CN108929892A - 一种从豆渣中提取可溶性豆渣蛋白及多肽的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种从豆渣中提取可溶性豆渣蛋白及多肽的方法，以豆制品加工过程中所产生的副产物—豆渣为原料，将豆渣与水混合，加热并搅拌使豆渣中的蛋白质溶解；待体系冷却后向体系中加入酶复合物Ⅰ进行一次抽提，离心，取上清；将一次抽提所得固相，破碎溶解，再次加入酶复合物Ⅱ进行二次抽提，离心，取上清；将两次所获得的上清混合，对酶灭活，调节其pH使可溶性蛋白及多肽析出，离心，取固相，干燥，即获得可溶性豆渣蛋白及多肽成品。本发明采用复合酶多次提取的工艺，利用碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶和纤维素酶之间的相互促进的作用，同时在豆渣中提取可溶性蛋白和多肽，提高了豆渣的利用率及经济附加值，降低了豆渣对环境的污染。
Description
技术领域
本发明涉及一种从豆渣中提取可溶性豆渣蛋白及多肽的方法，属于大豆副产物资源化利用领域。
背景技术
豆渣指的是指豆制品生产过程中所产生的一种副产物，在全球范围内，豆渣每年的产出量都非常的巨大。在我国，利用大豆生产各类豆制品已经有2000多年的历史。作为豆腐等豆制品的发源国，这些豆制品早已成为我们生活的一部分。因而我们每年对这些豆制品的需求量都非常的大，这也导致了大量的豆渣的产生，据统计，每年的豆渣产出量在2000万吨以上。目前，我们对豆渣的利用大都局限于对豆渣进行粗加工制成饲料或者肥料，豆渣的利用率不够高，这在某种程度上来说是对豆渣资源的浪费，同时还会对环境造成污染。
豆渣中含有丰富的豆渣蛋白，豆渣蛋白中的氨基酸组成与大豆蛋白的氨基酸组成(如亮氨酸、苯丙氨酸、缬氨酸、苏氨酸、赖氨酸、异亮氨酸等)基本相当，含量大于36mg/100g。同时，豆渣蛋白具有较低的过敏性。而豆渣中所含多肽是大豆蛋白的水解产物，它们是由3～6个氨基酸组成的，分子量低于1000u的低肽混合物，并含有少量的游离氨基酸、无机盐、糖类等成分。豆渣多肽在氨基酸组成上与大豆蛋白完全一致，含有人体所需的各种必需氨基酸，与大豆蛋白相比豆渣多肽化合物更容易被人体所利用和吸收，同时还具有较低的抗原性、能降低血压和血清胆固醇、促进脂肪代谢等生理机能的功效。传统的对豆渣的利用方式并不能够有效地利用到这些成分，因而我们开发了一种能够有效提取可溶性豆渣蛋白及多肽的方式。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是针对现有技术的不足，提供一种采用多酶、两次提取的方法从豆渣中同时提取可溶性豆渣蛋白和多肽。
为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下：
一种从豆渣中提取可溶性豆渣蛋白及多肽的方法，包括以下步骤：
(1)豆渣预处理：向湿豆渣中加入4～8倍体积的水，然后加热至80～100℃，同时缓慢搅拌使体系中蛋白质溶解，得豆渣悬浊液；
(2)一次抽提：将步骤(1)得到的豆渣悬浊液冷却至40～60℃，调节pH值至6～9，然后向其中加入酶复合物Ⅰ处理0.5～4h，将处理后的豆渣悬浊液离心，获得上清液A及固相混合物B；
(3)二次抽提：将步骤(2)得到的固相混合物B粉碎，过80目筛，向其中加入4～8倍体积的水，搅拌溶解，得到固相混合物B的悬浊液，调节pH至6～9，然后加入酶复合物Ⅱ，在40～60℃的条件下处理0.5-4h，将处理后的悬浊液离心，获得上清液C；
(4)提纯：将步骤(2)得到上清液A和步骤(3)得到上清液C混合得混合液，对混合液内的酶灭活，用盐酸调节混合液pH至4～7，待析出的物质不再增加，将混合液离心，获得固相D，干燥后获得可溶性豆渣蛋白及多肽成品。
步骤(2)中，所述酶复合物Ⅰ包含碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶和纤维素酶，质量比为(1～4):1:(1～8)。
