CN109042324B - 瓦苇属蓝镜玉露的离体培养与快速繁殖方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种瓦苇属蓝镜玉露的离体培养与快速繁殖方法，属于植物离体培养及快速繁殖技术领域。包括以下步骤：A、诱导培养，将蓝镜玉露的花蕾连同花柄逐个切下，洗净后消毒，置于无菌滤纸上，并将花柄底部切除2～4mm后作为外植体，接种到诱导培养基上愈伤，B、不定芽分化培养，将在诱导培养基上培养培养一段时间后的愈伤组织接种到分化培养基上分化培养不定芽，C、增殖培养，将分化的不定芽分别转接到增殖培养基上，增殖幼苗，D、炼苗移栽，将增殖后的幼苗从增殖培养基中取出，移栽至混合基质中生根。本发明省去组培苗生根阶段，直接炼苗生根，在保证生根成活率的同时，大大缩短了繁苗进程。

Description

瓦苇属蓝镜玉露的离体培养与快速繁殖方法
技术领域
本发明属于植物离体培养及快速繁殖技术领域，涉及一种瓦苇属蓝镜玉露的离体培养与快速繁殖方法。
背景技术
蓝镜玉露为百合科瓦苇属中软叶类多肉植物，原产非洲。其株型紧凑、矮壮，三角窗圆顶，有顶毛，叶片两侧有侧毛，叶片背部有两条背毛，皮色油亮，晒后呈现出深邃而内敛的蓝光，糯窗，这是此品种的典型特征，故名“蓝镜玉露”。由于多肉植物具有较高的观赏价值，因此已成为园艺植物爱好者喜爱栽培的植物类型，但由于瓦苇属植物具有自交不亲和性，故大多采用分株、叶插等方法繁殖,但这些繁殖方法容易损害母本，且繁殖系数小、繁殖速度慢，无法满足市场需求，导致其价格居高不下。
发明内容
本发明的目的是针对上述问题，提供一种瓦苇属蓝镜玉露的离体培养与快速繁殖方法。
为达到上述目的，本发明提供了以下技术方案：
一种瓦苇属蓝镜玉露的离体培养与快速繁殖方法，包括以下步骤：
A、诱导培养，将蓝镜玉露的花蕾连同花柄逐个切下，洗净后消毒，置于无菌滤纸上，并将花柄底部切除2～4mm后作为外植体，接种到诱导培养基上愈伤，
B、不定芽分化培养，将在诱导培养基上培养培养一段时间后的愈伤组织接种到分化培养基上分化培养不定芽，
C、增殖培养，将分化的不定芽分别转接到增殖培养基上，增殖幼苗，
D、炼苗移栽，将增殖后的幼苗从增殖培养基中取出，移栽至混合基质中生根。
一种瓦苇属蓝镜玉露的离体培养与快速繁殖方法，包括以下步骤：
A、诱导培养，将蓝镜玉露去除闭合花蕾的外苞片，再将花蕾连同花柄逐个切下，经流水冲洗20min以上，用洗洁精浸泡30min后用自来水冲洗干净，超净台上以75％的乙醇冲洗30s，无菌水冲洗后，用0.1％HgCl2溶液浸泡3-9min进行灭菌处理，并不停的搅拌，使消毒更彻底，用无菌水冲洗后置于无菌滤纸上，并将花柄底部切除2～4mm后作为外植体，接种到诱导培养基上愈伤，
B、不定芽分化培养，将在诱导培养基上培养一段时间后的愈伤组织接种到分化培养基上分化培养不定芽，
C、增殖培养，将分化的不定芽分别转接到增殖培养基上，增殖幼苗，
D、炼苗移栽，将增殖后长到2～3cm高的幼苗取出，并洗净其基部的培养基，风干3-4d后移栽至混合基质中。
在上述的瓦苇属蓝镜玉露的离体培养与快速繁殖方法中，在步骤A中，所述的诱导培养基以MS培养基作为基本培养基，添加3.0wt％的蔗糖和0.7wt％的琼脂，灭菌前pH值调整为5.8。
在上述的瓦苇属蓝镜玉露的离体培养与快速繁殖方法中，在步骤A中，所述的诱导培养基为MS+6-BA 2.0mg/L+NAA 0.2mg/L，添加3.0wt％的蔗糖和0.7wt％的琼脂，灭菌前pH值调整为5.8；或所述的诱导培养基为MS+6-BA 2.0mg/L+KT 1.0mg/L+NAA 0.2mg/L，添加3.0wt％的蔗糖和0.7wt％的琼脂，灭菌前pH值调整为5.8；或所述的诱导培养基为MS+6-BA1.0mg/L+TDZ 0.3mg/L，添加3.0wt％的蔗糖和0.7wt％的琼脂，灭菌前pH值调整为5.8。
