CN108976189A - 一种快速制备异淡红乳菇素的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种快速制备异淡红乳菇素的方法。本发明提供的方法不需要采用反复硅胶柱层析，仅使用可以工业化大生产的大孔树脂和微孔树脂即可制备纯度高达99％以上的异淡红乳菇素和3β,8β,5,13‑二环氧‑5,7(13)‑乳菇二烯，制备方法简单，应用前景广阔。

Description

一种快速制备异淡红乳菇素的方法
技术领域
本发明涉及化学领域，尤其涉及一种快速制备异淡红乳菇素的方法。
背景技术
异淡红乳菇素和3β,8β,5,13-二环氧-5,7(13)-乳菇二烯是存在于绒白乳菇子实体中的两种化合物，研究表明异淡红乳菇素和3β,8β,5,13-二环氧-5,7(13)-乳菇二烯为有效的血管内皮生长因子165激活剂，二者可以通过激活血管内皮生长因子165表达促进骨髓间充质干细胞成骨分化(中国专利申请号：2018109771474；2018109771489)。
异淡红乳菇素和3β,8β,5,13-二环氧-5,7(13)-乳菇二烯的化学结构式如图1所示。
目前，制备异淡红乳菇素或3β,8β,5,13-二环氧-5,7(13)-乳菇二烯的方法无不依赖于反复硅胶柱层析，甚至需要借助凝胶柱层析。但是，无论是硅胶柱层析还是凝胶柱层析均只能局限于实验室规模，还无法适用于工厂大规模分离制备。
工厂大规模制备最常用的柱层析当属大孔树脂和微孔树脂，大孔树脂可以实现粗分，微孔树脂可以相对实现细分。但是，由于大孔树脂和微孔树脂理论塔板数不高，只能适用于一小部分化合物的工业化分离纯化，且需要选择好恰当的树脂型号。
发明内容
本发明的目的在于提供一种快速制备异淡红乳菇素的方法。
为实现上述目的，本发明提供了以下技术方案：
一种制备异淡红乳菇素的方法，包括如下步骤：
步骤S1、绒白乳菇子实体的提取
干燥的绒白乳菇子实体经粉碎后用乙醇溶液常温浸泡提取，滤过，滤液减压回收乙醇至无醇味，得到绒白乳菇子实体的提取浓缩液，脱脂棉过滤备用。
步骤S2、LX-68大孔树脂富集
上样和吸附：计算需要使用的LX-68大孔树脂，然后装填在长径比为5:1的树脂柱内，在吸附流速为1.5BV/h的条件下上样，上样结束后关闭树脂柱的阀门，静置吸附0.5h；
洗脱：先用40％乙醇以3BV/h洗脱流速洗脱2h，再用75％乙醇以4BV/h洗脱流速进行洗脱，收集7-7.5BV的75％乙醇洗脱液，浓缩至无醇味，得到LX-68大孔树脂富集液。
步骤S3、MCI GEL CHP20P微孔树脂纯化
上样和吸附：计算需要使用的MCI GELCHP20P微孔树脂，然后将该MCI GELCHP20P微孔树脂装填在长径比为8:1的树脂柱内，在吸附流速为1.5BV/h的条件下上样，上样结束后关闭树脂柱阀门，静置吸附0.5h；
洗脱：先用30％甲醇以3BV/h洗脱流速洗脱2h，再用60％甲醇以4BV/h洗脱流速进行洗脱，收集4.2～4.5BV的60％甲醇洗脱液，浓缩干燥即得到异淡红乳菇素。
进一步地，步骤S1采用95％乙醇提取。
进一步地，步骤S1每公斤子实体使用5L 95％乙醇。
进一步地，步骤S1共浸泡提取3次，每次12h。
进一步地，步骤S2按照每150g提取浓缩液使用100g大孔树脂的量计算需要使用的LX-68大孔树脂。
进一步地，步骤S3按照每100g LX-68大孔树脂富集液使用100g微孔树脂的量计算需要使用的MCI GEL CHP20P微孔树脂。
本发明提供的方法不需要采用反复硅胶柱层析，仅使用可以工业化大生产的大孔树脂和微孔树脂即可制备纯度高达99％以上的异淡红乳菇素和3β,8β,5,13-二环氧-5,7(13)-乳菇二烯，制备方法简单，应用前景广阔。
附图说明
图1是异淡红乳菇素和3β,8β,5,13-二环氧-5,7(13)-乳菇二烯的化学结构式。
图2是异淡红乳菇素的HPLC色谱图，A为异淡红乳菇素对照品，B为本发明制备得到的异淡红乳菇素。
图3是3β,8β,5,13-二环氧-5,7(13)-乳菇二烯的HPLC色谱图，A为3β,8β,5,13-二环氧-5,7(13)-乳菇二烯对照品，B为本发明制备得到的3β,8β,5,13-二环氧-5,7(13)-乳菇二烯。
具体实施方式
一、实验材料
LX-68大孔树脂购自郑州和成新材料科技有限公司；MCI GEL CHP20P微孔树脂购自三菱化学；绒白乳菇新鲜子实体采自云南，洗净后风干。
二、实验方法和实验结果
1、绒白乳菇子实体的提取
干燥的绒白乳菇子实体经粉碎后用95％乙醇常温浸泡提取，每公斤子实体使用5L的95％乙醇，共浸泡提取3次，每次12h，滤过，合并滤液，减压回收乙醇至无醇味，得到绒白乳菇子实体的提取浓缩液，脱脂棉过滤备用。
2、LX-68大孔树脂富集
上样和吸附：按照每150g提取浓缩液使用100g大孔树脂的量计算需要使用的LX-68大孔树脂，然后将该LX-68大孔树脂装填在长径比为5:1的树脂柱内，在吸附流速为1.5BV/h的条件下上样，上样结束后关闭树脂柱的阀门，静置吸附0.5h；
洗脱：先用40％乙醇以3BV/h洗脱流速洗脱2h，再用75％乙醇以4BV/h洗脱流速进行洗脱，收集7-7.5BV的75％乙醇洗脱液，浓缩至无醇味，得到LX-68大孔树脂富集液。
3、MCI GEL CHP20P微孔树脂纯化
上样和吸附：按照每100g LX-68大孔树脂富集液使用100g微孔树脂的量计算需要使用的MCI GEL CHP20P微孔树脂，然后将该MCI GEL CHP20P微孔树脂装填在长径比为8:1的树脂柱内，在吸附流速为1.5BV/h的条件下上样，上样结束后关闭树脂柱阀门，静置吸附0.5h；
洗脱：先用30％甲醇以3BV/h洗脱流速洗脱2h，再用60％甲醇以4BV/h洗脱流速进行洗脱，分别收集4.2～4.5BV、7.6～8.0BV的60％甲醇洗脱液，浓缩干燥即分别得到异淡红乳菇素、3β,8β,5,13-二环氧-5,7(13)-乳菇二烯。
使用HPLC法分别测定上述方法制备得到的异淡红乳菇素、3β,8β,5,13-二环氧-5,7(13)-乳菇二烯的纯度，色谱柱采用Agilent ZORBAX Extend-C18(4.6×250mm，5μm)，流动相及洗脱梯度为40min内乙腈浓度从0上升至100％，流速为1.0mL/min，异淡红乳菇素检测波长为215nm，3β,8β,5,13-二环氧-5,7(13)-乳菇二烯检测波长为255nm，供试品溶液的浓度为1mg/mL，上样量为10μL。
结果本发明方法制备得到的异淡红乳菇素的HPLC归一化纯度为99.2％，3β,8β,5,13-二环氧-5,7(13)-乳菇二烯的HPLC归一化纯度为99.5％。色谱图如图2、3所示。
综上可见，本发明提供的方法不需要采用反复硅胶柱层析，仅使用可以工业化大生产的大孔树脂和微孔树脂即可制备纯度高达99％以上的异淡红乳菇素和3β,8β,5,13-二环氧-5,7(13)-乳菇二烯，制备方法简单，应用前景广阔。