优选地，所述酶复合物Ⅰ的加入量为豆渣悬浊液质量的0.1～0.5％。
步骤(3)中，所述酶复合物Ⅱ包含碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶，质量比为(1～4):1。
优选地，所述酶复合物Ⅱ的加入量为固相混合物B的悬浊液质量的0.1～0.5％。
采用复合酶多次提取的工艺，碱性蛋白酶能将大分子植物蛋白质水解成游离的氨基酸和多肽等产物，形成具有独特风味的蛋白质水解液，并在在碱性环境下得到催化；木瓜蛋白酶的作用是加速植物组织结构崩解，便于可溶性豆渣蛋白和多肽的提取；纤维素酶能够降解纤维素生成葡萄糖；在豆渣蛋白的提取过程中，碱性蛋白酶可以将大多数的蛋白分解出来，纤维素酶将豆渣中的纤维素分解使部分结合蛋白易于游离出来并被酶解，木瓜蛋白酶可以将碱性蛋白酶不能水解的苦味肽分解，使获得的蛋白和小肽具有特殊的清香；三者在提取过程中紧密配合，在豆渣中同时提取可溶性蛋白和多肽，相互促进，相比于单酶提取具有显著的进步。
步骤(4)中，所述灭活的方法为将混合液快速升温至85～95℃，保持5～20min使酶灭活，然后快速降温至20～50℃。
步骤(2)、步骤(3)和步骤(4)中，所述离心的温度为4～10℃，速率为4000～8000r/min。
步骤(4)中，所述干燥为冷冻干燥或喷雾干燥。
有益效果：
本发明采用复合酶多次提取的工艺，利用碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶和纤维素酶之间的相互促进的作用，同时在豆渣中提取可溶性蛋白和多肽，提高了豆渣的利用率及经济附加值，降低了豆渣对环境的污染。
附图说明
下面结合附图和具体实施方式对本发明做更进一步的具体说明，本发明的上述和/或其他方面的优点将会变得更加清楚。
图1为本发明提取工艺流程图。
具体实施方式
根据下述实施例，可以更好地理解本发明。
以下实施例中，碱性蛋白酶的酶活定义为：1克固体酶粉，在40±0.2℃，pH为10.5条件下，1分钟水解酪蛋白产生1微克酪氨酸为1个活力单位，用u/g表示，本碱性蛋白酶的酶活为240000u/g；
木瓜蛋白酶的酶活定义为：(紫外光分光度法)在37±0.2℃，pH为7.0条件下每分钟水解酪蛋白释出的三氯乙酸可溶物在275nm波长有吸光度与1微克酪氨酸的吸光度相当时，所需酶量即为1个活力单位，用u/g表示，本木瓜蛋白酶的酶活为200000u/g；
纤维素酶的酶活定义为：1克固体酶粉，在50±0.2℃，pH为4.8条件下，1分钟水解底物产生1微克葡萄糖的酶量为1个活力单位，用u/g表示，本纤维素酶的酶活为20000u/g。
实施例1
提取步骤如图1所示：
1)豆渣的预处理：向10kg湿豆渣中加入8倍体积的水，然后加热至80℃，同时缓慢搅拌15min，使蛋白质溶解溶解，得豆渣悬浊液；
2)一次抽提：将步骤1)得到的豆渣悬浊液冷却至50℃后，调节其pH至8.5，向其中加入豆渣悬浊液质量0.2％的酶复合物Ⅰ(所用酶为市售碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶及纤维素酶复合酶，碱性蛋白酶:木瓜蛋白酶:纤维素酶＝2:1:4)，在50℃的条件下处理3h；将处理后的豆渣悬浊液在4℃，4000r/min条件下离心15min，获得上清液A及固相混合物B；
3)二次抽提：将步骤2)得到的固相混合物B粉碎，过80目筛，向筛选后的固相中加入8倍体积50℃的水，搅拌溶解，得到固相混合物B的悬浊液；调节其pH至8.5，向其中加入固相混合物B的悬浊液质量0.2％的酶复合物Ⅱ(所用酶为市售碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶，碱性蛋白酶:木瓜蛋白酶＝2:1)，在50℃的条件下处理3h；将处理后的悬浊液在4℃，4000r/min条件下离心15min，获得上清液C；
