CN109125163A - 龙胆、余甘子和五脉绿绒蒿的冰川水复合提取物及其制备方法和应用 - Google Patents
龙胆、余甘子和五脉绿绒蒿的冰川水复合提取物及其制备方法和应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明属于植物提取领域及日化领域，具体涉及龙胆、余甘子和五脉绿绒蒿的冰川水复合提取物，制备方法为：将龙胆、余甘子和五脉绿绒蒿与冰川水混合提取；复合提取物含有总黄酮、总多酚和总环烯醚萜。采用冰川水进行提取，提取效果有显著提高，工艺简单，所得到的复合提取物能够有效清除自由基，具有抗衰老作用，可应用于制备皮肤外用剂，尤其应用于制备清除自由基和抗衰老的皮肤外用剂。
Description
技术领域
本发明涉及植物提取物领域及日化领域，具体涉及龙胆、余甘子和五脉绿绒蒿的冰川水复合提取物、制备方法及应用。
背景技术
龙胆属植物(Gentiana)约有400种，绝大多数分布在北温带。我国有247种，遍及全国，大多数种类集中在西南山岳地区，主要生长在高山流石滩、高山草甸和灌丛中。龙胆属植物以开蓝色花而著称，是野生花卉中最珍贵的类型。据《中国药典》记载，龙胆原植物有4种，即龙胆(G.scabra)、条叶龙胆(G.manshurica)、三花龙胆(G.triflora)、坚龙胆(G.rigescens)，其干燥根和根茎能够清热燥湿，泻肝胆火。研究表明，龙胆提取物有保肝、健胃、利胆、利尿、降压、抗炎、抗菌作用。且现有研究表明龙胆地上部分也具有抗炎、抗菌、降血糖、保肝等药用价值。
余甘子(Phyllanthusemblica L.)，又名庵摩勒或者滇橄榄，大戟科叶下珠属，是一种十分独特的生长在中国亚热带、热带部分地区，特别是干热河谷地区的乔木或灌木资源植物。原产地是印度、巴基斯坦、斯里兰卡、马来西亚、菲律宾、泰国等地。余甘子是药食两用的具有保健功能的经济资源植物，果实在我国作为中药，包括藏医药等民族药用植物记载使用已有2000历史；根据世界各国传统药物体系中余甘子的临床药用资料，全世界有近20个国家或民族在自己的传统药物体系中使用余甘子，这与其多种治疗功效有关。《中国药典》记载，余甘子系藏族习用药材，为大戟科油柑属植物余甘子的干燥成熟果实，冬季至次春果实成熟时采收，除去杂质，干燥。《全国中草药汇编》记载，根、叶、树皮等亦可入药。根、树皮全年可采，鲜用或晒干；叶春夏采，鲜用或浸渍用。
绿绒蒿是罂粟科绿绒蒿属(Meconopsis)植物的统称，主要分布在喜马拉雅地区海拔3000～5500m的高寒地带，具有很高的观赏价值。在中国西部藏族聚居地区，自古以来就有以该属多种植物入药的记载，当地俗称“刺儿恩”、“欧贝”、“木穷典云”、“阿夏择哦”、“红毛洋参”、“雪参”等。据《藏药志》的记载，五脉绿绒蒿(Meconopsis quintuplinervia)为藏药“欧贝”的正品资源种类，全草入药，性凉，味甘、涩，具清热解毒、止痛、消炎、利尿的功效，而以花入药解热效果好，并能治血热和血旺。
目前，并没有有关采用冰川水提取龙胆、余甘子和五脉绿绒蒿的报道，也没有将这三种植物复合提取物或冰川水复合提取物用于制备皮肤外用剂的报道。
发明内容
本发明的目的在于提供龙胆、余甘子和五脉绿绒蒿的冰川水复合提取物、制备方法。
本发明还将上述提取物用于制备皮肤外用剂，尤其是具有抗衰老和清除自由基功能的化妆品。
本发明的技术方案为：龙胆、余甘子和五脉绿绒蒿的冰川水复合提取物，含有总黄酮、总多酚和总环烯醚萜，以干物质重量计，总黄酮的含量为7％～9％，总多酚的含量为13％～17％，总环烯醚萜的含量为38％～46％。
优选的，总黄酮的含量为7.5％～8.5％，总多酚的含量为14.5％～16％，总环烯醚萜的含量为40％～43％。
上述龙胆、余甘子和五脉绿绒蒿的冰川水复合提取物的制备方法，包括以下步骤：
取龙胆、余甘子和五脉绿绒蒿与冰川水混合，提取后取滤液。
