104593326A (zh) 一种中药诱导增强型dc-cik细胞的制备方法及其应用
Niu et al. Inhibitory effect of saponins and polysaccharides from Radix ranunculit ternate on human gastric cancer BGC823 cells
JP6389958B2 (ja) 瓦草５環性トリテルペンサポニン類化合物抗腫瘍の薬物用途
CN102351631B (zh) 一种从松针中提取的α-蒎烯及其提取方法和在抗肿瘤中的应用
CN106834404B (zh) 一种酶解多肽及用于制备治疗肺腺癌药物的用途
CN102617698A (zh) 一种制备纤细薯蓣皂苷的方法及其用途
CN109125405A (zh) 一种具有抗肿瘤作用的丁香提取物的制备方法及其应用
Mao et al. Study on inhibitory effect of Spica Prunellae extract on T Lymphoma cell EL-4 tumor
CN101289453B (zh) 鞣花酸化合物的制备方法
CN111803484A (zh) 奥替溴铵在制备抗肿瘤药物中的应用
CN100381129C (zh) 一种抗肿瘤的动物药及其制备方法
CN106110305B (zh) 包含升麻皂苷的药物制剂及其应用
CN101168008A (zh) 一种具有抑制肿瘤作用的药物组合物及其制备方法和用途
CN105999232B (zh) 包含升麻皂苷的药物组合物及其应用
CN106310116A (zh) 一种莪术油及其用途和药物制剂
CN110141589A (zh) 一种山荷叶提取物及其制备方法和应用
CN104069149A (zh) 一种采用熊胆为基质的中药饮片炮制方法
CN116603039B (zh) 一种用于肺癌治疗的靶向药物及其制备方法
KR20140001319A (ko) 밀리타리스 동충하초 추출물 제조방법, 이에 따라 제조된 밀리타리스 동충하초 추출물을 포함하는 암 예방 및 치료용 약학 조성물 및 건강보조식품
CN103169845B (zh) 一种具有抗肝癌和肺癌作用的中药组合物
CN105327009A (zh) 治疗恶性肿瘤的药物组合物及其制备方法
CN101485791B (zh) 显齿蛇葡萄总黄酮在制备防治肿瘤放化疗不良反应的药物的应用
TWI635867B (zh) 中草藥組合物製備抑制腫瘤細胞轉移之藥物之用途
CN100393308C (zh) 毛喉鞘蕊花提取物鞘蕊素在肿瘤生长和增殖抑制剂中的应用
CN101066410B (zh) 用于治疗妇科慢性盆腔炎的中药制剂及其制备方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20190104

RJ01 Rejection of invention patent application after publication