4)提纯：将上清液A与上清液C混合得混合液，快速将混合液的温度上升至90℃，反应15min对酶灭活，反应结束后将混合液温度下降至40℃；用盐酸调节其pH至6.0，可见有物质析出；待析出的物质的量不再增加，将混合液在4℃，4000r/m条件下离心15min，获得固相D；将固相D喷雾干燥，包装，获得具有豆香味的可溶性豆渣蛋白及多肽成品。
实施例2
1)豆渣的预处理：向25kg湿豆渣中加入5倍体积的水，然后加热至85℃，同时缓慢搅拌15min，使蛋白质溶解溶解，得豆渣悬浊液；
2)一次抽提：将步骤1)得到的豆渣悬浊液冷却至55℃后，调节其pH至9.0，向其中加入豆渣悬浊液质量0.3％的酶复合物Ⅰ(所用酶为市售碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶及纤维素酶复合酶，碱性蛋白酶:木瓜蛋白酶:纤维素酶＝3:1:6)，在55℃的条件下处理4h；将处理后的豆渣悬浊液在4℃，4000r/min条件下离心20min，获得上清液A及固相混合物B；
3)二次抽提：将步骤2)得到的固相混合物B粉碎，过80目筛，向筛选后的固相中加入5倍体积55℃的水，搅拌溶解，得到固相混合物B的悬浊液；调节其pH至9.0，向其中加入固相混合物B的悬浊液质量0.3％的酶复合物Ⅱ(所用酶为市售碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶，碱性蛋白酶:木瓜蛋白酶＝3:1)，在55℃的条件下处理4h；将处理后的悬浊液在6℃，6000r/min条件下离心20min，获得上清液C；
4)提纯：将上清液A与上清液C混合得混合液，快速将混合液的温度上升至95℃，反应10min对酶灭活，反应结束后将混合液温度下降至30℃；用盐酸调节其pH至5.0，可见有物质析出；待析出的物质的量不再增加，将混合液在4℃，4000r/m条件下离心20min，获得固相D；将固相D喷雾干燥，包装，获得具有豆香味的可溶性豆渣蛋白及多肽成品。
实施例3
1)豆渣的预处理：向5kg湿豆渣中加入8倍体积的水，然后加热至90℃，同时缓慢搅拌15min，使蛋白质溶解溶解，得豆渣悬浊液；
2)一次抽提：将步骤1)得到的豆渣悬浊液冷却至40℃后，调节其pH至6.0，向其中加入豆渣悬浊液质量0.1％的酶复合物Ⅰ(所用酶为市售碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶及纤维素酶复合酶，碱性蛋白酶:木瓜蛋白酶:纤维素酶＝1:1:1)，在40℃的条件下处理2h；将处理后的豆渣悬浊液在4℃，4000r/min条件下离心20min，获得上清液A及固相混合物B；
3)二次抽提：将步骤2)得到的固相混合物B粉碎，过80目筛，向筛选后的固相中加入8倍体积40℃的水，搅拌溶解，得到固相混合物B的悬浊液；调节其pH至6.0，向其中加入固相混合物B的悬浊液质量0.1％的酶复合物Ⅱ(所用酶为市售碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶，碱性蛋白酶:木瓜蛋白酶＝1:1)，在40℃的条件下处理2h；将处理后的悬浊液在4℃，4000r/min条件下离心20min，获得上清液C；
4)提纯：将上清液A与上清液C混合得混合液，快速将混合液的温度上升至85℃，反应20min对酶灭活，反应结束后将混合液温度下降至50℃；用盐酸调节其pH至5.0，可见有物质析出；待析出的物质的量不再增加，将混合液在4℃，4000r/m条件下离心20min，获得固相D；将固相D喷雾干燥，包装，获得具有豆香味的可溶性豆渣蛋白及多肽成品。
实施例4
1)豆渣的预处理：向15kg湿豆渣中加入5倍体积的水，然后加热至100℃，同时缓慢搅拌15min，使蛋白质溶解溶解，得豆渣悬浊液；
2)一次抽提：将步骤1)得到的豆渣悬浊液冷却至60℃后，调节其pH至9.0，向其中加入豆渣悬浊液质量0.5％的酶复合物Ⅰ(所用酶为市售碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶及纤维素酶复合酶，碱性蛋白酶:木瓜蛋白酶:纤维素酶＝4:1:8)，在60℃的条件下处理2h；将处理后的豆渣悬浊液在4℃，4000r/min条件下离心20min，获得上清液A及固相混合物B；