提取的次数为1～3次，每次10～90min；优选的，每次提取时间为10～50min，更优选为10～40min。
所述的提取方法为浸提或超声提取。提取在常温下进行。浸提时搅拌处理，搅拌速度为200～500rpm。
得到的滤液可进一步浓缩或者浓缩干燥。
龙胆、余甘子、五脉绿绒蒿的质量比为1:(0.1～10):(0.1～10)；每次提取时，龙胆、余甘子和五脉绿绒蒿的中质量与冰川水的用量比为1Kg:(5～30)L。优选的，龙胆、余甘子、五脉绿绒蒿的质量比为1:(0.2～5):(0.2～5)，每次提取时，龙胆、余甘子和五脉绿绒蒿的中质量与冰川水的用量比为1kg：(10～25)L。更为优选的，龙胆、余甘子、五脉绿绒蒿的质量比为1:(0.5～2):(0.5～2)，每次提取时，龙胆、余甘子和五脉绿绒蒿的总质量与冰川水的用量比为1kg：(10～25)L。
所述的龙胆为龙胆的全草，所述的余甘子为余甘子的果实，所述的五脉绿绒蒿为五脉绿绒蒿的全草。龙胆、余甘子、五脉绿绒蒿的含水量不超过10％，更优选低于5％；并且粉碎为5～500目的颗粒。
冰川水是地表上长期存在并能自行运动的天然冰体，冰川水含有以下成分：Sr2+0.2～0.5mg/L、K+0.5～10.0mg/L、Na+1.0～5.0mg/L、Ca2+14.0～30.0mg/L以及Mg2+2.0～10.0mg/L；并且冰川水中不含溴酸盐，pH值为7.1～7.9，氘含量为130～140ppm，不含有不溶性固体物或者悬浮物，溶解性总固体含量为60～150mg/L。优选的，pH值为7.2～7.6，更优选为7.4。
浓缩干燥的方式为真空干燥或者冷冻干燥。真空干燥的温度为35℃～45℃；真空度为0.05～0.5MPa。
本发明的一个优选实施方式，将质量比为1:1:1龙胆、余甘子和五脉绿绒蒿混合物用冰川水中常温浸提1次，时间为10～50min，混合物与冰川水的用量比为1Kg:20L。
本发明采用冰川水为溶剂，进行提取，可明显缩短提取时间，并且提高浸出率；与采用纯水或者蒸馏水提取的方法相比，总黄酮、总多酚和总环烯醚萜的提取率平均可提高约15％或者更高。与用纯水或蒸馏水提取所获得的复合提取物相比，本发明的复合提取物清除自由基的效果更好，在含量约7.5ppm(7.5μg/mL)的情况下，DPPH清除率可以达到60％以上。
通过上述方法所获得的龙胆、余甘子和五脉绿绒蒿的复合提取物，具有清除自由基的效果，具有抗衰老作用，可应用于制备皮肤外用剂，尤其是作为皮肤外用剂中清除自由基或抗衰老的活性成分。与蒸馏水所获得的提取物相比，在同等浓度下清除自由基效果更好。
因此，采用冰川水作为提取溶剂优化提取溶剂的提取效果，缩短提取的时间，提高提取物的自由基清除能力和抗衰老作用。
皮肤外用剂指以涂抹、喷洒或者其它类似方法，散布于人体表面的任何部位，以达到清洁、保养、美容、修饰和改变外观，或者修正人体气味，保持良好状态的产品。皮肤外用剂可以是基础化妆品、清洁化妆品、毛发化妆品、美容化妆品、疗效化妆品，可以用于面部及其它部位的皮肤、头发、指甲等人体部位。
本发明的龙胆、余甘子和五脉绿绒蒿的复合提取物可用于制备具有清除自由基和/或抗衰老功能的皮肤外用剂。皮肤外用剂的剂型无特殊限制，可根据使用情况而定，如洁面霜、精华液、乳液、霜膏、化妆水(如柔肤水、爽肤水)、面膜、卸妆水等。
与现有技术相比，本发明具有以下优点：
(1)本发明首次采用冰川水来获取龙胆、余甘子和五脉绿绒蒿的复合提取物，与使用纯水、蒸馏水相比，提取效果有显著提高：总浸出率较同等条件下的蒸馏水复合提取物增加(23.4～62.4)mg固体物质/g药材，提高12％～20％；总黄酮浸出率增加(1.9～6.6)mg总黄酮/g药材，提高15％～23％；总多酚浸出率增加(5.3～18.6)mg总多酚/g药材，提高24％～50％；总环烯醚萜浸出率增加(10.1～39.5)mg固体物质/g药材，提高16％～30％。尤其是在提取时间较短的情况下，与蒸馏水相比，采用冰川水获得更高的浸出率，能够提高提取效率。因此，本发明的提取方法可缩短提取时间，不需要加热从而实现节能，并且优化提取效果，减少原料中有效成分的损失。