在上述的瓦苇属蓝镜玉露的离体培养与快速繁殖方法中，在步骤A中，所述的诱导培养基为MS+6-BA 1.0mg/L+TDZ 0.3mg/L，添加3.0wt％的蔗糖和0.7wt％的琼脂，灭菌前pH值调整为5.8。
在上述的瓦苇属蓝镜玉露的离体培养与快速繁殖方法中，在步骤B中，所述的分化培养基为MS+6-BA 1.0mg/L+TDZ 0.5mg/L。
在上述的瓦苇属蓝镜玉露的离体培养与快速繁殖方法中，在步骤C中，所述的增殖培养基为MS+6-BA 0.4mg/L+TDZ 0.4mg/L+NAA 0.1mg/L。
在上述的瓦苇属蓝镜玉露的离体培养与快速繁殖方法中，在步骤D中，所述的混合基质为重量比为5:3:2的泥炭、椰糠和蛭石的混合物。
在上述的瓦苇属蓝镜玉露的离体培养与快速繁殖方法中，步骤A-C中的培养条件分别为：培养温度25±2℃，光照强度1500～2000Lux，光照时间12h/d。
在上述的瓦苇属蓝镜玉露的离体培养与快速繁殖方法中，诱导培养的时间为20-40天，不定芽分化培养的时间为20-30天，增殖培养的时间为20-45天，炼苗移栽的时间为15-30天。
与现有的技术相比，本发明的优点在于：
1、本发明省去组培苗生根阶段，直接炼苗生根，在保证生根成活率的同时，大大缩短了繁苗进程。
2、本发明以蓝镜玉露花蕾为外植体，提供了其离体培养及快速繁殖的方法，建立了蓝镜玉露优质组培苗工厂化生产程序。
具体实施方式
以下实施例对发明进行详细描述，是说明性的而不是限定性的，可按照所限定范围列出若干个实施例，因此不脱离本发明总体构思下的变化和修改，应属于本发明的保护范围之内。
实施例1
一种瓦苇属蓝镜玉露的离体培养与快速繁殖方法，包括以下步骤：
A、诱导培养，将蓝镜玉露去除闭合花蕾的外苞片，再将花蕾连同花柄逐个切下，这里的逐个切下是指将带有花柄的花蕾切下，花蕾连接有花柄，经流水冲洗20min以上，用洗洁精浸泡30min后用自来水冲洗干净，超净台上以75％的乙醇冲洗30s，无菌水冲洗后，用0.1％HgCl2溶液浸泡3-9min，优选浸泡6min进行灭菌处理，并不停的搅拌，使消毒更彻底，用无菌水冲洗后置于无菌滤纸上，并将花柄底部切除2～4mm后作为外植体，这是由于灭菌后花柄底部有损伤，将损伤部位切除后再接种到诱导培养基上愈伤，接种时花柄接在诱导培养基上，所述的诱导培养基为MS+6-BA 1.0mg/L+TDZ 0.3mg/L，添加3.0wt％的蔗糖和0.7wt％的琼脂，灭菌前pH值调整为5.8，培养温度25±2℃，光照强度1500～2000Lux，光照时间12h/d，培养20-40天，
B、不定芽分化培养，将在诱导培养基上培养一段时间后的愈伤组织接种到分化培养基上分化培养不定芽，愈伤组织是指花柄伤口表面形成的一团薄壁细胞，所述的分化培养基为MS+6-BA 1.0mg/L+TDZ 0.5mg/L，所述的增殖培养基为MS+6-BA 0.4mg/L+TDZ0.4mg/L+NAA 0.1mg/L，培养温度25±2℃，光照强度1500～2000Lux，光照时间12h/d，培养20-30天，
C、增殖培养，将分化的不定芽分别转接到增殖培养基上，增殖幼苗，所述的增殖培养基为MS+6-BA 0.4mg/L+TDZ 0.4mg/L+NAA 0.1mg/L，培养温度25±2℃，光照强度1500～2000Lux，光照时间12h/d，培养20-45天，