3)二次抽提：将步骤2)得到的固相混合物B粉碎，过80目筛，向筛选后的固相中加入5倍体积60℃的水，搅拌溶解，得到固相混合物B的悬浊液；调节其pH至9.0，向其中加入固相混合物B的悬浊液质量0.5％的酶复合物Ⅱ(所用酶为市售碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶，碱性蛋白酶:木瓜蛋白酶＝4:1)，在60℃的条件下处理2h；将处理后的悬浊液在4℃，4000r/min条件下离心20min，获得上清液C；
4)提纯：将上清液A与上清液C混合得混合液，快速将混合液的温度上升至95℃，反应10min对酶灭活，反应结束后将混合液温度下降至30℃；用盐酸调节其pH至5.0，可见有物质析出；待析出的物质的量不再增加，将混合液在4℃，4000r/m条件下离心20min，获得固相D；将固相D喷雾干燥，包装，获得具有豆香味的可溶性豆渣蛋白及多肽成品。
实施例5
1)豆渣的预处理：向5kg湿豆渣中加入8倍体积的水，然后加热至90℃，同时缓慢搅拌15min，使蛋白质溶解溶解，得豆渣悬浊液；
2)一次抽提：将步骤1)得到的豆渣悬浊液冷却至40℃后，调节其pH至6.0，向其中加入豆渣悬浊液质量0.1％的酶复合物Ⅰ(所用酶为市售碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶及纤维素酶复合酶，碱性蛋白酶:木瓜蛋白酶:纤维素酶＝1:1:8)，在40℃的条件下处理2h；将处理后的豆渣悬浊液在4℃，4000r/min条件下离心20min，获得上清液A及固相混合物B；
3)二次抽提：将步骤2)得到的固相混合物B粉碎，过80目筛，向筛选后的固相中加入8倍体积40℃的水，搅拌溶解，得到固相混合物B的悬浊液；调节其pH至6.0，向其中加入固相混合物B的悬浊液质量0.1％的酶复合物Ⅱ(所用酶为市售碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶，碱性蛋白酶:木瓜蛋白酶＝1:1)，在40℃的条件下处理2h；将处理后的悬浊液在4℃，4000r/min条件下离心20min，获得上清液C；
4)提纯：将上清液A与上清液C混合得混合液，快速将混合液的温度上升至85℃，反应20min对酶灭活，反应结束后将混合液温度下降至50℃；用盐酸调节其pH至5.0，可见有物质析出；待析出的物质的量不再增加，将混合液在4℃，4000r/m条件下离心20min，获得固相D；将固相D喷雾干燥，包装，获得具有豆香味的可溶性豆渣蛋白及多肽成品。
实施例6
1)豆渣的预处理：向5kg湿豆渣中加入8倍体积的水，然后加热至90℃，同时缓慢搅拌15min，使蛋白质溶解溶解，得豆渣悬浊液；
2)一次抽提：将步骤1)得到的豆渣悬浊液冷却至40℃后，调节其pH至6.0，向其中加入豆渣悬浊液质量0.1％的酶复合物Ⅰ(所用酶为市售碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶及纤维素酶复合酶，碱性蛋白酶:木瓜蛋白酶:纤维素酶＝4:1:1)，在40℃的条件下处理2h；将处理后的豆渣悬浊液在4℃，4000r/min条件下离心20min，获得上清液A及固相混合物B；
3)二次抽提：将步骤2)得到的固相混合物B粉碎，过80目筛，向筛选后的固相中加入8倍体积40℃的水，搅拌溶解，得到固相混合物B的悬浊液；调节其pH至6.0，向其中加入固相混合物B的悬浊液质量0.1％的酶复合物Ⅱ(所用酶为市售碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶，碱性蛋白酶:木瓜蛋白酶＝4:1)，在40℃的条件下处理2h；将处理后的悬浊液在4℃，4000r/min条件下离心20min，获得上清液C；