(2)上述复合提取物具有更好的清除自由基效果，能够应用于制备皮肤外用剂，尤其是具有清除自由基、抗衰老作用的皮肤外用剂。
(3)本发明龙胆、余甘子和五脉绿绒蒿的冰川水复合提取物的制备工艺简单，工艺条件易于控制，制备成本低。
具体实施方式
下面结合具体实施例进一步示例性地详细说明本发明。需要说明的是，对于这些实施方式的说明用于帮助理解本发明，但并不构成对本发明的限定。
本发明下述实施例以龙胆的全草、余甘子的果实及五脉绿绒蒿的全草为原料制备复合提取物，并进行提取成分及相关活性的研究考察。
实施例1
分别取含水量低于5％的龙胆(全草)、余甘子(果实)和五脉绿绒蒿(全草)粉碎后过80目筛。
各取10g粉碎后的药材原料混合，加入600mL冰川水，室温下浸没搅拌提取，搅拌速度400rpm，得提取液。提取时间分别为10、20、30、40、50min。离心，取上清液。
冰川水取自喜马拉雅山的多吉曲登尼玛泉(海拔5128米)，冰川水中的氘含量为134ppm，pH＝7.4，不含溴酸盐，含有以下的组分：Sr2+0.2～0.5mg/L、K+0.5～10.0mg/L、Na+1.0～5.0mg/L、Ca2+14.0～30.0mg/L以及Mg2+2.0～10.0mg/L；并且冰川水不含有不溶性固体物或者悬浮物，其中的溶解性总固体含量为80～100mg/L。
另外用等体积蒸馏水代替冰川水，用同样的方法提取，作为对照。
按照每克药材原料提取得到的固体物质(mg)计算浸出率，用冰川水或蒸馏水提取的总浸出率如表1所示。测定方法为：提取后离心或过滤的上清液取1mL，平行3次，40℃、0.1MPa真空条件下干燥后，称取固体物质的质量，计算平均浸出率。
表1冰川水提取和蒸馏水提取的浸出率比较
| 提取时间(min) | 冰川水提取 | 蒸馏水提取 |
| 10 | 306.7±6.5 | 272.4±4.4 |
| 20 | 312.4±5.0 | 262.7±6.5 |
| 30 | 341.8±7.9 | 291.1±2.5 |
| 40 | 361.8±1.7 | 303.6±2.5 |
| 50 | 365.8±3.1 | 315.6±2.7 |
结果显示，用冰川水提取，总浸出率较同等条件下的蒸馏水提取增加(23.4～62.4)mg固体物质/g药材，提高约12％～20％。
实施例2总黄酮浸出率
用Al(NO3)3-NaNO2-NaOH法计算总黄酮浸出率，以槲皮素为标准品进行检测。
标准曲线的制备：分别向300μL不同浓度的槲皮素标准液中，加入50μL5％NaNO2溶液，混合后室温放置6min，再加入50μL10％Al(NO3)3溶液，混合后室温放置6min，然后加入400μL 4％NaOH溶液和100μL的蒸馏水，混合后室温放置15min，同一浓度的槲皮素标准液平行作3份，测定500nm的OD值，以每一浓度的槲皮素标准液的平均OD500值作标准曲线。
待测样品溶液的制备与检测：取300μL样品溶液，加入50μL5％NaNO2溶液，混合后室温放置6min，再加入50μL10％Al(NO3)3溶液，混合，室温放置6min，然后加入400μL 4％NaOH溶液和100μL的蒸馏水，混合后室温放置15min，平行3份，测定3份待测样品溶液500nm的OD值，并计算待测样品溶液的平均OD500值。
样品溶液为实施例1用冰川水、蒸馏水在不同时间下提取后所获得的上清液。
计算：根据待测样品溶液的平均OD500值和以槲皮素为标准品绘制的标准曲线，计算黄酮浸出率，黄酮浸出率按照每g药材提取得到的总黄酮(mg)计算，结果如表2所示。
表2冰川水提取和蒸馏水提取的总黄酮浸出率比较
结果显示，用冰川水提取，总黄酮浸出率较同等条件下的蒸馏水提取增加了(1.9～6.6)mg总黄酮/g药材，提高约15％～23％；用冰川水提取所获得的复合提取物中总黄酮含量约为7％～9％。
