CN108938803A

CN108938803A - 一种用于手足口病的中药组合物

Info

Publication number: CN108938803A
Application number: CN201810998057.3A
Authority: CN
Inventors: 肖伟; 闫明; 韦迎春; 刘秋; 王振中; 吴云; 连洁
Original assignee: Jiangsu Kanion Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Jiangsu Kanion Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2018-08-29
Filing date: 2018-08-29
Publication date: 2018-12-07
Anticipated expiration: 2038-08-29
Also published as: CN108938803B

Abstract

本发明提出了一种组合物在制备用于手足口病的药物的应用，其特征在于，所述组合物由下述重量份比例的原料药制成：金银花5～30重量份，鱼腥草5～30重量份，赤芍5～20重量份，艾叶5～15重量份，薄荷5～15重量份。通过体外药效学实验证明了本发明提出的组合物或其制剂在预防和治疗手足口病方面有着显著地作用，其无论是预防还是治疗上对病毒的抑制作用均显著强于病毒唑。而且本发明的药物细胞毒力小，临床应用安全性更好。

Description

一种用于手足口病的中药组合物

技术领域

本发明涉及中药技术领域，具体涉及一种中药组合物在治疗或预防手足口的中药组合物。

背景技术

手足口病(Hand-foot-mouth disease，HFMD)是一种由肠道病毒引起的常见传染病，引起该病的肠道病毒有20多种(型)，该病多发于5岁以下儿童，表现为口痛、厌食、低热、手、足、口腔等部位出现小疱疹和小溃疡，虽然多数患者一周左右自愈，但仍存在部分患儿会因此引发心肌炎、肺水肿等并发症，甚至因病情发展迅速而导致死亡。该病目前缺乏有效的治疗药物。

手足口病感染途径包括消化道、呼吸道和接触传播。因此，在儿童中传播速度快，发病范围广。目前，手足口病的发病时间无确定性，一年四季均可发病，且以夏秋季多见。该病爆发时，容易在幼儿园引起集体感染和家庭聚集发病的现象。由于其传播途径多，且感染性强，因此可在短时间内造成大范围的流行。且存在隐形感染，导致流行时间长。

临床中对于手足口病的治疗原则则主要是对症处理为主。在患病期间，加强对患儿的护理，做好口腔卫生，饮食以流食及半流食为主。由于患儿可能并发心肌炎、脑炎等严重的并发症，因此在治疗室需要及时复查和诊断。但对该病目前尚无特殊的治疗药物和方法。

发明内容

本发明的目的在于弥补现有技术的不足，提供一种中药组合物，该药物可在手足口爆发时，起到较好的预防和治疗作用。

具体地，本发明提出了一种组合物在制备预防和/或治疗手足口病的药物的应用，其特征在于，所述组合物由下述重量份比例的原料药制成：金银花5～30重量份，鱼腥草5～30重量份，赤芍5～20重量份，艾叶5～15重量份，薄荷5～15重量份。所述手足口病优选由EV71病毒引起的疾病。