4)提纯：将上清液A与上清液C混合得混合液，快速将混合液的温度上升至85℃，反应20min对酶灭活，反应结束后将混合液温度下降至50℃；用盐酸调节其pH至5.0，可见有物质析出；待析出的物质的量不再增加，将混合液在4℃，4000r/m条件下离心20min，获得固相D；将固相D喷雾干燥，包装，获得具有豆香味的可溶性豆渣蛋白及多肽成品。
对比例1
1)豆渣的预处理：向10kg湿豆渣中加入8倍体积的水，然后加热至80℃，同时缓慢搅拌15min，使蛋白质溶解溶解，得豆渣悬浊液；
2)一次抽提：将步骤1)得到的豆渣悬浊液冷却至50℃后，调节pH值至8.5，向其中加入豆渣悬浊液质量0.2％的碱性蛋白酶(市售碱性蛋白酶，酶活为240000u/g)，在50℃的条件下处理3h；将处理后的豆渣悬浊液在4℃，4000r/min条件下离心15min，获得上清液A及固相混合物B；
3)二次抽提：将步骤2)得到的固相混合物B粉碎，过80目筛，向筛选后的固相中加入8倍体积50℃的水，搅拌溶解，得到固相混合物B的悬浊液；调节其pH至8.5，加入固相混合物B的悬浊液质量0.2％的碱性蛋白酶(市售碱性蛋白酶，酶活为240000u/g)，在50℃的条件下处理3h；将处理后的悬浊液在4℃，4000r/min条件下离心15min，获得上清液C；
4)提纯：将上清液A与上清液C混合得混合液，快速将混合液的温度上升至90℃，反应15min对酶灭活，反应结束后将混合液温度下降至40℃；用盐酸调节其pH至6.0，可见有物质析出；待析出的物质的量不再增加，将混合液在4℃，4000r/m条件下离心15min，获得固相D；将固相D喷雾干燥，包装，获得具有豆香味的可溶性豆渣蛋白及多肽成品。
对比例2
1)豆渣的预处理：向10kg湿豆渣中加入8倍体积的水，然后加热至80℃，同时缓慢搅拌15min，使蛋白质溶解溶解，得豆渣悬浊液；
2)一次抽提：将步骤1)得到的豆渣悬浊液冷却至50℃后，调节其pH值至8.5，向其中加入豆渣悬浊液质量0.2％的木瓜蛋白酶(市售木瓜蛋白酶，酶活为200000u/g)，在50℃的条件下处理3h；将处理后的豆渣悬浊液在4℃，4000r/min条件下离心15min，获得上清液A及固相混合物B；
3)二次抽提：将步骤2)得到的固相混合物B粉碎，过80目筛，向筛选后的固相中加入8倍体积50℃的水，搅拌溶解，得到固相混合物B的悬浊液；调节其pH至8.5，向其中加入固相混合物B的悬浊液质量0.2％的木瓜蛋白酶(市售木瓜蛋白酶，酶活为200000u/g)，在50℃的条件下处理3h；将处理后的悬浊液在4℃，4000r/min条件下离心15min，获得上清液C；
4)提纯：将上清液A与上清液C混合得混合液，快速将混合液的温度上升至90℃，反应15min对酶灭活，反应结束后将混合液温度下降至40℃；用盐酸调节其pH至6.0，可见有物质析出；待析出的物质的量不再增加，将混合液在4℃，4000r/m条件下离心15min，获得固相D；将固相D喷雾干燥，包装，获得具有豆香味的可溶性豆渣蛋白成品。
对比例3
1)豆渣的预处理：向10kg湿豆渣中加入8倍体积的水，然后加热至80℃，同时缓慢搅拌15min，使蛋白质溶解溶解，得豆渣悬浊液；
2)一次抽提：将步骤1)得到的豆渣悬浊液冷却至50℃后，调节其pH值至8.5，向其中加入豆渣悬浊液质量0.2％的酶复合物(所用酶为市售碱性蛋白酶及木瓜蛋白酶复合酶，碱性蛋白酶:木瓜蛋白酶＝2:1)，在50℃的条件下处理3h；将处理后的豆渣悬浊液在4℃，4000r/min条件下离心15min，获得上清液A及固相混合物B；
3)二次抽提：将步骤2)得到的固相混合物B粉碎，过80目筛，向筛选后的固相中加入8倍体积50℃的水，搅拌溶解，得到固相混合物B的悬浊液；调节其pH至8.5，向其中加入固相混合物B的悬浊液质量0.2％的酶复合物(所用酶为市售碱性蛋白酶及木瓜蛋白酶复合酶，碱性蛋白酶:木瓜蛋白酶＝2:1)，在50℃的条件下处理3h；将处理后的悬浊液在4℃，4000r/min条件下离心15min，获得上清液C；