实施例3总多酚浸出率
用Folin-Ciocalteu方法计算总多酚浸出率，以没食子酸为标准品进行检测。
标准曲线的制备：分别向0.1mL不同浓度的没食子酸标准液中，加入0.5mL10％Folin-Ciocalteu试剂，混合，室温放置5min后加入0.4mL7.5％Na2CO3溶液，混合后室温放置60min，同一浓度的没食子酸标准液平行作3份，测定765nm的OD值，以每一浓度的没食子酸标准液的平均OD765值作标准曲线。
待测样品溶液的制备与检测：取0.1mL实施例1所获得的样品溶液，加入0.5mL10％Folin-Ciocalteu试剂，混合，室温放置5min后加入0.4mL7.5％Na2CO3溶液，混合后室温放置60min，平行3份，测定3份待测样品溶液765nm的OD值，并计算待测样品溶液的平均OD765值。
样品溶液为实施例1用冰川水、蒸馏水在不同时间下提取后所获得的上清液。
计算：根据待测样品溶液的平均OD765值和以没食子酸为标准品绘制的标准曲线，计算多酚浸出率，多酚浸出率按照每g药材提取得到的总多酚(mg)计算，结果如表3所示。
表3冰川水提取和蒸馏水提取的总多酚浸出率比较
| 提取时间(min) | 冰川水提取 | 蒸馏水提取 | 冰川水提取物总多酚平均含量 |
| 10 | 44.9±2.2 | 30.3±0.4 | 14.6％ |
| 20 | 45.6±1.1 | 30.8±0.7 | 14.6％ |
| 30 | 51.2±2.3 | 41.6±2.0 | 14.98％ |
| 40 | 52.2±0.9 | 41.1±0.6 | 14.4％ |
| 50 | 57.2±1.9 | 41.1±0.6 | 15.6％ |
结果显示，用冰川水提取，总多酚浸出率较同等条件下的蒸馏水取物增加(5.3～18.6)mg/g药材，提高约24％～50％；用冰川水提取所获得的复合提取物中总多酚的含量约为13％～17％。
实施例5总环烯醚萜浸出率
用紫外分光光度法计算总环烯醚萜浸出率，以龙胆苦苷为标准品进行检测。
标准曲线的制备：以溶剂作空白对照，用龙胆苦苷标准品溶液在200～400nm波长范围内进行扫描，取最大吸收波长274nm作为检测波长。配制不同浓度的龙胆苦苷标准液，每一浓度的龙胆苦苷标准液平行3份，测定274nm的吸光度，以每一浓度的龙胆苦苷标准液的平均吸光度值作标准曲线。
样品溶液的检测：平行取3份样品溶液，测定274nm的吸光度，并计算样品溶液的平均吸光度。
样品溶液为实施例1用冰川水、蒸馏水在不同时间下提取后所获得的上清液。
计算：根据样品溶液的平均吸光度和以龙胆苦苷为标准品绘制的标准曲线，计算总环烯醚萜浸出率。总环烯醚萜浸出率按照每g药材提取得到的总环烯醚萜(mg)计算，结果如表4所示。
表4冰川水提取和蒸馏水提取的总环烯醚萜浸出率比较
结果显示，用冰川水提取时，总环烯醚萜浸出率较同等条件下的蒸馏水提取高出(10.1～39.5)mg/g药材，提高约16％～30％；用冰川水提取所获得的冰川水复合提取物中总环烯醚萜的含量约为38％～46％。
实施例6清除自由基能力测试
1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)是一种稳定的氮中心有机自由基。DPPH法于1958年被提出，广泛地用于测定生物试样、分类物质和食品的抗衰老能力。此法是根据DPPH自由基有单电子，在517nm处有一强吸收，其醇溶液呈紫色的特性。当有自由基清除剂存在时，由于与其单电子配对而使其吸收逐渐消失，其褪色程度与其接受的电子数量成定量关系，因而可用分光光度计进行快速的定量分析，来检测自由基清除情况，从而评价样品的抗衰老能力。
取样品溶液用纯水稀释至提取物浓度为15μg/mL(以提取物干重计)，与DPPH溶液按照等体积比加入同一具塞试管中，摇匀，在避光条件下反应30min后用分光光度计在525nm处测定吸光度T；样品溶液用纯水稀释后，与95％乙醇溶液按照等体积比加入同一具塞试管中，摇匀，在避光条件下反应30min后用分光光度计在525nm处测定吸光度T0。上述反应体系中，以提取物的干重计，提取物的浓度为7.5μg/mL。