D、炼苗移栽，将增殖后长到2～3cm高的幼苗取出，并洗净其基部的培养基，风干3-4d后移栽至混合基质中，所述的混合基质为重量比为5:3:2的泥炭、椰糠和蛭石的混合物，予以遮阴，炼苗生根，15-30天后得到蓝镜玉露的组培苗，其中炼苗15天后即可生根，生根成活率可达到70％，30天后生根成活率可达到95％以上。
对比例1-2
本对比例与实施例1的步骤基本相同，不同之处在于，在步骤A中，对比例1的诱导培养基为MS+6-BA 2.0mg/L+NAA 0.2mg/L，添加3.0wt％的蔗糖和0.7wt％的琼脂，灭菌前pH值调整为5.8。
在步骤A中，对比例2的诱导培养基为MS+6-BA 2.0mg/L+KT 1.0mg/L+NAA 0.2mg/L，添加3.0wt％的蔗糖和0.7wt％的琼脂，灭菌前pH值调整为5.8。
对比例1和2分别每瓶接2个带花柄的花蕾，每次处理接种30个，重复3次。30天后统计愈伤组织形成率，并观察其生长情况。
外植体接种15d后开始膨大，30天后，在边缘产生较多淡绿色的瘤状组织,并逐渐发展成为瘤状突起的愈伤组织。40d时，大部分形成愈伤组织。由表1结果可知，不同的植物生长调节剂均能诱导形成愈伤组织，但不同植物生长调节剂启动速度和质量存在较大差异。其中实施例1中的诱导培养基形成愈伤组织能力最强，达到93.3％，说明花蕾外植体在此培养基上细胞分裂旺盛。其次为对比例2，对比例1诱导率偏低，说明该培养基不适宜为外植体培养基。因此，实施例1的MS+6-BA 1.0mg/L+TDZ 0.3mg/L为最适的外植体诱导培养基。
表1不同植物生长调节剂处理对外植体的诱导的影响
Figure BDA0001763286660000061
注：不同小写字母表示不同处理间在p＜0.05水平差异有统计学意义，下同。
对比例3-6
本对比例与实施例1的步骤基本相同，不同之处在于，在步骤B中，对比例3的分化培养基为MS+6-BA1.0mg/L，对比例4的分化培养基为MS+6-BA 1.0mg/L+TDZ 1.0mg/L，对比例5的分化培养基为MS+TDZ 1.0mg/L，对比例6的分化培养基为MS+6-BA 0.5mg/L+TDZ1.0mg/L。
培养10d左右开始出现绿色芽点，芽点不断生长，逐渐长成不定芽，培养30d后统计芽的分化率。由表2可以得知，愈伤组织在不同培养基上均能诱导出不定芽，但不同生长调节剂浓度对其分化的影响存在较大差异。其中实施例1分化率最高，而对比例6分化率最低，即6-BA为零时，分化率最低，由此可见，6-BA在不定芽分化过程中起决定性作用。处理对比例3、4和实施例1比较，当不添加TdZ时，分化率偏低，当TDZ过高时，玻璃化较严重，所以适当的TDZ浓度可以增加分化率。比较处理实施例1和对比例6可知，6-BA浓度高于TDZ时，可提高分化率，当TDZ较6-BA浓度低时，分化率下降。综上所述，实施例1的MS+6-BA 1.0mg/L+TDZ0.5mg/L为不定芽分化最适培养基。
表2不同6-BA和TDZ不同浓度组合对不定芽分化的影响
Figure BDA0001763286660000071
对比例7-10
本对比例与实施例1的步骤基本相同，不同之处在于，在步骤C中，对比例7的增殖培养基为MS+TDZ 0.3mg/L+NAA 0.1mg/L，对比例8的增殖培养基为MS+6-BA 0.2mg/L+TDZ0.3mg/L+NAA 0.1mg/L，对比例9的增殖培养基为MS+6-BA 0.6mg/L+TDZ 0.4mg/L+NAA0.1mg/L，对比例10的增殖培养基为MS+6-BA 0.8mg/L+TDZ 0.4mg/L+NAA 0.1mg/L，培养45d后，统计增殖幼苗的增殖系数及生长情况。