4)提纯：将上清液A与上清液C混合得混合液，快速将混合液的温度上升至90℃，反应15min对酶灭活，反应结束后将混合液温度下降至40℃；用盐酸调节其pH至6.0，可见有物质析出；待析出的物质的量不再增加，将混合液在4℃，4000r/m条件下离心15min，获得固相D；将固相D喷雾干燥，包装，获得具有豆香味的可溶性豆渣蛋白及多肽成品。
对比例4
1)豆渣的预处理：向10kg湿豆渣中加入8倍体积的水，然后加热至80℃，同时缓慢搅拌15min，使蛋白质溶解溶解，得豆渣悬浊液；
2)一次抽提：将步骤1)得到的豆渣悬浊液冷却至50℃后，调节其pH至8.5，向其中加入豆渣悬浊液质量0.2％的酶复合物(所用酶为市售碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶及纤维素酶复合酶，碱性蛋白酶:木瓜蛋白酶:纤维素酶＝2:1:4)，在50℃的条件下处理3h；将处理后的豆渣悬浊液在4℃，4000r/min条件下离心15min，获得上清液A及固相混合物B；
3)二次抽提：将步骤2)得到的固相混合物B粉碎，过80目筛，向筛选后的固相中加入8倍体积50℃的水，搅拌溶解，得到固相混合物B的悬浊液；调节其pH至8.5，向其中加入固相混合物B的悬浊液质量0.2％的酶复合物(所用酶为市售碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶及纤维素酶复合酶，碱性蛋白酶:木瓜蛋白酶:纤维素酶＝2:1:4)，在50℃的条件下处理3h；将处理后的悬浊液在4℃，4000r/min条件下离心15min，获得上清液C；
4)提纯：将上清液A与上清液C混合得混合液，快速将混合液的温度上升至90℃，反应15min对酶灭活，反应结束后将混合液温度下降至40℃；用盐酸调节其pH至6.0，可见有物质析出；待析出的物质的量不再增加，将混合液在4℃，4000r/m条件下离心15min，获得固相D；将固相D喷雾干燥，包装，获得具有豆香味的可溶性豆渣蛋白及多肽成品。
对比例5
1)豆渣的预处理：向5kg湿豆渣中加入8倍体积的水，然后加热至90℃，同时缓慢搅拌15min，使蛋白质溶解溶解，得豆渣悬浊液；
2)一次抽提：将步骤1)得到的豆渣悬浊液冷却至40℃后，调节其pH至6.0，向其中加入豆渣悬浊液质量0.1％的酶复合物Ⅰ(所用酶为市售碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶及纤维素酶复合酶，碱性蛋白酶:木瓜蛋白酶:纤维素酶＝4:1:1)，在40℃的条件下处理2h；将处理后的豆渣悬浊液在4℃，4000r/min条件下离心20min，获得上清液A及固相混合物B；
4)提纯：将上清液A快速升温升85℃，反应20min对酶灭活，反应结束后将上清液A温度下降至50℃；用盐酸调节其pH至5.0，可见有物质析出；待析出的物质的量不再增加，将上清液A在4℃，4000r/m条件下离心20min，获得固相C；将固相C喷雾干燥，包装，获得具有豆香味的可溶性豆渣蛋白及多肽成品。
目前对豆渣蛋白及多肽的提取方式主要有：化学提取法、超声提取法、酶法及反胶束萃取法。一般来说，在提取豆渣蛋白及多肽的工艺中主要用到的是化学提取法及酶法。反胶束萃取法由于工艺等还不是很成熟，所以极少见于豆渣蛋白及多肽的提取。本发明所提出的工艺是运用双酶法对豆渣中的蛋白及多肽进行提取，以下我们以本发明的实施例1～4的蛋白及多肽提取率与化学提取法及超声提取法的提取率进行比较，结果见表1。其中化学提取法及超声提取法的提取率数据由已有的文献及专利中获得，可见本发明方法提取率较化学提取法及超声提取法有明显的提高。
表1
由表中数据可看出，利用复合酶法对豆渣中的蛋白及多肽进行提取其提取率明显比化学法及超声法的提取率高。复合酶法提取的端点值实验的(实施例3)最低提取率为72.3％，这在化学提取法的提取率中已属于较高的数值。且考虑到复合酶(碱性蛋白酶及木瓜蛋白酶)的最适工作pH均大于端点值实验时的pH，可以预见本发明所提出的工艺是明显优于其他的提取方式的。