按照上述方法，测定DPPH溶液与等体积纯水混合液的吸光度C；纯水与等体积95％乙醇混合液的吸光度C0；根据下列公式计算清除率：清除率＝[1-(T-T0)/(C-C0)]×100％，结果如表5所示。采用冰川水提取所得复合提取物的DPPH清除率较同等条件下的蒸馏水提取所得复合提取物高出0％～16％，冰川水提取所得复合提取物在浓度为7.5μg/mL时，即表现出优异的自由基清除率。
样品溶液为实施例1用冰川水、蒸馏水在不同时间下提取后所获得的上清液。
表5冰川水提取和蒸馏水提取的DPPH清除率(％)比较
| 提取时间(min) | 冰川水提取 | 蒸馏水提取 |
| 10 | 65±1 | 54±1 |
| 20 | 65±3 | 55±0 |
| 30 | 68±2 | 61±5 |
| 40 | 68±4 | 62±3 |
| 50 | 61±3 | 53±5 |
结果显示，用冰川水提取的龙胆、余甘子和五脉绿绒蒿的复合物，清除自由基的效果有显著提高。
由实施例1～5的结果可知，采用冰川水提取龙胆、余甘子和五脉绿绒蒿混合物，与采用蒸馏水或纯水相比，总浸出率、总多酚浸出率、总黄酮浸出率、总环烯醚萜浸出率都有显著增加，并且所获得的复合提取物清除自由基效果更为优异。
Claims (10)
1.龙胆、余甘子和五脉绿绒蒿的冰川水复合提取物，其特征在于，以龙胆、余甘子和五脉绿绒蒿为原料，用冰川水提取。
2.权利要求1所述龙胆、余甘子和五脉绿绒蒿的冰川水复合提取物，其特征在于，含有总黄酮、总多酚和总环烯醚萜，以干物质重量计，总黄酮的含量为7％～9％，总多酚的含量为13％～17％，总环烯醚萜的含量为38％～46％。
3.根据权利要求1或2所述的龙胆、余甘子和五脉绿绒蒿的冰川水复合提取物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
取龙胆、余甘子和五脉绿绒蒿与冰川水混合，提取后取滤液。
4.根据权利要求3所述的冰川水复合提取物的制备方法，其特征在于，提取的次数为1～3次，每次10～90min；提取的方法为浸提或超声提取。
5.根据权利要求3所述的冰川水复合提取物的制备方法，其特征在于，龙胆、余甘子、五脉绿绒蒿的质量比为1:(0.1～10):(0.1～10)；每次提取时，龙胆、余甘子和五脉绿绒蒿的总质量与冰川水的用量比为1Kg:(5～30)L。
6.根据权利要求3所述的冰川水复合提取物的制备方法，其特征在于，将滤液浓缩或者浓缩干燥。
7.根据权利要求3所述的冰川水复合提取物的制备方法，其特征在于，所述的冰川水pH值为7.1～7.9，氘含量为130～140ppm，还含有如下组分：Sr2+0.2～0.5mg/L、K+0.5～10.0mg/L、Na+1.0～5.0mg/L、Ca2+14.0～30.0mg/L以及Mg2+2.0～10.0mg/L；并且冰川水中的溶解性总固体含量为60～150mg/L。
8.权利要求1或2所述龙胆、余甘子和五脉绿绒蒿的复合提取物在制备皮肤外用剂方面的应用。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述龙胆、余甘子和五脉绿绒蒿的复合提取物作为清除自由基的活性成分。
10.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述龙胆、余甘子和五脉绿绒蒿的复合提取物作为抗衰老的活性成分。
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| CN109125163B (zh) | 2022-07-22 |
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