所述组合物优选由下述重量份比例的原料药制成：金银花25～30重量份，鱼腥草25～30重量份，赤芍15～20重量份，艾叶10～15重量份，薄荷5～10重量份。

进一步地，所述组合物由下述重量份比例的原料药制成：金银花30重量份，鱼腥草30重量份，赤芍15重量份，艾叶5重量份，薄荷5重量份。

进一步地，所述组合物由下述重量份比例的原料药制成：金银花30重量份，鱼腥草27重量份，赤芍18重量份，艾叶9重量份，薄荷6重量份。

进一步地，所述组合物由下述重量份比例原料药制成：金银花30重量份，鱼腥草30重量份，赤芍18重量份，艾叶12重量份，薄荷6重量份。

进一步地，所述组合物由下述重量份比例原料药制成：金银花30重量份，鱼腥草25重量份，赤芍12重量份，艾叶9重量份，薄荷6重量份。

优选地，所述组合物由下述重量份比例原料药制成：金银花25重量份，鱼腥草25重量份，赤芍15重量份，艾叶10重量份，薄荷5重量份。

本发明的组合物可以直接研磨成粉，也可以是经过本领域常规手段制得的提取物等。本发明组合物中使用的中药也可以以直接研磨成粉、提取物、或者其它加工形态的方式使用。

具体地，所述手足口药物选自口服给药剂型、注射给药剂型或外用给药制剂。

进一步地，用于手足口病的药物选自汤剂、颗粒剂、胶囊剂、片剂、口服液、丸剂、酊剂、糖浆剂、栓剂、凝胶剂、喷雾剂、注射剂。

具体地，所述组合物的制备包括以下步骤：

步骤A:按照原料药的重量比例称取中药材，金银花净选、赤芍粗粉碎、薄荷全草粉碎，鱼腥草和艾叶直接备用即可。

步骤B:金银花用6-12倍量50％～75％乙醇回流提取2次，每次0.5h～2h，提取液合并滤过，回收乙醇得浸膏1，比重为1.20～1.30(60～80℃)，干燥，得干膏粉1，备用。

步骤C:加水3～10倍，加热至60℃～100℃，依次投入鱼腥草、艾叶、薄荷，提取挥发油3h-8h，药渣加赤芍粗粉，加水8-12倍量，煎煮2次，每次0.5h～2h，提取液合并滤过，浓缩至相对密度为1.02～1.10(60℃)，得清膏，加入95％乙醇，至含醇量60％～80％，醇沉，静置8～32小时，上清液回收乙醇，得相对密度为1.20～1.30(60℃)的稠膏2，干燥，粉碎得干膏粉2，备用。

步骤D：将所得的挥发油经处理或直接和上述干膏粉混合即得。也可以采用胶体磨研磨方式进行包合，得到挥发油包合物，粉碎后再和上述干膏粉混合。

进一步地，当用于手足口病的药物选自颗粒剂时，其由以下步骤制成：

步骤B:金银花用12倍量50％乙醇回流提取2次，每次0.5h，提取液合并滤过，回收乙醇得浸膏1，比重为1.20～1.30(60～80℃)，干燥，得干膏粉1，备用。

步骤C:加水8倍，加热至80℃，依次投入鱼腥草、艾叶、薄荷，提取挥发油5h，药渣加赤芍粗粉，加水10倍量，煎煮2次，每次1h，提取液合并滤过，浓缩至相对密度为1.02～1.05(60℃)，得清膏，加入95％乙醇，至含醇量70％，醇沉，静置12-32小时，上清液回收乙醇，得相对密度为1.20～1.30(60℃)的稠膏2，干燥，粉碎得干膏粉2，备用。

步骤D：将所得的挥发油，采用胶体磨研磨方式进行包合，得到挥发油包合物3，粉碎后，备用。

将干膏粉1、干膏粉2、包合物3与适当药学上可接受的辅料混合均匀，干法制粒，内包装即得。

本发明通过体外药效学实验证明了本发明提出的组合物或其制剂在预防和治疗手足口病方面有着显著地作用，其无论是预防还是治疗上对病毒的抑制作用均显著强于病毒唑。而且本发明的药物细胞毒力小，临床应用安全性更好。其为治疗或预防手足口病的药物提供了新的选择。

具体实施方式

如前所述，本发明旨在提供一种组合物在制备用于手足口病的药物的应用。以下将结合实验例的内容进行具体描述。

特别需要指出的是，针对本发明所做出的类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。

本发明如未注明具体条件者，均按照常规条件或制造商建议的条件进行，所用原料药或辅料，以及所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。

本发明组合物的体外药效学试验

1、材料和方法

细胞和病毒：人横纹肌肉瘤细胞株(RD)，购自美国ATCC公司，使用含10％牛血清的DMEM培养液进行培养，连续传代3次供试验研究用。人手足口病病毒(肠道病毒)EV71病毒株(购自中国疾病防御控制中心)。EV71病毒接种于单层RD细胞上，出现75％病变以上收获，冻融3次后吹打离心(5000r/min)，10min，取上清液，分装后，置于-80℃冰箱冷冻保存备用。本发明药物：实施例2制得的颗粒剂。病毒唑注射液：江苏苏星制药有限公司生产，100mg/ml，使用蒸馏水配制成3mg/ml的样品，4℃保存备用。