由表3可知，就增殖系数而言，以实施例1的增殖培养基MS+6-BA 0.4mg/L+TDZ0.4mg/L+NAA 0.1mg/L最高，达到5.0，但有较轻微的玻璃化现象；而对比例7和8均无玻璃化现象，但其增殖系数较处理实施例1低。此外，当6-BA浓度继续增加到0.6mg/L和0.8mg/L时，玻璃化程度越来越严重，分化出的丛生芽叶片细长、透明，且增殖系数也有所下降。综合考虑，当6-BA浓度为0.4mg/L时增殖效果较好。
表3不同6-BA浓度对蓝镜玉露增殖生长的影响
Figure BDA0001763286660000081
综上所述，蓝镜玉露作为一种新型的室内景观花卉，具有较高的观赏价值和市场前景。本发明以蓝镜玉露花蕾为外植体，提供了其离体培养及快速繁殖的方法，建立了蓝镜玉露优质组培苗工厂化生产程序，同时本发明省去组培苗生根阶段，直接炼苗生根，在保证生根成活率的同时，大大缩短了繁苗进程。
虽然，上文中已经用一般性说明、具体实施方式及试验，对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

Claims (4)

1.一种瓦苇属蓝镜玉露的离体培养与快速繁殖方法，其特征在于，包括以下步骤：
A、诱导培养，将蓝镜玉露去除闭合花蕾的外苞片，再将花蕾连同花柄逐个切下，经流水冲洗20min以上，用洗洁精浸泡30min后用自来水冲洗干净，超净台上以75％的乙醇冲洗30s，无菌水冲洗后，用0.1％HgCl2溶液浸泡3-9min进行灭菌处理，并不停的搅拌，使消毒更彻底，用无菌水冲洗后置于无菌滤纸上，并将花柄底部切除2～4mm后作为外植体，接种到诱导培养基上愈伤，
B、不定芽分化培养，将在诱导培养基上培养一段时间后的愈伤组织接种到分化培养基上分化培养不定芽，
C、增殖培养，将分化的不定芽分别转接到增殖培养基上，增殖幼苗，
D、炼苗移栽，将增殖后长到2～3cm高的幼苗取出，并洗净其基部的培养基，风干3-4d后移栽至混合基质中，
在步骤A中，所述的诱导培养基为MS+6-BA 2.0mg/L+NAA 0.2mg/L，添加3.0wt％的蔗糖和0.7wt％的琼脂，灭菌前pH值调整为5.8；或所述的诱导培养基为MS+6-BA 2.0mg/L+KT1.0mg/L+NAA0.2mg/L，添加3.0wt％的蔗糖和0.7wt％的琼脂，灭菌前pH值调整为5.8；或所述的诱导培养基为MS+6-BA 1.0mg/L+TDZ 0.3mg/L，添加3.0wt％的蔗糖和0.7wt％的琼脂，灭菌前pH值调整为5.8，
在步骤B中，所述的分化培养基为MS+6-BA 1.0mg/L+TDZ0.5mg/L，
在步骤C中，所述的增殖培养基为MS+6-BA 0.4mg/L+TDZ 0.4mg/L+NAA 0.1mg/L。
2.根据权利要求1所述的瓦苇属蓝镜玉露的离体培养与快速繁殖方法，其特征在于，在步骤D中，所述的混合基质为重量比为5:3:2的泥炭、椰糠和蛭石的混合物。
3.根据权利要求1所述的瓦苇属蓝镜玉露的离体培养与快速繁殖方法，其特征在于，步骤A-C中的培养条件分别为：培养温度25±2℃，光照强度1500～2000Lux，光照时间12h/d。
4.根据权利要求1所述的瓦苇属蓝镜玉露的离体培养与快速繁殖方法，其特征在于，诱导培养的时间为20-40天，不定芽分化培养的时间为20-30天，增殖培养的时间为20-45天，炼苗移栽的时间为15-30天。
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