Claims (6)

1.一种制备异淡红乳菇素的方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤S1、绒白乳菇子实体的提取
干燥的绒白乳菇子实体经粉碎后用乙醇溶液常温浸泡提取，滤过，滤液减压回收乙醇至无醇味，得到绒白乳菇子实体的提取浓缩液，脱脂棉过滤备用。
步骤S2、LX-68大孔树脂富集
上样和吸附：计算需要使用的LX-68大孔树脂，然后装填在长径比为5:1的树脂柱内，在吸附流速为1.5BV/h的条件下上样，上样结束后关闭树脂柱的阀门，静置吸附0.5h；
洗脱：先用40％乙醇以3BV/h洗脱流速洗脱2h，再用75％乙醇以4BV/h洗脱流速进行洗脱，收集7-7.5BV的75％乙醇洗脱液，浓缩至无醇味，得到LX-68大孔树脂富集液。
步骤S3、MCI GEL CHP20P微孔树脂纯化
上样和吸附：计算需要使用的MCI GEL CHP20P微孔树脂，然后将该MCI GEL CHP20P微孔树脂装填在长径比为8:1的树脂柱内，在吸附流速为1.5BV/h的条件下上样，上样结束后关闭树脂柱阀门，静置吸附0.5h；
洗脱：先用30％甲醇以3BV/h洗脱流速洗脱2h，再用60％甲醇以4BV/h洗脱流速进行洗脱，收集4.2～4.5BV的60％甲醇洗脱液，浓缩干燥即得到异淡红乳菇素。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤S1采用95％乙醇提取。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：步骤S1每公斤子实体使用5L 95％乙醇。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：步骤S1共浸泡提取3次，每次12h。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤S2按照每150g提取浓缩液使用100g大孔树脂的量计算需要使用的LX-68大孔树脂。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤S3按照每100g LX-68大孔树脂富集液使用100g微孔树脂的量计算需要使用的MCI GEL CHP20P微孔树脂。
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