2、本发明药物对病毒毒力的测定实验

取RD细胞接种于96孔细胞培养板上，100μl/孔，放置于35℃、5％CO₂培养箱中培养24h，当细胞长成单层时，弃去培养液。将本发明药物(实施例2制得的颗粒剂)配置成25.10mg/ml的母液，然后依次稀释成为8个浓度的样品溶液，稀释倍数分别为2，4，5，8，10，15，20，30，并在每个细胞培养板上每孔加入100μl，每个浓度下制备4平行组，采用倒置显微镜观察细胞病变，观察5天后，对各浓度的药物进行测定，结果如表1所示，采用Reed-Muench法测定细胞无毒的最大浓度(TD₀)和半数中毒浓度(TD₅₀)。

表1本发明药物对RD细胞的毒力

结论：药物浓度在小于5.020mg/ml时，没有观察到细胞病变。药物最大浓度(TD₀)和半数中毒浓度(TD₅₀)分别为5.020mg/ml和6.275mg/ml。

3、EV71病毒力测试

取RD细胞接种于96孔细胞培养板上，100μl/孔，放置于35℃、5％CO²培养箱中培养24h，当细胞长成单层时，弃去培养液。将EV71病毒用含2％牛血清的维持液(2％牛血清、1％双抗的DMEM，0.25％胰蛋白酶溶液)稀释，稀释为10^-1～10^-10，依次横向接种在细胞培养板中的单层RD细胞上，每个浓度下接种8份，并设置正常对照和空白对照组，共计96孔，将接种后的细胞培养板放置于35℃、5％CO₂的培养箱中，进行振摇30min，使病毒均匀吸附。采用倒置显微镜观察细胞病变(CPE)，结果如表2所示，并采用Reed-Muench法测定半数组织培养感染量(TCID₅₀)。

TCID₅₀计算公式：

TCID₅₀＝10^a

a＝高于50％细胞病变率的稀释度的对数+距离比例*稀释度对数之间的差值。

距离比例＝(高于50％病变率的百分数-50)/(高于50％病变率的百分数-低于50％病变率的百分数)。

表2 EV71对RD细胞的毒力测定(Reed-Muench)

结论：EV71病毒的TCID₅₀为TCID₅₀＝10^-5.5/ml。

4、预防性抑毒实验

前期细胞培养与毒力测试实验相同。待细胞长成单层后，吸取舍弃培养液，在每孔细胞中预先加入3.1375mg/ml、2.510mg/ml、1.67mg/ml的本发明药物溶液(对应为高、中、低浓度实验组)、病毒唑溶液(阳性药对照组)以及维持液各50μl，每组设置4复孔，充分接触6h后，舍弃孔内液体，各自加入50μl病毒液(稀释度为10^-5.5/ml)，充分吸附后，放置2小时后舍弃病毒液，加入100μl维持液，同时每孔均设正常细胞对照(空白组)和病毒对照(造模组)，继续培养，24h后向每个孔中加入5mg/ml的MTT 12μl，继续培养5h，黄色的MTT被活细胞的线粒体脱氢酶还原成蓝色的甲簪结晶。弃去MTT、每孔加入DMSO 100μl，振荡混匀30min后，在波长490nm下测定吸光度(OD)，实验重复3次，计算药物对病毒的生产抑制率。

数据处理方法：

细胞存活率(％)：正常细胞对照组细胞存活率为100％，以各组OD值进行相对值计算，获得细胞存活率(％)。

病毒抑制率计算公式(％)：(药物处理组平均OD值-病毒对照组平均OD值)/(正常细胞对照组平均OD值-病毒对照组平均OD值)*100％。

表3预防性抑毒实验各处理组24h后的OD值(x±s)