目前酶法提取蛋白质及多肽的主要方法有单酶法和多酶法，本实施例采用相同的处理方法和处理条件对单酶法及多酶法的蛋白提取率进行对比，结果见表2。
表2
从几个实施例的对比中可以发现，实施例1(即一、二次抽提分别采用复合酶Ⅰ和复合酶Ⅱ)的蛋白提取率最高，实施例1的方法更有优势。
通过比较实施例6和对比例5，可以发现在相同的处理条件下，二次抽提的方法能够将蛋白提取率提高10.2％，能够显著提高豆渣的利用率，见表3。
表3
| 处理方法 | 一次抽提(对比例5) | 二次抽提(实施例6) |
| 蛋白提取率(％) | 69.1 | 79.3 |
本发明提供了一种从豆渣中提取可溶性豆渣蛋白及多肽的方法的思路及方法，具体实现该技术方案的方法和途径很多，以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。本实施例中未明确的各组成部分均可用现有技术加以实现。
Claims (8)
1.一种从豆渣中提取可溶性豆渣蛋白及多肽的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)豆渣预处理：向湿豆渣中加入4～8倍体积的水，然后加热至80～100℃，同时缓慢搅拌使体系中蛋白质溶解，得豆渣悬浊液；
(2)一次抽提：将步骤(1)得到的豆渣悬浊液冷却至40～60℃，调节pH值至6～9，然后向其中加入酶复合物Ⅰ处理0.5～4h，将处理后的豆渣悬浊液离心，获得上清液A及固相混合物B；
(3)二次抽提：将步骤(2)得到的固相混合物B粉碎，过80目筛，向其中加入4～8倍体积的水，搅拌溶解，得到固相混合物B的悬浊液，调节pH至6～9，然后加入酶复合物Ⅱ，在40～60℃的条件下处理0.5～4h，将处理后的悬浊液离心，获得上清液C；
(4)提纯：将步骤(2)得到上清液A和步骤(3)得到上清液C混合得混合液，对混合液内的酶灭活，用盐酸调节混合液pH至4～7，待析出的物质不再增加，将混合液离心，获得固相D，干燥后获得可溶性豆渣蛋白及多肽成品。
2.根据权利要求1所述的一种从豆渣中提取可溶性豆渣蛋白及多肽的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述酶复合物Ⅰ包含碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶和纤维素酶，质量比为(1～4):1:(1～8)。
3.根据权利要求2所述的一种从豆渣中提取可溶性豆渣蛋白及多肽的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述酶复合物Ⅰ的加入量为豆渣悬浊液质量的0.1～0.5％。
4.根据权利要求1所述的一种从豆渣中提取可溶性豆渣蛋白及多肽的方法，其特征在于，步骤(3)中，所述酶复合物Ⅱ包含碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶，质量比为(1～4):1。
5.根据权利要求4所述的一种从豆渣中提取可溶性豆渣蛋白及多肽的方法，其特征在于，步骤(3)中，所述酶复合物Ⅱ的加入量为固相混合物B的悬浊液质量的0.1～0.5％。
6.根据权利要求1所述的一种从豆渣中提取可溶性豆渣蛋白及多肽的方法，其特征在于，步骤(4)中，所述灭活的方法为将混合液快速升温至85～95℃，保持5～20min使酶灭活，然后快速降温至20～50℃。
7.根据权利要求1所述的一种从豆渣中提取可溶性豆渣蛋白及多肽的方法，其特征在于，步骤(2)、步骤(3)和步骤(4)中，所述离心的温度为4～10℃，速率为4000～8000r/min。
8.根据权利要求1所述的一种从豆渣中提取可溶性豆渣蛋白及多肽的方法，其特征在于，步骤(4)中，所述干燥为冷冻干燥或喷雾干燥。
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