表4预防性抑毒实验各处理组24h后的存活率(x±s)

表5预防性抑毒实验各处理组24h后的病毒抑制率(％)

	低浓度实验组	中浓度实验组	高浓度实验组	阳性药对照组
					病毒抑制率	65.52％	73.98％	79.83	64.46％

结论：本发明的药物作预防性给药对病毒的生产抑制随着浓度的升高而增强，各浓度实验组相对于造模组都有显著性差异。而且，24h后本发明药物对病毒的抑制率均大于阳性药对照组，其中，高浓度组达到了79.83％。

5、治疗性抑毒实验-1

前期细胞培养与毒力测试实验相同。待细胞长成单层后，每孔接种50μl病毒液(稀释度为10^-5.5/ml)，混合均匀后，吸附2小时，吸附充分后，舍弃病毒液，分别加入不同浓度的药物溶液以及病毒唑药液各50μl(和预防性抑毒实验相同)，维持液50μl，每组设置4孔培养液，每组均设正常细胞对照和病毒对照，充分接触24h后，向每个孔中加入5mg/ml的MTT 12μl，继续培养5h，黄色的MTT被活细胞的线粒体脱氢酶还原成蓝色的甲簪结晶。弃去MTT、每孔加入DMSO 100μl，振荡混匀30min后，在波长490nm下测定吸光度，实验重复3次，计算药物对病毒的生产抑制率。

表6治疗性抑毒实验各处理组24h后的OD值(x±s)

表7治疗性抑毒实验各处理组24h后的存活率(x±s)

表8治疗性抑毒实验各处理组24h后的病毒抑制率(％)

	低浓度实验组	中浓度实验组	高浓度实验组	阳性药对照组
					病毒抑制率	66.14％	73.39％	86.84％	47.28％

结论：本发明的药物作治疗性给药对病毒的生产抑制随着浓度的升高而增强，各浓度实验组相对于造模组都有显著性差异。而且，24h后本发明药物对病毒的抑制率均显著大于阳性药对照组。

6、治疗性抑毒实验-2

前期细胞培养与毒力测试实验相同。待细胞长成单层后，每孔接种100μl病毒液(稀释度为10^-5.5/ml)，混合均匀后，吸附2小时，吸附充分后，舍弃病毒液，分别加入不同浓度的药物溶液各100μl，维持液100μl，每组设置4复孔，每组均设正常细胞对照和病毒对照(100TCID₅₀病毒液)，将接种后的细胞培养板放置于35℃、5％CO₂的培养箱中，进行振摇5天。每日在倒置显微镜下镜检CPE进展，计算50％有效浓度(EC₅₀)，并求出治疗指数(TI＝TC₅₀/EC₅₀)。

TI＝6.275*2.4/0.61＝24.69

表9治疗性抑毒实验各组CPE数据

结论：本发明药物在较低浓度(3.02mg生药/ml)时，即可产生较好的治疗效果，安全范围广，药效作用强。

实施例1中药组合物片剂的制备

原料药配比：鱼腥草：700g、金银花700g，赤芍600g，艾叶360g，薄荷360g

将干膏粉1、干膏粉2、包合物3与片剂常用的辅料混合均匀，制粒，整粒、压片、内包装即得。

实施例2中药组合物颗粒剂的制备

原药材配比：鱼腥草750g，金银花750g，赤芍450g，艾叶300g，薄荷150g。

将干膏粉1、干膏粉2、包合物3与糊精、甜菊素混合均匀，干法制粒，内包装即得。

实施例3中药组合物凝胶剂的制备

原药材配比：鱼腥草325g、金银花325g，赤芍225g、艾叶150g、薄荷75g。

步骤A：按照原料药的重量比例称取中药材，金银花净选、赤芍粗粉碎、薄荷全草粉碎、鱼腥草和艾叶直接备用。

步骤B:金银花用12倍量50％乙醇回流提取2次，每次0.5h，提取液合并滤过，回收乙醇得浸膏1，比重为1.20～1.30(60～80℃)，得稠膏1，备用。

步骤C:加水8倍，加热至80℃，依次投入鱼腥草、艾叶、薄荷，提取挥发油5h，药渣加赤芍粗粉，加水10倍量，煎煮2次，每次1h，提取液合并滤过，浓缩至相对密度为1.02～1.05(60℃)，得清膏，加入95％乙醇，至含醇量70％，醇沉，静置12-32小时，上清液回收乙醇，得相对密度为1.20～1.30(60℃)的稠膏2，备用。

步骤D：将以上稠膏1和稠膏2混合均匀，采用凝胶剂制备常用的辅料进行基质的制备，均匀地将以上稠膏混合物与基质混匀，加入保湿剂真空均质乳化后，加入挥发油混合均匀，加入制剂中常用的PH调节剂以及抑菌剂，制备成型即得。

应当指出，上述实验用的稠膏、挥发油或包合物等成分，可经过常规工序直接或加入药学上可接受的赋型剂或者增溶剂制成其它临床可接受的剂型，如胶囊、片剂、口服液体制剂、颗粒剂、注射剂等，这些剂型对于本领域技术人员而言，很容易预测也能起到治疗或预防手足口病的作用。当然，以上仅实施例也仅是本发明的优选实施方式，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims

1.一种组合物在制备用于手足口病的药物的应用，其特征在于，所述组合物由下述重量份比例的原料药制成：金银花5～30重量份，鱼腥草5～30重量份，赤芍5～20重量份，艾叶5～15重量份，薄荷5～15重量份。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述组合物由下述重量份比例的原料药制成：金银花25～30重量份，鱼腥草25～30重量份，赤芍15～20重量份，艾叶10～15重量份，薄荷5～10重量份。

3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述组合物由下述重量份比例的原料药制成：金银花30重量份，鱼腥草27重量份，赤芍18重量份，艾叶9重量份，薄荷6重量份。

4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述组合物由下述重量份比例原料药制成：金银花30重量份，鱼腥草30重量份，赤芍18重量份，艾叶12重量份，薄荷6重量份。

5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述组合物由下述重量份比例原料药制成：金银花25重量份，鱼腥草25重量份，赤芍15重量份，艾叶10重量份，薄荷5重量份。

6.根据权利要求1-5任一所述的应用，其特征在于，所述手足口药物选自口服给药剂型、注射给药剂型或外用给药制剂。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，用于手足口病的药物选自汤剂、颗粒剂、胶囊剂、片剂、口服液、丸剂、酊剂、糖浆剂、栓剂、凝胶剂、喷雾剂、注射剂。

8.根据权利要求1-5任一所述的应用，其特征在于，所述组合物的制备包括以下步骤：

步骤A:按照原料药的重量比例称取中药材，金银花净选、赤芍粗粉碎、薄荷全草粉碎，鱼腥草和艾叶备用；

步骤B:金银花用6-12倍量50％～75％乙醇回流提取，提取液滤过，回收乙醇，干燥粉碎，得干膏粉备用；

步骤C:鱼腥草、艾叶、薄荷投入提取罐中，加水3～10倍，提取挥发油，药渣加赤芍粗粉，加水8-12倍量煎煮，提取液滤过，得清膏，加入95％乙醇，至含醇量60％～80％，醇沉，静置8～32小时，上清液回收乙醇，得稠膏，干燥粉碎，得干膏粉备用；

步骤D：将上述挥发油经处理或直接和上述干膏粉混合即得。

9.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述颗粒剂是由以下步骤制成：

步骤C:鱼腥草、艾叶、薄荷加水3～10倍，提取挥发油，药渣加赤芍粗粉，加水8-12倍量煎煮，提取液滤过，得清膏，加入95％乙醇，至含醇量60％～80％，醇沉，静置8～32小时，上清液回收乙醇，得稠膏，干燥粉碎，得干膏粉备用；

步骤D：将上述挥发油包合，得到挥发油包合物，粉碎后备用；

将上述干膏粉、挥发油包合物与适当药学上可接受的辅料混合均匀，制粒即得。